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怒志对大鼠血管内皮功能及神经内分泌功能的影响

怒志对大鼠血管内皮功能及神经内分泌功能的影响
怒志对大鼠血管内皮功能及神经内分泌功能的影响

大鼠肺微血管内皮细胞使用说明

大鼠肺微血管内皮细胞 编号名称规格北京派瑞金GK1001大鼠肺微血管内皮细胞5×105cells/瓶 为能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的大鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。研发的大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 大鼠肺微血管内皮细胞简介: 1、名称:大鼠肺微血管内皮细胞 2、组织来源:大鼠肺血管组织 3、规格:5×105cells/25cm2培养瓶 4、细胞简介: 大鼠肺微血管内皮细胞分离自正常大鼠肺血管组织,血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,该屏障对于肺气体交换,调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。 本公司生产的大鼠肺微血管内皮细胞总量约为5×105cells/瓶,细胞纯度 75%~85%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 5、培养基信息: 1)培养基类型:1640培养基(GIBCO,添加NaHCO31.5g/L,Sodium Pyruvate0.11g/L) 2)添加因子:优质胎牛血清10%,细胞生长因子等 大鼠肺微血管内皮细胞使用方法: 收到细胞后,请按照以下方法进行操作。 1.取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。 2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。 3.细胞传代 1)吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;

各种神经行为学评价

大鼠行为学实验评价汇总 大鼠行为学评定方法比较 大鼠进行行为学评定(behavior test)的十分重要,对其评定的方法也颇多,但究竟那种方法更适用,目前未有人进行过比较。为了合理选择MCAO后的评定方法,如下对目前常用的几种行为学评定方法进行比较。 行为学检查方法:由3位参加试验的人员分别以单盲法对试验的大鼠进行打分和记录.然后将3组的记分结果进行平均后的得分进行统计计算。(国内) 由一个对试验实施过程不了解的观察者对大鼠进行行为学评测。评测续贯进行。如果大鼠在一次评测中出现恰当的行为,而以后却未出现,按前者记分。(国外) 1. 神经行为学检查Longa评分法 2.Berderson评分法姿势反射测验(postural reflex test) 3. 攀绳实验 4.网屏测验(screen test) 5.肢体放置测验(limb-placement test)Elicited Forelimb Placing 6.开野试验(Open-Field法)测定行为 7.MNSS 8.转动杆测验(rotating pole test) 9.Rotation 10.肢体对称试验评分法 11. rotarod test 12. adhesive-removal somatosensory test 13.Spontaneous Activity 14.Symmetry in the Movement of Four Limbs 15.Forepaw Outstretching 16.Climbing 17.Body Proprioception 18. Response to Vibrissae Touch 改善记忆作用 1.跳台试验 2.避暗试验 3.穿梭箱试验 4.水迷宫试验 Motor behavior (1) observation of spontaneous ipsilateral circling, (2) contralateral hindlimb retraction, (3) beam walking ability,平衡木测验(balance beam test) (4) bilateral forepaw grasp, Skilled forelimb function (1)staircase feeding apparatus nociception (1) plantar test

