大豆脂肪氧合酶对食品品质的的影响 卜凡琼 (班级：食研5班学号：2016309120048) 摘要:大豆脂肪氧合酶是存在于大豆中的脂肪氧合酶，其活性很高，在食品行业中有很广泛的应用，大豆脂肪氧合酶催化底物产生的一些物质能很好的改善食品质量。能增加食品香气，形成二硫键，增强面筋蛋白强度。其分离纯化方法有水浸提法，酸铵沉淀、葡聚糖凝胶柱G200分离沉淀法，缓冲液提取等方法。 关键词：大豆脂肪氧合酶，分离纯化，食品品质 1. 大豆脂肪氧合酶简介 脂肪氧合酶(Lipoxygenase, EC1.13.11.12, LOX),广泛存在于动植物体内，在豆类中具有较高的活力，其中尤以大豆中的活力为最高⑴ 属氧化还原酶，通称脂氧酶(LOX) o LOX中含有非血红素铁，专一催化具有顺，顺-1, 4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸，通过对其分子加氧，形成过氧化氢衍生物，是非常重要的风味前体物［2］。近年来研究表明，LOX产生的风味和香味是很多食品所必需的不饱和脂肪酸，经LOX作用形成氢过氧化物并进一步裂解成不饱和的醛类、酮类和醇类化合物而形成类似苹果、香瓜、芒果等水果风味以及鲜鱼味、牡砺味、文蛤味和海藻香、青草香［3］等挥发性风味物质。据脂肪氧合酶氧化花生四烯酸位置特异性，将脂肪氧合酶(LOX)分为5-L OX ,8-LOX ,12-LOX 和15-LOX。大豆LOX -I 属于15-LOX ,它已被广泛用于研究同类脂肪氧合酶功能和结构性质模型⑷大豆植物组
织中含有多种脂肪氧合酶同工酶，其中LOX-I和L0X-2是主要的同工酶。 2. 大豆脂肪氧合酶结构及其生化特性 研究表明，大豆脂肪氧合酶（LOX ）含839个氨基酸，是一个单 链肤蛋白，整体结构分为2个部分:一个是N末端的B与1条a螺旋组成的部分；另一个是包含22条a螺旋和8条B折叠股的主要区域。在空间结构上，LOX的主要区域以一条长的a螺旋为中心，其他结构环绕在其周围。非血红素铁原子靠近酶中心位置，其附近有一个特殊的三圈n螺旋，并以配位键与3个组氨酸侧链和梭基末端的C00- 结合，从而形成酶活力中心的主要组成部分⑸。 通过对分离得到的大豆子叶LOX的研究，发现每个LOX是一条M:为96000左右的多肤，每个多肤中含一个铁原子。有实验证明，大豆子叶的LOX处于静止、无活性状态时，铁以Fe态存在;当加入底物后，LOX中的Fe处于Fe （A）态，使LOX具有催化活性。大豆种子中的LOX都是球形、水溶性蛋白。LOX i, LOX2, LOX3的等电点分别为5.65, 5.85,6.150 3种同工酶的生化特性是丄0X1的反应最适pH值在9.0处，LOX:在pH6. 5处，LOX:在pH7. 0处。除催化原初反应外，LOX还催化次级反应而形成脂肪酸的二聚苯和淡基二烯酸，类胡萝卜素的漂白即是由LOX次级反应实现的⑹。 3. 大豆脂肪氧合酶的分离纯化及其性质 王辉，周培根⑺以大豆为原料，经硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶柱 G200分离沉淀，得到2种脂肪氧合酶（LOX）: LOX-1 , LOX-2。对
食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第37卷 第4期 食品开发· 40 ·脂肪氧合酶是一种加双氧酶[1]，广泛存在于需氧的机体中，包括植物[2-3]。它是一种在植物和动物界都有广泛研究的酶[3-4]，含非血红素铁的蛋白质，能专一催化氧化具有顺，顺-1,4-戊二烯结构的多不饱和脂肪酸[5]，生成具有共轭双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物[6]。近年来研究表明，LOX产生的风味和香味是很多食品所必需的不饱和脂肪酸，经LOX作用形成氢过氧化物并进一步裂解成不饱和的醛类、酮类和醇类化合物而形成 类似苹果、香瓜、芒果等水果风味以及鲜鱼味、牡蛎味、文蛤味和海藻香、青草香[7]等挥发性风味物质。茶树叶片中，LOX位于叶绿体的片层结构中，它能将不饱和脂肪酸氧化为不饱和脂肪酸过氧化物。茶叶的加工过程是塑造茶叶优良品质的关键，在此过程中，鲜叶中的多种酶类作用于鲜收稿日期：2011-08-01 *通讯作者 基金项目：十二五农村领域国家科技计划项目(2011BAD01B02)；苏州市科技支撑计划项目(农业部分)(SN201033)。作者简介：马惠民(1953—)，男，高级农艺师。 叶内含物，对绿茶的香气、滋味、汤色、外形等品质均可产生重要的影响。在制茶过程中，人们通过控制茶鲜叶中酶的活性和催化方向的变化，制造出不同种类的茶叶。例如在绿茶制造过程中可较早钝化酶的活性，以形成绿茶“清汤绿叶”的品质特征。这些主要是利用和控制茶叶中的各种内源酶的作用来形成各类茶叶特有的品质特征。 1 LOX的催化机理 1.1 LOX的活性中心结构LOX的来源不同，其氨基酸的组成不同。虽 然植物脂肪氧合酶的氨基酸残基数目和动物脂肪氧合酶的有所不同，但它们的氨基酸序列在某些区域内有很大的相似性，因而其催化反应的机理基本相同。 