利用分子生物技术，将一种生物的基因转移到另一物种，使其品种特性向人们所希望的方向发生转变，即为“转基因技术”。利用转基因技术培育出来的农作物，即为“转基因农作物”。以转基因农作物为直接食品或作为原料加工生产的食品就是“转基因食品”。 世界上越是农业发达的国家（如美国、加拿大、巴西、阿根廷、澳大利亚），其转基因农作物的种植比重越大。转基因农作物自1983年诞生以来，对增加粮食产量产生了巨大的推动作用。经过观察、研究和论证，我国自上世纪90年代开始批准引进转基因农作物。我们日常能够接触到的转基因农作物，都是经过国家论证批准的。止目前，没有确切的研究证明其对人体和生态环境的有害性。但事物都具有两面性，下面分述其主要利弊。 转基因农作物的优点： 一、能够大幅度降低生产成本，提升品质和产量。其抗病、抗虫、抗除草剂特性还可以大幅度减少农药用量，利于保护环境。 二、将豆科植物的固氮特性转移到小麦和玉米等大宗农作物中，能够大幅度降低化肥用量。 三、部分转基因农作物具有预防和治疗疾病的作用，可以用来开发生产功能性食品。
三、四季常青的转基因牧草能够大幅度提高单位面积牧场的载畜量并防止草原沙化。 四、耐寒、耐旱的新品种能够使不能耕种的高纬度和高海拔地区变成牧场甚至良田。 转基因农作物的弊端： 一、对生态环境影响的远期不确定性。尽管目前的研究证明其对生态环境没有明显的不良影响，但长期大规模种植对生态环境的影响尚不确定。 二、对人体健康影响的远期不确定性。食物品种和食物结构的长期改变，究竟会对人体健康产生什么样的影响，尚需长期观察和研究。 三、已有研究证明，对于某个物种过敏的人群，由于该物种的基因转移到了另一物种，该过敏人群也可能会对该新物种产生过敏反应。而该过敏人群可能预先并不清楚，从而产生不可预料的后果。 四、医疗上抗生素长期大量使用，产生了具有耐药性的细菌变种，使部分抗生素失灵。高抗性物种的大规模推广也可能催生新的有害物种。
枯草芽孢杆菌简介及应用 枯草芽孢杆菌简介 枯草芽孢杆菌（Bacillaceae）编号为Strain Number ACCC 11060，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚[1]。早在1835 年，Ehrenberg 所描述的“Vibrio subtilis”即是现在大家熟悉的“枯草芽孢杆菌”，它是由Cohn 于1872 年正式命名的，现作为芽孢杆菌科(Bacillaceae) 的模式菌株，芽孢杆菌是人类发现最早的细菌之一。 枯草芽孢杆菌应用 枯草杆菌(B acillus Subtilis) 是一种重要的α-淀粉酶生产菌。同时枯草芽孢杆菌作为一种安全、高效、多功能和极具开发潜力的微生物菌种已广泛应用于工业、农业、医药、卫生、食品、畜牧业、水产及科研诸领域。随着经济的发展、科研水平的提高，枯草芽孢杆菌与人们的日常生活将更为密切，它也必将作为一种十分重要的工业微生物菌种越来越引起人们的普遍关注和青睐。 ①枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用 工业酶的生产是工业微生物发酵的重要组成部分。枯草芽孢杆菌是当今工业酶生应用最广泛的菌种之一，据不完全统计，枯草芽孢杆菌所产的酶占整个酶市场的50 %。由于其产酶量高、种类多、安全性好和环保等优点，在现代工业生产中被广泛用作生产菌种，其发酵生产的酶已在食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸和医药等领域均发挥着十分重要的作用。 ②枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用 枯草芽孢杆菌作为植物病害生防细菌之一，具有较强的防病作用美国迄今已有4 株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局商品化或有限商品化生产应用许可，如美国AgraQuest公司用枯草芽孢杆菌QST713 菌株开发出活菌制剂杀菌剂SerenadeTM，并于2000 年通过美国环保局(EPA) 的登记，用于防治多种作物的白粉病、霜露病、疫病、灰霉病等病害。我国利用枯草芽孢杆菌防治植物病害的应用研究也达到了世界先进水
题型培优4PCR的相关问题分析 （单选题每题2分，多选题每题3分） 题型一PCR技术及其操作过程 1. (2018·常熟中学)下面关于多聚酶链式反应(PCR)的叙述,正确的是( ) A. PCR过程中需要引物,是为了使DNA双链分开 B. PCR技术利用DNA双链复制的原理,可在短时间内大量扩增目的基因 C. 延伸过程中需要Taq酶、ATP、4种核糖核苷酸 D. PCR过程中边解旋边复制 2. 下列有关PCR技术的叙述,错误的是( ) A. 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 B. 