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大叶桉不同溶剂提取物及不同提取方法对

抑菌活性的影响

第1章绪论

桉树(Eucalyptus globulus)是桃金娘科桉属植物的总称,广泛分布于澳洲太平洋诸岛屿,常绿植物,一年内有周期性的老叶脱落现象。大多数种是高大乔木,少数是小乔木,呈灌木状的很少。树冠形状有尖塔形、多枝形和垂枝形等。单叶,全缘,革质,有时被有一层薄蜡质。多数为亚热植物。桉树喜光,好湿,耐旱,抗热。畏寒,对低温很敏感。有些种起源于热带,不能耐0度以下低温;有些种原生长在温暖气候地带,能耐-10℃低温。大多数要求年平均温度15℃以上,最冷月不低于7~8℃。一般能生长在年降水量500毫米的地区,年降水量超过1000毫米生长较好。且桉树能够生长在各种土壤,多数种既能适应酸性土,也能适应碱性土,而最适宜的土壤为肥沃的冲积土,但在土层深厚、疏松、排水好的地方生长良好。主根深,抗风力强。多数根颈有木瘤,有贮藏养分和萌芽更新的作用。桉树一般枝叶稀疏。桉树树姿优美,四季常青,生长异常迅速,有萌芽更新及改善沼泽地的能力。且桉树是全世界最速生、经济价值最大、生态和社会效益最高的三大其名树种之一[1]。现在世界上已有127个国家种植桉树,总面积达9000多万亩。中国引种桉树已有100多年的历史,约有300种桉树引入中国,发展至今,中国已有20多个省、自治区、直辖市的600多个县种植了桉树人工林[2, 3 ]。

由于大量使用抗生素引起的细菌耐药性不断上升已成为全世界共同关注的难题之一。例如:金黄色葡萄球菌的耐药率已达90 %以上,同时造成的肠道菌群紊乱,易加重原发感染[4]。某些中草药具有广谱抗菌作用,且药源广泛,价格低廉,尤其在一些慢性感染过程中和急性感染的后期使用中草药能起到抗菌消炎和全面的调理作用[5]。中药的抑菌作用机制不同于抗生素,不易使细菌产生耐药性,且耐抗生素的有害细菌和真菌对植物中的抗菌物质十分敏感,因而日益受到关注[6]。我国具有如此丰

富的桉树资源,因此,进行抑菌作用研究就显得尤其重要。

1.1 桉树化学成分

1.1.1桉树的挥发油

不同种的桉树中挥发油的成分及含量有很大不同[7]。蓝桉叶中含挥发油,其主要成分为1 ,8-桉油素、α-松油醇、δ-及α-蒎烯、乙酸松油脂、香橙烯、τ-松苇醇、β-水芹烯、ρ-伞花烃、γ-松油烯、小茴香醇、榄香醇、顺式-丁香烯、α-及β-愈疮木烯、α-及β-榄香烯、β-檀香醇、蓝桉醇及1-乙酰-4-异丙叉环戊烯等。大叶桉叶中挥发油的含量为0. 82 %,单萜和含氧单萜是大叶桉叶精油的主要化学成分,其中单萜中的α2蒎烯含量最多,占精油总量的46. 267 % ,除此之外还有桉油素、百里香酚、蓝桉醇、1-油酮、α-水芹烯、β-蒎烯等[8]。大叶桉果实中也含有挥发油成分,窿缘桉挥发油含量为0. 82 % ,主要含桉油素、α-蒎烯、τ松苇醇、α-松油醇、τ-丁香烯和少量莰烯、α-及β-松油烯、葑醇、松油烯-4-醇、龙脑、别香树烯等[9 ]。柠檬桉油中主要成分为香茅醛和β2香茅醇,前者占60 %~80 % ,后者约占15 % ,此外还含有桉油素、芳樟醇、乙酸香茅脂、α-蒎烯及β-蒎烯、ρ-伞花烃、愈疮木醇、2 ,6-二甲基-5-庚烯醛、γ2松油烯、3 ,8-盖二烯、异松油烯、异胡薄荷酮、α-松油醇、水合萜、顺丁香烯、草烯、β2荜澄茄烯、榄香烯及甲基顺-9-十八烯酸甲酯等。

田玉红等[10]采用水蒸汽蒸馏法提取圆角桉叶精油,通过气相色谱-质谱( GC-MS) 得到其主要成分为1 ,8-桉叶油素、β2蒎烯、α2蒎烯、蓝桉醇、α2松油醇、柠烯、香树烯、42松油烯醇、表蓝桉醇等。

1.1.2 其他化学成分

蓝桉树皮和木质部中含有三鲜花烷216 ,182二酮、82甲氧基鞣花酸222鼠李糖甙、鞣花酸和鞣花鞣质等。陈斌等[11]在对蓝桉果实进行研究时,确定其含有桦木酮酸、白桦脂酸、熊果酸、2α,3β2二羟基乌苏酸、β2谷甾醇苷等,而刘玉明等[12]用分光光度法测定蓝桉果实中总三萜酸含量的方法更加简便、快速。谈满良等[13]从蓝桉果实乙醇提取物的石油醚部位分离鉴定出6 个化合物,通过理化和波谱分析结构鉴定为:5-羟基-4 ,7-二甲氧基-6-甲基黄酮(1) 、blumenol A (2) 、蓝桉醇(3) 、绿花白千层醇(4) 、β2谷甾醇(5) 、二十二烷酸(6) ,其中化合物1~4和化合物6 系首次从该植物中分离得到,化合物1和2 首次从桉属植物中分离得到。Kim JP等从蓝桉根皮中分离出鼠李糖甙,柠檬桉树胶中含有香木兰272甲醚、山柰酚272甲醚、鞣花酸、香橙素二甲醚

和柠檬桉醇等,大叶桉干叶含没食子酸、酚类、甾醇、三萜类、桉树素等。Hou AJ等[14]从桉叶中分离出一种没食子丹宁酸成分和 4 种可水解的丹宁酸、没食子酸及儿茶酚等。桉树中还含有黄酮类化合物,包括黄酮醇和二氢黄酮等类型,如槲皮素和槲皮甙以及芸香甙,L( + )-高丝氨酸、桉树素等[15]。

1.2 桉树活性成分的研究与应用

桉叶无论是在中国还是在其他种植地区都是民间常用的草药。桉树叶可提取桉叶油,是医药、香料和化学工业的重要原料,具有很高的药用价值[16],且具有防腐及杀虫驱蚊的作用,从大叶桉叶中也发现抗疟活性成分。我国各地中西医在桉叶制剂、药理和临床效果等方面积累了丰富的经验,但桉叶的抗菌活性目前大多是针对桉叶油的研究,尚缺乏系统研究。

1.2.1 抗菌作用

桉叶煎剂在体外对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、赤痢杆菌、伤寒杆菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌等均有抑制作用;对乙型副伤寒杆菌的氧消耗及其琥珀酸脱氢酶活性也有抑制作用,对流感病毒、口腔菌也有一定的抑制作用;对破伤风杆菌、白喉杆菌菌素及真菌有解毒效力。而桉叶油对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、大肠埃希菌比双黄连口服液抑菌作用强;对沙门氏菌、志贺痢疾杆菌比双黄连口服液抑菌作用稍弱;对福氏痢疾杆菌、乙型链球菌的抑菌作用与双黄连口服液一致,桉油浓度6 %以上时具有抑制结核菌的作用。Cimanga[17]的研究也证实柠檬桉油、小叶桉油、白桉油、柳桉油、大叶桉油具有广谱的抗菌效果。桉叶油通过与其他精油混合使用还可以达到协增效的作用,Pascal将莳萝、胡荽、芫荽叶、丰桉油通过分馏分成不同种类的混合物,测定了原精油不同的馏分的混合精油对革兰氏阳性菌、革兰氏阴菌和酵母菌的最小抑菌浓度,发现不同馏分的混合的抗菌能力和抗菌谱都比原精油强。

1.2.2 杀虫作用

李建华等观察了不同浓度的桉叶油对体外培养环境下蠕形螨和阴道毛滴虫的杀虫作用,并用小鼠为对象,观察了桉叶油对3 种常见传病蚊种的驱避作用。结果表明,

桉叶油对蠕形螨和滴虫均有较强的杀虫作用,随着药物浓度的增加和药物作用时间的延长,虫体死亡率明显升高,2 %和5 %桉叶油分别是杀滴虫和蠕形螨的有效而经济的

浓度;5 %桉叶油对中华按蚊、致倦库蚊、白纹伊蚊均有明显驱避作用,对白纹伊蚊的驱避效果强于中华按蚊和致倦库蚊,绝对保护时间分别为白纹伊蚊170 min ,中华按蚊和

致倦库蚊均为130 min[ 18 ]。李建华等使用10 %桉叶油霜体外抗蠕形螨实验及治疗试验结果表明,桉叶油霜作为单味中草药就具有较强的杀蠕形螨作用,治疗效果不亚于10 %硫磺软膏。赵亚娥等[19]采用透明胶带粘贴过夜法获取两种人体蠕形螨,随机分组,观察不同浓度下的桉叶油对两种人体蠕形螨的杀灭作用,试验结果表明桉叶油对两种人体蠕形螨均有明显的体外杀灭作用,对皮脂蠕形螨的杀虫效果优于毛囊蠕形螨,随着药物作用时间的延长及浓度的增加,蠕形螨死亡率增高, 6. 25 %的桉叶油是杀灭人体蠕形

螨的最低有效浓度,而12. 5 %的桉叶油是杀死人体蠕形螨的最适浓度。

1.2.3抗氧化作用

桉叶油具有消炎镇痛作用,Grassmann认为炎症产生的机理在于氧自由基( ROS)的产生,桉叶油可以消除经基自由基从而改善炎症症状.Siurin等人研究了精油对慢性支气管炎病人的脂质过氧化和脂质新陈代谢的影响,发现蓝桉油可通过激活红细胞中的过氧化氢酶起到抗过氧化作用。Silva考察了生长在巴西的蓝桉、柠檬桉、圆角桉油,发现这3 种桉叶油皆有止痛效果和抗炎效果。

Fadel比较了水蒸气蒸馏法和超临界二氧化碳萃取法得到的赤桉油的成分,并考察了二者在亚油酸体系中的抗氧化能力。发现2 种方法得到的精油都表现出抗氧化能力,超临界二氧化碳萃取得到的赤桉油的抗氧化能力要高于水蒸气蒸馏法得到的.Dessi等人研究了生长在撒丁岛上的植物精油和乙醇提取物对油脂的抗过氧化活性,发现蓝桉油在所研究的 4 种精油中抗氧化活性最高,但低于二丁基羟基甲醚( B H T ) [20]。

