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电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱

电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱
电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱

电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱陈焕文

1,3 郑健

32,3 王伟萍1 陈昌林1 王志畅11(东华理工学院,抚州344000) 2(北京市理化分析测试中心,北京100089)3(吉林大学化学院,长春130023)

摘 要 生物碱是许多中草药的活性有效成分,其含量的多少和种类的差异是导致中草药品质差异的重要因素。本文利用电喷雾解吸电离质谱(DESI 2MS )能够在不需要样品预处理的前提下进行复杂基体样品分析的特点,采用酸性甲醇2水混合溶液作为喷雾试剂,在优化了的实验条件下快速获得了吴茱萸的DESI 2MS 指纹谱图,然后利用串联质谱对其中有重要活性的5种生物碱进行了结构鉴定。实验表明,基于固体表面解吸电离质谱分析的方法不需要萃取2分离手续,单个样品测定时间不超过1.5m in,大幅度提高了分析速度,有望在药品品质的在线监测和工艺过程控制中发挥重要作用。

关键词 电喷雾解吸电离质谱,吴茱萸,快速测定,生物碱

 2008203226收稿;2008211224接受

本文系国家自然科学基金(No .20505003)资助项目

3E 2mail:zhjianhb@g mail .com

1 引 言

吴茱萸(F ructus Evod iae )是常用的中草药之一,其品质最好的是芸香科植物吴茱萸的干燥未成熟果实,具有温中、止痛、理气、燥湿、疏肝、散寒、止呕等多种功效。吴茱萸在中成药中需要粉碎后制作散剂或丸剂,临床上多作单方或复方用于治疗胃腹冷痛、高血压、寒疝疼痛、神经性皮炎、口腔溃疡及疥疮等[1]。研究认为,其主要活性成分为吴茱萸生物碱[1,2]

,生物碱的种类和含量与吴茱萸的品质相关。到

目前为止,对吴茱萸生物碱的测定方法主要有薄层扫描,毛细管电泳及高效液相色谱法[2~4]。这几种测

定方法为吴茱萸中的两种主要生物碱(吴茱萸碱和吴茱萸次碱)提供了较为满意的定性定量信息,由于灵敏度、参照物等方面的影响,对吴茱萸中尚缺少标准物质的生物碱成分的检测显得无能为力。液2质联用技术具有极强的定性能力,可有效地分析复杂混合物的单个和多个组分,曾经用来对吴茱萸生物碱进行分析[5]。但在常规LC 2MS 联用中,首先要将制药工艺中已经粉碎的样品进行萃取,然后在一定条件下进行色谱分离,最后才能够用电喷雾电离(ESI )或大气压化学电离(APC I )质谱检测。

电喷雾解吸电离(DESI )是一种新兴的离子化技术[6~8],其主要优点是能够在大气压下直接对固体

表面的痕量物质进行解吸电离,形成离子后被质谱检测。由于在大气压下进行操作(样品更换等较便利)和不需要样品预处理,使得DESI 适合于进行现场、在线分析,具有灵敏度高、速度快、特异性好等特点。自DESI 于2004年后期问世以来,已经广泛地应用到各种爆炸物现场检测[9,10]、生物组织的质谱成

像[11]、植物中生物碱分析[12]、各种形态的化学药品在线分析[13]、食品分析[14]和临床样品分析[15]等领域。本实验将DESI 2MS 用于芸香科植物吴茱萸干燥未成熟果实的快速分析。结果表明,DESI 2MS 不但

可用于化学制药工业中对成药品质进行监测[12],还可根据吴茱萸中主要生物碱组分对吴茱萸的真伪进

行快速鉴定。2 实验部分

2.1 仪器与试剂

LT Q 线性离子阱质谱仪(美国热电菲尼根质谱公司);电喷雾解吸电离(DESI )离子源(自制);红外光谱仪的制样器(天津天光光学仪器设备有限公司)。吴茱萸、曼陀罗等药材(南昌开心人中药房);甲醇、甲酸、氨水,均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂);去离子水,实验室自制。

第37卷2009年2月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究报告Chinese Journal of Analytical Che m istry

第2期237~241

2.2 电喷雾解吸电离(D ES I)离子源DESI 电离源实际上由一个略微倾斜的电喷雾源(ESI )和一个样品支架组成,整套装置放置在一个固定的平台上,并且能够通过32D 调节架来调节其相对位置,使ESI 喷嘴、样品表面以及LT Q 采样锥形成一定的夹角,以便在样品表面产生的离子能够更好地引入到质谱仪中进行质量分析。关于DESI 源的详细描述、优化等参见文献[11~14]。在通过碰撞诱导解离(C I D )进行串联质谱分析时,母离子选择窗口宽度为1.5质荷比单位,碰撞能量为20%~30%。

2.3 实验方法

2.3.1 样品处理 称取500g 清洁干燥的药用吴茱萸于洁净的粉碎机中粉碎,过0.128mm 孔径筛,然后把剩余药渣继续研磨,过筛后再充分搅拌以混合均匀。如此反复多次,直到所有药渣全部研细并且混合均匀。由于粉末样品难以直接在DESI 源中进行分析,故采用红外光谱仪的制样器将粉末样品压制成厚度约1mm 的药片备用。实验时,将药片放置在样品支架上,然后调整好样品支架和DESI 源的位置。为了获得更好的信噪比,每张质谱的平均扫描时间为1.5m in 。

2.3.2 正离子模式下D ES I 2M S 主要工作参数 质量范围为50~500Th;鞘气流速、辅助气体流速均为0mL /m in;喷雾溶剂流速为3mL /m in;雾化气线性流速约为300m /s;喷雾电压为5kV,毛细管电压为12V,透镜电压为100V;毛细管温度为275℃;喷雾溶剂为甲醇∶水∶甲酸=49∶49∶2(V /V );质谱入口与样品表面的距离为5mm;喷雾针尖与样品表面的距离为2mm;喷雾针与样品表面的角度(α)为45°;样品表面与质谱入口毛细管的角度(β)为15°。

3 结果与讨论

3.1 仪器工作条件的优化

为了优化仪器的工作条件和实验参数,首先使用常见的中药曼陀罗(Datura stra monium )的根茎进行DESI 2MS 分析,结果获得了如图1a 所示的曼陀罗的质谱图。从图1a 上可以看出,曼陀罗的DESI 谱图与文献[11]的结果基本一致,采集到大部分生物碱质谱峰。为了进一步确定所获得的实验结果,选择了曼陀罗中东莨菪碱的分子离子峰(m /z 304)进行串联质谱分析。在给定的C I D 条件下,获得了如图1b 所示的谱图,所获得的碎片与文献[11]报道一致。因此表明DESI 实验中所选定的仪器的工作条件(如角度、电压等)正确,能够获得良好的信号

图1 曼陀罗DESI 2M S 谱图(a )和其组织中东莨菪碱的二级质谱(b )

Fig .1 Des or p ti on electr os p ray i onizati on (DESI )2MS of Datura stra moniu m (a )and C I D s pectru m of

p r ot onated scopola m ine (m /z 304)(b ),showing rep r oducibility and app r op riate operati on para meters

f or DESI experi m ents

1.32多聚乙烯羟基26,72二羟基托烷(32tygl oyl oxy 26,72dihydr oxytr opane );

2.东莨菪碱(scopola m ine );

3.3,62二

聚乙烯羟基27β2酚酮(3,62ditygl oyl oxy 27β2hydr oxytr opane ); 4.32乙酸基262酚酮(32acet oxy 262hydr oxytr opane );

5.32β2二聚乙烯羟基62异戊含氧酰基272酚酮(3β2tygl oyl oxy 262is ovaler oyl oxy 272hydr oxytr opane );

6.32含氧托品

酰基262聚乙烯羟基托烷(32tr opoyl oxy 262tygl oyl oxytr opane )。

DESI 进行离子化的机理虽然还没有最终定论,但是被认为主要是离子2分子间的质子转移反应[6]

。因此,溶剂的质子化能力对信号的强度具有较大的影响。本实验考察了1%氨水、1%甲酸、中性水,中832 分析化学第37卷

性甲醇、中性甲醇2水混合溶液(1∶1,V /V )、碱性甲醇2水2氨(49∶49∶2,V /V )和酸性甲醇2水2甲酸(49∶49∶2,V /V )对曼陀罗的信号的影响。实验发现,在正离子工作模式下,碱性溶液对曼陀罗的信号有一定的抑制作用,而酸性溶液则能够对信号有较好的增强作用。实验表明,在正离子检测模式下,酸性溶液对DESI 信号有较好的增强作用,而在负离子检测模式下,碱性溶液对信号具有较好的效果。这与

