HEREDITAS (Beijing) 2008年4月, 30(4): 455―462 ISSN 0253-9772 https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,
研究报告
收稿日期: 2007?09?10; 修回日期: 2007?12?20
作者简介:李秀兰(1975?), 女, 河北人, 主治医师, 硕士研究生, 研究方向：卵巢肿瘤。Tel: 0311-********; E-mail: zjklixiulan@https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,
通讯作者:李琰1962?), 女, 河北人, 教授, 研究方向：肿瘤分子遗传学。Tel: 0311-********; E-mail: lykx1962@https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,
DOI: 10.3724/SP.J.1005.2008.00455
MMP-2和TIMP-2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究
李秀兰1, 康山1, 赵喜娃1, 张晓娟2, 周荣秒2, 王娜2, 贾静辉1, 赵健1, 李琰2
1. 河北医科大学第四医院妇产科, 石家庄 050011;
2. 河北省肿瘤研究所, 石家庄 050011
摘要：为探讨MMP-2和TIMP -2基因启动子区单核苷酸多态性(SNPs)与卵巢上皮性癌发病风险的关系, 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了246例卵巢上皮性癌患者和324例对照妇女的MMP -2 C-1306T 、C-735T 和TIMP -2 G-418C 3个SNPs 的基因型。结果显示, MMP -2 C-1306T SNP 的等位基因及基因型频率分布在卵巢癌与对照组间无显著差异(P =0.55和P =0.42); 但卵巢癌组MMP -2 C-735T SNP 的C 等位基因和C/C 基因型频率(80.7%和66.7%)明显高于对照组(75.5%和55.9%), 与T/T +C/T 基因型比较, 携带C/C 基因型可以显著增加卵巢癌的发病风险(OR =1.58, 95%CI =1.12~2.23), 进一步分层分析显示, C/C 基因型主要与宫内膜样癌和年龄≥50岁妇女的发病风险显著相关, OR 值分别为 1.69(95%CI =1.03~2.79)和 1.71(95% CI =1.14~2.57); 对MMP -2 C-1306T 、C-735T 2个SNPs 的单体型分析显示, 4种单体型频率(T -1306-T -735、T ?1306?C ?735、C ?1306?T ?735和C ?1306?C ?735)在两组间分布无显著差异(P =0.24); 虽然TIMP-2 G-418C SNP 的等位基因及基因型频率在卵巢癌组与对照组间分布无显著性差异(P =0.33和P =0.47), 但以病理类型分层分析显示, 携带TIMP-2 G ?418G/G 基因型有增加宫内膜样癌发病风险的趋势(OR =1.62, 95%CI =0.94~2.78)。以上结果提示, MMP-2基因启动子区C-735T SNP 的C/C 基因型可能是卵巢上皮性癌发病的潜在危险因素, 而C-1306T SNP 可能与卵巢上皮性癌的发病风险无关; TIMP -2 G-418C SNP 可能与不同病理类型的卵巢上皮性癌发病风险有关。 关键词：MMP -2; TIMP -2; 单核苷酸多态性; 卵巢上皮性癌; 遗传易感性
Association of SNPs in the promoter of MMP -2 and TIMP -2 genes with epithelial ovarian cancer
LI Xiu-Lan 1, KANG Shan 1, ZHAO Xi-Wa 1, ZHANG Xiao-Juan 2, ZHOU Rong-Miao 2, WANG Na 2, JIA Jing-Hui 1, ZHAO Jian 1, LI Yan 2
1. The Fourth Hospital of Hebei Medical University , Shijiazhuang 050011, China ;
2. Hebei Cancer Institute , Shijiazhuang 050011, China
Abstract: The association between single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the promoter region of MMP -2 and TIMP -2 genes and the risk of epithelial ovarian cancer was investigated. MMP -2 C-1306T , C-735T and TIMP -2 G-418C SNPs were genotyped by polymerase chain reaction-restrictive fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis in 246 patients with epithelial ovarian cancer and 324 healthy women as control. Results showed no significant difference between the patient and control groups in allele or genotype distributions of MMP -2 C-1306T (P =0.55 and P =0.42). However, the fre-quencies of the C allele and the C/C genotype of the MMP -2 C-735T were significantly higher in ovarian cancer patients
456 HEREDITAS
(Beijing) 2008第30卷
(80.7% and 66.7%) than those in healthy controls (75.5% and 55.9%). Compared with the T/T+C/T genotypes, the C/C genotype significantly increased the risk of ovarian cancer (OR=1.58, 95%CI=1.12?2.23). Stratification analysis showed
that subjects carrying C/C genotype were significantly associated with the risk of endometrioid ovarian cancer and with ovarian cancer in subjects that were 50 or older, with odds ratio at 1.69 (95%CI=1.03?2.79) and 1.71 (95%CI=1.14?2.57), respectively. Haplotype analysis showed that the frequencies of four haplotypes (T?1306?T?735, T?1306?C?735,C?1306?T?735 and
C?1306?C?735) of MMP-2 C-1306T and C-735T were not significantly different between the patient and control groups
(P=0.24). The allele and genotype frequencies of TIMP-2 G-418C were not significantly different between the patient and control groups (P=0.33 and P=0.47). But TIMP-2 ?418G/G genotype was associated with a trend for endometrioid ovarian cancer by stratification analysis according to histological subtypes (OR=1.62, 95%CI=0.94-2.78). Thus, the study suggested
that the C/C genotype of the C-735T SNP in the promoter region of MMP-2 gene may be a potential risk factor for epithelial ovarian cancer, but the C-1306T SNP may have no association with the risk of epithelial ovarian cancer. The TIMP-2
G-418C SNP may be associated with the risk of different histological subtypes of epithelial ovarian cancer.
