W estern实验步骤
1．制胶及上样：
（1）配制12%SDS-PAGE分离胶，混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间，其上加一薄层异丙醇，室温下静置至凝固。
（2）待分离胶完全聚合后，倾去其上的水层，以吸水纸吸净残余液体，插入加样梳，缓缓加入浓缩胶，使其充满加样梳间的空隙，室温下静置。待胶完全聚合。
（3）将凝胶固定于电泳装置上，上、下槽加入电泳缓冲液。
（4）小心拔去加样梳，使加样孔竖直，以电泳缓冲液冲洗加样孔数次。
（5）分别取50μg蛋白量的细胞总蛋白样品及蛋白质分子量Marker，按4：1体积比加入5?样品缓冲液，以1?样品缓冲液？配平上样体积（总体积20μ1）后，于沸水浴中煮3min使蛋白变性。
（6）将处理好的样品按照预定的顺序加入分离胶的上样孔中。
2．电泳
（1）接通凝胶电泳仪的电源，初始电压70V。（约30分钟）
（2）溴酚蓝染料的前缘进入分离胶上缘后提高电压至160V，继续电泳直至溴酚蓝泳出分离胶的下缘。（约60分钟）
3．转膜
（1）从玻璃板中取出凝胶，将其浸泡于转移缓冲液中。
（2）取与胶同样大小的硝酸纤维素膜，以95%乙醇浸泡5秒钟后浸泡于转移缓冲液5分钟以上待用。
（3）按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、三层滤纸、硝酸纤维素膜、凝胶、三层滤纸、海绵，保证每层之间没有气泡。
（4）将转移夹放入转移槽，膜在正极、胶在负极，接冷却循环水，90V稳压转移2小时。4．染色
（1）将硝酸纤维素浸入丽春红使用液中，振摇染色5-10min。
（2）蛋白质条带出现后，用去离子水洗去硝酸纤维膜上的丽春红底色。
（3）按照蛋白质分子量Marker指示的位置剪下目的条带所在的硝酸纤维素膜。
5．封闭
把硝酸纤维素膜浸入5%脱脂奶粉，室温摇动2小时。
6．洗膜与杂交
（1）以T-TBS洗膜，10分钟? 3次。
（2）第一抗体封闭：SPARC单抗以T-TBS 1：200稀释，按0.1ml/cm2加入封有硝酸纤维素膜的杂交袋中，去除所有气泡，4℃振摇过夜。
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（3）以T-TBS洗膜，10分钟? 3次。
（4）第二抗体封闭：辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG抗体（1：4000），按
0.1 ml/cm2加入封有硝酸纤维素膜的杂交袋中，去除所有气泡，室温下振摇60分钟。（5）以T-TBS洗膜，10分钟? 3次。
7．化学发光与曝光
（1）将化学发光试剂盒中的两种试剂各取0.5ml，按1：1的比例混合，在暗室中与硝酸纤维素膜摇动孵育1分钟。
（2）用滤纸沾干膜上的液体，用保鲜膜包好，用感光胶片在压片盒中曝光约1分钟。（3）曝光后的感光胶片在显影液中显影约30秒钟，定影液中定影1分钟，用水冲洗后晾干。
（4）根据曝光情况调整曝光时间，重复压片、显影及定影，选择满意的胶片。
（5）重复实验三次。
W estern实验步骤及注意事项
一.实验步骤
1. 组织块称重
2. 利用液氮、研钵粉碎组织块
3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMS F），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃
4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分钟
5. 移入离心管4℃约20,000 g（约15,000转）15分钟
6. 上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存
7. 进行Bradford比色法测定蛋白质浓度
8. 取相同质量的细胞裂解液（体积*蛋白质浓度），并加等体积的2×电泳加样缓冲液
9. 沸水浴中3分钟
10. 上样
11. 电泳（浓缩胶20mA，分离胶35mA）
12. 电转膜仪转膜（100mA 40分钟）
13. 膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色
14. Westernblot 试剂盒显色
15. 分析比较记录
western blot的实验步骤及注意事项的资料
1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。
1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。
2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。
3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中，凝胶面向阴极。
4）将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满转移缓冲液以淹没凝胶。
5）按照厂家所示接通电源开始电泳转移。
6）转移结束后，取出薄膜和凝胶，弃去凝胶。
2. 将薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量标准显现时取出，记录下标准位置。
3. 用100ml水洗涤纤维素膜，必要时可用脱色缓冲液。
4. 膜置印迹缓冲液中于37℃保温1小时。
5. 室温下，用PBS-Tween缓冲液洗涤薄膜。
6. 用封口机将薄膜封入塑料袋中，尽可能不留空气。
7．袋的一角剪一缓冲液的小口，用透析袋夹紧。
8．混合：NGS(100微升)，印迹缓冲液中的抗体（10毫升），加在装薄膜的袋中，于室温
下摇动2小时（或4℃过夜）
9．用总体积300ml PBS-Tween缓冲液，分4次在一浅盘中洗涤薄膜，每次75ml。
10. 将连接生物素的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS）加在袋内，于室温下摇动1小时。
11．按步骤9洗涤。
12．加入抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS），于室温下摇动。
注意事项：
western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态，空间结构改变，因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化，再用酶标记亲和素进行western blot。实验中取胶和膜需带手套。
Western可以参考如下步骤进行操作。
1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)
可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
2. 电泳(Electrophoresis)
(1) SDS-PAGE凝胶配制
SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-P AGE的配方。
(2) 样品处理
在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)。
100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白.
