实验一显微镜的构造及使用方法 一、目的要求 1.了解显微镜的构造、性能及成像原理。 2.掌握显微镜的正确适用及维护方法。 二、实验器材 1.显微镜、纱布、绸布 2.酵母菌示教标本 三、普通光学显微镜简介 微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。 显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。 （一）显微镜的构造 普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。 图1-1 显微镜构造 1.目镜 2.镜筒 3. 转换器 4. 物镜 5. 载物台 6. 聚光器 7. 虹彩光圈 8. 聚光镜调节钮9.反光镜10. 底座11. 镜臂12. 标本片移动钮 13. 细调焦旋钮14. 粗调焦旋钮15.电源开关16.光亮调节钮17.光源 1.机械系统： （1）镜座Base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。 （2）镜臂Arm：连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。 （3）镜筒Tube：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和斜筒式； 有单筒式的，也有双筒式的。 （4）旋转器Nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安
细胞室无菌技术标准操作规程 一、无菌室的灭菌 1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然 后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 %过氧乙酸擦拭。超净台上滤网需每月清洗 1 次。 2. CO孵箱（培养箱）灭菌：用75%酒精擦拭或者0.5 %过氧乙酸，再用紫外灯照 射。 3. 实验前灭菌：打开紫外灯、超净台各20-30 分钟。在开紫外灯杀菌前，应确认无 菌室无人后方可开紫外灯杀菌。 4. 实验后灭菌：用75%酒精（3%新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物 台。 5 ?定期检测下列项目：钢瓶之CO压力；CO培养箱之CO浓度、温度、及水盘是 否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPAi滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA。 6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750 ），定期更换水槽的水。 二、实验人员的无菌准备 1. 肥皂洗手； 2. 穿好隔离衣，放好拖鞋； 3. 用75%酒精棉球擦净双手； 三、无菌操作的要点 1. 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦 拭瓶子的外表面； 2. 靠近酒精灯火焰操作； 3. 器皿使用前必须过火灭菌； 4. 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火； 5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液
6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 细胞传代培养（消化法）标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分 瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液（PBS） 2. 胰酶-EDTA溶液（0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na）:以10ml 分装于15 ml 无菌离心管中，保存于-0C，使用前放在37C水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37 r水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 （4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 （5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。 （6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 （7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 (8)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
显微镜维护与保养与故障解决
显微镜维护与保养与故障解决 显微镜维护与保养与故障解决 1.物镜和目镜的生霉生雾的处理办法 准备30%无水乙醇+ 70%乙醚，将不同的镜头单独分开放置干燥剂器皿中，最好用棉花棒，纱布，柔软的刷子等比较柔软的东西来擦拭，注意不能用力擦，以防止损伤镀膜层。油镜当时就要清洗，特别是100X的油镜，处理不当的话，前片容易浸油或开胶。目镜可以自己拆下来清洗，16X目镜注意别装反了，前片凹面在上。物镜不要随便拆下。指针不要用头发来做，易弄脏镜头，厂家可配备一个指针。一般2个月最好能集中保养一次。显微镜多时，各个镜头要标号以免弄错了搭配。 2.透镜的清洁 清洁灰尘用用棉花棒，纱布，柔软的刷子等比较柔软的东西来，注意轻柔慢缓。有些较顽固的污迹如油迹，指纹等，可以用干净的软棉布，棉花棒镜头纸等蘸上无水酒精轻轻的擦去。如果是从油镜上擦去浸油，应用镜头纸，软棉布或纱布，蘸上二甲苯轻轻擦去。注意，不要用二甲苯清洗双目镜筒底部的入射透镜或目镜内的棱镜表面。因为纯酒精和二甲苯容易燃烧，在将电源开关打开或关闭时要特别当心不要引燃这些液体。防患于未然。 3.油漆和塑料表面的清洁 我们反对使用有机溶剂（如酒精，乙醚，稀释剂等）来清洗仪器的油漆和塑料表面，建议使用硅布，还有更顽固的污迹可以使用软性的清洁剂来清洗。塑料表面只需要用软布蘸水就可以了清洗了。 4.显微镜闲置的处理 当显微镜在放假等长时间不使用的情况下，请您用塑料罩盖好，并储放在干燥的地方防尘防霉。同时我们强烈建议您将物镜和目镜保存在干燥器之类的容
