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简单测定种子的生活力

简单测定种子的生活力
简单测定种子的生活力

8种子生活力测定

Z—1概述

种子生活力(Seed viability)是指种子发芽的潜在能力。种子生活力测定在农业生产上具有重要的意义:①测定休眠种子的生活力。许多植物种子因存在休眠,暂时不能萌发,因此发芽率很低,尤其是新收获的和野生性较强的种子,必须进行生活力测定,才能了解种子的发芽潜力,以便合理利用种子。播种前对发芽率低而生活力高的种子,应进行适当处理。种子检验时,若发芽试验末期有新鲜不发芽种子或硬实种子,也应接着进行生活力测定,以正确评定种子品质。②快速预测种子的发芽力。休眠种子可借助于各种处理措施打破休眠,然后进行发芽试验,但所需时间较长。而种子贸易中,有时因时间紧迫,不可能采用标准发芽试验来测定发芽力,因为发芽试验所需时间更长,如小麦需8d,水稻需14d,某些蔬菜和牧草种子需2~3周,而多数林木种子则需要更长的时间。在这种情况下,可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考。

种子生活力测定方法有10多种,根据其测定原理可大致分为4类:①生物化学法,如四唑测定法、溴麝香草酚蓝法、甲烯蓝法、中性红法和二硝基苯法等。②组织化学法,如靛蓝染色法、红墨水染色法和软x射线造影法等。③荧光分析法。④离体胚测定法。本节主要介绍四唑测定法、离体胚测定法、染料染色法和软x射线造影法。

Z—2生活力测定方法

一、测定原理

有生活力的种子,其活细胞原生质膜具有选择透性,当种子浸入染料后,染料大分子不能进入活细胞内,所以胚部等活组织不能被染料染色,而死的种胚细胞因原生质膜丧失选择吸收能力,故可被染料染色。

二、测定方法

(一)染色法

1.靛蓝染色法

此法适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。所用试剂为靛蓝(或称靛蓝洋红),分子式为C18H8O2N2(SO5Na)2,系蓝色粉剂,能缓慢溶于水。测定方法如下:

(l) 种子预处理:将种子浸人30℃水中,水稻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等种子须先去壳再浸种,浸种时间因种子不同而异,小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为3h,燕麦、芝麻等4h,油菜、花生、棉籽等6 h,蓖麻、红麻、大麻等7 h、黍8 h、水稻12 h、玉米20 h将充分吸胀的种子(100粒2次重复),沿胚中线纵切(如禾谷类)或剥去种皮(如双子叶种子),以备染色用。

(2) 靛蓝染色:将处理好的种子置于培养皿或小烧杯内,加入靛蓝溶液淹没种子,纵切种子,用0.1%溶液,剥去种皮种子用0.2%溶液。染色时间禾谷类为15min,油菜、芝麻、红麻和大麻等30 min,大豆、亚麻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等60 min 豌豆18 0 min

(3)观察鉴定:取出染色后的种子,用清水冲洗后立即进行观察鉴定。凡种胚不染色或染成浅蓝色的、胚根尖端或少部分子叶染色的,为有生活力种子;凡种胚全部染成蓝色的,或胚根、胚轴、胚芽、子叶等大部分染成蓝色的,为无生活力种子。

2.红墨水染色法

其测定原理、种子预处理方法以及染色时间等与靛蓝染色法基本相同,只是所染成的颜色不同,死胚染成红色,活种子胚不染色。测定时用刚开瓶的红墨水,加水稀释后使用,红墨水与水的比例:小麦、玉米、大豆和棉花等为1:60,大麦以1:120为宜。到达规定染色时间后取出种子,用清水冲洗并立即观察鉴定。

(二)其他方法

四唑测定法

(一)四唑测定法概述

1.发展简史

四唑测定法于1942年由德国https://www.doczj.com/doc/c01816625.html,kon教授发明,二战期间传入美国。IST A于195 0年成立四唑测定技术委员会,1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程。1974年,ISTA 四唑测定技术委员会主席美国R.P.Moor教授,为发展和推进四唑测定技术的标准化,主持编写《四唑测定手册》,其后经过多次ISTA会议讨论修改,于I984年正式公布发行。该手册汇集了世界上最先进实用的种子四唑测定技术,以及650多个属和种的农作物、蔬菜、林木、牧草、药材和花卉种子的具体测定技术,堪称最具权威性的四唑测定参考。种子生活力四唑测定技术经过不断研究和完善,目前已在全世界广泛应用。

2.特点

四唑测定具有原理可靠、简便快速、结果准确、不受休眠限制以及成本低廉等特点。该法比按细胞膜选择透比不同的染色方法更为可靠,所击仪器设备和物品较少,程序比较简单,一般2 4 h之内即能获得测定结果,不论是休眠种子还是非休眠种子均适用。因此,该法是世界公认的最有效的种子生活力测定方法。

3.适用范围

根据国际种子检验规程规定,四唑测定适用于下列范围:

(1)测定休眠种子、收获后需马上播种的种子以及发芽缓慢的种子的发芽潜力。

(2)测定发芽试验末期末发芽种子的生活力,特别是怀疑有休眠时。

(3) 测定种子收获或加工过程中的种子损伤(如热伤、机械损伤、化学伤害等)原因。(4)解决发芽试验中遇到的问题,查明不正常幼苗产生的原因和杀菌剂、种子包衣等处理的伤害。

(5)查明种子贮藏期间劣变衰老程度,按染色图形分级,评定种子活力水平。

(6)调种时时间紧迫,快速测定种子生活力。

(二)四唑测定法的原理

有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都会发生氧化还原反应。四唑溶液作为一种无色的指示剂,被种子活组织吸收后,参与活细胞的还原反应,从脱氢酶接受氢离子,在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替。化学反应式如下:

依据四唑染成的颜色和部位,即可区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。一般来说,单子叶植物种子的胚和糊粉层、双子叶植物种子的胚和部分双子叶植物的胚乳、裸子植物种子的胚和配子体等属于活组织,含有脱氢酶,四唑渗入后能染成红色,而种皮和禾谷类胚乳等为死组织,不能染色。除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外,还可能出现一些部分染色的种子。判断种子有无生活力,主要看胚和(或)胚乳(或配子体)不染色坏死组织的部位及面积大小,而不一定在于颜色的深浅,颜色的差异主要是将健全的、衰弱的和死亡的组织区别出来,根据上述原理.鉴定种子胚的死亡部分,还可以查明种子死亡的原因。

四唑染色是一酶促反应.因此反应不仅受酶活性的影响,还受底物浓度、反应温度、p H等因素的影响。该酶促反应的适宜pH为6. 1~7,高于者低于此pH反应不能正常进行,也就无法测定种子活力的高低。因此.对于游离酸含量高的四唑试剂应当用缓冲液配制。反应速率随温度的不同而变化.温度每升高10℃反应速率提高1倍,譬如20℃'时需要反应时间4h,30℃则需要2 h,但反应最高温度不能超过45℃,染色时底物的浓度要一致,一般染色部位切开的种子,测定时四唑溶液的质量浓度为0.1%~0.2%,染色部位完整的种子,质量浓度为1%~2%。种子预措时.采用的方法应根据种子的化学组成和种子结构确定。

(三)四唑测定法应用的化学试剂

1 四唑

四盐类有多种,最常用的是2,3,5一氯化(或溴化)三苯基四氮唑,英文名为2 ,3 , 5 - triphenyl tetralium chloride (or bromide) TTC(TTB)或TZ.分子式为C 19H