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C. PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA D. PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 3. (2018·盐城中学)下图表示PCR扩增某个目的基因的基本过程,有关叙述正确的是( ) A. PCR技术的主要原理是DNA复制,解旋酶和DNA聚合酶分别在图中①③两步中起作用 B. 据图分析PCR操作过程中使用的DNA聚合酶至少要能忍受72 ℃的高温 C. PCR技术使用的前提是能够利用目的基因的部分序列合成至少1种引物 D. 因为引物不能重复使用,所以在第n轮扩增过程中至少消耗2n个引物 4. (2018·如皋调研)用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增,设计了引物Ⅰ、Ⅱ,其连接部位如右图所示,X为某限制酶识别序列。扩增后得到的绝大部分DNA片段是下图中的( )
A B C D 5. (2017·江苏卷（9分）)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白,某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因,构建转基因工程菌,用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程如右栏上图所示,请回答下列问题: (1)从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA,通过获得用于PCR扩增。 (2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的位点。设计引物时需要避免引物之间形成,而造成引物自连。 (3)图中步骤1代表,步骤2代表退火,步骤3代表延伸,这三个步骤组成一轮循环。 (4) PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关,长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。 (5)如果PCR反应得不到任何扩增产物,则可以采取的改进措施有(填标号:①升高退火温度;②降低退火温度;③重新设计引物)。 题型二PCR与DNA复制的比较及相关数量等问题 6. (2018·响水中学)下图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程,其原理与细胞内DNA复制类似。下列叙述错误的是( ) A. 从理论上推测,第二轮循环产物中含有引物A的DNA片段占3/4 B. 在第二轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段
中国市场上的转基因食品及鉴别方法 国内市场上的转基因食品清单 一、我国转基因作物有哪些? 1、已批准安全证书的有棉花、水稻、玉米和番木瓜，只有棉花、番木瓜批准商业化种植 “截至目前，我国批准了转基因生产应用安全证书并在有效期内的作物有棉花、水稻、玉米和番木瓜。”中国农科院植保所副研究员谢家建介绍说。 “目前，转基因水稻和转基因玉米尚未完成种子法规定的审批，没有商业化种植。”谢家建表示，“我国已经进行商业化种植的转基因作物只有棉花和番木瓜。” 我国批准进口用作加工原料的转基因作物有大豆、玉米、油菜、棉花和甜菜。这些食品必须获得我国的安全证书。 2、目前市售圣女果、彩椒、小南瓜、小黄瓜都不是转基因食品 网上流传一份转基因食品名单，包括“圣女果、大个儿彩椒、小南瓜、小黄瓜”。对此专家并不认同。 中国农科院生物所研究员王志兴说，小番茄也叫圣女果、樱桃番茄，是自古就有的番茄品种，只是因为个头小、采摘不便、产量低，最早仅作为观赏用，后来发现食
用方便，口味经过改良后逐渐流行。个头小是天生的基因差异，不是转基因的结果。 中国农科院油料所副研究员吴刚说，小南瓜和小黄瓜也不是转基因食品，仅仅是未充分成熟的南瓜和黄瓜。如果继续在田间种植，小南瓜和小黄瓜最终会生长成普通的大南瓜和老黄瓜。 关于大个儿彩椒，吴刚表示，大个儿彩椒含有不同类型的花青素，表现为更丰富的颜色。花青素的变异在植物中很常见，像鲜花同一个品种就有不同颜色，萝卜也有红萝卜、绿萝卜、白萝卜等。“我国曾经批准过抗病毒甜椒的商业化种植，但与常规甜椒相比，转基因甜椒并没有明显优势，因此被市场自然淘汰。” 3、我国市场转基因食品主要是大豆油和木瓜 中国农业大学食品工程与营养科学院院长罗云波介绍，目前中国市场上的转基因食品主要有两种，一种是转基因食用油，就是我们所说的大豆色拉油，来源主要是从美洲，尤其是从美国、阿根廷、巴西等国家进口的大豆所生产出来的食用油。 还有一种就是转基因木瓜，因为木瓜容易得一种农药很难治的病，用基因的技术能够控制，转基因木瓜也是我们能够吃到的转基因食品。除此之外，我国很少能够见得转基因种类的食品。