器中，并防些干燥剂。 5.定期检查 显微镜的精细和贵重，要求我们要更加的爱护它。为了保持它的性能的稳定，我们建议您定期的检查，保养。 在显微镜的实际操作中，您或许总是会遇到一些问题。在此，我们奥力公司建议您先对照我们提供的常见故障排除法来先自己动手解决一下。这样即节约您等候维修人员的时间，又提高您自己的显微镜操作水平。如果您解决了，我们要祝贺你的能力实在是不一般；如果还是解决不了，您再向有关的维修部门联系。我们将列举一些常见的问题供您参考！希望对您有所帮助！ 第一类：光学部分的问题 症状原因对策 边缘黑暗或视场明暗不均匀转换器不在定位位置上转到定位的位置灯丝象不在中心调整使对中心透镜上沾有脏物擦干净（软布） 视场里有脏物透镜上沾有脏物擦干净（软布）玻片上有脏物擦干净（软布）聚光镜位置太底校正位置 像质很差 （分辨率低，对比度差）切片上没有盖玻片，或切片放反了使用标准的0.17mm盖玻片盖玻片过厚或太薄使用标准的0.17mm盖玻片干物镜上有浸油，40X更易有擦干净 透镜上有脏物擦干净 油侵物镜没有浸油或油浸有气泡使用浸油，清楚气泡 用了非指定的浸油使用专用浸油 孔径光栏开的过大（过小）调整光栏大小至正常 双目镜筒的入射透镜上有脏物擦干净 聚光镜位置太低校正位置 图象某一侧发暗聚光镜不在视场中心聚光镜偏斜重新安装，仔细调节中心螺钉转换器不在定位处转到定位的位置 标本处于浮动状态可靠地加固 调焦时图象移动 标本浮在载物台表面稳固的安放 转换器不在定位处转动使之到位图象略带黄色未用蓝色滤色镜使用蓝色滤色镜
倒置荧光显微镜 操作规程 Olympus IX5 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2017年3月
说明： ①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架； ⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮； ⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮；?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）；?荧光激发块转盘；?荧光减光阀
正式操作仪器之前请注意如下事项： 首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。 1.查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不要开机使用。 2.查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内空调，检查 并清空除湿机水箱。 3.查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候30 分钟以上再开机使用。 一、开机 1、打开透射光源（白光）主开关①； 2、打开荧光光源（汞灯高压电源）②； 3、打开电脑，进入cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。 二、明场观察（Bright Field BF） 1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动聚光镜转盘?到“BF”位置，直到听到咔嗒声； 4、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩； 三、相衬观察（Phase contrast PH) 1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜； 4、转动聚光镜转盘?，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）； 5、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根
项目四显微镜使用与维护 1、项目要求 （1）正确使用低倍镜 （2）正确使用高倍镜 （3）显微镜保养维护良好 2、仪器与器材 （1）光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等 （2）细菌染色标本 （3）工作服、肥皂、消毒液、毛巾等 3、操作步骤 （1）准备工作：穿好工作服，检查、清点所需物品。 （2）调节视野亮度： ①显微镜的取放：右手握镜壁，左手托镜座，靠在胸前，轻拿轻放。 ②放置显微镜：放置在洁净平稳的实验桌或实验台上。 ③调节视野亮度（使用低倍镜）：打开电源开关，升高聚光器，放大光圈，转 动亮度调节钮，使摄入镜头的光线适中（明亮但不刺眼）。 （3）低倍镜镜检： ①放置标本片：将标本片放置于载物台上，用压片夹固定，使观察部分对准通 光孔的中央。 ②观察姿势：身体要端正，胸部挺直，双眼自然睁开，用左眼观察。 ③低倍镜观察：先转动粗调节器，出现物像后，再慢慢转动细调节器，直到物 像清晰为止。 （4）油镜镜检： ①转换成油镜。 ②在标本欲检部位，滴加香柏油一滴，将标本固定于载物台正中。 ③镜检：转动细调节器找到标本的清晰视野。 （5）显微镜的保养与维护 ①擦拭：油镜用毕，先用擦镜纸擦去镜头和标本上的香柏油，再用滴加二甲苯 的擦镜纸擦拭，最后用干擦镜纸擦干净。