Keywords: MMP-2; TIMP-2; single nucleotide polymorphism; epithelial ovarian cancer; susceptibility
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)是降解细胞外基质成分的一类重要的锌离子水解酶, 组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs)是其天然抑制物, 两者在肿瘤的发生发展中起重要作用。其中明胶酶MMP-2和其特异性抑制因子TIMP-2与肿瘤的关系倍受关注, 它们的异常表达可能与肿瘤的发生和发展密切相关。
研究发现, 位于MMP-2基因启动子区的
C-1306T、C-735T和TIMP-2基因启动子区的G-418C 多态均可通过改变基因的转录活性而影响蛋白的表达水平[1,2], 进而与肿瘤的发病相关, 已有报道显示这3个多态位点与肺癌、乳腺癌、胃癌、食管癌、结肠癌[3~7]等多种恶性肿瘤的发病风险相关, 但与卵巢癌的相关研究尚未见报道, 本研究采用病例-对照研究方法, 拟探讨MMP-2、TIMP-2基因启动子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与卵巢上皮性癌发病风险的关系, 进一步阐明卵巢癌的发病机制。
1材料和方法
1.1研究对象
246例卵巢上皮性癌患者(卵巢癌组)为2001年12月~2007年2月于河北医科大学第四医院进行手术治疗的北方汉族妇女, 术前未行放射或化学治疗, 术后标本均经病理学证实, 其中浆液性癌93例, 粘液性癌29例, 宫内膜样癌88例和低分化腺癌36例; 临床分期采用国际妇产科联盟(FIGO)标准(2000年), 其中早期(Ⅰ~Ⅱ期)卵巢癌81例, 晚期(Ⅲ~Ⅳ期)卵巢癌165例; 确诊时年龄<50岁患者94例, ≥50岁患者152例。另选择同一地区324例健康妇女作为对照组, 对照组妇女均无肿瘤和遗传病史。所有研究对象均有知情同意。
1.2方法
1.2.1 DNA提取
所有研究个体均采集外周静脉血5 mL, 以枸橼酸钠抗凝, 采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法[8]提取白细胞DNA。
1.2.2 基因多态性检测
采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对MMP-2 C-1306T、C-735T 和TIMP-2 G-418C SNPs位点进行基因分型。扩增MMP-2 C-1306T位点的上游引物为5′-CTTCCTAG- GCTGCTTACTGA-3′, 下游引物为5′-CTGAGA- CCTGAAGAGGTAAAGAAGT-3′, 扩增产物为193 bp; MMP-2 C-735T位点的上游引物为5′-GGATTC- TTGGCTTGGCGCAGGA-3′, 下游引物为：5′-GG- GGGCTGGGTAAAATGAGGCTG-3′, 扩增产物为391 bp; TIMP-2 G-418C位点的上游引物为：5′- CGTCTCTTGTGGTGGTCA-3′, 下游引物为：5′- CCTCAGTCGACTCTGGAG-3′, 扩增产物为304 bp。PCR反应体系为20 μL, 其中模板DNA 100 ng, 10×PCR(含MgCl2 15 mmol/L)缓冲液2.4 μL, 染料2.0 μL, Taq DNA聚合酶1.0 U, dNTPs 200 μmol/L和上、下游引物各250 nmol/L; 反应条件为：94℃预
第4期李秀兰等: MMP-2和TIMP-2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究 457
变性5 min, 然后94℃45 s, 58℃(MMP-2 C-1306T)、65.5℃(MMP-2 C-735T)或62℃(TIMP-2 G-418C) 45 s, 72℃45 s, 35个循环后, 72℃延伸7 min。3个位点的扩增产物分别经XspⅠ(MMP-2 C-1306T)、Hin fⅠ(MMP-2 C-735T)或AvaⅠ(TIMP-2 G-418C)限制性内切酶于37℃消化过夜后, 进行4%琼脂糖凝胶电泳分析基因型。MMP-2 C-1306T的C/C基因型为188 bp、5 bp, T/T基因型为162 bp、26 bp和5 bp, C/T 基因型为188 bp、162 bp、26 bp和5 bp(图1)。MMP-2 C-735T的C/C基因型为391 bp, T/T基因型为338 bp 和53 bp, C/T基因型为391 bp、338 bp和53 bp(图2)。TIMP-2 G-418C的G/G基因型为230 bp、51 bp 和23 bp, C/C基因型为253 bp和51 bp, G/C基因型为253 bp、230 bp、51 bp和23 bp 4个碱基片段(图3)。
为进行基因型检测的质量控制, 每一批PCR反应均以灭菌双蒸水替代模板DNA作为阴性对照, 并随机挑取10%的DNA标本进行重复实验。
图1PCR-XSPⅠ酶切的MMP-2 C-1306T SNP基因型分型
1,6: T/T基因型; 2,4: C/C基因型; 3,5: C/T基因型; 7: PCR 产物; 8: 100 bp DNA标记物。
Fig. 1 MMP-2 C-1306T genotyping by PCR-XSPⅠdigestion
1, 6: T/T; 2, 4: C/C; 3, 5: C/T; 7: PCR product; 8: 100 bp ladder.