N4Cl,相对分子量334.8亦称红四唑,为白色或淡黄色粉剂,溶点243℃,当达到约2 15

45℃就会分解,易溶于水,有微毒,试剂在光下会被还原成粉红色,因此需用棕色瓶盛装,

且瓶外要裹一层黑纸。同样.配好的四唑溶液也应装入棕色瓶里,存放在暗处,种子染色也需在暗处和弱光处进行。

1996版《国际种子检验规程》规定,正常使用四唑溶液质量浓度为1.0%,但有些情况下,可使用较低或较高的浓度。GB/T3543.7一1995规定,四唑染色通常使用质量浓度为0.1%~1.0%的四唑溶液,一般来说,切开胚的种子可用0.1~0.5%的四唑溶液;整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用1.0的四唑溶液。

四唑溶液的pH要求在6.5~7.5范围之内,若溶液的pH不在此范围时,建议采用磷酸缓冲液来配制。其配制方法为称取1 g四唑粉剂溶解于100 ml磷酸缓冲液中,即配成1. 0%(或0.1%)的四唑溶液。当用酸度计测定时,若四唑溶液的pH达不到要求,则可用NaOH

或NaHCO3稀溶液加以调节。配好的四唑溶液应保存在棕色瓶中,一般有效期为几个月,如

存放在冰箱,则有效期更长。已用过的四唑溶液不能再用。

2.磷酸缓冲液

为保证配制的四唑溶液pH在6.5 ~7.5范围内,通常采用磷酸缓冲液来溶解粉剂。磷酸缓冲液的配制方法有两种,

(1) ISTA规程法:先准备两种溶液。

溶液I——在1000ml蒸馏水中溶解9.078g KH2PO4。

溶液——在1 000ml蒸馏水中溶解9.472 g Na2HPO4或11.876 g Na2HPO4·2H2 O

然后取溶液I 2份和溶液I I 3份混合即成。

(2)AOSA规程法:在1000ml蒸馏水中溶解5.45 g N aH2PO4和3.79 g Na2H PO4。

3.乳酸苯酚透明液

用于染色后的小粒豆类和牧草种子,使种皮、稃壳或胚乳变得透明,以便清楚地观察鉴定。其配法为:20ml乳酸+20ml苯酚+40ml甘油+20ml蒸馏水。

4.过氧化氢溶液

用于某些牧草种子(如黑麦草、早熟禾、羊茅和鸭茅等)的预湿浸种,以加快吸胀和酶的活化。

一般应用0.3%H2O溶液。

5.杀菌剂和抗生素

用微量的杀真菌剂和(或)抗生素加入四溶液或染色样品中,以延缓衰弱种子的劣变进程。可应用0.5%青毒素等抗生素

6.胶液硬化剂

有些种子浸种后,种皮表面出现胶黏物质而变得非常光滑.难以进行样品准备,可用AIK(SO4)212H2O, K2SO4,A12(SO4)3等硬化剂处理。如将种子浸在1%~2%AIK(SO4)·12H2O溶液中5min,可有效地减少胶黏物质。

2

(四)四唑测定法的程序

参照1996版《国际种子检验规程》的规定.介绍四测定法的程序:

1.试验样品

从净度分析后并经充分混合的净种子中,随机数取100粒种子,4次重复。如果是测定发芽试验末期休眠种子的生活力,则单用发芽试验末期所发现的休眠种子。

2.染色前的种子准备

(1)种子的预湿:预湿是四唑测定的必要步骤。因为吸胀种子一般比干种子不易破碎并且比较容易切开或刺穿。此外,预湿使活组织酶系统活化,可提高染色的均匀度、深度、鉴定的可靠性和正确性。有些种子在预湿前还要进行预措处理,以利吸胀,如水稻种子需脱去秤壳,豆科硬实种子需刺破种皮等,但须注意,预措不能损伤种子内部胚的主要构造。如果利用较高或较低温度进行预湿,则相应调整预湿时间,并将所采用的时间和温度填报在种子检验证书上。预湿方法有以下两种:

①缓慢预湿:按发芽试验所用的方法,将种子放在纸上或纸间吸湿。该法适用于那些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子,以及已经劣变的种子或过分干燥的种子。有些种子,缓慢预湿达不到充分吸胀,有必要进一步在水中浸一段时间。

②水浸预湿:将种子完全浸在水中,让其达到充分吸胀。如果浸渍时间超过24h,则应换水。部分植物种子在20℃下的预湿方式和最少预湿时间见表5一I,表5一2。

(2)染色前的种子处理:许多植物的种类(表5一l,表5一2)在染色前需将其胚的主要构造和活的营养组织暴露出来,以利于四唑溶液渗透·便于正确鉴定。可采用下列处理技术刺穿、切开种子或剥去种皮。其刺、切方法见图5一1。处理后的种子应保持湿润.直到每个重复都完成为止。

①刺穿:对经过预湿的种子或硬实种子,可利用解剖针或解剖刀,刺穿种子的非主要部位。

②纵切:所有禾谷类和禾本科牧草种子,像羊茅属大小种子或较大的种子,通过胚中轴的中部纵向切开,约达胚乳长度的3/4;无胚乳而具有直立胚的双子叶植物种子,通过子叶

略离中轴的一半纵切.而不伤及胚中轴部分;胚被活的组织包围着的种子,可沿着胚的旁边进行纵切。

③横切:用解剖刀、刀片、弯曲剪子或其他适当的方法,沿种子非主要组织横向切断。禾本科牧草种子:紧靠胚的上部横切,并将有胚的一端浸入四唑溶液。

具有直立胚和无胚乳的双子叶植物种子:从子叶末端部分横向切除1/3或2/5。

针叶树类种子:横向切去两端一小部分,以保证能打开胚腔,但不能伤及胚太重。

④横剖:横剖可替代横切,是切开但不切断的一种处理方法。适用于小粒禾本科牧草种子(如剪股颖属、梯牧草属和早熟禾属)。

⑤胚分离:胚分离可用于大麦、黑麦和小麦。用解剖针在盾片的上部稍偏中心处刺穿胚乳,然后略略扭动,使胚乳纵裂.挑出带有盾片的胚,随即移入四唑溶液。

⑥剥去种皮:当切开方法不适合时,必须剥去全部种皮以及其他被覆组织。具有坚硬被覆物的种子,如坚果和核果等,可将种子或预湿后的种子劈开或敲裂.但要注意避免胚部受伤。坚韧的种皮可在预湿后,用解剖刀或解剖针小心地将其撕开剥掉。

3.四唑染色

通过染色反应,能将胚和活的营养组织里的健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来,以便进行鉴别.判断种子的生活力和活力。

将准备好的规定数量种子放入适当大小的培养皿或烧杯中,特别细小的种子可用滤纸包起来放入容器里,然后加入适宜浓度的四唑溶液,以淹没种子为度,移置一定温度的恒温箱内进行染色反应。恒温箱内要求黑暗或弱光,因为光线可使四唑盐类还原。

染色时间因种子种类、样品准备方法、本身生活力的强弱、四唑溶液浓度、pH和温度等因素的不同而有差异。其中温度的影响最大,在20~45℃范围内.温度每增加5℃,其染色时间可减少l/2。部分植物种子在30℃下的染色时间见表5一1,表5-2。种子染色结束后,倾去溶液,用清水漂洗准备鉴定。规定的最适宜染色时间不是绝对的.可能随着种子条件而发生变化。从已积累的经验来看.也可能在染色的较早或较晚阶段进行鉴定为宜。

