HE染色和巴氏染色法
普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。
一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。
二、染色的作用
1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。酸性染料中有染色作用的为阴离子；碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。
2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。
三、染色方法及步骤
1．人工苏木素，伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。(4)100%酒精1min。(5)95%酒精
1min。(6)95%酒精1min。(7)90%酒精1min。(8)80%酒精1min。(9)自来水洗1min。(10)浸入苏木素染液浸染10-15min。(11)自来水洗30second-1min。(12)1%盐酸酒精分化30second。(13)流水冲洗15min以上。(14)1%伊红酒精染
3-5min。(15)90%或95%酒精分化30sec。(16)95%酒精30sec-1min。(17)95%酒精30sec-1min。(18)95%酒精30sec-1min。(19)100%酒精1min。(20)100%酒精1-2min。(21)碳酸二甲苯1min。(22)二甲苯1-2min。(23)二甲苯1-2min (24)二甲苯1-2min。(25)中性树胶封固。结果：细胞核被染成深蓝黑色；细胞浆被染成粉红色；软骨及钙盐被染成蓝色；胶原纤维染成淡粉红色，嗜酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色；弹力纤维呈淡粉红色；某些蛋白性物呈粉红色等。染色时的注意事项：
1.切片用二甲苯脱腊，应视不同的季节有不同的脱蜡时间，在夏天，室温较高，
脱蜡较迅速，往往在2-3min就可脱蜡干净，二在冬季，时间应相对延长。
2.切片在进入二甲苯前，可用电吹风吹切片，使切片上的蜡处于熔解状态，这
样脱蜡较迅速，尤其是冬天，此法更可行。
3.切片上的蜡一定要清除彻底干净，否则将影响染色，造成切片染色不均的现
象。
4.切片进行无水化处理，这一步骤，一是可增加切片的附帖，二是可延长苏木
素的使用寿命。切片用二甲苯脱蜡后，不能直接水洗，因二甲苯不溶于水，
必须经过酒精，酒精可溶解二甲苯，又能与水混合，按照以前教科书的要求，切片在整个染色过程中，都不要让其干燥。经过多年的实践及经验，笔者认为，切片用酒精将二甲苯彻底消除后，在进入苏木素染液前，可用电吹风吹干，这一步对于切片没有充分的烤片时间，对于血块等的切片来说，尤为重要，切片经此步骤，增加了附贴的牢固性，减少切片在染色过程中脱离载片的机会，保证了染色的成功率。另者，切片进入苏木素染液全无水，可保证了苏木素染液的浓度和PH值，延长其使用寿命。以往切片进入苏木素染液前，都须经水洗，每次染色，都带入不少的水分，稀释了苏木素染液的浓度，改变了它的PH值，使染液寿命缩短。
5.切片无水化除了用电吹风外，还可用火烧，切片用90%酒精洗后，取出切
片，用火轻烧，也可达到切片的无水化。火对切片有损害吗？否，经实验证明，切片火烧时最高温度为80℃左右，对切片没有影响。用火烧时必须彻底清除二甲苯，因为二甲苯燃烧时可产生浓烟，如果存留于切片，将会影响观察。当然，用火时应特别注意防火，因为病理技术室的大部分试剂都为易燃品。
6.苏木素染液中的最佳染色时间，确切地回答还是比较困难的，因为各种组织
都有不同的染色时间，核的染色时间从30sec至15min不等。对于核的染色，为了充分地显示各种核染色质，一定要过染，尤其对于初学者来说，更是如此。
7.苏木素染液有多种，常规应用的通常为明矾苏木素，明矾苏木素又有Harris
苏木素，Mayer’s苏木素，和Ehrish苏木素等。
8.盐酸酒精分化切片，浓度有0.25%,0.5%和1%根据各人的情况而使用。
这一步主要是将过染的颜色及不该染的染色去除掉，这一步要掌握得当，必须靠经验，核的染色清楚与否靠分化这一招，分化过度，核染色淡，分化不足，核染色质一团，分不清。初学者应于显微镜下控制分化程度。
9.水洗蓝化，也可用温热水来促使切片蓝化，可用氨水，碳酸锂等化学药品来
促蓝，虽然如此，自来水冲洗蓝化切片是最好的，这对于切片的保存较为有利。
10.伊红酒精浓度有0.25%,0.5%和1%之分，根据各单位的情况而定。切片
一放入伊红染液，即可马上着色，但是，要染好切片，必须染够染足时间。
11.分化伊红须用浓度较高的酒精，以往伊红染色以后，用低浓度的酒精分化，
洗去多余的染液，实践中发现低浓度的酒精褪色能力特强，如果掌握不好，染上的伊红，便会被褪去大部分。改用较高浓度酒精后，这种现象便不会出现。
12.作为切片脱水剂的酒精，要经常更换，尤其是无水酒精，更要保持其无水性。
否则切片脱水不干净，含有水份就会褪色。切片取出后，不能令其干涸，即刻进行下一步。
13.碳酸二甲苯，对于南方地区来说，是一种很有用的试剂，碳酸吸水性强，用
它可加强脱水，它是二甲苯与酒精之间的缓冲剂，切片经此试剂后更加透明和光亮。有人认为碳酸为一种弱酸，切片用它后可能会褪色，这种担心是多余的，切片褪色，最主要是切片本身含有水份所导致。根据我们的实验，82年的切片经碳酸处理后，17年来颜色仍然保持鲜艳就足以说明。
14.二甲苯须换三次，以确保切片的透明度，这对于切片的观察和保存，都大有
好处。
15.封片时要做到：切片从二甲苯取出后，不使切片干涸。如果干涸，由于空气
潮湿，封片时就保证不了切片的无水。如果切片上保留着一定量的二甲苯，二甲苯的特性不溶于水，它的存在使切片与空气隔开，切片无法跟潮湿空气
接触，就可保证切片的无水，这时及时滴上中性树胶，切片就能完好地封好。
16.封片用的中性树胶，不能过稠，也不能过稀，过稠胶难以伸展开，并容易产
生气泡，影响封片的速度。过稀是因胶中含过多的二甲苯，封完切片后，胶
一收缩及二甲苯挥发，切片就不能被完全封盖上，这都影响切片的质量。
2、卧色自动染色机染色方法及步骤自动染色机应用于病理切片的染色是近几年的事情，目前国内仅有少数单位拥有自动染色机，南方医院自1997年引进英国Shandon公司研制的Varicstain TM xy多程序全自动染色机以来，已完成活检HE染色和脱落细胞染色。
应用该机染片的优点①该机全部由电脑控制，可设置20种操作程序，任意设定各种时间。②有21个装试剂的罐，其中2个为自来水冲洗罐，切片前水洗和苏木素染色后水洗以及盐酸分化时的水洗，都在这两个罐中进行。③该机配有多种不同的染色架，根据工作量的不同，自行选择，其中最大容量为6张切片。④该机设置自动操作手臂，可在设置的范围内朝不同的方向和位置到达任何一个染色罐，朝上下活动。⑤染色罐可多套配备，作多种染色，如组织学的HE染色，细胞学的巴氏染色等。根据我们的应用情况，现将我们的染色程序列表如下：自动染色机工