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
农业转基因生物安全管理条例 （2001年5月23日中华人民共和国国务院令第304号发布根据2011年1月8日《国务院令关于废止和修改部分行政法 规的决定》修订 根据2017年10月7日《国务院关于修改部分行政法规的决定》 修订） 第一章总则 第一条为了加强农业转基因生物安全管理，保障人体健康和动植物、微生物安全，保护生态环境，促进农业转基因生物技术研究，制定本条例。 第二条在中华人民共和国境内从事农业转基因生物的研究、试验、生产、加工、经营和进口、出口活动，必须遵守本条例。 第三条本条例所称农业转基因生物，是指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的动植物、微生物及其产品，主要包括： （一）转基因动植物（含种子、种畜禽、水产苗种）和微生物； （二）转基因动植物、微生物产品； （三）转基因农产品的直接加工品；
（四）含有转基因动植物、微生物或者其产品成分的种子、种畜禽、水产苗种、农药、兽药、肥料和添加剂等产品。 本条例所称农业转基因生物安全，是指防范农业转基因生物对人类、动植物、微生物和生态环境构成的危险或者潜在风险。 第四条国务院农业行政主管部门负责全国农业转基因生物安全的监督管理工作。 县级以上地方各级人民政府农业行政主管部门负责本行政区域内的农业转基因生物安全的监督管理工作。 县级以上各级人民政府有关部门依照《中华人民共和国食品安全法》的有关规定，负责转基因食品安全的监督管理工作。 第五条国务院建立农业转基因生物安全管理部际联席会议制度。 农业转基因生物安全管理部际联席会议由农业、科技、环境保护、卫生、外经贸、检验检疫等有关部门的负责人组成，负责研究、协调农业转基因生物安全管理工作中的重大问题。 第六条国家对农业转基因生物安全实行分级管理评价制度。
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一种方法：电转化 (3) 第二种方法：Spizizen转化 (3) 第三种方法：原生质体法(Takashi) (4) 第四种方法：原生质体转化之二 (4) 第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (5) 第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (7) 第二节芽孢杆菌的缺点 (7) 第三节助表达系统 (7) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7) 第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8) 第一节：转录系统 (9) 第二节：翻译系统 (9) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10) 第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11) 1 中国 (11) 2 日本 (12) 3 加拿大 (12) 第七章芽孢杆菌其他产品 (13) 第一节核苷类产品 (13) 第二节核黄素 (13) 第三节微生物制剂/益生菌 (13) 第八章结语 (14) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15) 致谢及参考文献 (15)
第一章芽孢杆菌的简要介绍 芽孢杆菌作为一个属，于1872年被首次提出，至今已有一百多年。目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。芽孢杆菌是一个泛泛的概念，而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌，例如168菌株及其大量的衍生菌株。枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种，主要是由于他的转化、转导方法较完善，以及大量的衍生菌株。 目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。 