马惠民，王 雪，钱 和*，汪何雅 (江南大学食品学院，无锡 214122) 摘要：综合叙述了脂肪氧合酶及其在茶叶加工过程中的作用，并据此展望了酶在茶叶加工工艺中的发展前景。 关键词：茶叶；脂肪氧合酶；茶叶加工 中图分类号：TS 201.2+5 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)04-0040-04 The effection of lipoxygenase in the tea MA Hui-min, WANG Xue, QIAN He *, WANG He-ya (School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122)Abstract: This article describes that the function of the lipoxygenase in the tea during the tea processing, and according to it, the prospects of lipoxygenase in the tea manufacture were stated.Key words: tea; lipoxygenase; tea processing 脂肪氧合酶在茶叶中的作用
脂肪氧合酶的作用机理及对谷物陈化的影响研究进展 摘要：脂肪氧合酶(LOX)广泛存在于生物中，并且具有不同种类的底物位置特异性，可以形成具有不同位置特异性的氢过氧化脂肪酸，进而生成具有不同生物活性的物质。本文综述了脂肪氧合酶的作用机理、对谷物陈化的影响及其抑制方法的研究进展，对谷物食品加工有一定的指导意义。 关键词：脂肪氧合酶；作用机理；谷物陈化；适口性 脂肪氧合酶(Lipoxygenase，LOX，EC 1.13.11.12)，又称脂肪氧化酶(Lipoxidase)或胡萝卜素氧化酶(Carotene Oxidase)，分子量范围一般在9000~100000之间（汪晓明等，2013）。LOX是一种含非血红素铁的蛋白，酶蛋白由单肽链组成，它专门催化具有顺，顺-1，4-戊二烯结构的不饱和脂肪酸及其酯的氢过氧化作用，通过分子内加氧，形成具有共轭双键的氢过氧化衍生物(Andreou A et al., 2009)。LOX广泛存在于各种动物、植物、真菌以及少数海生生物中，在豆类中具有较高的活力，尤其以大豆中的活力为最高，LOX占大豆总蛋白含量的1%-2%（S. Nanda et al,. 2003）。在植物中其底物主要是亚油酸(Linoleic acid)和亚麻酸(Lionlenic acid)，在动物体内其底物主要是花生四烯酸(arachidonic acid)。据脂肪氧合酶氧化花生四烯酸位置特异性，可将脂肪氧合酶分为5-LOX，8-LOX，12-LOX和l5-LOX。大豆脂肪氧合酶LOX-1属于15-LOX，它已被广泛应用于同类脂肪氧合酶功能和性质模型（何婷等，2008）。本文结合国内外文献资料综述了脂肪氧合酶的作用机理以及对食品品质的影响，对食品的加工贮藏有着重要的指导意义。 1 脂肪氧合酶的同工酶 1970年，Christopher等利用离子交换层析法将脂肪氧合酶分离成Ⅰ型和Ⅱ型两个组分，两组分在许多性质上都不同，如酶活最适pH、热稳定性、Ca2+相关性、等电点、底物专一性等。大豆脂肪氧合酶有四种电泳类型，LOX-1主要出现在层析法分离的Ⅰ型中，也正是最早被Theorell分离结晶的那一种。LOX-2和LOX-3出现在Ⅱ型中。层析法的不断改进又将LOX-3分离成3a和3b两种，这两者在许多性质上相似。LOX的几种同工酶的性质比较见表1（蔡琨，2004）。 表1 几种脂肪氧合酶同工酶性质比较 LOX-1LOX-2LOX-3a LOX-3b 最适pH 9 6.8 7 7 Ca2+相关性激活激活抑制抑制 热稳定性热稳定受热易失活受热易失活受热易失活 等电点 5.70 5.85 5.95 6.20 二硫键数 4 4 3 3 含巯基数 4 4.2 5.6或6 5.9 底物特性阴离子底 物 酯化底物单氧化物单氧化物 生成氢过氧化 物类型 13位9或13位9或13位9或13位2 脂肪氧合酶的作用机理
第一章植物脂氧合酶的研究进展 缩写 LOX lipoxygenase 脂氧合酶; 9-H(P)OD (10E,12Z)-9-hydro(pero)xy-10,12-octadecadienoic acid AOS allene oxide synthase 氧化丙二烯合酶; (10E,12Z)-9-(过氧)羟基-10,12-十八碳二烯酸; AOC allene oxide cyclase 氧化丙二烯环化酶; 9-H(P)OT (10E,12Z,15Z)-9-hydro(pero)xy-10,12,15-octadecatrienoic acid HPL hydroperoxide lyase 过氧化氢裂解酶; (10E,12Z,15Z)-9-(过氧)羟基-10,12,15-十八碳三烯酸; DES divinyl ether synthase 联乙烯醚合酶; 13-H(P)OD (9Z,11E)-13-hydro(pero)xy-9,11-octadecadienoic