注意事项①表中二甲苯的脱蜡时间，可根据季节不同，可随意更改。②由于为机器操作，切片无法作无水化处理，因此切片在入水洗前要充分去二甲苯。③切片入苏木素染色前必须水洗，但在表中没有专门供这一次水洗的罐子，在表里21号中注有（6+1）的字样，在程序输入时必须将其输入，否则将没有冲洗这一步。因为整个染色过程，需要三次水洗，而机器的固定水洗罐只有两个，因此罐的使用可以重复使用。④机器虽然在每一步中，在进入下一罐前设有一定的时间，目的是将试剂控干后再进入下一个缸，虽然如此，还是带一定的试剂进入下一缸。⑤苏木素要经常观察，发现染核不好，就必须马上更换，因为水洗后的切片可带入水份染液，可稀释染液的浓度。⑥苏木素最好设置在靠近水洗缸的旁边。如果设置在远离水缸的一边，当要水洗时，由于切片从提蓝中提起，经长途输送方能到达水缸，虽然切片有控干的时间，但仍不够，还会有些许染液滴下，这样会污染机器。⑦切片脱水用的100%alc也可设置两个缸，根据实际情况使用。⑧碳酸后所设置的三个缸为二甲苯，目的是使切彻底得到透明，当然两个缸也可以，但效果没有三个缸的好。⑨切片经一个程序完结后，搁置在所设置的二甲苯最后一缸，如没有去妄动它，它将
永远不起来。3．酒精灯加温快速染色法及步骤该法可用于临床快速冰冻切片，快速石蜡及某些快速诊断的切片。它不象常规染色法那样，各种步骤都需要一定的时间。快速染色不但要求要快，而且染色质量要好，否则将给诊断造成困难。①所有切片包括冰冻切片和石蜡切片都须用电吹风吹，使切片附贴牢固。石蜡切片还须经过快速脱蜡，切片经电吹风吹一定时间后约（1min左右），即刻浸入二甲苯，此可见成片的石蜡溶解于二甲苯中，取出切片再用电吹风吹，然后再浸入二甲苯，如此反复2-3次，石蜡即脱干净，酒精洗后，继用电吹风吹干。②用滴管滴染苏木素染液于切片上，在酒精灯上加热染色。加热时要来回移动切片，不要在一个点上加热，否则染色不均匀，一点加热的地方容易将切片掀起来，导致切片脱离载片。当加热的苏木素染液有蒸汽出现时，即可停止染色（时间约为30sec-1min）。③倾去余液，急洗，速分化，水洗。将切片浸入70℃左右的热水中返蓝约30sec-1min。
④速染伊红，切片浸入伊红液即可，后速往下酒精至切片封固，整个染色过程约
4min左右，其结果与常规法同。4．超声波快速染色法及步骤①切片处理同3法①。②用一小烧杯，将入苏木素染液，浸入超声波的工作范围内，开动超声波计时表30sec，染色即可完成。③取出切片，速水洗，分化，浸入热水或于超声波工作范围内超声20sec，速染伊红直至封片。结果同常规染色法两种快速染色法染色时的注意事项：①切片要附贴牢固，薄切片是很重要的，如果切片过厚，加热染色时，切片容易翻起脱离载片，导致染色失败。②超声波快速染色原理见（超声波快速石蜡制作程序）。染色的目的是使细胞结构清晰，细胞透明度高，便于观察。染色归纳起来有两大类，即常规染色方法和特殊细胞化学染色方法。常用的染色方法有：苏木精伊红染色法(同组织切片染色)、巴氏染色法、绍氏染色法、迈格吉染色等。巴氏染色法
1．染液配制(1)Harris苏木精的配制：(同组织染色) (2)橙黄-G6：取橙黄-G6 O.5g，溶于95％酒精100ml中，加磷钨酸15mg。(3)EA36染液：先配制原液(贮备液)：①亮绿液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。②俾士麦棕液：俾士麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。③伊红Y液：伊红Y 0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。临用前，将上述亮绿液45ml,伊红Y液45ml，俾士麦棕液10ml混合后，再加人磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。也可配制EA50液：3%亮绿水溶液10ml 纯甲醇250ml 20％伊红Y水溶液20ml；冰醋酸20ml 磷钨酸2g(水溶后加入)95％酒精700ml 2．染色步骤(1)将固定后的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返蓝同HE染色。(2)70％、80％、95％酒精逐级脱水各：1分钟。(3)橙黄-G6 3-5分钟。
(4)95％酒精I、Ⅱ缸洗各1分钟。(5)EA36或EA50 5分钟。(6)95％酒精I、II 缸洗各1分钟。(7)无水酒精I、Ⅱ缸洗各1分钟。(8)二甲苯I、Ⅱ缸透明各1。
(9)中性树胶封固。3．结果巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色，粘液染成淡蓝色或粉红色。4．巴氏染色特点细胞透明度好，结构清晰，涂片色彩丰富而鲜艳，由于能显示鳞状上皮不同角化程度，常用于阴道涂片测定雌激素水平。宫颈涂片和痰涂片中分化差的鳞癌小角化细胞显示桔黄色，在红色坏死背景中特别突出，不易漏诊。
巴氏染色液说明书 【产品名称】 巴氏染色液 【包装规格】 货号：DA0082 单瓶(盒)包装规格：100ml 、250ml 、500ml 、5000ml ； 套组(盒)包装规格：4×100ml/盒、4×250ml/盒、4×500ml/盒。 【预期用途】 主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。 【检验原理】 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，橘黄G 与EA36或EA50联合使用可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而细胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。巴氏染色液利用这一特性对细胞进行多色性染色，细胞经染色后能清晰地显示细胞的结构，胞质透亮鲜丽，各种颗粒分明，细胞核染色质非常清楚，从而较容易发现异常细胞。通过巴氏染色可反映出细胞在炎症刺激下和癌变后的形态学变化，对早期发现和诊断一些病变和肿瘤具有较重要意义。 【主要组成成分】 试剂组成 主要成分 l 、苏木素染色液 苏木素 2、1%盐酸乙醇分化液 盐酸、乙醇 3、橘黄G 染色液 橘黄G 4、EA50染色液或EA36染色液 EA50染色液：淡绿、伊红、磷钨酸、冰乙酸； EA36染色液：淡绿、伊红、磷钨酸 【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 新鲜标本涂片后，应尽快用95%乙醇固定，以避免细胞变形。 【检验方法】 1、固定：将细胞涂片置于95%乙醇中固定； 2、染色，按要求进行染色。 3、二甲苯透明，中性树脂封片，镜检。 【检验结果的解释】 【检验方法的局限 性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】 1、冬季气温较低时，苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。 细胞核 蓝紫色或黑色 非角化细胞的胞质 淡蓝色或淡绿色 角化细胞的胞质 粉红或橘黄色 红细胞 鲜红色或橙红色 粘液 淡蓝或粉红色
