分类号密级
国际十进分类号（UDC）
第四军医大学
学位论文
育宝胶囊中砷含量和形态分析及其
生物学量效关系研究
（题名和副题名）
涂剑波
指导教师姓名王四旺教授 指导教师单位第四军医大学药学系药物研究所
申请学位级别硕士专业名称生药学
论文提交日期2007. 04论文答辩日期2007.05
学位授予单位和日期第四军医大学
答辩委员会主席罗晓星
评阅人孙文基李金声
独创性声明
秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个
人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特
别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究
成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工
作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致
谢。
申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。
论文作者签名： 日期：
保护知识产权声明
本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校
攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校
后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可
以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，
缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园
网上提供论文内容的浏览和下载服务。
论文作者签名： 导师签名： 日期：
育宝胶囊中砷含量和形态分析及其
生物学量效关系研究
研 究 生：涂剑波
学科专业：生药学
所在单位：第四军医大学药学系药物研究所
导 师：王四旺 教授
辅导教师：谢艳华 副主任药师
高双斌 高级实验师
关键词：中药；砷；形态；原子荧光法；男性不育；药效学；电离辐射；育宝胶囊
中国人民解放军第四军医大学
2007年 05 月
目 录
缩略语表 (1)
中文摘要 (2)
英文摘要 (6)
前言和文献回顾 (12)
正 文 (23)
1 育宝胶囊中砷含量及其形态分析 (23)
1.1育宝胶囊原药材的理化鉴定 (23)
1.2育宝胶囊的工艺制备 (36)
1.3育宝胶囊及原药材中砷含量研究 (38)
1.4育宝胶囊中砷的形态分析 (43)
1.5中药材中砷含量测定的不确定度分析 (48)
2实验用大鼠模型复制 (61)
3砷的生物学量效关系 (64)
小 结 (77)
参考文献 (78)
个人简历和研究成果 (86)
致 谢 (87)
缩略语表
缩略语 英文全称 中文全称
As(Ⅲ) arsenite 三价无机砷
As(Ⅴ) arsenite 五价无机砷
MMA monomethylarsonic acid 单甲基砷
DMA dimethylarsinic acid 二甲基砷
AFS atomic fluorescence 原子荧光法
LD
Medial lethal dose 半数致死量 50
CYB Capsule of YUBAO 育宝胶囊
T testosterone 睾酮
E estrogen 雌激素
LH leuteinizing hormone 促黄体生成激素
育宝胶囊中砷含量和形态分析及其
生物学量效关系研究
第四军医大学药学系药物研究所 西安 710032
中文摘要
砷是一种广泛分布于自然界的元素，克拉克值为5×10-4，宇宙丰度为4.0。自然界除了少量的天然砷外，已知有150多种含砷矿物。研究表明，不仅砒石、砒霜、雄黄、雌黄等中药材富含有砷，在一些常用中药如补骨脂、细辛、小蓟中砷含量也颇为丰富[1]。砷的生物学效应与其剂量和化学形态密切相关，
)为20mg/kg，二甲基砷(DMA，同为砷化物，三氧化二砷对小鼠半数致死量(LD
50
methylarsinic acid)为700-2600 mg/kg，砷糖（arsensugar）在8000mg/kg 以上 [2]。中药材来源广泛，受产地、采集、炮制加工的影响，其中的砷含量常较高。为加强其安全性、规范性，有必要检测其中的砷含量，并对其形态进行分析。
我所研制的育宝胶囊（Capsule of YUBAO，以下简称CYB）在第四军医大学西京医院等使用几年来，患者普遍反映服用方便，疗效可靠，毒副作用小，但实验室检测常出现砷含量较高的现象。籍此欲探讨不同中药材及中成药中砷的含量及其形态，研究砷对机体的生殖、造血系统的生物学量效关系。
1 实验目的
旨在通过对组方药材中的砷含量进行检测、分析，研究与探讨CYB治疗男性不育症的可能作用机制和砷对机体生殖系统、造血系统的生物学量效关系。
2 实验方法
2.1 CYB原药材中砷含量及形态分析
2.1.1 CYB原药材的理化鉴定及制备工艺 对市购中药材按照药典规定进行理化鉴定以保证药材质量，并按照处方设计对其进行了工艺放大。