(3) 上样与电泳
冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。为了便于观察电泳效果和转膜效果，以及判断蛋白分子量大小，最好使用预染蛋白质分子量标准。
电泳时通常推荐在上层胶时使用低电压恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。对于Bio-Rad的标准电泳装置或类似电泳装置，低电压可以设置在80-100V，高电压可以设置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的电泳仪就可以满足要求，也可以采用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。为了电泳方便起见，也可以采用整个SDS-PAGE过程恒压的方式，通常把电压设置在100V，然后设定定时时间为90－120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。
3. 转膜(Transfer)
我们推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。
通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA，转膜时间
为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时)。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。
在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。
转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。
4. 封闭(Blocking)
转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。
用微型台式真空泵吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。对于一些背景较高的抗体，可以在4℃封闭过夜。在整个Western过程中我们推荐使用碧云天生产的侧摆摇床，侧向摆动速度比较缓慢，而且也容易让溶液覆盖蛋白膜。
5. 一抗孵育(Primary antibody incubation)
参考一抗的说明书，按照适当比例用Western一抗稀释液稀释一抗。
用微型台式真空泵吸尽封闭液，立即加入稀释好的一抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。如果一抗孵育一小时效果不佳，可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。
回收一抗。加入Western洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
6. 二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
参考二抗的说明书，按照适当比例用Western二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的
二抗。用微型台式真空泵吸尽洗涤液，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。
回收二抗。加入Western洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
7. 蛋白检测(Detection of proteins)
参考相关说明书，使用BeyoECL, Western 荧光检测试剂等ECL类试剂来检测蛋白。
洗片时可以使用X光片自动洗片机。如果没有自动洗片机，可以用显影定影试剂盒自行配制显影液和定影液进行手工洗片。
8. 膜的重复利用(Membrane recovery)
如果蛋白样品非常宝贵，可以使用Western一抗二抗去除液处理蛋白膜，以重复利用蛋白膜。
模具的好坏，直接关系了产品的质量，生产效率及成本，这一点我想大家不会有异议。而模具的好坏需要通过试模来发现问题，解决问题，因此试模工序对于注塑企业来讲非常重要。关于试模方面的要求与资料，大家都比较容易查询得到。那么，国外试模又包含哪些内容呢？下面的文章就是介绍外国人是如何试模的，对于文章所介绍的内容，我绝大部分是持肯定态度的。说实话，有些地方我没有看懂，有的地方则存在异议。这里我不发表自己的意见，来个彻底的“拿来主义”，原汁原味地把它介绍给大家的好，大家可以看别人是怎么做的，有异议的地方再探讨、交流。 （一）模具空运行测试——验证模具的动作A.模具低压下的开合模状况检查：1.模具分快、中、慢各3次开合，在开合过程中有无异常声响，有无阻滞现象；2.模具开合动作顺畅，有无干涉发生。B、模具顶出系统的检查（低压下）1.顶出动作分快、中、慢各顶出3次，检查有无异常现象；2.平面处的顶针（司筒）顶出后，是否会发生松脱或卡死；3.斜面顶针或司筒装置，是否加定位销(防止松动或转动）；4.顶出系统（顶针或顶块）顶出时是否有异常响声以及振颤C.模具复位的检查1.模具分快、中、慢速度各复位3次，观看是否能回到位（复位）；2.复位后，斜顶针端面不高于模芯0.1mm或与模芯平齐；3.复位用限位咭掣接触是否良好；4.顶针顶出时是否与行位的动作发生干涉（滑块是否回到位）；5.模具是否装有顶针复位装置（机械式）。D.行位（滑块）动作的检查1.模具按快、中、慢各3次开合模，观察行位动作是否顺畅；2.行位回位是否正常，与顶针是否发生干涉；3.行位定位是否牢靠；4.液压抽芯装置动作顺序先后情况；5.行位在空运行中有无拉伤、“卡死”现象。 （二）型腔进胶平衡性的测试1.连续依次打5模，称量其重量；2.记录各模中每个产品的单件重量；3.减少注塑量，依次充满20%、50%、90%的样品各3模；4.称量并记录上述每个产品的重量；5.如果产品最大的重量与最小的重量差异小于2%的重量则可接受——若重量波动误差在2%以内，则表明型腔进胶平衡，否则进胶就不平衡；6.如果是单型腔模，也要做进胶平衡性测试（观察实际走胶情况） （三）保压时间（浇口冻结）时间的测试1.保压时间先设定为1秒时，每次成型3模产品； 2.如表格所示，依次增加保压时间，减少冷却时间，使整个循环周期不变（一直到浇口冷冻封胶，产品重量不增加为止）； 3.如下图所示设定多个不同的保压时间，每次成型3模产品，称量指定型腔的产品重量，把数据依次记录在表格里； 4.