第一节芽孢杆菌种类 目前，芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道，截至2011年10月，在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有： 简称菌种名称测序时间测序链接 bsu Bacillus subtilis1997RefSeq bss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeq bst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeq bsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeq bha Bacillus halodurans2000RefSeq ban Bacillus anthracis Ames2003RefSeq bar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeq bat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeq bah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeq bai Bacillus anthracis A02482009 RefSeq bal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeq bce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeq bca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeq bcz Bacillus cereus ZK2004RefSeq bcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeq bcb Bacillus cereus B42642008 RefSeq bcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeq bcg Bacillus cereus G9******* RefSeq bcq Bacillus cereus Q12009RefSeq
基因工程综合测试-刷真题 1 用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶 切位点及酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是 （D） A.图1中两种酶识别的核苷酸序列不同 B.图2中酶切产物可用于构建重组DNA C.泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物 D.图中被酶切的DNA片段是单链DNA 2 博耶（H．Boyer）和科恩（S．Coben）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。请回答下列问题： （1）该项研究利用了基因工程的原理和技术，基因工程的原理是__ _。其中非洲爪蟾核糖体蛋白基因是_ _。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_ __（答出两点即可）。（2）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组需要借助_ __酶的作用，然后用__ _处理大肠杆菌细胞，在一定温度的缓冲液中促进重组质粒被细胞吸收。也可以将重组质粒与噬菌体的蛋白质外壳组装，形成重组噬菌体，再通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是___。 （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用___ 缺陷的大肠杆菌作为受体细胞。 答案：（1）基因重组目的基因体外重组的质粒可以进入受体细胞真核生物基因可在原核细胞中表达（2）DNA连接酶钙离子细菌（3）蛋白酶（蛋白酶基因） 3 某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲）作目的基因，并将其插入质粒PO，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如图，图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题： （1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_ __。使用这两种酶进行酶切是为了保证__ _的完整性，启动子能与__ _特异性结合驱动转录开始。（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了__ _和_ __过程。 （3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的__ _移入牛的__ _中、体外培养、胚胎移植等。 （4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的__ _（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。 答案：（1）E1和E4甲RNA聚合酶（2）转录翻译（3）细胞核去核卵母细胞（4）核DNA 4 甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下。（1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，逆转录成对应DNA后，利用________技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的________，因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。