如果到达规定时间种子染色仍不够完全,可适当延长染色时间.以便判断染色不够充分是由四唑溶液渗入缓慢引起的,还是由种子本身的缺陷所致。但要注意,染色温度过高或染色时间过长,也会引起种子组织的劣变,这样可能掩盖由地遭受冻害、热伤和本身衰弱而呈现不同颜色或异常的情况。

有些植物种子要求在四唑溶液中加入微量的杀菌剂或抗生素(如0.01%环115防护剂或抗生素),以避免在染色过程产生带有黑色沉淀物的多泡沫溶液。

4.鉴定前处理

为确保鉴定结果的正确性,应将已染色的种子样品进行适当的处理,使胚的主要构造和活的营养组织更加明显地暴露出来,以便观察鉴定。目前国际上采用的方法有:(1)直接观察:适用于染色前已进行了样品准备的整个胚、摘出的胚中轴、纵切或横切的胚等样品。

(2)轻压出胚:适用于样品准备时仅切去种子的一部分,胚的大部分仍留在营养组织内的样品。在鉴定前用解剖针在种子上轻压,使胚向切口滑出。

(3)扯开营养组织:适用于样品准备时仅撕去种皮或仅切去部分营养组织的样品。须扯去遮盖住胚的营养组织或去掉切口表面的营养组织,使胚的主要构造完全暴露出来。

(4)切去一层营养组织:适用于样品准备时仅切去或切开种子上半粒或基部的种子样品。须在适当的位置切去一层适宜厚度的营养组织,以便观察胚和活营养组织染色情况。(5)下胚中轴纵切:适用于样品末经准备的种子,如有些豆类种子。

(6)沿种子中线纵切:适用于样品准备时,仅除去种子外面构造或仅切去基部的种子,如五加科等种子。

(7)剥去半透明的种皮或种子组织:适用于样品末加准备或仅切去基部的种子。如大豆、豌豆等种子。

(8)切去切面碎片或掰开子叶:适用于切得不好或有些双子叶豆科种子。

(9) 剥去种皮和残余营养组织:适用于样品准备时仅切去种子一部分的样品,如红花种子。

(l0)乳酸苯酚透明液的应用:在四唑染色达到适宜时间后,小粒种子用载玻片挡住培养皿的一边.留一条狭缝,沥出四唑溶液.注意不能溜出种子。对于更细小的种子(如小糠草)等,则可借助管口比种子小的吸管吸去四唑溶液。然后用厚型吸水纸片吸干残余的溶液.并把种子集中在培养皿的凹陷处,再加入2~4滴乳酸苯酚透明液.适当摇晃,使其与种子良好接触.马上移入38℃恒温箱保持30~60 min,经清水漂洗或直接观察。

5.观察鉴定

四唑测定样品经染色和处理后,进行正确的观察鉴定是非常重要的。测定结果的可靠性取决于检验人员对染色组织和部位的正确识别、工作经验和判断能力等综合运用能力。观察鉴定的主要目的是区别有生活力和无生活力种子。

一般鉴定原则是,凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色,且组织状态正常的,为有生活力种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色,并且活的营养组织不染色部分超过允许范围,以及组织软化的,为不正常种子。凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色.且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。不正常种子和死种子均作为无生活力种子.此外,胚或其他主要构造明显发育不正常的种子,不论

染色或不染色,均应作为无生活力的种子.仔细的鉴定工作还可以鉴别出不同类型的有生活力或无生活力的种子。部分植物种子的鉴定标准详见表5一1.5一2。图5-和图5-3分别是小麦和大豆种子四唑染色鉴定标准的实例。

鉴定时,可借助于放大器具进行观察。大、中粒种子可直接用肉眼或5~7倍放大镜进行观察鉴定,小粒种子最好利用10~100倍体视显微镜进行仔细观察鉴定。鉴定时注意判断种子预措时胚部切偏和切面粗糙对观测结果的影响。

6、结果计算及处理

在测定一个样品时,应统计各个重复中有生活力的种子数,并计算其平均值。重复间最大容许差距不得超过表5一3的规定,平均百分率修约至最近似的整数。测定结果按规定格式填报。对豆科的一些种须增填测定中发现的硬实百分率,硬实百分率应包括在所填报的有生活力的百分率中。

表5一3生活力测定重复间的最大容许差距

若是测定发芽试验末期未发芽种子生活力,结果应填报在发芽试验结果报告的相应栏中。

不同标准中四唑测定的一些差别

GB/T3543.7—1995农作物种子检验规程对主要农作物及蔬菜种子生活力的四唑染色技术作了详细规定,其中对试验样品数量的规定是至少测定200粒种子,即可以用200粒、300粒、400粒。这与ISTA规程规定用100粒4次重复和《四唑测定手册》认为可以用200粒,均有所不同。(GB/T 3543.7 —1995规定四唑测定时.种子预湿温度为30℃或20~30℃.四唑溶液质量浓度在0.1%~1.0%.染色温度为35℃。而ISTA规程中.预湿温度为20℃.四唑溶液质量浓度大多数种子采用1.0%,少数为0.5%,染色温度为30℃。GB/T2930.5—2001牧草种子检验规程,对牧草种子、草坪草种子和饲料作物种子生活力的四唑测定方法作了详细介绍,其测定程序基本与国际规程相同,但所列牧草种子的种类比国际规程更为全面。

离体胚测定法

(一)概述

自1904年H?nning. E成功地培养了胡萝卜和辣根菜的离体胚以来,离体胚组织培养已有百年的历史。该技术在植物育种中主要用于解决远缘杂种败育、种子休眠期过长以及快速繁殖等问题、Tukey 1944年研究桃种子发现,未通过后熟种子和已通过后熟种子的胚在离体培养下生长速率一致,因此,认为胚胎培养法可用于快速测定这类种子的生活力。目前,

离体胚培养法已被广泛应用于木本植物种子的生活力测定。离体胚测定的目的是,快速测定某些发芽缓慢或休眠期较长的植物种的种子生活力。

适用范围

1996版《国际种子检验规程》规定,离体胚测定只适用于下列已规定具体方法的植物种:

(1)槭属(Acer spp.)[复叶槭(A.negundo)和鸡爪槭(A. palmatum)除外」。(2)卫矛属(Euonymus spp.)。

(3)梣属(Fraxinus spp)。

(4)苹果属(mulus spp.)和梨属(Pyrus spp.)。

(5)加州山松( Pinus monticola )、扫帚松( P. Peuce)和北美乔松(P. strobus )。

(6)瑞士石松( P. cemtbra) ,大果松(I'. coulteri) ,巴尔干松( P.heldreichii) ,黑材松(P. jefreyi)、红松( P. koraiensis)和日本五针松(P.parviflora)。

(7)李属(Prunus、spp).欧洲甜樱桃(P. avium)、比西氏樱桃(P. bessey)、黄果酸樱桃( P.

maheleb)、稠李( P.padus)、柳栋野黑樱(P. serotina )、美国稠李(P. virginiana )、杏(P. armeniaca)和桃(P.persica)等。

(8)花揪属(Sorbus spp.)。

(9)椴属(Tilia spp.)。

对于原先已发过芽的种子和发过芽又失水干燥的种子,不适合采用此法。

2.原理

将离体胚在规定的条件下培养5~14d。有生活力的胚仍然保持坚硬新鲜的状态,或者吸水膨胀、子叶展开转绿.或者胚根和侧根伸长、长出上胚轴和第1叶:而无生活力的胚,则呈现腐烂的症状。

