基因工程
1、（10浙江）在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（A）
A.用限制性核酸内切酶切割烟草茶叶病毒的核酸
B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C.将重组DNA分子导入原生质体
D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
2、（10全国）下列叙述符合基因工程概念的是
A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因
B．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株
C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株
D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上
3、（10广东）新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是
A.PCR技术——扩增蛋白质
B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体
C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒
D.花粉离体培养——培育单倍体植物
【答案】BD
4、（10江苏）下列关于转基因植物的叙述。正确的是
A．转入到油菜的抗除草剂基因，可能通过花粉传人环境中
B．转抗虫基因的植物．不会导致昆虫群体抗性基因撷宰增加
C．动物的生长激素基因转人植物后不能表达
D．如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题
【答案】A
5、（10江苏）下列关于利用胚胎工程技术繁殖优质奶羊的叙述．错误的是
A．对受体母羊与供体母羊进行同期发情处理
B．人工授精后的一定时间内，收集供体原肠胚用于胚胎分割
C．利用胚胎分剖技术可以获得两个基因型完全相同的胚胎
D．一次给受体母羊檀人多个胚胎．可增加双胞胎和多胞胎的比例
【答案】B
6、（10江苏）老年痴呆症患者的脑血管中有一种特殊的β一淀粉样蛋白体，它的逐渐积累
可能导致神经元损伤和免疫功能下降．某些基因的突变会导致β一淀粉样蛋白体的产生和积累。下列技术不能用于老年痴呆症治疗的是
A．胚胎移植技术 B．胚胎干细胞技术 c．单克隆抗体技术D．基因治疗技术
【答案】A
7、（11天津）某致病基因h位于X染色体上，该基因和正常基因H中的某一特定序列BclI 酶切后，可产生大小不同的片段（如图1，bp表示碱基对），据此可进行基因诊断。图2为某家庭病的遗传系谱。
下列叙述错误的是
A h基因特定序列中Bcl 1酶切位点的消失是碱基序列改变的结果
B II-1的基因诊断中只出现142bp片段，其致病基因来自母亲
C II-2的基因诊断中出现142bp，99bp和43bp三个片段，其基因型为X H X h
D II-3的丈夫表现型正常，其儿子的基因诊断中出现142bp片段的概率为1/2.
答案：D
8、（11四川）北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是
A过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，
C过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
答案：B
9、（11浙江）ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误
．．的是
A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒
B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点
C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada
D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子
答案：C
10、（12浙江）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
【答案】A
11、（12江苏）下列关于转基因生物安全性的叙述，错误的是
A．种植转基因作物应与传统农业种植区隔离
B．转基因作物被动1物食用后，目的基因会转入动物体细胞中
C．种植转基因植物有可能因基因扩散而影响野生植物的遗传多样性
D．转基因植物的目的基因可能转入根际微生物
答案：B
11.（08全国）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有一个酶切位点被该酶切断，则理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是
A.3
B.4
C.9
D.12
15、（12四川）将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后，重新置入大肠杆菌的细胞内，通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是
A．发酵产生的生长激素属于大肠杆菌的初级代谢产物
B．大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传
C．大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等
D．生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶
答案：B。
12．（12浙江）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
【答案】A
5.（2012四川）2．将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后，重新置入大肠杆菌的细胞内，通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是
A．发酵产生的生长激素属于大肠杆菌的初级代谢产物
B．大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传
C．大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等
D．生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶
答案：B。
12、（12福建）肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答：
(1)进行过程①时，需用酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为。
(2)进行过程e委时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取.