国内市场上的转基因食品清单 一、我国转基因作物有哪些 ? 1、已批准安全证书的有棉花、水稻、玉米和番木瓜，只有棉花、番木瓜批准商业化种 植 “截至目前，我国批准了转基因生产应用安全证书并在有效期内的作物有棉花、水稻、 玉米和番木瓜。”中国农科院植保所副研究员谢家建介绍说。 目前， 转基因水稻和转基因玉米尚未完成种子法规定的审批， 家建表 示，“我国已经进行商业化种植的转基因作物只有棉花和番木瓜。 我国批准进口用作加工原料的转基因作物有大豆、玉米、 必须获得我国的安全证书。 2、目前市售圣女果、彩椒、小南瓜、小黄瓜都不是转基因食品 网上流传一份转基因食品名单，包括“圣女果、大个儿彩椒、小南瓜、小黄瓜”。对此 专家并不认同。 中国农科院生物所研究员王志兴说， 小番茄也叫圣女果、 樱桃番茄， 是自古就有的番茄 品种，只是因为个头小、采摘不便、产量低，最早仅作为观赏用，后来发现食用方便，口味 经过改良后逐渐流行。个头小是天生的基因差异，不是转基因的结果。 中国农科院油料所副研究员吴刚说， 小南瓜和小黄瓜也不是转基因食品， 仅仅是未充分 成熟的南瓜和黄瓜。 如果继续在田间种植， 小南瓜和小黄瓜最终会生长成普通的大南瓜和老 黄瓜。 关于大个儿彩椒， 吴刚表示， 大个儿彩椒含有不同类型的花青素， 表现为更丰富的颜色。 花青素的变异在植物中很常见， 像鲜花同一个品种就有不同颜色， 萝卜也有红萝卜、 绿萝卜、 白萝卜等。 “我国曾经批准过抗病毒甜椒的商业化种植， 但与常规甜椒相比， 转基因甜椒并 没有明显优势，因此被市场自然淘汰。” 3、我国市场转基因食品主要是大豆油和木瓜 中国农业大学食品工程与营养科学院院长罗云波介绍， 目前中国市场上的转基因食品主 要有两种， 一种是转基因食用油，就是我们所说的大豆色拉油，来源主要是从美洲，尤其是 从美国、阿根廷、巴西等国家进口的大豆所生产出来的食用油。 还有一种就是转基因木瓜， 因为木瓜容易得一种农药很难治的病， 用基因的技术能够控 制，转基因木瓜也是我们能够吃到的转基因食品。 除此之外， 我国很少能够见得转基因种类 的食品。 4、吃了转基因大豆豆粕饲料长大的牛羊，其肉制品不是转基因食品 罗云波：这个应该不算，转基因是没有商业化种植。 ”谢 油菜、 棉花和甜菜。这些食品
目的基因到工程菌的构建 1基因工程的诞生 1972年，美国斯坦福大学的学者首先在体外进行了DNA改造的研究，他们把SV40（一种猴病毒）的DNA分别切割，又将两者连接在一起，成功构建了第一个体外重组的人工DNA分子。1973年，Cohen等人首次在体外将重组的DNA分子导入大肠杆菌中，成功地进行了无性繁殖，从而完成了DNA体外重组和扩增的全过程。在这个的基础上，基因工程诞生了。 SV40病毒
第一个重组体的构建 1.1基因工程技术的三大理论基础 一是20世纪40年代Avery等人通过肺炎球菌的转化实验证明了生物的遗传物质是DNA，而且证明了通过DNA可以把一个细菌的性状转移给另一个细菌。二是20世纪50年代Watson和Crick发现了DNA分子的双螺旋结构及DNA的半保留复制机理。三是20世纪60年代关于遗传信 息中心法则的确立，即生物体中遗传信息是按DN A→RNA→蛋白质的方向
进行传递的。 1.2基因工程技术的三大技术基础 三大基本技术问题：一是如何从生物体庞大的双链DNA分子中将所需的基因片段切割下来；二是如何将切割下来的DNA片段进行繁殖扩增；三是如何将所获得的基因片段重新连接。20世纪70年代，由Smith等人发现的核酸限制性内切酶、DNA连接酶和可以作为基因工程载体的细菌质粒的发现，解决了上述三大问题。 1.2.1 限制性核酸内切酶 限制性内切酶不切割自身DNA是因为原核生物中不存在酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 1.2.2 DNA连接酶 作用实质：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起，形成重组DNA分子，其起作用时不需要模板。 1.2.3 基因工程的载体-质粒 基因载体的作用是运载目的基因进入宿主细胞，使之能得到复制和进行表达。也就是说，离开染色体的外源DNA不能复制，而而插入复制子DNA的外源DNA可作为复制子的一部分在受体菌中进行复制，这种复