巴氏染色液说明书 【产品名称】巴氏染色液 【产品名称】巴氏染色液PAP Staining Solutions 【产品编号】PAP-500ml,PAP-1000ml,PAP-2500ml 【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml 2500ml；橘黄G6染色液500ml、1000ml 2500ml；EA50染色液500ml、1000ml 2500ml。 【预期用途】主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。 【检验原理】 巴氏染色液由3部分组成：苏木素染色液、橘红G6染色液和EA50染色液。 苏木素染色液，是一种针对正常以及变态细胞学涂片染料，对核膜、核质、核仁染色效果非常清晰。涂片标本可是妇科或非妇科的，如痰液，尿液及细胞学穿刺样本。为获得优质的染色效果，苏木素染液技术完全按照帕氏染色法，以及OG-6染液；EA 31染液；同时供应选择性多色复染染料，如EA50试剂；EA65试剂，满足细胞学染色需求。 橘黄G6染色液，是橘黄G (Orange G) 染料添加磷酸（PMA）后的酒精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为获得优质的染色效果，OG-6试剂特性与其他用于Papanicolaou染色法中染色试剂-苏木素试剂，EA 31试剂，及对比染色试剂EA50试剂，EA65试剂相符。 EA50染色液,为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为获得优质的染色效果，EA 50 Pap 3B试剂特性与其他用于细胞学涂片染色试剂（苏木素试剂，OG-6试剂）相符。 【主要组成成分】 苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；橘黄G染液：橘黄G6、磷酸、稳定剂；EA50：伊红Y、亮绿 SF、磷钨酸、稳定剂 【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C 和+25°C
巴氏染色的几点体会 李瑞祥熊灏靳敏 巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。 1 EA 36 染液pH值的测试 EA 36 染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36 染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。在溶媒中其发色团是负离子部分。发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。所以必须把染液pH 值调至5.2为宜［1］。EA 36 染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。当然用酸度计法最为准确。但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。本文采用一种简单方便的方法。即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。并充分混匀。直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。保证染色达到理想效果。 2 分色 分色或酸化，对染色效果也很重要。分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36 染液的着色。结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。看不到红蓝相间现象。因此，掌握好分色是关键。分色时间不能过短或过长。太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。每次应在数秒内完成。盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。这样便于掌握分色的时间。 3 蓝化或碱化 蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。经蓝化后的胞核紫中带蓝。这与红色的胞浆对比更鲜明。蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。为EA 36 的着色创造良好条件。所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。 若涂片经EA 36 染色后，镜下观察效果不理想时。根据涂片着色情况，可于EA 36 染液中滴加少量10%磷钨酸或饱和碳酸锂后重染EA 36 3～5min而补救。比如:角化细胞浆不红，就滴加10%磷钨酸。若角化前细胞浆也变红，就滴加饱和碳酸锂如此边复染边镜下观察，直至获得最佳染色效果为止。
巴氏染色 巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。 1 EA 36染液pH值的测试 EA 36染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。在溶媒中其发色团是负离子部分。发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。所以必须把染液pH值调至5.2为宜［1］。EA 36染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。当然用酸度计法最为准确。但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。本文采用一种简单方便的方法。即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。并充分混匀。直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。