反相高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿
魏酸的含量
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【摘要】目的建立接骨胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱：Hypersil C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-1%冰乙酸(33∶67),检测波长为320 nm,流速为1.0 mL/min。结果阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.999 9),平均回收率为99.6%,RSD＝1.8%。结论该方法简便、准确,可用于控制接骨胶囊制剂的质量。
【关键词】接骨胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a method for determination of Ferulic acid in Jiegu Capsule. Method The samples were determined by RP-HPLC on a Hypersil C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of methanol and 1% acetic acid (33∶67). The detection wavelength was at 320 nm and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curves of Ferulic acid was linear in the range of 6～60 μg/mL (r＝0.999 9). The average recovery was 99.6% and RSD was 1.8%. Conclusion
The method is simple and accurate, which can be used for the quality control of Jiegu Capsule.
Key words：Jiegu Capsule；Ferulic acid；HPLC；content determination
接骨胶囊是在接骨片[《卫生部药品标准·中药成方制剂》(第2册)WS3-B-0402-90]的基础上研制的新制剂,由四号铜粉、川芎、制川乌、当归、乳香(醋炙)、没药(醋炙)、自然铜(煅)7味中药组成,具有散瘀、活血、止痛的功效,临床用于跌打损伤、筋伤骨折、瘀血肿痛。阿魏酸为本品有效成分之一,且含量较高。本试验采用高效液相色谱法对接骨胶囊中的阿魏酸进行了含量测定,为控制本品的质量提供依据。
1 仪器与试药
日本岛津高效液相色谱仪LC-6A系列；LC-6A溶剂输送泵；SPD-6AV 紫外-可见分光检测器；NASTA色谱工作站；7125型定量进样阀。接骨胶囊(自制,规格：0.2 g/粒,批号070810、070812、070814)；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110773-9910)。甲醇为色谱纯,醋酸为分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67,v/v)；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min。在此条件下,阿魏酸与其他组份分离度大于1.5,按阿魏酸峰计算理论塔板数不低于2 000,色谱峰的对称因子为0.95～1.05。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备
取阿魏酸对照品适量,精密称定,用甲醇配成每1 mL含0.06 mg 的溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取接骨胶囊50粒,取研细内容物约2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-水(50∶50, v/v)25 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率200 W,频率40 kHz) 30 min,放冷,再称定重量,用甲醇-水(50∶50,v/v)补足减失的重量,混匀,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
按照处方比例和制备工艺,制备不含川芎和当归的阴性模拟制剂,照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.3 分析方法验证
2.3.1 专属性考察
取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下进样20 μL,记录色谱图,结果见图1。由色谱图知,阿魏酸峰保留时间约15.6 min,阴性对照样品溶液在阿魏酸峰位置无干扰峰,阿魏酸与其他组份可完全分离。
2.3.2 标准曲线制备
精密吸取阿魏酸对照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 mL,分别置10 mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,各进样20 μL,按上述色谱条件进行测定。以阿魏酸浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,计算得回归方程：Y＝82 824X－560.95,r＝0.999 9,表明阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内线性关系良好。
2.3.3 精密度试验
精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0 mL,置10 mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,进样20 μL,重复进样5次,按上述色谱条件进行测定,结果阿魏酸峰面积RSD＝1.1%。
2.3.4 重复性试验
取同一批样品(批号070810)约2 g,精密称定,共5份,按“2.2.2”项下方法操作,测定结果的RSD＝1.7%。
2.3.5 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、24 h,精密吸取20 μL,注入液相色谱仪,测定阿魏酸峰面积,RSD＝1.6%,说明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.3.6 加样回收率试验
取已知含量的样品(批号070810)约1 g,精密称定,共9份,分别加入1.5、3.0、4.5 mL阿魏酸对照品溶液,按“2.2.2”项下方法操作,按上述色谱条件测定,结果见表1。表1 接骨胶囊中阿魏酸的
加样回收率试验结果（略）
2.4 样品测定
精密吸取供试品溶液20 μL,按上述色谱条件测定,3批样品测定结果见表2。表2 3批样品的阿魏酸含量测定结果(略)
3 讨论
样品提取方法及条件考察[1-2]分别采用甲醇-水(50∶50, v/v)、甲醇、流动相为溶剂,分别超声提取15、30、60 min,比较阿魏酸的含量,结果表明,样品用甲醇-水(50∶50,v/v)超声提取30 min较为适宜。另外,本试验曾用甲醇-水(50∶50,v/v)加热回流,结果阿魏酸含量与超声提取30 min比较没有明显提高,但因加热回流操作繁琐,故采用超声提取为样品提取方法。
本试验采用高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量,方法简便,结果可靠,可作为该制剂的质量控制方法。
【参考文献】
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[2] 李玲,王丽.HPLC测定升血灵口服液中阿魏酸的含量[J].中成药, 2004,26(12)：1077－1078.