第29卷 第2期2010年5月铀 矿 冶 URANIU M M IN ING A ND M ETA LLURGY Vo l 29 No 2M ay 2010 收稿日期:2009 09 09 基金项目:国家自然科学基金项目(10775065,20707008);湖南省高校创新平台开放基金项目作者简介:梁颂军(1985 ),男,湖南省涟源市人,在读硕士研究生,研究方向为水处理理论与技术。 含重金属抗性基因工程菌的构建与应用 梁颂军1 ,谢水波1,2 ,王文涛1 ,李仕友 2 (1.南华大学污染控制与资源化技术湖南省重点实验室,湖南衡阳421001; 2.南华大学铀矿冶生物技术国 防重点学科实验室,湖南衡阳421001) 摘要:介绍含重金属抗性基因工程菌的构建;阐述含金属络合物基因工程菌、含特异性金属转运酶基因工程菌和含金属沉淀酶基因工程菌在含重金属废水处理中的应用,及其表现出的高富集容量、高选择性与生存能力强的特点;探讨处理过程中的影响因素,指出应用时存在的安全性、遗传稳定性等问题。利用含重金属抗性基因工程菌处理含重金属废水具有广阔的应用前景。关键词:基因工程菌;重金属废水;富集 中图分类号:Q 789;X 703.1 文献标志码:A 文章编号:1000 8063(2010)02 0092 05 含有大量重金属的废水对人类健康的影响及生态环境的破坏日益严重。治理重金属废水的方法有多种,其中微生物吸附法以其原材料来源丰富、成本低、操作简单及吸附速度快等优点而引起广泛关注。而未经任何处理的微生物往往对pH 、离子强度及辐射强度等环境因素反应敏感,并且当废水中多种重金属离子共存时,对目标重金属离子的选择性不高。针对这些问题,一些新型生物处理技术应运而生,其中利用分子生物学技术构建高富集容量、高选择性及生存能力强的基因工程菌成为当前研究的热点。 1 含重金属抗性基因工程菌的构建 1.1 宿主菌的选择 选择适宜的宿主菌是构建高效基因工程菌的基本前提之一。理想的宿主菌应该满足便于目的 DNA 的导入;能使目的DNA 稳定存在于宿主菌中;便于基因工程菌的筛选;遗传稳定性高,易于扩大培养或发酵生长;安全性高,无致病性,不会 对外界造成生物污染等条件。 目前,被广泛用作宿主菌的菌体有E sche richia coli 、Bacillus subtilis 、Yeast 及Deinococ cus radiod ur ans 等。其中E.coli 是迄今研究得最为详尽、应用最为广泛的原核生物种类之一,也是基因工程研究与应用中发展最为完善的载体受体系统。D.r adiodurans 具有易于被染色体DNA 和质粒DNA 自然转化的遗传化学特性,及耐辐射能力强、无致病性、易分离培养等优点,以它作为宿主菌的基因工程菌可应用于放射性环境下重金属污染的修复。笔者利用基因工程技术将非特异性酸性磷酸酶基因(p hoN )克隆到D.radio dur ans R1中,构建了耐辐射超富集核素的基因工程菌,用于改良核污染区污染的土壤与地下水。1.2 目的基因 这里的目的基因主要是指一系列重金属抗性基因,用于激活和编码金属结合蛋白、操纵子、金属转运酶和金属还原酶等。近期报道的主要重金属抗性基因见表1。 表1 重金属抗性基因 基因来源表达产物功能文献z itB E.c oli Zn 转运酶对Zn 具有抗性[1]Zhf Sch iz osacchar omy ces p ombe Zn/Co 转运酶 对Zn/C o 具有抗性 [2]
毛细血管 毛细血管 毛细血管就是极细微得血管,管径较小,平均为６～9μｍ,血流很慢，连于动、静脉之间,并互相连接成网状.除软骨、角膜、毛发上皮与牙釉质外,遍布全身。毛细血管壁薄,通透性大。其功能就是利于血液与组织之间进行物质交换。荷兰显微镜学家Ａ、van列文·虎克通过大量细微得观察,解释并完善了M、马尔皮基提出得关于毛细血管系统得知识，证明了动脉与静脉就是与毛细血管直接相连得. 简介编辑毛细血管就是极细微得血管,管径平均为6～9μm,连于动、静脉之间,互相连接成网状。毛细血管数量很多，除软骨、角膜、毛发上皮与牙釉质外，遍布全身。毛细血管壁薄仅有一层上皮细胞构成,管内径极小，血流很慢,通透性大,红细胞只能单行通过,管内血流速度较慢.这些特点有利于血液与组织之间充分进行物质交换。 荷兰显微镜学家A、vａn列文·虎克自制了许多性能优良得显微镜，最高得放大倍数达27０倍。她通过大量细微得观察，解释并完善了M、马尔皮基提出得关于毛细血管系统得知识,证明动脉与静脉分别与毛细血管直接相连。 毛细血管就是体内分布最广、管壁最薄、口径最小得血管，仅能容纳1个红细胞通过。其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织。另外还常可见到一种扁而有突起得细胞贴在毛细血管