根据图表确定最佳保压时间。（四）最佳锁模力的确定1.当保压切换位置/保压压力设为最佳时，锁模力设为最大锁模力的90%以内，成型3模，记录每模产品的重量；2.锁模力依次减少5Ton，每次成型3模，记录每模产品重量，直到产品重量突然变大，重量增加5%左右产品周边开始产生飞边时为止。（五）最佳冷却时间的确定方法1.在注塑工艺条件合适的情况下（产品打饱后），估算冷却时间（初选一较长的冷却时间，使产品完全冷却），打3模产品，测量其尺寸；2.在下表中记录产品尺寸，观察胶件变形情况；3.产品冷却时间逐一减少1秒，打3模；4.减少冷却时间，直到产品开始出现变形，尺寸开始减小时为止； 5.每个冷却时间所注塑出的产品，应在胶件充分冷却后（约15分钟时间），才能测量其尺寸； 6.确定最佳冷却时间的依据——考虑产品尺寸稳定性。一般冷却时间的估算公式：1.经验冷却时间≥t（1+3t）……模温60℃以下；2.经验冷却时间≥1.5t（1+3t）……模温60℃以上；（t表示成型品的最大肉厚）。3.理论冷却时间的估算公式：s=最短的冷却时间（s）t=塑件厚度（mm)α=材料的热扩散系数（c ㎡/每秒）Tk=塑件的脱模温度Tm=模具温度（℃）Tc=料筒温度（℃） （六）冷却水流动状况的测试1.使用压力表与流量表进行测量，把测量出的数据填入表中； 2.测量并记录冷却水管直径； 3.根据冷却水温度，查出运动粘度； 4.按如下公式计算出其雷诺数；雷诺数（Re）=3160×冷却水流量/冷却水直径×运动粘度 5.冷却水的流动在紊流状态下，才有较好的冷却效果（Re ＜2000为层流状态；Re ＞4000为紊流（湍流）状态；Re=2000~4000为过渡状态）。
杜鹃商务山庄 工作注意事项 1、在山庄中不准大声讲话，不准有不雅之举，如用手触 摸头、脸或手置于口袋中等； 2、在服务中不准背对客人，不准斜触靠墙或服务台，不准跑步或行动迟缓，不准突然转身或停顿； 3、要预先了解客人的需要，避免聆听客人的闲聊，在不 影响服务的状况下才能与客人聊天，联络感情； 4、搞好工作场所的清洁，避免在客人面前做清洁工作， 勿将制服当抹布；勿置任何东西在干净的桌面上，以避免造成污损。溢泼出来的食物，饮料应马上清理；不可用手接触任何食物； 5、不准堆积过多的盘碟在茶水柜上，不准空手离开餐厅 到厨房，不准拿超负荷的餐具； 6、客人进入餐厅就餐时，以微笑迎接客人，根据年龄及 阶层，先服务女士，在服务时避免靠在客人身上； 8、在最后一位客人用完餐之后，不要马上清理杯盘，除 非是客人要求才进行清理； 9、所有掉在地上的餐具均需要更换，但需先送上干净的 餐具，然后在拿走弄脏的餐具； 10、客人入座时，主动上前协助拉开椅子，保持良好仪容、 仪表，有礼貌地接待客人，尽量记住常客的习惯与喜
好的菜式；熟悉菜单并仔细研究。 11、工作时，不得双手交叉抱胸或搔痒，不得在客人面 前打呵欠，忍不住打喷嚏或咳嗽时要使用手帕或面巾 纸，并事后马上洗手，不得在客人面前看手表； 12、不准与客人争吵，不准批评客人，对待小孩必须有耐 心，不得抱怨或不理睬，如小孩影响到别桌的客人， 应请他的父母加以劝导； 13、壶嘴不可对着客人，因为壶嘴对着客人是一种不礼 貌的行为； 14、转盘不可反转，每道菜都应从上菜口上，须顺时转 动转盘到主位并报菜名；面对门口的位置就是主位； 15、倒酒：不可反手倒酒，商标必须面对客人。白酒8分满，红酒3分满，啤酒8分满 16、服务站位，站在客人右侧为客人服务。 17、要手勤、脚勤、眼勤、口亲，及时为顾客提供服务； 18、上班时要精神集中，不准几个人凑在一起闲谈，不准做与工作无关的事； 19、保持良好的心态；遇到客人投诉应立即报告上级领导解决，尽量满足客人的合理要求； 20、善于运用礼貌语言，为客人提供最佳服务，做到文明有礼，掌握原则，有问必答。
Western实验步骤 1. 电泳(Electrophoresis) （1）SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。 一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。 配胶步骤： 1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。 2.按比例配分离胶（8ml-10ml） 3.加水压胶，待分离胶凝固后（可见有分离胶与水有分隔线，一般凝固时间30分钟-1小时左右），吸走上层水面 4.按比例配浓缩胶（3ml-4ml），加入分离胶上层，插入梳子，（注意别有气泡），待凝。（如果今日不上样可以放入4°C冰箱） 注意：玻璃板要洗得干净；玻璃板要装好，不要漏；制胶过程中，一定要充分混匀，而且避免有气泡；（2）样品处理 1.准备无菌EP管，向EP管内加入样品蛋白质体积的1/4体积的SDS缓冲液（5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，现样品加 3.5ul），之后加入相应蛋白样品（要制冰，蛋白质样品要放置在冰上），充分吹打混匀 2.100℃水浴加热5分钟，以充分变性蛋白。 3.12000r离心5分钟。 （3）上样与电泳 1.将玻璃板装入电泳槽中，加电泳缓冲液至泳槽的的2/3左右 2.蛋白质样品冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可，样品两边加蛋白质Maker(6ul)（注意上样蛋白质顺序，一定不要弄错）。 3.通常把电压设置在100V，然后设定定时时间为100分钟（一般为90-120分钟）。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。 通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。（为了避免电泳过头，最好是在电泳设定时间的提前30分钟观察电泳） 注意：上样时尽量避免样本被上漏出孔外；注意电泳时间的把握；最重要的是一定要记录上样顺序，必要时记录在本子上。 3.转膜(Transfer) 1.物品准备，甲醇，转膜缓冲液，滤纸，转膜槽，玻璃皿3个，制冰。 2.取下胶板，用专门的板将玻璃板分离（务必不要将胶弄破，动作轻些，从下面和上面分离玻璃板），切适合大小的胶（不要切掉MAKER）。 3.用专门的板将胶转入事先放有转膜缓冲液的皿中，记录胶的顺序，剪与胶同等大小的滤纸和转膜纸PVDF膜，PVDF膜要放入甲醇中浸15秒（一般1-2分钟），胶要切角做标记（不要切到maker）,一般一个切三个角，一个切一个角，记录顺序 4.铺膜，PVDF膜铺在胶上，在PVDF膜上铺三层滤纸，然后胶的对侧面铺三层滤纸即可（滤纸要大于等PVDF膜，PVDF膜要大于等胶），赶尽气饱。 5.再将铺好的膜胶滤纸，转入转膜夹中，有PVDF膜这面放在正极侧（即无色透明夹这面），再将夹子放入转膜槽里（电极不要放错，蛋白质带负电的）
