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殝
殝
临床医学研究
作者单位：710032西安，军事口腔医学国家重点实验室，口腔疾病国
家临床医学研究中心，陕西省口腔疾病重点实验室，第四军医大学口腔医院牙体牙髓病科（杨倩娟
常文悦
郭晓睿陆群），组织工程中心（刘文佳），口腔正畸科（王红
陈琦）
通讯作者：陆群
E-mail ：luqun22@hotmail．com
miＲ-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
杨倩娟
刘文佳
常文悦
郭晓睿
王红
陈琦
陆群
【摘要】目的：研究miＲ-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法：分离培养人牙周膜干细胞后用qＲT-PCＲ
检测miＲ-20a 的表达，并且在瞬时转染miＲ-20a mimics 和inhibitor 后成骨诱导，用茜素红染色，Western Blot 和PCＲ的方法检测成骨能力的改变。结果：人炎症牙周膜干细胞中miＲ-20a 表达降低，转染mimics 后成骨能力升高，转染inhibitor 后成骨能
力降低。结论：miＲ-20a 可以促进人炎症牙周膜干细胞成骨分化。【关键词】miＲ-20a ；牙周膜干细胞（PDLSCs ）；成骨分化
The effects of miＲ-20a on the osteogenic differentiation potential of the inflammatory PDLSCs
YANG Qianjuan 1，LIU Wenjia 2，CHANG Wenyue 1，GUO Xiaorui 1，WANG Hong 3，CHEN Qi 3，LU Qun 1．1．710032Xi ＇an ，State Key Laboratory of Military Stomatology ＆National Clinical Ｒesearch Center for Oral Diseases ＆Shaanxi Key Laboratory of Oral Diseases ，Department of Conservative Dentistry and Endodontics ，2．Ｒesearch and Development Center for Tissue Engineering ，3．Department of Orthodontics ，School of Stomatology ，The Fourth Military Medical University ，China
【Abstract 】Objective ：To study the effects of miＲ-20a on the osteogenic differentiation potential of inflammatory periodontal liga-ment cells （IPDLSCs ）．Methods ：Cells were isolated and cultured from the healthy and inflammatory periodontal ligament samples （HPDLSCs and IPDLSCs ）respectively．miＲ-20a expression was analyzed by qＲT-PCＲ．Alizarin red staining ，Western blot and PCＲwere used to evaluate the osteogenic differentiation potential of IPDLSCs after transient transinfection of miＲ-20a mimics or inhib-itor．Ｒesults ：miＲ-20a expression in IPDLSCs was lower than that in HPDLSCs ，and the osteogenic differentiation potential of IP-DLSCs were promoted by miＲ-20a mimics ，and reduced by miＲ-20a inhibitor．Conclusion ：The miＲ-20a in IPDLSCs was down reg-ulated．miＲ-20a can promote the osteogenic differentiation potential of IPDLSCs．
【Key words 】miＲ-20a ；Periodontal ligament stem cells （PDLSCs ）；Osteogenic differentiation potential 中图分类号：Ｒ781．4文献标志码：A doi ：10．3969/j．issn．1001－3733．2016．02．007
牙周膜干细胞（PDLSCs ）是一类来源于间充质的成体干细胞，具有多向分化潜能，而由牙周膜干细胞形成的再生组织有可能成为一种治疗牙周疾病的新方法［1］
。自从1993年Ambros 和Coworkers 发现miＲNA 以来，在随后的20多年中，随着人们对miＲNA 研究的不断深入，已经证实miＲNA 在胚胎发育、细胞分化、
血管形成、炎症、肿瘤等方面均发挥着重要作用［2］。miＲNA 是较短的双链ＲNA 分子，约有22个核苷酸，
其在转录后通过靶向作用于mＲNA ，从而抑制转录或诱导靶mＲNA 分裂降解。miＲNA 现已被认为是真核
生物基因表达和功能调节过程的关键分子［3］
。有文
献报道，
miＲ-20a 可通过激活BMP 信号通路促进人骨髓来源的间充质干细胞成骨分化。但是miＲ-20a 对人
炎症牙周膜干细胞成骨分化的影响尚未见报道。慢性牙周炎环境下，
miＲNA 分子的表达有明显变化，
Xie 等应用微阵列芯片技术分析重度牙周炎患者炎性牙龈组织与健康人牙龈组织miＲNAs 的表达，得
出牙周炎的miＲNA 表达谱
［4－5］
。结果显示，与健康人牙龈相比，炎性牙龈组织中miＲNAs 表达上调的有91个，下调的则有34个。本实验已证明在炎症牙周膜细
胞中，
miＲ-20a 表达下降。我们想进一步证明，miＲ-20对炎症牙周膜细胞的成骨分化能力的影响。1材料与方法
1．1
主要试剂和仪器
α-MEM ；胎牛血清；1000U /ml 青霉素，1000U /ml 链霉素；胰蛋白酶（Hyclone ，美国）；谷氨酰胺（Gibco ，美国）；β-甘油磷酸钠、地塞米松、抗坏血酸（Sigma ，美国）；茜素红；Trizol Ｒegent （Life Technolo-
·
681·https://www.doczj.com/doc/c14679300.html,
本文摘自中国继续医学教育
gies，美国）；逆转录试剂盒、ＲT-PCＲ试剂盒（Takara，日本）；lipofectamine2000（Invitrogen，美国）；mimics NC，miＲ-20a mimics，inhibitor NC，miＲ-20a inhibitors （上海吉玛制药技术有限公司）；Ｒeal-Time PCＲ仪。1．2方法
1．2．1牙周膜细胞原代培养收集因智齿阻生及牙周炎拔除的牙齿，PBS冲洗3次，刮除根中1/3牙周膜组织，离心管收集组织块。800r/min，离心5min后弃除PBS。加入3mg/ml的I型胶原酶，37?消化1 h，每10min吹打50次，离心后收集细胞及消化松散的组织块，加入α-MEM培养液（含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100μg/ml链霉素），吹打均匀后接种于培养瓶中，37?、5%CO2孵箱中培养，每3d换液。原代培养至细胞汇合达80%时采用有限稀释法分选PDLSCs，并进行常规传代培养。阻生智齿来源的细胞定义为健康PDLSCs（HPDLSCs），牙周炎牙来源的细胞定义为炎症PDLSCs（IPDLSCs）。取3 5代细胞进行后续实验。
1．2．2瞬时转染将IPDLSCs细胞按1?105/孔密度接种于12孔板，细胞汇合至80%后，按lipo-fectamine2000转染试剂的说明书转染。
