一. 常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性，
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L 的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt’s regent）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）
水2g 2g 2g
加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液,水: 2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP
水2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul
20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水20g
50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。
DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC 处理Tris缓冲液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。
磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl
1mmol/L EDTA
水1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15％聚蔗糖（400型）
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）
水 2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
50％甘油
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40％聚蔗糖
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1％SDS
50％甘油
水20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10％SDS
5ml
补足到10ml
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化钠10g
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化钠0.5g
1 mol/L 氯化钾2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化钠4ml
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g
用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml 终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
几种溶液的配制方法
1、PBS:
取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。
2、TBS：
2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）
Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g
1N HCL 约420ml
双蒸水加至1000ml
Tris缓冲液配制方法：
先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH （1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。
2.2 TBS配方：
Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6）100ml
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
双蒸水加至1000ml
TBS配制方法：
先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：
3.1 储存液：
A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7?H20）溶于1000ml蒸馏水中。
B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7?2H20）溶于1000ml蒸馏水中。
3.2 工作液：
0.1 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0
4、胰酶（Trypsin）：
4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：
常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。
4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。
5、胃酶（Pepsin）：
4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。
（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）
6、DAB：
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。
6.1 ZLI-9030 DAB：
6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。
7、AEC：
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。
8、RIPA：
1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml l/ml） PMSF异丙醇溶液（用量为10
l/ml） 8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液
l/ml） （用量为10
9、Blotto A：
常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。
10、Blotto B：
与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。
[ Last edited by BlueGuy on 2006-4-26 at 20:42 ]
作者：Eric6007
实验室常用贮存液的配制参数
一、核酸及蛋白质常用数据
化合物分子量λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值OD280/OD260
ATP 507 259 15400 0.15
CTP 483 271 9000 0.97
GTP 523 253 13700 0.66
UTP 484 262 10000 0.38
dATP 494 259 15200 0.15
dCTP 467 271 9300 0.98
dGTP 507 253 13700 0.66
dTTP 482 267 9600 0.71
2．常用核酸的长度与分子量
核酸核苷酸数分子量
λDNA 48502（双链环状） 3.0×107
pBR322 4363（双链） 2.8×106
28SrRNA 4800 1.6×106
23SrRNA 3700 1.2×106
18SrRNA 1900 6.1×105
19SrRNA 1700 5.5×105
5SrRNA 120 3.6×104