DESI 中离子2分子反应机理一致[6,13]。无论何种检测模式,一般需要在喷雾溶剂中添加一定的甲醇等

有机溶剂,主要是为了减小水的表面张力,使得喷雾更加均匀细致。由于需要测定的主要成分是吴茱萸中具有一定碱性的生物碱,因此,实验选定甲醇2水2甲酸(49∶49∶2,V /V )混合溶液为DESI 喷雾所用的溶液。实验还考察了甲醇2水2甲酸(49∶49∶2,V /V )溶液的流速对信号的影响,并且发现在流速为3μL /m in 时信号的强度已经达到最大而且稳定。因此,本实验选择了3μL /m in 。

3.2 吴茱萸的D ES I 质谱检测

在已经优化的实验条件下,按照实验条件操作,获得的吴茱萸的DESI 2MS 谱图如图2所示。由图2可知,吴茱萸的DESI 2MS 谱图比较杂乱,尤其是在m /z 200~400区间内具有许多可以识别的峰(S /N ≥

3)。从前人的工作可知,吴茱萸主要活性成分是生物碱[5,16,17],分别为吴茱萸碱(分子量303)、吴茱萸

酰胺(分子量307)、羟基吴茱萸碱(分子量)、吴茱萸次碱(分子量287)和吴茱萸酰胺甲(分子量305)。由于喷雾溶剂为酸性,具有较强的质子化能力,而所测定的生物碱均具有较强的碱性。因此,在此实验条件下,在DESI 2MS 中观测的应该是这些生物碱的质子化分子离子。从图2可以看出,在m /z 304、308、320、288和306处分别观测到了较强的质谱峰,正好与吴茱萸5种生物碱的分子离子相对应。为了进一步确定所获得的这些质谱峰,分别按照实验部分进行操作,考察了这些离子的二级串联质谱,其中吴茱萸碱和吴茱萸酰胺的C I D 谱图分别如图3a 和图3b 所示

 图2 吴茱萸的DESI 2M S 谱图

Fig .2 DESI 2MS of F ructus Evodiae p lant tissue using

acidic s p raying s olvent 图3 吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸酰胺的C I D 质谱Fig .3 DESI 2M S/MS of evodiam ine and evodia m ide in p lant tissue

图3a 中碎片m /z 171为母离子丢失碎片C 8H 7NO (结构式Ⅰ)后所得。与此途径竞争的是另外一种裂解方式,即丢失碎片C 11H 10N 2(结构式Ⅱ)后得到m /z 134;从图中可以看出m /z 134的丰度比m /z 171略微高些,表明在该实验条件下两种裂解途径都存在,且丢失碎片Ⅱ的方式略占优势。图3b 为吴茱萸酰胺质子化分子离子的二级质谱,其中m /z 178是母离子丢失碎片C 9H 8N (结构式Ⅲ)后得到的碎片离子,该离子不稳定,能够继续裂解,如果丢失碎片CH 3和H 2后则得到m /z 161,如果丢失CH 3NHCH 2后则得到m /z 134。由于m /z 134的丰度较高,可能在该条件下更有利于此裂解方式的发生。另外,母离子m /z 320获得的碎片离子主要有m /z 304,144,分别由母离子丢失甲烷和碎片C 9H 8N 2O 2(结构式Ⅳ)所得;母离子m /z 288的碎片较少,在较高能量下获得的碎片主要有由于丢失水而获得的m /z 270;母离子m /z 306的碎片主要有m /z 288,是该离子丢失H 2O 后得到的碎片离子。从获得的碎片情况看,所有母离子的结构与此5种吴茱萸生物碱的质子化分子离子结构一致,而且与文献报道的结果一致[5,16,17]。因此,可以确定在DESI 2MS 谱图上观测到的质谱峰m /z 304,308,320,288和306分别为吴茱萸碱(分子量303)、吴茱萸酰胺(分子量307)、羟基吴茱萸碱(分子量319)、为吴茱萸次碱(分子量287)和吴茱萸酰胺甲(分子量305)的质子化分子离子。

C I

D 过程中形成的碎片的可能结构如下[5]:

932第2期陈焕文等:电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱

042 分析化学第37卷

实验发现,大部吴茱萸分生物碱能够和碱金属盐(如Na+)形成加合物,比如DESI2MS中m/z330, 637分别为吴茱萸酰胺(分子量307)的钠离子化峰(M+Na+)和双分子钠离子化峰(2M+Na+); m/z326,629是吴茱萸碱(分子量303)的钠离子化峰和双分子钠离子化峰。这种情况在DESI中经常出现,尤其是当碱性物质的浓度较大或碱性较强以及样品或溶液中含有浓度较高的碱金属离子时更是如此[13,15]。本实验的样品中可能含有少量钠盐,因为在LC2ESI2MS进行吴茱萸生物碱测定时观测到明显的钠离子加合物[5]。

3.3 样品制备及其杂质的影响

DESI技术的突出优点是在不需要进行样品预处理的情况下,能对复杂固体样品进行快速的质谱分析。比如在毒芹的DESI2MS分析时,直接将植物放在DESI喷嘴下即可得到很强的质子化γ2毒芹碱信号(m/z126)[12]。因此,本实验中也曾采用吴茱萸果实直接进行测定。在同样的条件下,也能够获得基本上与研磨后的样品一致的谱图,但是对低含量的生物碱,例如吴茱萸酰胺则难以获得很好的信号,尤其是当样品的表面沾有灰尘等杂质时,干扰更加严重。这可能是因为与毒芹相比,吴茱萸中的一些生物碱,如吴茱萸酰胺等,比毒芹中的生物碱更难以挥发的缘故。实践表明,不同产地的中药品质和性能有差异,在临床上的效果也很不相同。例如文献[5]报道不同产地吴茱萸的生物碱种类基本一致,但是含量差异很大[5]。因此,为了尽可能消除DESI测定中带来的系统误差,还是建议将样品进行研磨后使用。当然,如果是挥发性成分[12]或大量成分[13]的测定则无需研磨。但是,不管是否研磨,与常规的色谱2质谱联用技术相比,DESI不需要进行萃取、分离等处理手段,尚可节省大量时间。

除了样品的制备可能带来影响外,样品的纯度也对结果具有重要影响。比如将吴茱萸样品置换成曼陀罗后则获得了完全相异的DESI2MS谱图,即使能够观测到m/z304,但其二级质谱与吴茱萸中观测到的m/z304的二级质谱完全不同(参见图1和图3)。因此,还可据此做定性分析。另外,如果将少量的杂质如烟叶等研磨后混杂在吴茱萸样品中,获得的DESI2MS谱图也完全不同,主要可能是烟叶中挥发性物质更多。因此,如果将DESI2MS获得的中草药的指纹谱图与化学计量学工具(如PCA等)相结合,将有可能对吴茱萸等中草药进行快速的鉴定。

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D esorpti on Electrospray I on i za ti on M a ss Spectro m etry for

Fa st D etecti on of A lka lo i ds i n F ructus Evodiae

CHE N Huan 2W en

1,3,Z HE NG J ian 32,3,WANG W ei 2Ping 1,CHE N Chang 2L in 1,WANG Zhi 2Chang 11(East China Institute of Technology,Fuzhou 34400)2(B eijing Centre for Physical and Che m ical A nalysis,B eijing 100089)

3(College of Che m istry,J ilin U niversity,Changchun 130023)

Abstract Des or p ti on electr os p ray i onizati on mass s pectr ometry (DESI 2MS )was e mp l oyed f or fast direct de 2tecti on of 5alkal oids such as evodia m ide,evodia m ine,hydr oxyvodia m ine,rutae car p ine and goshuyua m ide 2Ⅰp resented in F ructus Evodiae herb p lant .The operati on para meters f or both DESI and LT Q instrument were op 2ti m ized and tested by p revi ously exa m ined p lant tissue of Datura Stra monium s o that a reliable finger p rint of the F ructus Evod iae tissue was generated successfully using a m ixture of methanol/water/f or m ic acid (49∶49∶2)as electr os p ray liquid .The alkal oids detected gave p redom inant signals at m /z 308,304,320,288and m /z 306,which were corres ponding t o the p r ot onated molecules of evodia m ide,ev odia m ine,hydr oxyvodia 2m ine,rutae car p ine and goshuyua m ide 2Ⅰ,res pectively .The structures of the p r ot onated molecules were con 2fir med with high confidence by tande m DESI 2MS/MS,which was facilitated by the unique features of LT Q mass s pectr ometer .I onic adducts of alkal oids and s odium were als o commonly observed in DESImass s pectra of the p lant tissue,and possible interference caused by dust,fake tissues were als o investigated experi m ental 2ly .A single run was comp leted in 1.5m in,p r oviding a fast method f or finger p rinting volatile compounds in p lant tissue .It has been de monstrated that DESI is not only potentially useful f or the quality monit oring of p r oducts in phar maceutical p r ocesses,but als o useful t o discri m inate authentic or fake F ructus Evodiae based on their mass s pectral finger p rints .