1．2．3成骨分化诱导细胞转染48h后加入成骨诱导培养基进行诱导。诱导培养基中含有10%胎牛血清的α-MEM中包括地塞米松，50μg/ml维生素C和10mmol/Lβ-磷酸甘油。
1．2．4qＲT-PCＲ转染24h后收样，采用Trizol一步法提取总ＲNA，酶标仪测定样本ＲNA的纯度和浓度。采用PrimeScript TMＲT-PCＲKit（PerfectＲeal-Time）（Takara公司）试剂盒，逆转录合成cDNA后以其为模板，U6为内参Ｒeal-Time PCＲ定量分析miＲ-20a表达水平以检测转染效率。转染并成骨诱导的样本7d收样，以GAPDH为内参检测OCN，BMP2，ALP，ＲUNX2基因mＲNA表达水平，方法同上。
1．2．5Western blot成骨诱导14d后收样，PBS洗2遍，ＲIPA裂解液裂解细胞后超声震荡3次（每次5 10s），12000r/min，离心15min，取上清并测定蛋白浓度。按所测蛋白浓度计算样品和NaCl、5?loading buffer体积后，将其混合并置于95?水浴锅中水浴5 min。配制聚丙烯酰胺凝胶，80V恒压下蛋白电泳至分离胶与浓缩胶界面时换为120V电压，然后200 mA，2h恒流下将蛋白转至PVDF膜。封闭2h后，以ＲUNX2，β-actin抗体4?孵育过夜。TBST洗膜3次，每次10min。二抗孵育2h，TBST洗膜3次，每次10min。化学发光剂显色后，蛋白凝胶成像系统分析样品中目标蛋白的相对含量。
1．2．6茜素红染色转染并诱导细胞，连续培养28d 后，去掉培养液，PBS洗2次。60%异丙醇固定2 3 min，再水化2min，茜素红染色1min，去掉茜素红染液，ddH2O洗3次，观察矿化结节形成情况。
1．3统计学分析
采用SPSS13．0统计软件对数据（珋x?s）进行单因素方差分析，用Dunnet t检验，检验水准α=0．05。
2结果
2．1酶消化法原代培养的PDLSC
接种第3天组织块周围有细胞爬出，10d左右细胞生长融合至70% 80%。培养至第2 3代时可得到纯化的PDLSC，有限稀释法筛选出来的细胞克隆呈圆形、多角形、梭形等多种形态，但都表现为胞核聚集在中心，胞质形成的突起向外呈放射状（图1）
。
A：健康PDLSCs；B：炎症牙PDLSCs
图1培养中的PDLSCs（倒置显微镜，?40）
A：HPDLSCs；B：IPDLSCs
Fig1Cultured PDLSCs（Inverted microscope，?40）
2．2炎症牙周膜干细胞中miＲ-20a的表达
qＲT-PCＲ检测到炎症牙周膜干细胞中miＲ-20a 的表达较健康细胞降低约一倍左右（0．417?0．098）（图2）。
2．3转染效率检测
炎症牙周膜干细胞中转染mimics后，miＲ-20a表达上升约300倍（310．067?15．406，P＜0．05）（图3），转染inhibitor后，miＲ-20a下降约6倍（0．165?0．016，P＜0．05）（图4），结果显示，转染有效。
2．4转染后细胞成骨分化能力的改变
PCＲ结果显示，加入mimics后，OCN，ＲUNX2表达上升，差异有统计学意义（P＜0．05），但ALP，BMP表达上升不明显（图5A）。加入inhibitor后，ALP，BMP，OCN，ＲUNX2表达均有所下降（P＜0．05）（图5B）。从WB结果来看，加入mimics后，ＲUNX2表达升高，差异
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有统计学意义（P ＜0．05），加入inhibitor 后，
ＲUNX2表达明显下降（P ＜0．05）（图5C ）。茜素红染色后发现，转染mimics 后，实验组较对照组染色加深；而转染in-hibitor 后，实验组较对照组染色变浅（图5D ）
。
图2miＲ-20a 在PDLSCs 中的表达图3转染mimics 后miＲ-20a 的表达图4转染inhibitor 后miＲ-20a 的表达Fig 2
miＲ-20a expression in PDLSCs
Fig 3
miＲ-20a expression after transfection Fig 4
miＲ-20a expression after transfection of miＲ-20a mimics
of miＲ-20a
inhibitor
A 、
B ：qＲT-PCＲ检测成骨相关基因的表达；
C ：WB 检测ＲUNX2的表达；
D ：茜素红染色检测矿化结节的形成
图5
转染并成骨诱导后，成骨相关基因的表达
A ，
B ：The osteogenesis gene expression detected by qＲT-PCＲ；
C ：ＲUNX2expression detected by Western Blot ；
D ：The mineral nodes test-
ed by Alizarin red staining
Fig 5
The osteogenesis gene expression after transient transfection of miＲ-20a mimics and osteogenic induction
3讨论
牙周炎是一种因细菌侵犯牙周组织而引起的慢性炎症，是一种破坏性疾病，其主要特征为牙周袋的形成
及袋壁的炎症，牙槽骨吸收和牙齿逐渐松动，是导致成年人牙齿丧失的主要原因。近年来干细胞治疗在肿瘤等领域已被大量研究，并且取得了一定进展。干细胞
治疗同时也为牙周炎的治疗带来了新思路，目前已有研究着手于利用牙周膜干细胞治疗牙周炎。牙周膜干细胞是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，对牙周膜干细胞体外诱导培养发现，其具有成骨分化潜能，并
可形成骨结节
［1，6－7］
。牙周膜干细胞治疗牙周炎具有广阔前景，它可以：1）促进牙周缺损的修复；2）用于牙种植体－骨组织界面，使其成为牙周结缔组织附着
的结合形式；3）与牙髓干细胞相联合构建组织工程活性牙根甚至完整的牙齿结构［8］。而如何利用牙周膜干细胞修复牙槽骨缺损也是干细胞治疗牙周炎研究中一项重要课题。microＲNA是一类真核生物内源性的小分子单链ＲNA，在维持干细胞的自我更新和调控分化方向等方面具有重要影响［9－10］。有研究表明：在健康牙周膜中miＲ-17 92家族中miＲ-17通过靶向作用于TCF3基因，从而抑制牙周膜干细胞成骨分化，在炎症牙周膜干细胞中miＲ-17发挥促进炎症牙周膜干细胞成骨分化的作用，但是其表达量却相对减少［11］。
本研究中证明，炎症牙周膜组织来源的牙周膜干细胞中，miＲ-20a表达较健康牙周膜干细胞亦降低。而牙周炎中miＲ-20a下调的机制尚不明确，需要进一步研究。已有研究证明炎症牙周膜干细胞成骨分化能力降低［12］。本实验发现上调miＲ-20a后，炎症牙周膜细胞成骨能力升高，降低miＲ-20a表达后，成骨能力有所恢复。这与miＲ-17在炎症牙周膜细胞的作用相一致。又有文献报道，在间充质干细胞中，miＲ-17 92家族，尤其是miＲ-20a，能调控人MSCs的成骨分化，过表达miＲNA能促进成骨基因ＲUNX2和BMPs的表达，上调BMP信号通路，从而促进间充质干细胞向成骨方向分化，这项研究对于骨质疏松的治疗具有一定意义［2］。miＲ-20a在炎症牙周膜细胞和间充质干细胞中均可以促进成骨分化。因此，我们可以提出假设，是否可以通过miＲ-20a来提高这2种干细胞治疗牙周炎牙槽骨缺损或者骨质疏松的疗效。
目前已有多种miＲNA分子被研究以应用于肿瘤的诊断、治疗或者预后评估。比如，有文献报道，胰腺癌早期筛查中CA19-9联合miＲNA（血浆中miＲNA-16和miＲNA-196a）比单独检测CA19-9的灵敏度及特异性更高［13］。Esquela等［14］将let-7导入非小细胞肺癌小鼠体内可有效抑制肺癌细胞的生长，剔除let-7则会促进肺癌的发生。Seike等［15］发现miＲNA-21反义抑制剂能够增强AG1478诱导非吸烟腺癌细胞系H3255的凋亡，而且其本身对非吸烟腺癌细胞系H441也有诱导凋亡的作用。但是miＲNA由于其亲水特性以及其容易降解，因此其应用于临床尚存在一些问题。有文献报道，使用新型的纳米材料作为miＲ-7的载体，可以有效地减少携带有人的胶质瘤的小鼠体内肿瘤的血管生长和肿瘤的增殖［16］。目前，已有学者在研发新型的将miＲNA注入体内的载体材料。miＲNA治疗牙周炎具有广阔前景，利用miＲNA提高牙周膜细胞的成骨能力，可以与干细胞联合应用于牙周炎治疗的临床研究。