保证染色达到理想效果。 2 分色 分色或酸化，对染色效果也很重要。分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36染液的着色。结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。看不到红蓝相间现象。因此，掌握好分色是关键。分色时间不能过短或过长。太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。每次应在数秒内完成。盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。这样便于掌握分色的时间。 3 蓝化或碱化 蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。经蓝化后的胞核紫中带蓝。这与红色的胞浆对比更鲜明。蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。为EA 36的着色创造良好条件。所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。
巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。 巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染色的操作方法及注意事项 染色染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。主要达到以下要求：1、核的结构清晰；2、透明度高；3、分色恰当。 一、固定固定的目的细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固定方法是95％酒精作为固定液的湿固定法。酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶捋蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。1、固定方法湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％酒精的固定缸内。制片在固定液内至少保持15-30min。固定时间通常不超过1周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。如果细胞制片需要送至另一实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因为无论固定前或固定后的制片，如果发生干燥后都会影响染色的效果。 2、固定注意事项固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是
使用过的固定液，必须过滤后才能再使用。使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计测定，酒精浓度低于90％时应该及时更换新液。湿固定的重要性：标本再新鲜时及时固定时保证染色效果的重要因素。如苏木素对细胞核的染色，巴氏染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干燥后固定而大受影响。制片标本的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的小盒中。实验室在收到标本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再进行染色。 二、核染色1、苏木素液浸染时间一般在3-5min，但是必须随气温和燃料情况而酌情改变。夏季或放置较久的苏木素染液容易着色，时间要缩短；冬季或新配制的苏木素染液和应用已久较稀释的苏木素液不易着色，时间要延长。在使用苏木素染色时，一般有2种方法：1）过染法：首先有意识地进行深染，然后通过盐酸酸化过程使核染色趋于合适。这种方法能够在酸化过程中把胞浆内黏附多余的苏木素染料去掉，使胞浆染色更为鲜艳、清晰、多用于黏液多的标本。2）淡染法：在核染色过程中，严格掌握染色时间，使核染色适宜而不用盐酸酸化，但是胞浆中少量的苏木素会影响EA 染色的质量。主要用于黏液少的标本，避免在酸化和自来水冲洗的过程中使细胞成片地脱落。在使用苏木素染色时，一定要每日进行过滤，否则苏木素结晶会影响染色的质量。一般苏木素染液可以使用较长时间，所以每日增加少量新鲜
巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，质去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴
道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色
巴氏染色液(Papanicolaou EA50)使用说明 产品简介： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用检测于阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36或EA50联用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。 巴氏染色液(Papanicolaou EA50)细胞质染色采用EA50染液，细胞核染色采用无毒改良型苏木素染色液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。 产品组成： 规格名称 G1540 4×100ml G1540 4×500ml Storage 试剂(A):苏木素染色液100ml500ml RT避光试剂(B):蓝化液100ml500ml RT 试剂(C):橘黄G6染色液100ml500ml RT避光试剂(D):EA50染色液100ml500ml RT避光使用说明书1份
自备材料： 固定液如95%乙醇-冰乙酸固定液；系列乙醇；显微镜，盐酸乙醇分化液。操作步骤（仅供参考）： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、苏木素染液染色5～10min。 7、自来水冲洗2min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4～5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2min。 10、蓝化液中蓝化2min。 11、自来水冲洗2min。 12、70%的乙醇脱水2min。 13、80%的乙醇脱水2min。 14、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水2min。 15、橘黄G6染液染色2min。 16、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水2min。 17、EA50染液染色3～5min。 18、95%的乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水1min。 19、无水乙醇(Ⅰ)(Ⅱ)各脱水1min。