大鼠脑缺血模型研究进展

文章编号:1001-6910(2002)05-0060-03?中医药研究进展? 大鼠脑缺血模型研究进展 王 军综述,陈国华审校 (河南省中医药研究院,河南郑州450004) 摘 要:脑缺血实验动物是研究缺血性脑血管病不可缺少的工具,大鼠为最常见的实验动物。文章就常用大鼠脑缺血动物模型制作方法、影响因素及优缺点作一综述。 关键词:脑缺血 动物模型,动物大鼠 综述 中图分类号:R25512 文献标识码:A 由于临床研究的种种限制,脑缺血动物模型已成为研究脑血管病损伤机理和防治措施不可缺少的工具。多数学者更倾向于选用大鼠复制脑缺血模型,主要由于:①大鼠脑血管解剖特点比较接近人类;②有关大鼠生理、生化、形态及药理等方面的实验资料比较丰富,有利于进行研究和比较;②价格低廉,可进行较大量重复实验;④纯种鼠属近亲交配,品种相对一致,脑血管解剖和生理机能变异较小;⑤大脑体积小,有利于进行固定染色及病理组织学观察[1]。 1 全脑缺血模型 1.1 二血管阻断缺血模型 阻断双侧颈总动脉(CC A)加动脉放血造成低血压而形成前脑缺血。单纯结扎双侧CC A而不降低血压,则不足以使脑血流量(C BF)降低至缺血和能量代谢紊乱的程度。该模型是20世纪70年代由Ekolof和N ordstrom建立并用以研究不完全性脑缺血对能量代射的影响[2,3]。优点:手术简单,失败率低。缺点:仅形成不完全性脑缺血,由于全身低血压严重干扰其它脏器的血供及实验结果。模型不能在清醒动物进行,无法进行神经行为的观察。 1.2 四动脉阻断全脑缺血模型 即双侧CC A和双侧椎动脉阻断,由Pulsinelli于1979年建立[4]。首先在麻醉状态下,经颈腹侧切口,在双CC A放入套扣并外置备用,经背正中切口在第一颈椎翼状孔下电凝双侧椎动脉。24小时后,清醒状态下经外置套扣关闭双侧CC A而形成全脑缺血,并可在一定时间放开而实现再灌流。优点:可同时在动物麻醉和清醒两种状态下进行,并能进行再灌注实验。缺点:操作复杂,且由于椎动脉与脊管前动脉间的交通支存在,个体差异较大,模型不稳定而需筛选。 1.3 三动脉阻断全脑缺血模型[5] 经麻醉动物颈正中切口,分离双侧CC A备用,剪去枕骨腹侧面部分颅骨,用5-0丝线结扎延髓腹侧面上的基底动脉,通过双侧CC A的关闭和开放实现全脑缺血再灌流。模型的成功与否可通过脑电图翻正反射进行验证。由于此模型成功率高,缺血指标的观察明确简单,可根据实验的需要,通过阻断CC A时间的长短控制脑缺血的程度等优点,已广泛用于脑缺血的药物及方法的研究。被认为是至今为止最理想的全脑缺血再灌流的动物模型。 2 局灶性脑缺血模型 由于大脑中动脉(MC A)是人群脑卒中的多发部位,因此,阻断MC A所造成的脑缺血模型被认为是一种理想的动物模型。 2.1 栓塞法 将无菌干燥研碎筛滤的血凝块[6]、碳素颗粒、塑料颗粒、花生四烯酸盐[7]及免脑粉[8]等作为栓塞剂,由颈外动脉(EC A)注入栓子后结扎EC A,开放CC A,栓子由颈内动脉(IC A)进入MC A,造成以MC A供血区脑组织损伤为主的缺血模型。但由于栓子的随机性,无法预测栓塞部位与大小,脑组织缺血不一,不利于神经症状和脑组织定量分析,且与人类卒中差异较大,使其应用受到限制。 2.2 栓线法 1985年K oizumi首次报道栓线法可逆性MC A闭塞动物模型,并在近年来不断得以完善[9,10]。由EC A插人4-0尼龙线进入IC A,阻断MC A起始端而导致局灶性脑缺血(MC AO)。通过提拉插线可造成再灌流损伤模型。优点:无需开颅,是目前唯一能观察再灌流损伤的急、慢性局灶性脑缺血模型。缺点:动物体重要求严格,该模型实质上也是一种栓塞性卒中,与人类常见卒中仍存在着差异。 2.3 光化学法 将大鼠头部固定于立体定位仪上,切开皮肤,暴露颅骨,静脉注射光敏材料虎红酸钠,用特定冷光源(500—600nm)照射切口处颅骨,光线透过颅骨与血管内的光敏物质接触,激发光化学反应而产生单线态氧,直接损伤血管内皮细胞而诱导血栓形成[11]。优点:不开颅,手术创伤小,动物易长时间存活,血栓形成过程与人类近似,适用于抗血小板、抗血栓及内皮细胞保护药物的急慢性动物实验研究。缺点:较早地导致终未动脉及微血管永久性闭塞,不利于扩血管及促进侧支循环作用的研究。 2.4 开颅法 在麻醉大鼠耳眼连线的中点垂直切开皮肤,分离颞肌,剪断颧弓,在颧弓根前方颅骨钻孔,于大脑上、下静脉间用11-0外科无创伤缝合线结扎MC A,造成MC A支配区局灶性脑缺血模型。自T amura等[12]1981年建立以来,一直受到同 ? 6 ?中医研究 2002年10月 第15卷 第5期 TC M Res.October2002V ol.15N o.5 收稿日期:2002-05-24