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万方数据
甄蕾，等．人牙周膜干细胞的初步鉴定及体外成骨诱导 ＺＨＥＮＬｅｉ．ｅｔａＬＨｕ眦ｎＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＬｉｇａｍｅｎｔＳｔｅｍＣｅｌｌｓＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏＯｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ／ｎｖ／ｔｒｏ?３１９? ＲＮＡ提取试剂盒、一步法ＲＴ．ＰＣＲ试剂盒（Ｔｉａｎｇｅｎ公司。北京）。 １．２方法 １．２．１牙周膜细胞原代培养收集临床１２一１８岁因正畸需要而拔除的牙周健康、无龋的新鲜前磨牙，ＰＢＳ洗３次，刮取根中ｌ，３牙周膜组织，采用酶解组织块法培养，每隔３ｄ换液．直至细胞从组织块周围游出。细胞生长达８０％汇合时传代。 １．２．２有限稀释法克隆化培养纯化ＰＤＬＳＣｓ取对数生长期的第１代细胞。以１～２个／孔的密度接种于９６孔板，常规培养７。１４ｄ，至出现细胞克隆（细胞数≥５０为判定标准）后扩大培养。 １．２．３ＰＤＬＳＣｓ的初步鉴定分别取第２代克隆形成细胞进行爬片。采用ＳＰ法检测波形蛋白和角蛋白的表达。同时利用兀ＴＣ荧光标记二抗检测ＳＴＲＯ．．１和ＣＤｌ４６的表达。 １．２．４体外诱导分化取第２代对数生长期的克隆形成细胞。按５ｘｌｌＹ个／ｍＬ接种于２４孔板中，待细胞进入对数生长期后弃去原培养液。ＰＢＳ洗３遍，换诱导液（１０ｍｍｏｌ／ＬＢ．甘油磷酸钠、１０｛ｍｏｌ／Ｌ地塞米松、５０Ｉ．Ｌｇ／ｍＬ维生素Ｃ）培养２１ｄ。对照组细胞常规培养。 １．２．５成骨性能的鉴定 １．２．５．１茜素红Ｓ染色观察钙结节形成人ＰＤＬＳＣｓ诱导培养２１ｄ后弃去培养液，４％多聚甲醛固定３０ｍｉｎ后饱和茜素红Ｓ溶液染色１０ｍｉｎ，观察钙结节形成情况。 １．２．５．２定性的细胞ＡＬＰ活性检测人ＰＤＬＳＣｓ诱导培养２１ｄ后弃去培养液。按ＡＬＰ检测试剂盒说明书规范操作。光学显微镜下观察染色情况。 １－２．５．３免疫细胞化学检测ＢＳＰ、Ｉ型胶原表达人ＰＤＬＳＣｓ诱导培养２１ｄ后常规ＳＰ法检测ＢＳＰ、Ｉ型胶原蛋白表达情况。 １．２．５．４ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＬＰ、ＢＳＰｍＲＮＡ表达收集诱导培养２１ｄ后的人ＰＤＬＳＣｓ．。使用细胞总ＲＮＡ提取试剂盒提取培养细胞总ＲＮＡ。采用一步法进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，以Ｂ．ａｃｔｉｎ为内参照。参照ＧｅｎＢａｎｋ数据库，采用Ｏｌｉｇｏ计算机软件设计引物，Ｂ．．ａｃｔｉｎ上游引物５＇－ｇｃｇａｇａａｇａｔｇａｃｃｃａｇａｔｃａｔｇｔｔ一３’。下游引物５’一ｇｃｔｔｃｔｃｃｔｔａａｔｇｔｃａｃｇｃａｃｇａｔ－３’：ＡＬＰ上游引物５＇－ａｔｅｔｔｔｇ．－ｇｔｃｔｇｇｃｃｃｃｃａｔｇ－一３。下游引物５＇－ａｔｇｃａｇｇｃｔｇｃａａｔａｃｇｃｃａｔ一３７；ＢＳＰ上游引物５＇－ａｔｇｇｃｃｔｇｔｇｃｔｔｔｃｔａａｔ－３’。下游引物５＇－ｔｔｃｃｔｅｃｔｅｃｔｃｔｔｃｔｇａａｃｔｇ．－３’：由上海生工生物技术公司合成。反应条件：５０。Ｃ３０ｍｉｎ逆转录，９４。Ｃ５ｍｉｎ逆转录失活，然后９４。Ｃ３０ｓ，５８。Ｃ３０ｓ，７２。Ｃ３０ｓ，３５个循环，７２。Ｃ延伸７ｍｉｎ。ｌ％琼脂糖凝胶电泳检测，鉴定ＰＣＲ产物片断大小。 ２结果 ２．１ＰＤＬＳＣｓ的分离及纯化 本实验采用酶解组织块法培养原代细胞。３～１０ｄ组织块周围有细胞爬出。２周左右可达８０％汇合。有限稀释法筛选出来的细胞克隆呈圆形、多角形等多种形态，但都表现为胞核聚集在中心，胞质形成的突起向外呈放射状．具有成体干细胞的特征。２．２ＰＤＬｓＣｓ的鉴定 免疫细胞化学检查发现．ＰＤＬＳＣｓ广谱角蛋白阴性表达，波形蛋白阳性表达（图１），说明本实验克隆形成细胞为中胚层来源的间充质细胞．且无外胚层来源的细胞污染。免疫荧光检测可见克隆细胞ＳＴＲＯ．１、ＣＤｌ４６均呈阳性表达，细胞发出明亮的绿色荧光（图２、３），提示其具有干细胞特性。 田１第２代ＰＤＬｓＣｓ波形蛋白染色阳性（免疫组化。ｘ１００ｌ Ｆｉｇｍｕｍ１Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖｉｍｅｎｌｉｎｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ０ｆＰＤＬＳＣｓ（ｉｍｍｕｎｏｈｉａｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ｘ１００） 圈２第２代ＰＤＬＳＧｓＳＴＲＯ．１染色阳性（免疫荧光，ｘ１００） Ｆｉｇｍ陀２ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＴＲＯ?１ｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆ ＰＤＬＳＣｓ（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ｘ１００） 万方数据
破骨细胞 (osteoclast，亦称bone-resorbing cells)是骨组织成分的一种，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨细胞与成骨细胞（osteoblast，亦称bone-forming cells）在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase）和组织蛋白酶K（cathepsin K）是破骨细胞主要标志。 破骨细胞由多核巨细胞(multinuclear giant cell, MNGC)组成，直径100μm，含有2～50个紧密堆积的核，主要分布在骨质表面、骨内血管通道周围。由多个单核细胞融合而成的，胞浆嗜碱性但随着细胞的老化，渐变为嗜酸性。 作用 破骨细胞具有特殊的吸收功能，某些局部炎症病灶吸收中，巨噬细胞也参与骨吸收过程。 在破骨细胞吸收骨基质的有机物和矿质的过程中，造成基质表面不规则，形成近似细胞形状的陷窝，称为Howship 陷窝。在陷窝内对着骨质的
一面，细胞伸出许多毛样突起，很象上皮细胞表面的纵纹缘和刷毛缘。电镜下，贴近骨质的一侧有许多不规则的微绒毛，即细胞突起，称为皱褶缘(ruffled border)。在皱褶缘区的周缘有一环形的胞质区，含多量微丝，但缺乏其它细胞器，称为亮区(clear zone)，此处的细胞膜平整并紧贴在骨质的表面。亮区犹如一道以胞质构成的围墙，将所包围的区域形成一个微环境。破骨细胞向局部释放乳酸及柠檬酸等，在酸性条件下，骨内无机矿物质自皱褶缘吞饮，于皱褶缘基质内形成一些吞饮泡或吞噬泡。于破骨细胞内，无机质被降解，以钙离子的形式排入血流中。无机质的丢失使骨基质内的胶原纤维裸露，破骨细胞分泌多种溶酶体酶，特别是组织蛋白酶K和胶原溶解组织蛋白酶。破骨细胞离开骨表面后，其皱褶缘消失，细胞内发生变化，进入静止期。 成骨细胞 成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌
《药剂学》第01章在线测试 恭喜，交卷操作成功完成！你本次进行的《药剂学》第01章在线测试的得分为20分（满 分20分），本次成绩已入库。若对成绩不满意，可重新再测，取最高分。 测试结果如下： ? 1.1 [单选] [对] 现行中华人民共和国药典颁布使用的版本为 C ? 1.2 [单选] [对] 药剂学概念正确的表述是 D ? 1.3 [单选] [对] 现行中华人民共和国药典三部收载的是 D ? 1.4 [单选] [对] 药品生产质量管理规范的简称是 A ? 1.5 [单选] [对] 应用于临床的药物制剂 D ? 2.1 [多选] [对] 下列关于制剂的正确表述是 BDE ? 2.2 [多选] [对] 药典是 ABC ? 2.3 [多选] [对] 我国现行药典二部收载 ABCDE ? 2.4 [多选] [对] 按分散系统分类，可将药物剂型分为 ABC ? 2.5 [多选] [对] 在我国具法律效力的是 AE ? 3.1 [判断] [对] 药物剂型的分类按分散系统分类与临床使用密切结合 X ? 3.2 [判断] [对] 部颁标准上收载的药品处方是协定处方 X ? 3.3 [判断] [对] 由医院药剂科与医师协商制定的适于本单位的处方为协定处方 V ? 3.4 [判断] [对] 美国药典的缩写E.P X ? 3.5 [判断] [对] 英国药典的缩写B.P V 《药剂学》第02章在线测试 恭喜，交卷操作成功完成！你本次进行的《药剂学》第02章在线测试的得分为20分（满 分20分），本次成绩已入库。若对成绩不满意，可重新再测，取最高分。 测试结果如下： ? 1.1 [单选] [对] 溶解度的正确表述是 B ? 1.2 [单选] [对] 茶碱在乙二胺存在下溶解度由1:120增大至1:5，乙二胺的作用是 A ? 1.3 [单选] [对] 不宜制成混悬剂的药物是 A ? 1.4 [单选] [对] 向用油酸钠为乳化剂制备的O/W乳剂中，加入大量氯化钙后，乳剂可出现 C ? 1.5 [单选] [对] 半极性溶剂是 B ? 2.1 [多选] [对] 下列哪种物质能作混悬剂的助悬剂作用 ABDE ? 2.2 [多选] [对] 与乳剂形成条件有关的是 ABCD ? 2.3 [多选] [对] 关于芳香水剂的错误表述是 BC ? 2.4 [多选] [对] 疏水胶体的性质是ACE ? 2.5 [多选] [对] 影响药物溶解度的因素有 ABCE ?[多选] [对] 能形成O/W型乳剂的乳化剂是ABDE ?[多选] [对]不能用于液体药剂防腐剂的是ABDE ?[多选] [对]乳剂的变化可逆的是DE ?[多选] [对]液体制剂的特点叙述正确的是BCD
rhIGF1对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节作用
天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 在成骨细胞(ostelblast，OB)及破骨细胞(Osteoclast,OC)的表面均表达有 胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1,IGF—I)的受体，IGF．I对这两种细胞也都具有激活作用。IGF．1在调节骨代谢平衡中具有重要作用，被认为是存在于RANKL／OPG系统之上，调节成骨细胞与破骨细胞相互作用的核心分子。为此，本文拟探讨不同浓度的rhlGF．I对成骨细胞和破骨细胞的直接作用，及对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节。 方法 1．利用50ng／ml的RANKL诱导小鼠破骨前体细胞系分化为成熟破骨细胞。TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶染色)鉴定。 2．以50ng／ml rhlGF．1分别干预成细胞以及分化成熟的破骨细胞，干预时间分 别为：6min、20min、60mira Western．blotting检测rhlGF．1 R活化情况。 3．分别加入0、2、4、6ug／ml的兔抗。rhlGF-I IgG中和培养基中的rhlGF-I，利用Western-blotting进行抗体中和浓度的筛选。 4．重新接种成骨细胞和破骨细胞，用O、10、50、lOOnedlIll的rhlGF。1分别干预成骨细胞、破骨细胞，12小时后终止培养并收集培基，之后实验分为三组：A组：rhIGF．1直接干预组。B组：条件培养基交互培养组：破骨细胞经rhIGF．1 干预后的条件培养基(OC conditioned medium after rhlGF．1 treatment，OCCM)；成骨细胞经rhlGF．1干预后的条件培养基(OB conditioned medium after rMGF．1 treatment，OBCM)。滤过OCCM、OBCM后两细胞培基互换交互培养12h。C组：rhlGF-l中和后交互培养组：OCCM、OBCM中加入4ug／ml的抗rhlGF．I IgG，中和后再用于交互培养12h。 (1)ELISA检测各组OB上清液中RANKL、OPG及BGP含量。(2)实时荧光 定量PCR检测各组OB中Bgp，Opg，RanM及OC中Ck，Mmp一9、 Rank mRNA的表达水平。 结果 1．50ng／ml的RANKL诱导培养8天后，RAW264．7出现TRAP阳性多核细胞。 2．50ng／ml rMGF．1分别干预成骨细胞、破骨细胞6、20、60rain后，Western．blotting检测随着rhlGF—l干预时间的延长磷酸化rhlGF．1R的量逐渐增 II
《口腔生物学》教学大纲 （供口腔医学专业本科使用） 前言 口腔生物学是口腔医学中的一门基础课程，它是医学基础课与口腔专业课之间的桥梁，从基础理论上解释疾病的发生、发展和预后。口腔生物学内容广泛，包括口腔微生物学，口腔生物化学，口腔疾病分子生物学，口腔免疫学，牙周骨组织生物学，口腔细胞培养及其应用。这些内容是口腔医学专业本科生必须掌握的知识，为他们将来从事医疗，教学和研究打下基本的功底。通过学习口腔微生物，树立口腔生态系的观念，有助于对口腔中最常见的疾病——龋病和牙周病本质的理解；通过学习口腔生物化学，了解其生物矿化过程与龋病的关系；了解龋病和牙周病发生的机制；了解作为牙齿的外环境和口腔内主要的营养调节体液——唾液对维持机体生理平衡、抵御疾病的重要作用；通过学习分子遗传学的基本知识，结合口腔疾病，了解分子生物学研究的基本操作技术，能进行初步的研究设计；通过口腔免疫学的学习，了解口腔常见病与免疫和诊断技术，能将理论知识用于临床疾病的诊治上；通过学习牙周骨组织生物学，熟悉牙硬组织、牙周组织、牙槽骨的生理特点，对临床治疗的设计和研究大有裨益；通过学习细胞培养，为今后从事细胞生物学、组织工程学研究奠定基础。 本大纲适用于我院五年制本科口腔医学专业学生学习和教师教学。主要由前言、学时分配、各章节的主要内容和要求（包括目的要求、教学难点、教学内容、复习思考题）、参考书籍和常用网址等四个部分组成。该课程为1学分，计划理论学时为26学时。理论教学采用多媒体辅助的讲授方式为主，开展问题式教学，构建科学合理的知识网络，采用对比记忆法、相互联系记忆法使学生分析归纳问题的能力、理解想象问题的能力和创新思维能力等科学文化素质得到提高和发展。 考试方式及成绩构成：理论考试为闭卷，题型主要有名词解释、填空、选择、判断、简答、论述，占总成绩的100%。
膜剂与涂膜剂 (总分：50.00，做题时间：90分钟) 一、A型题(总题数：34，分数：34.00) 1.合成的高分子成膜材料是 ?A．明胶、虫胶、阿拉伯胶 ?B．聚乙烯醇、阿拉伯胶 ?C．羧甲基纤维素、阿拉伯胶 ?D．聚乙烯醇、羟丙甲纤维素、乙烯-醋酸乙烯共聚物 ?E．淀粉、聚乙烯醇、琼脂 （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 2.膜材PVA05-88中，88表示 ?A．聚合度 ?B．醇解度 ?C．水解度 ?D．酸解度 ?E．粘度 （分数：1.00） A. B. √ C. D. E. 解析： 3.膜材EVA中，醋酸乙烯的比例越大，材料的溶解性及柔软性 ?A．越大 ?B．越小 ?C．不变 ?D．不确定 ?E．以上答案都不正确
（分数：1.00） A. √ B. C. D. E. 解析： 4.下列对膜剂的叙述中哪一条是错误的 ?A．膜剂配伍变化少、分析干扰少 ?B．吸收起效快 ?C．可控速释药 ?D．能保持药物清洁和无菌状态 ?E．药物含量准确 （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 5.PVA在其醇解度为多少时，水溶性最好 ?A．68％ ?B．78％ ?C．88％ ?D．98％ ?E．100％ （分数：1.00） A. B. C. √ D. E. 解析： 6.对膜剂成膜材料的要求，不正确的是 ?A．生理惰性