巴氏染色液(Papanicolaou EA65)操作步骤及注意事项 货号：G1614 规格：4×100ml/4×500ml 有效期：6个月有效。 产品内容： 产品组成4×100ml4×500ml Storage 试剂(A):苏木素染色液100ml500ml RT避光 试剂(B):蓝化液100ml500ml RT 试剂(C):橘黄G6染色液100ml500ml RT避光 试剂(D):EA65染色液100ml500ml RT避光 产品说明： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。 巴氏染色液(Papanicolaou EA50)细胞质染色采用EA50染色液，细胞核染色采用无毒改良型苏木素染色液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。
自备材料： 1、固定液(如95%乙醇-冰乙酸固定液) 2、系列乙醇 3、显微镜 4、盐酸乙醇分化液 操作步骤(仅供参考)： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、苏木素染液染色5～10min。 7、自来水冲洗2min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4～5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2min。 10、蓝化液中蓝化2min。 11、自来水冲洗2min。 12、70%的乙醇脱水2min。 13、80%的乙醇脱水2min。 14、95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)脱水各2min。 15、橘黄G6染液染色2min。 16、95%的乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)冲洗各2min。
EA50染色液使用说明书 【产品名称】EA50染色液 【产品编号】EA50-OT-100，EA50-OT-500，EA50-OT-1L，EA50-OT-2.5L 【包装规格】100ml500ml1000ml2500mL 【预期用途】细胞质染色试剂，用于Papanicolaou染色法细胞学上使用的对比 染料 【检验原理】 EA50染色液,Pap3B试剂为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒 精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6试剂和 EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。 之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。 测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为 获得优质的染色效果，EA50Pap3B试剂特性与KOHYPATH其他用于细胞学涂片 染色试剂（苏木素HP，Pap1A试剂，OG-6，Pap2A试剂）相符。 【主要组成成分】含生物染料级别（BSC）的伊红Y和亮绿SF，并添加磷钨酸和 适当的稳定剂，两者浓度和比例不同于其他EA Pap试剂。 细胞学涂片染色： 收集和准备细胞学材料的两种方法： 收集细胞学样本后置于载玻片（Vitro Gnost）上，立即喷洒固定液（CitoSpray） 进行固定，干燥后染色备用。样本固定后可放置于95%乙醇（Histanol95） 中30min。 用液体基质的细胞学方法（LBC），刷子刷下细胞学样本，立即浸入固定液（CitoFix） 固定。染色前，从固定液中分离样本细胞（离心固定液），置于载玻片上，准备 进一步染色。 巴氏（Papanicolaou）染色法，进行性染色： 染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。 如样本已经用CitoSpray固定并干燥，应放置于95%乙醇（Histanol95）中 10min，以去除聚乙二醇；若样本是经95%乙醇（Histanol95）溶液固定， 请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用LBC法），包含低浓度乙醇，因此无 需用递减梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素HP，Pap1A染色。 1.递减梯度浓度乙醇溶液（Histanol95,Histanol 4组，每次上下跌落6-8次80and Histanol70）水化，并用蒸馏水或去离 子水冲洗 2.苏木素HP，Pap1A染色2-3min 3.Scott溶液或显蓝试剂处理1min 注：若没有此试剂，可直接用自来水冲洗3-5min 4.递增梯度浓度乙醇溶液（Histanol70,Histanol 3组，每组上下跌落6-8次80and Histanol95）进行脱水 5.OG-6，Pap2A染色2-3min 6.95%乙醇（Histanol95）冲洗2次，每次上下跌落6-8次 7.EA31，Pap3A试剂染色/EA50，Pap3B试2-3min
巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法就是脱落细胞染色中最好得染色方法.苏木素染液，细胞核内得染色质主要就是去氧核糖核酸（DNA，DNA得双螺旋结构中,两条链上得磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷得苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上得染液，但就是在细胞核中结合过多得染料与细胞浆中吸附得染料必须用分化液 1 %盐酸酒精脱去，才能保证细胞核与细胞浆染色得分明，把这个过程称为染色得分化作用.因酸能破坏苏木素得醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下 处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上得细胞核变呈蓝色，称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。E A50 染液得酸碱度对于巴氏染色得成功起着关键作用,EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团就是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电得氨基结合，从而就是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷得多少就是随溶液得PH值而改变得，在偏碱环境中,蛋白质得羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料得着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还就是一对弱酸弱碱，实际上就是一对缓冲剂，可中与分化及蓝化时可能留下得少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织得标本,就是阴道脱落细胞检查中最常用得染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点? 巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌:灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞与淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。 巴氏染色得操作方法及注意事项
巴氏染色原理及操作步骤
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巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液,细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNＡ的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外，带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而 被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化:苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液,但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液１%盐酸酒精脱去,才能保证细胞核和细胞浆染 色的分明,把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝,也可用温水（5０度温水最佳）变蓝。EA50染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，ＥA５０染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合,从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色,但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中,蛋白质的羧基游离增多(带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力,同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱,实际上是一对缓冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。 巴氏染色法将胞核染为深蓝色;鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色,完全角化细胞胞质呈桔黄色;细菌：灰色;滴虫:淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色;腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染色液(Papanicolaou EA36) 产品简介： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。橘黄G6与EA36和EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞浆呈粉红或橘红色。 Jimei巴氏染色液(Papanicolaou EA36)细胞质染色采用EA36染色液，细胞核染色采用Jimei自主研发的无毒改良型苏木素染色液，EA36比EA50更适用于妇科细胞学涂片染色筛查宫颈癌和癌前病变。 产品组成： 自备材料： 1、固定液（如95%乙醇-冰乙酸固定液） 2、系列乙醇 3、显微镜 4、盐酸乙醇分化液 操作步骤（仅供参考）： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10~15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、Jimei苏木素染液染色5~10 min。 7、自来水冲洗2 min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4~5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2 min。 10、蓝化液中蓝化2 min。 11、自来水冲洗2 min。
巴氏染色试剂盒(Papanicolaou EA50) 产品简介： 细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法。Papanicolaou Stain 最初仅用检测于阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。Harris苏木素染液是比较好的核染色剂，但由于Harris苏木素有毒性，本公司采用美国最新流行的改良Lillie-Mayer苏木素染色液。橘黄G6与EA36或EA50联用使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。 目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞核染色液主要为Harris苏木素染液，细胞质染色液主要为EA36染液、EA50染液。巴氏染色液用于细胞脱落标本，细胞核呈蓝色或黑色，角化鳞状细胞胞浆呈粉红或橘红色。 Leagene 巴氏染色试剂盒(Papanicolaou EA50)细胞质染液采用EA50染液，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。 主要成分： 试剂(A): 主要由苏木素、硫酸铝钾等组成。 试剂(B): 主要由碳酸锂或氨水等组成。 试剂(C): 主要由橘黄G6等组成。 试剂(D): 主要由淡绿、伊红、磷钨酸等组成。 自备材料： 1、固定液如95%乙醇-冰乙酸固定液