tRNA（大肠杆菌）75 2.5×104
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bp DNA
30，000MW蛋白质=810bp DNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kb DNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
（1）高分子量标准参照（2）中分子量标准参照（3）低分子量标准参照肌球蛋白分子量磷酸化酶 B 97，400 碳酸酐酶31，00
肌球蛋白212，000 牛血清白蛋白66，200 大豆脻蛋白酶21，500
β-半乳糖甘酶B 116，000 谷氨酶脱氢酶55，000 抑制剂磷酸化酶 B 97，400 卵白蛋白42，700 马心肌球蛋白16，900
牛血清白蛋白66，200 醛缩酶40，000 溶菌酶14，400
过氧化氢酶` 57，000 碳酸酐酶31，000 肌球蛋白（F1）8，100
醛缩酶40，000 大豆脻蛋白酶21，500 肌球蛋白（F2）6，200
抑制剂肌球蛋白（F3）2，500
溶菌酶14，400
5．常用DNA分子量标准参照物
λDNA/HindⅢλDNA/EcoRⅠλ/HindⅢ+EcoRⅠpBR322/HaeⅢ23130 21226 21227 587 123
9416 7421 5148 405 104
6557 5804 4973 504 89
4361 5643 4268 458 80
2322 4843 3530 434 64
2027 3530 2027 267 57
564 1904 234 51
125 1584 213 21
1375 192 18
974 184 11
831 124 7
564
125
续上表
pBR322/HinfⅠφχ174/HinfⅠφχ174/Hae Ⅲφχ174/TapⅠ1631 726 140 1353 2914
517 713 118 1078 1175
506 553 100 872 404
396 500 82 603 327
344 417 66 310 231
298 413 48 281 141
221 311 42 271 87
220 249 40 234 54
154 200 24 194 33
75 151 118 20
72
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml)
5.8 8.5 91.5
6.0 13.2 86.8
6.2 19.2 80.8
6.4 2
7.8 72.2
6.6 38.1 61.9
6.8 49.7 50.3
7.0 61.5 38.5
7.2 71.7 28.3
7.4 80.2 19.8
7.6 86.6 13.4
7.8 90.8 9.2
8.0 94.0 6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml)
5.8 7.9 92.1
6.0 12.0 88.0
6.2 1
7.8 82.2
6.4 25.5 74.5
6.6 35.2 64.8
6.8 46.3 53.7
7.0 57.7 42.3
7.2 68.4 31.6
7.4 77.4 22.6
7.6 84.5 15.5
7.8 89.6 10.4
8.0 93.2 6.8
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA 27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris
250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用
液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris?HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型6×缓冲液贮存温度
Ⅰ0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
Ⅱ0.25溴酚蓝
室温
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅲ0.25%溴酚蓝
4℃
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ0.25%溴酚蓝
4℃
40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
Ⅴ18%聚蔗糖(Ficoll400)
4℃
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
所需pH值（25℃）0.1mol/L HCl的体积
7．1 45．7
7．2 44．7
7．3 43．4
7．4 42．0
7．5 40．3
7．6 38．5
7．7 36．6
7．8 34．5
7．9 32．0
8．0 29．2
8.1 26.2
8.2 22.9
8.3 19.9
8.4 17.2
8.5 14.7
8.6 12.4
8.7 10.3
8.8 8.5
8.9 7.0
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris?HCl液pH值的影响
4℃25℃37℃
8．1 7．5 7．2
8．2 7．6 7．3
8．3 7．7 7．4
8．4 7．8 7．5
8．5 7．9 7．6
8．6 8．0 7．7
8．7 8．1 7．8
8．8 8．2 7．9
8．9 8．3 8．0
9．0 8．4 8．1
9．1 8．5 8．2
9．2 8．6 8．3
9．3 8．7 8．4
9．4 8．8 8．5
（6）常用缓冲液的pKa值
缓冲液分子量pKa值缓冲范围
Trisa 12.1 8.08 7.1～7.9
HEPESb 283.3 7.47 7.2～8.2
MPOSc 209.3 7.15 6.6～7.8
PIPESd 304.3 6.76 6.2～7.3
MESe 195.2 6.09 5.4～6.8
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
缓冲体系pKa(20℃) △pKa/10℃
Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
PiPes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.014
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180
Glycylglycine 8.40 -0.280
三、常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。
2．蛋白水解酶类
贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理
0.01mol/L Tris(pH7.8)
链霉蛋白酶a 20mg/ml -20℃（溶于水）1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃自消化b
0.5% SDS
0.01mol/L Tris(pH7.8)
蛋白酶Kc 20mg/ml -20℃（溶于水）50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37～56℃无须预处理
0.5% SDS
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./L Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/L NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃
温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/L Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