1.3 桉叶油的用途

桉叶油由于其特殊的芳香气味和良好的杀菌、消毒能力,广泛地应用于食品、日用化学品及医药方面等。

1.3.1 在医药方面的应用

医药用桉叶油主要以富含1,8- 桉叶油素的精油为主,虽然许多种类桉叶油中都含用1,8-桉叶油素,但只有蓝桉和史密斯桉等少数几种1,8-桉叶油素含量高的种类才具有开发价值。蓝桉油是一种常用的药物,具有消炎镇痛作用,能抗结核杆菌。药理实验表明,蓝桉油对鼻腔和支气管薪膜有温和的刺激作用,可促进粘液分泌,从而帮助疏通堵塞的鼻腔和支气管。同时可刺激唾液产生和分泌,随即激活吞咽反射,可抑制即将发生的咳嗽,因而可以作为气体吸人剂用于治疗呼吸道疾病、流行性感冒、减轻头痛和缓解痉挛[21]。由于具有杀菌作用和清新的气味,蓝桉油也可用做防腐剂和

杀菌剂,常用于十滴水、清凉油、风油精、杀菌除臭剂中。

桉叶油也常用来分离提纯1,8-桉叶油素。1 , 8 -桉叶油素可以治疗流感、感冒、细菌性痢疾、肠炎及各种感染,在口腔医学中可用作口腔清洁剂的防败血和除臭组分。1,8-桉叶油素还有抑制食欲的功能,用它配制的药水荆和固体药片,对治疗食欲亢进和用以减肥,有很好的效果。在英国、美国都规定了医药用桉叶油中1,8-桉叶油素的最低含量。

1.3.2 在食品方面的应用

由于桉叶油具有清凉香气,对人无毒,可作为食品添加剂使用。我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760-1996)规定,桉叶油可按生产需要适量用于配制各种食品香精。主要在口香糖产品中使用,利用桉叶油对呼吸道疾病的缓解作用,也常用于止咳糖配方中。

1.3.3 在日用化学方面的应用

由于桉叶油清新的气味和良好的杀菌作用,在日用化学工业中应用广泛,常用于配制香水、洗涤剂、皮肤清洗剂、护发剂、牙膏、空气清新剂等.利用其杀曳驱虫作用可配制驱虫剂,用于蟀螂、各类储存害虫、蚊子的毒杀和驱避。

桉叶油还具有良好的表面活性,是一种天然的洗涤剂,对污垢、油脂、油漆及不愉快的气味有很强的清除作用。在常用洗涤剂中加人按叶油可以使洗涤后的羊毛制品柔软蓬松。澳大利亚已生产出为去污垢或杀菌消毒用的按叶油商品,其主要产品是桉叶油空气洁净剂或消毒剂、高效多泡沫肥皂、药皂等系列产品。

1.3.4 在其他方面的应用

富含胡椒酮和a-水芹烯的按叶油,不仅用于香料和药物添加剂,在工业上还常用作溶剂、清洗剂、矿物浮选剂( 主要用于铅和锌的浮选) 和化工原料。桉叶油还可用于胶粘剂的生产,通常为了增强粘合剂的粘合力,都要在粘合剂中加入可塑剂、防霉剂等化学合成添加物,但这些化学合成添加物容易导致环境污染。日本开发出使用桉叶油等植物精油成分替代化学合成添加物的新型环保粘合剂,不仅具有优良的粘合效能,而且能够有效防霉。另外,桉叶油可以作为助燃剂添加在汽油-乙醇混合燃料中。

1.4植物化学成分抑菌作用的机制

明确了药用植物中起到抑菌作用的活性化合物,并不意味着就揭示了其抑菌、抗

菌机理或其合成或分解的代谢循环机制,从现有研究水平来说,揭示抗菌、杀菌分子机制的仅仅是很少的特例。如马齿苋、黄芩提取液成分并无杀菌活性,但具有消除细菌质粒作用,从而降低病菌对抗生素耐药性;小檗碱的抑菌机理是小檗碱能与寄生物DNA形成复合物,复合物的形成抑制寄生物DNA的复制,因而阻止寄生无繁殖;植物凝集素(lectin)是非免疫来源的糖蛋白或结合糖的蛋白质,它们能凝集细胞和(或)沉淀糖蛋白。一些研究表明,植物源抑菌杀菌物质可作用于菌体膜结构,影响初生能量代谢。有些植物的提取物可抑制、钝化、中和病菌产生的毒素,起到防治的目的。在抗真菌天然药物方面,有关聚烯和核苷的研究仍然活跃,脂肽类化合物通过抑制活力细胞壁多聚体,1,3-α-D-葡聚糖的合成,具有广谱抗菌作用。

总之,植物源杀菌剂对植物病害作用机理仅限于初步了解,其真正的作用机理还需进行深入细致的研究。

1.5 本研究的对象与技术方法

我国是世界生物多样性最丰富的国家之一,同时也是药用植物最丰富的国家。据全国中药资源普查统计,我国药用植物种类有11100多种。本研究选取大叶桉叶作为对象,采集其叶用甲醇、无水乙醇、95%乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚提取其抑菌成分,研究其对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、产气杆菌(Clostridium perfringens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)这四种细菌的抑菌效果,并进一步对其进行最低抑菌浓度试验。

本次研究采用甲醇、无水乙醇、95%乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚进行粗提,然后对粗提物采用减压蒸发浓缩,再将浓缩物制成一定浓度的药液,最后采用琼脂平板打孔法测其抑菌活性与最低抑菌浓度。

药用植物粗提物的制备,其过程比较固定,主要包括提取、浓缩、纯化、干燥和制剂等。其中,提取和浓缩是现代中药制药的关键单元操作之一[6,22]。一般情况下药用植物中具有较强抑菌功效的有效成分常溶于极性较强的有机溶剂中,所以常用的中草药有效成分提取剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚等极性较强的溶剂[23-25]。而近年来为了提高浓缩效果和药品质量,开发了许多有价值的中药浓缩新工艺和新技术。合理引进这些先进实用的共性技术和装置,可以提升中药制药业的科技含量和整体制造水平。涉及的浓缩新方法有蒸发浓缩、冷冻浓缩、膜浓缩和吸附树脂分离浓缩等。

1.6 本研究的目的与意义

农药是人类用于防治有害生物的一类生物活性物质, 在作物保护中发挥着重要甚至不可替代的作用。许多化学农药存在安全隐患, 不同程度地存在扩散、残留、富集等。当前, 以高效、低毒、低残留的环境合理型生物农药逐渐替代传统的高毒化学农药是农药发展的必然趋势。随着抗生素的大量不科学的使用,病原细菌的抗药性日渐突出。如,使病原细菌对某些抗生素产生抗性基因、抗生素的用量越来越大等。为此,国内外研究人员展开了植物天然抑菌剂的研究开发。本研究拟通过对大叶桉叶采用不同溶剂提取,研究其提取物对四种常见细菌的抑菌效果分析,为探索桉树在药用和生物农药方面的应用提供一定的理论依据。

第2章材料与方法

2.1 材料

2.1.1 植物材料及来源

大叶桉(Eucalyptus robusta Smith)为双子叶植物桃金娘科桉属,实验所用的大叶桉叶(Folium Eucalypti Robustae)采自四川省绵阳市西南科技大学校园,经鉴定为大叶桉。

2.1.2供试菌种

大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、产气杆菌(Clostridium perfringens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)由西南科技大学生命科学与工程学院微生物实验室提供。

2.1.3 主要试剂

甲醇、95%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚、二甲基亚砜(均为分析纯),注射用硫酸链霉素(华北制药股份有限公司)。

2.1.4 主要实验仪器

植物粉碎机FZ102 天津市泰斯特仪器有限公司电子分析天平FA1104 上海上平仪器公司

万用电炉DL-T 北京中兴伟业仪器有限公司循环水式真空泵SMZ-D(Ⅲ)巩仪市英峪予华仪器厂

旋转蒸发仪SENCO R-201 上海申顺生物科技有限公司恒温培养箱KXE-13A 上海科析实验仪器厂

超声波清洗器KQ3200B 昆山市超声仪器有限公司

超净工作台SW-CJ-1F型苏州安泰空气技术有限公司手提式不锈钢蒸汽消毒器YX-280B 上海三申医疗器械有限公司

立式自动电热压力蒸汽灭菌锅LDZX—40Ⅱ上海中安医疗器械厂

恒温水浴锅上海科析试验仪器厂

2.2实验方法

2.2.1 植物材料预处理

取大叶桉叶洗去叶面杂垢,自然风干后,用小型粉碎机粉碎,过60目筛,收集备用。取桉叶粉末50g六份,分别置于广口瓶中,密封保存备用。

2.2.2粗提物的制备

分别用甲醇、95%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚各500ml冷浸桉叶粉末四天,再放在超声波清洗器中进行超声20min(30℃),继续冷浸48h后,过滤,得提取液。用旋转蒸发仪对滤液进行浓缩,浓缩至少量的提取液后,转入小烧杯中,再将装有浓缩液的小烧杯放入60℃恒温水浴锅中继续浓缩,当浓缩成浸膏之后取出。分别记录空烧杯重M1与加入提取液的浓缩完成后烧杯重M2,即可得浓缩完成时所得浸膏的重量M=M2-M1。浸膏用二甲基亚砜定容为质量浓度为50 mg/ml的药液,备用。

同时本实验还采用了95%乙醇采用冷浸法、热浸法和超声波提取三种提取方法进行提取,分别用超声波清洗器45℃下恒温超声30min;用恒速搅拌器在45℃恒温水浴中以700r/min的速度搅拌8h然后再冷浸四天。同样,浓缩干燥后所得的浸膏用二甲基亚砜定容为质量浓度为50 mg/ml的药液备用。

注射用硫酸链霉素用二甲基亚砜溶解成质量浓度为2 mg/ml作为细菌的阳性对照药液。二甲基亚砜用作供试菌的阴性对照药液。

2.2.3 培养基与菌种活化

2.2.

3.1 牛肉膏蛋白胨培养基的制备

牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂20g,用蒸馏水定容至1000mL,再用1mol/L 的NaOH调节培养基的pH 值为7.2~7.4。然后将熬制好的培养基装于试管中(每管加五分之一),塞上棉塞包好后,用立式自动电热压力蒸汽灭菌锅湿热灭菌(121℃,20 min) 后,摆斜面,冷却后备用。

2.2.