中央民族大学刘庆山-基于神经血管单元和网络药理学理论的抗脑卒中神经病变靶点分析

基于神经血管单元和网络药理学理论的 抗脑卒中神经病变靶点分析 刘庆山1,方亮2,王维群2,张梓倩1,杨洪军 3* (1.中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京100081; 2.苏州大学,江苏苏州215006; 3.中国中医科学院中药研究所,北京100700) [摘要]目的:总结抗脑卒中神经病变的潜在药物靶点,为开发治疗脑卒中神经病变的创新组分中药提供资料。方法:根据国内外文献总结了脑缺血再灌注损伤导致神经血管单元的3种细胞即神经元、神经胶质细胞和脑微血管内皮细胞死亡和凋亡的信号机制。结果:重要通路有5个:炎性因子-MMPs 通路-Caspases ,Ca 2+-线粒体通路-Caspases ,Ca 2+-磷脂酶-PI-3K /AK 通路,Ca 2+-自由基-MAPK 通路,Ca 2+-NO-蛋白酶通路。其中重要节点是Caspases ,Ca 2+和NO 。结论:针对脑卒中神经病变信号网络的关键环节,发挥中药多层次多机制的特色,在神经血管单元和网络药理学理论指导下的创新组分中药开发极具价值。 [关键词]脑卒中;神经病变;神经血管单元;网络药理学;创新组分中药[稿件编号]20110714005 [基金项目]国家自然科学基金面上项目(30973959,81173657)[通信作者] * 杨洪军,研究员,博士生导师, Tel :(010)64014411-2948, E-mail :hongjun0420@https://www.doczj.com/doc/d76038186.html, [作者简介]刘庆山,副研究员,博士生导师,研究生导师,Tel :(010)68933254-839,E-mail :nlqsh@https://www.doczj.com/doc/d76038186.html, 脑卒中神经病变是临床医学难题,医学界多年来围绕促进血管重构、阻断神经细胞死亡级联反应2个机制进行治疗和药物开发,药物的临床疗效不理想,药物研发思路亟待突破,中药具有多组分、多层次、多靶点和多机制的优势,如何结合国内外在神经血管单元和网络药理学方面的最新研究成果, 借鉴组分中药和有效成分组学思路,从中药宝库中开发创新药物具有重要意义。1基于神经血管单元理论分析脑缺血再灌注损伤的治疗靶点 1.1 围绕神经血管单元开发多靶点抗脑卒中药物符合网络 药理学理论特点 脑卒中是危害中老年人生命与健康的常 见病,具有高发病率、高致残率、高复发率及高致死率的特点,脑卒中分为缺血性卒中和出血性卒中2种类型,脑卒中神经病变(CIN )是其共同病理特征之一 [1-2] 。国际上多年来 主要针对神经元保护进行抗脑卒中创新药物研制,效果不理想, 10多年来美国FDA 仅仅批准了一个相对有效的药物上市,其原因可能是单细胞、单靶点思路阻碍了药物的成功率,近年来的神经血管单元理论为创新药物开发提供了新的思路。神经血管单元(neurovascular unit ,NVU )是美国国立神经病学与卒中研究所(NINDS )提出的一个中风治疗的概念模型,是神经系统的结构和功能单位,由神经元、血脑屏障 (blood brain barrier ,BBB )、小胶质细胞(microglia )以及维持脑组织完整性的细胞外基质构成, BBB 的组分包括星形胶质细胞、血管内皮细胞、周细胞(pericyte )和基底膜 [3-5] 。脑缺血损伤与神经元、小胶质细胞和微血管 [6-8] 关系密切,符合网 络药理学理论。因此, 对NVU 相关的“靶点网络”进行药物开发可能会为脑卒中神经病变的防治带来新的机遇[9-10] ,我 国一些医药研究机构利用该技术研究创新药物已经取得了 一系列进展[8,11-12] 。 1.2 兴奋性氨基酸受体和离子通道是抗CIN 潜在靶点 在 缺血脑再灌注损伤中至少有3种基本机制:兴奋性毒性和离子失衡、氧化/硝基化应激、细胞凋亡 [13-14] 。脑缺血导致能量 丢失而促发离子稳态失衡和神经递质(如谷氨酸)的释放及再摄取抑制。过量谷氨酸结合到离子型N -甲基-D -天门冬氨酸受体(NMDA )和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸(AM-PA )受体上加速了钙内流,进而导致了线粒体上的磷脂酶(主要是磷脂酶C 和磷脂酶A2)、钙依赖蛋白酶及一氧化氮合酶(NOS )等活化,改变线粒体膜的通透性,并诱导生成大量氧自由基引起膜脂质过氧化等一系列自由基连锁反应等进而导致细胞死亡或凋亡 [12] 。 近年来AMPA 受体的作用日益受到关注,研究发现一种含有PDZ 和BAZ 结构域的功能性伴侣蛋白PICK1(protein that interacts with C kinase 1)在AMPA 受体的上膜、转运和酸敏感离子通道(ASIC )的膜定位分布扮演了极为重要的角色,PICK1可能成为缺血性脑损伤的新靶点[15]。另外,胞内Ca 2+的其他通道,如L ,P /Q 和N 型钙通道都是抗脑卒中的潜在靶点。1.3 抗脑神经细胞凋亡的潜在靶点 在脑卒中病例中,凋 亡主要出现在缺血半暗带。凋亡程序的触发器包括过量的 · 831·

毛细血管(二)

毛细血管(二) 毛细血管(capillary)是管径最细,分布最广的血管。它们分支并互相吻合成网(图8-8)。各器官和组织内毛细血管网的疏密程度差别很大,代谢旺盛的组织和器官如骨骼肌、心肌、肺、肾和许多腺体,毛细血管网很密;代高血压较低的组织如骨、肌腱和韧带等,毛细血管网则较稀疏。 图8-8 人胃粘膜血管铸型扫描电镜像示毛细血管网 (一)毛细血管的结构 毛细血管管径一般为6~8μm,血窦较大,直径右达40μm。毛细血管管壁主要由一层内皮细胞和基膜组成。细的毛细血管横切面由一个内皮细胞围成,较粗的毛细血管由2~3个内皮细胞围成。内皮细胞基膜外有少许结缔组织。在内皮细胞与基膜之间散在有一种扁而有突起的细胞,细胞突起紧贴在内皮细胞基底面,称为周细胞(pericyte)(图8-9,8-10)。周细胞的功能尚不清楚,有人认为它们主要起机械性支持作用;也有人认为它们是未分化的细胞,在血管生长或再生时可分化为平滑肌纤维和成纤维细胞。 图8-9 毛细血管扫描电镜像示周细胞 P 周细胞胞体 1、2周细胞突起