?B．性能稳定 ?C．眼用的、腔道用的膜材要有好的脂溶性?D．成膜、脱膜性能好 ?E．来源丰富，价格便宜 （分数：1.00） A. B. C. √ D. E. 解析： 7.膜剂的物理状态为 ?A．膜状固体 ?B．胶状溶液 ?C．混悬溶液 ?D．乳浊液 ?E．以上答案都不正确 （分数：1.00） A. √ B. C. D. E. 解析： 8.PVA05-88中，88代表的醇解度为 ?A．98％ ?B．44％ ?C．88％ ?D．88±2% ?E．95% （分数：1.00） A. B. C. D. √
牙周膜干细胞的研究 作者：常秀梅， 刘宏伟， 金岩 作者单位：常秀梅(广东医学院附属医院口腔科,广东,湛江,524001)， 刘宏伟(同济大学口腔医学院)， 金岩(第四军医大学口腔医学院病理科) 刊名： 临床口腔医学杂志 英文刊名：JOURNAL OF CLINICAL STOMATOLOGY 年，卷(期)：2009,25(7) 被引用次数：3次 参考文献(19条) 1.Surani MA Reprogramming of genome function through epigenefic inheritance[外文期刊] 2001(6859) 2.McCulloch CA Origins and functions of cells essential for periodontal repair:the role of flbroblasts in tissue homeostasis 1995(04) 3.McCulloch CA;Barghava U;Melcher AH Cell death and the regulation of populations of cells in the periodontal ligament[外文期刊] 1989(01) 4.Arceo N;Sauk JJ;Moehring J Human periodontal cells initiate mineral-like nodules in vitro 1991(08) 5.Nohutcu RM;McCauley LK;Koh A J Expression of extracellular matrix proteins in human periodontal ligament cells during mineralization in vitro 1997(04) 6.Chou AM;Sae-Lim V;Lim TM Culturing and characterization of human periodontal ligament fibroblasts- a preliminary study 2002 7.Seo BM;Minra M;gronthos Investigation of muhipotent postnatal stem cells from periodontal ligament 2004(9429) 8.Handa K;Saito M;Y amauchi M Cementum matrix formation in vivo by cultured dental follicle cells[外文期刊] 2002(05) 9.Handa K;Saito M;Tsunods A Progenitor cells from dental follicle are able to form cementum matrix in vivo[外文期刊] 2002(2-3) 10.Gould TR;Melcher AH;Brunette DM Location of progenitor cells in periodontal ligament stimulated by wounding 1977(02) 11.McCulloch CA;Nemeth E;Lowanberg B Paravascular cell in endosteal spaces of alvelar bone contribute to periodontal ligament cell populations 1987(03) 12.Kramer PR;Nares S;Kramer SF Mesenchymal stem cells acquire characteristic of cells in the periodontal ligament in vitro[外文期刊] 2004(01) 13.刘宏伟;欧龙;庞劲凡自体骨髓基质细胞用于牙周骨缺损移植的动物实验研究[期刊论文]-牙体牙髓牙周病学杂志 2000(03) 14.Groeneveld MC;Everts V;Beertsen W A quantitative enzyme histochemical analysis of the distributtan of alRaline phosphatnse acclivity in the periodontal ligament of the rat incisor 1993(09) 15.Tsuboi Y;Nakanishi T;Takano-Yamamto T Mitogenic effects of neutrophins on a periodontal ligament cell line[外文期刊] 2001(03) 16.Byers MR;Maedu T;Brown AM GFAP immunorcecfivity and transcription in trigeminal and dental
口腔生物学课程教学大纲 课程简介 一、课程简介 口腔生物学为2001年始新开设的一门口腔基础学科，它是衔接前期医学基础课(生理、生化、微生物、免疫、分子生物学等)与口腔临床学科(口内、口外、口修和正畸等)的一门重要的桥梁学科，包括“口腔微生物”、“口腔免疫学”、“口腔生物化学”、“口腔疾病分子生物学”、“牙周骨组织生物学”和“口腔细胞培养及其应用”六大部分内容，从不同角度阐明口腔疾病的发生、进展和预防。理论大课28学时，考试2学时，要求学生把握口腔生物学的差不多理论、差不多知识和差不多技术，为今后从事口腔医疗、教学和科研打下扎实的基础。 二、总体要求 通过本学科学习，要求学生： 1.把握口腔生态系的阻碍因素，牙菌斑的形成、分类及要紧物质代谢、矿物质转换。 2.把握要紧致龋菌、牙周致病菌的生物学特性、致病机制以及宿主免疫反应在牙周炎发病中的重要作用。 3.把握釉质、牙本质、牙骨质的化学组成。 4.氟在生物矿化中的作用。 5.把握分子生物学研究的要紧方法及在口腔致病菌研究中的应用。 6.把握骨改建的生物学基础 7.把握细胞培养的差不多原理与技术。 8.把握细菌培养、细菌鉴定、毒力检测方法 三、学时分配 四、考核要求 按照把握、熟悉、了解三个层次进行考核。理论考核题型为：名词讲明、填空题、选择题和咨询答题。
学习目的要求 一、把握口腔生态系定义及阻碍因素、牙菌斑的形成及分类、口腔正常菌丛的概念及其成员。 二、熟悉细菌粘附的学讲、正常菌丛的双重作用。 三、了解口腔生物学的内容及意义。 课程内容 一、口腔生物学简介 1.口腔生物学的定义 2.口腔生物学的进展 3.口腔生物学的六个组成部分 二、口腔微生物学概论 1.口腔生态系及其阻碍因素：生态系、生态学、口腔生态系的概念，口腔生态系的阻碍因素 2.口腔正常菌丛：来源和类型 3.牙菌斑：形成、分类、成份 考核知识点 一、口腔生物学的定义、进展 二、口腔生态系的概念及其阻碍因素 三、口腔正常菌丛的概念及来源 四、牙菌斑的形成和分类 考核要求 一、把握口腔生态系定义及阻碍因素、牙菌斑的形成及分类、口腔正常菌丛的概念及其成员。 二、熟悉细菌粘附的学讲、正常菌丛的双重作用。 三、了解口腔生物学的内容及意义。 复习摸索题 一、口腔生态系及其阻碍因素。 二、何谓牙菌斑？ 三、口腔正常菌丛的概念及其双重作用。 第二章牙体微生物及其免疫 学习目的要求 一、把握要紧致龋菌的生物学特性和致病机制 二、熟悉免疫防龋的概念 三、了解防龋疫苗的研究、根尖周病的发病机制 课程内容 一、正常口腔菌丛成员 1.链球菌属 变形链球菌群