进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中(RASmRNA／RAS蛋白质)含最减少引起的。
答案：⑴限制（限制性核酸内切）启动子⑵胰蛋白酶⑶RNA RAS蛋白质
14、（12全国）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有和。
（２）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。
（３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。
（４）反转录作用的模板是，产物是。若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。
（５）基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。
（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是。
【答案】（１）平末端和粘性末端（２）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同（３）Ｔ４Ｅcoli （４）mRNA 单链ＤＮＡＰＣＲ（聚合酶链式反应）（５）动植物病毒λ噬菌体的衍生物（６）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
16、（10福建）红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图
（1）图中①所指的是技术。
（2）图中②所指的物质
是，③所指的物质
是。
（3）培养重组CHO 细胞时，为便于清除代谢
产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应
定期更换。
（4）检测 rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆
抗体。分泌单克隆抗体的细胞，
可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤
细胞融合而成
答案：（1）PCR （2）mRNA rhEPO （3）
培养液（4）杂交瘤
17、（12天津）黄曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能表达AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。
( 1 ) AFB1属于类致癌因子。
( 2 ) AFB1能结合在DNA 的G 上．使该位点受损伤变为G ' ，在DNA复制中，G '会
与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为。
( 3 ）下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图
据图回答问题：
①在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株．经测定．甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶：乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶．过程l 应选择菌液的细胞提取总RNA ，理由是
②过程Ⅱ中，根据图示，可以看出与引物结合的模版是
③检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采用方法。
( 4 ）选取不含AFB1的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB1解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果间下表：
据表回答问题：
①本实验的两个自变量，分别为。
②本实验中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是。
③经测定，某污染饲料中AFB1含量为100μg/kg ，则每千克饲料应添加克AFB1解毒酶．解毒效果最好．同时节的了成本。
（5）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高每的活性出发，设计语气的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的。
【答案】( 1 )化学( 2 )
（3）①甲因为甲菌液细胞含解毒酶，意味着完成了基因的表达，所以应选择甲菌液的细胞提取总RNA
②cDNA. ③抗原-抗体杂交(4）①AFB1的有无和AFB1解毒酶的含量。
②B组③ 5
(5）脱氧核苷酸序列。
18、（10天津）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet R表示四环素抗性基因，amp R表示氨苄青霉素抗性金银，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是（填字母代号）。
A.启动子
B. tet R
C.复制原点
D. amp R
（3）过程①可采用的操作方法是（填字母代号）。
A.农杆菌转化
B. 大肠杆菌转化
C.显微注射
D. 细胞融合
（4）过程②可采用的生物技术是。
（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的性。（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用（填字母代号）技术。
A.核酸分子杂交
B. 基因序列分析
C.抗原—抗体杂交
D. PCR
（1）HindⅢ和BamHⅠ；氨苄青霉素
（2） A
（3） C
（4）胚胎移植技术
（5）全能
（6） C
19、（10江苏）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相
关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有▲个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越▲。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是▲。（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止▲。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入▲酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了▲。
（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在▲的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。【答案】（1）0、2（2）高（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接
（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞（7）蔗糖为唯一含碳营养物质
20、（10海南）请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：
（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、＿＿＿＿、＿＿＿＿＿以及在母体中发育和产出等过程。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其＿＿＿＿＿。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和＿＿＿＿＿。
（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是＿＿＿＿＿＿＿、基因表达载体的构建、＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺细胞）。
答案（1）早期胚胎培养（1分）胚胎移植（2分）
（2）获能第一极体（每空1分，共2分）
（3）促性腺激素（其他合理答案也给分）（2分）
（4）获取目的基因（2分）将目的基因导入受体细胞（2分）
目的基因的检测与鉴定（2分）人干扰素基因（或目的基因）（1分）
终止子（1分）标记基因（1分）显微注射法（1分）受精卵（1分）21、（10山东）胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。
（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是_____；从良种公牛采集的精子需_____后才能进行受精作用。
（2）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供____气体
以维持____。
（3）图中过程A称为_____，它在胚胎工程中的意义在于_____。
（4）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是____；获得转基因母牛后，如果_____即说明目的基因已经表达。
【答案】（1）使卵母细胞成熟（或：使卵母细胞获得受精能力）；获能
（2）CO2；培养液（基）的pH（3）胚胎移植提高优良母畜的繁殖率。
（4）显微注射法牛奶中含有人类白细胞介素（或：牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素）22、（11江苏）请回答基因工程方面的有关问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内
DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链
DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的
DNA片段所占的比例为▲。
②在第▲轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷
酸链等长的DNA片段。
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计
的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。
①第1组：▲；②第2组：▲。
(3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为▲。
(4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。
(1)①15/16 ②三
(2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效
②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
(3) DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结
合到双链DNA片段的引物链上
(4)见右图
23、（11北京）T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。
（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除，因为后者产生的会抑制侧芽的生长。
（2）为筛选出已转化的个体，需将T
代播种在含的培养基上生长，成熟后自
1
代）。
交，收获种子（称为T
2