acid POX peroxygenase 过氧酶; (9Z,11E)-13- (过氧)羟基-9,11-十八碳二烯酸; HPLC high performance liquid chromatography 13-H(P)OT (9Z,11E,15Z)-13-hydro(pero)xy-9,11,15-octadecatrienoic acid 高效液相; (9Z,11E,15Z)-13- (过氧)羟基-9,11,15-十八碳三烯酸; CP-HPLC chiral-phase HPLC 手性-HPLC 13-HPOT(γ) (6Z,9Z,11E)-13- hydroperoxy-6,9,11- octadecatrienoic acid RP-HPLC reversed-phase HPLC 反相-HPLC (6Z,9Z,11E)-13-过氧基-6,9,11-十八碳三烯酸; SP-HPLC straight-phase HPLC 正相-HPLC 9,16-diH(P)OT LC/MS liquid chromatography mass spectrometry (10E,12Z,14E)-9,16-dihydro(pero)xy-10,12,14-octadecatrienoic acid 液相色谱质谱联用计(10E,12Z,14E)-9,16-二(过氧)羟基-10,12,14-十八碳三烯酸; GC/MS gas chromatography mass spectrometry 15-HPETE 气相色谱质谱联用计 (5Z,8Z,11Z,13E)-15-hydroperoxy-5,8,11,13-eicosatetraenoic acid 12-oxo-PDA 12-oxo-10,15-phytodienoic acid (5Z,8Z,11Z,13E)-15-过氧基-5,8,11,13-二十碳四烯酸; 12-氧-10,15-植二烯酸; 8,15-diHPETE 12,13(S)-EOD (5Z,9E,11Z,13E)-8,15-dihydroperoxy-5,9,11,13-eicosatetraenoic acid (9Z,13S)-12,13-epoxy-9,11-octadecadienoic acid (5Z,9E,11Z,13E)-8,15-二过氧基-5,9,11,13-二十碳四烯酸. (9Z,13S)-12,13-环氧-9,11-十八碳二烯酸; 12,13(S)-EOT (9Z,13S,15Z)-12,13-epoxy-9,11,15-octadecatrienoic acid (9Z,13S,15Z)-12,13-环氧-9,11,15-十八碳三烯酸; 一前言 脂氧合酶(LOX；EC 1.13.11.12)是含有非血红素离子的双加氧酶，广泛存在于需氧生物中，包括植物、动物和低等水生生物（Hartmut Kühn & Astrid Borchert，2002）。最近发现，在真菌(Bisakowski et al，1997；Su & Oliw，1998)-和细菌(Porta & Rocha-Sosa，2001)中也存在脂氧合酶。根据酶学分类，将LOX 定义为亚油酸根：氧氧化还原酶，它催化含（Z,Z）-1,4戊二烯结构单元的不饱和脂肪酸的加氧反应，产生不饱和脂肪酸的过氧化物（Alexander Grechkin，1998）。LOX启动合成的一系列环状或脂肪族化合物，统称为氧脂（oxylipins），它们在植物的生长发育过程中以及在植物对环境胁迫反应中起着重要的作用（Helena Porta & Mario Rocha-Sosa，2002），一般将此代谢过程称之谓LOX途
大豆脂肪氧合酶的提取工艺 脂肪氧合酶对食品质量的影响有利与弊两个方面。脂肪氧合酶是食品原料中固有的一种酶，它的作用对食品质量的影响既有助于提高某些质量指标如颜色、质构、风味等，又可能对某些质量指标如营养成分含量、食品颜色等有不利影响。 脂肪氧合酶属氧化还原酶。脂肪氧合酶中含有非血红素铁，专一催化具有顺，顺-1，4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸，通过对其分子加氧，形成过氧化氢衍生物。脂肪氧合酶广泛存在于植物界中，特别是从人类大量食用的大豆中提取的脂肪氧合酶活性高于其它植物来源。大豆中蛋白含量为40%左右，脂肪 氧合酶是大豆中活性最高的酶。 许多研究结果认为脂肪氧合酶在植物生理，如植物萌发、生长、发育、衰老、抗性等物质转化中起某种重要调节作用，会影响植物脂肪在萌发期的氧化，脂肪过氧化形成乙烯影响植物叶片衰老，脂肪氧化影响种子的衰老、死亡、果蔬催熟和脱落，可以运用于植物抗病、抗虫和伤害反应中。 一、试验目的 了解大豆脂肪氧合酶的提取工艺 了解哪个工艺对脂肪氧合酶酶活影响最小 二、试验原理 以低温脱脂大豆粉为原料，采用水浸提、二次盐析、聚乙二醇（PEG共沉淀等方法提取脂肪氧合酶，并对LOX活性进行测定和比较，以便综合评价提取方法的优劣。同时研究了影响脂肪氧合酶活性的因素和化学微环境影响，为保存和合理利用LOX提供理论基础。 三、试验材料 原料：大豆； 试剂：Tween 20（化学纯）；亚油酸；其它化学试剂或溶剂均为分析纯。 设备：752型紫外光栅分光光度计，PHS-3B精密pH计，LD4-2型离心机， 81-2 型恒温磁力搅拌器。