中国组织工程研究与临床康复第14卷第23期 2010–06–04出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research June 4, 2010 Vol.14, No.23 Department of Oral Medicine, Stomatological Hospital Affiliated to Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China Jiang Jun-qiang★, Master, Lecturer, Department of Oral Medicine, Stomatological Hospital Affiliated to Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China jqjiang@https://www.doczj.com/doc/c14679300.html, Correspondence to: Cai Wei, Lecturer, Department of Oral Medicine, Stomatological Hospital Affiliated to Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan Province, China caiwei311@https://www.doczj.com/doc/c14679300.html, Supported by: the Scientific Research Foundation of Health Department of Sichuan Province, No. [2007]431* Received: 2010-01-19 Accepted: 2010-05-10 三种方法原代培养人牙周膜细胞*★ 蒋俊强，王忠朝，黎春晖，蔡炜 Primary culture of human periodontal ligament cells using three methods Jiang Jun-qiang, Wang Zhong-chao, Li Chun-hui, Cai Wei Abstract Jiang JQ, Wang ZC, Li CH, Cai W.Primary culture of human periodontal ligament cells using three methods. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2010;14(23): 4290-4294. [https://www.doczj.com/doc/c14679300.html, https://www.doczj.com/doc/c14679300.html,] 摘要 蒋俊强，王忠朝，黎春晖，蔡炜.三种方法原代培养人牙周膜细胞[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(23):4290-4294. [https://www.doczj.com/doc/c14679300.html, https://www.doczj.com/doc/c14679300.html,] 0 引言 细胞培养技术是细胞生物学研究的基础[1]。从组织中分离的原代细胞较好地保存了原组织细胞的遗传特征和生物学特征[2]。体外培养的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cell，hPDLC)对研究牙周细胞生物学、药理学、毒理学以及牙周组织工程研究具有重要意义[3-7]。牙周膜是一种致密的结缔组织，由细胞、基质和大量的胶原纤维组成。由于受到牙周组织的解剖结构和取材数量的限制，牙周膜细胞的原代培养较为困难，这也成了限制牙周细胞生物学研究的瓶颈[8-10]。大量的研究者对其培养方法进行了探索，目前常用的方法主要有两种：组织块法和酶消化法[11-15]。作者在实验过程中发现这两种方法存在培养周期较长，成功率较低、培养出的细胞活性欠佳等缺陷。若将两种方法结合起来，采用酶消化结合组织块法能够有效提高hPDLC培养的成功率。本实验分别采用这3种方法进行hPDLC的原代培养，比较其培养成功率，同时对所培养细胞进行鉴定，探索hPDLC原代培养的方法，为牙周细胞生物学研究奠定基础。
我的细胞培养计划 1、培养目的： 人牙周膜成纤维细胞( human periodontal ligamentfibroblasts, PDLFs) 是牙周组织修复与重建的前体细胞之一., 在牙周病病理变化和转归中起着重要作用。因此, 希望通过较简单的实验方法能较容易地培养出生长状态良好的牙周膜成纤维细胞,为研究牙周膜的生物学特点及各种与牙周膜成纤维细胞相关的实验研究提供较好的体外模型。 2、实验室条件： 超净工作台、培养箱、倒置显微镜、冰箱、冷冻保存装置、细胞计数板和电子细胞计数仪、离心机、PH计、天平、水纯化装置、高压蒸汽消毒装置、电热干燥箱、过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器、特殊用具、杂用品。DMEM 培养基, 胶原酶, 胰蛋白酶, 小牛血清, ABC 免疫组化试剂盒。 3、培养方法： 1）、培养基: DMEM 培养基, 内含10%小牛血清、青霉素100u/ ml、链霉素100Lg / ml。 2）具体操作方法及步骤（按实际操作分步列出）； 选择12 岁~ 25 岁因正畸或阻生拔牙患者, X 线显示无根尖病变, 无骨质吸收, 牙龈正常, 主诉该牙无既往病史。在拔牙过程中不增隙也不使用牙挺, 拔除后, 用消毒刮匙刮取拔牙创骨壁中部的牙周膜, 将刮取的牙周膜立即放入盛有培养基的无菌瓶中, 送往实验室处理。
3）、组织块的冲洗: 在洁净工作台上用含双抗( 青霉素100u/ ml, 链霉素100Lg / ml ) 的HANK. S 液反复冲洗3 次, 尽量去除组织块上附着的血污等其它杂质和细菌。 4）、PBS 冲洗2次后, 加入0. 125% 胰蛋白酶及0. 1%胶原酶5ml, 37℃振荡下消化30～60min。镜下观察, 组织松散、大部分细胞游离时, 用吸管吹打使其彻底分散。将消化的细胞悬液经190目筛过滤, 收集并离心( 1000 r / min, 10 min) , 弃去上清液。 5）、加入含10%小牛血清的DMEM 培养基, 充分吹打细胞悬液, 血细胞计数板计数,将细胞按4 ×105 / 瓶接种于25cm2 培养瓶, 加入4 mlDMEM 培养基, 内含10%小牛血清、青霉素100u/ ml、链霉素 100Lg / ml, 于二氧化碳孵箱内培养。培养条件为5%CO2、95% 空气、37℃、饱和湿度。待细胞贴壁后, 隔日换液。 4、注意事项： 1）、在收集标本, 供体年龄越小越易取得成功, 标本要新鲜并及时处理。在刮除牙龈1/ 3牙周组织以避免污染的情况下, 要彻底刮下中2/ 3剩余牙周组织, 以防止牙周膜细胞成分的丢失。 2）、在消化时间上,应根据组织块的大小采用不同的消化时间。本实验采用0. 1%胶原酶和0. 125% 胰蛋白酶联合消化约50min左右, 显微镜下密切观察组织消化情况, 及时收集细胞, 消化时间过长, 将会影响细胞贴壁及成活率。 3）、在细胞贴壁方面, 通常原代细胞贴壁速度较慢, 可通过:a. 培养瓶胶原涂膜; b. 在培养瓶内盛有少量培养基并预先1、2天放置二
破骨细胞 编辑 破骨细胞(osteoclast，亦称bone-resorbing cells)是骨细胞的一种，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨细胞与成骨细胞（osteoblast，亦称bone-forming cells）在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和组织蛋白酶K（cathepsin K)是破骨细胞主要标志。 目录 1定义 2形态 3作用 1定义 破骨细胞(osteoclast，亦称bone-resorbing cells)是骨细胞的一种，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨细胞与成骨细胞（osteoblast，亦称bone-forming cells）在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和组织蛋白酶K（cathepsin K)是破骨细胞主要标志。 2形态