3．无DNA酶的RNA酶
将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris?HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl中，配成10mg/ml 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。
四、常用抗生素溶液
作者：Eric6007
四、常用抗生素溶液
抗生素贮存液a 工作浓度
浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒
氨苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
羧苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml
氯霉素34mg/ml(溶于乙醇) -20℃25μg/ml 170μg/ml
卡那霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
链霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml
四环素b 5mg/ml(溶于乙醇) -20℃10μg/ml 50μg/ml
a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
五、常用贮存液的配制
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】
把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】
放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/L Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol?cm）]
A 259 1.54×104
G 253 1.37×104
C 271 9.10×103
T 260 7.40×103
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/L NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/L Tris?HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10% SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/L NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。
pH HCl
7.470ml
7.6 60ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L 的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/L Tris）
抗体稀释液 牛血清白蛋白1g NaN3 0.08g 30% Triton 1ml（PBS） 定容PBS（1x）100ml 驴血清封闭液 血清5-10ml NaN3 0.05g 30% Triton 0.5ml（PBS） 定容PBS（1x）100m 抗原稀释液 A 18ml+ B 82 ml5 双蒸水1000ml ,PH=6 封片液 Na2CO3 0.689g NaHCO3 1.554g 溶于50ml 双蒸水 50ml 甘油加热混合 抗原修复液 A:柠檬酸2.1g----100ml ddH2O B:二水柠檬酸三钠14.7g-----500ml A 18ml+ B 82ml+900mlddH2O--------1L(PH=6.0) Neurobasal Media glutamine, 1%penicillin/streptomycin, 10 ng/mL platelet-derived growth factor, 10 ng/mL FGF, and 2% B27 BRDU BrdU is a brominated analog of thymidine. STABILITY / STORAGE AS SUPPLIED: BrdU should be stored at -0°C and desiccated. If properly stored, it will have a shelf-life of two years. SOLUBILITY / SOLUTION STABILITY: Sigma routinely tests the solubility at 50 mg/mL in 1 M ammonium hydroxide yielding a clear colorless solution. It can be dissolved in water at a concentration of up to 10 mg/mL. It is also soluble in DMF, DMSO and water (with heat) at 50-100 mg/mL. Solutions at neutral pH should be stable for at least 6 months when stored frozen at -20°C. APPLICATIONS: BrdU is selectively incorporated into cell DNA at the S phase of cell cycle. The use of BrdU as a thymidine analog has made possible the identification of DNA synthesis in suspensions of cells, cell smears and tissue sections. The incorporation of BrdU into DNA
实验室常用溶剂共沸体系 18、00、960浓盐酸1、19 12、 10、372浓硝酸1、42 15、 90、704磷酸1、70 14、 80、855冰醋酸1、05 17、4 50、998浓氨水0、90 14、5 30、566浓氢氧化钠1、54 19、 40、505注：表中数据录自John A、 Dean、Lange’s Handbook of Chemistry、13th ed、1985常见的共沸混合物1）与水形成的二元共沸物（水沸点100℃）溶剂沸点/℃共沸点/℃含水量/%溶剂沸点/℃共沸点/℃含水量/%氯仿 61、2 56、 12、5甲苯1
85、020四氯化碳77、0 66、04、0正丙醇97、2 87、7 28、8苯 80、4 69、 28、8异丁醇108、4 89、9 88、2丙稀腈 78、0 70、0 13、0二甲苯137- 40、5 92、0 37、5二氯乙烷 83、7 72、0 19、5正丁醇1 17、7
37、5乙睛82、0 76、0 16、0吡啶1 15、5 94、042乙醇78、3 78、 14、4异戊醇1 31、0 95、1 49、6乙酸乙酯77、1 70、 48、0正戊醇1 38、3 95、4 44、7异丙醇82、4 80、4 12、1氯乙醇1
97、8 59、0乙醚353 41、0二硫化碳464 42、0甲酸101107262）常见有机溶剂间的共沸混合物共沸混合物组分的沸点/℃共沸物的组成(质量)/%共沸物的沸点/℃乙醇-乙酸乙酯 78、3， 78、030：70 72、0乙醇-苯 78、3， 80、632：68 68、2乙醇-氯仿 78、3， 61、27：93 59、4乙醇-四氯化碳 78、3， 77、016：84 64、9乙酸乙酯-四氯化碳 78、0， 77、043：57 75、0甲醇-四氯化碳