(二)离体胚测定法

1.试验样品

常用400粒种子。由于在胚分离过程中可能有损伤的种胚.所以至少应从经净度分析后的净种子中随机取425~450粒种子。根据胚的大小和放置容器的容量设定重复次数(如4×100或×50)

2.浸种前处理

某些需要机械划破或化学腐蚀种皮的植物种子。必须在浸种前进行适当处理。一些果实外部的坚硬果皮也需去除。

3、清水浸种

按种子吸水速率不同,将种子放在自来水中浸泡24~96 h。水温保持在25℃以下,每天换水2次.以延缓真菌或细菌的生长以及种子渗出物的积累。

4.胚的分离

用解剖刀或刀片从吸胀种子中分离出胚,操作过程中应保持湿润。为使胚处于无菌状态,可用70%乙醇擦净器具和台面。分离时受损伤的种胚应去掉,并用试验样品中的多余种子替代。

属于下列类型之一的种子.在计算生活力百分率时,应计入总数中:

(1)空瘪果实或无胚种子。

(2)胚部遭虫害或在加工过程中受到严重损伤的果实或种子。

(3)胚已严重变色、腐烂或死亡的果实或种子。

( 4)胚中子叶严重畸形的果实或种子。

5、置床培养

将胚放在培养皿或发芽盒中的湿润滤纸或发芽纸上,置于20~25℃恒温下,每天至少光照8h,培养至1 4 d。每天应拣出腐烂的胚或明显带有真菌菌丝体的胚。

如被霉菌严重感染,则须重新试验,并在胚分离前,先将果实或种子用5%次氯酸钠溶液浸15 min,然后用水充分洗涤。

6.观察鉴定

经培养24 h后,根据局部组织变色,将因分离受到机械损伤的胚与无生活力的胚区别开来。若胚因分离造成损伤而难以鉴定时,则须进一步练习分离技术后,重新进行试验。

(1)下列类型的胚列为有生活力的:①保持坚硬,体积稍稍增大,因种不同,呈现白色(如大部分种)、绿色(如假挪威槭)或黄色的胚。②呈现生长或变绿的一片子叶或几片子叶的胚。③正在发育的胚(有可能长成幼苗)。①下胚轴呈弯曲状的针叶树球果类的胚。⑤因分离造成的损伤组织表现局部变色的胚。

(2)下列类型的胚列为无生活力的:①很快被霉菌严重感染、劣变或腐烂的胚。②呈深褐色或变黑色、暗淡的灰色或白色水肿状的胚。

7.结果计算

根据供检果实或种子总数计算生活力百分率,而不是根据分离胚的数目计算。最后的生活力百分率是有生活力的总胚数占供检种子总数的百分率。

软X射线造影法

X射线是电磁能的一种形式,波长在0. 000 1-0. 12 nm,能够穿透各种吸收和反射可见光的材料,按波长和穿透力不同可分为硬X射线和软X射线。硬X射线波长较短,

为0.005~0. 01 nm,穿透力强;软X射线波长较长,为0.01~0. 05 nm,穿透力弱。软X射线造影法(衬比法)测定种子生活力.由瑞典的Simak和Kanar于1963年首先应用。

(一)测定原理

活细胞的原生质膜具有选择吸收能力,当种子浸入重金属盐溶液中.凡有生活力的细胞、组织或种子不吸收或很少吸收重金属离子,无生活力的则相反。软X射线造影时,由于重金属离子能强烈吸收X射线.因而死组织呈现不透明的阴影,活组织则较透明,经显影定影后,在底片上死组织较为透明.而活组织则较为黑暗。印成相片后,死组织较为黑暗,活组织较为白亮,从而形成明暗对比。根据明暗强弱、面积大小及其部位,判定种子有无生活力。

(二)测定方法

1.种子预湿

从净度分析后的净种子中随机取50~10 0粒种子,4次重复。将种子在清水中浸泡2~16 h ,,对直接浸水容易造成吸胀损伤的一些种,可先进行缓慢预湿后再浸泡16h。

2.造影剂处理

目前最常用的造影剂是BaCl2。将预湿好的种子放入10~20%的BaCl2溶液中,处理时间一般为1~2h 。取出种子用自来水冲洗,再用吸水纸吸干种子表面浮水,或将种子于60~70℃下干燥1.5 ~2h

3.软X射线摄影

首先要选好胶片.国外有专用X射线胶片,我国主要采用SDIN文献反拍黑白片.也有用照相纸直接造影。将处理和干燥的种子放在合适的样品托盘上,再将其放在感光胶片的暗袋上,然后放入X射线仪工作室内曝光造影,其曝光造影技术条件因X射线仪的种类而不同。目前我国主要应用Hy-35型农用X线机。

4.影像鉴定

在胶片上.凡种胚透明的,为无生活力种子;凡种胚呈黑色的.为有生活力种子。在照片上,软x射线测定是一种非破坏性的快速测定方法,它所拍摄的x射线照片可提供形态学特征以及可区分饱满、空瘪、虫蛀及物理损伤等种子的永久性图像记录。

四唑法测定种子生活力

四唑染色法测定种子生活力 福建农林大学20**级农学0******* ***** 一、目的 1、了解种子生活力测定方法 2、熟悉利用四唑染色法测定种子活力方法及操作方式 二、原理 有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都发生氧化还原反应,四唑溶液作为一种无色的指示剂,被种子吸收后参与活细胞的还原反应,从脱氢酶接受氢离子, 在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲。化学反应如下:DPNH2 + TTC DPN + TTCH + HCl (辅酶IH2)(四唑)(辅酶Ⅰ)(甲)(氯化氢) H N‐N‐C6H5N‐N‐C6H5 ∥2H ∥ C6H5‐C C6H5‐C +HCl \ \ N﹦N+‐C6H5 N=N‐C6H5 无生活力的种子则无此反应。 根据种子的四唑显色的部位,即可区分有活力的部分和死亡部分。一般鉴定原则是,凡是胚的主要结构及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色,且组织状态正常的,为有生活力的种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽,并且活营养组织部染色成无光泽的淡红色或灰白色,且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。 三、试材与设备 1、材料大豆种子 2、设备烧杯、滤纸、刀片、镊子、恒温培养箱 3、试剂 1.0%的四唑溶液 四、实验步骤 从净度分析后并经过充分混合的大豆种子中,随机抽取30粒,3次重复。 1、种子预湿将选取的大豆种子水浸预湿,室温下浸泡8h,使其充分吸胀。 2、种子处理将吸胀的大豆种子的种皮去除,掰开子叶,露出子胚芽,保持湿润备用。 3、四唑染色将处理好的种子放入烧杯中,加入1.0%的四唑溶液,将种子淹没,然后置于35℃恒温培养箱中避光染色0.5~1 h。 4、观察鉴定将染色后的大豆种子经清水冲洗后进行染色情况的观察鉴定。胚部全部显成鲜红色、仅子叶远离胚芽部分少量未染色、仅子叶边缘少许未染色,为有生活力的种子。 5、结果计算及处理统计各个重复中有生活力的大豆种子数,并计算其平均值。