服务过程中注意事项 1、上班前应注意自己的仪容、仪表（发型、胡子、口红、指 甲）、首饰等等。 2、上班前不可吃有异味的东西（葱、蒜、喝酒、吸烟等）。 3、上班时不可带情绪上班。 4、在任何情况下用或拿洒楼的物品应轻拿轻放。 5、迎接客人时，如有几名服务员同时在一起，问候客人时一 定异口同声说，在任何地方见到领导要打招呼。 6、在任何地方服务员与客人同时走路（或同时相遇时）一定 先让客人先行并微笑向客人打招呼。 7、当给客人上茶水时，茶水应注意滴到客人衣服或身上，并 茶壶嘴不可对着客人。 8、在服务过程中，不能对客人说“要”字，必须讲“需”来 点什么或用加点什么。 9、在点菜过程中，一定注明客人所提出的特殊要求，字迹要 清楚。 10、当点完菜时，应向客人叙述一遍菜单（如：海鲜的斤两、 做法等）。 11、当客人点完酒水，应让客人确认后，方可开瓶。 12、倒洒时，商标对着客人，从主人开始右边做起。 13、当打带气的饮料、酒水（如：可乐、雪碧、香宾等）不可
对着客人方向打开，则背对着客人，以免弄脏客人的衣服。 14、上菜时，应注意荤素、颜色的搭配，如有盘花的菜，盘花 应向转心或没有座客人的方向。 15、上汤、煲仔、火锅等比较烫类型的菜，下面都要放一个盘 或碟子。 16、无论是倒茶水、上菜，特别是上火锅、铁板时，一定要先 撤位，请客人让一下，不要在有小朋友的地方上。 17、上鱼时，鱼肚朝向客人。 18、在上菜过程中，菜需换小碟或分汤的要跟客人说一声。 19、当菜上齐时，一定告诉客人菜人菜已上齐。（在上菜过程中， 报菜名） 20、在撤台或当着客人时，盘与盘，碟与碟，杯与杯不能重放， 对客人不礼貌。 21、在摆台时，坏的、脏的台布、口布、餐具、玻璃器不许摆 台。 22、家私柜内不可放私人物品。 23、不准私自使用洒楼任何物品。 24、上班时间，不可做工作以外的事情，不能哼小曲、大声说 话，吵架、打架等行为。 25、任何情况下，不许对着客人打喷嚏、掏耳朵、摸头发等。 26、在服务过程中，手要保持清洁，不可用脏手给客人服务。 27、上班时，不能私自离开岗位。
Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤 发布日期:2008-8-25 热门指数:4360 Western Blot(免疫印迹法) 主要包括以下4个基本步骤： n 样品制备 n 电泳分离 n 蛋白的膜转移 n 免疫杂交与显色――蛋白检测 溶液和试剂 n 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) n Modified RIPA buffer Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA: 1 mM ;P MSF: 1 mM ;Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1 microgram/ml each ;Na3VO4: 1 mM ;NaF: 1 mM n 1X SDS 样品缓冲液 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 于25°C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mM DTT, 0.01% w/v溴酚蓝 n 转移缓冲液 25 mM Tris base, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇(pH 8.3) n 10X Tris缓冲盐(TBS) 准备1L 10X TBS: 24.2 g Tris base, 80 g NaCl;用1N HCl调pH为7.6 n 脱脂奶粉或BSA n 甲醇 n TBS/T缓冲液 1X TBS, 0.1% Tween-20 n 封闭缓冲液（TBS/T）
1X TBS, 0.1% Tween-20加5% w/v脱脂奶粉或BSA n 一抗的稀释 1X TBS, 0.1% Tween-20 加5% BSA (多抗)或5%脱脂奶粉(单抗) Note:一般来说, BSA被推荐用于多克隆抗体，脱脂奶粉用于单克隆抗体，这样可得到较高的信噪比。抗体的稀释度参考抗体说明书或根据实验确定。 n 预染的蛋白质Marker，可用于监测转膜的效率 样品制备 原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。 1．培养细胞或药物处理。 2．弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。 3．加入1X SDS样品缓冲液(6-well plate, 100 μl /w或75 cm2plate, 500-1000 μl/瓶)，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4．超声10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5．煮沸样品5 minutes。 6．离心12000g, 5 min，取上清。 7．电泳分离：上样15μl~20 μl 至SDS-PAGE 胶(10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平，应用RIPA裂解液(1 ml per 107cells/100 mm dish/150 cm2flask)裂解细胞，收集裂解液至离心管中，在振荡器上混匀4～15min，14000g离心15min（4℃），弃沉淀，用B radford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度以调整上样体积和上样量，进行Western杂交时还需设置内或外参照，通常用beta-actin。 注意：一般上样20~30 μg已足够，如待检蛋白为低丰度蛋白，可加大上样量至100μg，但电泳条带易拖尾，可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。 电泳分离（参照SDS-PAGE电泳方法） 转膜 杂交膜的选择是决定Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜。NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被