常用试剂的溶解性 1 . 二甲胺：有机物和无机物的优良溶剂，溶于水、低级醇、醚、低极性溶剂， 强烈刺激性。 2 . 石油醚：不溶于水，与丙酮、乙醚、乙酸乙酯、苯、氯仿及甲醇以上高级醇 混溶，与低级烷相似。 3 . 乙醚：微溶于水，易溶与盐酸，与醇、醚、石油醚、苯、氯仿等多数有机溶 剂混溶。麻醉性 4 . 戊烷：与乙醇、乙醚等多数有机溶剂混溶，低毒性。 5 .二氯甲烷：与醇、醚、氯仿、苯、二硫化碳等有机溶剂混溶。低毒性，麻醉 性强 7 . 二硫化碳：微溶与水，与多种有机溶剂混溶。麻醉性，强刺激性 8 .丙酮：与水、醇、醚、烃混溶。低毒，类乙醇，但较大 9 . 1，1-二氯乙烷：与醇、醚等大多数有机溶剂混溶。低毒、局部刺激性 10 . 氯仿：与乙醇、乙醚、石油醚、卤代烃、四氯化碳、二硫化碳等混溶。中 等毒性，强麻醉性 11 . 甲醇：与水、乙醚、醇、酯、卤代烃、苯、酮混溶。中等毒性，麻醉性 12 . 四氢呋喃：优良溶剂，与水混溶，很好的溶解乙醇、乙醚、脂肪烃、芳香烃、氯化烃。吸入微毒，经口低毒。 13 . 己烷：与甲醇部分溶解，与比乙醇高的醇、醚、丙酮、氯仿混溶。低毒， 麻醉性，刺激性 14 . 三氟代乙酸：与水、乙醇、乙醚、丙酮、苯、四氯化碳、己烷混溶，溶解 多种脂肪族、芳香族化合物。 15 . 1，1，1-三氯乙烷：与丙酮、、甲醇、乙醚、苯、四氯化碳等有机溶剂混溶。低毒类溶剂 16 . 四氯化碳：与醇、醚、石油醚、冰醋酸、二硫化碳、氯代烃混溶。氯代甲 烷中毒性最强。 17 . 乙酸乙酯：与醇、醚、氯仿、丙酮、苯等大多数有机溶剂互溶，能溶解某
些金属盐。低毒，麻醉性 18 . 乙醇：与水、乙醚、氯仿、酯、烃类衍生物等有机溶剂混溶。微毒类，麻 醉性 19 . 丁酮：与丙酮相似，与醇、醚、苯等大多数有机溶剂混溶。低毒，毒性强 于丙酮 20 . 苯：难溶于水，与甘油、乙二醇、乙醇、氯仿、乙醚、四氯化碳、二硫化碳、丙酮、甲苯、二甲苯、冰醋酸、脂肪烃等大多有机物混溶。强烈毒性 21 . 乙睛：与水、甲醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丙酮、醚、氯仿、四氯化碳、 氯乙烯及各种不饱和烃混溶，但是不与饱和烃混溶。中等毒性，大量吸入蒸气， 引起急性中毒 22 . 异丙醇：与乙醇、乙醚、氯仿、水混溶。微毒，类似乙醇 23 . 甲苯：不溶于水，与甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙醚、冰醋酸、苯等有机 溶剂混溶。低毒类，麻醉作用。 24 .乙二胺：溶于水、乙醇、苯和乙醚，微溶于庚烷。刺激皮肤、眼睛 25 . 丁醇：与醇、醚、苯混溶。低毒，大于乙醇3倍。 26 . 乙酸：与水、乙醇、乙醚、四氯化碳混溶，不溶于二硫化碳及C12以上高级脂肪烃。低毒，浓溶液毒性强 27 .吡啶：与水、醇、醚、石油醚、苯、油类混溶。能溶多种有机物和无机物。 低毒，皮肤黏膜刺激性 28 . 乙酸丁酯：优良有机溶剂，广泛应用于医药行业，还可以用做萃取剂。一 般条件毒性不大 29 . N，N-二甲基甲酰胺：与水、醇、醚、酮、不饱和烃、芳香烃烃等混溶， 溶解能力强。低毒。 30 . N，N-二甲基乙酰胺：溶解不饱和脂肪烃，与水、醚、酯、酮、芳香族化 合物混溶。微毒类 31 . 二甲亚砜：与水、甲醇、乙醇、乙二醇、甘油、乙醛、丙酮乙酸乙酯吡啶、 芳烃混溶。微毒，对眼有刺激性 32 . 甲酰胺：与水、醇、乙二醇、丙酮、乙酸、二氧六环、甘油、苯酚混溶， 几乎不溶于脂肪烃、芳香烃、醚、卤代烃、氯苯、硝基苯等。皮肤、黏膜刺激性、
实验室溶液的配制 一．蛋白试验 （1）4%的硼酸吸收液：分析纯硼酸，4g溶于50ml水，加热使其溶解，冷却，再用蒸馏水标至100ml。 （2）40%的氢氧化钠：分析纯氢氧化钠，40g溶于100ml水。 （4）0.1mol/L盐酸标准溶液：量取9ml盐酸（GB622，分析纯），用蒸馏水定容到1000ml，摇匀。 标定：在电子天平上准确称取5份烘干至恒重的基准无水碳酸钠，每份0.2g左右，记下所称的基准无水碳酸钠的质量m，将5份基准无水碳酸钠分别置于5个250ml锥形瓶中（提前标号），加入50ml水，加2~3滴甲基红指示剂，然后用待标定的0.1mol/L的HCL标准溶液滴定至溶液由黄色变为灰红色，记下消耗的盐酸标准液的体积Vo，然后将滴定完的锥形瓶在电炉上烧至沸腾，然后转小火保持沸腾2分钟,溶液中的二氧化碳被赶出后溶液又变为蓝绿色，冷却，再用盐酸标准溶液滴定至溶液变为灰红色，记下消耗的盐酸标准液体积Vi，两次滴定之和即为消耗的盐酸标准液体积。平行滴定5份基准无水碳酸钠，记录好 每份的数据。计算公式：C(Hcl)＝m/(V o+Vi)×0.05299，五次结果的平均值即为盐酸标准液的浓度，将盐酸标准液转入1000ml容量瓶保存即可。贴上标签标明配制时间，配制人，溶液浓度。 注：测凯氏定氮仪漏气不漏气的方法——取分析纯硫酸铵0.2g左右做蛋白试验，测其氮含量，作3个平行试验，测得硫酸铵含氮量为21.19%±0.2%，否则应检查加减，蒸馏，滴定各步骤是否正确。 二．钙的测定 （1）10%o淀粉溶液的配制：10g淀粉溶于水，加热使其溶解，冷却后转移到1000ml容量瓶，用蒸馏水定容到1000ml。 （2）1/1三乙醇胺溶液（即50%溶液）：取100ml三乙醇胺溶于100ml
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
实验室常用溶液配制示例 氢氧化钠滴定液(1、0.5或0.1mol/L) NaOH=40.00 40.00g→1000mL 20.00g→ 1000mL 4.000g→1000mL 【配制】取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。氢氧化钠滴定液(1mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液28mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。 【标定】氢氧化钠滴定液(1mol/L) 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL的氢氧化钠滴定液(1mol/L) 相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即得。氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约3g，照上法标定。每1mL的氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于102.1mg 的邻苯二甲酸氢钾。氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)，取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，照上法标定。每1mL的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。如需用氢氧化钠滴定液(0.05、0.02或0.01mol/L)时，可取氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)加新沸过的冷水稀释制成。必要时，可用盐酸滴定液(0.05、0.02或0.01mol/L)标定浓度。 【贮藏】置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 盐酸滴定液(1、0.5、0.2或0.1mol/L) HCl=36.46 36.46g→1000mL；18.23g→ 1000mL 7.292g→1000mL；3.646g→1000mL 【配制】盐酸滴定液(1mol/L)：取盐酸90mL，加水适量使成1000mL，摇匀。 盐酸滴定液(0.5、0.2或0.1mol/L)：照上法配制，但盐酸的取用量分别为45、18或9.0mL。【标定】盐酸滴定液（1mol/L）取在270～300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL 的盐酸滴定液(1mol/L)相当于53.00mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。 盐酸滴定液(0.5mol/L)照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约0.8g。每1mL的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于26.50mL的无水碳酸钠。 盐酸滴定液(0.2mol/L)：照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约0.3g。每1mL的盐酸滴定液(0.2mol/L)相当于10.60mg的无水碳酸钠。