图2PCR-Hin fⅠ酶切的MMP-2 C-735T SNP基因型分型
1,2,3,5: C/C基因型; 4,6,7: C/T基因型; 8,9: T/T基因型; 10: PCR 产物; 11：100 bp DNA标记物。
Fig. 2 MMP-2 C-735T genotyping by PCR-Hin fⅠdigestion
1, 2, 3, 5: C/C; 4, 6, 7: C/T; 8, 9: T/T; 10: PCR product; 11: 100 bp ladder.
图3PCR-AvaⅠ酶切的TIMP-2 G-418C SNP基因型分型
1,4,7: G/G基因型; 2,5,8: G/C基因型; 3,6,9: C/C基因型; 10: PCR产物; 11: 100 bp DNA标记物。
Fig. 3 TIMP-2 G-418C genotyping by PCR-AvaⅠdigestion
1, 4, 7: G/G; 2, 5, 8: G/C; 3, 6, 9: C/C; 10: PCR product; 11: 100 bp ladder.
1.2.3 统计学方法
数据分析采用SPSS 11.5统计软件进行处理。正常对照组基因型频率分布行χ2检验做Hardy- Weinberg平衡分析。病例组与对照组的年龄差异采用t检验, 基因型和等位基因频率分布比较采用χ2检验, 以非条件logistic回归方法计算表示相对风险度的比值比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)。采用EH软件分析MMP-2 C-1306T和C-735T基因单体型频率, 2ld软件分析连锁不平衡状态。采用似然比检验(likelihood ratio test)分析MMP-2和TIMP-2基因之间的交互作用。P<0.05作为差异有显著性的标准。
2结果与分析
2.1研究对象的一般特征
卵巢癌组患者年龄20~79岁, 中位年龄为53岁; 对照组妇女年龄20~75岁, 中位年龄为50岁; 两组妇女的年龄比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。对照组MMP-2 C-1306T、C-735T和TIMP-2 G-418C的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P=0.87, P=0.75和P=0.81)。
2.2 MMP-2 C-1306T单核苷酸多态性与卵巢癌的
关系
卵巢癌组和对照组中, MMP-2 C-1306T多态的基因型和等位基因频率分布无显著性差异(P=0.42和P=0.55)(表1)。与T/T+C/T基因型比较, C/C基因型与卵巢癌的发病风险无关, OR值为 1.07(95% CI=0.72~1.58)(表2)。以病理类型、临床分期或确诊时年龄分层分析, MMP-2 C-1306T的基因型频率在各组间分布也均未发现显著性差异(P值均大于
458 HEREDITAS
(Beijing) 2008第30卷
0.05)(表3)。
2.3 MMP-2 C-735T单核苷酸多态性与卵巢癌的
关系
MMP-2 C-735T多态的3种基因型频率(C/C、C/T、T/T)在卵巢癌组和对照组中分别是66.7%、28.0%、5.3%和55.9%、39.2%、4.9%, 两组比较有显著性差异(P=0.02); 卵巢癌组的C等位基因频率(80.7%)明显高于对照组(75.5%), 两组比较有统计学意义(P=0.04)(表1)。与T/T+C/T基因型比较, 携带C/C基因型可显著增加卵巢癌的发病风险, OR值为1.58(95%CI =1.12~2.23)(表2)。以病理类型分层分析发现, C/C基因型与宫内膜样癌的发病风险明显相关(OR=1.69, 95%CI=1.03~2.79), 且有增加浆液性癌发病风险的趋势(OR=1.58, 95%CI=0.97~ 2.56); 以临床分期分层分析显示, C/C基因型与早期卵巢癌的发病风险明显相关(OR
=
1.88, 95%CI= 1.11~3.17), 有增加晚期卵巢癌发病风险的趋势(OR=1.46, 95%CI=0.99~
2.15); 以年龄分层分析显示, 携带C/C基因型明显增加年龄≥50岁妇女患卵巢癌的风险, OR值为1.71(95%CI=1.14~2.57)(表3)。
表1MMP-2和TIMP-2 SNPs的基因型及等位基因型频率在卵巢癌和对照组中的分布
Table 1 Genotype and allele distributions of MMP-2 and TIMP-2 SNPs among ovarian cancer patients and healthy controls 基因Gene 基因型/等位基因Genotype/Allele 卵巢癌组No. of patients (%) 对照组No. of controls (%) P (χ2 test)
MMP-2C-1306T C/C 189(76.8) 245(75.6)
0.42
C/T 56(22.8) 74(22.9)
T/T 1(0.4) 5(1.5)
C 434(88.2) 564(87.0)
0.55
T 58(11.8) 84(13.0)
MMP-2C-735T C/C 164(66.7) 181(55.9)
0.02
C/T 69(28.0) 127(39.2)
T/T 13(5.3) 16(4.9)
C 397(80.7) 489(75.5)
0.04
T 95(19.3) 159(24.5)
TIMP-2G-418C G/G 170(69.1) 215(66.4)
0.47
G/C 71(28.9) 97(29.9)
C/C 5(2.0) 12(3.7)
G 411(83.5) 527(81.3)
0.33
C 81(16.5) 121(18.7)