图8-10 毛细血管电镜像 左图连续毛细血管,中图有孔毛细血管,右图毛细血管扫描电镜像示内皮孔 E 内皮细胞,P周细胞,↑内皮细胞孔 (二)毛细血管的分类 光镜下观察,各种组织和器官中的毛细血管结构相似,但在电镜下,根据内皮细胞等的结构特点,可以将毛细血管分为三型。 1.连续毛细血管连续毛细血管(continuous capillary)的特点为内皮细胞相互连续,细胞间有紧密连接等连接结构,基膜完整,细胞质中有许多吞饮小泡。连续毛细血管分布于结缔组织、肌组织、肺和中枢神经系统等处。肺和中枢神经系统内的毛细血管内皮细胞甚薄,含吞饮小泡较少(图8-10)。 2.有孔毛细血管有孔毛细血管(fenestrated capillary)的特点是,内皮细胞不含核的部分很薄,有许多贯穿细胞的孔,孔的直径一般为60~80nm(图8-10)。许多器官的毛细血管的孔有隔膜封闭,隔膜厚4~6nm,较一般的细胞膜薄。内皮细胞基底面有连续的基板。此型血管主要存在于胃肠粘膜、某些内分泌腺和肾血管球等处。肾血管球的内皮细胞的孔没有隔膜。 3.血窦血窦(sinusoid)或称窦状毛细血管(sinusoid capillary),管腔较大,形状不规则,主要分布于肝、脾、骨髓和一些内分泌腺中。血窦内皮细胞之间常有较大的间隙,故又称不连续毛细血管(discontinuous capillary)。不同器官内的血窦结构常有较大差别,某些内分泌腺的血窦,内皮细胞有孔,有连续的基板;有些器官如肝的血窦,内皮细胞有孔,细胞间隙较宽,基板不连续或不存在。脾血窦又不同于一般血窦,其内皮细胞呈杆状,细胞间的间隙也较大。 (三)毛细血管与物质交换 毛细管是血液与周围组织进行物质交换的主要部位。人体毛细血管的总面积很大,体重60kg的人,毛细血管的总面积可达6000m2。毛细血管管壁很薄,并与周围的细胞相距很近,这些特点是进行物质交换的有利条件。 物质透过毛细血管壁的能力称毛细血管通透性(capillary permeability)。毛细血管结构与通透性关系的研究表明,内皮细胞的孔能透过液体和大分子物质,吞饮小泡能输送液体,细胞间隙则因间隙宽度和细胞连接紧密程度的差别,其通透性有所不同。基板能透过较小的分子,但能阻挡一些大分子物质。另外一些物质,如O2、CO2和脂溶性物质等,可直接透过内皮细胞的胞膜和胞质。

第八节心脑血管药理学实验方法与技术简介

第八节心脑血管药理学实验方法与技术简介 心脑血管药物实验方法很多,择其要者简介如下: 一、血压测定及相关模型 血压测定法大体分为直接和间接测压法。直接测压可选用颈动脉或股动脉插管,通过压力换能器记录血压变化,一般用麻醉动物作急性实验。常用的间接测压法主要有大鼠尾容积测压及尾动脉脉搏测压法。实验性高血压模型有:1、肾血管性高血压模型(肾动脉狭窄性高血压模型),分为2肾1夹型(两侧肾完整,一侧肾动脉狭窄)、1肾1夹型(一侧肾切除,另一侧肾动脉狭窄)和2肾2夹型(两侧肾完整,两侧肾动脉狭窄),常用动物是狗和大鼠。 2、内分泌性高血压模型常用大鼠,包括DOC盐性高血压模型、肾上腺再生性高血压模型。 3、神经原性高血压模型。 4、遗传性高血压模型,根据采用的遗传学方法进行分类:①选择性近亲繁殖高血压模型(如自发性高血压大鼠SHR、Dahl盐敏感大鼠DS、米兰种高血压大鼠 MHS、遗传性高血压大鼠 GH、以色列种高血压大鼠 SBH、里昂种高血压大鼠 LH)②基因工程高血压模型高血压转基因动物(transgenic animals of hypertension)、高血压基因敲除动物(geneknockout animals of hypertension)。 研究降压药作用机理的实验方法包括:中枢降压(毁髓猫或大鼠模型、减弱神经反射性调节实验等);外周降压(神经节阻断、对传出神经递质及受体的影响、对在体血管阻力或离体血管平滑肌作用实验等)。 二、心脏与血管实验法简介 心脏实验可用在位心脏和离体心脏进行。离体心脏实验最常用的方法是Straub法、八木-Hartung法与Langendorff法。前两种方法主要观察药物直接对心脏收缩力、传导与心输出量的影响,适用于两栖类动物如青蛙、蟾蜍等离体心脏;后者适用于哺乳类动物兔、豚鼠、大鼠等,不仅可观察药物对心肌的直接作用,还可观察药物对冠脉流量的影响。本法虽然排除了神经体液的调控作用,但不能同时控制前、后负荷和心率,故又建立了离体工作心脏实验法。在位心脏实验法有Bülbring法、家兔不破坏胸膜记录心收缩力法、狗心肺装置实验法等。 冠脉血管及冠脉血流量实验法离体实验主要有冠状动脉条实验、Langendorff离体心脏测定冠脉灌流量法;在位心脏测定冠脉血流量及心肌耗氧量、测定区域性心肌血流量、86Rb 测定心肌营养血流量法。 心血管药理实验方法中的技术手段还有:清醒大鼠心功能及血流动力学实验、动物心电图、心导管技术等。 三、抗心肌缺血与再灌注损伤药物实验法简介 首先介绍心肌缺血与再灌注损伤模型的制备:①整体动物结扎冠脉后再灌注模型(常用犬、兔、大鼠进行);②离体心脏缺氧造成全心缺氧和其后的在给氧损伤,亦可结扎离体心脏的冠脉,然后松结产生局部心肌再灌注损伤;③体外心肌培养缺糖缺氧与再给糖给氧产生再灌注损伤。 心肌缺血与梗塞范围测定:组织学检查;NBT或TTC标本染色法;心肌酶活性测定(如CK、LDH);心表面NADH荧光照相法。 还可应用心肌代谢测定法观察药物的影响,如测定血或组织中的乳酸、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)等,一般用试剂盒检测。 四、脑缺血和脑血流实验法简介 阻断支配脑组织的血管,可模拟与人脑卒中相近似的病理模型,实验性脑缺血模型制备的方法主要有:1、全脑缺血:结扎大鼠双侧颈总动脉和椎动脉;结扎大鼠双侧颈总动脉合