种子生活力快速测定

种子生活力快速测定 一、实验原理 通过本实验,掌握种子生活力快速测定的原理和方法。 二、实验原理 (1)活细胞染色:脱氢辅酶(NADH或NAFPH)存在于活的细胞内,当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原,便由无色的TTC变为红色的三苯基甲(TTE)。当细胞死亡后,NADH会迅速被降解,不会发生相应的颜色反应,故TTC染色法可显示细胞是否存活。 (2)死细胞染色:有生命力的细胞膜是一个半透性膜,因此对内渗透的物质有选择性;而无生命力的细胞,其细胞膜已经消失,因此有的有色物质(如品红)不能进入活的细胞内,但可以进入已经死亡的细胞,从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色,故可以据此鉴别细胞是否死亡。 三、实验材料、药品和器具 1、实验材料:花生、黄豆 2、实验药品和器具:品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等 四、试验方法 1、分别取10颗红豆和黄豆的种子,沿种子的培从中切成两半,将带胚的部分放入培养皿中,加入TTC培养1h左右,观察胚染色的情况。胚被染色的为有活力种子,未被染色的为无活力的种子。 2、别取10颗红豆和黄豆的种子,沿种子的培从中切成两半,将带胚的部分放入培养皿中,加入品红培养10-20min,倒掉品红溶液,冲洗数次,观察胚染色的情况。胚被染色的为无活力种子,未被染色的为有活力的种子。 五、实验结果 品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93% 黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异,用TTC染色得出的结果高于品红染色法。 结果分析:可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净,品红粘在胚上,影响实验的观察,导致结果差异。 六、注意事项 1、选取种子的时候,要尽量选取未发芽的种子,避免影响测定。 2、添加染色液时,要是然也尽量没过种胚,使种胚和染液充分接触。 3、染色时间要尽量控制在规定时间内,染色过长过短都会影响结果测定。 4、清洗品红染液时,要冲洗干净,冲洗数次,直至冲洗液无色为止,冲洗不干净直接影响实验结果的测定。

种子生活力的测定(红墨水法)教学设计

《林果生产技术》实验实训2“种子质量的简易测定”之五:种子生活力的测定(红墨水法)教学设计 课题:种子生活力的测定(红墨水法)课型:专业技能实 训课 班级:2014级现代农艺班时间:2015年10月9日 教学目标: 1、应知:种子生活力的概念,红墨水法测定生活力的原理、意义、步骤。 2、应会:掌握用红墨水染色法测定种子生活力的操作技能,熟悉种子质量鉴定技术过程。 3、能力培养:学会自主学习、合作学习、探究学习,培养动手能力、观察能力、合作意识和专业情感。 教学重点: 小麦种子生活力红墨水染色法测定的方法步骤。 教学难点: 1、切分种子。 2、有无生活力的判断。 教学方法: 1、紧抓生本课堂的五大元素“前置学习、合作学习、展示分享、质疑问难、教师点拨”,让学生自主学习,先做后学,先学后教。 2、恰当运用信息化教学手段。

课前任务布置: 提前一天晚自习分发学案和适量材料样品(每小组分发经浸泡后充分吸胀了的小麦种子50粒左右,单面刀片2片,镊子2把,放大镜1个),自学时间2课时。学案附后。 材料器具准备: 经浸种吸胀后的小麦种子(每小组600粒左右)、直尺、烧杯、9cm培养皿(每小组4套)、镊子(每人1把)、单面刀片(每人1片)、瓷盘、洗瓶、滤纸、5%红墨水。 导入: 种子质量的好坏,直接关系到农业的丰歉。种子的纯度、净度、发芽率、生活力、含水量等是种子分级、是否合格的重要指标。今天我们以小麦种子为例,通过实训操作一起来学习种子生活力的测定方法。同学们课前已经做了预习,在操作之前我们先来弄清楚几个问题,分小组回答: 问题一:种子生活力指的是什么?(一组回答) 答案:种子生活力是指种子潜在的发芽能力。 问题二:既然种子生活力是指种子潜在的发芽能力,那么我们为什么不直接测定种子的发芽率,而测定种子生活力? (二组回答)答案:用标准发芽试验无法准确测出处于休眠状态的种子的发芽能力;发芽试验测定发芽率,所需时间较长,如小麦需要8天,水稻需要14天,多数林木种子则需要更长的时间,而生活力的测定可

种子生活力的测定红墨水法教学设计

种子生活力的测定红墨 水法教学设计 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#

《林果生产技术》实验实训2“种子质量的简易测定”之五: 种子生活力的测定(红墨水法)教学设计 课题:种子生活力的测定(红墨水法)课型:专业技能实训课 班级:2014级现代农艺班时间:2015年10月9日 教学目标: 1、应知:种子生活力的概念,红墨水法测定生活力的原理、意义、步骤。 2、应会:掌握用红墨水染色法测定种子生活力的操作技能,熟悉种子质量鉴定技术过程。 3、能力培养:学会自主学习、合作学习、探究学习,培养动手能力、观察能力、合作意识和专业情感。 教学重点: 小麦种子生活力红墨水染色法测定的方法步骤。 教学难点: 1、切分种子。 2、有无生活力的判断。 教学方法:

1、紧抓生本课堂的五大元素“前置学习、合作学习、展示分享、质疑问难、教师点拨”,让学生自主学习,先做后学,先学后教。 2、恰当运用信息化教学手段。 课前任务布置: 提前一天晚自习分发学案和适量材料样品(每小组分发经浸泡后充分吸胀了的小麦种子50粒左右,单面刀片2片,镊子2把,放大镜1个),自学时间2课时。学案附后。 材料器具准备: 经浸种吸胀后的小麦种子(每小组600粒左右)、直尺、烧杯、9cm培养皿(每小组4套)、镊子(每人1把)、单面刀片(每人1片)、瓷盘、洗瓶、滤纸、5%红墨水。 导入: 种子质量的好坏,直接关系到农业的丰歉。种子的纯度、净度、发芽率、生活力、含水量等是种子分级、是否合格的重要指标。今天我们以小麦种子为例,通过实训操作一起来学习种子生活力的测定方法。同学们课前已经做了预习,在操作之前我们先来弄清楚几个问题,分小组回答: 问题一:种子生活力指的是什么(一组回答) 答案:种子生活力是指种子潜在的发芽能力。

实验六 种子生活力的快速测定

实验六 种子生活力的快速测定 一、实验目的 1.加深对种子作用的理解; 2.掌握种子生活力的测定方法。 二、实验原理 在播种、交换和调运种子之前,都要及时了解种子的发芽率,以确定是否作为播种材料或引种种源。因此,快速而又准确地测定种子生活力,对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 有生活力的种子进行呼吸作用,呼吸代谢途径催化产生的氢(H ) 种子生活力越强,代谢活动越旺盛,被染成红色的程度越深; 死亡种子没有呼吸作用,不会将TTC 还原成红色; 种胚生活力衰退或部分丧失生活力,染成较浅或局部被染色; 三、实验材料及用品 材料:绿豆种子 实验器皿:恒温箱、小烧杯、镊子、刀片 实验试剂:0.5%TTC 溶液(避光保存) 四、实验步骤 1. 浸种:将待测种子在 30 ~ 35 ℃温水中浸种,以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色 :a 、种子处理:随即选取吸胀的种子 40 粒,小心剥去种皮,勿伤及种胚。 b 、实验组处理:将处理好的20粒种子置于小烧杯中,加入0.5%TTC 溶液,以 刚好浸没种子为宜,恒温(32℃)中保1h 。 c 、对照组处理:另取20粒种子,于沸水浴中煮5min 后,加入0.5%TTC 溶液, 以刚好浸没种子为宜,恒温(32℃)中保温1h 。 有生活力的种子进行呼吸 作用,呼吸代谢途径催化产 生的氢(H )