对于无盖玻片的标本，可用“拉纸 法”，即把一小张擦镜纸盖在玻片上的香柏油处，加数滴二甲苯，趁湿向外 拉擦镜纸，拉出后将纸去掉，如此反复2-3次，即可将标本上的油去掉。 ②显微镜用完后，把低倍镜转至中央，高倍镜和油镜转成“八”字形。 ③使载物台和聚光器下降，关闭光圈，关上电源，用绸布包好，放入镜箱。 （6）填写项目报告：书写清楚，结果明确。 （7）项目完毕后，按要求整理，恢复原状，放回指定位置。用肥皂洗手，毛巾擦干，脱下工作服，放到指定位置。 4、说明： （1）低倍镜，最短，有4×、10×、20×、25× （2）高倍镜，较长，有40×、45× （3）油镜，最长，放大倍数最大（90×或100×），有色环（白色）或字样（标有“油” 字或“oil”或“HI”字样） （4）观察物像程序可概括为“先低后高，先降后升，先粗后细”。
倒置式金相显微镜的操作规程 摘要:倒置式金相显微镜的实用操作规范, 可以保证金相显微观察的效果, 也利于设备保护。但是,更重要的是规程背后包含更加丰富的内容, 这才是金相显微镜操作过程中需要深入了解的。本文介绍了倒置式金相显微镜的操作规程, 规程细节的详细分析, 以及在实践教学中应用、维护。 关键词: 倒置式; 金相显微镜; 操作规范; 日常维护; 在有些专业显微镜的使用频率非常高的, 有必要全面提高学生的显微镜技术。生物显微镜的操作, 可参考的文献比较多, 但是文献中介绍金相显微镜操作的比较少, 特别是倒置式金相显微镜。由于对样品观察面与背面平行度没有要求, 制样困难小,倒置式金相显微镜的实际应用非常多; 但现在还看不到一个比较适用、完整的。我们根据实际操作经验, 在正确使用、维护显微镜方面介绍一些经验, 供大家参考。 1. 现有文献的不足 随着技术的提高显微镜在不断地更新换代, 显微镜使用方法也要不断地调整。生物显微镜如此, 金相显微镜也是如此。而所能见到的有关金相显微镜操作方面的国内文献在这方面动作比较慢,不适应现在的要求。 1. 1. 关于变压器 近十几年来, 金相显微镜的变压器都已经实现了内置, 操作者从一般的角度出发, 不用再关心是否要连接到一个变压器上, 是否处于安全电压伏数的问题。国外在80年代初, 国内在80年代末, 基本实现了这一设计。不过, 很多最新出版的有关这方面的专业书籍, 还是沿用陈旧的说明: 注意不要直接插到220伏的电源上, 这就太落伍了。当然, 对于早期的显微镜还是需要考虑的。不过只应在操作说明的特别关注部分注明即可, 基本操作规范还是应该跟上技术、设计的发展。 1. 2. 偏重于正置式金相显微镜 在较早的文献中, 关于金相显微镜的操作类似如下的说明是主流, 为保证在聚焦过程中使物镜触及试样, 操作的次序应该是先调节粗动螺丝, 使物镜接近试样的表面, 再通过目镜观察试样, 调整粗动旋钮, 使物镜朝着离开试样的方向移动。必须养成这种操作习惯。有关金属显微组织检验方法的国家标准中也是这样的叙述: 聚焦调节时, 物镜头部不能与试样接触, 应先转动粗调旋钮使物镜尽量接近试样(目测), 然后从目镜中观察的同时调节粗调旋钮, 使物镜渐渐离开样品直到看到显微组织映像时, 再使用微调旋钮调至映像清晰为止。这样的描述, 适用于正置式金相显微镜, 而不太适用于倒置式金相显微镜, 因为使用者根本无法实现这样的操作, 尤其是在采用高倍物镜时, 根本无法观察到物镜与样品表面的距离变化。 1. 3. 操作、维护混杂在一起 这是最常见的。维护工作对一般操作者来讲不必一定了解, 混杂在一起, 容易干扰重点关注的地方。应单独列出管理者、维护者关注的部分。 1. 4. 没考虑不同厂家的金相显微镜在机械构造上的差异
光学显微镜的使用步骤和维护保养 一、操作步骤和注意事项 （一）正置显微镜 1、安放右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边3～4厘米处。 2、清洁检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。 3、对光镜筒升至距载物台1～2厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮。 4、安装标本将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。 5、调焦调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时，应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值。若使用双筒显微镜，如观察者双眼视度有差异，可靠视度调节圈调节。另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距。 6、观察若使用单筒显微镜，两眼自然张开，左眼观察标本，右眼观察记录及绘图，同时左手调节焦距，使物象清晰并移动标本视野。右手记录、绘图。镜检时应将标本按一定方向移动视野，直至整个标本观察完毕，以便不漏检，不重复。光强的调节：一般情况下，染色标本光线宜强，无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱，高倍镜观察光线宜强。除调节反光镜或光源灯以外，虹彩光圈的调节也十分重要。 （1）低倍镜观察观察任何标本时，都必须先使用低倍镜，因为其视野大，易发现目标和确定要观察的部位。 （2）高倍镜观察从低倍镜转至高倍时，只需略微调动细调焦旋钮，即可使物像清晰。使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮，否则易压碎盖玻片并损伤镜头。转动物镜转换器时，不可用手指直接推转物镜，这样容易使物镜的光轴发生偏斜，转换器螺纹受力不均匀而破坏，最后导致转换器就会报废。（3）油镜的观察先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后，再换油镜观察。