UF1000尿沉渣全自动流式细胞仪误差研究
【摘要】目的比对UF-1000尿沉渣全自动流式细胞仪、尿11A干化学法、尿显微镜镜检法三种方法检测结果，总结影响因素。方法留取本院800例住院患者新鲜晨尿，同时用三种方法检测。结果UF-1000尿沉渣全自动流式细胞仪检测尿液红细胞、白细胞、管型方面均有误差。结论三种方法联合应用，降低检验误差，提高尿液检验质量。
【关键词】UF-1000尿沉渣全自动流式细胞仪；尿11A干化学法；显微镜镜检法
随着医学检验技术的发展，尿沉渣自动分析技术逐渐推广。日本sysmex公司的UF-1000是采用流式细胞仪的工作原理，将一定量的尿液中各种有形成分用荧光染料染色后，进入流式通道，测定激光照射下各种有形成分的前向散射光强度、侧向散射光强度和脉冲幅度、荧光强度和荧光脉冲幅度和细胞电阻值的大小，由计算机根据特定分析软件区别和计算各种有形成分。该仪器使用起来快速、简便，具有很高的临床价值。但是，任何仪器都有它的局限性。在我们的临床工作中发现尿中的真菌、结晶、细菌等可能会影响UF-1000尿沉渣全自动流式细胞仪的检测结果。为排除其误、漏诊因素，提高尿沉渣检验的准确性。本文就尿检中使用UF-1000流式细胞仪、干化学法、显微镜法三种方法做一对比研究。现结果如下。
1 临床资料
1.1 仪器和试剂日本sysmex公司UF-1000流式细胞仪及其原装试剂，URIT-1500优利特干化学分析仪，优利特干化学试纸，Cχ21FS1光学显微镜。
1.2 标本来源和方法收集河南省漯河市中心医院患者新鲜中段晨尿800份，混匀后倒10 ml入洁净玻璃管，先在URIT1500优利特干化学分析仪上进行干化学分析，再在UF-1000流式细胞仪上进行尿沉渣自动分析，最后1500r/min离心5 min后弃去上清液做尿沉渣显微镜检查。
1.3 判断标准UF-1000流式细胞仪红细胞参考范围为0-25/μl，白细胞参考范围为0-25/μl，管型0-3/μl [1]；尿干化学阳性结果为异常，阴性结果为正常；尿沉渣镜镜检红细胞正常范围0-3/HP，白细胞正常范围0-5/HP，生理性管型偶见。超出正常范围的为阳性结果。
1.4 统计学方法对阳性结果进行χ2检验（P＜0.05）为差异具有统计学意义。
2 结果
UF-1000流式细胞仪红细胞阳性例数126，阳性率15.8%，白细胞阳性例数192，阳性率24%，管型阳性率例数44，阳性率5.5%。干化学法红细胞阳性例
UF-100全自动尿沉渣分析仪标准操作规程 1.目的： UF-100全自动尿沉渣分析仪检测的红细胞、白细胞及相关参数可对肾脏及与肾脏有关的疾病的诊断、治疗以及疗效观察提供参考数据。 2.范围： 适用于UF-100全自动尿沉渣分析仪进行尿液标本分析； 3.检测原理： 当尿液标本被稀释液稀释并经染色液染色后，在液压作用下通过鞘液流动池。当反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，它被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心(竖直)轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光(波长为488nm)光束照射。不同细胞有不同程度荧光强度(fluorescent light intensity，Fl，从染色尿液细胞发出的荧光主要反映细胞的定量特性如细胞膜、核膜、线粒体和核酸)、散射光强度(这种仪器测定的是前向散射光强度，forward scattered light intensity，Fsc，它成比例反映细胞的大小)和电阻抗的大小(电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比)。仪器正是将这种荧光、散射光和电阻抗的信号转变成电信号，分析这些电信号才能使得每个尿液标本产生出直方图(histogram)和散射图(scattergram)，然后分析这些图形，即可区分不同细胞并得出每个细胞的形态。UF-100每小时可测定多至100份标本，仪器最多存储1000份标本的测试结果和图形。 4.设备与试剂： 4.1 UF-100全自动尿沉渣分析仪。 4.2稀释液(URINOPACK： UPK-300A，5L)；鞘液(CELLSHEATH： SE-90L，20L)；染色液(URINOSEARCH： USR-800A，42ml)；清洁液(CELLCLEAN：
流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B- D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能 ,多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理 流动室及液流驱动系统 流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信 号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 流动室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide) 四. 流式细胞仪主要构造和工作原理 激光光源及光束形成系统