小鼠肺微血管内皮细胞使用说明

小鼠肺微血管内皮细胞 小鼠肺微血管内皮细胞产品说明: 为使客户能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠肺微血管内皮细胞注意事项: 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。 小鼠肺微血管内皮细胞其他相关小鼠原代细胞: 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞

大鼠腹主动脉取血方法

●将大鼠腹腔注射 1 0 %水合氯醛以0。03 m L/kg麻醉,也可用3%戊巴比妥纳, 0.2ml/100g体重,注射麻醉剂后,直到身体全身变软,方可把大鼠仰卧固定在手术台 上,背部可以放置一粗试管以充分暴露腹主动脉,常规消毒后用手术剪刀沿腹正中线剪开腹腔,用小镊子轻轻扒开血管周围脂肪,再用棉球把覆盖在血管的多余脂肪擦静,直达清昕看清血管为止(用棉球可以尽量减少小血管破裂出血,影响接下来进针时的视线)。找腹主动脉在脊柱上面,腹腔静脉血管(比腹主动脉粗,黑)旁,找到后,术者先固定血管,尽可避免血管移位,左手拇指和食指固定住血管两旁的脂肪及其它脏器,无名指按住血管进针点的上端,降低血压,可以避免喷血,右手持穿刺针,针尖斜面朝下,人针角度约 30度左右,朝向心端方向刺人,深度以5 mm左右为宜,进针后可以用止血夹夹住针头,可以避免麻醉不够挣扎导致血管被针头戳破。可以反复采集多管的血样进行不同项目的测试,一般体重 2 0 0~ 3 0 0 g 的大鼠 用真空管采血可采血液 8~1 0 m L ,同周龄的老鼠,雄鼠可采的血量多余雌鼠。此方法特点是采血量多,但是只能采一次血,需要点技巧,需多次练习方可熟练。 ●图中粉红色为腹主动脉,粗、且黑为静脉 准备材料:需要一次性采血针和真空采血管 (是不是抗凝的由你自己决定) 取血方法:你应该见过护士给病人取血吧,原理是一样的,打开腹腔后,用镊子将腹腔脏器翻转到右侧(大鼠的左侧),即可见腹主动脉和后腔静脉,其中后腔静脉为暗红色,腹主动脉颜色发白.用小镊子剥离开腹主动脉旁边的筋膜组织(如果你技术熟练可以省略此步)然后用采血管做腹主动脉穿刺见回血后,另一端插入真空管之中,就会有血喷出,直到压力变小后再换一根真空管.