蛋白印迹——Western blot 实验流程及注意事项 各种凝胶电泳方法可以直接了解蛋白的某些性质如迁移率、电荷、大小、丰度以至蛋白的亲疏水性等。此外，特异染色方法可用于识别不同种类的蛋白质。Western blot技术大大扩展了凝胶电泳后识别和鉴定蛋白的可能性。这一技术首先将电泳分离后的蛋白质条带或斑点从凝胶介质转移到固相支持膜上，然后用特异性配体进行检测。特异性抗体和凝集素等已被广泛应用检测印迹膜上的蛋白。印迹技术还常常作为电泳分离后用化学方法（如蛋白氨基端序列分析等）鉴定蛋白的一个重要步骤。 一、聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE或SDS-PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCL。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCL。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 实验步骤 1.配制分离胶5ml（配方见图1）； 2.将液体用1ml移液器加入玻璃板（从玻璃板的边缘加入，速度适中，尽量不 要产生气泡）； 3.用去离子水压胶（利用重力作用把胶压平，否则如果有气泡，胶就不平了， 影响电泳效果。注意上面盖一保鲜膜，防止液体挥发）； 4.大约1第二天一早配制堆积胶）， 5.倒掉玻璃板上面的水并用滤纸吸干，加入堆积胶，并插入梳子； 6.约1小时后堆积胶凝固，把玻璃板转移到电泳装置并加紧（防止漏液）； 7.将电泳装置内加入电泳缓冲液并观察是否漏液； 8.拔掉梳子，用微量注射器冲洗上样孔，加入和上样缓冲buffer混合变性的蛋 白；①蛋白上样量：20-50μg；②上样缓冲液：加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×；③上样最大体积：根据梳子孔径和玻璃板的距离而定，一般我们用的上样最大体积在30ul左右；④蛋白变性：上样前要将样品于沸水中煮5-10min 使蛋白变性。可以使用PCR仪进行变性，99℃5分钟，加快速度，这样就不用将水煮沸了，同时在水中煮蛋白样品有下面弊端：a. EP 管容易炸开，样品丢失；b. 容易进水，使样品体积增加，超过电泳最大上样量； 9.在电泳槽中加入电泳缓冲液； 10.恒压80V 30分钟，100V 2小时左右，溴酚蓝跑到底即可（电泳时间可以根 据自己目的蛋白的具体条件设置，一般4～5 h，电压为40V 较好，也可用60V。）；
试模操作流程 试模主要分四部分： （1）试模前模具的检查 （2）试模前的准备工作和调试 （3）试模时的注意事项 （4）试模后模具的检收 一、试模前模具的检查 模具做好后，需要对模具进行试模前的检查，以发现模具设计和制造中的问题，以便及时纠正，其具体步骤如下： （1）注塑模的外观检查 1．成型零件、浇注系统等与熔料接触的表面应光滑、平整、无塌坑、伤痕等缺陷。 2．模具的闭合行程，安装于机器的各配合部位尺寸、脱模方式、开模距离、模具工件要求 等应符合设备的相关条件。 3．模具上应有生产号和合模标志，各种接头、阀门、附件、备件应齐全。 4．各滑动零件的配合间隙应符合要求，起止位置定位正确，镶件紧固应紧固牢靠。 5．对于注塑腐蚀性较强的注塑模，其模具型腔的表面应镀铬和防腐处理。 6．模具的外观部分不应当有锐角，大、中型模具应有起吊用的吊孔、吊环。 7．互相接触的承压零件，应有合理的承压面积和承压方式，避免直接承受挤压。 8．模具的稳定性良好，有足够强度，工作时应受力匀衡，行动平稳。 （2）模具的空运转检查 模具安装好后，必须经过空运转检查，经便进一步发现问题，进而解决问题。 1．将模具缓缓合拢，合模后各结合面均应接触紧密，不得出现间隙。 2．开模时顶出脱模机构应保证顺利脱模，以便取出塑件和浇注系统废料。 3．活动型芯，顶出及导向部分等运动时应滑动平稳、灵活、动作协调可靠。
4．检查各锁紧机构、应能可靠、稳妥地锁紧，各紧固件不得有任何松动现象。 5．各气动、液动控制系统动作正确，不泄漏、不产生过大振动，各阀门工作正常。 6．冷却系统的水路应畅通，不漏水，各种控制阀门控制正常。 二，试模前的准备工作及调试 试模是为了检查模具制作的质量好坏，能否生产出合格产品来。 1．试模前，应检查所用原料是否符合要求，不符合要求的应进行处理或更换；欲试之原料先行干燥，ＰＥ、ＰＰ、ＰＯＭ不需干燥其余均要，利用新料试才标准。 2．模具挂上中心孔要对准锁模力以总顿数的１／３即可，如射出时分模面不是因射压太高之关系起毛边，可渐渐增加锁模顿数直到不起毛边为至如此做法可增长模具使用寿命。 3．根据选定的工艺参数将料筒和喷嘴加热至合适温度，判断温度是否合适的最好方法，是在喷嘴与模具主流道脱开时，用较低的注射压力，使熔料自喷嘴中缓慢流出，再观察料流流出情况。 4．如果料流中没有气泡、硬块、银丝、变色等情况，料流光滑明亮，即说明料简和喷嘴温度合适，可以试模。 5．清洗料管利用ＰＰ或亚克力清洗，ＰＰ是利用其粘度，亚克力是利用其磨擦性，料温在240℃～２５０℃之间，计量短行程，加点背压快速射出清洗，不易洗净可加洗管剂清洗，依比例调配。 6．开锁模速度压力位置调整妥当，低压保护更是要调好，乃因是新模成品尚不了解，有滑块（SLIDE）之模具开关模速度不可快，有抽芯及绞牙之模具要先行手动试验功能正常否？模具良好否？不然一失误模具就会损坏。 7．条件设定、射出料量、压力速度、时间、计量、位置等，射压、射速、计量由低而高依成品状况而设定。冷却时间、射出时间由长至短依成品成形况而减少。如此可防止粘模及充填过饱。 8．试模时，先选择低压、低温各较长时间下成形，然后按压力、时间、温度先后顺序变化，以求得到较好的工艺参数。 9．若注射压力小，型腔难充满，可加大注射压力，当增压效果不明显时，再改变温度和时间，当延长时间仍然不能充满时，再提高温度，但不能升温太快，以免塑料发生过热分解。 10．在生产壁薄面积大的塑件时，一般采用高速注射，对于壁厚而面积小的塑件，则采用低速注射。 11．若高速和低速都能充满型腔时，除了玻纤增强塑料外，均可采用低速注射。
服务中的注意事项范文 一、安全 1．穿着合适的鞋子以免滑倒和摔倒 2．不要匆忙或奔跑 3．警惕在你周围的人 4．以客为先，靠右走 5．不要在盘子上堆放过多的东西 6．当抬举重物时用腿部的力量而不是背部力量 7．手拿物品时，尽可能的作好自我保护 8．即使清洁溢出和残留的水滴 9．清楚地了解地板何处有水，并应用拖把拖干 10．勿用手直接触摸发热的物品，如：薯条炸炉等