Keywords Des or p ti on electr os p ray i onizati on,mass s pectr o metry,F ructus Evodiae ,fast direct detecti on

(Received 26March 2008;accep ted 24November 2008)142第2期陈焕文等:电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱

生物碱的概述及分类

题目:第九章生物碱(一) 生物碱的概述及分类 教学目的与要求: 要求掌握生物碱的定义、分类及分布 内容与时间分配:(2学时) 一、掌握生物碱的定义和存在形式 二、熟悉生物碱的主要结构类型 三、了解生物碱的生源合成途径及生物合成的基本原理 重点与难点: 重点:生物碱的主要结构类型 难点:生物碱的生源合成途径及生物合成的基本原理 §9 第九章生物碱 §9-1 概述(15分钟) 一、生物碱的含义 二、生物碱的分布 三、生物碱的存在形式 §9-2 生物碱生物合成的基本原理(10分钟) 一、环合反应:一级环合反应、二级环合反应 二、C-N 键的裂解 §9-3 生物碱的分类(65分钟) 一、来源于乌氨酸的生物碱 吡咯类、托品烷类、吡咯里西定类 二、来源于赖氨酸的生物碱 哌定类、吲哚里西定类、喹诺里西定 三、来源于邻氨基苯甲酸的生物碱 喹啉、丫啶酮 四、来源于苯丙氨酸和酪氨酸的生物碱 苯丙胺类、苄基四氢异喹啉、四氢异喹啉、苯乙基四氢异喹啉、苄基苯乙胺类、吐根碱类五、来源于色氨酸的生物碱

简单吲哚类、半萜吲哚类、单萜吲哚类 六、来源于萜类的生物碱 单萜、二萜、三萜类 七、来源于甾体的生物碱 孕甾烷类、环孕甾烷类、胆甾烷类 §9-4 生物碱的理化性质(10分钟) 一、形状 二、旋光性 题目:第九章生物碱(二) 生物碱的理化性质 教学目的与要求: 要求掌握生物碱的溶解性、碱性及沉淀反应 内容与时间分配:(4学时) 一、掌握生物碱的形态、颜色和旋光性及生物碱和生物碱盐的溶解性及其应用,生物碱沉淀反应 二、掌握生物碱的碱性,碱性强弱与生物碱分子结构的关系及其在提取分离中的应用 三、了解生物碱的C-N键的裂解反应机理 重点与难点: 重点:生物碱的溶解性及酸碱性 难点:生物碱的碱性强弱与生物碱分子结构的关系及其应用 三、生物碱的溶解性(60分钟) (一)亲脂性生物碱1、游离生物碱易溶氯仿难溶于水(特例) 2、生物碱盐易溶于水难溶于低级性溶剂(特例) 3、具有酸碱两性的生物碱既可溶于酸、又可溶于碱 4、具有内酯、酰胺结构的生物碱加碱开环加酸环合 5、极弱碱不易与酸成盐 (二)亲水性生物碱1、季胺碱

吴茱萸规范化种植基地开发项目书

**县吴茱萸规范化种植基地开发项目推荐书 一、项目名称 **县**乡吴茱萸规则化种植基地开发项目 二、项目概况: **县**乡距县城50公里,吴茱萸种植基地于**乡境内2公里的转水、城堡两村,该乡位于湘西边陲,处在云贵高原苗山之余脉延伸的末端,既有山地特色,又有高原地相,境内最高海拔736.3米,最低海拨387.7米。土壤垂直分布明显,海拔450米以下为红壤,450-650米为黄红壤,650-730米为黄壤,气温属中亚热带季风湿润气候。这样的自然条件适于吴莱萸的种植,地产吴莱萸籽粒饱满,香气浓郁,为全国优值吴莱萸的主产地。现该乡已有成片吴茱萸种植面积1000亩,有悠久的种植历史,当地农户积累了一定的种植经验,为吴茱萸扩大种植规模奠定了良好基础。 三、建设规楗 2009年按GAP要求建立2000亩吴茱萸规范化生产基地。 四、市场前景 以吴茱萸组方多,如香连片、左金丸、戊已丸、吴莱萸汤、鸡鸣散等,目前我省怀化正清制药有限公司、湘泉集团、湘西制药有限公司、张家界制药厂等厂的肠康片(原名为香连片)年销售量在4亿片以上,年需吴莱萸50砘以上:我省衡阳卫材的伤湿膏之类用量在5吨以上,吴莱萸在全国的正常年需求量为600吨。

由于包括美国在内的西方发达国家和地区,把中药及天然植物药纳入营养补充剂、甚至非处方药的管理范畴,使很多中药有更多的途径进入国际医药保健品市场,吴莱萸是主要出口药材之一。年出口量在300吨左右;目前吴莱萸提取物成为一种新的出口产品,并在国外已开发了多种吴茱萸提取物为原料的制剂,年出口产品药需药材300吨;吴茱萸碱( Evodmine)、吴茱萸次碱(Yutaecarpihe)吴茱萸素( Wuchugine)吴茱萸苦素(Yutavine)等已作为新产品进行开发研究。 五、项目总投资:65万元 六、合作方式:合作 七、效益分析 按规划2011年可采收面积2000亩,累计产量70000kg,年累计收入17.5万元,投资回收期为4年。 八、项目进展情况 可行性研究报己完成 九、联系方式

浅谈吴茱萸中生物碱类成分的研究进展

浅谈吴茱萸中生物碱类成分的研究进展 吴茱萸, 始载于《神农本草经》:主温中下气, 止痛,咳逆寒热, 除湿, 血痹, 逐风邪, 开腠理, 为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.) Benth、石虎 E.rutaecarpa (Juss.)Benth.Var.officinalis(Dode) Huang 或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa(Juss.)Benth.Var.bodinieri (Dode) Huang 的干燥近成熟果实。主产于贵州、广西、湖南、云南、陕西、浙江、四川等地。 8~11 月果实尚未开裂时, 剪下果枝, 晒干或低温干燥, 除去枝、叶、果梗等杂质。其味苦, 性辛热, 有小毒。归肝、脾、胃、肾经, 具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻等功效。临床上常用于寒凝疼痛、胃寒呕吐、虚寒泄泻等症的治疗。运用现代药物分析技术研究发现, 生物碱类成分为吴茱萸中主要成分, 药理研究则证明生物碱为其药理作用的主要活性成分。 1 生物碱成分化学研究 1. 1 吲哚类生物碱吴茱萸果实中吲哚类生物碱目前分出的共有14 个, 包括吴茱萸碱(evodiamine)、吴茱萸次碱(rutaecarpine)、羟基吴茱萸碱(hydroxy- evodiamine)、雷特西宁(rhetsinine)、二氢吴茱萸次碱(dihydrorutaecarpine)、甲酰二氢吴茱萸次碱(formyldihydrorutaecarpine)、羧基吴茱萸碱(carboxyevodiamine)、N, N- 二甲基-5- 甲氧基色胺(N,N-dimethy-5-methoxytryptamine)、吴茱萸酰胺甲(goshuyuamide-I)[I]、吴茱萸酰胺乙