细胞分选的简要操作步骤 一、上样前的准备 FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。 1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。 3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制） 5L无菌蒸馏水 5L无菌PBS 2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗 涤。安好鞘液筒。 3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。。 4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。 5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。 6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。 7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。 9、从Acquire menu选择SortSetup。在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制 键RUN。 10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。。 11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。 12、再重复上述步骤2次，共需要1h。 13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直 至洗净桶内壁残余乙醇。 14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。安好鞘液筒。 15、在收集管接口处安装2支新的收集管。 16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。 17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。 19、再重复上述步骤2次，共需要1h。 20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。安好鞘液筒。 21、在收集管接口处安装2支新的收集管。 22、放上一支装有无菌PBS的进样管。 23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 24、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。重复 操作至2个管都收集了15 mL PBS为止。点击Pause, Abort。 25、在收集管接口处安装2支新的收集管。若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无菌 PBS4 % BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。 26、按下述分选步骤分选样本 二、分选细胞
仪器简介 UF-50采用流式细胞测定技术，并且通过尿检标准化提高检验结果的可靠性。 处理能力：每个样品约需72秒 每小时约100个样本 样品量：手工模式：0.8毫升 自动模式：1.5毫升 记忆容量：180个样品（40个样品和它们的直角坐标图） 4. 试剂 4.1稀释剂（URINOPACK） 试剂品牌：Sysmex 包装规格：1L 试剂成份： 4.2缓冲液 2.3% 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为5~30℃。 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。若试剂发生凝固，须替换。 4.3鞘液（CELLSHEATH） 试剂品牌：Sysmex 包装规格：20L 试剂成份： 氯化钠7.1g/L 氨丁三醇缓冲液 2.0g/L EDTA-2K 0.20g/L 表面活性剂0.8g/L 储存条件：须存储于干净的环境中，防止阳光直射，适宜温度为5~30℃。 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。 4.5染液（URINOSEARCH） 试剂品牌：Sysmex 包装规格：28ml/袋 试剂成份： 菲啶0.14% 羰化青0.04% 1,2-亚甲基二醇99.82% 储存条件：须存储于干净的环境中，远离明火，防止阳光直射，适宜温度为5~30℃。 使用期限：在失效期前使用；开封后的使用期限为60天。 安全事项：远离明火。 注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须更换。 4.6清洁剂（CELLCLEAN） 试剂品牌：Sysmex 包装规格：50ml 试剂成份： 次氯酸钠（有效氯浓度为5%）