得管壁外面，称为周细胞.这种细胞得性质还不清楚。有人推测周细胞具有收缩作用,可控制毛细血管管径，但尚未证实。有实验表明，内皮细胞受某些化学物质或机械性刺激时,它本身就可收缩而改变管径得大小。毛细血管得内径平均约为8μｍ,长0、２—4mｍ，它们互相联系成网状，布满全身，毛细血管总横断面积大于主动脉数百倍。平时一般仅有小部分毛细血管轮流开放.由于毛细血管壁薄,与有较高通透性，使血液中得氧气与营养物质能通过管壁进入组织,组织中得二氧化碳与代谢产物也能通过管壁进入血液，从而完成血液与组织间得气体交换与物质交换。据电镜观察,肾等器官内得毛细血管内皮有许多小孔，更有利于物质得通透。 结构编辑毛细血管管径一般为6～９μｍ，血窦较大，直径可达4０μm。毛细血管管壁主要由一层内皮细胞与基膜组成。细得毛细血管横切面由一个内皮细胞围成，较粗得毛细血管由2～3个内皮细胞围成。内皮细胞基膜外有少许结缔组织。在内皮细胞与基膜之间散在有一种扁而有突起得细胞，细胞突起紧贴在内皮细胞基底面,称为周细胞(ｐericｙte）。周细胞得功能尚不清楚，有人认为它们主要起机械性支持作用;也有人认为它们就是未分化得细胞，在血管生长或再生时可分化为平滑肌纤 维与成纤维细胞。 分类编辑前言 光镜下观察，各种组织与器官中得毛细血管结构相似，但在电镜下，
转基因食品快速检测试纸的检测原理 一、转基因食品快速检测试纸简介概述： 托普云农转基因食品快速检测试纸用于快速检测种子或植物叶片等样品中的转基BtCry1Ab/1Ac，灵敏度为1%，整个检测过程只需要10-15分钟，适用于各类企业及检测机构。 大多数转基因植物有可能在耕种、收割、运输、储存与加工过程同时混入食品，不管是要对转基因食品贴示标签，亦或是对转基因与非转基因原料分别进行输送，转基因食品的原料和食品检测都是必不可少的；还有，要区别开来转基因和非转基因食品，对转基因食品进行进行标识，而食品中转基因含量的多少加以限制，更加需要有效准确的基因检测设备与良好的检测技术。 跟随着每个国家转基因标识制度纷纷相继建立和老百姓对转基因产品高度关注度的提高，老百姓对转基因技术的认知度与准确性相继提出了更加严格性的要求，而因此各个转基因检测技术与转基因检测设备更成为了大家研究的热点和探讨的话题，最近十几年来国外的科学研究一直处于前沿，为了促进我国转基因作物相关科技技术研发、推广发展，托普云农也致力于让老百姓对转基因检测技术的现状以及未来发展趋势有较为清晰和全面的认知了解！ 托普云农专业检测团队采用PCR技术，从分子水平检测农产品、加工原料、成品中的转基因成分，为食品生产加工和流通企业、检测机构、研究院所提供全面快速、简便经济的专业基因检测服务。为您食品的安全保驾护航！ 二、转基因食品快速检测试纸仅需30秒转基因现真身 在实验室里，托普云农工作人员演示转基因快速检测的过程。桌上的两个纸袋中，分别装有转基因和非转基因稻谷。工作人员各取数粒研磨成粉，分别装入两只试管，滴入缓冲液静置，待固体物质沉底后，取出2张转基因检测试纸分别蘸取上面的清液。30秒后，试纸呈现出不同的标记。 其中1张上、下两条检测线均呈现紫红色，为转基因样本，另外一张仅下检测线呈现紫红色，为非转基因。“试纸样式、检测原理、使用方法与早孕试纸类似。”试纸应用双抗体夹心免疫层析原理，如果样本中存在转基因抗原，与试纸上的转基因抗体结合就会使上、下检测线同时显色。 三、转基因食品快速检测试纸快速检测意义不凡 农业部印发《2015年农业转基因生物安全监管工作方案》，其中提到对水稻、玉米等进行重点监管，建议利用试纸条等快速检测方法，降低成本，扩大监测范
微生物处理重金属污染 摘要：重金属污染的修复是目前研究的热点之一，其中生物治理技术尤其得到了广泛关注。利用菌类微生物的表面结构特性及其生化代谢作用，通过生物化学法、生物絮凝法等将重金属元素分离或降低其毒性，可达到治理污染的目的。基因工程技术在这一领域的应用，加强了菌类和微藻的吸附、代谢、絮凝功能，提高了重金属污染的处理能力。固定化技术的应用提高了治理重金属污染的效率及稳定性，有力地推动了重金属微生物治理技术的发展。文章综述了近年来国内外在利用微生物及植物技术治理重金属污染方面的研究进展，并对其发展方向进行了展望。 关键词：重金属；微生物；研究现状；应用前景 Review on Microbiological for Heavy Metal Pollution LI Dong-xiao Abstract：Development in the treatment of heavy metal pollution at home and abroad by means of microbiological techniques were summarized，and present studies and application prospects of Biological chemical method，Biological flocculation method. the application of gene engineering technique and immobilized microorganism technique to heavy metal pollution treatment were introduced. The prospects of development of treatment technology for heavy metal pollution were also discussed. Key words：heavy metal pollution；microorganism；status; review 1.