质谱基本原理

质谱基本原理 质谱法是将样品离子化,变为气态离子混合物,并按质荷比(m/z)分离的分析技术;质谱仪是实现上述分离分析技术,从而测定物质的质量与含量及其结构的仪器。质谱分析法是一种快速,有效的分析方法,利用质谱仪可进行同位素分析,化合物分析,气体成分分析以及金属和非金属固体样品的超纯痕量分析。在有机混合物的分析研究中证明了质谱分析法比化学分析法和光学分析法具有更加卓越的优越性,其中有机化合物质谱分析在质谱学中占最大的比重,全世界几乎有3/4仪器从事有机分析, 现在的有机质谱法,不仅可以进行小分子的分析,而且可以直接分析糖,核酸,蛋白质等生物大分子,在生物化学和生物医学上的研究成为当前的热点,生物质谱学的时代已经到来,当代研究有机化合物已经离不开质谱仪。 一.仪器概述 1.基本结构 质谱仪由以下几部分组成 供电系统 ┏━━━━━┳━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━┓ 进样系统离子源质量分析器检测接收器数据系统┗━━━━━┻━━┳━━━┻━━━━━━━┛ 真空系统 (1)进样系统:把分析样品导入离子源的装置,包括:直接进样,GC,LC及接口,加热进样,参考物进样等。 (2)离子源:使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子(离子)的装置,并对离子进行加速使其进入分析器,根据离子化方式的不同,有机常用的有如下几种,其中EI,FAB最常用。 EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离——最经典常规的方式,其他均属软电离,EI 使用面广,峰重现性好,碎片离子多。缺点:不适合极性大、热不稳定性化合物,且可测定分子量有限,一般≤1,000。 CI(Chemical Ionization):化学电离——核心是质子转移,与EI相比,在EI法中不易产生分子离子的化合物,在CI中易形成较高丰度的[M+H]+或[M-H]+等‘准’分子离子。得到碎片少,谱图简单,但结构信息少一些。与EI法同样,样品需要汽化,对难挥发性的化合物不太适合。 原理R + e-→R+·+ 2e-(电子电离)反应气为含H的 R为反应气体分子R+·+ R →RH+ + (R-H)·分子,例如异丁 M为样品分子RH+ + M →R + (M+H)+ (质子转移)烷,甲烷,氨气, R浓度>>M浓度R+·+ M →R + M+·(电荷交换)甲醇气等 R+·+ M →(R+M)+·(加合离子) FD(Field Desorption):场解吸——大部分只有一根峰, 适用于难挥发极性化合物,例如糖,应用较困难,目前基本被FAB取代。 FAB(Fast Atom Bombardment):快原子轰击——利用氩,氙,80年代初发明,或者铯离子枪(LSIMS,液体二次离子质谱),高速中性原子或离子对溶解在基质中的样品溶液进行轰击,在产生“爆发性”汽化的同时,发生离子-分子反应,从而引发质子转移,最终实现样品离子化。适用于热不稳定以及极性化合物等。FAB法的关键之一是,选择适当的(基质)底物,从而可以进行从较低极性到高极性的范围较广的有机化合物测定,是目前应用比较广的电离技术。不但得到分子量还能提供大量碎片信息。产生的谱介于EI与ESI之间,接近硬电离技术。生成的准分子离子,一般常见[M+H]+和[M+底物]+。另外:还有根据底物脱氢以及分解反应产生的[M-H]_ 容易提供电子的芳烃化合物产生M+

(整理)吴茱萸种植技术.

吴茱萸种植技术 独在异乡为异客,每逢佳节倍思亲。 遥知兄弟登高处,遍插茱萸少一人。 这是唐代诗人王维的作品。诗中提到的茱萸便指我们今天要介绍的植物药材吴茱萸。 吴茱萸是我国传统的中药材。为芸香科吴茱萸属植物。其入药部分为吴茱萸的果实。药材名为吴茱萸,又名吴萸,茶辣等。主要功效是温中散寒,开郁止痛。 吴茱萸在我国长江以南各地均可栽培。主产于四川、贵州、云南、湖北等省区。今天我们就一起走进吴茱萸之乡,湖北的阳新县,来学习吴茱萸的种植技术。 一、植物学特性 1、形态特征

吴茱萸为落叶灌木或小乔木,成年树可高达3~5m。叶片对生,单数羽状复叶。花为黄白色,雌雄异株。果实呈五角状扁球形,直径2~5mm。每果含种子1粒,黑色,有光泽。 2、生长周期 吴茱萸定植后的2~3年便可开花结果。花期在6~7月份,果期在8~10月份。4年以后进入盛产期。30年后结果量逐年递减,到时需砍伐更新。 3、适宜环境 吴茱萸喜温暖湿润、阳光充足的环境。适宜在海拔500m以下冬季较暖的地区生长。土壤最好是土层深厚、肥沃、排水良好的沙壤土。 二、育苗 吴茱萸的繁殖分种子、扦插、分株等多种方法。今天主要针对初次种植,想发展此产业的地区讲解一下种子繁殖。此方法在二三月份进行。育苗需要一年左右的时间。 1、选地整地

在育苗地上撒上一层腐熟的农家肥作为底肥,每亩(667平方米)约3000~4000千克。然后用旋耕机对苗圃地深耕25~30厘米,将土翻松耕细。用锄头作成宽130厘米左右的畦。在畦上开浅沟,沟宽8-10厘米,沟深3-5厘米。 2、播种 ①种子处理 我们选用的是吴茱萸成熟果实的种子。播种前将种子撒上浓度为80%的多菌灵,每千克撒60克左右,用手搅拌均匀,这样可以防止入土后的种子发生霉变。 ②播种 播种时通过拇指、食指和中指的捻动,使种子较为均匀的落在条沟里。种子的发芽率在60%左右,播种量为每亩13克左右,之后覆土,浇透水。 一到两个月后,长到5~10cm高的时候,这便进入了苗期的管理阶段。

生物质谱技术

生命科学被誉为21世纪的最前沿科学之一,随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学,即蛋白质组学时代。正如基因草图的提前绘制得益于大规模全自动毛细管测序技术一样,后基因组研究也将会借助于现代生物质谱技术等得到迅猛发展。本文拟简述生物质谱技术及其在生命科学领域研究中的应用。 1.质谱技术 质谱(MassSPectrometry)是带电原子、分子或分子碎片按质荷比(或质量)的大小顺序排列的图谱。质谱仪是一类能使物质粒子高化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离,并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组成。 质谱分析的基本原理 用于分析的样品分子(或原子)在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器,离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两个场的偏转作用彼此补偿时,它们的轨道便相交于一点。与此同时,在磁场中还能发生质量的分离,这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上,不同质荷比的离子聚焦在不同的点上,其焦面接近于平面,在此处用检测系统进行检测即可得到不同质荷比的谱线,即质谱。通过质谱分析,我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。 质谱技术的发展 质谱的开发历史要追溯到20世纪初J.J.Thomson创制的抛物线质谱装置,1919年Aston制成了第一台速度聚焦型质谱仪,成为了质谱发展史上的里程碑。

吴茱萸的栽培技术

龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/d513978176.html, 吴茱萸的栽培技术 作者: 来源:《农家科技》2017年第01期 吴茱萸为常用木本药材,以果实入药,具有温中、散寒、燥湿、疏肝、降压、止呕、止痛的功能,除药用外,还可作香料。2016年由于货源不足,市场需求量增大,导致商品价格上升:~200-250元/千克,与去年同比价翻了一番,后市走势将继续看好。因此,发展生产正当时,药农可因地制宜适度发展种植。吴茱萸野生资源分布在江西、湖南、浙江、福建、湖北、安徽、贵州、广西、云南、四川等省区,以“中花”品种价格最高,我国长江流域及以南地区均适合人工栽培。吴茱萸为落叶小乔木,平地、丘陵、山区都可种植,一年栽种,30年受益。 现将其栽培技术介绍如下: 一、育苗繁殖 1.伤根分蘖繁殖。吴茱萸分蘖力极强,可于冬季或早春,选择4年生以上的母株,将植株根际周围泥土扒开,在较粗的侧根上,用刀每隔7-9厘米处砍伤,施以适量农家肥,覆盖薄土,1-2个月后,自伤口处开始萌发出根蘖苗,培育1年,当苗高50厘米以上时,即可带根挖取另行定植。 2.扦插繁殖。选择4年生以上无病虫害的优良单株作母株。在冬季落叶后或春季新梢萌发前,从母株上剪取1年生发育充实的枝条,剪成20-25厘米长的插穗,每段需有3-4个芽,然后将上端截平,下端近节处削成马耳形斜面,每50根扎成1捆用500毫克/千克生根粉(ABT)或500毫克/千克萘乙酸(NAA)溶液快速(约10秒)浸蘸下切口1~2厘米处,取出稍晾干后扦插。插时在整好的插床上,按行株距10×5厘米划线,先用细木棒打引孔,再轻轻地将插穗插入孔内,避免碰伤皮层,插穗入土深度为穗长的112~113,插后随即按实压 紧,浇1次透水,并加盖弓形塑棚增温保湿,生根发芽后拆除。加强田间管理,培育1年,当苗高50厘米以上时,即可出圃定植。 二、移栽 自冬季落叶后至春季萌发前均可移栽。将地翻耕,除去杂草,耙细整平,然后按行株距 3×2米(每亩110株)挖穴,穴径和深各30-40厘米,每穴施入农家肥5千克左右,与底土混合均匀作基肥。然后每穴栽苗1株,要栽正、栽稳,使根部舒展,分层填土压实,浇透定根水。栽若后遇干旱天气,应及时浇水。 三、田间管理 1.中耕除草。定植后至植株封行前,要及时进行中耕除草,宜浅锄,避免伤根。栽后前3年内行间可套种草本药材或其它作物,除草也可结合套种作物进行。

