人钙调素依赖蛋白激酶II（elisa）试剂盒 使用说明 详细介绍： 人钙调素依赖蛋白激酶II（elisa）试剂盒使用说明 检测范围：96T 4pg/ml-200pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII）水平。用纯化的人钙调素依赖蛋白激酶II （CaMKII）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII），再与HRP 标记的钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人钙调素依赖蛋白激酶II（CaMKII）浓度。 试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶 2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（320pg/ml）0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份 5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张 6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 160pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 80pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 40pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
钙调蛋白、钙调蛋白激酶与癫痫 癫痫的发病机制较为复杂，但是各种类型癫痫发作的共同病理基础是神经元的异常放电。癫痫的每一次发作都包括起动、发作性放电的维持与扩展以及发作性放电的抑制3个不同而连续的病理生理过程，在这个过程中，脑内钙离子(Ca2+)的传导起重要作用。Ca2+是一个功能活跃的2价阳离子，在调节神经元兴奋中起着重要作用。细胞外的Ca2+一旦进入细胞内并达到一定浓度时，可以激活许多细胞生物学过程。Ca2+也是中枢神经系统内发挥着重要的第二信使[3]的作用，通过Ca2+受体蛋白―钙调蛋白和钙调蛋白激酶系统激活细胞的多种功能。 1钙离子、钙离子通道与癫痫? 钙离子与癫痫的关系已经肯定。Ca2+内流在阵发性去极化漂移（paroxysmal depolarization shift，PDS）、神经元同步放电和抑制性突触后电位形成有关。由于细胞内Ca2+浓度的调节机制（Ca2+通道、Ca2+结合蛋白）失控，Ca2+过度流入神经元，可以导致细胞毒性等一系列反应。因此，Ca2+内流是癫痫发病的基本条件。 1.1在细胞水平上，癫痫的共同病理基础是神经元过度放电至于这种自发性放电，目前认为是短暂快速的Ca2+内流和缓慢Ca2+内流[4-5]引起的细胞去极化。Badea[6]等用Ca2+成像的方法观察了神经元参与癫痫发作的情况，证实了Ca2+离子快速内
流与细胞去极化有关。当这种去极化达到一定程度就会触发Na+内流，从而爆发一系列迅速的去极化过程。 1.2癫痫发作需要众多的神经元同步放电，其放电是由突触介导的，先决条件是Ca2+内流在癫痫发作前，突触前末梢活性区域中的高电子密度颗粒实质上是一种Ca2+通道。它为Ca2+进入细胞并促发癫痫发作提供条件。在癫痫持续状态时，Ca2+也发挥作用。一般认为，癫痫放电过程中，除了细胞膜快速去极化外，神经元还通过Na+-Ca2+交换、Ca2+泵、线粒体和内质网重新调整细胞内Ca2+浓度，在此基础上，新的Ca2+内流又开始。癫痫发作后期，癫痫病灶内巨大的传出冲动可以通过负反馈激活抑制机制，产生长时间细胞膜过度去极化，抑制性突触后电位IPSP 的产生，使脑内抑制过程扩散，癫痫发作终止，而IPSP的产生与Ca2+有关。 1.3细胞内Ca流的增加除可引起神经元兴奋外，大量Ca2+内流可引起细胞内钙超载而对神经细胞造成损害①激活了某些ATP酶,使高能磷酸键水解释放大量的H+,造成酸性环境而不利 于正常代谢。②细胞膜上的饱和磷脂成分水解,胞外物质进入胞内,同时释放自由基根源的游离脂肪酸。③大量内流的Ca2+沉积于线粒体,使氧化与磷酸化脱耦联,干扰高能磷酸盐的正常功能。 ④加强神经递质的胞吐作用。以上损害使细胞兴奋激惹性增高导致神经元异常放电而出现癫痫样发生。 1.4细胞内外Ca2+浓度的改变主要通过钙通道的改变得以
钙依赖蛋白激酶(CDPK s)在植物钙 信号转导中的作用① 刘贯山 陈 珈② (植物生理生化国家重点实验室,中国农业大学生物学院 北京 100094) 摘要 C DPK s 在植物钙信号转导中起重要作用。本文介绍了植物钙信号转导及C DPK s 的结构与生化性质,在此基础上,重点总结了C DPK s 在植物钙信号转导中的潜在调节作用,包括基因表达、代谢、离子和水分的跨膜运输、细胞骨架的动态变化、气孔运动和生长发育等,并提出了在C DPK s 研究中已达成的共识和需要解决的问题。 关键词 钙依赖蛋白激酶(C DPK s ),植物钙信号转导 R oles of C alcium -dependent Protein K inases (CDPK s) in Plant C alcium Signal Transduction LI U G uan-Shan CHE N Jia ② (State K ey Laboratory o f Plant Physiology and Biochemistry ,College o f Biological Sciences ,China Agricultural University ,Beijing 100094) Abstract C DPK s play im portant roles in the plant calcium signal transduction.Based on plant cal 2cium signal transduction ,and structure and biochemical properties of C DPK s ,potential regulatory roles of C DPK s in gene expression ,metabolism ,traffic of ions and water across membranes ,the dy 2namics of the cytoskeleton ,stomatal m ovement ,as well as growth and development were summa 2rized.Recognitions and challenges in C DPK studies were als o put forward. K ey w ords Calcium -dependent protein kinase (C DPK ),Plant calcium signal transduction C DPK s 全称为钙依赖的钙调素不依赖的蛋白激酶(calcium -dependent and calm odulin-in 2dependent protein kinases ),或称类似钙调素结构域的蛋白激酶(calm odulin-like domain protein kinases )。C DPK s 是在豌豆中首先报道的(Hetherington and Trewavas ,1982),并在大豆中第一次得到纯化和鉴定(Harm on et al ,1987),它不同于动物细胞中的蛋白激酶C 和依赖于Ca 2+/CaM 的蛋白激酶。C DPK s 在植物、藻类及部分原生动物中均有存在,但在细菌、真菌、酵母、线虫和动物中尚未发现。C DPK s 在植物体内分布广泛:在器官水平上,根、茎、叶、花、果实和种子中无处不在;在细胞水平上,分生细胞、木质部细胞、花粉细胞、保卫细胞和胚细胞中均有发现(Li et al ,1998;Y ahalom et al ,1998;Nishiyama et al ,1999);在亚细胞水平上,质膜、液泡膜(Chen et al ,2002)、线粒体外膜、叶绿体类囊体膜、内质网膜(Lu and Hrabak ,2002)等膜系统和胞质、核质中均有踪迹。C DPK s 在植物钙信号转导过程中具① ②②通讯作者。Author for correspondence.E -mail :chenja @https://www.doczj.com/doc/d411435776.html,. 作者简介:刘贯山,男,1962年生,中国农业大学生物学院生化及分子生物学系博士生,现主要从事钙依赖蛋白激酶功能的研究。陈珈,女,1945年生,中国农业大学生物学院生化及分子生物学系教授、博士生导师,主要从事植物膜蛋白在逆境胁迫信号转导中作用的研究。 收稿日期:2002206203 接受日期:2002208220 责任编辑:崔郁英 ①国家重点基础研究发展规划项目(G 1999011700)和国家自然科学基金资助项目(30170088)。植物学通报 2003,20(2):160～167 Chinese Bulletin of Botany