实验室无水试剂的制备 1. 无水甲苯、无水四氢呋喃、无水二氧六环的制作： 钠：除水； 二苯甲酮：指示剂，它在绝对无水的条件下显蓝色 用量方面： 1000ml溶剂需要最多10克钠，二苯甲酮大约需要约5克 操作： 将需要的装置(通常需要：1000ml的圆底瓶，球形冷凝管，直形冷凝管，尾接管，三角瓶，三通，玻璃塞)，烘干，冷却，待用。 在圆底瓶中加入甲苯、二苯甲酮，用镊子加取钠块，棉花擦去钠块表面的煤油，然后用剪刀将钠剪成小块，通过加料漏斗加入到甲苯中；然后架好装置，将装置内的空气用氮气置换了（包括接收瓶）。加热回流2～3h后，回流变蓝后，稍冷（不回流了就可以），改为蒸馏装置，接少量前馏分，收集需要的部分。当圆底烧瓶中液体剩余大约50mL时，停止加热 后处理：圆底烧瓶中剩余的钠球，加无水乙醇室温搅拌，至完全分解。倒入废液瓶。 2. 无水DMF (N, N- 二甲基甲酰胺)的制作： DMF提前一天用无水硫酸镁干燥（25g/L）； 将需要的装置(通常需要：1000ml的圆底瓶，直形冷凝管，尾接管，三角瓶，三通，玻璃塞，水泵)，烘干，冷却，待用。在圆底瓶中加入干燥过的DMF，然后架好装置，用氮气球检查装置的气密性。然后60℃-70℃减压蒸馏接少量前馏分，收集需要的部分。 3. 无水二氯甲烷的制作： ①氢化钙：除水； 用量：50g/L 操作：回流3-4小时后，蒸馏，4A分子筛保存。 后处理：圆底烧瓶中剩余的CaH2，加无水乙醇室温搅拌，至完全分解。倒入废液瓶。 ②无水氯化钙，分子筛； 操作：室温搅拌过夜，蒸馏出来用分子筛保存 4. 无水乙醚的制作： 钠：干燥； 用量：7-8g /500mL 操作：将钠剪成小块状干燥24小时后待用，500mL的试剂瓶用19#的橡胶塞塞紧，插上瘪气球。 备注：旋蒸乙醚时温度不能太高，不要超过30℃；放置太久的乙醚不能加热，因含过氧化物，易于爆炸。
配制溶液的一般实验步骤 配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同，现举两个例 子： 举例 1：配置 0.05mol/L ，400mL NaOH 溶液的步骤：要准确配置氢氧化钠的浓度，则要用容量瓶定容，实验室没有 400 毫升的容量瓶，则选用 500 毫升的容量瓶。 1.计算需要氢氧化钠的质量：0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000 克 2.称 1.000 克氢氧化钠于烧杯中，加少量水溶解，然后倒入 500 毫升容量瓶里，分 3 次洗烧杯，将溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀释至刻度线，摇匀，即，得到 0.05mol/L 的氢氧化钠溶液。 如果不需要很准确的话，可以直接用量筒量 400 毫升，称的时候只要称 0.8 克就可以了。举例 2：配置 1.5mol/L 的稀硫酸 200mL 步骤： 第 1 步：计算：根据 C1V1=C2V2 ，计算需要浓硫酸的体积；第 2 步：量取，利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积；第 3 步：稀释，将浓硫酸转移到小烧杯中，加少量水稀释；第 4 步：转移 , 待溶液温度降低后，将烧杯中的硫酸转移到 200mL 容量瓶中； 第 5 步：洗涤，洗涤小烧杯，和转移的时候用到的玻璃棒， 至少三次，将洗涤的水一并转移到容量瓶中； 第 6 步：定容，加水定容到刻度线，在距离刻度线一厘米左右改
用胶头滴管定容； 第 7 步：摇匀 ,将溶液摇匀 ,如果液面下降也不可再加水定容；第 8 步：将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签；举例 3：配制 500mL ，0.1mol/L 碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤：第一步：计算：所需碳酸钠的质量 =0.5*0.1*106=5.3 克；第二步：称量：在天平上称量 5.3 克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中；第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解；第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入 500mL 容量瓶中；第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2?3次，并倒入 容量瓶中；第六步：定容：倒水至刻度线 1?2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直；第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀；第八步：装瓶、贴签；误差分析：固体药品的称量与液体药品的量取是否准确；把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了；未洗涤烧杯和玻璃棒；用待配液润洗了容量瓶；定容时水加多了或加少了；定容时未平视刻度线。仰视、俯视对溶液浓度有何影响？★俯视刻度线，实际加水量未到刻度线，使溶液的物质的量浓度增大；★仰 视刻度线，实际加水量超过刻度线，使溶液的物质的量浓度 减小。市售盐酸密度1.19,质量分数36%?38%以37%计 算：步骤： 1.计算：假若需要 2mol/L 的硫酸 100mL ，则需 37%
NMR Chemical Shifts of Common Laboratory Solvents as Trace Impurities Hugo E.Gottlieb,*Vadim Kotlyar,and Abraham Nudelman* Department of Chemistry,Bar-Ilan University, Ramat-Gan52900,Israel Received June27,1997 In the course of the routine use of NMR as an aid for organic chemistry,a day-to-day problem is the identifica-tion of signals deriving from common contaminants (water,solvents,stabilizers,oils)in less-than-analyti-cally-pure samples.This data may be available in the literature,but the time involved in searching for it may be considerable.Another issue is the concentration dependence of chemical shifts(especially1H);results obtained two or three decades ago usually refer to much more concentrated samples,and run at lower magnetic fields,than today’s practice. We therefore decided to collect1H and13C chemical shifts of what are,in our experience,the most popular “extra peaks”in a variety of commonly used NMR solvents,in the hope that this will be of assistance to the