H PLC法测定维生素C制剂
李文玉,李虎将1(吉林省通化市食品药品检验所,通化 134000; 1通化市疾病预防控制中心)
摘要: 对2005年版 中国药典 收载的维生素C片、维生素C注射液及维生素C丸含量测定方法进行改进,建立H PLC法测定维生素C含量。采用Kromasil C18色谱柱;以甲醇 0 1%磷酸(5 95)为流动相;柱温:25 ;流速:0 8mL m in 1;检测波长:242nm。维生素C进样量在0 0618~0 5562 g范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)为100 0%,RSD为0 33%。本方法简便、快速、结果准确,可作为维生素C多种制剂的质量控制标准。
关键词: H PLC法;维生素C片;维生素C注射液;维生素C丸;维生素C;含量测定
中图分类号:R927 2 文献标识码:A 文章编号:1002 7777(2008)09 0810 03
Determination of Vitamin C Preparations by HPLC
Li Wenyu and Li H ujiang1(Jilin To ng hua Institute for Food and Drug Contro l,T onghua134000; 1T onghua Institute for Disease Prevention Control Centre)
ABSTRAC T T he metho ds for the determination of Vitam in C Tablets,Vitam in C Injection and Vitam in C Pills in ChP(2005)w ere improv ed.An H PLC m ethod w as developed for the determination o f Vitam in C Tablets.T he H PLC system co nsisted of C18column,w ith methano l 0 1%pho sphor ic acid(5 95)as mobile phase,at25 .The w av elength w as242nm.T he flow rate w as0 8mL min 1and the injection volume w as10 L.The linear rang er of v itamin C w as0 0618~0 5562 g.The aver ag e r ecovery for the com po und w as100 0%(RSD=0 33%,n=6).The m ethod is sim ple,quick and accurate.It is suitable fo r quality contr ol o f many kinds of vitamin C preparation.
KEY WORDS H PLC;Vitamin C Tablets;Vitamin C Injectio n;Vitam in C Pills;vitam in C; determ ination
维生素C的化学成分为L 抗坏血酸,是维生素类药[1]。其制剂维生素C片、维生素C注射液收载于 中国药典 2005年版二部,维生素C丸收载于 卫生部药品标准 二部第二册。由于维生素C具有很强的还原性,因此在以上质量检验标准中均采用氧化还原滴定法进行含量测定。本文参考有关文献[2 8]采用高效液相色谱法测定维生C制剂的含量,具有适用性广,干扰少,操作简便、准确、重复性、回收率和精密度均较好的特点,可用于本制剂的质量控制。
1 仪器与试药
LC 2010AH T型高效相色谱仪(日本岛津), LC so lution工作站;AE163型电子分析天平(瑞士梅特勒);U V 260型紫外可见分光光度计(日本岛津)。
维生素C对照品(中国药品生物制品检验所,批号:100425 200301;规格:50m g;供含量测定用)。维生素C制剂(购自药店,编号为001, 002,003,004;其中001、002为维生素C片, 003为维生素C注射液,004为维生素C丸)。甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(4 6mm 200mm, 5 m);流动相:甲醇 0 1%磷酸(5 95);柱温: 25 ;流速:0 8m L min 1;检测波长:242nm;
作者简介:李文玉,本科,副主任药师;Tel:139********;E mail:th lw y@https://www.doczj.com/doc/ed1560219.html,
理论板数按维生素C峰计算应不低于3000。
2 2 对照品溶液的制备
精密称取维生素C对照品20mg,置25mL量瓶中,加1%偏磷酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取1m L,置25mL量瓶中,加1%偏磷酸溶液稀释至刻度,摇匀,即得(每1m L中含维生素C32 g)。
2 3 供试品溶液的制备
取本品适量(约相当于维生素C20mg),置25mL量瓶中,加1%偏磷酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1mL,置25m L量瓶中,加1%偏磷酸溶液稀释至刻度,摇匀,即得。
2 4 测定法
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及1%偏磷酸溶液各10 L,按上述色谱条件进样,测定,结果见图1。
a 对照品;
b 供试品;
c 空白溶液;1 维生素C。