11．知道灭火器的摆放位置和使用方法（基本和简单有效的消防知识） 12．取冰块是要用冰铲，不要直接用手或玻璃器皿 13．用托盘装载热的物品 14．打翻冰块应与任何渗水一样处理 15．如果抬举特别重物时，需要两个以上的人合作完成 二、坏习惯 1．身体依靠在家具、墙面或单脚站立 2．两手叉腰、两手插在口袋中或两手交叉 3．两腿不停的摇摆 4．站得离客人太远或太近，站在客人不易看见的地方
5．与客人说话时眼睛看着别处 6．走路太快、太慢或奔跑，两手放在背后，走路僵硬，走路看着地板 7．装着没有注意顾客需要服务，背对着顾客 8．触摸自己的头发和脸 9．挖鼻孔、咬或挖指甲 10．刮或磨擦家具 11．咬嘴唇 12．揉眼睛 13．营业场所内整理制服 14．营业场所内化妆 15．咀嚼口香糖或吃东西
16．玩手指并发出声音 17．显出厌烦的神态 18．打哈欠、打嗝、吐痰、打喷嚏不遮住脸，打击关节、吹口哨或大声唱歌 19．未经客人允许触碰客人的东西 20．营业场所口头禅里带秽语、粗口 服务中的注意事项[篇2] 1、在工作中DJ不允许接听与工作无关的电话 2、严禁挑客，私自离开服务房间，若客人要求换人或自己有特殊情况要求，应迅速私下找到房间负责经理报告，得到批准后（经理在服务监督卡上签字认可）才可离开。 3、严禁窜房，若有其它房间熟客需打招呼，须得到本房和进房负责经理同意，打招呼时间不得超过十分钟。
FEI TECNAI 20透射电镜 目录 电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 - 一.放置样品 ..................................... - 4 - 二.合轴 ............................................. - 4 - 三.拍形貌 ......................................... - 5 - 四.踩带轴 ......................................... - 6 - 五、拍衍射 ...................................... - 6 - 六、能谱分析 .................................. - 7 - 七、高分辨 ...................................... - 7 - 八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -
电镜操作面板
镜筒 注意事项 1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。 2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。 3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤： 一.放置样品 1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可） 2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。 3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。然后点Tube on 。然后点Col Values Closed 。 检查 4．关灯，取下蒙皮。 5.点击→Search ，即可看到样品所在位置。开始找样品中心空洞。 二.合轴 1.在Spot size 为1，低倍（6200X 或8700X ）下找到薄区（朝着光亮处找）。然后调焦。选择最佳物镜电流值9 2.5854（按Eucentric focus ）。 2.放大倍数至86000X ，然后将光斑移至孔区域，开始合轴。观察光斑是否为圆形，非圆形时要进行调圆→condenser ，调圆后点→ None
Western blot实验步骤 一、制备蛋白样品（单层贴壁细胞总蛋白提取） 1.倒掉细胞培养液,加3ml预冷的PBS洗涤细胞，重复两次，弃掉PBS 后将细胞培养瓶置于冰上。 2.裂解液RIPA(强)1ml +PMSF10ul(100:1),两者混匀后加入培养瓶中裂解细胞，冰上裂解30min,为使细胞充分裂解,培养瓶要经常来回摇动。 3.裂解完后，用细胞刮将细胞刮于一侧（动作要快），转移至ep管中. 4.4度，12000rpm,离心5min.离心后取上清至新的ep管中，用于后续实验（-80保存） 常用蛋白收样：倒掉细胞培养基后，预冷PBS洗涤细胞2次，弃去，再加入1ml PBS，用细胞刮轻轻刮取细胞，转移至1.5ml ep管中，12000rpm，离心5min，尽量吸净上清，沉淀于-80保存，用于后续实验。融化蛋白样品，加入RIPA+PMSF细胞裂解液（200ul/ep管），充分混匀，冰上裂解20min，4度离心，5min ，12000rpm，小心吸取上清至新的ep管中。 二、蛋白浓度测定(BCA法) BCA(碧云天)蛋白浓度测定试剂盒灵敏度高，检测浓度下限达到25ug/ml，最小检测蛋白量达到0.5ug，待测样品体积为1-20ul。在50-2000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。 标准蛋白BSA浓度：5mg/ml (-20保存),完全溶解蛋白标准品，取10ul 稀释至100ul，使终浓度为0.5mg/ml(ug/ul)。蛋白样品在什么溶液中，
标准品也宜用什么溶液稀释。但为了简便起见，也可以用0.9%NaCl 或PBS稀释标准品。 1.配置BCA工作液 A液： B液= 50 :1 ，混匀 A液+B液=200ul (每个样本) 样本数量： 7个标准品 + N 个待测蛋白样本 2.先将每孔加入200ul BCA工作液，再加入蛋白样本。（96孔板）, 总体积为10ul.待测蛋白样本先10倍稀释。 3.37度，温箱中孵育30min。562nm波长，测OD值。待测蛋白样品浓度在50-2000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。 4.根据所测样品的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线即可计算样本相应的蛋白含量，除以样本稀释液总体积（10ul）,再乘以样本稀释倍数，即为样本的实际浓度（ug/ul） 5.蛋白定量后，以最小蛋白浓度为标准，将各组蛋白样本调至相同浓度（ddH2O补齐） 绘制标准曲线：X轴为蛋白质量，Y为OD值 插入—XY散点图,选中图上一点，右键，添加趋势线—选项（显