3. 统计:染色结束,马上鉴定;倒出TTC溶液,用清水将种子冲洗1-2次,观察种胚乳染 色情况。有生活力种子:种胚全部或大部分被染成红色;无生活力种子:不被染 色。 生活力的种子数 计算种子生活力的比率= ————————X 100% 实验组测定种子数 五、实验现象与结果 表一种子染色情况记录表 图1 未煮沸的种子染色情况 图2 煮沸的种子染色情况 生活力的种子数 未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70% 实验组测定种子数

三种常用检测种子生活力方法比较

植物生理学小论文 三种常用检测种子生活力方法的比较 班级:09级生物技术2班 学号: 系别: 化学与生命科学系 : 雪婷 日期:2012年5月15日

浅谈三种常用检测种子生活力的方法 雪婷 (师学院化学与生命科学系675000) [摘要] 种子活力是种子最重要的生理及生产指标之一,近年来,无论在育种选种方面还是植物生理实验方面都得到广泛关注。本文基于对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的最新研究进展为基准, 对TTC法、BTB法及红墨水染色法三种常见种子活力快速检测方法进行了简要综述。结论:四氮唑染色法是蔓荆子种子生活力测定的最佳方法,生活力与发芽率呈显著的正相关。 关键词:种子活力;TTC法;BTB法;红墨水染色法;研究进展 The discussion on three kinds of methods to detect seed vigor SUN-xueting (Chuxiong normal university,chuxiong,yunnan675000,China) Abstracts: The seed vigor is the most important physiological and seed production indexes. In recent years,No matter in selecting seeds breeding or in plant physiology experiments. The seed vigor is widely mentioned This paper based on the concept of the seed vigor influence factors of the seed vigor and the seed vigor rapid determination of the latest research progress Comparition of three kinds of methods to determine seed vigor. Keywords: seed vigor ;Triphenyl Tetrazolium Chloride method;Bromo—thymol blue method; red ink method;research progress 种子生活力是检测种子质量最重要的指标之一,它对于种子的发育,萌发,成熟以及成长为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。对于科学选种,快速预测种子的利用价值也具有重要的意义。快速检测种子生活力的方法很多,但生产实验及植物生理实验中常用的主要有氯化三苯基四氮唑(TTC)法、溴麝香草酚蓝(BTB)法和红墨水染色法。这三种方法都能快速测定种子的正常生理代功能是否受到损害,胚是否存活,以了解种子是否还具有发芽的潜力。 种子生活力(seed viability)是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力,通常是指一批种子中具有生命力(即活的)种子数占种子总数的百分率。早在1876年种子学的创始人Nobbe(德国)[1]就指出在同一批种子存在个体间发芽和幼苗生长速度的差异,并且不

种子生活力的测定

种子生活力的测定 一、氯化三苯基四氮唑(TTC)法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH或NADPH)还原时,可产生红色的三苯基甲(TTF),胚便染成红色。当种胚生活力下降时,呼吸作用明显减弱,脱氢酶的活性亦大大下降,胚的颜色变化不明显,故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下: TTC(无色) TTF(红色) 【仪器与用具】 培养皿2套;镊子1把;单面刀片1片;垫板(切种子用)1块;烧杯1个;棕色试剂瓶;解剖针1把;搪瓷盘1个;pH试纸。 【试剂】 TTC溶液的配制:取1g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中,配制成0.1%的TTC溶液。药液pH应在6.5~7.5,以pH试纸试之(如不易溶解,可先加少量酒精,使其溶解后再加水)。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子,用温水(30℃)浸泡2~6h,使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份,每份50粒,沿种胚中央准确切开,取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中,加TTC溶液,以浸没种子为度。 4.放入30~35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40~60min. 5.保温后,倾出药液,用自来水冲洗2~3次,立即观察种胚着色情况,判断种子有无生活力,把判断结果记入表32-1内。 表32-1 染色法测定种子生活力记载表 【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用,如需贮藏则应贮于棕色瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以25~35℃为宜。 3.判断有生活力的种子应具备:胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色;子叶有小部分坏死,其部位不是胚中轴和子叶连接处;胚根尖虽有小部分坏死,但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备:胚全部或大部分不染色;胚根不染色部分不限于根尖;

种子生活力快速测定

种子生活力快速测定 实验人员:候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业 试验目的:种子生活力是指种子的发芽潜力,即发芽力,是判断种子质量的重要指标;要了解种子生活力的大小,最可靠的方法是测定种子的发芽率。种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数,它是鉴定种子质量的主要依据,在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。 本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。 实验仪器及材料: 1、仪器:电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀 2、试剂:3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5% 3、材料:玉米、小麦吸胀种子 方法一:红墨水染色法 实验原理: 红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质 的透性,而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质,于是染料进入死细胞而染色。 操作步骤: 1、浸种:取不同种子一部分用沸水煮5-10min,作为死种子;一部分用凉水浸泡一昼夜,吸 涨备用。 2、染色:取已吸涨种子100粒,玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养 皿中,用5%红墨水染色。 3、结果观察:经过5-8min,倒出红墨水,多次用清水清洗后观察胚的颜色,凡是胚部不着 色的为生活良好的种子,有略带红色的说明生活力较弱,都染红的说明无生活力。 结果:活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100 方法二:BTB变色法 实验原理: 活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2,放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3,H2CO3解离为H+和HCO3-,使得种子周围环境的酸度增加。BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色,碱性呈蓝色,中间经过绿色(变色点为PH7.1)。色泽差异显著,易于观察。 操作步骤:

实验 34 种子生活力的快速测定 - 食品伙伴网

实验 17 种子生活力的快速测定 种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据,与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采用发芽实验,即在适宜条件下,让种子吸水萌发,在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法(直接发芽)测定种子生活力所需时间较长,特别是有时为了应急需要,没有足够的时间来测定发芽率,遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法,则能在较短时间内获得结果。 Ⅰ氯化三苯基四氮唑法( TTC 法) 一、原理 凡有生命活力的种子胚部,在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲( TTF ),而且种子的生活力越强,代谢活动越旺盛,被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用,因而不会将 TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力,则染色较浅或局部被染色。因此,可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料 玉米、小麦等种子。 (二)试剂 0.5% TTC 溶液:称取 0.5 gTTC 放在烧杯中,加入少许 95% 乙醇使其溶解,然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存,若变红色,即不能再用。 (三)仪器设备 恒温箱,培养皿,刀片,烧杯,镊子,天平。 三、实验步骤 1. 浸种将待测种子在 30 ~ 35 ℃温水中浸种(大麦、小麦 6 小时,玉米 5 小时左右),以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色取吸胀的种子 200 粒,用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半,将其中的一半置于 2 只培养皿中,每皿 100 个半粒,加入适量的 0.5% TTC 溶液,以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果,凡胚被染为红色的是活种子。 将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚,作同样染色处理,作为对照观察。 3. 计算活种子的百分率,如果可能的话与实际发芽率作一比较看是否相符? Ⅱ溴麝香草酚蓝法( BTB 法) 一、原理 凡活细胞必有呼吸作用,吸收空气中的 O 2 放出 CO 2 。 CO 2 溶于水成为 H 2 CO 3 , H 2 CO 3 解离成 H + 和 HCO 3 ˉ,使得种胚周围环境的酸度增加,可用溴麝香草酚蓝( BTB )来测定酸度的改变。 BTB 的变色范围为 pH6.0 ~ 7.6 ,酸性呈黄色,碱性呈蓝色,中间经过绿色(变色点为 pH 7.1 )。色泽差异显著,易于观察。 二、实验材料、试剂与仪器设备