UriSed型全自动尿沉渣分析仪应用评价分析 发表时间：2014-07-15T14:15:57.123Z 来源：《中外健康文摘》2014年第13期供稿作者：李金英高颖 [导读] UriSed全自动尿沉渣分析仪，同一份标本重复测定30次批内精密度经与国外同类产品比较[1]，其精密度能够满足临床要求。 李金英高颖 (淄博万杰肿瘤医院检验科 255213 ) 【中图分类号】R446.12 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）13-0082-02 UriSed型全自动尿沉渣分析仪是2006年由匈牙利77 Elektronika 公司生产的应用“自动显微镜检”技术，对离心尿液标本进行自动分析的全自动尿沉渣分析仪。其测定过程是将尿液加入到特殊的沉渣板（cuvette）中，通过内置离心机离心10秒（2000转/分）后，使尿液标本均匀沉积于沉渣板底部平面，再采用显微CCD技术，在内置显微镜下对尿中有形成份进行图片拍摄，然后通过图像分析软件对已拍摄图片 进行数字图像粒子自动识别、分类计数。此仪器进行尿沉渣定量分析时，样本量少；与传统的手工样本准备相比，分析速度快，其应用可大大减轻劳动强度，提高工作效率。为了证实该仪器使用的可靠性，我们从重复性、准确性、可比性、携带互染率、生物参考区间等方面对仪器进行了评价，现报告如下： 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 仪器与试剂 UriSed型全自动尿沉渣分析仪及配套尿沉渣板（批号：131121222）（匈牙利77 Elektronika 公司，由北京倍肯集团提供）。 1.1.2标本来源 随机收集新鲜住院患者尿液标本，不加任何防腐剂等物质，所需检测标本在2小时内检测完毕。 1.2评价方法 1.2.1 重复性 由于目前尚无可靠的尿沉渣标准液和质控液，故全自动尿沉渣分析仪的重复性评估只能采用新鲜尿液标本来进行，于是选取高、中、低浓度的尿液标本各一份，在UriSed分析仪上进行检测，观察同一份标本的20个检测区域的分布均匀情况，及同一份标本重复测定30次的CV值情况。 1.2.2 准确性与对比试验 标本选择：选取住院患者随机尿液标本1210份。 尿液标本的收集：用一次性塑料尿杯随机收集上述患者的清洁中段尿，充分混匀后，分成2管(使用一次性尿液专用塑料试管分装)：1管用于分析仪检查，另1管用于显微镜检查。 测定方法：①分析仪测定法：严格按仪器说明书操作步骤对每份充分混匀的尿液标本进行测定，记录实验结果。②显微镜检查法：取混匀的尿液标本10ml于一次性尿液专用塑料试管，以1500转/min，离心5分钟。吸掉上清液，留取0.2ml尿沉渣，用一次性塑料移液管轻轻混匀尿液，滴入JAST一次性专用尿沉渣计数板内，放置1分钟，首先用低倍镜观察尿液细胞分布情况，再用高倍镜观察10个视野所见最低和最高值，分别记录检测结果。 1.2.3 机器识别准确率 UriSed型全自动尿沉渣分析仪为自动微粒识别、分类计数，为验证其识别准确率，随机选阳性标本50份进行检测，从仪器的图像识别界面中，每份标本随机选取多幅图像，由专业检验人员进行识别，与仪器的识别结果进行比较，并计算仪器的红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及结晶的识别正确率。识别率是指某种有形成份被分析仪器识别的百分率；正确识别率是指分析仪器检测某种有形成份时，正确识别的百分率。 1.2.4 携带污染率 选取高值、低值标本各三份，随机分成三对，每对在仪器上先检测高值标本三次，记录为H1、H2、H3，随后检测低值标本三次，记录为L1、L2、L3，然后按下列公式分别计算红细胞、白细胞、上皮细胞互染率：互染率%=|L1-L3|/(H3-L3)×100。 1.2.5 分析仪生物参考区间的建立 UriSed型全自动血凝仪尿沉渣分析仪，采用全自动镜检的方法，对尿中有形成份进行自动识别及分类计数。其检测的尿液量、离心方式、离心速度、离心时间、显微摄影倍数与传统手工方法略有差异，因此我们对其生物参考区间进行了考察。 检测对象：各年龄段的健康者，要求近1个月无服药史及发热，无泌尿系统疾病、高血压、糖尿病、肝炎、风湿等全身性疾病，无泌尿系统疾病的家族史、泌尿道外科手术史及泌尿道结石史，无浮肿的现象，女性在非月经期内。各年龄段的健康人群随机中段尿，以干化学尿红细胞、白细胞、蛋白及葡萄糖阳性为排除对象。 2 结果 2.1 重复性 UriSed全自动尿沉渣分析仪同一份标本的20个检测区域的分布均匀情况的批内重复性见表1；同一份标本重复测定30次批内重复性见表2。
流式细胞分选技术介绍 流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，可以每秒钟分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数。其应用范围非常广泛，而且还在不断增加。当然，细胞分选也是它的重要应用之一。它能够根据每个细胞的光散射和荧光特征，将特定的细胞从细胞群体中分选出来。每次一个细胞。所以人们又常常将流式细胞仪称为荧光激活细胞分选仪（fluorescence-activated cell sorter, FACS），其实FACS并不是流式细胞仪的通称，它是BD公司的注册商标。 细胞分选的原理 当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 流式细胞分选的特点 1. 