餐厅服务员服务中注意事项100条 1、服务中切记服务态度要热情； 2、上菜时拇指不得进盘中； 3、忌上菜时对着菜品讲话； 4、不得在客人面前与同事大声吼叫； 5、在餐厅可以快走，但不可以跑； 6、忌不及时为客人更换骨碟、烟缸； 7、要为客人拉椅让座； 8、要为客人接挂衣帽； 9、不要为客人左右开功的服务； 10、不要站在客人正面为客人服务； 11、不可在客人面前饮水； 12、不可离开本包房或本台客人过久； 13、不可在客人面前挖鼻孔、剔牙； 14、为客人上餐具，如酒杯时，不可留有手印； 15、不可将口布夹在腋下； 16、不可给客人上破损餐具； 17、不可用脏托盘为客人服务； 18、不可依靠墙壁无精打采； 19、不可忘记客人交待的事情； 20、及时为客人调换落在地上的餐巾或餐具； 21、不可背对客人；
22、服务中不可突然转身或停顿； 23、服务中不可跑步或行动迟缓； 24、不可议论客人； 25、上菜时要尽可能保持一个上菜口，不要随时更换； 26、带有佐料的菜：佐料先上，上在菜的右侧； 27、骨碟更换边撤边换，同步进行； 28、及时为客人斟倒酒水，不要等客人喊； 29、客人碰洒酒水要及时清理； 30、落在转盘上的菜及汤汁要及时清理； 31、收到菜单时，先检查是否有提前准备的餐具； 32、尽量记住常来客人的姓名、喜好； 33、为客服务时尽量不要打断客人的讲话； 34、当宾客斟酒时，服务员要准备好酒，随时为客人添加； 35、预先调好室内温度； 36、上菜后稍退一步报上菜名； 37、菜齐后要及时通知客人菜已齐； 38、菜齐时要及时问客是否需要主食，以免主食上的速度慢； 39、如遇汤羹类菜肴要及时为客人分羹； 40、所有食物均由右侧为客人上； 41、避免撤换餐具时碰撞发出声音； 42、不可在老人及儿童之间上菜； 43、不能用开水加汤，必须跟指定的汤；
Western bolt 一、实验目的 通过实验了解western blot技术的原理和操作。 二、实验原理 SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。 PAGE能有效的分离蛋白质,主要依据其分子量和电荷的差异,而SDS-PAGE的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。 第一抗体就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。 化学发光HRP底物（辣根过氧化物酶底物，也常被称为ECL试剂）是目前Western blot检测中最为灵敏的试剂。显影液的A液主要成分为鲁米诺（Luminol）及发光增强剂，B液主要成分为过氧化物溶液。二抗上含有HRP（辣根过氧化物酶），可以催化A液和B液反应发光。 三、实验器材 1.电泳槽，胶板架子 2.转膜仪 3.NC膜 4.电泳电源 5.滤纸 6.摇床 7.X射线摄影暗匣 8.X射线胶片 9.塑料薄膜 四、实验试剂 1.runningbuffer 5xrunningbuffer(1L) Tris 15.1g
注塑机试模方法及注意事项 内容来源网络，由“深圳机械展（11万㎡，1100多家展商，超10万观众）”收集整理！更多cnc加工中心、车铣磨钻床、线切割、数控刀具工具、工业机器人、非标自动化、数字化无人工厂、精密测量、数控系统、3D打印、激光切割、钣金冲压折弯、精密零件加工等展示，就在深圳机械展 注塑机试模方法及注意事项 新模具注塑成型之前或机台更换其他模具生产时，试模是必不可少的部分。试模结果结果的好坏将直接影响工厂的后续生产是否顺畅。因此在试模过程中必须遵循合理的操作步骤和记录试模过程中有用的技术参数，以利于产品的批量生产。 试模前的注意事项 1.了解模具的有关资料： 最好能取得模具的设计图面，详予分析，并约得模具技师参加试模工作。 2.先在工作台上检查其机械配合动作： 要注意有否刮伤，缺件及松动等现象，模向滑板动作是否确实，水道及气管接头有无泄漏，模具之开程若有限制的话也应在模上标明。以上动作若能在挂模前做到的话，就可避免 在挂模时发现问题，再去拆卸模具所发生的工时浪费。 3.当确定模具各部动作得宜后，就要选择适合的试模射出机，在选择时应注意： (a)注塑机台的最大射出量是多少 (b)拉杆内距是否放的下模具 (c)活动模板最大的移动行程是否符合要求 (d)其他相关试模用工具及配件是否准备齐全 一切都确认没有问题后则下一步骤就是吊挂模具，吊挂时应注意在锁上所有夹模板及开模之
前吊钓不要取下，以免夹模板松动或断裂以致模具掉落。模具装妥后应再仔细检查模具 各部份的机械动作，如滑板、顶针、退牙结构及限制开关等之动作是否确实。并注意射料嘴与进料口是否对准。下一步则是注意合模动作，此时应将关模压力调低，在手动及低速 的合模动作中注意看及听是否有任可不顺畅动作及异声等现象。吊装模具过程其实比较简单，需要仔细的地方主要是模具浇口与射嘴的校中心比较困难，通常可以采用试纸的方式 调校中心。 4.提高模具温度： 依据成品所用原料之性能及模具之大小选用适当的模温控制机将模具之温度提高至生产时所须的温度。等模温提高之后须再次检视各部份的动作，因为钢材因热膨胀之后可能会引 起卡模现象，因此须注意各部的滑动，以免有拉伤及颤动的产生。 5.若工厂内没有推行实验计划法则，我们建议在调整试模条件时一次只能调整一个条件，以便区分单一条件变动对成品之影响。 6.依原料不同，对所采用的原枓做适度的烘烤。 7.试模与将来量产尽可能采用同样的原料。 8.勿完全以次料试模，如有颜色需求，可一并安排试色。 9.内应力等问题经常影响二次加工，应于试模后待成品稳定后即加以二次加工模具在慢速合上之后，要调好关模压力，并动作几次，查看有无合模压力不均等现象，以免成品产生 毛边及模具变形。 以上步骤都检查过后再将关模速度及关模压力调低，且将安全扣杆及顶出行程定好，再调上正常关模及关模速度。如果涉及最大行程的限制开关时，应把开模行程调整稍短，而在 此开模最大行程之前切掉高速开模动作。此乃因在装模期间整个开模行程之中，高速动作行程比低速者较长之故。在塑料机上机械式顶出杆也必须调在全速开模动作之后作用，以