3.2 菌种的活化

将菌种从冰箱中取出,采用固体斜面接种法,在试管中接种活化,接种过程在超净工作台中进行,先将菌种、接种环、75%酒精、酒精灯、培养基斜面等实验所需物品在紫外灯下杀菌20min,灭菌完后关掉紫外灯,打开白光灯进行菌种活化,然后再将接种后的菌种放在恒温培养箱中,在37℃下培养,注意观察,培养24h即得活化后的菌种。一部分活化的菌种用作抑菌效应检测,剩下的部分活化菌种置于冰箱中保存备用。

2.2.4 菌液制备

用接种环取两环活化好的菌种,放入10ml无菌水中,摇匀,备用。整个操作在超净工作台里完成,以防止菌悬液污染杂菌。

2.2.5 抑菌活性测定

2.2.5.1 抑菌活性筛选

采用琼脂打孔法进行抑菌活性筛选的测定。将牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、笔筒、移液管、试管、滴定管、镊子(均在高压灭菌锅中湿热灭菌(121℃,20min))药液等实验所需用品在紫外杀菌20min后,将10ml菌液倒入装有250ml牛肉膏蛋白胨培养基的500ml三角瓶中,振荡,摇匀,趁混有菌液的牛肉膏蛋白胨培养基还未凝固前,迅速倒入培养皿中,约1/3厚度,培养基凝固后,用直径为9mm的打孔器,每个培养皿里打三个孔,将所有的培养基均打完孔后,再用镊子取出打孔的部位,最后吸取0.25 ml药液注入已打好的圆孔中,另两个圆孔,一个孔中滴入二甲基亚砜溶液作阴性对照,剩下的一个孔中滴入链霉素药液(链霉素药液分别滴入混有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌和枯草芽孢杆菌的培养基里)做阳性对照(上述操作均在超净工作台里的酒精灯火焰旁进行),上述操作完成后,每种药液做3次重复实验,将培养皿放在37℃下恒温培养箱中培养24h后,用十字交叉法测量抑菌圈直径,求得平均值即视为抑菌圈直径。记录数据,并照相作图像记录。

2.2.5.2 最低抑菌浓度(MIC)测定

在无菌条件下,采用打孔法测定最低抑菌浓度。用二甲基亚砜溶剂将原浓度为5mg/mL的药液按2倍稀释法稀释成1:1,1:2,1:4,1:8,1:16倍液以作最低抑菌浓度测定试验,每个试验重复3次,每次试验做3个平板。培养条件及时间:37℃恒温培养箱中培养24h。以观察到刚出现抑菌圈时相对应的药液浓度作为其最低抑菌浓度,用最小刻度1mm直尺用十字交叉法测量抑菌圈直径,求得平均值即视为抑菌圈直径。记录数据。

第3章结果与分析

3.1 不同溶剂粗提物的得率

采用旋转蒸发仪对桉叶的各种溶剂粗提液进行减压蒸馏浓缩,至一定浓度后置于小烧杯中,自然挥发至烧杯中不出现液体物质作为终点,称量其浓缩物质量。由于提取时所称取的药物粉末均为50g,可得到各种药物粗提物的得率,具体结果统计见表1。

表1桉叶不同溶剂粗提物得率

提取溶剂浸膏质量/g 得率/%

石油醚8.3 16.6

乙酸乙酯12.6 25.2

95%乙醇15.2 30.4

无水乙醇15.8 31.6

甲醇18.5 37.0

丙酮21.6 43.2

由表1可知,不同溶剂提取的得率各不相同。其中,石油醚得率最小,而丙酮得率最高。而上述的得率中也可以看出,桉叶中极性的物质含量较大。主要集中在乙醇、甲醇和丙酮极性溶剂之中。

经查阅,中药体外抑菌强弱与提取物的成分和浓度有密切关系。大多数中药的提取物浓缩到较高的生药浓度时,往往变得粘稠,这种提取物成分复杂,常含有生物碱、黄酮类、鞣质(内含焦性没食子酸和焦性儿茶酚)及没食子酸的衍生物、有机酸等多种抗菌、抑菌成分,也有蛋白质、淀粉、多糖、树脂等无抑菌作用的成分。这些无抑菌作用的成分往往会影响抑菌效果,不除去提取物中的杂质,提高提取物中抑菌成分的浓度,则大多数中草药的抑菌效果难以呈现出来[26],所以在浓缩至干时产生的膏状物中含有大量的蛋白质、淀粉、多糖、树脂等无抑菌作用的成分,并且定容后的溶解液显得粘稠,为了消除这些因素对抑菌效果的影响,在定容后,对每种溶解液进行一次过滤,以达到除去溶解液中大量的无抑菌成分。但是蛋白质、淀粉、多糖、树脂等许多无抑菌作用的成分并不溶于无水乙醇中,导致这些物质溶解的原因可能是在进行水

浴提取过程中,由于搅拌导致密封不严,部分乙醇在温度较高下挥发,导致乙醇溶液浓度过低,使许多无抑菌作用的蛋白质、淀粉、多糖、树脂等溶解其中,最后进行减压蒸发浓缩时产生大量的膏状物。而在定容过程中使用的溶液二甲基亚砜只有50mL,并不能溶解其中的大量蛋白质、淀粉、多糖、树脂等许多无抑菌作用的成分,从而析出使药液变的粘稠。

综上所述,在定容后应用滤纸滤去其中大量的析出来的无抑菌活性成分。在进行浓缩提取作抑菌成分得率的测试时,若不对粗提物进行任何处理而得到的结果并不能准确表现其中抑菌成分含量的多少,若要进行其抑菌成分含量的多少可用乙醇沉淀除去其中的杂质,反复多次,则可将其中的蛋白质、树脂等不溶性成分除去,保留如生物碱、苷类、氨基酸、有机酸等水溶性成分,提高抑菌成分的浓度[20],再次进行浓缩至干测其干物质的质量。

3.2 不同溶剂粗提物对大肠杆菌的抑菌效应

采用打孔法测定这6种溶剂的大叶桉叶粗提物药液对大肠杆菌抑菌作用的大小,在每个混有大肠杆菌的平板里用直径为9mm的笔筒打三个孔,在其中的一个孔中滴药液,一个孔中滴入二甲基亚砜溶液做阴性对照,剩下的一个孔中滴入链霉素药液做阳性对照,每一种药液做三次重复实验,然后再放入37℃恒温培养箱里培养24h,观察抑菌效果,测定其抑菌圈直径,并作图像记录,结果见表2。

表2 不同溶剂粗提物对大肠杆菌的抑菌效应(单位:mm)提取溶剂重复1 重复2 重复3 重复4 平均数

甲醇20.6 22.6 21.3 22.6 21. 8±0.9 a

无水乙醇18.7 21.3 20.3 21.7 20.5±1.2 b 乙酸乙酯21.3 20.7 19.7 19.3 20.3±0.8 b

95%乙醇21.7 21.3 21.7 23.3 22.0±0.8 a

丙酮21.7 21.3 20.3 21.7 21.3±0.6 ab 石油醚—————注:表中数字为各平板平均抑菌直径;“±”后的数字为标准差;表中字母表示LSD法0.05显著水平差异;

“—”为无抑菌效果

培养后发现的凡对该菌有抑制力的抗菌药物,在其孔的周围会出现一个无细菌生长的圆圈,称为抑菌圈。抑菌圈越大表示该菌对此药物敏感性越高,反之越低。若无抑菌圈则说明该菌对此药具有耐药性。所以应按抑菌圈直径的大小(以mm为单位)来作为判定抗菌药物敏感度高低(即抑菌能力的强弱)的标准。

通过表2可以看到,六种粗提物除石油醚外,对大肠杆菌都具有佷好的抑菌效果。抑菌圈直径均在19mm以上,显著性差异不明显。二甲基亚砜作为阴性对照无抑菌效果,而链霉素作为阳性对照具有很强的抑菌效果,抑菌圈为22mm。我们可以通过下面的图片观察几种粗提物的抑菌效果。

图1 95%乙醇粗提物对大肠杆菌抑菌效应图2 甲醇粗提物对大肠杆菌抑菌

图3 无水乙醇粗提物对大肠杆菌抑菌图4 丙酮粗提物对大肠杆菌抑菌

图5 乙酸乙酯粗提物对大肠杆菌抑菌图图6 石油醚粗提物对大肠杆菌抑菌图

注:A孔为药液处理;B孔为阴性对照;C孔为阳性对照

3.3 不同溶剂粗提物对金黄色葡萄球菌的抑菌效应

同样采用打孔法测定这6种溶剂的大叶桉叶粗提物药液对金黄色葡萄球菌抑菌作用的大小,在每个混有金黄色葡萄球菌的平板里用直径为9mm的笔筒打三个孔,在其中的一个孔中滴药液,一个孔中滴入二甲基亚砜溶液做阴性对照,剩下的一个孔中滴入链霉素药液做阳性对照,每一种药液做三次重复实验,然后再放入37℃恒温培养箱里培养24h,观察抑菌效果,测定其抑菌圈直径,并作图像记录,结果见表3。

表3 不同溶剂粗提物对金黄色葡萄球菌的抑菌效应(单位:mm)

提取溶剂重复1 重复2 重复3 重复4 平均值

甲醇26.7 27.3 26.3 26.3 26.7±0.4 a

无水乙醇24.3 25.3 24.3 25.7 24.9±0.6 b

乙酸乙酯20.7 19.7 20.3 20.3 20.3±0.4 e

95%乙醇24.7 26.3 25.3 24.3 25.2±0.8 b

丙酮21.3 21.3 21.3 20.7 21.2±0.3 d 石油醚21.7 22.7 21.3 22.3 22.0±0.5 c

注:表中数字为各平板平均抑菌直径;“±”后的数字为标准差;表中字母表示LSD法0.05显著水平差异;

表3表明,六种粗提物均对金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌圈。甲醇、95%乙醇

和无水乙醇提取液的抑菌圈均在24mm以上,抑菌效果显著,表明这几种提取物对金黄色葡萄球菌具有佷高的敏感性。其他抑菌圈也都在20mm以上,抑菌效果明显。还可以通过下面实验图片,观察药液的抑菌效果,可以看出抑菌效果明显。