前言 由于工业的发展,重金属的使用越来越广泛,伴随而来的重金属污染问题也日趋严重。特别是重金属废水,因其中的铅、铬、镉等可通过食物链最终在生物体内累积,破坏正常的生理代谢活动甚至产生“三致”(致癌、致畸、致突变)作用,而成为一种对生态环境危害极大的工业废水。因此,寻找一种能有效地治理重金属废水污染的技术已显得紧迫而重要。 治理重金属的传统方法有:中和沉淀法、化学沉淀法、氧化还原法、气浮法、电解法、蒸发和凝固法、离子交换法、吸附法、溶剂萃取法、液膜法、反渗透和电渗析法等。它们各有优点,但又不同程度地存在着投资大、能耗高、操作困难、易产生二次污染等不足,特别是在处理低含量重金属污染时,其操作费用和原材料成本相对过高[1]。利用微生物体系制备的生物吸附剂处理和回收重金属,是目前实践证明最有发展前途的一种新方法。它与传统的处理方法相比,具有以下优点[2]: (1)在低浓度下,金属可以被选择性地去除; (2)节能,处理效率高; (3)操作时的pH值和温度条件范围宽; (4)易于分离回收重金属; (5)吸附剂易再生利用; (6)对钙、镁离子吸附量少;(7)投资小,运行费用低,无二次污染。 2. 重金属污染的微生物处理方法
枯草芽孢杆菌的介绍 完成者：河岸hkfced（https://www.doczj.com/doc/b718160829.html,/hkfced）完成时间：2012-3-23 版本：第二版本
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌的表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一节：常见转化方法 (3) 1 化学转化法 (3) 2 电转化 (3) 3 原生质体转化 (3) 4 碱金属离子转化 (4) 5 质粒的其它转移方式 (4) 第二节：标准操作 (4) 第一种方法：电转化 (4) 第二种方法：Spizizen转化 (5) 第三种方法：原生质体法(Takashi) (5) 第四种方法：原生质体转化之二 (6) 第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (7) 第三章芽孢杆菌的表达系统 (8) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (8) 第二节芽孢杆菌的缺点 (9) 第三节助表达系统 (9) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (9) 第四章枯草芽孢杆菌的转录翻译系统 (9) 第一节：转录系统 (10) 第二节：翻译系统 (11) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (12) 第六章芽孢杆菌应用实例 (13) 1 中国 (13) 2 日本 (13) 3 加拿大 (14) 第七章芽孢杆菌的产品 (14) 第一节核苷类产品 (14) 第二节核黄素 (14) 第三节微生物制剂/益生菌 (15) 第四节工业酶制剂 (15) 第八章结语 (15) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (16) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (16) 致谢及参考文献 (17)
生命科学前沿讲座论文 转基因食品的检测方法 姓名：陈继款 系别：生命科学学院 专业：生物信息学 年级：2008级 学号：080567011 指导老师：薛李春 总成绩： 2010年07月02日
转基因食品的检测方法 自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。因此转基因产品的检测就显得尤为重要。转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。 1核酸水平 主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 1．1定性检测 1．1．1聚合酶链式反应(PCR) 1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止污染。 1．1．2多重PCR 多重PCR是常规PCR方法的改进，它是在同一个反应中同时扩增两个或多个目标基因序列。这种方法具有更大的可靠性和适应性，并且能降低检测成本。多重PCR可以同时针对几个靶位点进行PCR技术检测。V．T．Forte等利用其设计的多重PCR方法对转基因大豆和Bt玉米样品进行实际检测，结果表明该方法能够准确的检测食品中是否含有转基因成分，其检测结果可以精确到2％～0．1％的范围。Permingeat等仅用两