实验六 种子生活力的快速测定

实验六种子生活力的快速测定 一、实验目的 1.加深对种子作用的理解; 2.掌握种子生活力的测定方法。 二、实验原理 在播种、交换和调运种子之前,都要及时了解种子的发芽率,以确定是否作为播种材料或引种种源。因此,快速而又准确地测定种子生活力,对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 有生活力的种子进行呼吸作用,呼吸代谢途径催化产生的氢(H) 有生活力的种子进行呼吸 作用,呼吸代谢途径催化产 种子生活力越强,代谢活动越旺盛,被染成红色的程度越深; 死亡种子没有呼吸作用,不会将TTC还原成红色; 种胚生活力衰退或部分丧失生活力,染成较浅或局部被染色; 三、实验材料及用品 材料:绿豆种子 实验器皿:恒温箱、小烧杯、镊子、刀片 实验试剂:0.5%TTC溶液(避光保存) 四、实验步骤 1. 浸种:将待测种子在 30 ~ 35 ℃温水中浸种,以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色:a、种子处理:随即选取吸胀的种子 40 粒,小心剥去种皮,勿伤及种胚。 b、实验组处理:将处理好的20粒种子置于小烧杯中,加入0.5%TTC溶液,以刚 好浸没种子为宜,恒温(32℃)中保1h。 c、对照组处理:另取20粒种子,于沸水浴中煮5min后,加入0.5%TTC溶液, 以刚好浸没种子为宜,恒温(

32℃)中保温1h。 3. 统计:染色结束,马上鉴定;倒出TTC溶液,用清水将种子冲洗1-2次,观察种胚乳染 色情况。有生活力种子:种胚全部或大部分被染成红色;无生活力种子:不被染 色。 生活力的种子数 计算种子生活力的比率= ————————X 100% 实验组测定种子数 五、实验现象与结果 保温1h后种子染色情况: 被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6 煮沸的种子 0 20 表一种子染色情况记录表 图1 未煮沸的种子染色情况 图2 煮沸的种子染色情况 生活力的种子数 未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%

实验四 种子生活力测定

实验四种子生活力测定 一、目的要求 应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。 二、材料用具 (一)材料:水稻和玉米种子 (二)药品:2.3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。 三、方法步骤 (一)四唑盐类法: 1.在洁净的水稻种子中,随机数取试样2份,各100粒剥去谷壳,浸入30℃的水中6-8小时。 2.用2.3.5-氯化三苯基四氮唑配制成的溶液,装在棕色玻璃瓶里,保存在黑暗中。 3.将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切,取其一半浸于已配好的药液中,放于暗处(最好用棕色发芽皿盛放),经24小时可观察结果,如果提高温度可以缩短处理时间(40℃1小时)。 4.观察结果:凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子,凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。 5.具体种子具体做法: 取水稻种子样品200粒,去壳,放纸间或水中30℃预湿12h,沿种子侧面胚纵切,放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h,凡是胚的主要构造染成正常鲜红色,或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。 (二)红墨水染色法: 1.从洁净玉米种子随机数取试样二,各100粒,于30℃温水中浸2-3小时。 2.配制红墨水溶液,用红墨水加水配成1:60的溶液。 3.取出软化过的种子,沿胚切成对半,取其半粒种子。 4.浸入红墨水溶液,15分钟后取出,用清水冲洗。 5.观察结果:凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子,凡种胚染色者为无生活力的种子。

四、结果表示与报告 计算各个重复中有生活力的种子数,重复间最大容许差距不得超过附表(生活力测定重复间的最大容许差距)的规定,平均百分率计算到最近似的整数。

种子生活力快速测定-教案-参考模板

种子生活力快速测定 ------红墨水染色法 一、教学目标: 知识与能力 熟悉红墨水染色法测定种子生活力的原理和方法及其计算 过程与方法 通过实验,培养学生动手操作的能力 情感态度与价值观 通过观察和实验等教学活动,培养学生科学的思维方法,实事求是的科学态度以及协作精神。 二、教学重点和难点 显色过程既是重点又是难点 三、教学准备 (一)教师准备 1.仪器设备、材料和试剂 (1)仪器: 培养皿2套;镊子1把;单面刀片1片;垫板(切种子用)1块;烧杯1个;搪瓷盘1个; (2)试剂: 取市售红墨水稀释20倍(1份红墨水加19份自来水)做为染色剂。 (3)材料: 玉米或小麦 2.实验操作准备 浸种 实验组将待测种子在30~35℃温水中浸泡(大麦、小麦、籼谷6~8h , 玉米5h左右,梗谷2h), 以增强种胚的呼吸强度,使显色迅速。 对照组取充分吸胀后取出一部分种子,在沸水中煮沸3~5min,

3.学生分好组 (二)、学生准备 学生课前认真的自学,自己查找相关资料,了解与弄清所需实验用具或用品的用途和用法,做好预习案及实验前的一切准备。 四、教学方法、教学手段: 1、教学方法:实验探究。 2、教学手段:本节课以学生亲自动手实践为主,教师演示与辅导为辅的教学手段。 五、教学设计: (一)创设情景,导入新课: 教师讲述:种子生活力就是种子发芽的潜在能力,通过对种子生活力的测定可以快速预测种子的发芽能力,为我们的播种选种提供理论依据,本节课我们就是学习怎样动手快速测定种子生活力。 (二)讲授新课 1.将在预习过程中遇到的疑惑,带到课堂师生共同解决,师生共同回顾种子生活力的相关知识。 2.红墨水染色法测种子生活力 (1)教师示范操作(同时讲解操作要点) 步骤: ①. 显色 取吸胀的种子和死种子各50粒,用刀片沿种胚中央纵切为两半, 其中一半放入培养皿中,加适量红墨水溶液(以浸没种子为度),染 色10-20min后倒去红墨水溶液,用水反复冲洗多次,至冲洗液无色为止。 ②.观察 对比观察冲洗后两组种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅 红色者,即具有生活力的种子,若胚部染成与胚乳相同的红色,则为 死种子,把测定结果记录在表格内。 (2)学生动手操作,教师巡回指导 (3)引导学生在观察的过程中讨论解决下列问题。 ①.种子生活力的测定方法还有哪些?

简单测定种子的生活力

8种子生活力测定 Z—1概述 种子生活力(Seed viability)是指种子发芽的潜在能力。种子生活力测定在农业生产上具有重要的意义:①测定休眠种子的生活力。许多植物种子因存在休眠,暂时不能萌发,因此发芽率很低,尤其是新收获的和野生性较强的种子,必须进行生活力测定,才能了解种子的发芽潜力,以便合理利用种子。播种前对发芽率低而生活力高的种子,应进行适当处理。种子检验时,若发芽试验末期有新鲜不发芽种子或硬实种子,也应接着进行生活力测定,以正确评定种子品质。②快速预测种子的发芽力。休眠种子可借助于各种处理措施打破休眠,然后进行发芽试验,但所需时间较长。而种子贸易中,有时因时间紧迫,不可能采用标准发芽试验来测定发芽力,因为发芽试验所需时间更长,如小麦需8d,水稻需14d,某些蔬菜和牧草种子需2~3周,而多数林木种子则需要更长的时间。在这种情况下,可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考。 种子生活力测定方法有10多种,根据其测定原理可大致分为4类:①生物化学法,如四唑测定法、溴麝香草酚蓝法、甲烯蓝法、中性红法和二硝基苯法等。②组织化学法,如靛蓝染色法、红墨水染色法和软x射线造影法等。③荧光分析法。④离体胚测定法。本节主要介绍四唑测定法、离体胚测定法、染料染色法和软x射线造影法。 Z—2生活力测定方法 一、测定原理 有生活力的种子,其活细胞原生质膜具有选择透性,当种子浸入染料后,染料大分子不能进入活细胞内,所以胚部等活组织不能被染料染色,而死的种胚细胞因原生质膜丧失选择吸收能力,故可被染料染色。 二、测定方法 (一)染色法 1.靛蓝染色法 此法适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。所用试剂为靛蓝(或称靛蓝洋红),分子式为C18H8O2N2(SO5Na)2,系蓝色粉剂,能缓慢溶于水。测定方法如下: (l) 种子预处理:将种子浸人30℃水中,水稻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等种子须先去壳再浸种,浸种时间因种子不同而异,小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为3h,燕麦、芝麻等4h,油菜、花生、棉籽等6 h,蓖麻、红麻、大麻等7 h、黍8 h、水稻12 h、玉米20 h将充分吸胀的种子(100粒2次重复),沿胚中线纵切(如禾谷类)或剥去种皮(如双子叶种子),以备染色用。