宴会服务中的注意事项 1、客人入座后送撤香巾，应从客人右侧 2、不伸手到客人面前取物或将食品递给对面的客人更不可隔着客人服务。 3、取碟时四个手指在下、拇指在上切忌浸入菜汤。 4、开启酒瓶时：酒瓶要倾斜，商标朝向客人。 5、啤酒泡沫过多，斟到时（1）速度慢（2）酒瓶倾斜、瓶口留出空隙利于进空气（3）尽量减 少晃动、让酒沿杯边徐徐的倒入。白酒九分满，啤酒8分满、红酒1/3或2/3白兰地1/5 6、当客人杯中还剩1/3酒水时服务员要及时斟倒除非客人不要 7、斟倒茶饮料时8分满 8、啤酒和饮料应先倒啤酒 9、斟倒酒水及饮料时一律从客人右侧 10、菜的盘边、盘底、一定要保持干净、上菜的位置应选择在副主人的右侧。新上的菜转到主 宾面前、把前一道菜转到副主人面前、或主人、主宾中间 11、上菜撤盘不能从客人头上越过，不要从小孩女士身边上菜，不能说劳驾更不能说借光、上 菜要稳、不要将汤汁洒在客人身上。 12、分菜时要将菜的优质部分均匀的分给客人。分菜要做到一勺准、一叉准、切不可将一勺汤 或一叉菜派分给两位宾客，每道菜要留下2/10将剩余的放桌上，以示菜肴充足。 13、上整鱼时鱼头朝向主宾、鱼尾朝向副主宾、分整鱼时要剔出鱼骨并恢复原形，不可把鱼 肉戳破上桌供人观赏。分整鸡时、整鸭、只分腿肉和胸脯肉，不分头尾翅 14、上汤菜时要注意。不要用抹布垫托要使用托盘。端拿时手指不能浸入汤内，汤中若有油 花，油沫和湖葱，应用小勺撤出、切记用嘴吹或用手拿 15、上撤要分开左撤右上换骨蝶如客人碟如客人碟内有食物应用客人询问是否可以撤下， 注意不要把汤洒在客人身上。 16、斟酒上菜，送物一律用托盘，托盘一律用右手，用右手操作 17、宴会服务要集中精力、精神饱满、客问必答，不要上错上漏菜肴不要洒菜汤、打破餐具， 要尊重客人的风俗习惯，客人不食之物，不要多次送上，不要偏向某一位客人
试模前的注意事项 1.了解模具的有关资料： 最好能取得模具的设计图面，详予分析，并约得模具技师参加试模工作。 2.先在工作台上检查其机械配合动作： 要注意有否刮伤，缺件及松动等现象，模向滑板动作是否确实，水道及气管接头有无泄漏，模具之开程若有限制的话也应在模上标明。以上动作若能在挂模前做到的话，就可避免在挂模时发现问题，再去拆卸模具所发生的工时浪费。 3.当确定模具各部动作得宜后，就要选择适合的试模射出机，在选择时应注意： (a)注塑机台的最大射出量是多少 (b)拉杆内距是否放的下模具 (c)活动模板最大的移动行程是否符合要求 (d)其他相关试模用工具及配件是否准备齐全
一切都确认没有问题后则下一步骤就是吊挂模具，吊挂时应注意在锁上所有夹模板及开模之前吊钓不要取下，以免夹模板松动或断裂以致模具掉落。模具装妥后应再仔细检查模具各部份的机械动作，如滑板、顶针、退牙结构及限制开关等之动作是否确实。并注意射料嘴与进料口是否对准。下一步则是注意合模动作，此时应将关模压力调低，在手动及低速的合模动作中注意看及听是否有任可不顺畅动作及异声等现象。吊装模具过程其实比较简单，需要仔细的地方主要是模具浇口与射嘴的校中心比较困难，通常可以采用试纸的方式调校中心。 4.提高模具温度： 依据成品所用原料之性能及模具之大小选用适当的模温控制机将模具之温度提高至生产时所须的温度。等模温提高之后须再次检视各部份的动作，因为钢材因热膨胀之后可能会引起卡模现象，因此须注意各部的滑动，以免有拉伤及颤动的产生。 5.若工厂内没有推行实验计划法则，我们建议在调整试模条件时一次只能调整一个条件，以便区分单一条件变动对成品之影响。 6.依原料不同，对所采用的原枓做适度的烘烤。 7.试模与将来量产尽可能采用同样的原料。 8.勿完全以次料试模，如有颜色需求，可一并安排试色。 9.内应力等问题经常影响二次加工，应于试模后待成品稳定后即加以
宴会的服务流程及注意事项 一、什么是宴会？ 宴会是为了表示欢迎、祝贺、答谢、喜庆等举行的一种正式而隆重的餐饮活动。 一、宴会的特点 A、人数多 B、气氛隆重热烈 C、就餐时间长 D、消费标准高 E、菜式品种多 F、接待讲究 二、宴会的八知三了解 八知：A、主办单位B、主办单位负责人的姓名、联系电话C、时间D、人数 E、地点 F、主人及客人的身份和国籍 G、用餐标准 H、结帐方式 三了解：A、客人的生活饮食喜好与忌讳 B、客人的特殊要求 C、客人的习惯 四、宴会的分类 按规格分：国宴、正式宴会、便宴 按餐别分：中餐、西餐、冷餐宴会、鸡尾酒会 按进餐形式分：坐式、立式 按礼仪形式分：欢迎宴会、答谢宴会、告别宴会 五、准备工作 1、定台型----摆台----场内布置 2、根据菜单做准备： A、舞台上（蛋糕塔：蛋糕、蛋糕刀、净布、早生贵子；香摈塔：香摈杯、香摈、净布） B、场内工作台（餐具、开瓶器、净布两块、花雕酒壶、刀叉、杂物夹、圆托两个、餐 巾纸、主桌工作台有耳茶杯、咖啡壶、牙签盅） C、台面（婚寿宴签到卡、笔、台号牌、酒水、汁酱、烟、槟榔、凉菜） D、场外工作台（垃圾桶、布草车、废口布、方托、两个空筐子、米饭桶、米饭碟、米 饭勺、瓷勺、吸管、一次性筷子、打包盒、打包袋、剁椒腐乳、生抽、陈醋、毛 巾柜、毛巾蓝、备用毛巾、餐车、杯盒、餐巾纸、一次性手套、备用椅、屏风） E、酒水车（敬酒托盘、布、四个烈酒杯、花雕酒壶、冷开水、娃娃、西装套） F、茶水台（有耳茶杯、茶碟、红茶包、咖啡壶、热水瓶、圆托） G、签到台（签到牌、温馨提示牌、签到花、签到本、笔、烟缸、婚宴需三个盘子用红 布包好） H、厅内（龙凤喜字、BB椅、主桌毛巾托、植物、空调、卫生） 六、点到分工 1、点到、检查仪容仪表 2、报菜单 3、注意事项 A、看台员工： 1、米饭、毛巾、打包盒/袋、红茶、BB椅、备用酒水的位置在……。 2 、节约酒水,空白酒瓶盖留下点数,空酒瓶连盖一起放于工作台下纸箱内。
连续流动分析仪使用步骤和注意事项 适用于新用户，老用户也可以做为参考，或者直接略过参看下一章节。 1．开机前检查 1.1 检查蠕动泵两侧导轨是否安装正确，泵管卡块是否安装到位。 1.2检查泵管安装是否正确 1.3检查管路是否连接正确， 1.3.1检查流程 进样针泵管化学模块中的混合圈透析膜 加热池检测器中的流通池废液管 1.3.2检查管路中的接头（两通、三通、玻璃管间的塑料套管）是否牢靠，不会出现漏液 或进气泡现象。 1.3.3运行时间长后，玻璃管间的塑料套管上会出现有色颗粒沉淀，应及时更换新的套管， 否则在测定时会带来较大的噪声。 1.3.4检查泵管的选择是否正确，新用户最好对照法的装置图进行检查，如泵管出现老损 时请及时更换。 1.3.5检查空气管路是否连接正确，每次开机前最好将空气阀上的硅胶管左右移动一下， 改变硅胶管上受力点的位置，这样可以提高硅胶管的使用寿命。 1.4 滤光片是否正确 注：滤光片不用时用原包装袋装好放入干燥器皿中，防止在潮湿空气中光学老化。 1.5 管路中加热池，紫外消解器或蒸馏器是否连接正确（如有） 1.6 检查电源线与数据传输线是否连接正确，如有搬动时此项检查尤为重要。 1.7 打开各部件（进样器、蠕动泵、化学模块上的加热池及紫外灯、检测器）电源：1.7.1 蠕动泵主电源开关在右侧下，上红色开关控制启动和停止。 1.7.2 打开在线蒸馏装置开关（如果需要），不用时请关闭电源。 1.7.3 化学模块上加热池的温度控制已依据分析法设定好，使用时直接连接电源即可。紫 外灯电源线在化学模块下，如果要使用直接连接电源线。注：温度对显色反应的灵敏度影响很大，忘记打开加热池，可能会带来显色反应的灵敏度下降。 1.8 电源开启后进样器会自检。启动蠕动泵，将管路放入蒸馏水中，清洗管路，如果有