生物碱习题

3 生物碱的碱性与哪些有关 (1)氮原子的杂化类型:随杂化度升高而增强;②诱导效应:氮原子所连接的基团如为供电基团则碱性增强,如为吸电基团则碱性减弱;③诱导一场效应:使生物碱的碱性降低;④共轭效应:若生物碱分子中氮原子孤对电子成P-兀共轭体系时,通常情况下,其碱性较弱;⑤空间效应:若生物碱的空间环境不利于氮原子接受质子,其碱性减弱;反之,则碱性增强;⑥分子内氢键形成:若生物碱分子结构中氮原子附近存在羟基、羰基等取代基团,碱性增强。 4.生物碱类化合物的鉴别方法①沉淀反应:大多数生物碱能和某些酸类、重金属盐类以及一些较大分子量的复盐反应,生成单盐、复盐或络盐沉淀。如与碘化铋钾试剂的反应; ②显色反应:用于生物碱的冠色试剂很多,它们往往因生物碱的结构不同而显示不同的颜色,Mandelin试剂(1%钒酸铵的浓硫酸溶液);③成盐反应:绝大多数生物碱可与酸形成盐类,但不同类型的生物碱与酸成盐的形式不同,主要有:季铵生物碱的成盐反应、含氮杂缩醛生物碱的成盐反应、具有烯胺结构生物碱的成盐反应、涉及氮原子跨环效应生物碱的成盐反应。 5.生物碱类化合物的提取一般从天然药物巾提取总生物碱通常采用溶剂法、离子交换法、沉淀法等提取分离方法。①对于脂溶性生物碱可采取酸水提取法、醇类溶剂提取法、亲脂性有机溶剂提取法;②对于水溶性生物碱可采取沉淀法、溶剂萃取法。 6.生物碱类化合物的分离对于生物碱的分离通常分为系统分离与特定分离。一般的方法是先对总碱进行初步分离,将性质相近的生物碱分成几个类别或部位。然后再按各成分的碱度、极性或功能团的差异分离生物碱单体。①总生物碱的初步分离:根据总生物碱中各成分理化性质的差异,可将其初步分离为强碱性的季铵碱、中等强度碱性的叔胺碱及其酚性碱、弱碱性生物碱及其酚性碱等几个部分;②生物碱单体的分离:利用生物碱碱性的差异、利用生物碱极性的差异或生物碱盐的溶解度差异、利用生物碱特殊官能团、利用色谱法进行分离。 7.生物碱类化合物的结构鉴定①色谱法:色谱法在生物碱鉴别中的应用主要体现在天然药物及天然药物制剂中有无生物碱存在的检识、指导生物碱的分离、检查生物碱的纯度及对已知生物碱的鉴定等多个方面,主要有:薄层色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法;②谱学法:目前,在生物碱结构鉴定工作中,最常用的分析方法有紫外光谱(U V)、红外光谱(IR)、质谱(M S)和核磁共振(N M R)。 【习题】 一、名词解释 1.生物碱 2.两性生物碱 3.生物碱沉淀反应 4.诱导效应 5.共轭效府 6.空间效应 7.诱导一场效应 8.氢键效应 二、填空题 1.小檗碱呈黄色,而四氢小檗碱则无色,其原因在于。 2.弱碱性生物碱在植物体内是以状态存在。 3.在生物碱的色谱检识中常用的显色剂是,它与生物碱斑点作用常显色。 4.Mayer’s试剂的主要成分为;Dragendorff’s试剂的主要成分为。 5.总生物碱的提取方法大致有以下三类:、、。 6.麻黄碱和伪麻黄碱的分离可利用它们的——盐在水中的溶解度不同,在水中溶

吴茱萸穴位贴敷

吴茱萸的临床应用 吴茱萸,别名吴萸、茶辣、漆辣子、臭辣子树、左力纯幽子、米辣子等。嫩果经泡制凉干后即是传统中药吴茱萸,是苦味健胃剂和镇痛剂。其性温热,味苦、辛,有小毒,归肝、脾、胃、肾经,具有散寒止痛、降逆止呕、燥湿止泻之功,用于治疗肝胃虚寒、阴浊上逆所致的头痛、高血压或胃脘疼痛等症。 1.口腔疾病 1.1口腔溃疡:吴茱萸贴敷涌泉及神阙 俞梦瑾,宋玉娟,余秀梅。吴茱萸外敷治疗婴幼儿口腔溃疡120例【J】。实用医学杂志,2009,25(8):1324—1325. 马贵廷,马平,刘志省,等。复方吴茱萸脐敷治疗复发性口腔溃疡临床报告【J】。 临床口腔医学杂志,2013,29(2):94—95. 1.2鹅口疮:吴茱萸贴敷涌泉 陈晓红。吴茱萸与冰硼散外用治疗婴幼儿鹅口疮30例【J】。山西中医学院学报,2008,9(2):42—43. 1.3牙痛:吴茱萸贴敷涌泉 金央,章勤,孙津津,等。吴茱萸穴位贴敷治疗早期妊娠牙痛39例【J】。浙江中西医结合杂志,2015(8):796—797. 2.呼吸系统疾病: 2.1急性咽炎及急性扁桃体炎:吴茱萸贴敷涌泉 葛善为。吴茱萸肉桂涌泉穴贴敷配合治疗小儿疱疹性咽峡炎的临床研究【D】。南京:南京中医药大学,2009. 赵长江。生大黄吴茱萸穴位贴敷辅助治疗小儿急性化脓性扁桃体炎胃火炽盛证临床观察【J】。中医儿科杂志,2013,9(5):48—50. 2.2咳嗽:吴茱萸贴敷大椎、肺腧、天突、脾腧、膻中 王晶。吴茱萸穴位贴敷治疗咳嗽(寒证)的临床疗效观察【D】。广州:广州中医药大学,2012. 许坚,庚慧,许桂媚。吴茱萸末穴位贴敷治疗咳嗽86例临床观察【J】。浙江中医杂志,2010,45(12):889. 2.3排痰:吴茱萸贴敷天突、定喘、肺腧 许媚媚,尹闺琛。吴茱萸粉外敷穴位促进呼吸衰竭病人肺部排痰的效果观察【J】。 江西中医药,2014(7):40—42. 2.4呼吸道感染性发热:吴茱萸贴敷涌泉、大椎 韩选明,杨茹,郭建春,等。吴茱萸穴位贴敷配合治疗小儿感染性发热的临床研究【J】。陕西中医,2014(3):295—296.

吴茱萸种植

吴茱萸种植--项目可行性报告 吴茱萸分大花吴茱萸、中花吴茱萸和小花吴茱萸等几个品种,以中花吴茱萸的市场销量为最佳,且大多出口东南亚一带,吴茱萸做香味也有一部分。目前市场上以中花走销为主,故种中花品种为宜。其次是小花吴茱萸。因大花吴茱萸的果实颗粒比较大,消费市场不太接受,药性比中、小花吴茱萸稍差,因此其商品价和苗价相对比较低。吴茱萸因前几年生产发展不平衡,近两年供需矛盾突出,故使商品价格直线上升,每公斤反弹已达35-38元左右。70年代末期到80年代初开始,中成药麝香虎骨膏配料用量年年上升,形成货少价昂之势。 分布于广东、广西、江西、贵州、云南、四川、陕西、湖南、湖北、安徽、福建及浙江等地,中性、微咸性或微酸性的土壤都能生长,一般要定值2-3年以后才能采收果实,管理得当株产干果一般2-3公斤以上,每667平方米(1亩)产200-300公斤左右,少量栽植当年可少量挂果,3 -4年进入盛果期。管理粗放,且周期不是很长。 一、项目背景 吴茱萸为芸香科植物吴茱萸[Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.]的干燥将近成熟果实,又名吴萸、吴萸子、淡吴萸、吴芋、吴于、吴椒、棍子、苯榝、榝子、搅子、樾子、椒子、茱萸子、荣子、辣子、漆辣子、米辣子、伏辣子、臭辣子、气辣子、茶辣子、石虎子、曲药子、疏毛吴茱萸、储油子、毛脉吴茱萸、纯幽子、臭泡子、左力等。 二、市场分析 吴茱萸为常用温里药,具温中散寒、开郁止痛之功效。长用于治