大鼠神经行为缺损评分与脑梗死率相关性研究分析_张俊清

大鼠神经行为缺损评分与脑梗死率相关性研究分析 张俊清1,孟智宏2,樊小农 3 (1.内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院,内蒙古包头014010;2.天津中医药大学第一附属医院,天津300193; 3.天津中医药大学第一附属医院针灸研究所,天津300193)摘 要:目的:研究经典线栓法制备局灶性脑梗死模型大鼠的神经功能评分与脑梗死率的相关性。方法:采用ZeaL-onga 法制作大鼠局灶性脑梗死模型,在不同时间段采用Zausinger 六分法对脑梗死大鼠进行神经功能缺损评分,并用 TTC (2、3、5-氯化三苯基四氮唑)溶液对脑组织染色,计算脑梗死率。结果:六次神经功能缺损评分与脑梗死率之间呈 显著相关性(r 1=-0.528;r 2=-0.535;r 3=-0.529;r 4=-0.512;r 5=-0.535;r 6=-0.5888)。结论:经典线栓法制备的局灶性脑梗死模型(大脑中动脉栓塞)中,大鼠的肢体运动功能与脑梗死率有相关性,第六次神经功能缺损评分与脑梗死率相关性最大,针刺能够改善神经功能缺损情况,提高评分,降低脑梗死率。 关键词:大脑中动脉缺血模型;神经功能缺损评分;脑梗死率;相关性 中图分类号:R364.17文献标识码:A 文章编号:1000-1719(2012)11-2140-03 Analysis on Correlation between Rats Neurobehavioral Scores and Cerebral Infarction Rate ZHANG Jun-qing 1,MENG Zhi-hong 2,FAN Xiao-nong 2 (1.The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College ,Inner Mongolia University of Science &Technology ,Baotou 014010,Inner Mongolia ,China ;2.First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine ,Tianjin 300193,China ;3.Institute of Acupuncture &Moxibustion ,First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM ,Tianjin 300193,China )Abstract :Objective :To study the relation between neurobehavioral scores and cerebral infarction rate in rats model which was made by method of classic suture method.Methods :ZeaLonga method was used to make focal cerebral infarction model.In different periods ,Zausinger six points method was used for neural function defect scale ,and with TTC (2,3,5-chlorinated three four nitro-gen phenyl )solution to make brain tissue dyeing ,the calculation of cerebral infarction rate was made.Results :The neural function defect scales and cerebral infarction rate at six time points had a significant correlation (r 1=0.528;r 2=0.535;r 3=0.529;r 4=0.512;r 5=0.535;r 6=0.5888).Conclusion :In the focal cerebral infarction model (brain artery embolization )made by classic su-ture method ,rat body movement function and cerebral infarction rate have correlation ,the sixth correlation of neural function de-fect scale and cerebral infarction rate is the largest.Acupuncture can improve neural function defects ,improve the grade ,reduce the rate of cerebral infarction. Key words :MCAO ischemia model ;neural function defect scale ;cerebral infarction rate ;correlation 收稿日期:2012-05-17 基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划);针刺手法的量效关 系及生物学机制研究(2010CB530506) 作者简介:张俊清(1979-),男,内蒙古呼和浩特人,博士研究生,研究 方向:针刺治疗脑血管病机理及针刺手法疗效关系。 通讯作者:孟智宏(1963-),男,教授、主任医师,博士研究生导师,研究 方向:针刺治疗对心脑组织保护作用,针刺手法量效关系及生物学基础。 神经功能缺损评分是一种被广泛应用的脑缺血模 型评价方法。资料显示, 50% 70%的脑梗死存活者遗留瘫痪、失语等,神经功能缺损评分可直观的反映这些症状和体征,症状与体征的检测又可以反映脑损伤与恢复的程度。脑梗死灶体积的测定是评价局部脑缺血及缺血性脑损害程度最重要的客观指标之一,是公认的评价药物是否具神经保护效果的金指标。TTC (2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色法能够直观地显示 脑缺血发生的部位和程度,进而对脑梗死体积做出评 价。神经功能缺损评分是评价造模成功的标准,也是 神经功能缺损的反应, 梗死率是评价脑缺血损伤程度最准确的指标,二者之间是否存在相关性,相关程度如何罕见报道。本研究复制大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO ),以针刺频率的慢、中、快(1、 2、3次/s )和针刺时间的短、中、长(5s 、 60s 、180s )的两因素三水平针刺参数搭配组合9种针刺参数组, 以捻转手法刺激“内关穴”,以神经行为缺损评分、脑梗死率为效应指 标, 通过偏相关分析研究神经功能缺损评分与通过TTC 计算脑梗死率的相关性,以及相关的程度。分析TTC 计算脑梗死率与六次神经功能缺损评分的相关性。 1材料和方法 1.1试剂与仪器水合氯醛(分析纯)(天津市瑞科 有限公司)、多聚甲醛(分析纯)、 PBS 溶液、TTC 粉末、生理盐水(天津市联星生物技术有限公司)。

小鼠神经功能评分

小鼠神经功能评分 1.神经行为评分 在梗死后24h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法[3]对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包 括:①自主活动的程度,②左前肢偏瘫,③提尾时左前肢伸不直,④抗侧推能力,⑤向左倾斜度,⑥向左环行度,⑦对触须的反应。以上指标无异常为0分,中等异常为1分,严重异常为2分,将各项评分相加,总分为0~14分。 2.动物行为学评定 ①0分:无神经损伤症状; ②1分:不能完全伸展对侧前爪; ③2分:向瘫痪侧转圈; ④3分:向对侧倾倒; ⑤4分:不能自发行走,意识丧失。 3.大鼠神经损伤严重缺损评分(Neurological Severity Scores,NSS): 0分:神经功能正常; 1分:轻度神经功能缺损(提尾时左前肢屈曲); 2分:中度神经功能缺损(行走时向左侧转圈); 3分:中度神经功能缺损(向左侧倾斜); 4分:无自发行走,意识减退; 5分:与缺血有关的死亡。 4.平衡木试验(Beam Balance Test,BBT): 把大鼠置于一宽1.5cm的木条上。木条一端悬空,另一端固定于一块40x40cm的平板中心,以防止大鼠从木条上爬到桌面上使实验失败。木条下备有软垫以防大鼠掉下时跌伤。根据2分钟内大鼠的平衡能力行神经学评分。正常大鼠的平衡能力在1-2分钟。 平衡试验评分标准: 1在木条上站稳,无摇晃,持续2分钟 2在木条上站稳,左右摇晃,未滑下,持续2分钟 3在木条上站立,下滑至一侧,未掉下,持续2分钟 4在木条上站立不到2分钟即从木条上掉下 5试图在木条上站稳、但在数秒钟即掉下 6无任何站立能力