少量细胞分选时，流式细胞分选精确度高（99%以上），速度快。目前，先进的流式细胞仪的分选速度可达25 000个细胞/秒以上，比传统的分选速度提高了很多倍，原来需要一天的工作现在只需要几小时就能完成。不过流式细胞仪分离细胞的量还是有一定的限制，一次分离的最大合理量约为108个细胞。如果细胞量超过109个，则需要耗费10小时以上，分选后细胞的活力会受到很大的影响， 2. 可以同时进行多个Marker分选，正选负选同时进行。以前的流式细胞仪只能给液滴充上正电荷或负电荷，因此在电场中只能向左或向右偏转，即两路分选。现在的仪器可以给液滴充以不同的电量，从而调整液滴的偏转角度，实现多路分选。BD的FACSAria流式细胞仪就可以进行四路分选。 3. 不仅仅限于表面抗原，流式细胞仪可以根据任何能检测到的发光度（如细胞
全自动尿液分析系统1套 序号招标规格投标商对照规格 一适用范围：检验科开展尿液分析项目（包括全自动尿液干化学和全自动尿液沉渣检测）； 二技术要求（技术参数和功能）及配置： 1 全自动尿液干化学分析仪技术要求： ▲1.1 仪器可检测PH值、胆红素、葡萄糖、维生素C、蛋白、尿胆素原、潜血、亚硝酸盐、白细胞、酮体、尿比重共11个项目 1.2自动化程度高，操作者只需装入试纸条、放置样本、按“进标本”键，仪器便可完成无限量标本连续测定 1.3 测试系统采用三波长高亮度冷光源，独特的多波长独立扫描技术，避免光源相互影响及减少环境的干扰，减少环境光干扰，光源使用寿命长，提高仪器的灵敏度、准确度、稳定性 1.4 自动修正环境温度、试纸非特异性、尿液酸碱度、比重、颜色对测试结果的影响 1.5 触摸式大屏幕液晶显示，全中文视窗操作界面800*600彩色薄膜显示器 1.6 储存功能：仪器可储存60万个标本数据，并可随时调出显示及打印 ▲1.7 自动完成11项试纸测定，连续测试：300个测试/小时；反应时间：60秒 1.8 自动输送样本、吸样、点样、清洗、试纸条进给、收集废条 1.9 需样本量：5ml；使用样本量：0.7ml 1.10 精确定量滴样，避免测试项间交叉污染 1.11 急诊插入功能，可进行单个或成组样本的急诊测试 1.12 可配条码阅读器，采用标准RS232接口,可内置或外置打印机。 2 全自动尿有形成份分析仪技术要求： *2.1 检测原理：半导体激光流式细胞+核酸荧光染色技术； 2.2、报告方式：定量 (每微升沉渣的数量)； *2.3 检测速度：≥80标本/小时； 2.4 进样方式：仪器可全自动进样和手工进样；
流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病
第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或
尿沉渣自动分析仪 一、测定项目（参数和信息）： ⒈定量参数：RBC（红细胞），WBC（白细胞），EC（上皮细胞），CAST（管型），BACT（细菌）。据文献报道：每高倍镜视野的报告方式报告结果，其CV值接近40%以上。非定量结果是一个模糊的概念，特别当结果处于临界状态时，容易引起误诊识判。定量报告方式能让临床及时了解药物疗效，进行疗效的动态观察和比较。两者的换算关系：1/HPF=5.56ul，1/LPF=0.34ul。 ⒉提示性参数：Path. CAST（病理管型），SRC（小圆上皮细胞）YLC（酵母样细胞），X’TAL（结晶），SPERM（精子）。Path. CAST和SRC阳性提示肾脏疾病，应显微镜复查与尿蛋白综合分析；YLC 、X’TAL 和SPERM阳性提示可能有这些物质的存在。 ⒊红细胞信息：https://www.doczj.com/doc/c12334103.html,（红细胞信息），Microcytic（小红细胞），Normocytic（正常红细胞），Non-classified（混合性红细胞）。 ⒋其它分析参数：Total Count（颗粒总数：当Total Count＞4万：⑴明显的病理标本⑵污染的标本、药物的干扰），OTHERS（其它颗粒），Fsc2（细菌的Fsc均值），Conductivity（电导率）。 ⒌红细胞分析参数：RBC-P70Fsc（红细胞直方图70%面积处红细胞大小）， RBC-Fsc-DWC（红细胞分布宽度）。 二、参数和信息在临床中的应用： 1．血尿来源的判断（文献报道敏感性100%，特异性92.54%）：Microcytic（小红细胞），提示血尿来源为肾性血尿，同时RBC-P70Fsc＜80ch，RBC-Fsc-DWC 均值15.7ch。Normocytic（正常红细胞）RBC-P70Fsc＞100ch，RBC-Fsc-DWC均值15.7ch，Non-classified提示为混合性红细胞。红细胞大小均一的RBC-Fsc-DWC＜50ch红细胞大小不均一的RBC-Fsc-DWC＞50ch。