代播种在含的培养基上，获得（3）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T
2
所需个体。
（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与植株进行杂交，再自交代后统计性状分离比。
（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，
从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性。
（6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。
其过程是：提取植株的DNA，用限制酶处理后，再用将获得
的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链
DNA片断中选取作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。答案：
（1）顶芽生长素
（2）（一定浓度的）除草剂
（3）（一定浓度的）盐
（4）野生型 1
（降低
（6）突变体DNA连接酶B、C
24、（11安徽）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前，需用___________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。
(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
答案：（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）（2）启动子终止子（3）TaqDNA聚合酶对干扰素基因特异性的DNA引物对（4）增大细胞贴壁生长的附着面积
25、（11海南）回答有关基因工程的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_平__末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为DNA—RNA分子杂交。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素原（蛋白质）_，常用抗原-抗体杂交技术。
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T—DNA_中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体_上。
26、（11上海）回答下列有关基因工程的问题。
基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Ap r表示抗青霉素的抗性基因，Tc r表示抗四环素的抗性基因。
将两端用E1切开的Tc r基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）
A．X－1
B．X－2
C．X－3
D．X－4
若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
如果X－1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X－2（Tc r基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为＿＿＿＿＿＿＿＿＿对碱基。
若将外源的Tc r基因两端用E2切开，再与用E2切开的X－1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X－4的细胞数与含X－1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
答案：特异性地识别和切割DNA（ABC）无质粒细胞）含X—3的细胞4750
不能DNA连接酶对DNA片段没有选择性/两段DNA末端相同
27、（11重庆）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(T n)功能的流程示意图。
（1）与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜T n基因的mRNA中UGA变为ＡＧＡ，其末端序列成为“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＡＣＵＣＵＡＡ”，则T n比ｔ多编码个氨基酸（起始密码子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ为终止密码子）。
（２）图中①应为。若②不能在含抗生素Ｋａｎ的培养基上生长，则原因
T基因与拟南芥T基因的功能相是 .若③的种皮颜色为，则说明油菜
n
同。
T基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个t基因，则③中进行减数分裂（3）假设该油菜
n
的细胞在联会时的基因为；同时，③的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现为；取③的茎尖培养成16颗植珠，其性状通常（填不变或改变）。
（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥（填是或者不是）同一个物种。
答案：（1）2 （2）重组质粒（重组DNA分子）重组质粒未导入深褐色
（3）TnTntt；黄色正常、黄色卷曲；不变（4）是
28、（11广东）登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热、出血甚至休克。科学家用以下方法控制病毒的传播。（1）将S基因转入蚊子体内，使蚊子的唾液腺细胞大量表达S蛋白，该蛋白可以抑制登革热病毒的复制。为了获得转基因蚊子，需要将携带S基因的载体导入蚊子的
细胞。如果转基因成功，在转基因蚊子体内可检测出、和。（2）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB）。A、B基因位于非同源染色体上，只有A或B基因的胚胎致死。若纯合的雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1群体中A基因频率是，F2群体中A基因频率是。
（3）将S基因分别插入到A、B基因的紧邻位
置（如图11），将该纯合的转基因雄蚊释放
到野生群体中，群体中蚊子体内病毒的
平均数目会逐代，原因是。
答案：（1）受精卵S基因、由S基因转录的mRNA
S蛋白
（2）50% 60%
（3）减少S基因表达的S蛋白会抑制登革热病毒复制
29、（11山东）人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠________中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为__________，质粒作为_________,二者需用________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有________有关。
（3）子代大鼠如果________和__________，即可分别在水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。
答案：（1）卵巢（2）目的基因载体同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）限制酶切割位点（3）检测到体内有相关蛋白出现高血压（4）体外受精
30、2003年非典曾在我国南方蔓延，有些地区还出现了死亡病例。科学家已经分离出该病病毒（一种RNA病毒）。某制药厂根据下面流程图生产预防和治疗该病毒的抗体，据图回答有关问题：
（1）进行过程a之前，必须对小鼠注射-----------------，使小鼠产生免疫反应。
（2）若细胞甲是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞乙是从小鼠体内提取的--------------细胞。
促进b过程常用的化学诱导剂是-----------。假设仅考虑某两个细胞的融合，则
可形成-----------种类型的细胞丙，因此需用特定的选择培养基筛选出-----------
细胞用于培养。
（3）选出此细胞后还需进行-----------------培养。
（4）上述细胞经培养后还需进行---------------检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。理论上，注射了该抗体的人群不能长期具有对该病
毒的免疫能力，试分析原因-------------------。(至少写出两点).
答案：(1)灭活的非典病毒(2)B淋巴(浆) PEG 3 杂交瘤(3)克隆化(4)抗体(抗体阳性) 该抗体在人体内存在时间短;病毒发生变异
31、如图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答;
(1)该实验所用受体猪具有体型小,食量小,宜粗饲等优点.某养猪厂引进了一批这种猪,
并用现代生物工程技术有效提高这种优质猪的生育效率.他们用促性腺激素处理适龄母猪,使其一次排出比自然情况下多几倍到几十倍的卵子.采集的卵母细胞人工培育至-----------------时期才具备与精子受精的能力.该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和-----------------.体外受精前要对精子进行一定的处理,使其------------------.
受精时为阻止后来的精子进入而引起多精入卵受精,卵子具备的两道屏障分别是
-----------------------.然后将多枚受精卵移入代孕母猪完成生殖过程.
(2)上图中通过过程①②形成重组质粒,需要限制酶切取目的基因和切割质粒. 限制酶
Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GA TCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。请画出质粒
被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端过程---------------------------。
(3)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用的方法是------------------。然后要
通过DNA分子杂交技术，来检测GFP基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞-----------
上。为了检测猪细胞中目的基因是否转录出mRNA，可用-----------------作为探针进
行分子杂交。若通过基因工程技术，利用猪乳汁来生产人类血清白蛋白，在基因表
达载体构建时人血清白蛋白基因首端必须连接----------------------------。
(4)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因
可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是---------------------。
答案：(1)减数第二次分裂中期第一极体获能透明带反应和卵黄膜封闭作用
(2) —G↓GATCC—限制酶Ⅰ—G GATCC—
—CCTAG↓G—------------------------- —CCTAG G—
(3)显微注射技术染色体DNA上（基因组中）荧光分子或放射性同位素标记的目的基因猪乳腺蛋白基因启动子
(4)鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含目的基因的细胞筛选出来