RNA 提取试剂提取试剂(TRIzol)(TRIzol)(TRIzol)提取蛋白实验方法提取蛋白实验方法力学笃行，志远必达！
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操作步骤
1．用TRIzol 试剂匀浆细胞和组织的方法同RNA 提取步骤；
2．在细胞匀浆中加入氯仿，每1ml TRIzol 的起始用量加入0.2ml 氯仿。剧烈震荡30秒钟后室温放置2~3分钟；
3．4℃下10,000g 离心10分钟；
4．小心吸取并丢弃上层水相（该水相中富含细胞总RNA，如果需要提取RNA，则收集该水相）；
5．在剩下的中间层及有机相中加入无水乙醇，每1ml 起始TRIzol 用量加入0.3ml 无水乙醇。颠倒充分混匀后室温放置2~3分钟；
6．4℃下2,000g 离心5分钟；
7．小心吸取并收集上层的酚醇有机相（沉淀为DNA），转移到一个新的离心管中，加入异丙醇，每1ml 起始TRIzol 用量加入1.5ml 异丙醇，轻轻混匀后室温放置10分钟；
8．4℃下12,000g 离心10分钟；
9．丢弃上层液相，沉淀即为蛋白质。用清洗液（盐酸胍溶于95%乙醇中，终浓度为0.3M）清洗沉淀3次。每1ml 起始TRIzol 用量加入2ml 清洗液清洗。在每次清洗过程中，先将沉淀保留于清洗液中20分钟（室温下），然后在4℃下7,500g 离心5分钟。最后一次清洗后，丢弃上层液相，将沉淀悬浮于2ml 乙醇中，涡旋震荡15秒后在室温下放置20分钟，然后在4℃下7,500g 离心5分钟；10．丢弃上层液相，将沉淀真空干燥5~10分钟。然后将沉淀溶解于1%SDS（十二烷基硫酸钠）中。可于50℃水浴中用Tip 头反复吹打以助溶。不溶物在4℃下10,000g 离心10分钟去除。收集上清，转移到新的收集管中。该上清中的蛋白样品可直接用于Western Blotting 实验或保存于－20℃。
附注
1.蛋白沉淀保存于清洗液（盐酸胍溶于95%乙醇中，终浓度为0.3M）中，或保存于乙醇中，在4℃下可保存至少一个月，在－20℃下可至少保存一年；
2.在上述步骤7中收集的酚醇有机相，可用0.1%SDS 透析三次，透析后4℃下10,000g 离心10分钟。上清液可直接用于Western Blotting 实验。如果采用这种实验方案，可提高蛋白的回收效率；
3.如果蛋白溶液中的SDS 浓度高于0.1%，则不宜采用考马斯亮兰染色法（Bradford）法对蛋白定量。因为蛋白溶液中可能含有痕量酚，也不宜采用紫外分光光度法定量蛋白质。采用上述方法提取的蛋白，可以用Lowry 法或BCA 法进行蛋白定量。