全自动尿沉渣分析仪研究背景现状与意义全自动尿沉渣分析仪研究背景现状与意义 1研究背景 2全自动尿沉渣分析仪的发展现状 3全自动尿沉渣分析仪的意义 1研究背景 尿沉渣检验在临床医学中是一项非常重要的项目，它是临床最为常用且信息最为丰富的项目之一，它不仅在治疗泌尿系疾病乃至对全身各系疾病的诊治都有重大价值。近年来，随着检验医学的迅猛发展，各类尿沉渣自动化、标准化仪器不断问世，使尿沉渣标准化方面有所突破，尿沉渣自动化分析技术正在逐步推广。 自动聚焦技术被广泛应用于各个领域，如医学诊断、制造业、检验、文档分析和军事等。自动聚焦技术具有很高的自动化和智能化，在聚焦过程中，通过计算机来识别和控制，只需要很少的人工干预，这就极大的避免了人为因素带来的影响，且效率比人工聚焦要高得多。自动聚焦技术具有高效率，高精度，自动化程度高等优点，非常适合现代社会各行各业高度自动化的发展要求。 2全自动尿沉渣分析仪的发展现状 尿沉渣就是尿液中的有形状成分。是原尿经过离心后，形成的沉渣。是尿液有形成分质和量的组合。包括细胞。管形、结晶、细菌、精子等各 [8]种病理成分。 1千年前，波斯名医Ismail，已对尿液的颜色、粘稠度、透明度、尿量、臭味、泡沫及沉淀物作了观察。显微镜发明后，Bright于1827年首次发现肾炎患者蛋白尿中出现管型，此后Bird于1854年，Purdy于1900年，进一步证明尿沉渣检查的临床价值。Addis建立的尿沉渣物定量检查法，1948年用于肾脏疾病的病程观察。近年来，Brody采用相差显微镜鉴别红细胞与脂肪滴等。Haber用干涉显微
镜从三个方位仔细观察沉渣成分。Rutecki等用免疫荧光技术测定颗粒管型中的血浆蛋白。认为部分管型的颗粒是血浆多种蛋白的聚集。有些学者用偏光显微镜鉴别尿中结晶。Linder等结合免疫荧光技术，酸性磷酸酶染色及扫描电镜对颗粒管型进行分型。不少学者应用巴氏染色或Sternheimer-Malbin(SM)等染色观察尿管型、脱落细胞等。最近几年，流式细胞仪技术进入了无需离心检查的新时代。 尿沉渣检验是尿液的重要组成部分，对临床诊断、治疗、监测及群体普查具有重要意义。目前国内临床尿沉渣检验的方法主要是显微镜为基础的形态学检查法和以流动式细胞为原理的流式细胞计数法。前者是经典的形态检查方法，为尿沉渣检验的金标准;后者因为原理上的缺陷不是直接的形态学检查，而是利用标记和散射等检测技术对尿沉渣进行分类计数，因此，应用具有其局限性，只能作为尿沉渣检验过筛检查，阳性标本必须用显微镜形态学检查来确认，但是其自动化程度高和检测速度快的特点仍然受到临床检验的欢迎。 1988年，美国研制生产了世界上第一台“Yollow IRlS”高速摄影机式的尿沉渣自动分析仪，简称Y—1尿自动分析仪。这种仪器是将标本的粒子影像展示在计算机的屏幕上，由检验人员加以鉴别。1990年，日本与美国合作，生产出影像流式细胞术的UA-1000型、UA-2000型尿沉渣自动分析仪，主要由连续高速流动位点摄影系统组成，包括闪光放电管、放大物镜、平面流动池、CCD摄影系统、影像信息处理机和阴极射线示波器等。但由于此类尿沉渣自动分析仪对图像粒子测绘不十分满意，处理能力低、重复性差、管型分辨不清、价格较昂贵等原因而未能普及。1995年，日本将流式细胞术和电阻抗技术结合，UF-100型全自动尿沉渣分析仪。1996年，德国生产出SEDTRON以影像系统配合计算机技术的尿沉渣自动分析仪。2003年，美国DiaSys R/S Corporation尿液分析系统工作站。尿沉渣分析仪大致
一、开机程序： 1.检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位 置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 气压。 2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印 机。 3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以 排除管路中气泡。 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 1.制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入 1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过 程中是否需要清洗样品。 4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。 7.做Set up。 8.打印校正结果，退出FACSComp程序。 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 软件，选择“联机”。 1.
（2）对实验样本进行命名； （3）对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。 备注：如果界面被关闭，重新调出步骤： 2.调出质控模板。 3.画图 选择画图工具（一般选择散点图），Inspect 界面会自动弹出，对几个常用选项进行设定：将散点图选中（用鼠标点击散点图边框才能够 选中图形），将 更改横纵坐 备注：第一个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC 。 （1一般获取10000个细胞。 （2 （ 3）将所有补偿调为0 （4）将非 52 （5）FSC和SSC （6 4.上阴性对照 将阴性对照管混匀，上机，功能键设置在“RUN”,散点图出现细胞信 号，第一个图：让细胞信号出现在自己看上去舒服的区域；其他三个 散点图，要将细胞信号调整到阴性区域，即左下角区域。通过移动通