图1 无水乙醇粗提物对金球菌抑菌图图2 95%乙醇粗提物对金球菌抑菌图

图3 甲醇粗提物对金球菌抑菌图图4 丙酮粗提物对金球菌抑菌图

注:A孔为药液处理;B孔为阴性对照;C孔为阳性对照

3.4 不同溶剂粗提物对枯草芽孢杆菌的抑菌效应

同上面两种抑菌测定方法相同,采用打孔法测定抑菌圈大小,观察抑菌效果。由于在预实验中得到无水乙醇与95%乙醇的抑菌效果几乎相同,而乙酸乙酯对枯草芽孢杆菌无抑菌效果,所以未对这两种提取物进行抑菌实验。测定其抑菌圈直径,结果见表4。

表4 不同溶剂粗提物对枯草芽孢杆菌的抑菌效应(单位:mm)

提取溶剂重复1 重复2 重复3 重复4 平均值

甲醇25.7 25.7 25.3 26.3 25.8±0.4 a

95%乙醇21.3 21.3 22.3 22.0 21.7±0.4 b

丙酮26.7 27.0 25.7 25.3 26.2±0.7 a

石油醚22.3 22.3 21.0 21.3 21.7±0.6 b

注:表中数字为各平板平均抑菌直径;“±”后的数字为标准差;表中字母表示LSD法0.05显著水平;

通过表4可以看出,甲醇和丙酮提取液对枯草芽孢杆菌抑菌能力较强,抑菌圈直径分别为25.7mm、26.2mm;而95%乙醇和石油醚的提取液对枯草芽孢杆菌的抑菌能力稍弱。从表中同样可以看出,各溶剂粗提物的抑菌效果存在显著性的差异。这几种溶剂的粗提物对枯草芽孢杆菌具有极强的敏感性,佷好的抑菌效果。

3.5 不同提取方法获得的乙醇粗提物对产气杆菌的抑菌效应

分别采用冷浸法、热浸法和超声波提取法,用95%乙醇作为提取溶剂。同样采用打孔法测定这3种不同方法的大叶桉叶的95%乙醇粗提物药液对产气杆菌抑菌作用。观察抑菌效果,测定其抑菌圈直径,并作图像记录,结果见表5。

表5 95%乙醇不同提取方法粗提物对产气杆菌的抑菌效应(单位:mm)

提取方法重复1 重复2 重复3 重复4 平均值

冷浸16.3 15.7 15.7 17.0 16.2±0.6 b

热浸18.7 19.0 18.3 18.3 18.6±0.3 a

超声15.3 14.7 15.7 16.3 15.5±0.7 b

注:表中数字为各平板平均抑菌直径;“±”后的数字为标准差;表中字母表示LSD法0.05显著水平;

从表5中同可以看出,不同方法的粗提物的抑菌效果存在显著性的差异。热浸法的粗提物抑菌效果最为明显。而冷浸法和超声波提取法也具有一定的抑菌效果,但抑菌能力较弱。通过下面的图片可以观察到热浸法的抑菌效果。

热浸法粗提物对产气杆菌抑菌图

注:A孔为药液处理;B孔为阴性对照;C孔为阳性对照

3.6 乙醇粗提物的最低抑菌浓度(MIC)

这6种溶剂粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌实验数据结果表明,95%乙醇粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现出了很好的抑菌效果,表现出了极强的抑菌能力。选用不同溶剂粗提物的抑菌检测结果,挑选其中抑菌圈大并且抑菌效果明显的药液与菌种组合做最低菌抑菌浓度试验,找到其最低抑菌浓度。所以根据上述实验结果选取的组合为:95%乙醇粗提物与大肠杆菌,95%乙醇粗提物和金黄色葡萄球菌。按二倍稀释法,从质量浓度5 mg/ml开始依次浓度减半,从而测定MIC。量取抑菌圈直径,以观察到刚出现抑菌圈时相对应的药液浓度作为其最低抑菌浓度,用最小刻度1mm直尺水平垂直两次量取抑菌圈直径,取平均值。结果如表6所示。

表6 95%乙醇提取液各浓度下的抑菌效果

供试菌种

药液浓度(mg/ml)

5.00 2.50 1.25 0.63 0.31 0.16

金黄色葡萄球菌++++ +++ +++ ++ + - 大肠杆菌++++ +++ ++ + - -

注:1)“-”抑菌圈直径10 mm以下,即视为无抑菌效果;2)“+”—抑菌圈直径10-12 mm,“+ +”—抑菌圈直径12-14 mm,“+ + +”—抑菌圈直径14 -16 mm,“+ + + +”—抑菌圈直径16 mm以上;3)表中数据均为3次平行,3次重复得到.

MIC测定中,抑菌圈直径小于10mm可视为无抑菌效果,刚无抑菌效果时的药液浓度即为MIC。95%乙醇粗提物对以上两个菌种的最低抑菌(MIC),对金黄色葡萄球菌的抑菌浓度最低达到了0.31mg/ml,而大肠杆菌的抑菌浓度最低为0.63mg/ml,可以看出95%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果相对略强一些。而枯草芽孢杆菌用75%乙醇提取物做最低抑菌的效果也较明显,也在0.63mg/ml左右达到最低抑菌浓度[2]。

第4章讨论

4.1 关于提取方法和提取溶剂

4.1.1 提取方法

药用植物中抑菌成分提取所选用提取方法多种多样,常用的提取的方法有,浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法等。在本次实验中,采用的是浸泡法并结合超声波提取法进行提取的。为了充分提取药用植物中的抑菌成分,浸泡时间较长,室温浸泡四天后再放在超声波清洗器中进行超声,然后放回继续室温浸泡48h。超声波提取法是用于天然产物有效成分的提取是一种非常有效的方法和手段,它在提取时不需加热,避免了中药常规煎煮法、回流法长时间加热对有效成分的不良影响,由于其不需加热,因而也节省了能源;超声波提取还提高了药物有效成分的提取率,节省了原料药材,有利于中药资源的充分利用,提高了经济效益;提取中溶剂用量少,节约了溶剂;超声波提取是一个物理过程,在整个浸提过程中无化学反应发生,不影响大多数药物有效成分的生理活性。把超声波提取法的以上的优点与本次实验具体条件相结合,所以结合了超声波提取法进行此次实验,用超声波清洗器在30℃下提取20min。

4.1.2 提取溶剂

选用什么样的溶剂提取中药成分,取决于溶剂的性质和被提取成分的化学结构及溶解性。根据“相似相溶原理”,欲提取亲脂性成分应选用亲脂性溶剂,欲提取亲水性成分则选用水及亲水性溶剂。乙醇、甲醇虽然属于亲水性溶剂,它们可与水任意混溶,但很多亲脂性成分可溶于乙醇、甲醇,所以乙醇或甲醇溶液中既有水溶性成分,也有很多脂溶性成分。乙醇或甲醇中可加入水配成不同浓度的乙醇或甲醇,根据提取成分的情况可选用适当浓度的醇进行提取。本次实验分别采用了甲醇、乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮以及石油醚这六种提取溶剂,先在室温下浸泡药用植物四天后,再用超声波提取,然后继续在室温下浸泡48h,以提取更充分植物中的有效成分。

4.2 关于浓缩方法和溶解溶剂

4.2.1 浓缩方法

在本实验中,采用的是旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩。采用减压蒸馏浓缩可降低提取

液中的乙醇的沸点,加快浓缩,但其温度不能过高,否则极易造成药液沸出,所以一般温度调至比相应提取溶剂的沸点低20~30℃之间,并且注意观察浓缩时烧瓶中的情况,即将沸腾时,此时瓶中会冒出小气泡,此时应该适当放入空气,升高气压,如此反复,最后浓缩至烧瓶中只有少许提取液时,再将提取液倒入小烧杯中,放入温度为60℃的水浴锅中,直至将提取液挥成浸膏即可。本实验未选择直接在旋转蒸发仪里挥成浸膏,是因为浸膏不容易被取出,所以选择先用旋转蒸发仪再用水浴锅浓缩。

4.2.2 溶解溶剂

提取液浓缩成浸膏以后,用二甲基亚砜作为溶解剂,将其配制成药液。二甲基亚砜是一种含硫有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,具有吸湿性的可燃液体,既有高极性,高沸点,非质子,于水混溶的特性,毒性极低,热稳定性好,能溶于乙醇,丙醇,苯和氯仿等大多、数有机物,被誉为“万能溶剂”,所以选取二甲基亚砜作为溶解剂,且其主要成分没有抑菌作用。在溶解过程中,仍有不能完全溶解的,可采取水浴加热将其完全溶解。

4.3 关于菌种的选择

实验可供选择的病原细菌种类多,但本实验采用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌这3种最具代表性的病原细菌种做抑菌活性检测。并采用了95%乙醇的不同提取方法提取的药液对产气杆菌进行了抑菌活性检测。这几种细菌在社会的生产生活中的危害都比较大,常造成感染。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌,主要寄生在大肠内;它侵入人体一些部位时,可引起感染,如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等;人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热,感染可能是致命性的,尤其是对孩子及老人。如果水中大肠杆菌超标,饮用则会造成腹泄,痢疾等病症,并且对家禽危害也较大,会造成大肠杆菌病,造成大量死亡。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到;因而,食品受其污染的机会很多。近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌也是人类最重要的化脓性球菌,若伤口处理不当易造成化脓感染,并且其抗药性强。芽孢杆菌的污染是造成食品腐败变质的一个很重要的原因。

4.4 关于抑菌试验对照的使用

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论文写作范式 (论文写作目标:解决具体问题) 一、基本格式 标题。标题表示写作内容。例如:中信建投公司资产管理产品创新研究 大约写五章到六章,其中第一章和最后一章是只有章、节(条)两级标题,其他章有章、节(条)、目(款)三级标题。 第一章绪论 1.1 选题背景:回答为什么选择该内容作为论文题目。 1.2 研究目标:回答选择该题目要达到什么目的。 1.3 文献综述:以往研究同一题目的文献及相关观点。 1.4 论文结构:论文思路及结构设计。 1.5 论文创新观点:研究结论视为创新观点。 第二章到第四章通过例举一个案例表现作者具有解决具体管理问题的能力。 第二章案例内容。例如:中信建投公司资产管理产品创新现状 第三章问题分析。例如:中信建投资产管理产品创新中的问题和原因 第四章对策建议。例如:中信建投资产管理产品创新的对策 第五章结论 5.1 研究结论 先总体对研究结论进行总结,然后提出5个左右的研究结论,每个结论用标题列出,在结论标题后做一段归纳论述。 5.2 研究局限与展望 写两段,一段是从理论和应用两方面谈研究局限,一段从理论和应用两方面谈研究展望。(这部分不用标题) 二、文字要求 1.标题尽量用短句,即使用单句结构标题,不要使用从句或复句结构标题。 2.标题尽量用较少成分、结构简单的句型(不要使用带所有成分的结构句型。句子所有成分包括主、谓、宾、定、补、状) 3.每章三节(条)左右,每节三目(款)左右 4.节与节、目与目的句型结构一致 5.注意关键词或主题词4个,一般为实词,词与词不能有重复,不能与论文标题有关词完全重复。 三、文字数量及结构安排 除绪论和研究结论章之外,各章之间的文字数量基本相同,各节之间的文字数量基本相同。 四、5.1研究结论部分的写法 五、摘要写法 摘要要写成一篇短文,而不是第一章包含什么内容之类的论文介绍写法。 摘要包含5段,总计2000字左右,不得超过。 一段:选题背景相关内容(300字左右); 二段:研究目标相关内容(200-300字左右) 三段:研究内容相关文献的观点(300-400字左右) 四段、五段:论文案例研究内容及研究结论(1000字左右)