practicing chemist. Experimental Section NMR spectra were taken in a Bruker DPX-300instrument (300.1and75.5MHz for1H and13C,respectively).Unless otherwise indicated,all were run at room temperature(24(1°C).For the experiments in the last section of this paper,probe temperatures were measured with a calibrated Eurotherm840/T digital thermometer,connected to a thermocouple which was introduced into an NMR tube filled with mineral oil to ap-proximately the same level as a typical sample.At each temperature,the D2O samples were left to equilibrate for at least 10min before the data were collected. In order to avoid having to obtain hundreds of spectra,we prepared seven stock solutions containing approximately equal amounts of several of our entries,chosen in such a way as to prevent intermolecular interactions and possible ambiguities in assignment.Solution1:acetone,tert-butyl methyl ether,di-methylformamide,ethanol,toluene.Solution2:benzene,di-methyl sulfoxide,ethyl acetate,methanol.Solution3:acetic acid,chloroform,diethyl ether,2-propanol,tetrahydrofuran. Solution4:acetonitrile,dichloromethane,dioxane,n-hexane, HMPA.Solution5:1,2-dichloroethane,ethyl methyl ketone, n-pentane,pyridine.Solution6:tert-butyl alcohol,BHT,cyclo-hexane,1,2-dimethoxyethane,nitromethane,silicone grease, triethylamine.Solution7:diglyme,dimethylacetamide,ethyl-ene glycol,“grease”(engine oil).For D2O.Solution1:acetone, tert-butyl methyl ether,dimethylformamide,ethanol,2-propanol. Solution2:dimethyl sulfoxide,ethyl acetate,ethylene glycol, methanol.Solution3:acetonitrile,diglyme,dioxane,HMPA, pyridine.Solution4:1,2-dimethoxyethane,dimethylacetamide, ethyl methyl ketone,triethylamine.Solution5:acetic acid,tert-butyl alcohol,diethyl ether,tetrahydrofuran.In D2O and CD3OD nitromethane was run separately,as the protons exchanged with deuterium in presence of triethylamine. Results Proton Spectra(Table1).A sample of0.6mL of the solvent,containing1μL of TMS,1was first run on its own.From this spectrum we determined the chemical shifts of the solvent residual peak2and the water peak. It should be noted that the latter is quite temperature-dependent(vide infra).Also,any potential hydrogen-bond acceptor will tend to shift the water signal down-field;this is particularly true for nonpolar solvents.In contrast,in e.g.DMSO the water is already strongly hydrogen-bonded to the solvent,and solutes have only a negligible effect on its chemical shift.This is also true for D2O;the chemical shift of the residual HDO is very temperature-dependent(vide infra)but,maybe counter-intuitively,remarkably solute(and pH)independent. We then added3μL of one of our stock solutions to the NMR tube.The chemical shifts were read and are presented in Table 1.Except where indicated,the coupling constants,and therefore the peak shapes,are essentially solvent-independent and are presented only once. For D2O as a solvent,the accepted reference peak(δ)0)is the methyl signal of the sodium salt of3-(trimeth-ylsilyl)propanesulfonic acid;one crystal of this was added to each NMR tube.This material has several disadvan-tages,however:it is not volatile,so it cannot be readily eliminated if the sample has to be recovered.In addition, unless one purchases it in the relatively expensive deuterated form,it adds three more signals to the spectrum(methylenes1,2,and3appear at2.91,1.76, and0.63ppm,respectively).We suggest that the re-sidual HDO peak be used as a secondary reference;we find that if the effects of temperature are taken into account(vide infra),this is very reproducible.For D2O, we