表2 MMP-2和TIMP-2基因的3个SNPs与卵巢上皮性癌发病风险的关联
Table 2 Association of three SNPs in MMP-2 and TIMP-2genes with the risk of epithelial ovarian cancer development
基因Gene 基因型Genotype 卵巢癌组No. of patients (%) 对照组No. of controls (%) OR (95% CI)
MMP-2C-1306T C/T+T/T 57(23.2) 79(24.4)
C/C 189(76.8) 245(75.6)
1.07(0.72~1.58)a
MMP-2 C-735T C/T+T/T 82(33.3) 143(44.1)
C/C 164(66.7) 181(55.9)
1.58(1.12~
2.23)b
TIMP-2G-418C G/C+C/C 76(30.9) 109(33.6)
G/G 170(69.1) 215(66.4)
1.13(0.80~1.62)c
a: 相对MMP-2 C-1306T的C/T+T/T基因型, C/C基因型的卵巢癌发病风险值; b:相对MMP-2 C-735T的C/T+T/T基因型, C/C基因型的
卵巢癌发病风险值; c: 相对TIMP-2 G-418C的C/C+G/C基因型, G/G基因型的卵巢癌发病风险值。
a: Odds ratio of the C/C genotype relative to the C/T and T/T genotypes of MMP-2 C-1306T in ovarian cancer; b: Odds ratio of the C/C
genotype relative to the C/T and T/T genotypes of MMP-2 C-735T in ovarian cancer; c: Odds ratio of the G/G genotype relative to the C/C and
G/C genotypes of TIMP-2 G-418C in ovarian cancer.
第4期
李秀兰等: MMP -2和TIMP -2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究 459
表3 MMP -2和TIMP -2基因的3个SNPs 与卵巢上皮性癌病理类型、临床分期及年龄的风险关联
Table 3 Association of three SNPs in MMP-2 and TIMP -2 genes with patient age, the pathological type and clinical stage of epithelial ovarian cancer
MMP -2 -1306C/T MMP -2 -735C/T TIMP -2 -418G/C
C/T +T/T
C/C
OR (95% CI )a
C/T +T/T
C/C
OR (95% CI )b
G/C +C/C
G/G
OR (95% CI )c
对照组Controls 79 245 143 181 109 215 病理类型
Pathological types
浆液性
Serous
24 69 0.93(0.55~1.57) 31 62 1.58(0.97~2.56)
35 58 0.84(0.52~1.36)
粘液性
Mucinous
5 24 1.55(0.57~4.19) 8 21 2.07(0.89~4.82)
11 18 0.83(0.38~1.82)
宫内膜
Endometrioid
20 68 1.10(0.63~1.92) 28 60 1.69(1.03~2.79)
21 67 1.62(0.94~2.78)
低分化
Undifferentiated
8 28 1.13(0.49~2.58) 15 21 1.11(0.55~2.22)
9 27 1.52(0.69~3.35)
临床分期
Clinical stage
早期Earlier 18 63 1.13(0.63~2.02) 24 57 1.88(1.11~3.17)26 55 1.07(0.64~1.80)晚期Advanced 39 126 1.04(0.67~1.62) 58 107 1.46(0.99~2.15)50 115 1.17(0.78~1.75)年龄Age
<50岁Years 20 74 1.19(0.68~2.08) 34 60 1.39(0.87~2.24)26 68 1.33(0.80~2.20)≥50岁Years
37 115 1.00(0.64~1.57) 48 104 1.71(1.14~2.57)
50 102 1.03(0.69~1.56)
a: 相对MMP -2 C-1306T 的C/T +T/T 基因型, C/C 基因型的卵巢癌发病风险值; b: 相对MMP -2 C-735T 的C/T +T/T 基因型, C/C 基因型的卵巢癌发病风险值; c: 相对TIMP -2 G-418C 的C/C +G/C 基因型, G/G 基因型的卵巢癌发病风险值。
a: Odds ratio of the C/C genotype relative to the C/T and T/T genotypes of MMP -2 C-1306T in ovarian cancer; b: Odds ratio of the C/C genotype relative to the C/T and T/T genotypes of MMP -2 C-735T in ovarian cancer; c: Odds ratio of the G/G genotype relative to the C/C and G/C genotypes of TIMP -2 G-418C in ovarian cancer.