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4.关键词。需列出4个关键词,小三楷字体。第1个关键词应为二级学科名称。学科分类标准执行国家标准;关键词后请列出作者的中国科协所属全国性学会个人会员的登记号 5.正文。小四号宋体。文中所用计量单位,一律按国际通用标准或国家标准,并用英文书写,如km2,kg等。文中年代、年月日、数字一律用阿拉伯数字表示。 正文中的各级标题、图、表体例见下表: 表;标题体例 标题级别字体字号格式说明 一级标题三号标宋居中题目 二级标题四号黑体左空2字,单占行汉字加顿号,如“一、” 三级标题四号仿宋体左空2字,单占行汉字加括号,如“(一)” 四级标题小四号黑体左空2字,单占行阿拉伯数字加下圆点,如“1.”

五级标题小四号宋体左空2字,右空1字,接排正文阿拉伯数字加括号,如“(1)”允许用于无标题段落 图、表、注释及参考文献体例 内容字体字号格式说明 图题五号宋体排图下,居中,单占行图号按流水排序,如“图1;“图2” 图注小五号宋体排图题下,居中,接排序号按流水排序,如“1.”;“2.” 表题五号黑体排表上,居中,可在斜杠后接排计量单位,组合单位需加括号如“表2几种发动机的最大功率/kW”“表5几种车辆的速度/(km/h)”表序号按流水排序,如“表1”、“表2” 表栏头小五号宋体各栏居中,计量单位格式同上 图文/表文小五号宋体表文首行前空1字,段中可用标点,段后不用标点

形势与政策论文之一带一路

形势与政策论文之一带一路 “一带一路”作为中国首倡、高层推动的国家战略,对我国现代化建设和屹立于世界的领导地位具有深远的战略意义。“一带一路”战略构想的提出,契合沿线国家的共同需求,为沿线国家优势互补、开放发展开启了新的机遇之窗,是国际合作的新平台。“一带一路”战略在平等的文化认同框架下谈合作,是国家的战略性决策,体现的是和平、交流、理解、包容、合作、共赢的精神。作为历史上丝绸之路的起点,自贸区应抓住机遇,进一步深化与东盟在各个层面的经济合作。 “一带一路”战略构想意味着我国对外开放实现战略转变。这一构想已经引起了国和相关国家、地区乃至全世界的高度关注和强烈共鸣。之所以产生了如此巨大的效果,就在于这一宏伟构想有着极其深远的重要意义。 首先,“一带一路”的战略构想顺应了我国对外开放区域结构转型的需要。众所周知,1978年召开的党的十一届三中全会开启了中国改革开放的历史征程。从1979年开始,我们先后建立了包括等5个经济特区,开放和开发了14个沿海港口城市和浦东新区,相继开放了13个沿边、6个沿江和18个陆省会城市,建立了众多的特殊政策园区。但显然,前期的对外开放重点在东南沿海,、、、、等省市成为了“领头羊”和最先的受益者,而广大的中西部地区始终扮演着“追随者”的角色,这在一定程度上造成了东、中、西部的区域失衡。“一带一路”尤其是“一带”起始于西部,也主要经过西部通向西亚和欧洲,这必将使得我国对外开放的地理格局发生重大调整,由中西部地区作为新的牵动者承担着开发与振兴占国土面积三分之二广大区域的重任,与东部地区一起承担着中国走出去的重任。同时,东部地区正在通过连片式的“自由贸易区”建设进一步提升对外开放的水平,依然是我国全面对外开放的重要引擎。 其次,“一带一路”战略构想顺应了中国要素流动转型和国际产业转移的需要。在改革开放初期,中国经济发展水平低下,我们亟需资本、技术和管理模式。因此,当初的对外开放主要是以引进外资、国外先进的技术和管理模式为主。有数据显示,1979至2012年,中国共引进外商投资项目763278个,实际利用外资总额达到12761.08亿美元。不可否认,这些外资企业和外国资本对于推动中国的经济发展、技术进步和管理的现代化起到了很大作用。可以说,这是一次由发达国家主导的国际性产业大转移。而今,尽管国仍然需要大规模有效投资和技术改造升级,但我们已经具备了要素输出的能力。据统计,2014年末,中国对外投资已经突破了千亿美元,已经成为资本净输出国。“一带一路”建设恰好顺应了中国要素流动新趋势。“一带一路”战略通过政策沟通、道路联通、贸易畅通、货币流通、民心相通这“五通”,将中国的生产要素,尤其是优质的过剩产能输送出去,让沿“带”沿“路”的发展中国家和地区共享中国发展的成果。 第三,“一带一路”战略构想顺应了中国与其他经济合作国家结构转变的需要。在中国对外开放的早期,以欧、美、日等为代表的发达经济体有着资本、技术和管理等方面的优势,而长期处于封闭状态的中国就恰好成为他们最大的投资

毕业论文参考文献(1)

中国网络营销在2004年取得了飞速的发展,可以说是自1999年以来发展最快的一年。2004年中国的网络营销尤其在网络营销服务市场、企业的网络营销基础建设等方面更为令人瞩目,这不仅是由于互联网整体环境的日益成熟,同时也取决于网络营销服务行业自身的发展,当然在这些发展热潮中也存在一些不容忽视的问题。总体说来,十个方面尤其值得在中国网络营销发展史上重点记录。 (1)企业网站建设取得了稳步发展但仍存在明显问题 企业网站是开展网络营销的综合性工具,专业性的企业网站是网络营销效果得以保证的基础。中国企业网站的发展首先表现在数量的稳定增加方面,其次是一些领域的网站如家电业、航空服务业等表现出整体专业性水平较高的行业特征。从《中国大型企业网络营销状况研究报告》的调查中发现,国内的大型企业在网站及其维护方面取得了可喜的进展,根据对国内11个行业的117家大型消费类企业(其中80%为上市公司)网站所进行的系统调查发现,超过半数的企业在1999年之前就已经建立了自己 的网站,并且几年来坚持网站内容更新,曾经成为一些文章中被批评的热点问题如“信息陈旧”、“面貌象简陋”等现象,现在实际上已经不再是主要问题,在美观性方面,部分企业网站甚至已经出现了美观有余而实用不足的状况。从这些外在的方面来看,企业网络营销的基础建设状况是值得肯定的,但一个不容忽视的现实问题是,大多数企业网站网站并没有发挥应有的价值,并且从网络营销的专业性看来,这些被调查的网站从整体策划到功能、服务、信息、运营等方面都还存在很大的问题,这些被归纳为“企业网站的十大问题”。从现象来看,这种状况通常被认为是企业网站运营策略失当,如网站推广不力、信息更新不及时等,但从更深入的层次上分析,则是由于缺乏对企业网站功能、实质以及与网络营销之间关系的深入了解所致。如何认识和解决这些问题,成为企业网络营销水平是否可以得到进一步提高的基础。 (2)搜索引擎营销热度进一步提高 搜索引擎在网络营销中的作用,有史以来从没有像2004年这样被推到至高无上的地位,甚至在一定程度上让人感觉到搜索引擎推广就是网站推广的惟一方法的印象,这种情况反映了搜索引擎营销服务市场发展达到了空前的热度。搜索引擎营销市场的形成和高速发展的首要原因,得益于互联网泡沫破裂后人们对于网络营销的期望从概念向实际收益转变的历史机遇:从2000年后半年互联网泡沫破裂开始,企业开始重新思考和认识网络营销的价值,经过2年多的实践和认识,以网站推广为基础的网络营销日益受到企业的重视,而传统的基于免费搜索引擎登录和免费信息发布等推广手段已经不适应目前的网络营销环境,因而需要更有效的推广方法,搜索引擎营销服务商适时地推出各种有效的网络营销产品,正好适应了企业的市场需求;其次,搜索引擎营销市场得以快速发展的直接推动,在很大程度上要归功于全国数以千计网络营销服务商的大力推广,这些服务商为开拓网络营销服务市场付出了艰苦的努力;第三个促成搜索引擎营销获得快速发展的重要原因,在于目前的网络营销服务市场中可供企业选择的网络营销服务产品还比较少,尤其是缺乏对于网站推广有明显效果的产品,因而为付费搜索引擎的发展提供了广阔空间,即使在付费搜索市场中,由于服务商数量少,行业呈明显的集中态势,因而行业竞争还不太显著,付费搜索在一定程度上还处于卖方市场状况。 (3)传统销售渠道主导网络营销产品市场 前文述及,搜索引擎营销市场的高速发展在很大程度上得益于网络营销服务商的推动,其实不仅是搜索引擎服务市场,其他可以作为标准化定价模式进行推广的网络营销相关产品,同样主要依靠传统的销售渠道来开拓市场,这其中包括网络实名/通用网址、网络广告、域名注册、虚拟主机、企业邮箱等。不可否认传统渠道为开拓网络营销服务市场