2、70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇 3、显微镜 操作步骤（仅供参考）： 1、细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸固定液固定10～15min。 2、95%的乙醇浸泡1min。 3、80%的乙醇浸泡1min。 4、70%的乙醇浸泡1min。 5、蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。 6、改良Lillie-Mayer苏木素染液染色5～10min。 7、自来水冲洗2min。 8、1%的盐酸乙醇分化液分化约4～5s或0.5%盐酸水溶液分化10s。 9、自来水冲洗2min。 10、蓝化液中蓝化2min。 11、自来水冲洗2min。 12、70%的乙醇脱水2min。 13、80%的乙醇脱水2min。 14、95%的乙醇(Ⅰ)脱水2min。 15、95%的乙醇(Ⅱ)脱水2min。 16、橘黄G6染液染色2min。 17、95%的乙醇(Ⅰ)冲洗2min。 18、95%的乙醇(Ⅱ)冲洗2min。 19、EA50染液染色3～5min。 20、95%的乙醇(Ⅰ)脱水1min。 21、95%的乙醇(Ⅱ)脱水1min。 22、无水乙醇(Ⅰ)脱水1min。 23、无水乙醇(Ⅱ)脱水1min。 24、二甲苯透明。 25、中性树脂封片。 染色结果：
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/c510739111.html, 宫颈液基细胞学TCTHE染色和巴氏染色检查在宫颈癌筛查中的应用 作者：冉飞燕 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第12期 【摘 ;要】目的：对宫颈液基细胞学（TCT）HE染色和巴氏染色检查在宫颈癌筛查中的应用价值进行分析。方法：采集选取我院2017年2月-2019年5月接受宫颈液基细胞学检查的5009例患者中的2040例，按照染色检查方法的不同分为通过随机法分为两组，即1020例HE 组与1020例巴氏组，以病理检查结果作为金标准，对比两种染色方法的实际应用价值。结果：经过对比后，两组阳性检出率差异小（P>0.05）;两组诊断符合率差异小（P>0.05）。结论：应用宫颈液基细胞学对宫颈癌检查时，HE染色和巴氏染色的诊断价值类似，但HE染色法具有价格低廉与操作简便的优势，因此临床上更为常用;两种染色方法配合使用，能够在很大程度上增强诊断准确性。 【关键词】液基细胞学;HE染色;巴氏染色;筛查 ;应用 【中图分类号】R47 ; ; ;【文献标识码】A ; ; ;【文章编号】1672-3783（2019）12-0097-01 宫颈癌是我国女性健康的重要杀手、从癌前病变转变成癌有一个过程、一般所需10年左右、因此早癌筛查很重要，而液基细胞学（TCT）检查是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，检出率为100%，在宫颈病变诊断中普及，改变了传统手工涂片的方法，制片效果好，利于观察，阳性检出率高，是应用于妇女宫颈癌筛查的一项先进的技术。宫颈细胞学的常用染色方法以巴氏染色，HE染色为主，效果各有优劣。比较两种染色方法，分析各自的优缺点，便于在工作中选择合适的染色方法。临床上常用的染色法可分为苏木精—伊红染色法（HE）和巴氏染色[1，2]。本研究对我院收治的TCT检查患者采用不同染色法，旨在探讨两种染色法在宫颈癌筛查中的应用价值，具体内容如下： 1 对象和方法 1.1对象 采集选取我院2017年2月-2019年5月接受宫颈液基细胞学检查的5009例患者中的2040例，按照染色检查方法的不同分为通过随机法分为两组，即1020例HE组与1020例巴氏组，以病理检查结果作为金标准。其中HE组年龄为28-66岁，平均年龄为（40.29±6.37）岁;巴氏组年龄为37-68岁，平均年龄为（42.56±6.71）岁。经过对比后，两组一般资料差异小且无统计学意义（P>0.05）。
巴氏染色的操作方法 染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。 主要达到以下要求：1、核的结构清晰；2、透明度高；3、分色恰当。 一、固定 1、固定的目的 细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固定方法是95％酒精作为固定液的湿固定法。酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶将蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。 2、固定方法 湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％酒精的固定缸内。制片在固定液内至少保持15-30min。固定时间通常不超过1周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。 如果细胞制片需要送至另一实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因为无论固定前或固定后的制片，如果发生干燥后都会影响染色的效果。 3、固定注意事项 固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是使用过的固定液，必须过滤后才能再使用。使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计测定，酒精浓度低于90％时应该及时更换新液。 湿固定的重要性：标本再新鲜时及时固定时保证染色效果的重要因素。如苏木素对细胞核的染色，巴氏染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干燥后固定而大受影响。 制片标本的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的小盒中。