油镜观察前，应将显微镜亮度调整至最亮，光圈完全打开。使用油镜时，先在盖玻片上滴加一滴香柏油（镜油），然后降低镜筒并从侧面仔细观察，直到油镜浸入香柏油并贴近玻片标本，然后用目镜观察，并用细调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本的焦段时停止并调节清晰。香柏油滴加要适量。油镜使用完毕后一定要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦镜纸擦去多余二甲苯。 7、结束操作观察完毕，移去样品，扭转转换器，使镜头V字型偏于两旁，反光镜要竖立，降下镜筒，擦抹干净，并套上镜套。若使用的是带有光源的显微镜，需要调节亮度旋钮将光亮度调至最暗，再关闭电源按钮，以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯。 （二）倒置显微镜倒置显微镜与正置显微镜的主要区别在于物镜位于载物台下方，这样有利于观察时在上方对样品进行一些实时操作。 倒置显微镜操作过程基本与双筒的正置显微镜相似，需注意以下几点：观察时可调节铰链式双目目镜至舒适的位置。组织培养液或水溅到载物台上、物镜上或显微镜镜架上可能会损伤设备。如果溅上后，应该立即从墙上插座拔下电源线，擦去溅出液或水。一定要轻柔转动光强调节钮，不要试图将旋钮转过终点位置。使用后一定要先将灯的强度调至最小再关电源。使用后要旋转三孔转换器，使物镜镜片置于载物台下侧，防止灰尘的沉降。 （三）实体显微镜又称体视显微镜或解剖显微镜。操作步骤基本和双筒正置显微镜类似：取用解剖镜时，移动需用双手，保持稳重。若需连镜箱搬动，应将镜箱锁好，同时镜箱的钥匙必须拔除。镜管上若有防尘罩，应取下并换上目镜及眼罩。将样品置于玻片上或蜡盘中再放到载物盘上待观察。拧开锁紧螺丝，把镜
细胞传代培养SOP（消化法） 具体步骤如下： 1. 传代前准备： 1.1预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37C水浴锅内预热。 1.2 用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 1.3 正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 1.4 点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 1.5 准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8 分钟再次消毒。 1.6 取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 1.7 从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 1.8 打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶-EDTA消化： 2.1加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶-EDTA液）,注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37T < 2.2 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 2.3 吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞： 3.1 吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 3.2吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 3.3 平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8 分钟。 3.4弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞： 4.1 分装：将细胞悬液吸出分装至2-3 个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。 4.1 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5X 105/ml。最后要做好标记。 5. 继续培养： 用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO培养箱中继续培养。传代细胞 2 小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时
显微镜的使用方法显微镜使用 引导语：初中的生物课我们就开始接触显微镜，怎么使用呢? 以下是收集的关于显微镜的使用方法相关内容，欢迎阅读参考! 一、显微镜的使用方法 1.观察前的准备 (1)置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为一寸左右。镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录，两眼必须同时睁开，以减少疲劳，亦可练习左右眼均能观察。显微镜构造见右图。 (2)显微镜是光学精密仪器，在使用时要特别小心，使用前要熟悉显微镜的结构和性能，检查各总零件是否完好无损。镜身有无灰尘，镜头是否清洁，做好必要的清洁和调整工作。 (3)调节光源对光时应避免直射光源，因直射光源影响物像的清晰，损坏光源装置和镜头，并刺激眼睛。晴天可直接用窗外的散射光，如明暗天气，可用8-30W日光灯或显微镜灯照明 调节光源及光照的一般步骤： 将低倍物镜旋至镜筒下方，旋转粗调节轮，使镜头和载物台距离约为0.5cm左右。 上升聚光器，使与载物台表面同样高。否则使用油镜时光线较暗。 左眼看目镜，调节反光镜镜面角度(反光镜有凹平两面，光线较强自然光源，宜用平面镜;光线较弱的天然光源或人工光源，宜用凹