2.4 TIMP -2 G-418C 单核苷酸多态性与卵巢癌的
关系
TIMP -2 G-418C 多态的基因型和等位基因频率在卵巢癌组与对照组中分布无显著性差异(P =0.47和P =0.33)(表1), 与C/C +G/C 基因型相比, G/G 基因型与卵巢癌的发病风险无关(OR =1.13, 95%CI = 0.80~1.62)(表2)。但进一步分层分析发现, 携带G/G 基因型有增加宫内膜样癌发病风险的趋势, OR 值为1.62(95%CI =0.94~2.78), 而与临床分期及发病年龄无显著关联(表3)。
2.5 MMP -2 C-1306T 和C-735T 的基因单体型分析
结果
采用EH 软件对MMP -2 C-1306T 和C-735T 两位点SNPs 进行单体型分析显示, 对照组C ?1306? C ?735单体型最常见(65.7%), 其次为C ?1306?T ?735 (21.3%)、T ?1306?C ?735(9.9%)和T ?1306?T ?735(3.1%), 4种单体型频率在卵巢癌组分布与对照组相似, 两组比
较差异无显著性(P =0.24)。与T -1306?T -735单体型相比, 其他3种单体型均不增加卵巢癌的发病风险(表4)。采用2ld 软件对两位点分析显示, MMP -2 ?1306C 等位基因和?735C 等位基因存在连锁不平衡现象(D’=0.78, P =0.00)。
2.6 MMP -2基因多态位点与TIMP -2基因多态位点
的交互作用 采用似然比检验分析TIMP -2 G-418C SNP 与MMP -2 C-1306T 、C-735T 2个SNPs 之间的基因-基因交互作用。结果发现, TIMP -2 G-418C 与MMP -2 C-1306T 、TIMP -2 G-418C 与MMP -2 C-735T 之间无明显交互作用存在(P =0.74和P =0.41)。但对不同基因型组合分析显示, 卵巢癌组的C/C MMP -2 C-735T ?G/ G TIMP -2 G-418C 频率(46.3%)明显高于对照组(36.4%), 差异有显著性(P =0.02), 且携带C/C MMP -2 C-735T ?G/ G TIMP -2 G-418C 基因型个体的卵巢癌发病风险是携带C/T +T/T MMP -2 C-735T -G/G TIMP -2 G-418C 基因型的1.67倍(95%CI =1.10~2.54)(表5, 表6)。
460 HEREDITAS
(Beijing) 2008第30卷
表4 MMP-2 C-1306T和MMP-2 C-735T单体型频率与卵巢上皮性癌的发病风险
Table 4 Haplotypes of MMP-2 C-1306T and MMP-2 C-735T and the risk of epithelial ovarian cancer development
单体型 Haplotypes 对照组No. of controls (%) 卵巢癌组No. of patients (%) OR (95% CI) T?1306?T?73520(3.1) 12(2.4)
1.00
T?1306?C?73564(9.9) 46(9.4)
1.20(0.53~
2.69)a
C?1306?T?735138(21.3) 84(17.1)
1.01(0.47~
2.18)b
C?1306?C?735426(65.7) 350(71.1)
1.37(0.66~
2.84)c
a, b, c: 相对T?1306?T?735单体型, T?1306?C?735、C?1306?T?735和C?1306?C?735单体型的卵巢癌发病风险值。
a, b, c: Odds ratio of the T?1306?C?735, C?1306?T?735 and C?1306?C?735 haplotypes relative to the T?1306?T?735haplotype in ovarian cancer.