疗呕逆吞酸、厥阴头痛、胱腹冷痛、胃冷吐酸、脚气水肿等症,外治口舌生疮。吴茱萸内服多用于治疗寒湿之证、肠胃疾病等,亦可用于高血压、心绞痛、胆心综合征、风湿性关节炎、药物性肝损害、神经性吸气、排尿性晕厥、口腔病、高血压、阳痿早泄、慢性前列腺炎、虚寒性胃痛、腮腺炎、泄泻、麻痹性肠梗阴、小儿消化不良等。远销两广、港澳、苏联、日本、韩国、东德、西德、东南亚、南洋群岛、俄罗斯及东欧等国家和地区,深受欢迎。 三、项目建设有利条件 项目所在地为著名四大药都之一的樟树市昌付镇,昌付镇种植吴茱萸的历史悠久,中花品种为当地独有,当地农民非常熟悉种植、采收技术,也具有较高的种植吴茱萸的积极性,他们将积极参与配合项目实施;市、县、乡都有吴茱萸专业技术人员,这些技术人员长期在基层从事农业技术服务和科技推广,具有丰富的吴茱萸种植经验,种植技术及管理水平较高,可为吴茱萸种植提供技术保障。 国家、省、市对吴茱萸种植项目都有扶持资金或补助经费,对种植吴茱萸所得收入按照税法规定享受农业产业化所得税减免优惠政策,各县、乡均把吴茱萸种植作为招商项目给予扶持和税费减免。四、项目投入概算 一、第一年: 项目用地租赁费:30-60元/亩/年×500亩=1.5-3万元; 1、清山费:30元/亩×500亩=1.5万元; 2、人工种植费:0.2元/株×(500亩×111株) =1.11万元;

串联质谱技术的应用综述

《有机结构分析II》 串联质谱技术的应用

液相色谱-质谱法(LC/MS)将应用范围极广的分离方法与灵敏、专属、能提供相对分子质量和结构信息的质谱法结合起来, 因此已成为一种重要的现代分离分析技术。虽然与LC相连的单极质谱仪也能够提供相对分子质量的信息, 但不足之处在于基质对待测组分的干扰难以排除及待测组分的结构信息不能充分利用。液相色谱与串联质谱联用可在一级质谱MS条件下获得很强的待测组分的准分子离子峰, 几乎不产生碎片离子, 并可对准分子离子进行多级裂解, 进而获得丰富的化合物碎片信息, 可用来推断化合物结构, 确认目标化合物, 辨认重叠色谱峰以及在高背景或干扰物存在的情况下对目标化合物定量, 因而成为药物代谢过程和产物研究, 复杂组分中某一组分的鉴定和定量测定, 以及药用植物成分研究中更为强有力的工具。本文对液相色谱-串联质谱法(LC-MSn)的原理及其在药物代谢方面的应用作简要介绍。 1 串联质谱(MS/MS)基本原理 1.1 离子源 离子源的种类包括:电子轰击电离(EI)、化学电离(CI)、快原子轰击(FAB)、场电离(FI)和场解吸(FD)、大气压电离源(API)、基质辅助激光解吸离子化(MALDI)和电感耦合等离子体离子化(ICP)等。现在主要采用大气压离子化技术(API), 包括电喷雾离子化(ESI)、大气压化学离子化(APCI)和大气压光电离化(APPI)。API 是软电离技术, 通常只产生分子离子峰, 因此可直接测定混合物。其中,ESI应用十分广泛, 适用于极性、热不稳定、难气化的成分分离分析, 小到无机离子, 大到蛋白质、核酸。ESI-MS中可以容易地控制碎片的裂解程度。用串联质谱可以选择特定的离子, 通过碰撞诱导解离(CID)使其碎裂成碎片离子;另一种方法是通过改变锥孔(取样口)电压(源内CID)的方式, 无选择地将源内所有的离子击碎。 1.2 质量分析器及其特点 质量分析器是质谱计的核心, 不同类型的质量计其功能、应用范围、原理和实验方法均有所不同。磁质谱:分为单聚焦磁场分析器和双聚焦分析器。离子源中生成的离子通过扇形磁场和狭缝聚焦形成离子束。离子离开离子源后, 进入垂直于其前进方向的磁场。不同质荷比的离子在磁场的作用下, 前进方向产生不同的偏转, 从而使离子束发散。由于不同质荷比的离子在扇形磁场中有其特有的运动曲率半径, 通过改变磁场强度, 检测依次通过狭缝出口的离子, 从而实现离

植物次生代谢物生物碱的检测液相色谱-质谱法(标准状态:现行)

I C S07.080 A21 中华人民共和国国家标准 G B/T38571 2020 植物次生代谢物生物碱的检测 液相色谱-质谱法 D e t e r m i n a t i o no f a l k a l o i d s a s p l a n t s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y-m a s s s p e c t r o m e t r y 2020-03-31发布2020-03-31实施 国家市场监督管理总局

前言 本标准按照G B/T1.1 2009给出的规则起草三 本标准由中国标准化研究院提出并归口三 本标准起草单位:中国测试技术研究院生物研究所二河北省食品检验研究院二中国标准化研究院二河北医科大学二中国计量大学三 本标准主要起草人:张岩二范素芳二马爱进二冯德建二马春玲二文迪二丛斌二王娟二吕品二叶子弘三

植物次生代谢物生物碱的检测 液相色谱-质谱法 1范围 本标准规定了用液相色谱-串联质谱仪检测植物次生代谢产物生物碱的方法三 本标准适用于(-)-东莨菪碱二番木鳖碱二乌头碱二次乌头碱二新乌头碱二秋水仙碱二阿托品二士的宁二喜树碱二毛果芸香碱二鬼臼毒素的测定三 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的三凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件三凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件三 G B/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品经提取液超声提取二离心后,用液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量三 4试剂或材料 除非另有规定,所用试剂均为分析纯三水为G B/T6682规定的一级水三 4.110%(体积分数)乙腈溶液 10m L乙腈+90m L去离子水,混匀三 4.2甲酸 色谱纯三 4.30.1%(体积分数)甲酸水溶液 准确移取甲酸1.0m L置于1L容量瓶中,用水定容,混匀三 4.41%(体积分数)甲酸-乙腈溶液 1m L甲酸+99m L乙腈,混匀三 4.5100m m o l/L乙酸铵溶液 称取乙酸铵3.854g,用去离子水溶解,定容至500m L三 4.6乙酸铵-氨水缓冲液,p H9 取100m L100mm o l/L乙酸铵溶液,用氨水调p H到9.0?0.5三

吴茱萸高产栽培技术

吴茱萸高产栽培技术 吴茱萸又名茱萸子、曲药子。系芳香科落叶小乔木,是名贵的中药材。吴茱萸适应性强、生长快,一般栽培3年即可采集果实,加工入药。 近年来随着药材市场需求量的增加,价格也随之上扬。 吴茱萸又名茱萸子、曲药子。系芳香科落叶小乔木,是名贵的中药材。吴茱萸适应性强、生长快,一般栽培3年即可采集果实,加工入药。近年来随着药材市场需求量的增加,价格也随之上扬。因此适时发展吴茱萸栽培不失为山区多种经营途径之一。其高产栽培技术是: 1、选地与整地。栽培地应选用海拔较低、背风向阳、土层深厚、排水良好的沙质坡脚地为好。地下水位过高,土壤黏重,易积水的地方则不宜栽培。整地时按株行距3.30米X3.30米,每亩按60株的造林密度打点挖穴。整地时宜于秋季进行;坡地较大的可采取块状整地, 其规格是长、宽、深分别为60厘米x60厘米x40厘米或带状地60厘米x40厘米深,坡度较小或平地可用全垦方式,适度套种。 2、苗木繁殖。吴茱萸繁殖方法可采用种子或插条育苗。种子繁殖可冬插也可在清明节前后播种,播种1个月后即可岀苗。插条繁殖可于11-12月或第二年1-2月采集粗壮的枝条剪成20厘米长的小段, 在高垄上按25厘米行距斜插土中,保持一半露出土而。插前用比播穗稍粗的硬签引孔,然后搭棚遮阴。遮阴棚高度以50厘米为宜,也可用遮阳网遮阴。插条后要浇足水,保持土壤湿润。一般4-5月份萌芽生根。 3、栽培管理和采收。应选在冬季落叶后或第二年萌发前栽植,以春季栽植效果最佳,栽培时苗木要竖直,树根要自然伸展。先用表土