面镜。)对光使全视野内为均匀的明亮度。凡检查染色标本时，光线应强;检查未染色标本时，光线不宜太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线. 2.低倍镜观察。 检查的标本须先用低信镜观察，因为低倍镜视野较大，易发现目标和确定检查的位置。 (1)先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，转动粗调节轮，下降物镜或上升载物台使物镜至标本0.5cm处。 (2)左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。 3.高倍镜观察; 将高倍镜转正至正下方，在转换接物镜时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后由接目镜观察，再仔细调节光圈和聚光镜，使光线的明亮度适宜，同时再仔细正反两方向微转动细调节轮，直至获得清晰的物象后为止，找到最适宜于观察的部位。需进一步要观察的部位移视野中央，准备用油镜观察。 4.油镜观察： (1)上升聚光器，全开虹彩光圈 (2)用粗调节轮提起镜筒或下降载物台，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。右手顺时针方
正确使用金相显微镜的方法步骤 金相显微镜的使用相对来说比较复杂些，下面给大家介绍一下金相显微镜的一些简单使用，希望对大家有所帮助。 1.金相显微镜使用说明： (1)使用油浸系物镜前，将载物台升起，用一支光滑洁净小棒蘸上一滴杉木油，滴在物镜的前透镜上，这时要避免小棒碰压透镜及不宜滴上过多的油，否则会弄伤或弄脏透镜。 (2)使用低倍物镜观察调焦时，注意避免镜头与试样撞击,可从侧面注视接物镜,将载物台尽量下移，直至镜头几乎与试样接触(但切不可接触)，再从目镜中观察。此时应先用粗调节手轮调节至初见物像，再改用细调节手轮调节至物像十分清楚为止。切不可用力过猛，以免损坏镜头，影响物像观察。当使用高倍物镜观察，或使用油浸系物镜时，必须先注意极限标线，务必使支架上的标线保持在齿轮箱外面二标线的中间，使微动留有适当的升降余量。当转动粗动手轮时，要小心地将载物台缓缓下降，当目镜视野里刚出现了物像轮廓后，立即改用微动手轮作正确调焦至物像最清晰为止。 (3)观察前原则上要装上各个物镜。在装上或除下物镜时，须把载物台升起，以免碰触透镜。如选用某种放大倍率，可参照总倍率表来选择目镜和物镜。 (4)试样放上载物台时，使被观察表面复置在载物台当中，如果是小试样，可用弹簧压片把它压紧。 (5)将光源插头接上电源变压器，然后将变压器接上户内220V电源即可使用。照明系统在出厂前已经经过校正。 (6)每次更换灯泡时，必须将灯座反复调校。灯泡插上灯座后，在孔径光栏上面放上滤色玻璃，然后将灯座转动及前后调节，以使光源均匀明亮地照射于滤色玻璃上，这样，灯泡已调节正确，这时则将灯座的偏心环转动一个角度，以便将灯座紧固于底盘内。灯座及偏心环上有红点樗，如卸出时，只要将红点相对即可。 (7)为配合各种不同数值孔径的物镜，设置了大小可调的孔径光栏和视场光栏，其目的是为了获得良好的物像和显微摄影衬度。当使用某一数值孔径的物镜时，先对试样正确调焦，之后，可调节视场光栏，这时从目镜视场里看到了视野逐渐遮蔽，然后再缓缓调节使光栏孔张开，至遮蔽部分恰到视场出现时为止，它的作用是把试样的视野范围之外的光源遮去，以消除表面反射的漫射散光。为配合使用不同的物镜和适应不同类型试样的亮度要求设置了大小可调的孔径光栏。转动孔径光栏套圈，使物像达到清晰明亮，轮廓分明。在光栏上刻有分度，表示孔径尺寸。 2.金相显微镜使用注意事项： (1)切勿将显微镜的灯泡(6~8V)插头直接插在220V的电源插座上，应当插在变压器上，否则会立即烧坏灯泡。观察结束后应及时关闭电源。
背景知识： 细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。 原理： 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 主体内容（操作步骤）： 一、材料 （一）仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃） 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱 7. 液氮冰箱 易生物仪器库：https://www.doczj.com/doc/ec1351553.html,/yp/product-list-42.html （二）玻璃器皿 1. 吸管（弯头、直头） 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶（250ml、100ml） 4. 废液缸 （三）塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 胶塞 4. 移液管（10ml） 5. 15ml离心管 6. 冻存管（1～2ml） （四）其他物品 1. 微量加样枪 2. 红血球计数板 3. 记号笔 4. 医用橡皮膏 5. 移液枪 （五）试剂 1. D-Hanks液 2. 小牛血清