used a different set of stock solutions,since many of the less polar substrates are not significantly water-soluble(see Table1).We also ran sodium acetate and sodium formate(chemical shifts: 1.90and8.44ppm, respectively). Carbon Spectra(Table2).To each tube,50μL of the stock solution and3μL of TMS1were added.The solvent chemical shifts3were obtained from the spectra containing the solutes,and the ranges of chemical shifts (1)For recommendations on the publication of NMR data,see: IUPAC Commission on Molecular Structure and Spectroscopy.Pure Appl.Chem.1972,29,627;1976,45,217. (2)I.e.,the signal of the proton for the isotopomer with one less deuterium than the perdeuterated material,e.g.,C H Cl3in CDCl3or C6D5H in C6D6.Except for CHCl3,the splitting due to J HD is typically observed(to a good approximation,it is1/6.5of the value of the corresponding J HH).For CHD2groups(deuterated acetone,DMSO, acetonitrile),this signal is a1:2:3:2:1quintet with a splitting of ca.2 Hz. (3)In contrast to what was said in note2,in the13C spectra the solvent signal is due to the perdeuterated isotopomer,and the one-bond couplings to deuterium are always observable(ca.20-30Hz). Figure1.Chemical shift of H DO as a function of tempera-ture. https://www.doczj.com/doc/d32042366.html,.Chem.1997,62,7512-7515 S0022-3263(97)01176-6CCC:$14.00?1997American Chemical Society
实验室常用得指示剂配制 1 百里香酚蓝-酚酞混合指示液 取3份体积百里香酚蓝溶液(1g/L)与2份体积酚酞溶液(1g/L)混合均匀。 2 甲基红-亚甲基蓝混合指示液 将50mL甲基红溶液(2g/L)与50mL亚甲基蓝溶液(1g/L)混合。 3 酸性铬蓝K-萘酚绿B混合指示剂 称取0、1g酸性铬蓝K,0、1g萘酚绿B与20g干燥氯化钾,置于研钵中,充分研磨混匀,贮存于棕色广口瓶中。 4 溴百里(香)酚蓝-苯酚红混合指示液 0、08g溴百里酚蓝与0、1g苯酚红溶于20mL乙醇中,加水50mL,用氢氧化钠溶液(4g/L)调至pH为7、5(红紫色),再以水稀释至100mL。 5 溴甲酚绿-甲基橙混合指示液 6份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)与1份体积甲基橙溶液(1g/L)混合。 6 溴甲酚绿-甲基红混合指示液 3份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)与1份体积甲基红溶液(1g/L)混合,摇匀,贮存于棕色瓶中。 7 1,10-菲罗啉-硫酸亚铁铵混合指示液 称取1、6g1,10-菲罗啉及1g硫酸亚铁铵(或0、7g硫酸亚铁),溶于100mL 水中,贮存于棕色瓶中。 8 甲基红指示液(1g/L) 称取0、10g甲基红,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 9 溴甲酚绿指示液(2g/L)
称取0、20g溴甲酚绿溶解于6mL氢氧化钠溶液(4g/L)与5mL乙醇中,用水稀释至100mL。 10 甲基橙指示液(1g/L) 称取0、10g甲基橙,溶于70℃水中,冷却,用水稀释至100mL。 11 酚酞指示液(10g/L) 称取1、0g酚酞,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 12 溴(甲)酚蓝指示液(1g/L) 称取0、10g溴酚蓝,溶于乙醇,用乙醇稀释至100mL。 13 钙指示液(钙羧酸指示剂) 称取0、20g钙指示剂〔2-羟基-1-(2-羟基-4-磺酸-1-萘偶氮)-3-萘甲酸〕(C21H14N2O7S)或其钠盐与10g在105℃干燥得氯化钠,置于研钵中研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。 14 铬黑T指示剂 将1、0g铬黑T与100、0g干燥得氯化钠,置于研钵中,研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。 15 铬黑T指示液(5g/L) 称取0、50g铬黑T与4、5g氯化羟胺,溶于乙醇中,用乙醇稀释至100mL,贮存于棕色瓶中。可保持数月不变质。 16 百里香酚蓝指示液(1g/L) 溶解0、10g百里香酚蓝于2、2mL氢氧化钠溶液(4g/L)与5mL乙醇中,稀释至100mL。 17 孔雀绿指示液(1g/L)
常用溶剂中英文对照 i-pentane(异戊烷) n-pentane(正戊烷) Petroleum ether(石油醚) Hexane(己烷) Cyclohexane(环己烷) Isooctane(异辛烷) Trifluoroacetic acid(三氟乙酸) Trimethylpentane(三甲基戊烷) Cyclopentane(环戊烷) n-heptane(庚烷) Butyl chloride(丁基氯;丁酰氯) Trichloroethylene(三氯乙烯;乙炔化三氯) Carbon tetrachloride(四氯化碳) Trichlorotrifluoroethane(三氯三氟代乙烷) i-propyl ether(丙基醚;丙醚) Toluene(甲苯) p-xylene(二甲苯) Chlorobenzene(氯苯)o-dichlorobenzene(邻二氯苯) Ethyl ether(二乙醚;醚) Benzene(苯) Isobutyl alcohol(异丁醇) Methylene chloride(二氯甲烷) Ethylene dichloride(二氯化乙烯) n-butanol(正丁醇) n-butyl acetate(醋酸丁酯；乙酸丁酯) n-propanol(丙醇) Methyl isobutyl ketone(甲基异丁酮) Tetrahydrofuran(四氢呋喃) Ethyl acetate（乙酸乙酯） i-propanol(异丙醇) Chloroform(氯仿) Methyl ethyl ketone(甲基乙基酮) Dioxane(二恶烷;二氧六环;二氧杂环己烷) Pyridine(吡啶)