表5 MMP-2 C-1306T和TIMP-2 G-418C基因型联合作用与卵巢癌发病风险的关系
Table 5 Risk of epithelial ovarian cancer in association with both the MMP-2 C-1306T genotypes and the TIMP-2 G-418C genotypes
基因型Genotype
MMP-2 C-1306T TIMP-2 G-418C
卵巢癌组
No. of patients (%)
对照组
No. of controls (%)
OR (95% CI)
C/T+T/T G/G 37(15.0) 48(14.8)
1.00
C/T+T/T G/C+C/C 20(8.1) 31(9.6) 0.84(0.41?1.70)
C/C G/G 133(54.1) 167(51.5)
1.03(0.64?1.68)
C/C G/C+C/C 56(22.8) 78(24.1) 0.93(0.54?1.61)
表6MMP-2C-735T和TIMP-2G-418C基因型联合作用与卵巢癌发病风险的关系
Table 6 Risk of epithelial ovarian cancer in association with both the MMP-2C-735T genotypes and the TIMP-2G-418C genotypes
基因型Genotype
MMP-2C-735T TIMP-2G-418C
卵巢癌组
No. of patients (%)
对照组
No. of controls (%)
OR (95% CI)
C/T+T/T G/G 56(22.8) 97(30.0)
1.00
C/T+T/T G/C+C/C 26(10.6) 46(14.2)
0.98(0.55~1.75) C/C G/G 114(46.3) 118(36.4)
1.67(1.10~
2.54) C/C G/C+C/C 50(20.3) 63(19.4)
1.38(0.84~
2.26)
3讨论
卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤, 其发病隐匿、进展迅速, 70％~80％的患者发现时已为晚期, 但迄今为止, 卵巢癌的发病机制尚不清楚。研究显示遗传易感性可能在其发生中起重要作用, MMPs基因作为一组重要的遗传候选基因, 近年来成为研究的热点。本课题组已经对MMP-1、MMP-3、MMP-7和MMP-9等基因多态性与卵巢癌发病风险的关系进行了研究, 结果表示, MMP-7?181A/G SNP与卵巢上皮性癌的易感性相关, 而MMP-1?1607 1G/2G、MMP-3 ?1171 5A/6A、MMP-9 ?1562C/T SNPs与卵巢癌的发病风险无关[9], 本文将进一步探讨MMP-2及其抑制因子TIMP-2基因启动子区SNPs与卵巢上皮性癌发病风险的关系。
MMP-2是MMPs家族的重要成员, 不仅能降解细胞外基底膜中的Ⅳ型胶原, 促进肿瘤细胞的侵袭和转移, 而且与细胞增殖、血管生成关系密切。已有许多研究报道, MMP-2在卵巢癌组织中过度表达, 参与了卵巢癌的发生和进展[10,11]。MMP-2基因定位于人类染色体16q21, 包含多个SNPs, 其中位于基因启动子区的?1306C→T和?735C→T变异破坏了Sp1(CCACC盒)的结合位点, 导致基因转录水平下降, 体外实验已证实, 两位点的C等位基因转录活性显著高于T等位基因[1,6], 许多研究亦发现, 携带MMP-2?1306C或?735C等位基因可以显著增加多种恶性肿瘤的发病风险, 如肺癌、乳腺癌、胃贲门癌、食管癌和结肠癌等, 并与肿瘤的侵袭和转移有关[3~7]。但研究结果不尽一致, 如在与肺癌的关联研究中, Zhou等[3]报道, MMP-2?1306C/C基因型携带者患肺癌风险是其他基因型的2倍, ?735C/C基因型携带者是未携带者的1.6倍; 而Rollin等[12]研究发现, MMP-2C-1306T、C-735T多态的基因型在非小细胞性肺癌组与对照组中分布无显著差异, 但?735T等位基因携带者的生存时间长于C/C基因型, 携带
第4期李秀兰等: MMP-2和TIMP-2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究 461
?735C/C基因型患者的死亡相对危险度增高2.6倍。我们的研究结果与后者相似, MMP-2C-1306T多态与卵巢癌发病风险无明显关联, 但?735C/C基因型显著增加了宫内膜样癌和年龄≥50岁妇女的发病风险, 提示MMP-2C-735T多态可能与卵巢上皮性癌的发生密切相关。
Zhou等[3]和Yu等[6]在对MMP-2 C-1306T、C-735T多态与肺癌及食管癌的关联研究中均发现, 两多态位点间存在连锁不平衡现象, 且有协同作用, 与T?1306?T?735单体型相比, 携带C?1306?C?735单体型的个体患肺癌及食管癌的风险显著增高, 同时发现食管癌组织中的MMP-2 mRNA表达水平增高3.7倍, 并还证实, C?1306?C?735单体型报告基因的荧光素酶表达较T?1306?T?735单体型高7倍[6]。本研究结果也显示, MMP-2?1306C等位基因和?735C等位基因存在连锁不平衡, 但未发现4种单体型与卵巢癌的发病风险相关。
位于TIMP-2基因启动子区的G-418C多态能够破坏转录因子Sp1的结合, 可能导致基因的转录活性下降[2]。有关此位点的SNPs与恶性肿瘤发病的关联研究报道不一, Vairaktaris等[13]报道, 口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者组的TIMP-2?418C等位基因频率分布比对照组高10倍以上, 携带G/C和C/C基因型可以增加OSCC的发病风险。但Zhou等[4]研究发现, 携带TIMP-2?418G/C和C/C基因型可以降低乳腺癌的发病风险。Wu等[5]也发现TIMP-2?418G/G基因型与胃癌的浆膜层浸润、淋巴结转移和脉管受侵有关。我们的研究结果和后两者相似, 携带TIMP-2?418G/G基因型有增加宫内膜样癌发病风险的趋势。这种相悖的结果可能与TIMP-2既可以抑制MMP-2的活性, 又能激活ProMMP-2的双重功能有关, 其生物学方面的确切机制还有待于进一步研究探讨。