油镜的使用方法及维护 通型生物显微镜的放大倍数可达几百倍.一般真菌和酵母菌等微生物个体较大,用低倍物镜和高倍物镜即可得到良好的效果.但要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造,最好使用油镜头. 油镜比干燥系高倍物镜的工作距离短得多,最短的只有0.1mm,且调焦程序又不同于干燥系物镜,操作时须特别细心,防止油镜压碎标本或损坏油镜. 显微镜油镜原理 由于细菌体积微小,故在细菌的形态学研究中,经常需要借助显微镜油镜,才能比较清楚地进行观察.因此,必须熟练地掌握油镜的使用及保护法. （一）油镜头的识别： 各接物镜的放大率可由其外形辨认,镜头长度越大,镜片直径越小,放大倍数大；反之,放大倍数小.油镜头长度大于低、高倍镜,镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线,并刻有100×、或oil等字样. （二）油镜的使用法： 1、使用显微镜油镜时,必须将显微镜端正直立桌上,不得将镜臂弯曲,使载物台倾斜,以免香柏油流溢,影响观察,污染台面. 2、调焦距： A、转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降）,直至油镜头浸没至油中.此时眼睛应从侧面观察,以免压碎标本片和损坏镜头. B、将标本片放载物台上,用标本推进器固定,将欲检部分移至接物镜下.先用低倍镜找出标本的位置,然后提高镜筒,在标本的待检部位滴镜油一滴,再换油镜观察. C、然后双眼移至接目镜,一面从接目镜观察,一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台,或上升镜筒）,当出现模糊物象时,换用细调节器,转动至物象清晰为止. D、观察完毕,应先提高镜筒,并将油镜头扭向一侧,再取下标本片.油镜头使用后,应立即用擦镜纸擦净镜头上的油.若镜油粘稠干结于镜头上,可用擦镜纸蘸少许
OLYMPUS IX71倒置显微镜操作规程 编写人：於锋时间 一、目的 正确使用倒置显微镜对细胞标本的形态特征进行观察，为生命科学的研究提供更多可靠的实验数据。 二、原理 倒置显微镜系统（IX71系列）是在透镜成像原理基础上发展起来的显微观察系统，利用卤素灯为光源，光线经过聚光镜汇聚后透过标本，通过物镜对标本进行聚焦放大成像，最后通过目镜把物镜所成的像再次放大，从而使实验者能够清晰的分辨体外培养的细胞的形态以及内部结构，主要用于体外活细胞培养形态观察，根据实验需求配置了明场、暗场、相差、荧光等技术模块。 三、主要操作规程 相差观察： 1.打开主开关 2.转动光路选择盘到“眼睛”位置。 3.装上观察样本。使用10X物镜，将聚光镜转盘转到“BF”位置。 4.瞳距调节 5.屈光度调节：通过螺旋目镜屈光度调节环。 6. 通过粗微调对样本准确调焦。选择所用物镜，10X，20X，40X。 相差观察时转动聚光镜转盘到“PH”位置。相差只能用10X，20X物镜观察和摄影。 7. 调节光线强度：明场观察时，调节孔径光栏。相差观察时，打开孔径光栏 8. 观察。 荧光观察步骤： 1.打开荧光供电装置开关，关掉显微镜主开关。等大约10分钟后电弧稳定。 2.连接UV防护板 3.把光路选择转盘和选择杆转到“眼睛”位置。 4.使相应的荧光激发滤色镜进入光路 5.根据标本不同，选择U，B，G激发。
6.打开激发光光闸使光通过把所用物镜推入光路10X，20X，40X。 7.把标本放在载物台上，对标本进行调焦，如果荧光衰退快，请将激发光光闸推入光路 使用1小时后关掉电源开关。 普通明场观察： 1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上 3.将光路选择旋钮调至观察位置 4.从低倍镜开始观察，相差环拨到明场（BF）位置，荧光滤色块转盘拨到“1”的位置 5.调节透射光光强，调焦，找到预观察视野 6.依次换到高倍镜，观察样品 7.拍照时将光路选择旋钮调至相机位置 关机： 1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启） 2. 将透射光强调到最小，透射光选择按钮按出 3. 关闭明场电源开关 4. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头 5. 确认数据已经保存，关闭软件 6. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据） 7. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况
眼科手术显微镜的使用及保养 随着科学的不断进步和发展，眼科手术已经进入显微手术时代。手术显微镜的使用，不但使医生能够看清手术部位的精细结构，还可以进行凭肉眼无法完成的各种显微手术，大大拓展了手术治疗范围，提高了手术精密度和病人治愈率。目前，手术显微镜已成为一种常规的医疗设备。我院所用的显微镜生产年代和规格型号略有差异，但在操作性能和功能应用上基本一致。 1 手术显微镜的基本结构 眼科手术一般应用立式手术显微镜（落地式），这类手术显微镜的特点是位置可以任意摆放，比较灵活，安装方便。手术显微镜一般可分为四大部分：机械系统、观察系统、照明系统、显示系统。 1.1 机械系统：高质量的手术显微镜一般配有复杂的机械系统来固定和操纵，以保证能够快速自如灵活地将观察和照明系统移至必要位置。机械系统包括：底座、行走轮、制动闸、主柱、旋转臂、横臂、显微镜安装臂、水平X-Y移动器及脚踏控制板等。横臂一般设计成两组，目的是使观察显微镜在尽可能大的范围内能够迅速移至手术部位上空。水平X-Y移动器则可将显微镜精确定位于所需要的位置。脚踏控制板控制显微镜上下左右移动调焦外，还可进行显微镜放大、缩小变率的变换。机械系统是手术显微镜的骨架，确定了显微镜的活动范围。使用时，要保证该系统的绝对稳定。 1.2 观察系统：在一般手术显微镜中的观察系统实质上是一可变倍双目体视显微镜。观察系统包括：物镜、变倍系统、分光器、节目物镜、专项棱镜及目镜。在手术时，经常需要助手配合，因此观察系统经常设计成双人双目的形式。 1.3 照明系统：显微镜的照明方式可分为内照明和外照明两种，它的作用在于某些特殊需要，如眼科裂隙灯照明，照明系统由主灯、副灯、光缆等组成。光源从物体的旁边或上面照明物体，像的产生是靠进入物镜的反射光成像。