破骨细胞由多核巨细胞(multinuclear giant cell, MNGC)组成，直径100μm，含有2～50个紧密堆积的核，主要分布在骨质表面、骨内血管通道周围。由多个单核细胞 融合而成的，胞浆嗜碱性但随着细胞的老化，渐变为嗜酸性。 3作用 破骨细胞具有特殊的吸收功能，某些局部炎症病灶吸收中，巨噬细胞也参与骨吸收过程。 在破骨细胞吸收骨基质的有机物和矿质的过程中，造成基质表面不规则，形成近似细胞形状的陷窝，称为Howship 陷窝。在陷窝内对着骨质的一面，细胞伸出许多 毛样突起，很象上皮细胞表面的纵纹缘和刷毛缘。电镜下，贴近骨质的一侧有许多不规则的微绒毛，即细胞突起，称为皱褶缘(ruffled border)。在皱褶缘区的周缘有 一环形的胞质区，含多量微丝，但缺乏其它细胞器，称为亮区(clear zone)，此处的 细胞膜平整并紧贴在骨质的表面。亮区犹如一道以胞质构成的围墙，将所包围的区域形成一个微环境。破骨细胞向局部释放乳酸及柠檬酸等，在酸性条件下，骨内无机矿物质自皱褶缘吞饮，于皱褶缘基质内形成一些吞饮泡或吞噬泡。于破骨细胞内，无机质被降解，以钙离子的形式排入血流中。无机质的丢失使骨基质内的胶原纤维裸露，破骨细胞分泌多种溶酶体酶，特别是组织蛋白酶B和胶原溶解组织蛋白酶。破骨细胞离开骨表面后，其皱褶缘消失，细胞内发生变化，进入静止期。
药剂学 交卷时间：2016-09-07 15:49:00 一、单选题 1. (2分)以下不属于影响滤过速度的因素是（） ? A. 操作压力 ? B. 粘度 ? C. 毛细管孔径 ? D. 毛细管长度 ? E. 重量 得分：0知识点：药剂学作业题 2. (2分)以下不属于胶囊质量检查项目的是（）。 ? A. 含量 ? B. 外观 ? C. 崩解时限 ? D. 装量差异 ? E. 溶化性 得分：0知识点：药剂学作业题 3. (2分)随着剪切应力增大，粘度下降，剪切应力消除后粘度在等温条件下缓慢地恢复到原来状态的现象，这种流动曲线称为（）。? A. 塑性流动 ? B. 胀性流动 ? C. 触变流动 ? D. 牛顿流体
? E. 假塑性流体 得分：0知识点：药剂学作业题 4. (2分)为了增加空胶囊的韧性和可塑性，一般需要加入（）。? A. 增稠剂 ? B. 防腐剂 ? C. 遮光剂 ? D. 增塑剂 ? E. 着色剂 得分：2知识点：药剂学作业题 5. (2分)眼膏剂常用的基质是（）。 ? A. 黄凡士林：羊毛脂=8：2 ? B. 黄凡士林：液体石蜡：羊毛脂=8：2：1 ? C. 白凡士林：液体石蜡=8：2 ? D. 白凡士林：液体石蜡：羊毛脂=8：2：1 ? E. 黄凡士林：液体石蜡：羊毛脂=8：1：1 得分：2知识点：药剂学作业题 6. (2分)下列气雾剂属于两相气雾剂的是（）。 ? A. 混悬型气雾剂 ? B. 粉末气雾剂 ? C. 泡沫气雾剂 ? D. 乳剂型气雾剂 ? E. 溶液型气雾剂
得分：2知识点：药剂学作业题 7. (2分)有关复方乙酰水杨酸片的不正确表述是( ) ? A. 加入1％的酒石酸可以有效地减少乙酰水杨酸的水解 ? B. 三种主药混合制粒及干燥时易产生低共熔现象，所以采用分别制粒法? C. 应采用尼龙筛制粒，以防乙酰水杨酸的分解 ? D. 应采用5％的淀粉浆作为黏合剂 ? E. 应采用滑石粉作为润滑剂 得分：0知识点：药剂学作业题 8. (2分)软胶囊剂的常用制备方法是（）。 ? A. 冷压法 ? B. 热熔法 ? C. 搓捏法 ? D. 滴制法 ? E. 乳化法 得分：2知识点：药剂学作业题 9. (2分)软膏的常用制备方法有( ) ? A. 研和法、熔合法、乳化法 ? B. 冷压法、熔合法、乳化法 ? C. 冷压法、热熔法 ? D. 乳化法、滴制法 ? E. 热熔法、滴制法 得分：0知识点：药剂学作业题 10.
成骨细胞骨形成机制研究 发布时间：2003-1-14 作者：童安莉陈璐璐、丁桂芝 骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至 被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨。破骨与成骨过程的平衡是维持 正常骨量的关键。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和 矿化。目前，随着研究的不断深入，在骨形成过程中，成骨细胞发展及其调控的分 子机制也逐渐得以揭示。 1 成骨细胞的起源 成骨细胞起源于多能的骨髓基质的间质细胞，除成骨细胞外，基质细胞还可分 化成软骨细胞，成纤维细胞，脂肪细胞或肌细胞。成骨细胞来源谱系有以下几种： (1)骨髓克隆形成单位(成纤维细胞集落形成单位，CFU-F)；(2)骨祖细胞，可分化 成前成骨细胞和前软骨细胞谱系，常位于骨髓腔中，有很强的自身增殖能力； (3) 前成骨细胞，即最近的成骨前体，能定向分化成成骨细胞，具有合成和增殖能力［ 1，2］。成骨细胞由多能的间质干细胞在体内的各种调控因素的调节下发展而来， 调控因素主要有BMP-2，BMP-2能诱导基质细胞向成骨细胞分化，具体就是诱导间质 干细胞分化形成骨祖细胞进而形成前成骨细胞［3］。 2 成骨细胞发展阶段及骨形成机制 成骨细胞在骨形成过程中要经历成骨细胞增殖，细胞外基质成熟、细胞外基质 矿化和成骨细胞凋亡四个阶段。很多因素可调节这几个阶段，从而最终调控骨形成 。 成骨细胞增殖期成骨细胞数量增加，以形成多层细胞，并合成、分泌Ⅰ型胶原 以便最终可以矿化形成骨结节。对成骨细胞增殖的调控具体说来即是对细胞周期的
一、A型题（最佳选择题) 1、下列关于气雾剂的概念叙述正确的是 A、系指药物与适宜抛射剂装于具有特制阀门系统的耐压容器中而制成的制剂 B、是借助于手动泵的压力将药液喷成雾状的制剂 C、系指微粉化药物与载体以胶囊、泡囊或高剂量储库形式，采用特制的干粉吸入装置，由患者主动吸入雾化药物的制剂 D、系指微粉化药物与载体以胶囊、泡囊储库形式装于具有特制阀门系统的耐压密封容器中而制成的制剂 E、系指药物与适宜抛射剂采用特制的干粉吸入装置，由患者主动吸入雾化药物的制剂 2、关于气雾剂正确的表述是 A、按气雾剂相组成可分为一相、二相和三相气雾剂 B、二相气雾剂一般为混悬系统或乳剂系统 C、按医疗用途可分为吸入气雾剂、皮肤和黏膜气雾剂及空间消毒用气雾剂 D、气雾剂系指将药物封装于具有特制阀门系统的耐压密封容器中制成的制剂 E、吸入气雾剂的微粒大小以在5~50μm范围为宜 3、下列关于气雾剂的特点错误的是 A、具有速效和定位作用 B、由于容器不透光、不透水，所以能增加药物的稳定性 C、药物可避免胃肠道的破坏和肝脏首过作用 D、可以用定量阀门准确控制剂量 E、由于起效快，适合心脏病患者使用 4、溶液型气雾剂的组成部分不包括 A、抛射剂 B、潜溶剂 C、耐压容器 D、阀门系统 E、润湿剂 5、混悬型气雾剂的组成部分不包括 A、抛射剂 B、潜溶剂 C、耐压容器 D、阀门系统 E、润湿剂 6、二相气雾剂为 A、溶液型气雾剂 B、O/W乳剂型气雾剂 C、W/O乳剂型气雾剂 D、混悬型气雾剂 E、吸入粉雾剂 7、混悬型气雾剂为 A、一相气雾剂 B、二相气雾剂 C、三相气雾剂 D、喷雾剂 E、吸入粉雾剂 8、乳剂型气雾剂为 A、单相气雾剂 B、二相气雾剂 C、三相气雾剂 D、双相气雾剂 E、吸入粉雾剂 9、下列关于气雾剂的叙述中错误的为 A、二相气雾剂为溶液系统 B、气雾剂主要通过肺部吸收，吸收的速度很快，不亚于静脉注射 C、吸入的药物最好能溶解于呼吸道的分泌液中 D、肺部吸入气雾剂的粒径愈小愈好 E、小分子化合物易通过肺泡囊表面细胞壁的小孔，因而吸收快 10、下列关于气雾剂的叙述中错误的为 A、气雾剂可分为吸入气雾剂、皮肤和粘膜用气雾剂以及空间消毒用气雾剂 B、脂/水分配系数小的药物，吸收速度也快 C、混悬型气雾剂选用的抛射剂对药物的溶解度应越小越好 D、泡沫型气雾剂是乳剂型气雾剂，抛射剂是内相，药液是外相 E、抛射剂的填充有压灌法和冷灌法