东财论文写作指导在线作业

东财《论文写作指导》在线作业一(随机) 一、单选题(共 10 道试题,共 40 分。) 1. 毕业论文选题要能敏锐地发现学科领域内有价值的但未被充分挖掘研究的领域,这属于遵循 了选题的()原则。B. 创新性原则 2. 作者在撰写文献综述时必须系统梳理研究问题的起源、发展和现状,具体地说就是必须采用 历史方法按照“由远到近”、“有大到小”和“由宽到窄”,这是撰写文献综述的()原则。 B. “文献树”原则 3. ()指在全面搜集、阅读大量的有关研究文献的基础上,经过归纳整理、分析鉴别,对所研 究的问题在一定时期内取得的研究成果、存在问题以及新的发展趋势等进行系统、全面的叙述和评论。 D. 文献综述 4. 下列关于内容摘要的叙述中哪一项是错误的()。 A. 摘要是毕业论文内容的高度浓缩,因此不必保持论文中的信息量不变 5. 正文的核心部分是:()。B. 主体 6. 抄袭的含义:()。B. 指将他人作品或者作品的片段窃为己有 7. 下面关于正文的叙述中,哪一项是错误的() B. 引论部分要有一定量的文字叙述,但不能单独编成一章 8. 下面哪一描述最好的概括了毕业论文的含义?() A. 毕业论文是高等院校应届毕业生在教师指导下按学术论文标准独立完成的具有一定学术 价值和应用价值的文章 9. 需要插入脚注时,找到Word编辑界面工具栏中“插入”下拉式菜单,选择(),里面有“脚注 和尾注”。 C. “引用” 10. 引论中最主要、所占篇幅最长的部分是()。C. 文献综述 二、多选题(共 10 道试题,共 40 分。) 1. 论文的构成项目包括以下内容:()。A. 封面 B. 内容摘要及关键词 C. 目录 D. 参考文献 2. 调查报告型毕业论文的一般特征有:()。A. 告知性 C. 真实性 D. 时效性 3. 以下哪些资料不能用作毕业论文的参考资料()。A. 地方小报、小网站的资料 B. 非正规出版物、内部刊物或工作总结等资料 C. 领导人讲话资料 4. 初稿的拟定方法有:()。A. 按提纲顺序分段进行 B. 按思考的成熟程度分部分进行 5. 构思论文提纲时一般根据()进行。A. 客观事物的发展变化规律 C. 写作意图

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导论 ............................................................................................ 错误!未定义书签。 一、问题提出 ...................................................................错误!未定义书签。 二、选题价值 ...................................................................错误!未定义书签。 三、文献综述 ...................................................................错误!未定义书签。 四、文章思路 ...................................................................错误!未定义书签。 五、研究方法 ...................................................................错误!未定义书签。 六、创新与不足 ...............................................................错误!未定义书签。第一章我国会计准则国际趋同概述 .......................................... 错误!未定义书签。 一、我国会计准则国际趋同的涵义及特征...................错误!未定义书签。 (一)会计准则国际趋同的含义......................错误!未定义书签。 (二)会计准则国际趋同的特征......................错误!未定义书签。 二、我国会计准则国际趋同的理论基础.......................错误!未定义书签。 (一)会计准则国际趋同的必要性..................错误!未定义书签。 (二)会计准则国际趋同的可行性..................错误!未定义书签。第二章我国新企业会计准则与国际财务报告准则的比较分析错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则与国际财务报告准则体系的差异错误!未定义 书签。 (一)国际财务报告准则的体系构成..............错误!未定义书签。 (二)我国新企业会计准则体系的构成..........错误!未定义书签。 (三)我国新企业会计准则体系与国际财务报告体系的比较和分 析..........................................................................错误!未定义书签。 二、我国新企业会计准则与国际财务报告准则项目涵盖范围的比较错误! 未定义书签。 三、我国会计准则体系与国际财务报告体系下财务会计概念框架的比较 ...........................................................................................错误!未定义书签。 四、我国新企业会计准则与国际财务报告准则差异的主要表现错误!未 定义书签。 (一)公允价值的适用范围不同......................错误!未定义书签。 (二)企业合并的范围和会计处理方法有差异错误!未定义书签。 (三)关联方及其交易的披露范围有区别......错误!未定义书签。 (四)资产减值的相关规定不一致..................错误!未定义书签。 (五)政府补助的会计处理有差距..................错误!未定义书签。 (六)资本与资本保全的处理未规定..............错误!未定义书签。 五、我国新企业会计准则与国际财务报告准则的具体差异错误!未定义 书签。 第三章我国新企业会计准则国际趋同的历程和影响 .............. 错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则国际趋同的历程...................错误!未定义书签。

毕业论文写作提纲模板(模板)

毕业论文写作提纲 标题:论中学教师对新课程改革的不适应性及应对策略 ХХХ (井冈山大学化学化工学院,江西吉安343009) 指导老师:ХХХХХ [摘要]基础教育新课程改革缘起于社会发展与课程功能滞后、素质教育与课程运作流弊、价值转型与课程旨趣单向等方面的矛盾动因。在这种背景下的新课程改革,给中小学教师带来了很大的不适,主要有教师的角色转换、教师的视角转换、教师的教学方式、学生的学习方式等方面所引起的心里不适,针对新课程改革中教师这些心理不适, 给出教师的自身努力、学校的策略和社会支持等三种应对策略。 [关键词]基础教育;新课程改革;教师;心里不适;应对策略 [引言]:随着新课程改革的进行,也有很多的专家、教师意识到了这个问题, 并对它展开了研究。但由于传统教育它的真的是根深蒂固,要想一下子改变 是非常难,研究也没有太深入的进行。因为课程的改革是势在必行的,教师 只有去适应它的变化,适应社会的发展,才能让自己更好的发展。那么,跟 着这个趋势,我们的研究将会越来越来剥出真相,更能掌握住新课程改革的 真是目的,提高我国的教育质量和水平。本文主要就对教师的这些心理不适 应进行分析,并提出一些相应的应对策略,总结其经验教训,以此给一些处 在这种状况下的教师做些参考。 [正文] 一引言 1.1基础教育新课程改革时代背景 1.1.1 社会发展与课程功能滞后 1.1.2素质教育与课程运作流弊 1.1.3价值转型与课程旨趣单向 二教师对新课程改革的不适应性 2.1 教师对由居高临下向平等融洽的角色转变的心里不适

2.2 教师对视角的转换的不适应 2.3 教师对新的教学方式的心里不适 2.4 教师对学生的新学习方式的心里不适应 2.5 教师对自我的心里不适 三应对新课程改革中教师心理不适的策略 3.1 教师的自身努力层面 3.1.1 教师要关注自身在新课改中的教师转换 3.1.2 提高教学监控能力 3.1.3 正视自己,提高自信,完善自我 3.2 学校策略层面 3.2.1 学校管理策略 3.2.3 学校的交流策略 3.3社会支持层面 3.1.1 加快教师专业化进程 3.3.2 建立科学的教师评价体系 3.3.3 要理解和尊重教师 四结束语

论文写作格式模板1

导论 ........................................................................................... 错误!未定义书签。 一、问题提出......................................................................... 错误!未定义书签。 二、选题价值......................................................................... 错误!未定义书签。 三、文献综述......................................................................... 错误!未定义书签。 四、文章思路......................................................................... 错误!未定义书签。 五、研究方法......................................................................... 错误!未定义书签。 六、创新与不足..................................................................... 错误!未定义书签。第一章我国会计准则国际趋同概述 ......................................... 错误!未定义书签。 一、我国会计准则国际趋同的涵义及特征......................... 错误!未定义书签。 (一)会计准则国际趋同的含义.................................. 错误!未定义书签。 (二)会计准则国际趋同的特征.................................. 错误!未定义书签。 二、我国会计准则国际趋同的理论基础............................. 错误!未定义书签。 (一)会计准则国际趋同的必要性.............................. 错误!未定义书签。 (二)会计准则国际趋同的可行性.............................. 错误!未定义书签。第二章我国新企业会计准则与国际财务报告准则的比较分析错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则与国际财务报告准则体系的差异错误!未定义书签。 (一)国际财务报告准则的体系构成.......................... 错误!未定义书签。 (二)我国新企业会计准则体系的构成...................... 错误!未定义书签。 (三)我国新企业会计准则体系与国际财务报告体系的比较和分析错误! 未定义书签。 二、我国新企业会计准则与国际财务报告准则项目涵盖范围的比较错误!未 定义书签。 三、我国会计准则体系与国际财务报告体系下财务会计概念框架的比较... 错 误!未定义书签。 四、我国新企业会计准则与国际财务报告准则差异的主要表现错误!未定义 书签。 (一)公允价值的适用范围不同.................................. 错误!未定义书签。 (二)企业合并的范围和会计处理方法有差异.......... 错误!未定义书签。 (三)关联方及其交易的披露范围有区别.................. 错误!未定义书签。 (四)资产减值的相关规定不一致.............................. 错误!未定义书签。 (五)政府补助的会计处理有差距.............................. 错误!未定义书签。 (六)资本与资本保全的处理未规定.......................... 错误!未定义书签。 五、我国新企业会计准则与国际财务报告准则的具体差异错误!未定义书签。第三章我国新企业会计准则国际趋同的历程和影响 ............. 错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则国际趋同的历程......................... 错误!未定义书签。 (一)改革初期市场经济会计的探索阶段1978年—1992年错误!未定义 书签。

本科生毕业论文参考格式教材

新疆农业大学毕业设计(论文)基本规范要求 (—)封面的基本要求见文后范本(规格为A4纸)。 (二)论文内容基本要求 1、标题。标题要简短、明确、有概括性。标题字数要适当,一般不宜超过 20个字。如果有些细节必须放进标题,可以分成主标题和副标题。 2、论文摘要或设计总说明。论文摘要以浓缩的形式概括研究课题的内容,中文摘要在300字左右,外文摘要以250个实词左右为宜。 设计总说明主要介绍设计任务来源、设计标准、设计原则及主要技术资料,中文字数要在1500~2000字以内,外文字数以1000个左右实词为宜。 3、正文。毕业设计(论文)正文包括: (1)选题背景。 (2)方案论证。 (3)过程(设计或实验)论述。 (4)结果分析。 (5)结论或总结。 4、参考文献与附录。参考文献是毕业设计(论文)不可缺少的组成部分,一般做毕业设计(论文)的参考文献不应少于10篇。 附录是对于一些不宜放在正文中,但有参考价值的内容,可编入毕业设计(论文)的附录中,例如与论文有关的图表、公式的推演、编写的程序运行结果,主要设备、仪器仪表的测试精度等等;如果文章中引用的符号较多时,为便于读者查阅,可以编写一个符号说明,注明符号代表的意义。 5、谢辞。谢辞要简短的文字对在课题研究和论文撰写过程中曾直接给予帮助的