填实,两分层回填踏实,使根与土壤充分接触,浇透定根水,再盖上层浮土,保持土壤的通透性,在肥料施用上应以有机肥为主,每株可用饼肥60千克或鸡粪每株3-5千克,结合整地一并施入穴中。同时适时多追肥,防止落花落果。夏季应多施磷、钾、硼肥,少使氮肥。适度喷施防落果素效果为好。 定植3年后于小暑至立秋间,当果实由绿变黄,但尚未完全变黄时,摘下全穗果实晒干。如遇雨天可用微火烘烤,火不宜过大,以免油质挥发影响质量。

吴茱萸低产原因及高产栽培技术措施

吴茱萸低产原因及高产栽培技术措施 摘要:吴茱萸[Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.]以干燥近成熟果实入药,是传统的中药材?但野生资源少,为零星分布,商品吴茱萸主要靠人工栽培生产?在总结了桂林市的吴茱萸种植示范基地的种植经验上,论述了吴茱萸低产原因和高产栽培技术,以及采收加工的注意事项? 关键词:吴茱萸;低产原因;;高产栽培技术 Study on the Low-Yield Cause and High-Yield Techniques of Evodia rutaecarpa Abstract: Dry and almost mature Evodia rutaecarpa(Juss.) Benth. fruit was used as traditional Chinese medicine material. Now, the wild resources were ad-hoc distribution. The commercial evodia mainly depended on the cultivation. The low-yield reason, the high-yield techniques and the key points in harvest and possessing of evodia were discussed on the basis of summarizing the planting experience in Guilin demonstration base. Key words: Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.; low-yield cause; high-yield techniques 吴茱萸[Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.]为芸香科(Rutaceae)落叶小乔木,以干燥 近成熟果实入药?主要成分吴茱萸碱(分子式C19H17N3O)和吴茱萸次碱(分子式C18H13N3O)?味辛?苦,性热;有小毒;归肝?脾?胃?肾经?具有散寒止痛?降逆止呕?助阳止泻等功效[1]?商品吴茱萸主要来源于人工栽培生产,野生较少?吴茱萸的栽培历史约为300年,主产于贵州?云南?湖南?广西?陕西?浙江等省区?此外,江西?湖北?安徽?福建等省亦产[2-7]?2007年起,我们在广西壮族自治区开展了吴茱萸良种繁育及规模化生产关键技术集成应p 1.3.2褐天牛幼虫蛀入树干或枝条内,啃食木质部,造成树势衰退或断枝,严重时引起植株死亡,降低产量?7~10月危害严重,此时是果实生长和采收期? 1.4采收时期不当 吴茱萸收获期因品种不同而有差异?早熟品种在小暑后开始收获,晚熟品种在立秋后开始成熟?一般在果实由绿变黄尚未充分成熟时为最佳采收期,采收过早则产量低?品质差;过迟则果实开裂脱落,影响产量和商品质量?采收时间若不在晴天,则不能及时晒干或晾干? 2高产栽培技术措施 2.1建园选址

电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱

电喷雾解吸电离质谱快速测定吴茱萸中生物碱陈焕文 1,3 郑健 32,3 王伟萍1 陈昌林1 王志畅11(东华理工学院,抚州344000) 2(北京市理化分析测试中心,北京100089)3(吉林大学化学院,长春130023) 摘 要 生物碱是许多中草药的活性有效成分,其含量的多少和种类的差异是导致中草药品质差异的重要因素。本文利用电喷雾解吸电离质谱(DESI 2MS )能够在不需要样品预处理的前提下进行复杂基体样品分析的特点,采用酸性甲醇2水混合溶液作为喷雾试剂,在优化了的实验条件下快速获得了吴茱萸的DESI 2MS 指纹谱图,然后利用串联质谱对其中有重要活性的5种生物碱进行了结构鉴定。实验表明,基于固体表面解吸电离质谱分析的方法不需要萃取2分离手续,单个样品测定时间不超过1.5m in,大幅度提高了分析速度,有望在药品品质的在线监测和工艺过程控制中发挥重要作用。 关键词 电喷雾解吸电离质谱,吴茱萸,快速测定,生物碱  2008203226收稿;2008211224接受 本文系国家自然科学基金(No .20505003)资助项目 3E 2mail:zhjianhb@g mail .com 1 引 言 吴茱萸(F ructus Evod iae )是常用的中草药之一,其品质最好的是芸香科植物吴茱萸的干燥未成熟果实,具有温中、止痛、理气、燥湿、疏肝、散寒、止呕等多种功效。吴茱萸在中成药中需要粉碎后制作散剂或丸剂,临床上多作单方或复方用于治疗胃腹冷痛、高血压、寒疝疼痛、神经性皮炎、口腔溃疡及疥疮等[1]。研究认为,其主要活性成分为吴茱萸生物碱[1,2] ,生物碱的种类和含量与吴茱萸的品质相关。到 目前为止,对吴茱萸生物碱的测定方法主要有薄层扫描,毛细管电泳及高效液相色谱法[2~4]。这几种测 定方法为吴茱萸中的两种主要生物碱(吴茱萸碱和吴茱萸次碱)提供了较为满意的定性定量信息,由于灵敏度、参照物等方面的影响,对吴茱萸中尚缺少标准物质的生物碱成分的检测显得无能为力。液2质联用技术具有极强的定性能力,可有效地分析复杂混合物的单个和多个组分,曾经用来对吴茱萸生物碱进行分析[5]。但在常规LC 2MS 联用中,首先要将制药工艺中已经粉碎的样品进行萃取,然后在一定条件下进行色谱分离,最后才能够用电喷雾电离(ESI )或大气压化学电离(APC I )质谱检测。 电喷雾解吸电离(DESI )是一种新兴的离子化技术[6~8],其主要优点是能够在大气压下直接对固体 表面的痕量物质进行解吸电离,形成离子后被质谱检测。由于在大气压下进行操作(样品更换等较便利)和不需要样品预处理,使得DESI 适合于进行现场、在线分析,具有灵敏度高、速度快、特异性好等特点。自DESI 于2004年后期问世以来,已经广泛地应用到各种爆炸物现场检测[9,10]、生物组织的质谱成 像[11]、植物中生物碱分析[12]、各种形态的化学药品在线分析[13]、食品分析[14]和临床样品分析[15]等领域。本实验将DESI 2MS 用于芸香科植物吴茱萸干燥未成熟果实的快速分析。结果表明,DESI 2MS 不但 可用于化学制药工业中对成药品质进行监测[12],还可根据吴茱萸中主要生物碱组分对吴茱萸的真伪进 行快速鉴定。2 实验部分 2.1 仪器与试剂 LT Q 线性离子阱质谱仪(美国热电菲尼根质谱公司);电喷雾解吸电离(DESI )离子源(自制);红外光谱仪的制样器(天津天光光学仪器设备有限公司)。吴茱萸、曼陀罗等药材(南昌开心人中药房);甲醇、甲酸、氨水,均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂);去离子水,实验室自制。 第37卷2009年2月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究报告Chinese Journal of Analytical Che m istry 第2期237~241

吴茱萸田间管理

吴茱萸田间管理-幼树管理 (1)中耕除草。吴茱萸不耐荒芜,种植后应适时中耕除草,以使田间无杂草。中耕时不宜过深,以不伤根,并使表土疏松不板结为宜。 (2)水分管理。幼树定植后应做好抗旱排涝工作。平地建园应开深沟排水,降低地下水位。山地建园应注意做好水土保持。若遇干旱,有水源条件的可以采取浇水抗旱措施。如果没有水源条件,可在干旱季节来临前,在苗木四周浅中耕后搞地面覆盖。覆盖材料可就地取材,如割去山地杂草,铺于树干周围,直径1米厚10~20厘米,其上再押土或者石头,防止被风吹走。 (3)开垦扩穴。幼树定植前如果未进行深翻改土,只是挖定植穴的,应在定植后1~4年内逐年扩穴。如在梯田上种植,可先将梯田内壁深翻,以后对外壁深翻,外壁回填土较多的,可不进行深翻;如在坡地种植,可隔年隔行进行深翻,但在4年内全园要深翻一遍。 (4)行间套种。成片种植时,在株行间可间套种其他药用植物、绿肥或农作物。以低矮作物为主,如菊花、鱼腥草、益母草、大豆、西瓜、南瓜等。 (5)合理施肥。新植幼树除施足基肥外,成活后应及时补施速效性肥料。一年中以施用3次为宜,分别在早春萌芽前、6月开花前和冬季落叶后