实验室所需溶液配制 1.费休氏试液，购买； 2.氢氧化钠溶液，C=0.01mol/l。氢氧化钠分子量40.0，准确称取氢氧化钠固体 0.4g溶于200ml蒸馏水中，并在1L容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 3.中性红溶液，C=1%。准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中，并在100ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 4.溴百里香酚蓝溶液，C=1%。准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏 水中，并在100ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 5.碘化钾溶液，C=10%。准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中，并在500ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 6.硫代硫酸钠溶液，C=0.1mol/l。硫代硫酸钠分子量158.11，准确称取硫代硫 酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 7.硫酸溶液，C=2mol/l，硫酸分子量98.08，浓度98%时密度约1.84g/ml，准确 量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中，向水中加入硫酸而非向硫酸中加水，冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液； 8.淀粉溶液，C=0.5%。准确称取可溶性淀粉0.5g，溶于50ml水中，并在100ml 容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 9.铬酸钾溶液，C=50g/L。准确称取铬酸钾固体50g，溶于500ml水中，并在 1000ml容量瓶中定容，搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止. 静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可，不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中； 10.氯化钠基准试剂，C=0.1mol/l，氯化钠分子量58.5，准确称取氯化钠固,5.85g 溶于500ml蒸馏水中，并在1000ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液； 11.硝酸银溶液，C=0.1mol/l，硝酸银分子量169.87，准确称取硝酸银固体8.49g 溶于200ml蒸馏水中，并在500ml容量瓶中定容，即得到上述浓度溶液，用前采用基准氯化钠试剂（10）标定，需保存于棕色试剂瓶中；
分子实验室、细胞实验室常用配方
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(一)WB相关试剂及常用缓冲液 ●RIＰA（１０0mI）(最后要调pH为７.4） 终浓度分子量称取 50mM 1２1.14 60５．7mg Ｔｒｉs-HCI（pH ７.4) NaCI １50 ｍＭ５8.4４87６.６ｍg TritｏnＸ-1０0 1% 1mI 脱氧胆酸钠1％１g EDTA １mM 292.24８２９.224８mｇSＤS 0．1％０.1g ＰMSF（１00ｍM) 使用时每1ｍl加１ ０ｕl ●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度) AP粉末 1ｇ ddＨ2０ 10mｌ ●1０%SDS(十二烷基硫酸钠）： SＤＳ粉末１0g ｄdH20定容到 100ml 注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡 ●6X蛋白质sample buffer Tris-HCl(１M,ｐH6.８) 30ｍL ＳＤＳ10ｇ 甘油 30ｍL DTT（1５4.２5）９.3g 溴酚蓝０．０6g dd H2０定容至10０mＬ ●10XPBＳ缓冲液的配制： ＮaCｌ 80g KCl 2g Ｎa2ＨPＯ4 14．4ｇ(十二水合36g） KH２PO40 2.４g 加800 mLddH2O,根据开始的pH用ＮaOH或ＨCL调pH到７.4,调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度 ●PBSＴ(1X) ＰBS(1X） 500ml Tweeｎ 2０５０0μｌ ●5０×Tris－乙酸（TＡE）缓冲液配制1Ｌ溶液各成分的用量 Ｔris粉末 2４2ｇ 冰醋酸 57.１ｍl Nａ2EDTA·2H2O 3７.２g
实验室常用溶液及试剂配制表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂
表三混合酸碱指示剂 表四容量分析基准物质的干燥
表五缓冲溶液的配制
实验室常用试验方法2 九、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴，用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点，同时做空白试验。 计算：X%（一水）= （V1-V0）×C×0.06404x m×（1-0.08566）×100 X%（无水）= （V1-V0）×C×0.06404x m×100 V1-----消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； V0-----空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； C------氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； m---样品质量。 十、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 称取2g（精确到0.0002g）样品，用10ml盐酸（1+1）溶解，转移至100ml容量瓶中定溶，用移液管吸取10ml于250ml锥形瓶中，加50ml水，5ml蔗糖溶液（25g/L），2ml三乙酸胺（1+1），1ml乙二胺（1+1），1滴孔雀绿指示液（1g/L），滴加氢氧化钾溶液（200g/L）至无色，再过量10ml，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都要摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下用0.05mol/L的EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。 Ca%= C×V×0.4008x m ×100 C------EDTA标准溶液的浓度，mol/L； V-----消耗EDTA标准溶液的体积，ml； m----样品质量。 （二）氟（Fˉ）含量的测定： 1、标准曲线的绘制； 2、试样含量的测定： 称取0.5g（精确到0.0002g）置于50ml纳氏比色管中，加1mol/L盐酸10ml，密闭提取1h （不时摇动），避免粘于管壁，提取后加总离子强度缓冲液25ml，加水至刻度，以滤纸过滤。以氟电极测平衡电位值。 结果计算：X= C×50×1000 x m×1000 = 50C x m X-----试样中氟含量， m---试样质量，g； C-----据电位值查得的浓度， 总离子强度缓冲液：现配现用，3mol/L乙酸钠；0.75mol/L柠檬酸钠，配成（1+1）。 测定时，用蒸馏水洗电极装置至值为-370以后。 （三）磷（P）的测定 磷标准曲线的绘制：准确移取磷标准溶液（分析纯的磷酸二氢钾，在105℃干燥1h，冷却后称取0.2195g，溶于1L的容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，得到50ug/ml溶液），分别吸取0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、15.0ml于50ml容量瓶中，各加入磷显色液（钒-钼酸铵显色液：偏钒酸铵1.25g，加250ml硝酸于1000ml容量瓶中；钼酸铵25g 于烧杯中，加400ml水溶解，冷却下，将此液倒入容量瓶中，定容）10ml，用蒸馏水定容，