尿沉渣分析仪发展简史 发布时间：2007-11-1 浏览次数：865 次 一、尿沉渣分析仪发展简史 1988年，美国研制生产了世界上第一台“Yollow IRlS”高速摄影机式的尿沉渣自动分析仪，简称Y—1尿自动分析仪。这种仪器是将标本的粒子影像展示在计算机的屏幕上，由检验人员加以鉴别。 1990年，日本与美国合作，生产出影像流式细胞术的UA-1000型、UA-2000型尿沉渣自动分析仪，主要由连续高速流动位点摄影系统组成，包括闪光放电管、放大物镜、平面流动池、CCD摄影系统、影像信息处理机和阴极射线示波器等。但由于此类尿沉渣自动分析仪对图像粒子测绘不十分满意，处理能力低、重复性差、管型分辨不清、价格较昂贵等原因而未能普及。 1995年，日本将流式细胞术和电阻抗技术结合，UF-100型全自动尿沉渣分析仪。 1996年，德国生产出SEDTRON以影像系统配合计算机技术的尿沉渣自动分析仪。 2003年，美国DiaSys R/S Corporation尿液分析系统工作站。 尿沉渣分析仪大致有两类，一类是通过尿沉渣直接镜检再进行影像分析，得出相应的技术资料与实验结果；另一类是流式细胞术分析。 二、流式细胞术尿沉渣分析仪 1995年，日本将流式细胞术和电阻抗技术结合，UF-100型全自动尿沉渣分析仪。 1. 工作原理 应用流式细胞和电阻抗的原理。当一个尿液标本被稀释并经染色液染色后，靠液压作用通过鞘液流动池。当反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心（竖直）轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的荧光强度（fluorescent light intensity，FI，从染色尿液细胞发出的荧光，主要反映细胞的定量特性，如细胞膜、核膜、线粒体和核酸）、前向散射光强度（forward scattered linght intensity，Fsc，它成比例反映细胞的大小）和电阻抗的大小（电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比）。仪器正是将这种荧光、散射光等光信号转变成电信号，并对各种信号进行分析，最后得到每个尿液标本产生出的直方图（histogram）和散射图（scattergram）。通过分析这些图形，即可区分每个细胞并得出有关细胞的形态。 仪器通过对前向散射光波形、前向荧光波形和电阻抗值的大小综合分析，得出细胞的信息并绘出直方图和散射图。仪器通过分析每个细胞信号波形的特性来对其进行分类。前向散射光信号主要反映细胞体积的大小，前向荧光信号主要反映细胞核的大小。
一、样品制备 1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells， 二、上流式测细胞 1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数选择FL2-H 1024(此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光,本实验使用PI作为荧光染料,故选择FL2-H)
—、样品制备 1、取样（大约lx cells）,离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1 ml 70%的冷乙醇固定细胞，-20°C冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100|j 啲Rnase （GenScript试剂A）, 37°C水浴30min,然后再加入400』的PI染液（GenScript试剂B）,在4°C避光条件下孵ff30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2xl04cells, 二、上流式测细胞 1」、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属扌当板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow）,拧紧鞘液桶盖，安上金属扌当板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖, 检查所有管路是否妥善安責。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBYo如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS）,等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀責于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowce呻的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流岀）。结束后自动STANDBY, 5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest,最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis, X参数和丫参数分别取FSC-H、SSC-H （选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-onalysis, X 参数选择FL2-H 1024（此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光，本实验使用PI作为荧光染料，故选择FL2-H） Y Parameter Plot Source： |< Select File... X Parameter Mie：| Acquisition