施入。幼树以氮肥为主,每株每次使用尿素0.1千克随水浇施。如用水不便,可在下小雨前后撒施。随着树龄增加,可逐渐增加施肥量。幼树定植第三年开始,应控制氮肥施入量,增施钾肥,每株每次可施钾肥0.2千克,也可直接施入氮磷钾三元复合肥,以增强树势,促进花芽形成,为结果做准备。可采用穴施法、环状沟施肥法或放射状施肥法。 (6)定形修剪。定形修剪的对象是幼龄期吴茱萸通过修剪促进侧枝形成,培养骨架,塑造树形形6成广阔的结果面,为早产、丰产、稳产打下基础。定形修剪一般分三步完成,第一次在定植当年5月进行,第二次在定植当年落叶后至次年发芽前,第三次在定植第二年落叶后至发芽前。修剪方法:当吴茱萸株高达到80~100厘米时进行第一次修剪,剪去主干顶端,促其发枝。在向四周生长的侧枝中,选留3~4条健壮枝条,培育成主枝。第一年冬季落叶后到次年发芽前在主枝上选留不同方向生长发育充实的3~4个枝条,在每个主枝上培育出副主枝。定植第三年冬季,在副主枝上选留3~4个不同方向发育良好的侧枝,使其成为矮干低冠、外圆内空、树冠开展、通风透光的自然开心形丰产树。进入盛果期后,每年冬季还要适当地剪除过密枝、重叠枝、徒长枝和病虫枝,对枝条粗 壮、芽苞饱满的枝条应保留,促其形成结果枝。

吴茱萸中药材详细说明书

吴茱萸 药材名称: 吴茱萸 拼音名称: WUZHUYU 别名: 曲药子、伏辣子、茶辣、随萸子、吴萸、辣子、臭辣子、吴椒、臭泡子 科属: 为芸香科植物吴茱萸的未成熟果实。 产地: 分布于广东、广西、贵州、云南、四川、陕西、湖南、湖北、福建、浙江、江西。 性味: [性味、归经]辛、苦,大热。有小毒。入肝、胃、脾、肾经。 功效: 散寒止痛,降逆止呕,助阳止泻,杀虫。 中成药: 共有99种中成药使用吴茱萸:复方木香小檗碱片癣湿药水小儿健脾贴膏复方田七胃痛胶囊左金胶囊胃逆康胶囊泻痢消胶囊小儿腹泻外敷散消食贴痛经软膏等。 应用:

1、寒凝腹痛。本品辛散苦泄,性热祛寒,主入肝经,既散肝经之寒邪,又疏肝气之郁滞,为治疗肝寒气滞诸痛之要药。每与生姜、人参等同用,治疗厥阴 头痛,干呕吐涎沫,苔白脉迟等;常与小茴香、川楝子、木香等配伍,治疗寒 疝腹痛;与桂枝、当归、川芎等同用,治疗冲任虚寒,瘀血阻滞之痛经;与木瓜、苏叶、槟榔等同用,治疗寒凝脚气肿痛,或上冲入腹。 2、胃寒呕吐。本品辛散苦泄,性热祛寒,善散寒止痛,还能疏肝解郁,降 逆止呕,兼能制酸止呕。常与干姜、甘草同用,治霍乱心腹痛,呕吐不止; 与半夏、生姜同用,治疗外寒内侵、胃失和降之呕吐;配伍黄连,可治疗肝郁 化火、肝胃不和之胁痛口苦,吞酸。 3、虚寒泄泻。本品性味辛热,能温脾益肾,助阳止泻,为治疗脾肾阳虚、五更泄泻之常用药,多与补骨脂、肉豆蔻、五味子同用。 配伍效用: 1、吴茱萸配伍大枣:吴茱萸温肝暖脾、降逆止呕;大枣甘温,补脾和胃、养血安神。吴茱萸得大枣则温散而不燥烈,大枣得吴茱萸则益气养血而不壅滞。 二药合用,有温中补虚、降逆止呕之功效,用于治疗脾胃虚寒之胃脘疼痛、妊 娠恶阻以及厥阴头痛、干呕等症。 2、吴茱萸配伍当归:吴茱萸辛热燥烈,疏肝行气、温中散寒,善下行温肝肾、暖胞宫;当归辛甘而温,补血行血,为妇科养血调经之常用之品。吴茱萸得当 归则温散而不伤阴血,当归得吴茱萸则补血而不凝滞。二药伍用,其温经活血、调经止痛之功效更著,用于治疗月经延期、量少而黑、少腹冷痛因冲任虚寒所 致者以及寒滞肝脉之疝气疼痛。 3、吴茱萸配伍党参:吴茱萸辛苦性热,芳香而燥,入肝、脾、胃经,有温肝暖脾、降逆止呕、疏肝解郁、行气止痛之功;党参补中益气、养血生津。二者 合用,温中寓补,有散寒补虚之功效,用于治疗胃中虚寒之食谷欲吐、胸膈满闷;肝寒犯胃之呃逆吞酸以及厥阴头痛、干呕、吐涎沫。 4、吴茱萸配伍生姜:吴茱萸温中下气而降逆;生姜温胃散寒而止呕。二者合用,有温胃散寒、降逆止呕之功效,用于治疗胃寒呕吐或厥阴头痛呕吐涎沫者。 5、吴茱萸配伍小茴香:吴茱萸散寒除湿;小茴香散寒止痛。二者合用,有散寒除湿、行气止痛之功效,用于治疗下焦寒湿所致之脘腹疼痛、疝痛、及宫寒 不孕、月经不调、痛经等因寒而致者。 用法用量: 煎服,1.5~4.5G。外用适量。 注意事项:

质谱原理简介

质谱原理简介: 质谱分析是先将物质离子化,按离子的质荷比分离,然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标,离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。 常见术语: 质荷比:离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z. 峰:质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰离子丰度:检测器检测到的离子信号强度. 基峰:在质谱图中,指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰总离子流图;质量色谱图;准分子离子;碎片离子;多电荷离子;同位素离子总离子流图: 在选定的质量范围内,所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC图. 质量色谱图指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所作的图. 利用质量色谱图来确定特征离子,在复杂混合物分析及痕量分析时是 LC/MS测定中最有用的方式。当样品浓度很低时LC/MS的TIC上往 往看不到峰,此时,根据得到的分子量信息,输入M+1或M+23等数值,观察提取离子的质量色谱图,检验直接进样得到的信息是否在 LC/MS上都能反映出来,确定LC条件是否合适,以后进行MRM等 其他扫描方式的测定时可作为参考。 1.0 指与分子存在简单关系的离子,通过它可以确定分子量.液质中最常 见的准分子离子峰是[M+H]+或[M-H]-. 在ESI中,往往生成质量大于分子量的离子如

M+1,M+23,M+39,M+18......称准分子离子,表示为:[M+H]+,[M+Na]+ 等碎片离子: 准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示该分子较容易断裂,丰度高的碎片峰表示该离子较稳定,也表示分子比较容易断裂生成该离子。 Ep hedri ne, MW = 165 多电荷离子: 指带有2个或更多电荷的离子,常见于蛋白质或多肽等离子.有机质谱中,单电荷离子是绝大多数,只有那些不容易碎裂的基团或分子结构 -如共轭体系结构-才会形成多电荷离子.它的存在说明样品是较稳定 的?采用电喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷的离子,最后经计算机自动换算成单质/荷 比离子。 同位素离子由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子各种元素的同位素,基本上按照其在自然界的丰度比出现在质谱中,这对于利用质谱确定化合物及碎片的元素组成有很大方便,还可利用稳定同位素合成标记化合物,如:氘等标记化合物,再用质谱法检出这些化合物,在质谱图外貌上无变化,只是质量数的位移,从而说明化合物结构,反应历程等 如何看质谱图: (1)确定分子离子,即确定分子量 氮规则:含偶数个氮原子的分子,其质量数是偶数,含奇数个氮原子 的分子,其质量数是奇数。与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在3~8和10~13,21~25之间均不可能,则说明是碎片或杂质。

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