5.抬高身体摇摆试验(Elevated Body Swing Test,EBST): 用于测量运动不对称,EBST测量时首先用手提起大鼠的尾根部,大鼠头部悬垂距平面5cm左右,这时大鼠头部会向左侧或右侧旋转,向单测旋转的角度大于100时为计数的标准,记录旋转的方向和角度,一次试验后让大鼠休息1min,再进行下一次实验,重复试验20次,记录总的次数和方向。 6.一次性被动回避平台试验(Step-down Passive Avoidance Test,SDPAT)是一种用于研究记忆的简 单行为模型,主要适用于研究记忆的巩固(memory consolidation)和记忆的保持 (memory retention)。该模型含有一定的空间记忆成份,试验箱是一个长方形的封闭空间,高为60cm,箱内有一较小的平台9cm X9cm,高出底面约2cm,动物只能不十分舒服地坚持在平台上,如跑下平台(铜棒,通电,30V)即遭到电击。训练过程是这样的:首先把动物放在平台上,大鼠一般在平台上只能停留几分钟,就会跑下来,但由于底面的金属条是通电的,大鼠在寻找一段时间后,能够找回平台。这时第一次试验结束,24h后,再次把大鼠放在平台上,这时底面的金属条并不通电,记录大鼠 在平台上滞留的时间,根据测试间隔时间的长短和在平台上滞留时间的多少来判定大鼠对上次电击的记忆保持能力。 7.水迷宫试验(Water Maze Test,WMT): 用于测量大鼠空间学习能力。每组于移植后的第7周进行。在相同室温(25±2)0C和象限条件下,将3组动物连续训练4d,2次/d,每次限定时间为120s,超过120s仍找不到平台者记为未找到平台,2次间隔为10min,第5天测试。 Bederson评分四个功能等级: 0分:无神经损伤症状 1分:悬尾实验不能完全伸展对侧前爪 2分:前肢抵抗对侧推力能力下降? 3分:向对侧转圈

大鼠腹主动脉真空采血管采血法

万方数据

大鼠腹主动脉真空采血管采血法 作者:李研, 于峰 作者单位:国家沈阳新药安全评价研究中心, 刊名: 卫生毒理学杂志 英文刊名:JOURNAL OF HEALTH TOXICOLOGY 年,卷(期):2001,15(4) 被引用次数:2次 本文读者也读过(10条) 1.安丽.鲍清大鼠颈静脉采血新方法[期刊论文]-中国比较医学杂志2003,13(4) 2.邹洪.闫洪涛.李军.伍松.唐均成.汤礼军.Zou Hong.Yan Hongtao.Li Jun.Wu Song.Tang Juncheng.Tang Lijun 大鼠实验研究中三种采血方法的应用[期刊论文]-西南军医2011,13(5) 3.张颖.望文桢大鼠心脏采血的几点体会[期刊论文]-实验动物科学2008,25(1) 4.金玮.杨安怀.邢怡桥.Jin Wei.Yang Anhuai.Xing Yiqiao大鼠心脏穿刺采血方法的改进[期刊论文]-微循环学杂志2006,16(2) 5.罗卫国.张伟大鼠两种采血方法介绍[期刊论文]-第四军医大学吉林军医学院学报2000,22(1) 6.李卫国.罗艳蕊.翟心慧.张文学大鼠连续定时采血新方法--股动脉插管法[期刊论文]-生物学杂志2001,18(6) 7.王晶晶.焦昆.李兵.殷召雪.孟霞.乔欣.肖迎秋.卢静.WANG Jing-jing.JIAO Kun.LI Bing.YIN Zhao-xue.MENG Xia.QIAO Xin.XIAO Ying-qiu.LU Jing介绍一种新的大鼠颈外静脉插管方法[期刊论文]-实验动物科学2008,25(2) 8.吴清洪.顾为望.林继红.张嘉宁一种大鼠采血方法介绍[期刊论文]-动物医学进展2004,25(1) 9.张海燕.姬凤彩.马新.唐婧.李世东.郭莉丹.张慧洁不同间隔采血对大鼠血常规的影响[期刊论文]-实验动物与比较医学2010,30(4) 10.金玮.金化民.盛晖.姚颐.程帆剑突下入路的大鼠心脏穿刺采血法[期刊论文]-中华实验外科杂志2005,22(12)引证文献(2条) 1.邹洪.闫洪涛.李军.伍松.唐均成.汤礼军大鼠实验研究中三种采血方法的应用[期刊论文]-西南军医 2011(5) 2.谢兴文.许伟.李宁羌活鱼研粉物、水提及酸提物含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化的影响[期刊论文]-中国组织工程研究与临床康复 2011(36) 本文链接:https://www.doczj.com/doc/d76038186.html,/Periodical_wsdlxzz200104028.aspx

小鼠心肌微血管内皮细胞使用说明

小鼠心肌微血管内皮细胞 小鼠心肌微血管内皮细胞产品说明: 为使能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠心肌微血管内皮细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠心肌微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 注意事项: 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。 小鼠心肌微血管内皮细胞产品简介: 1、产品名称:小鼠心肌微血管内皮细胞 2、组织来源:小鼠心肌血管组织 3、产品规格:5×105cells / 25cm2培养瓶 小鼠心肌微血管内皮细胞简介: 小鼠心肌微血管内皮细胞分离自正常小鼠心肌血管组织,血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。 本公司生产的小鼠心肌微血管内皮细胞,细胞总量约为5×105cells/瓶,细胞纯度可达80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 小鼠心肌微血管内皮细胞培养基信息:

MCAO神经行为学评价

MCAO造模后行为学评定小结 MCAO后大鼠行为学评定方法比较 在对MCAO后大鼠进行行为学评定(behavior test)的十分重要,对其评定的方法也颇多,但究竟那种方法更适用,目前未有人进行过比较。为了合理选择MCAO后的评定方法,如下对目前常用的几种行为学评定方法进行比较。 行为学检查方法:由3位参加试验的人员分别以单盲法对试验的大鼠进行打分和记录.然后将3组的记分结果进行平均后的得分进行统计计算。(国内) 由一个对试验实施过程不了解的观察者对大鼠进行行为学评测。评测续贯进行。如果大鼠在一次评测中出现恰当的行为,而以后却未出现,按前者记分。(国外) 1. 神经行为学检查 Longa评分法 2.Berderson评分法姿势反射测验(postural reflex test) 3. 攀绳实验 4.网屏测验(screen test) 5.肢体放置测验(limb-placement test)Elicited Forelimb Placing 6.开野试验(Open-Field法)测定行为 7.MNSS 8.转动杆测验(rotating pole test) 9.Rotation 10.肢体对称试验评分法 11. rotarod test 12. adhesive-removal somatosensory test 13.Spontaneous Activity 14.Symmetry in the Movement of Four Limbs 15.Forepaw Outstretching 16.Climbing 17.Body Proprioception 18. Response to Vibrissae Touch 改善记忆作用 1.跳台试验

大鼠尾部血管的解剖结构与鼠尾的生理功能探讨

2018年1月第28卷一第1期 中国比较医学杂志 CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINE January,2018 Vol.28一No.1 [基金项目]华中科技大学实验技术研究项目(华中科技大学实验室与设备管理处,设字[2013]13号)三 [作者简介]王蕾(1996 ),女,医学本科在读,研究方向:比较医学及实验动物疾病模型三E?mail:272492016@qq.com[通信作者]叶明霞(1971 ),主管技师,医学学士,研究方向:动物实验及手术造模三E?mail:yemx@hust.edu.cn 研究报告大鼠尾部血管的解剖结构与鼠尾的生理功能探讨 王一蕾1,叶明霞2? (1.华中科技大学同济医学院护理学院,武汉一430030;2.华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉一430030)一一?摘要?一目的一通过对实验大鼠尾部血管的解剖研究,进一步明确其动静脉走行和分布,以加深对其生理功 能的理解,为动物实验技术的规范化和实验动物模型设计提供解剖学基础三方法一选用成年SD大鼠,采用红蓝两 色颜料对尾部血管进行灌注后解剖二腹主动脉生理压力甲醛灌注固定后尾部组织切片二动脉显微血管造影,三种方 法配合互相印证三结果一证实了大鼠尾部浅层3套纵向动静脉系统,明确了背侧的动静脉链状结构,填补了深层 血管分布的空白三提出了动静脉血管分布不匹配特点及其生理基础,明确了尾部血管的双层笼状沟通结构三结论 本研究准确地显露了大鼠尾部丰富的血管结构,揭示了鼠尾深层血管系统的存在,并提出双层框架血管结构的理 念,为探讨其生理功能的相关研究,避免重大损伤二后肢缺血代偿反应等打下良好的基础三 ?关键词?一SD大鼠;尾部血管;造影;HE染色 ?中图分类号?R?33一一?文献标识码?A一一?文章编号?1671?7856(2018)01?0051?05 doi:10 3969/j.issn.1671-7856 2018 01 009 Anatomyofcaudalvesselsoftheratandphysiologicalfunctionsofrattail WANGLei1,YEMingxia2? (1.SchoolofNursing;2.FacultyofLaboratoryAnimals;TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScience andTechnology,Wuhan430030,China) 一一?Abstract?一Objective一Tofurtherdefinitethedistributionofcaudalarteriesandveinsofratbyanatomical dissectionandtodeepentheunderstandingoftheirphysiologicalfunctions,andprovideabasisforstandardizationofanimal experimentaltechniquesanddesignofanimalmodels.Methods一EighteenSPFadultSDratswereusedinthisstudy. Severaltechniqueswereusedincombinationtostudytheanatomyandhistologyoftherattailbloodvessels: paraformaldehydeperfusionthroughtheabdominalaortawasperformedforrapidandthoroughfixation,blueandredpaints wereinjectedtovisualizethetailveinsandarteries,respectively,arterialmicroangiographywasperformedtoillustratethe distributionoftailarteries,andthemicroscopicstructureofarteriesandveinswasverifiedbyhistologicalexamination. Results一Threelongitudinalsuperficialarterialandvenoussystemsofrattailwereconfirmedandadorsalarterialand venouschainstructurewasdefined,whichdeepedourknowledgeaboutthedistributionofthedeepbloodvessels.In addition,thecaliberofarterieswasnotcorrespondingwiththatofveins,providingabasisoftheirphysiologicalfunctions. Abilayercageconnectingstructureoftherattailvasculaturewasforthefirsttimedefined.Conclusions一Therichvascular structureofrattailisdescribedindetailsinthisstudy.Theexistenceofbasalvascularsystemofrattailisclarified.A conceptofbilayerframeworkoftherattailvasculatureisproposed,whichlaysagoodfoundationforrelatedresearchesof theirphysiologicalfunctions,andprovidesagoodbasisforavoidingmajorinjuriesandcompensatoryresponsesofhindlimb ischemiaduringanimalexperiments. ?Keywords?一SDrats;tailvasculature;angiography;HEstaining

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