人员(例如指导教师、答疑教师及其他人员)表示自己的谢意。 (三)毕业设计(论文)的写作细则 1、汉字。汉字必须使用国家公布的规范字。 2、标点符号。毕业设计说明书(论文)中的标点符号应按新闻出版署公布的“标点符号用法”使用。 3、名词、名称。科学技术名词术语尽量采用全国自然科学名词审定委员会公布的规范词或国家标准、部标准中规定的名称,尚未统一规定或叫法有争议的名称术语,可采用惯用的名称。使用外文缩写代替某一名词术语时,首次出现时应在括号内注明其含义。外国人名一般采用英文原名,非英语国家的人名按所在国原文,按名前姓后的原则书写。一般很熟知的外国人名(如牛顿、达尔文、马克思等)可按通常标准译法写译名。 4、量和单位。量和单位必须采用中华人民共和国的国家标准(GB3100~ GB3102-93)。非物理量的单位,如件、台、人、元等,可用汉字与符号构成组合形式的单位,例如:件/台、元/千米。 5、数字。毕业设计(论文)中的测量统计数据一律用阿拉伯数字,但在叙述不很大的数目时,一般不用阿拉伯数字。大约的数字可以用中文数字,也可以用阿拉伯数字。 6、标题层次。毕业设计(论文)的全部标题层次应有条不紊,整齐清晰。相同的层次应采用统一的表示体例,正文中各级标题下的内容应同各自的标题对应,不应有与标题无关的内容。 编号方法应采用分级编号方法,第一级为“1”、“2”、“3”等,第二级为“1.1”、“1.2”、“1.3”;“2.l”、“2.2”、“2.3”等,第三级为“1.1.1”、“1.1.2”、“1.1.3”;“1.2.1”、“1.2.2”、“l.2.3”“1.2.1.(1)”、“1.2.1.(2)”、“1.2.1.(3)”等。

【科学论文格式范文】 论文的格式模板范文

科技论文在情报学中又称为原始论文或一次文献,是科学和技术进步的科学记录和历史性文件,是对我们进行科学研究基本功的训练。下面是为大家整理的科学论文格式范文,希望你们喜欢。 科学论文格式范文 1 题目是科技论文的中心和总纲。 要求准确恰当、简明扼要、醒目规范、便于检索。一篇论文题目不要超出20个字。用小2号黑体加粗,居中。 2 署名 署名表示论文作者声明对论文拥有著作权、愿意文责自负,同时便于读者与作者联系。署名包括工作单位及联系方式。工作单位应写全称并包括所在城市名称及邮政编码,有时为进行文献分析,要求作者提供性别、出生年月、职务职称、电话号码、e-mail等信息。 用小4号宋体 3 摘要 摘要是对论文的内容不加注释和评论的简短陈述,是文章内容的高度概括。主要内容包括 1)该项研究工作的内容、目的及其重要性。 2)所使用的实验方法。 3)总结研究成果,突出作者的新见解。 4)研究结论及其意义。 中文摘要200字左右,中文名称的“内容摘要”用小2号黑体加粗,居中,其内容另起一行用小4号宋体(5倍行距),每段起首空两格,回行顶格。 英文“内容提要”项目名称规定为“Abstract”,用小2号Times New Roman字体加粗,居中,其内容另起一行用小4号Times New Roman 字体,标点符号用英文形式。 4 关键词 关键词是为了满足文献标引或检索工作的需要而从论文中萃取出的、表示全文主题内容信息条目的单词、词组或术语,一般列出3~8个。 有英文摘要的论文,应在英文摘要的下方著录与中文关键词相对应的英文关键词(key

words )。 中文名称的“关键词”另起一行用小4号黑体加粗,内容用小4号黑体,一般不超过8个词,词间空一格。 英文“关键词”另起一行,项目名称规定为“Key words”,用小4号Times New Roman 字体加粗,顶格,其内容接“Key words”后空一格,用小4号Times New Roman字体加粗,词间用分号“;”隔开。 5 引言 引言又称前言、导言、序言、绪论,它是一篇科技论文的开场白,由它引出文章,所以写在正文之前。引言也叫绪言、绪论。 引言的写作要求 (l)引言应言简意赅,内容不得繁琐,文字不可冗长,应能对读者产生吸引力。学术论文的引言根据论文篇幅的大小和内容的多少而定,一般为200~600字,短则可不足100字,长则可达1000字左右。 (2)比较短的论文可不单列“引言”一节,在论文正文前只写一小段文字即可起到引言的效用。 (3)引言不可与摘要雷同,不要写成摘要的注释。一般教科书中有的知识,在引言中不必赘述。 (4)学位论文为了需要反映出作者确已掌握了坚实的理论基础和系统的专门知识,具有开阔的科研视野,对研究方案作了充分论证,因此,有关于历史回顾和前人工作的综合评述,以及理论分析等,则可将引言单独写成一章,用足够的文字详细加以叙述。 (5)引言的目的应是向读者提供足够的背景知识,不要给读者悬念。作者在引言里不必对自己的研究工作或自己的能力过于表示谦意,但也不能自吹自擂,抬高自己,贬低别人。 引言的格式要求 项目名称用小2号黑体加粗,居中;内容另起一行用小4号宋体。每段起首空两格,回行顶格。 6正文 正文是科技论文的主体,是用论据经过论证证明论点而表述科研成果的核心部分。正义占论文的主要篇幅,可以包括以下部分或内容调查对象、基本原理、实验和观测方法、仪器设备、材料原料。实验和观测结果、计算方法和编程原理、数据资料、经过加工整理的图表、形成的论点和导出的结论等。

关于国家一带一路战略意义的论文

关于国家一带一路战略意义的论文 导语:“一带一路”战略由中国倡议,而建设则需要得到相关国家的理解和支持,中国要能与他们取得共识,开展密切合作,共同参与建设。 论文摘要: 2013年9月主席访问哈萨克斯坦时提出共同建设“丝绸之路经济带”的倡议,10月在访问东 盟国家时提出共同建设“21世纪海上丝绸之路”的战略构想。由此,“一带一路”作为中国一个新时期对外大战略浮出水面。中国为何如此重视“一带一路”的建设?究竟如何认识“一带一路”的深刻意义?要真 正办好这件大事,还是需要加深对它的认识。特别是,“一带一路”战略由中国倡议,而建设则需要得到 相关国家的理解和支持,中国要能与他们取得共识,开展密切合作,共同参与建设。 论文关键词:“一带一路”,发展战略,对外开放,经济发展 2013年9月主席访问哈萨克斯坦时提出共同建设“丝绸之路经济带”的倡议,10月在访问东盟国家时提出共同建设“21世纪海上丝绸之路”的战略构想。由此,“一带一路”作为中国一个新时期对外大战略浮出水面。前不久,中央召开中央财经领导小组会议,就如何落实“一带一路”进行研究,指出,“一带 一路”的提出是“时代的要求”,是“一个包容性的巨大发展平台”,“把快速发展的中国经济同沿线国 家利益结合起来”。他要求,“要集中力量办好这件大事”,“要抓住关键的标志性工程,力争尽早开花 结果”。这表明,落实“一带一路”战略正式提上日程,要由计划见之于行动了。 中国为何如此重视“一带一路”的建设?究竟如何认识“一带一路”的深刻意义?要真正办好这件大事,还是需要加深对它的认识。特别是,“一带一路”战略由中国倡议,而建设则需要得到相关国家的理解和 支持,中国要能与他们取得共识,开展密切合作,共同参与建设。 一、“时代要求”的含义 为何说“一带一路”是时代的要求?在笔者看来,这是因为我们所处的时代最突出的特征是和平与发展,也就是说,追求和平,实现发展是各国人民最大的诉求。 中国的快速发展引起世界的高度关注,其中最为关注的是中国强大了要干什么,如何干。世界以往发 展的历史表明,大国必争,强国必霸。尽管中国一再宣称,坚持走和平发展的道路,但是,别的国家仍然 不太相信,听其言,观其行,这也不难理解。人们担心,一旦中取扩型战略,与美国争夺影响力,世界就 会陷入“修昔底德陷阱”,发生大国争端,进而引发大的战争。作为不走传统大国崛起道路宣示的实践,

20春东财《论文写作指导》单元作业一答案2664

(单选题)1: 案例设计型毕业论文的含义:()。 A: 是对某些领域(如:企业、政府部门、社会公众)特定管理情境的真实、客观的描述和介绍,是管理情境的真实再现 B: 是指用一个具有代表性的典型事件来说明某些经济管理问题的论文 C: 包括案例正文和案例分析两部分 D: 是反映社会实践中具有一定典型性的经验,以介绍先进的典型经验为主 正确答案: B (单选题)2: 获取一手资料与事实资料的常用方法是()。 A: 纸质报刊媒体的报道 B: 年鉴、史料 C: 实地调查 D: 政策文件 正确答案: C (单选题)3: 下列关于标题句式的叙述中,哪一项是正确的()。 A: 《我国汽车工业必须确立五大发展战略》是陈述句式标题 B: 《中国面临输入型通货膨胀》是陈述句式标题 C: 《浅析我国石油与化工企业品牌文化建设的几个误区》是判断句式标题 D: 《CPI上涨不会引发全面通货膨胀》是判断句式标题 正确答案: D (单选题)4: 间接引用的含义:()。 A: 对他人的观点或结论用自己的语言进行归纳提练 B: 直接使用作者的原话来佐证自己的观点 C: 应包括文章中所引用的每一篇资料 D: 将他人作品的精华部分作为自己的主要部分 正确答案: A (单选题)5: 毕业论文中的下述表述,“一个广为流传但未经证实的说法是,在中国,生活被房贷按揭所改变的青年,有2600万。”此类表述违背了毕业论文写作的哪一原则()。A: 创新性原则 B: 学术性原则 C: 科学性原则 D: 平易性原则 正确答案: C (单选题)6: 朗读草稿,发现问题进行修改的方法是:()。 A: 念读修改法 B: 热加工法 C: 冷却修改法 D: “集体会诊”法 正确答案: A