四、试验方法 1. 脂肪氧合酶的提取 大豆经粉碎后再经石油醚多次浸提得到脱脂大豆粉。每批次10 g脱脂大豆 粉为原料, 料液比为 1 ：10(质量：体积)，按下述 5 方法提取脂肪氧合酶： (A) 水浸提法：加水搅拌50 min, 4 000 r/ min条件下离心20 min,上清液即为粗酶液。 (B) 酸提-盐析法：加水并用1 mol/ L盐酸调pH值至4. 5,搅拌50min，过滤；滤液中加入固体硫酸铵至40 %饱和，离心分离20 min，弃去残渣；上清液中加入固体硫酸铵至60 %饱和，离心分离20 min，沉淀用pH值9. 0的0. 2 mol/ L 的硼酸盐缓冲液溶解得到酶液。 (C缓冲液提-盐析法：加pH值4.5的乙酸-乙酸盐缓冲液，搅拌50 min，其余步骤同(B)。 (D) 碱溶-酸提-盐析法:加水并用1mol/L氢氧化钠调pH值至9.0，搅拌 30min，离心20min，弃去沉淀；上清液用1mol/L盐酸调pH值至4.5，继续搅拌，其余步骤同(B)。 (E) 聚乙二醇共沉淀法：加水并用1mol/L盐酸调pH值至4.5，搅拌50min，过滤；滤液中加入50%的PEG-6000至PEG浓度达30%，继续搅拌40min，离心分离20min，用pH值9.0的0.2 mol/ L的硼酸盐缓冲液溶解沉淀，滤去不溶物得到酶液。 2. 酶活测定 25C、pH值9.0下，以亚油酸为底物的3 mL反应体系在234 nm处每分钟增加0.001吸光度值定义为一个酶活单位。将0. 25 mL Tween 20分散于10 mL pH值9.0的0.2 mol/L的硼酸盐缓冲液中，摇动下逐滴加入0.27 mL亚油酸，充分混合，加入 1 mol/ L 氢氧化钠溶液使体系澄清，调pH 值至9. 0 ,然后用上述缓冲液稀释到500 mL作为底物。取0. 2mL酶液(已稀释一定倍数)移入1.5mL的底物溶液中，混匀后于25C水浴中恒温3min,用5mL无水乙醇终止反应，然后加入5mL蒸馏
植物中脂氧合酶（LOX）活性测定试剂盒使用说明 微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC0325 规格：100T/96S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2mL试剂二，充分溶解。 产品说明： LOX广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。 LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。 自备仪器和用品： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液枪和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。 二、测定：
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。 2.试剂二在25℃水浴中预热30min以上。 3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、160μL试剂二和 20μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。 4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂二和 20μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。 三、LOX活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活 单位。 LOX(U/mg prot)=[(A4－A3)－(A2－A1)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T×1000 =10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr （2）按照样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。LOX(U/g)=[(A4－A3)－(A2－A1)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000 =10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W：样品质量，g；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间。