实验室在收到标本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再进行染色。 二、核染色 1、苏木素液浸染时间一般在3-5min，但是必须随气温和染料情况而酌情改变。夏季或放置较久的苏木素染液容易着色，时间要缩短；冬季或新配制的苏木素染液和应用已久较稀释的苏木素液不易着色，时间要延长。在使用苏木素染色时，一般有2种方法：1）过染法：首先有意识地进行深染，然后通过盐酸酸化过程使核染色趋于合适。这种方法能够在酸化过程中把胞浆内黏附多余的苏木素染料去掉，使胞浆染色更为鲜艳、清晰、多用于黏液多的标本。2）淡染法：在核染色过程中，严格掌握染色时间，使核染色适宜而不用盐酸酸化，但是胞浆中少量的苏木素会影响EA染色的质量。主要用于黏液少的标本，避免在酸化和自来水冲洗的过程中使细胞成片地脱落。 在使用苏木素染色时，一定要每日进行过滤，否则苏木素结晶会影响染色的质量。一般苏木素染液可以使用较长时间，所以每日增加少量新鲜染液即可。 2、碱化碱化亦称返蓝过程，可以使用饱和碳酸锂或3％氨水碱化，目的使苏木素及早显色，时间约数秒。更重要的是流水冲洗，可使蓝色显的更鲜艳。碱性溶液亦需要充分漂清才不会妨碍下一步的胞浆着色及标本制成后的颜色保存。分化和碱化溶液至少每天更换新液。
+. 医 疗 器 械 注 册 产 品 标 准 YZB/皖 巴氏染色液试剂盒 2013-11-10发布 2014-03-01实施
前言 巴氏染色试剂盒是以分泌物中的脱落细胞含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同的电荷，与巴氏染色液中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细胞染成不同的颜色为原理，用于脱落细胞涂片染色，方便观察诊断。目前尚无国家标准或行业标准，为了规范生产，确保产品质量，特制订本注册产品标准。 本标准的编写遵循了GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写、第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》和《医疗器械注册产品标准编写规范》中的有关医疗器械注册产品标准编写的基本规定，并参照YY 0466-2003《医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号》，本标准于2014年3月首次发布。 本标准由合肥华今生物科技有限公司提出并起草。 本标准主要起草人：万士林梁锋
巴氏染色液试剂盒 1 范围 本标准规定了巴氏染色液试剂盒的分类、要求、试验方法、检验规则、标志、标签、使用说明书和包装、运输、贮存。 本标准适用于本公司生产的巴氏染色液试剂盒（以下简称试剂盒）。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 191-2008 包装贮运图示标志 GB/T 13385-2008 包装图样要求 GB2828.1—2003 记数抽样检验程序第1部分：按接受质量限（GQL）检索的逐批检验抽样计划 GB2829—200 《周期检查计数抽样程序及抽样表》 3 分类 3.1预期用途 巴氏染色是临床检验最基本的染色方法之一，适用于各种脱落细胞的形态观察前的染色（涂片 染色），方便观察诊断。 3.2检验原理 分泌物中的脱落细胞含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同的电荷，与巴氏染色液 中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细 胞染成不同的颜色。 3.3主要组成。 主要由苏木精染液、EA50染液、橘黄G染液构成。 3.4包装规格： 4 要求 4.1外观 苏木精染液为紫红色液体，无沉淀，上清液无絮状物。 橘黄G染液为橙黄色，无沉淀，上清液无絮状物。 EA50染液为蓝绿色，无沉淀，上清液无絮状物。 4.2准确度 脱落细胞染色后，细胞核呈紫色，非角质化细胞的细胞质呈蓝绿色，角质化细胞的细胞质呈粉红或橘红色。 4.3 装量 每个容器装量应不少于标示量95%。
HE染色和巴氏染色法 普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。 一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。 二、染色的作用 1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。酸性染料中有染色作用的为阴离子；碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。 2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。 三、染色方法及步骤 1．人工苏木素，伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。(4)100%酒精1min。(5)95%酒精 1min。(6)95%酒精1min。(7)90%酒精1min。(8)80%酒精1min。(9)自来水洗1min。(10)浸入苏木素染液浸染10-15min。(11)自来水洗30second-1min。(12)1%盐酸酒精分化30second。(13)流水冲洗15min以上。(14)1%伊红酒精染 3-5min。(15)90%或95%酒精分化30sec。(16)95%酒精30sec-1min。(17)95%酒精30sec-1min。(18)95%酒精30sec-1min。(19)100%酒精1min。(20)100%酒精1-2min。(21)碳酸二甲苯1min。(22)二甲苯1-2min。(23)二甲苯1-2min (24)二甲苯1-2min。(25)中性树胶封固。结果：细胞核被染成深蓝黑色；细胞浆被染成粉红色；软骨及钙盐被染成蓝色；胶原纤维染成淡粉红色，嗜酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色；弹力纤维呈淡粉红色；某些蛋白性物呈粉红色等。染色时的注意事项： 1.切片用二甲苯脱腊，应视不同的季节有不同的脱蜡时间，在夏天，室温较高， 脱蜡较迅速，往往在2-3min就可脱蜡干净，二在冬季，时间应相对延长。 2.切片在进入二甲苯前，可用电吹风吹切片，使切片上的蜡处于熔解状态，这 样脱蜡较迅速，尤其是冬天，此法更可行。 3.切片上的蜡一定要清除彻底干净，否则将影响染色，造成切片染色不均的现 象。 4.切片进行无水化处理，这一步骤，一是可增加切片的附帖，二是可延长苏木 素的使用寿命。切片用二甲苯脱蜡后，不能直接水洗，因二甲苯不溶于水，