细胞基质与功能 细胞外基质 细胞是生物体的基本结构单位，然而在多细胞生物体中，细胞大都以组织的形式存在，组织中除了细胞成分外，尚存在有非细胞性的细胞间物质。 在动物组织中，这种细胞间物质是由一些蛋白质和多糖大分子构成结构网络，这些存在于细胞间的大分子结构称为细胞外基质。 实际上细胞外基质是细胞的分泌物在细胞附近构成的精密结构，它通过与细胞质膜中的细胞外几种受体结合，同细胞建立相互关系。它对细胞的分化、增殖、形状、迁移和功能活动都由重要的影响。 细胞外基质主要由凝胶基质和纤维网架构成 凝胶基质为多糖，包括氨基聚糖和蛋白聚糖 纤维网架为纤维蛋白。纤维蛋白非两种，一是起结构作用的，如胶原蛋白、弹性蛋白 一是起黏合作用的，如纤连蛋白和层连蛋白。 基质中的多糖凝胶使细胞外基质具有抵抗压力的作用，细胞外基质凝胶中的纤维呈网状结构，因而各种养料、代谢产物和激素等物质可穿越网孔迅速扩散，便与在血液和组织之间进行交换。 细胞外基质是指分布于细胞外空间，由细胞分泌的蛋白质和多糖所构成的网络结构，细胞外机制不仅为组织的构建提供了框架，还对其接触的细胞命运及其它功能产生重要的调控作用。细胞外机制具有以下功能： 1.细胞外基质将细胞粘连在一起构成组织；动物组织的构建既是多细胞相互作用的结果，也是细胞与细胞外基质相互作用的结果 2.提供细胞外网架，在组织中或组织之间起支持作用 3.细胞外基质的三维结构即成分是动态变化的没通过细胞微环境的改变对细胞形态、生长、分裂、分化和凋亡起到控制作用。 糖胺聚糖（GAG） 糖胺聚糖是重复二糖单位构成的长链多糖，不分支。二糖单位为氨基糖（N-乙酰葡糖胺或N-乙酰版乳酸）和糖醛酸（即葡萄糖醛酸）。氨基糖大多硫酸化。过去糖胺聚糖也称为粘多糖。 根据糖残基性质、连接方式和硫酸基的数量和存在部位。可将糖胺聚糖分为4类：1.透明质酸 2.硫酸软骨素和硫酸皮肤素 3.硫酸类肝素和肝素 4.硫酸角质素糖胺聚糖的特性与功能意义：糖胺聚糖多糖连不能曲折，形不成球状构象，呈充分展开构象，且糖胺聚糖呈高度亲水性。糖链带有大量负电荷，可吸引许多阳离子，从而对渗透压具有很大影响，可将大量水分吸收吸收到基质中，使其具有高膨胀压，可耐受很强的压力。在细胞外形成多空的糖胺聚糖凝胶，占据了细胞质的大部分空间，提供机械支持作用。由于糖胺聚糖凝胶中的许多空洞，因此水溶性分子可在凝胶状红迅速扩散，同时也游离于细胞在机制中的迁移。 透明质酸 4类糖胺聚糖当中，分子结构最为简单，是唯一一种不含硫酸的成员，存在于动物所有组织和体液中，在早期胚胎组织中特别丰富。 细胞外基质中的透明质酸不是由细胞分泌产生的，而是由质膜中的酶复合物直接从细胞表面聚合出的分子链。透明质酸不与蛋白质形成共价结合的蛋白聚糖 透明质酸的功能是多方面的：1.在成体组织和关节肿抵御压力 2.在胚胎发育中起空袭
ste m cells f or treat m ent of therapy-resistant graft-versus -host disease1Trans p lantati on,2006;81(10):1390–1397 19 Bocelli-Tyndall C,B racci L,Spagnoli G et al1Bone mar2 r ow mesenchy mal str omal cells(BM-MSCs)fr om healthy donors and aut o-i m mune disease patients reduce the p r o2 liferati on of aut ol ogousand all ogeneic-sti m ulated ly mpho2 cytes in vitr o1Rheu mat ol ogy,2007;46(3):403–408 20 Gerdoni E,Gall o B,Casazza S et al1Mesenchy mal ste m cells effectively modulate pathogenic i m mune res ponse in experi m ental aut oi m mune encephal omyelitis1Ann Neur ol, 2007;61(3):219–227 21 Augell o A,Tass o R,Negrini S M et al1Cell therapy using all ogeneic bone marr ow mesenchy mal ste m cells t o p revent tissue da mage in collagen-induced arthritis1A rthritis Rheu m,2007;56(4):1175–1186 22 English A,Jones E A,Corscadden D et al1A comparative assess ment of cartilage and j oint fat pad as a potential s ource of cells f or aut ol ogous therapy devel opment in knee osteoarthritis1Rheumat ol ogy,2007;46(11),1676–1683 23 Pisati F,Boss olasco P,MeregalliM et al1I nducti on of neu2 r otr ophin exp ressi on via hu man adult mesenchy mal ste m cells:i m p licati on f or cell therapy in neur odegenerative dis2 eases1Cell Trans p lant,2007;16(1):41–55 (2009-04-14收稿) 成骨细胞与破骨细胞的相互作用对骨重塑的调节汕头大学医学院第一附属医院(515041) 陈 斌综述 李学东 杜世新审校 摘 要 骨骼是一个动态活性组织,它通过持续的重塑来维持其矿化平衡及自身的结构完整。在骨重塑的过程中,协调成骨细胞,骨细胞和破骨细胞之间的活性,能保持骨重塑过程的动态耦联平衡,其中成骨细胞(骨形成功能)和破骨细胞(骨吸收功能)在骨重塑过程中起关键作用。成骨细胞和破骨细胞之间的相互调节在骨重塑过程实现骨形成和骨吸收平衡的基础。两组细胞实现细胞间相互作用主要有三种方式:直接接触,分泌旁分泌因子及细胞与骨基质作用,成骨细胞和破骨细胞之间3种相互作用方式对骨重塑过程起重要调节作用。 关键词 骨重塑;成骨细胞;破骨细胞 骨是高活性组织,通过持续的重塑修复自身微损伤,保持结构、荷载和钙的内稳态平衡,每年有10%的骨质代谢重塑[1],骨骼系统的内稳态平衡就是靠骨重塑来实现的。骨重塑也称为骨的再生循环,人为划分为:活化,吸收,逆转及骨形成四阶段。成骨细胞(O steoblast,OB)和破骨细胞(O s2 teoclast,OC)是骨重塑过程中的两种主要细胞,协调OB与OC的生成与活性,能平衡骨的吸收与形成过程。在骨重塑过程中,OB及OC间的相互作用发生在基本多细胞单位[2],通过直接接触,分泌旁分泌因子及细胞与骨基质作用3种主要方式相互调节,进而精确影响骨的重塑过程。本文就骨重塑过程中OB与OC间的上述3种相互作用方式加以概述。 1 细胞间缝隙连接细胞间通讯 缝隙连接(gap juncti on,GJ)是相邻细胞间的通道结构,GJ的主要功能是细胞与细胞间的通讯(cell-cell communicati on),又称缝隙连接细胞间通讯(gap juncti on intercellular communicati on, GJ I C)是细胞间最重要的信息交流形式,许多与生长、分化密切相关的小分子物质(﹤1000Da,如钙离子、c AMP、I P3、单糖、氨基酸、核苷酸、维生素和激素等),可以通过GJ从一个细胞至另一个细胞,从而影响组织细胞的生长、增殖、分化及迁移[3]。GJ由连接蛋白(connexin,CX)组成, CX是多基因家族成员,在人类已证实的有21种CX表达,依据分子量的不同而命名为CX26、CX40、CX43等。研究显示CX几乎表达于所有的组织细胞,不同组织可表达不同的CX,同一组织也可表达多种CX。在多细胞生物体中,细胞通过CX及介导的GJ I C以调节它们的发育和组合、控制它们的生长和增殖、协调它们的代谢和功能。因此,GJ I C是组织保持内稳态的核心。在骨骼的发育和重塑过程中GJ I C也发挥了重要的作用。研