脂肪氧合酶及其对小麦品质的影响 摘要：小麦脂肪氧化酶活性及其对品质改良的作用是当前国内外关注的课题之一。本文综述了脂肪氧化酶类型及性质、其影响因素和测定方法、脂肪氧化酶对小麦加工品质和储藏品质的影响等。 关键词:小麦；脂肪氧化酶；储藏品质；加工品质 Abstract：Activity of lipoxygenase and its effect towheat quality was one of the programs concerned with some scholar at home and abroad．The types and characteristics as well as the influencing factors and testing methods of lipoxygenase, effect of lipoxygenase on wheatmilling and storing qualities etc. were reviewed. Keywords：wheat；lipoxygenase；storage quality；processing quality 脂肪氧合酶(Lipoxygenase, LOX, EC1.13.11.12)属于氧化还原酶，是一类含非血红素铁的蛋白质,能专一催化具有顺，顺-戊二烯结构的多不饱和脂肪酸及酯，通过分子内加氧，形成具有共轭双键的氢过氧化衍生物[1]（脂肪氧合酶的酶学特性及其活性抑制机理的研究进展）。LOX广泛地存在于动植物界中，最普通的天然底物是亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸。1932年Andre和Hou首先发现大豆蛋白制品产生豆腥味是因为其中多元不饱和脂肪酸发生酶促反应的结果，其中关键的酶就是脂肪氧合酶。1947年Theoren等首次从大豆中获得了脂肪氧合酶的结晶，相对分子质量为10.2万[2]。（植物中脂肪氧合酶的研究进展）LOX催化多不饱和脂肪酸的氧化,产生氢过氧化合物,氢过氧化合物通过均裂或β-裂变分解，就形成了醛、酮等二级氧化产物,氢过氧化合物进一步裂解成不饱和的醛类、酮类和醇类化合物，形成类似苹果、香瓜、芒果等水果风味以及鲜鱼味、牡蛎味、文蛤味和海藻香、青草香等挥发性风味物质（小球藻脂肪氧合酶酶学性质研究）[3]。另一方面，产生的的氢过氧化物也可以进一步氧化可以转化为环氧酸。这些氧化产物导致果蔬加工制品产生不良的风味,比如说大豆及其制品的豆腥味,以及油脂和含油食品在贮藏和加工过程中的色、香、味发生劣变等。 除此之外，脂质降解是小麦等粮食储藏期间变质,产生陈味劣变主要内在原因，而脂肪氧化酶活性是影响小麦储藏特性的重要因素之一[4]（脂肪氧化酶及其在小麦品质改良中的研究与应用）。 1 脂肪氧化酶的结构与作用机制 1.1 脂肪氧合酶活性中心结构
货号：MS2404 规格：100管/48样植物中脂氧合酶（LOX）活性测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： LOX广泛存在于动植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。 测定原理： LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在280nm处有特征吸收峰；测定280nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。 自备实验用品及仪器： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液枪和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。 粗酶液提取： 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。 测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长到280 nm，蒸馏水调零。 2. 在试剂三中加入10mL试剂二（振荡混匀1min），在30℃水浴中预热10 min以上。用不完的试剂4℃保存。 3. 对照管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL样本和180μL试剂二，30℃反应 30min后，记录A对照。 4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL样本和180μL试剂三，30℃反应 30min后，记录A测定。 5. ΔA=A测定-A对照 LOX活性计算： （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.01个单位为1个酶活单位。LOX (U/mg prot) =ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr （2）按照样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.01个单位为1个酶活单位。 LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W 第1页，共2页