论文写作要求及模板

石家庄经济学院成人高等教育毕业论文(设计)写作要求 一、写作步骤 1.选题:结合所学专业理论和学科基础知识,深入了解和分析本学科或本专业的理论实务现状和实践中存在的问题及研究现状,综合运用基础理论、专业知识进行综合分析、研究,确立自己的研究题目。选题应结合毕业实习的具体情况,反映专业的前沿和实际应用的需要,不得选择内容陈旧过时或没有应用价值的问题。题目应具有比较强的概括性,反映文章的核心内容。 2.收集资料:题目选定后,在指导老师的指导下开展有关调研和查阅有关资料,资料内容要翔实,具有普遍意义和较强的佐证性,收集途径可以通过实习收集所在单位的实际情况(不得直接在论文或设计中应用);也可利用图书、报刊、专业杂志收集与自己主题相关的文章和报导(必须注明刊名、题目、作者、期号、页码);或在网上搜集(但必须注明网名、题目、作者、发表时间),但不得直接下载全部文章。 3.拟定写作提纲和写作进度:根据题目要求和查阅的文献资料,对其进行加工、提炼和整理,列出详细的写作提纲。根据提纲内容和论文的写作时间要求制定出写作进度安排(写作时间表)。 4.完成论文(设计)初稿:按照提纲要求完成论文(设计)初稿。 5.修改初稿:初稿经指导老师审阅并提出修改意见后,按修改意见对初稿进行修改,直至指导老师认为可以定稿为止。 6.定稿。论文定稿后按时提交给指导老师。 二、写作要求与编写格式 (一)论文(设计)写作要求: 1.论文(设计)应做到观点明确、内容充实、论据充分、论证有力、结论(解决方案)正确。整体结构合理,层次分明。不得拼凑文章,更不得抄袭。 2.论文(设计)写作过程中必须及时以各种形式和指导教师沟通,并得到和记录指导意见,并在交阅下一稿时将前稿意见附在前端,一般情况下(论文)设计题目确定并开始写作后,不得变更题目或主要内容。 3.(论文)设计字数要求不少于5000字。 4.有异议问题应按照指导教师意见执行。 (二)论文(设计)格式要求全部统一,内容包括: 1.封面; 2.开题报告、成绩评议表等; 3.中文摘要(含关键词); 4.英文摘要(含关键词);(该部分可选) 5.目录; 6.正文; 7.参考文献; 8.致谢; 9.封底

一带一路小论文

一带一路 一带一路是中国首倡,但不是中国一家的独奏曲,而是各国共同参与的交响乐。一带一路不是一个空洞的口号,而是看得见、摸得着的具体举措。它抓住互联互通这个关键环节,聚焦经济合作特别是基础设施建设,契合沿线国家和本地区发展的需要。我们坚持共商、共建、共享的原则,突出务实合作、互利共赢,一步一个脚印,把中国发展同相关国家发展紧密结合。 一带一路的战略构想就是“新丝绸之路经济带”和“21世纪海上丝绸之路”的战略构想,强调各国之间共同打造互利共赢的利益共同体。众所周知,“丝绸之路”是中国最早实行对外开放的标志,曾在古代促进了我国与西方国家的经济、政治、文化等共同的发展,是一条具有深刻的历史文化底蕴与重要意义的通道。中国经济发展进入新常态,机遇和挑战并存,挑战之一就是地区发展不平衡。一带一路建设通过扩大向西开放,以开放促发展,有助于加快西部发展步伐,助推东中西部梯次联动并进。同时,一带一路涵盖了中国中西部和沿海省区市,紧扣中国区域发展战略、新型城镇化战略、对外开放战略,将助推中国形成全方位开放新格局。 一带一路的提出促进共同发展,实现共同繁荣的合作共赢之路,增进信任理解,加强全方位交流的和平友谊之路。一带一路战略的实施不仅有机遇也充满了挑战,需要我们有一定的风险意识,未雨绸缪。 探索经济增长之道实行全方位开放的——大创新。推动沿线国家实现合作与对话,建立更平等均衡的新型全球发展伙伴关系夯实世界经济长期稳定发展的

基础,实现全球化的平衡,正推动全球再平衡。鼓励向西开发,向西推广中国伏质产能和比较伏势产业。推动建立持久和平,普遍安全,共同繁荣的和谐世界。 共商下一阶段重要合作举措,进一步推动各方加强发展战略对接,深化伙伴关系,实现联动发展。 一带一路不但能促进国家的经济繁荣。而且还能与邻国友好共处,推动产业的发展。实现国民经济的快速发展,寻找新的经济发展与飞动力和增长点。在推进中国经济社会发展和结构调整的同时,推动国际合作,实现合作共赢。求木之长者,必固其根本,欲流之远者,必浚其泉源。我们期待同各方一道,通过主办高峰论坛,推进一带一路建设,为促进世界经济增长、深化地区合作打造更坚实的发展基础,创造更便利的联通条件,更好造福各国和各国人民。 一带一路构想具有十分丰富的内涵。首先,它体现了对古丝绸之路精神的继承和发扬。2000多年的交往历史证明,只要坚持丝绸之路精神,不同种族、不同信仰、不同文化背景的国家完全可以共享和平、共同发展。在建设丝绸之路经济带和“21世纪海上丝绸”之路的今天,更需要将丝绸之路承载的和平合作、开放包容、互学互鉴、互利共赢精神薪火相传,在文明交流史上续写灿烂篇章。 对于中国而言,“一带一路”构想寄托着多层次的区域合作愿景,对于丝绸之路中国国内段和国际段都有着重要的发展意义。 开创地区新型合作,中国改革开放是当今世界最大的创新,一带一路作为全方位对外开放的战略,正以经济走廊理论,经济理论,21世纪的国际合作理论等创新经济发展理论,区域合作理论,全球化理论。

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关键词:木聚糖降解菌;筛选;分子鉴定;木聚糖酶;酶活 0 引言 纤维素类物质是一类大量存在而又可再生的重要潜在资源,半纤维素占总纤维素的15%~30%,其中主要成分是木聚糖。与纤维素相比,半纤维素更易为微生物所降解和转化[1]。 该酶具有广泛的应用前景[2] ,研究,已有不少研究者对黑曲霉、木霉(Trichoderma sp.)等真菌及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、环状芽孢杆菌(B.circulans)等细菌的木聚糖酶进行了研究。 糖,从中很容易筛选得到高效降解木聚糖的菌株。本研究主要从宝天曼森林腐木中富集、分离、筛选出产木聚糖酶菌株,并分析它们木聚糖酶的酶

活力大小,找出酶活力较高的分离菌株。最后通过分子生物学方法测定分离菌株的26S rDNA 序列并对其进行序列相似性分析和系统发育树分析,初步鉴定出分离菌株在系统发育上的分类地位。 材料与方法 样品 取自实验室保存的宝天曼地区采集的腐木。 试剂 溴钾酚绿、1%刚果红溶液、1 mol/L NaCl 溶液、柠檬酸缓冲液、DNS 试剂、试剂酵母基因组提取试剂盒、PCR Magic Mix2.0、NL 1、引物NL 4、TAE 缓冲液、琼脂糖凝胶、EB 试剂。 培养基[3] 木聚糖1%、酵母氮基础培养基1%、氯霉素(80 μL/100 mL); 0.5%2%、80 μL/100 mL ); 1%、(80 mL ); 0.3%、麦芽粉0.3%、蛋白胨0.5%、琼脂2%、氯霉μL/100 mL ); 1.4 菌株筛选[4,5] 1.4.1 富集培养 取7支干净小试管,向每支试管中分装入3~5 mL 富集培养基,于121 ℃高压灭菌锅中灭菌20 min 。用镊子夹取少许实验室保存的7种森林腐木分别放入已灭菌的富集培养基中,于28 ℃温箱中富集培养2~3 d 。 1.4.2 平板分离 对培养后变混浊的富集培养液按照梯度稀释法用无菌水稀释到10-5,在超净工作台中的无菌条件下,准确吸取100 μL 的10-3~10-5不同稀释倍数的菌液涂布于已灭菌的平板培养基上,于28 ℃温箱中倒置培养2~3 d 。 1.4.3 纯化菌种 根据菌落形态特征的比对,找出不同形态的菌株。在无菌条件下,挑取不同形态的单菌落在已灭菌的纯化培养基上进行扇形划线,于28 ℃温箱

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木聚糖降解菌的筛选及分子鉴定 作 者:××× 指导老师:××× 从宝天曼地区采集的腐木中富集、分离出了16株能够降解木聚糖的 6株菌株在摇床180 r/min 、28 ℃的条件下发酵培养48 h M3 。提取菌株M3的基因组进行26S rDNA PCR 初步鉴定菌株M3属于木聚糖降解菌;筛选;分子鉴定;木聚糖酶;酶活 0 引言 纤维素类物质是一类大量存在而又可再生的重要潜在资源,半纤维素占总纤维素的15%~30%,其中主要成分是木聚糖。与纤维素相比,半纤维素更易为微生物所降解和转化。该酶具有广泛的应用前景[2] , 研究,已有不少研究者对黑曲霉、木霉(Trichoderma sp.)等真菌及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、环状芽孢杆菌(B.circulans)等细菌的木聚糖酶进行了研究。 糖,从中很容易筛选得到高效降解木聚糖的菌株。本研究主要从宝天曼森林腐木中富集、分离、筛选出产木聚糖酶菌株,并分析它们木聚糖酶的酶 活力大小,找出酶活力较高的分离菌株。最后通过分子生物学方法测定分离菌株的26S rDNA 序列并对其进行序列相似性分析和系统发育树分析,初

步鉴定出分离菌株在系统发育上的分类地位。 材料与方法 样品 取自实验室保存的宝天曼地区采集的腐木。 试剂 溴钾酚绿、1%刚果红溶液、1 mol/L NaCl 溶液、柠檬酸缓冲液、DNS 试剂、试剂酵母基因组提取试剂盒、PCR Magic Mix2.0、NL 1、引物NL 4、TAE 缓冲液、琼脂糖凝胶、EB 试剂。 培养基[3] 木聚糖1%、酵母氮基础培养基1%、氯霉素(80 μL/100 mL); 0.5%2%、80 μL/100 mL ); 1%、(80 mL ); 0.3%、麦芽粉0.3%、蛋白胨0.5%、琼脂2%、氯霉μL/100 mL ); 1.4 菌株筛选[4,5] 1.4.1 富集培养 取7支干净小试管,向每支试管中分装入3~5 mL 富集培养基,于121 ℃高压灭菌锅中灭菌20 min 。用镊子夹取少许实验室保存的7种森林腐木分别放入已灭菌的富集培养基中,于28 ℃温箱中富集培养2~3 d 。 1.4.2 平板分离 对培养后变混浊的富集培养液按照梯度稀释法用无菌水稀释到10-5,在超净工作台中的无菌条件下,准确吸取100 μL 的10-3~10-5不同稀释倍数的菌液涂布于已灭菌的平板培养基上,于28 ℃温箱中倒置培养2~3 d 。 1.4.3 纯化菌种 根据菌落形态特征的比对,找出不同形态的菌株。在无菌条件下,挑取不同形态的单菌落在已灭菌的纯化培养基上进行扇形划线,于28 ℃温箱中倒置培养2~3 d 。按照同样的方法划线2~3次后即可得到纯菌落。 用镊子夹取已灭菌的牙签,将纯化培养基中的纯菌落点蘸到鉴别培养

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