实验 植物种子生活力快速测定 (1)

实验十一植物种子生活力快速测定 一、实验目的 掌握植物种子生活力检测的基本原理及快速鉴定植物种子生活力的方法。 二、实验原理 种子活力是决定种子在发芽和出苗期间的活性强度和种子特性的综合表现(指田间条件下的出苗能力及与此有关的其他特征和指标),种子生活力是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力(通常指一批种子中具有生命力种子数占种子总数的百分率)。种子贮藏过程中必须维持种子是有活力的,因此定期进行生活力和活力的检测是非常重要的。测定种子生活力方法常用发芽率测定法,该法是指在最适宜的条件下,在规定天数内发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据,与播种时的用种量直接有关。但是常规方法(直接发芽)测定种子发芽率所需的时间较长,对于处于深休眠状态的种子,几乎难于应用。特别是有时为了应急需要,没有足够的时间来测定种子发芽率,所以有必要根据种子的生理特性建立起一套快速测定种子生活力的方法。 红墨水染色法 凡是生活的活细胞的原生质膜都具有选择吸收能力,它对某些染料不让透过,因此用这类染料(如红墨水、酸性靛蓝等)不能使种胚染色。而死种子的胚细胞原生质膜丧失了选择吸收能力,于是染料进入死细胞,将胚完全染色。因此,可根据种胚或子叶对染料的着色情况判断种子的发芽率。 三、实验材料 小麦种子、大麦种子、籼稻种子、玉米种子、粳稻种子、蚕豆种子、大豆种子。 四、设备与试剂 恒温箱,培养皿,烧杯,镊子,刀片,紫外荧光灯,滤纸(无荧光),琼脂,沸水。 5%红墨水:市售红墨水5 mL加95 mL自来水。 五、实验步骤 1.红墨水染色法 将待测种子在30~35℃温水中浸种(小麦、大麦、籼稻种子6~8h;玉米种子5 h 左右;粳稻种子2 h),以增加种胚的呼吸速率,使显色迅速;取吸胀的种子200 粒,沿种子胚的中心线纵切为二半,将其中的一半置于红墨水培养皿中5~10 min;用红墨水染色后,倒去废液,用水冲洗多次,至冲洗液无色为止,并检查种子死活。凡种胚不着色或着色很浅的为活种子,种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。也可用沸水杀死的种子作为对照观察。

第五章 种子生活力和活力测定

第五章种子生活力与活力测定 本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法 §2、种子活力测定原理及方法 第一节种子生活力测定的原理与方法 在种子贸易中,时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况,如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果,种子生活力测定可以满足这一要求。 一、种子生活力概念: 种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的 生命力; 种子生活力和发芽具有不同的含义: 一些休眠种子在发芽试验中不能发芽,但它是有生活力的,破除休眠后,能长成正常幼苗。而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。所以,种子生活力测定,反映的是种子批的最大发芽潜力。 二、种子生活力测定的意义 1、测定休眠种子的生活力 新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子,正常发芽条件下,其发芽力很低,这种情况下,仅用发芽试验测定其发芽率,就不可能测出种子的最高发芽率。必须进行生活力测定,了解种子的发芽潜力,合理利用种子。(怎样利用?) 播种之前对发芽率低而生活力高的种子,应进行适当处理后播种。 种子检验时,发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子,就应接着进行生活力测定;或破除休眠后做发芽试验。 2、快速预测种子的发芽力: 休眠种子可借助于各种预处理打破休眠,进行发芽试验,但时间较长;而种子贸易中,因时间紧迫,不可能采用标准发芽试验来测定发芽力,

因为发芽试验所需的时间较长。如小麦8d,水稻14d,菠菜21d。 而多数林木种子则需要更长的时间(如月季15~25℃发芽,70d计算发芽率)。这时,可用生物化学法测定种子生活力作为参考;而林木种子可用生活力来代替发芽力。 种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。 本节将重点介绍四唑染色法,并简要介绍其他方法。 三、四唑测定法(GB) (一)四唑测定法概述 1、发展简史 四唑测定法于1942年由德国https://www.doczj.com/doc/c01816625.html,kon(莱康)教授发明,二战期间传人美国。ISTA于1950年成立四唑测定技术委员会,1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程,主持编写《四唑测定手册》,经过多次ISTA会议讨论修改,于1984年正式公布发行。该手册汇集了650多个种属的具体测定技术,是四唑测定的权威性参考书。目前国际和国家检验规程都将其列于正式检验项目,它是测定种子生活力公认的最有效的方法。 2、四唑测定方法的特点 四唑测定是一种世界公认、省时快速、结果可靠的种子生活力 测定方法。有以下几个特点: 1)原理可靠,结果准确:主要是按胚的染色图形来判断种子的死与活,该技术已发展成熟。如果能正确使用四唑测定方法,四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3~5%。 2)不受休眠限制:利用种子内部的还原反应显色来判断种子的死与活,不受休眠限制。 3)方法简便,省时快速:所需仪器设备和物品较少(恒温箱、培养皿、刀片、镊子、放大镜和四唑药品等)。测定方法也较为简便,

8、种子生活力的快速测定(TTC法)

华南农业大学实验报告 专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定(TTC法)姓名梁志雄日期2012-11-21 一、实验原理 有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF,如果种胚死亡或种胚生活力衰退,则不能染色或染色较浅,因此,可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力 二、实验材料与实验器材 水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯 三、实验步骤 1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热,将水稻种子用温水(30~35℃)浸泡2~6h,使 种子充分吸涨 2、随机抽取30粒水稻种子,小心剥去种皮,千万不要伤害种胚,然后把处理好的种子置 于小白瓷碗中,加入0.5%TTC溶液,以刚好浸没种子为度,与恒温箱中(30~35℃)中保温0.5-1h。 3、染色结束后要立即进行鉴定,因放置太久会褪色。倒出TTC溶液,再用清水将种子清 洗1~2次,观察种胚染色的情况。凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子,种胚不被染色的为死种子。 四、数据记录记录 本实验测得染色种子25粒,无色种子5粒,其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的,说明其生长活性物质多,生命力强。根据以下公式 种子活力(%)=有活力的种子数/种子总数×100%

可以知道种子活力=25/30*100%=83.3% 六、实验总结 有生活力的种子能够进行呼吸代谢,在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF,且代谢物质越多,颜色越深,代谢强度越大。从本实验结果来看,种子生命力总体上时比较强的,且其中的19粒染色较深的那些则更高。另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。

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