TIMP-2是MMP-2的特异性抑制因子, 可以与MMP-2酶原和活性酶1：1结合, 使之失活, 两者的平衡对维持基底膜的完整以及MMP-2的正常功能有重要意义。许多研究表明, MMP-2和TIMP-2之间平衡失调, 是肿瘤发生发展的一个重要因素。俞岚等[14]报道, MMP-2在卵巢癌中的表达明显增高, 且随着临床分期、病理分级的增高而显著增加, 而TIMP-2的表达则与其相反。为了进一步探讨MMP-2与TIMP-2基因间相互作用对卵巢癌发病的影响, 我们将TIMP-2G-418C分别与MMP-2C-1306T和C-735T 两个SNPs作交互作用分析, 均未发现有明
显交互作用存在。然而Zhou等[4]研究发现, MMP-2
C-1306T与TIMP-2G-418C之间虽然无交互作用, 但
同时携带MMP-2?1306C/T+T/T和TIMP-2?418G/G、MMP-2?1306C/T+T/T和TIMP-2?418G/C+ C/C可以
显著降低乳腺癌的发病风险, 尚具有一定的累加效应。O-Charoenrat等[15]也报道, 同时携带MMP-2?1306C/C和TIMP-2?418G/C、C/C基因型可显著增
加头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的发病风险。关于MMP-2C-735T与TIMP-2G-418C之间的交互作用尚
未见报道, 我们的结果显示, 同时携带具有强启动
子活性的MMP-2?735C/C和TIMP-2?418G/G基因型, 可以显著增加卵巢癌发病风险, 亦可能有一定的累
加效应。
总之, 肿瘤的发生所涉及的不只是单基因的作用, 而是多基因的联合作用。因此进一步研究不同
肿瘤候选基因独立或联合在肿瘤遗传易感性中的作用, 对阐明肿瘤的发生机制和研究肿瘤的防治具有
重要的意义。
参考文献(References):
[1] Price SJ, Greaves DR, Watkins H. Identification of novel,
functional genetic variants in the human matrix metallo-
proteinase-2 gene: role of Sp1 in allele-specific transcrip-
tional regulation. J Biol Chem, 2001, 276(10): 7549?7558.[DOI]
[2] De Clerck YA, Darville MI, Eeckhout Y,Rousseau GG.
Characterization of the promoter of the gene encoding
human tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2).
Gene, 1994, 139(2): 185?191.[DOI]
[3] Zhou Y, Yu C, Miao X, Wang Y, Tan W, Sun T, Zhang X,
Xiong P, Lin D. Functional haplotypes in the promoter of
matrix metalloproteinase-2 and lung cancer susceptibility.
Carcinogenesis, 2005, 26(6): 1117?1121.[DOI]
[4] Zhou Y, Yu C, Miao X, Tan W, Liang G, Xiong P, Sun T,
Lin D. Substantial reduction in risk of breast cancer asso-
ciated with genetic polymorphisms in the promoters of the
matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metal-
loproteinase-2 genes. Carcinogenesis, 2003, 25(3): 399?404.[DOI]
[5] Wu CY, Wu MS, Chen YJ, Chen CJ, Chen HP, Shun CT,
Chen GH, Huang SP, Lin JT. Clinicopathological signifi-
cance of MMP-2 and TIMP-2 genotypes in gastric cancer.
Eur J Cancer, 2007, 43(4): 799?808.[DOI]
[6] Yu C, Zhou Y, Miao X, Xiong P, Tan W, Lin D. Func-
tional haplotypes in the promoter of matrix metallopro-
teinase-2 predict risk of the occurrence and metastasis of
esophageal cancer. Cancer Res, 2004, 64(20):
462 HEREDITAS (Beijing) 2008 第30卷
[12] Rollin J, Régina S, Vourc'h P, Iochmann S, Bléchet C, Reverdiau P, Gruel Y. Influence of MMP-2 and MMP -9 promoter polymorphisms on gene expression and clinical outcome of non-small cell lung cancer. Lung Cancer , 2007, 56(2): 273?280.[DOI] 7622?7628.[DOI]
[7] Xu E, Lai M, Lv B, Xing X, Huang Q, Xia X. A single
nucleotide polymorphism in the matrix metallopro-teinase-2 promoter is associated with colorectal cancer.