倒置金相显微镜安全操作规程 1内容 本操作规程规定了本公司用于观察金相组织的徕卡倒置式金相显微镜DMILM的相关使用及保养方法，使相关员工能正确使用和维护本公司显微镜。 2范围 本操作规程适用于本公司检验员的操作。 3细则 3.1准备工作 1)检查倒置金相显微镜是否良好。 2)把显微镜放在平整的桌子上。 3)倒置金相显微镜构造如图1所示。 图1倒置金相显微镜 3.2使用 1)被测试样应干燥洁净，其观察面应平整光洁，不得有杂物、凹坑及明显的加工痕迹。 2)取下显微镜防尘罩，打开照明系统电源后，显微镜后部光源灯亮。取下显微镜载物台上的物镜保护盖，将试样平稳放在载物台上。 3)用显微镜直接观察时，调整双目镜的宽度，使双眼能看到同一视场。转动显微镜右侧与载物台相连的手柄，将试样被观察部位移动到视场下，缓慢转动粗调旋钮，当视场内出现模糊的图像时，停止粗调旋钮，改为转动微调旋钮，直到整个视场内出现清晰的图像。 4)转动显微镜底座右侧的照明系统电压调节旋钮，调整光源到适宜亮度。 5)如果要用不同放大倍数进行观察，可转动换物镜旋座到所需要的放大倍数的物镜。 6)如需要对试样组织尺寸进行测量，可通过左侧目镜的目镜测微尺进行尺寸测量。可通过旋转目镜调整微尺方向。 7)如要对试样组织拍照，可通过显微镜与电脑相连的数字摄像头进行拍摄取像，所使用的软件为Profound Iron & Steel 金相图像分析系统软件。 8)使用完毕，盖上物镜保护盖，关闭电源。长时间不使用，则盖上防尘罩。
3.3 Profound Iron & Steel 金相图像分析系统 3.3.1定标 第一次使用，需进行定标。定标就是得到图像像素和常用度量单位间的对应关系，步骤如下： a)打开显微镜。 b)将物台测微尺放于载物台上，打开Profound Iron & Steel 金相图像分析软件，点击图像快速采集按钮，即可观察到显微镜下的图像，使用显微镜调焦系统对图像进行调节，调整好后，点击“抓拍F8”按钮可摄取带有标尺的清晰图像。 c)单击关闭按钮关闭图像摄取窗口，单击“标定标尺”，出现对话框。 d)标尺方式选定“x向线段”，在对话框中输入标尺名称和标尺长度（比如在50×放大倍数下摄取的标尺图像，输入标尺名称为50×，以便于记忆），单位为“公制”。然后在所摄取标尺图像起始处按下鼠标左键，向标尺另一边移动鼠标，直到结束。然后输入选定的测微尺的实际长度，点击“保存标尺”按钮。则50倍放大倍数下的标尺就定好了。 e)如果再定其他倍数下的标尺，重复上述操作。 3.3.2图像处理 a)反色：以图像相反的颜色显示图像，即是对每个像素的像素值都发生变化，灰白图像黑白反转，以突出显示物体。 b)彩色灰度化：将彩色转变为灰色，显示成256级灰度图像。 c)对比度增强：单击该按钮弹出对话框，拖动滑块可调整图像的亮度和对比度。 d)直方图均衡：增强当前图像的对比度和显示动态的边界。 e)二值化：进行阀值分割，将灰度图像转化为二值图像，变成只有两个灰度级的图像，即0和1，1代表物体，0代表背景。 f)二值图像处理：如果初始的阀值分割不能够令人满意，对二值图像的某些形式的出来通常能提高其质量，以便更准确的测量和观察。本软件包括腐蚀、碰撞、开运算、闭运算、收缩、细化、抽骨架、剪枝、粗化、No Touch、填内孔、去孤点、取碎屑、去毛刺等二值图像处理功能。 g)编辑图像：编辑当前图像，对图像像素值直接进行修改，主要作用是孔洞填充、断点连接、分割物体。 h)标注：使用该功能对图像作标注，标注图像的文本信息或迭加标尺等（常用尺寸标注结果已储存，可在对话框“文件”直接打开）。 i)景深扩展：试样不平坦时，景深范围内的图像是清晰的，景深外是模糊的，这是光学系统的物理特征，不能通过调整显微镜来解决。景深扩展功能通过将同一视场不同聚焦面的图像序列进行合成，最终可得到该视场完整清晰的图像。 j)图像拼接：显微镜视野较小，为了得到较大区域的全貌图像，图像拼接功能可以把试样上数幅有关系的图像，通过自动搜索重合区域，拼接成一幅高分辨率的全貌图像。 3.3.3图像变换 a)裁剪：单击“专用”菜单下的“视场设置”，弹出对话框，选择矩形、圆形、椭圆形工具的一种，在图像上单击左键，图像上出现视场，按住左键任意移动视场，选择完毕后，单击“裁剪”按钮。 b)任意角旋转：单击该菜单，弹出对话框，在对话框中输入角度，点击确定，图像可旋转任意角度。 c)水平翻转：将图像水平翻转。
显微镜的保养 更换镜头时应特别小心，避免手指接触透镜表面。镜头用毕应贮存于干燥洁净的干燥皿中，以免镜片胶合剂发霉而致损坏。 聚焦调节时，物镜头部不能与试样接触，应先转动粗调旋钮使物镜尽量接近试样（目测），然后从目镜中观察的同时调节粗调旋钮，使物镜渐渐离开样品直到看到显微组织映象时，再使用微调旋钮调至映象清晰为止。 镜头表面有污垢时，严禁用手或织物擦摸，应先用专用的橡皮球吹去表面尘埃， 显微镜不使用时需用防尘罩盖起（防尘罩可用玻璃、绸布等） 1、显微镜是精密仪器，操作时要小心，并避免突然和剧烈的震动。 在下列场合不要使用仪器。靠近空调等设备的进气孔和排气孔的地方。靠近产生不正常噪音设备的地方。 2、不要强迫各种调节装置越过限位，这些位置表示操作的极限。所 以不要用力过大。 3、为了防止灰尘侵入，在不使用模块时，应把原来装在相应模块安 装座上的密封帽装上。清洁各种玻璃部件时，严禁用手或手帕等擦摸，不能用嘴吹，必须先用专用的橡皮球吹去表面尘埃，再用专用擦镜纸轻轻擦拭。要除掉指纹或油渍时，用少量的乙醚（70%）和酒精混合溶液沾湿专用擦镜纸擦拭。注意不要把这些化学品接近明火和可能的点火花来源，如进行开关操作的电子设备。且只能在通风良好的房间使用。 4、如果玻璃部件以外的显微镜其它部件脏了，用一块干净布擦去。 如果过分脏，不要使用有机溶剂擦拭。而要使用一块无毛软布蘸少量中性
清洁剂擦拭。 5、不要拆开显微镜的任何部分。这会造成功能失调或性能下降。 6、不使用显微镜时，一定要把主开关拨到“O”（关）。等灯室完全冷却后，在贮藏前，把它用所提供的防尘罩盖上 7、显微镜应放置在干燥通风，少尘埃及不发生腐蚀气氛的室内。室内的相对湿度应小于70%，要注意适时通风。但同时仪器不宜长期受阳光直射。室内温度过低机械部分的润滑脂容易冻结，使操作困难。在显微镜物镜、目镜装置处放上防护罩，以防尘埃进入镜体；仪器周围或内腔最好放置防霉剂，如甲醛B-萘酚、麝香草酚等慢性挥发药品。 8、操作时双手和样品要干净，绝对不允许将浸蚀剂未干的试样在显微镜下观察，以免腐蚀物镜等光学元件。操作时应精力集中，接通电源时应通过变压器，装卸或更换镜头时必须轻、稳、细心。 9、金相显微镜是一种精密贵重的光学仪器，要求非常仔细地使用和妥善的保管。要保持干燥、清洁。