图1 维生素C制剂H PL C色谱图
2 5 线性关系考察
精密称取维生素C对照品适量,加1%偏磷酸制成每1mL含32 10 g的溶液,分别精密吸取2, 6,10,14,18 L测定,以对照品进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,计算回归方程,结果表明维生素C进样量在0 0618~0 5562 g范围内,呈良好的线性关系,符合外标法定量测定的要求。回归方程为:
Y=3 972084 106X+2 298 103 r=1 0000
2 6 稳定性试验
取同一供试品溶液(编号001),在室温条件下分别放置0,2,4,6,8小时后进样测定,结果维生素C峰面积的RSD为0 33%,表明供试品溶液在8小时内稳定。
2 7 精密度试验
精密吸取供试品溶液(编号001),连续进样5次,测定维生素C峰面积。结果维生素C峰面积的RSD为0 25%。
2 8 重复性试验
取同一供试品(编号001),依正文方法独立测定5次,平均含量为72 67%,其RSD为0 31%。
2 9 加样回收试验
2 9 1 维生素C片
取已知含量的供试品(编号:001规格100mg 片 1,含量为72 67%平均片重0 1362g),研细,称取6份,每份约0 014g,精密称定,精密加入维生素C约10mg,依法测定,计算回收率,结果见表1。
表1 维生素C片加样回收率试验结果(n=6)样品含量
(mg)
加标量
(m g)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
10 2110 0720 29100 1
10 4210 3020 83101 1
10 4910 1220 5999 8
10 3610 2220 5399 5100 10 54
10 2210 3520 58100 1
10 5810 1820 76100 0
2 9 2 维生素C注射液
取已知含量的供试品(编号:003规格2mL 0 5g含量为25 2%),分别精密量取6份,每份0 04m L,精密加入维生素C约10mg,依法测定,计算回收率,结果见表2。
表2 维生素C注射液加样回收率试验结果(n=6)
样品含量
(mg)
加标量
(m g)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
10 0810 0120 09100 0
10 0810 0320 16100 5
10 0810 1220 1899 8
10 0810 2020 2599 7100 00 28
10 0810 1620 25100 1
10 0810 1520 23100 0
2 9
3 维生素C丸
取已知含量的供试品(编号:004规格
100m g/丸含量为51 1%平均丸重0 2013g),研细,称取6份,每份约0 020g,精密称定,精密加入维生素C对照品约10mg,依法测定,计算回收率,结果见表3。
表3 维生素C丸加样回收率试验结果(n=6)
样品含量(mg)加标量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
10 4910 2120 6899 8
10 4710 3320 80100 0
10 2410 2020 4299 8
10 2310 3020 5299 9100 00 16
10 2510 2620 52100 1
10 2310 0320 28100 2
2 10 样品含量测定
依正文方法及药典方法测定4种样品,结果见表4。
表4 样品中维生素C的含量测定结果 %
编号规格
药典法
标示百分含量RSD
HPLC法
标示百分含量RSD
001100mg 片 198 90 50 98 90 31 00250mg 片 195 80 38 95 90 25 0030 5g 2mL 1100 40 47 100 80 20 004100mg 丸 1102 70 38 102 90 05
3 讨论
3 1 测定波长的选择
取维生素C对照品适量,用1%偏磷酸溶液配成浓度为6m g L 1的溶液,在200nm~400nm范围内进行扫描,维生素C在242 6nm处有最大吸收,因此确定242nm为本实验的测定波长。
3 2 色谱柱的选择
我们以该分离方法对不同色谱柱进行考查,结果本方法具有柱适用性广,稳定性好的特点。
3 3 提取溶液的选择
维生素C水溶液在空气中极不稳定,只有在酸性环境中稳定性较好,因此,我们分别采用不同浓度的不同溶媒提取,其含量测定结果差异显著, 1%偏磷酸作溶媒提取效果及稳定性均好,因此我们采用1%偏磷酸作为提取溶剂。
采用1%偏磷酸作溶媒,加不同量的V c对照品配制等差浓度的V c溶液,用本方法进行含量测定,结果显示,溶媒对Vc含量测定无影响,不干扰含量测定。
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(上接第809页)藿香正气口服液、藿香正气水、藿香正气软胶囊的质量标准,结合本品的处方、工艺,建议本品每片含厚朴酚、和厚朴酚总量应在0 6m g以上。目前,对本品其它组份的研究也有很多,采用TLC法对方中白芷、广藿香、陈皮、白术进行定性鉴别,采用GC法测定百秋李醇的含量[4],高效液相色谱法测定藿香正气水中橙皮苷的含量[5]等,这些都有利于制定出更加完善的质量标准,确保药品质量。
由于中药材的产地、采收、加工、贮藏,生产工艺等多方面的因素对中成药的质量均有较大的影响,因而生产厂家应对其原材料进行严格控制,全面检验,严格按生产工艺进行生产,确保成品质量,保证疗效。
参考文献:
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