流式细胞仪的使用方法及相关资料 仪器名称：流式细胞仪 生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司 使用方法： 一．开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。 4．如果需要打印，打开打印机电源。 5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。 6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。 7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。 做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。 二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files) 1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。 2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。 3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。 三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整 1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。 2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status 等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。 4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周
流式细胞仪分选技术的好处 流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度。那么流式细胞仪分选技术的好处有哪些?给大家详细的讲解一下。 流式细胞仪分选技术特点 1. 少量细胞分选时，流式细胞分选精确度高(99%不过流式细胞仪分离细胞的量还是有一定的限制，一次分离的最大合理量约为10个细胞。如果细胞量超过10个，则需要耗费10小时以前的流式细胞仪只能给液滴充上正电荷或负电荷，因此在电场中只能向左或向右偏转，即两路分选。仪器可以给液滴充以不同的电量，从而调整液滴的偏转角度，实现多路分选。BD的FACSAria流式细胞仪就可以进行四路分选。 3. 不仅仅限于表面抗原，流式细胞仪可以根据任何能检测到的发光
度(如细胞体积)或荧光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特异抗原)散射度差异来分离细胞。如果能保证流式细胞仪的无菌状态，那么分选后的细胞还可以进行培养或其他分析。 4. 如果只是偶尔做几次细胞分选的话，用流式分选还是比较划算的，只需要准备样品和抗体，交纳一定的仪器使用费即可，不需要购买配套的设备。 流式细胞仪分选技术应用 1、干细胞组织工程在研究。 2、细胞增值、活性和凋亡研究。 3、疾病细胞如炎症细胞、肿瘤细胞等的发生、发展和转归研究。
4、基因表达和表达调控研究。 5、细胞内信号传导和生物大分子间相互作用研究。 6、各种病原体如病毒、细菌等基础和致病性和致病机理研究。 7、药理药效和药物开发研究。 8、移植和细胞治疗研究。 9、生物材料对细胞结构、活性和功能的影响等。利用仪器的分选功能分选得到高纯度、高活性的稀有细胞，通过直接培养、诱导、增殖、分化、活化和移植等进行更深一步的细胞功能和细胞治疗探索，还可以在此基础上逆向进行基因组合蛋白质组相关研究，寻找致病基因、致病蛋白和疾病信号传导方式。
流式细胞仪（Flow Cytometry） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年，Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置测量的设想。1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。近20年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程中的应用，非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是13年前出版的，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统