显微镜维护与保养与故障解决 显微镜维护与保养与故障解决 1.物镜和目镜的生霉生雾的处理办法 准备30%无水乙醇+ 70%乙醚，将不同的镜头单独分开放置干燥剂器皿中，最好用棉花棒，纱布，柔软的刷子等比较柔软的东西来擦拭，注意不能用力擦，以防止损伤镀膜层。油镜当时就要清洗，特别是100X的油镜，处理不当的话，前片容易浸油或开胶。目镜可以自己拆下来清洗，16X目镜注意别装反了，前片凹面在上。物镜不要随便拆下。指针不要用头发来做，易弄脏镜头，厂家可配备一个指针。一般2个月最好能集中保养一次。显微镜多时，各个镜头要标号以免弄错了搭配。 2.透镜的清洁 清洁灰尘用用棉花棒，纱布，柔软的刷子等比较柔软的东西来，注意轻柔慢缓。有些较顽固的污迹如油迹，指纹等，可以用干净的软棉布，棉花棒镜头纸等蘸上无水酒精轻轻的擦去。如果是从油镜上擦去浸油，应用镜头纸，软棉布或纱布，蘸上二甲苯轻轻擦去。注意，不要用二甲苯清洗双目镜筒底部的入射透镜或目镜内的棱镜表面。因为纯酒精和二甲苯容易燃烧，在将电源开关打开或关闭时要特别当心不要引燃这些液体。防患于未然。 3.油漆和塑料表面的清洁 我们反对使用有机溶剂（如酒精，乙醚，稀释剂等）来清洗仪器的油漆和塑料表面，建议使用硅布，还有更顽固的污迹可以使用软性的清洁剂来清洗。塑料表面只需要用软布蘸水就可以了清洗了。 4.显微镜闲置的处理 当显微镜在放假等长时间不使用的情况下，请您用塑料罩盖好，并储放在干燥的地方防尘防霉。同时我们强烈建议您将物镜和目镜保存在干燥器之类的容器中，并防些干燥剂。 5.定期检查
显微镜的精细和贵重，要求我们要更加的爱护它。为了保持它的性能的稳定，我们建议您定期的检查，保养。 在显微镜的实际操作中，您或许总是会遇到一些问题。在此，我们奥力公司建议您先对照我们提供的常见故障排除法来先自己动手解决一下。这样即节约您等候维修人员的时间，又提高您自己的显微镜操作水平。如果您解决了，我们要祝贺你的能力实在是不一般；如果还是解决不了，您再向有关的维修部门联系。我们将列举一些常见的问题供您参考！希望对您有所帮助！ 第一类：光学部分的问题
细胞培养程序 材料 A、仪器 1. 净化工作台， 2. 离心机， 3. 恒温水浴箱， 4. 冰箱（4℃） 5. 倒置相差显微镜， 6. CO2培养箱， 7. 振荡混合仪 8. 酶联免疫检测仪，9. 移液枪，10. 电磁力搅拌机，11. 微孔滤器 B、玻璃器皿 1. 吸管， 2. 小烧杯（100ml）， 3. 废液缸， C、塑料器皿 1. 吸头， 2. 枪头， 3. 96孔培养板， 4. 15ml离心管， 5. 50ml离心管， 6. 胶塞， D、其他物品 1. 微量加样枪， 2. 红血球计数板， F、试剂 1. D-Hanks液， 2. 小牛血清， 3. RPMI1640， 4. 双抗（青霉素、链霉素）， 5. 0.25%胰酶， 6.0.025% EDTA 7. 二甲基亚砜（DMSO）， 8. MTT溶液：称取250mgMTT，放入小烧杯中，加50ml培养液或平衡盐溶液在电磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤器除菌，分装，4℃保存备用，两周内有效。 一、原代细胞培养或细胞株（系）复苏培养： （一）细胞原代培养 1.贴壁细胞培养法： 1）、组织块培养法 将所取得的组织用含青霉素、链霉素400U/ml和400ug/ml的生理盐水漂洗2此，5分钟/次。取出组织尽可能的取出液滴，置青霉素小瓶中，加两滴小牛血清，用剪刀尽可能将其剪碎，用吸管将其泥状的组织点种在培养瓶壁，倒置于37°、5%CO2条件下30分钟后将培养瓶正置，从培养瓶的一端缓缓加入完全培养液（小
牛血清15%、青霉素、链霉素各100U、100ug/ml），使组织块有培养液与其接触为准，轻轻放置于37°培养。待24小时候补液。 或小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。培养2~4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养3~5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。 其他方法：消化分离法、器官培养略 2.悬浮细胞培养法 对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。 （二）细胞株(系)细胞复苏培养 细胞复苏的主要操作步骤 (1)佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。 (2)迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化。 (3) 然后在无菌下取出细胞。冻存管用75%酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液。 (4)在1000r/min速度下离心5～10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109/L，置37℃温箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中，并加入培养基贴壁培养12～24小时后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养。加入的培养液的量依冻存的细胞数量，如果冻存数量为106，则稀释10倍使细胞达到105即可。 注意事项 在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生