Biochem Biophys Res Commun , 2004, 324(3): 999?1003.[DOI] [13] Vairaktaris E, Yapijakis C, Yiannopoulos A, Vassiliou S, Serefoglou Z, Vylliotis A, Nkenke E, Derka S, Critselis E,
Avgoustidis D, Neukam FW, Patsouris E. Strong associa-tion of the tissue inhibitor of metalloproteinase-2 polymor-phism with an increased risk of oral squamous cell carci-noma in Europeans. Oncol Rep , 2007, 17(4): 963?968. [8] Miller SA, Dybes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acid Res , 1988, 16: 1215.[DOI] [9] Li Y, Jin X, Kang S, Wang Y, Du H, Zhang J, Guo W, Wang N, Fang S. Polymorphisms in the promoter region of the matrix metalloproteinases ?1, ?3, ?7, and ?9 and the risk of epithelial ovarian cancer in China. Gynecol Oncol , 2006, 101: 92?96.[DOI] [14] YU Lan, WANG Wan-Ying, WANG Chao-Fu, YAO Min. Expression of MMP -2, MMP-9, TIMP-2 and infection of bacterial L-forms in ovarian neoplasms and its clinical significance. J Bengbu Med Coll , 2005, 30(3): 198?201.
俞岚, 汪万英, 王朝夫, 姚敏. 卵巢肿瘤MMP-2、
MMP-9及TIMP-2和细菌L 型检测的意义. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(3): 198?201.
[10] ZHAO Yu-Qing, LI Pei-Ling, MA Bing. Expression of
MMP -2 in ovarian carcinoma. CJCM , 2004, 4(17):
395?396.
赵宇清, 李佩玲, 马兵. MMP -2在卵巢癌中的表达. 中
华实用中西医杂志, 2004, 4(17): 395?396.
[15] O-Charoenrat P, Khantapura P. The role of genetic poly-morphisms in the promoters of the matrix metallopro-teinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 genes in head and neck cancer. Oral Oncol , 2006, 42(3):
257?267.[DOI]
[11] Sakata K, Shigemasa K, Nagai N, Ohama K. Expression of
matrix metalloproteinases (MMP-2, MMP-9, MT1-MMP ) and their inhibitors (TIMP -1, TIMP -2) in common epithe-lial tumors of the ovary. Int J Oncol , 2000, 17(4): 673?681.
?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ?ˇ
中华医学会第七次全国医学遗传学学术会议通知(第一轮)
中华医学会第七次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2008年医学遗传学年会)定于2008年6月13日至15日在浙江省温州市召开。本次研讨会经中华医学会批准, 列入2008年学术活动计划。此次会议由中华医学会医学遗传学分会主办, 温州医学院承办。会议主题是“遗传学与转化医学(Genetics and Translational Medicine)”会议将围绕一年来国内外医学遗传学各个领域的新进展进行广泛学术交流。主要采取大会报告、分会报告和壁报交流三种形式。会议将邀请十余位美国和澳大利亚的国际知名专家作学术报告。此外, 会议还将组织医学遗传学技术专场报告会。欢迎从事医学遗传学科研、教学工作者和临床遗传学服务的广大医师踊跃参加。
一、会议时间：2008年6月13?15日。 二、会议地点：温州医学院(温州)
三、会务费：正式代表每位800元, 学生代表每位600元, 含注册费和资料费等。交通住宿费自理, 回单位报销。 四、会议征文主要领域：我国医学遗传学与发展中的问题, 单基因遗传病和复杂疾病遗传学, 细胞遗传学, 分子
遗传学, 生化遗传学, 临床遗传学, 肿瘤遗传学, 药物遗传学, 遗传筛诊断和遗传咨询, 群体遗传学, 法医遗传学, 医学伦理学, 以及基因治疗等领域的研究进展。敬请全国医学遗传学同行和广大临床医生积极投稿。 五、征文要求：
1. 请提交未在全国性刊物发表或全国性学术会议交流的论文摘要(500~1000字);
2. 请以宋体五号字, 按题目、作者、作者单位和文摘内容顺次输入;
3. 请务必于2008年5月25日前将摘要电子版发至张学(miaosun@https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,)或李秀普老师(zhyc@https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,)。
六、有意参会者请将报名回执用电子邮件发给温州医学院季敬璋老师(手机：135********; E-mail: smartyiz-hang@https://www.doczj.com/doc/b717410393.html,)