2.1.2 CYB原药材及成药中砷含量及其形态分析 采用原子荧光法对所鉴定本处方中药材进行了砷含量分析，并对含砷量较高的药材进行了砷的形态分析。
2.1.3 中药材中砷含量分析的不确定度探讨 利用直观因果图，分析原子荧光法测定中药黄芪中的砷含量的不确定度影响因素，找出影响其结果的主要因素，并对其进行评价。
2.2.实验用大鼠模型复制
采用60Co照射的方法，找到造成雄性大鼠的生殖功能障碍及造血系统抑制的适宜照射剂量。通过对大鼠照射后3周的精子数量和畸形率、存活率的考察，观测大鼠自动恢复时相。
2.3 砷的生物学量效关系
2.3.1 CYB及不同剂量As
2O
3
对大鼠生殖及造血系统的影响 采用60Co照射的方
法，造成雄性大鼠生殖功能障碍及造血系统抑制模型。按照CYB低、中、高剂
量组（0.2、0.15 、0.1 g/mL）和As
2O
3
低、中、高剂量组（0.15、0.3、0.75mg/mL）
和模型组、阳起石组（0.1g/mL）、正常组给于不同的处理，3周后采血并处死、解剖动物，观测其生殖系统各项指标，比较各主要脏器脏器系数及体重增长系数，胸骨骨髓涂片后常规染色观察。
2.3.2 染砷大鼠各组织中砷含量 采用原子荧光法对正常组和给药组中As
2O
3
低、高剂量组以及CYB中剂量组大鼠各主要脏器、组织中的砷含量进行检测，以寻找砷可能的蓄积器官和靶器官。
3 实验结果
3.1 CYB原药材中砷含量及形态分析
CYB中砷含量较高主要系由CYB原药材中四味药材砷含量较高药材引起，四味药材分别是：黄连、阳起石、牡蛎、龙骨。通过对CYB中砷形态的分析，CYB中的主要是As(Ⅲ)。通过对原子荧光法检测中药材中砷的不确定度评定的探讨，建立了有效的数学模型，对测试过程中不确定度的各个分量进行了分部假设及总体合成，并对评定结果进行了讨论。
3.2 实验用大鼠模型复制
4.0Gy 60Co照射组、
5.0Gy 60Co照射组与正常组在精子数量、存活率、畸形率方面均存在极显著差异（P<0.01），4.0Gy照射组与5.0Gy照射组在精子数量、畸形率上存在显著差异（P<0.05），存活率差异不显著，大鼠无1例并发症导致死亡。
3.3 砷的生物学量效关系
模型组与正常组相比大鼠精子数量、存活率、畸形率差异显著(P<0.01)，表明模型稳定可靠。与模型组比较，CYB各剂量组及As2O3低剂量组精子数量均有提高，具有明显统计学意义(P<0.05)。
与模型组相比，CYB各剂量组、As
2O
3
低剂量组精子数量均有显著提高
(P<0.01)，CYB各剂量组存活率有所升高(P<0.05)，CYB各剂量组、As2O3低剂量组精子畸形率显著降低，具有明显统计学意义(P<0.05)。模型组促黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌激素（E）与正常组相比均有所下降，其中雌激素水平和睾酮水平存在显著差异（P<0.05）。与模型组相比，As2O3低剂量组雌激素水平和睾酮水平显著升高（P<0.05），CYB各剂量组睾酮水平均升高，其中CYB中剂量组存在显著差异（P<0.05）。
模型组与正常组相比，附睾系数、睾丸系数存在显著差异（P<0.01），储
精囊系数、前列腺系数、包皮腺系数无明显差异。与模型组相比，As
2O
3
高剂
量组睾丸系数显著降低(P<0.05)而CYB低、中剂量组显著增加(P<0.05)。
正常组和模型组体重增长系数不存在显著差异，As 2O 3高剂量组大鼠体重
增长显著加快(P <0.05)，而阳起石组大鼠体重增长显著减慢(P <0.05)。模型组、As 2O 3高剂量组肾上腺系数与正常组存在显著差异(P <0.05)，但各给药组
与模型组间差异不显著。胸腺系数、脾脏系数、肾脏系数各组间无明显差异。模型组与正常组心系数、肝系数、肺系数无差异，As 2O 3高剂量组与正常组相
比，心系数、肝系数、肺系数与正常组之间差异显著(P <0.05)，但As 2O 3低剂量组脾脏系数显著低于正常组(P <0.05)。
正常大鼠骨髓增生极度活跃，巨核细胞、粒细胞、淋巴细胞、红细胞无形态学改变。大鼠经过60Go照射后，骨髓广泛变性，巨核细胞、粒细胞、淋巴细胞、红细胞溶解，核染色质、胞膜不清晰，细胞形态发生改变，细胞增生极度活跃，大量空泡变性，出现许多网状纤维。砷高剂量组、阳起石组骨髓形态学均提示有大量部分空泡变性，与模型组相比有所改善，但与正常组相比较亦有所差距。各药物实验组中以砷低、中剂量组骨髓相恢复较好。 4 结论
4.1 所测阳起石、黄连、牡蛎、龙骨药材中，砷含量较高的分别为188mg/kg、115mg/kg、22mg/kg、41mg/kg；原药材及CYB 中的砷主要以三价形式存在。
4.2
5.0Gy 60Co照射可成功复制大鼠不育症以及放射性骨髓抑制模型。
4.3 治疗剂量的CYB 可以提高模型大鼠精子数量、存活率；降低畸形率，提高模型大鼠体内T 水平，而对模型大鼠雌激素水平无明显提高。CYB 原药材中含砷高的阳起石不能提高模型大鼠精子数量与激素水平，提示CYB 对不育症大鼠的治疗作用可能不依赖于其中的砷含量。
4.4
5.0Gy 60
Co照射对大鼠体重增长无明显影响，高剂量As 2O 3可使发育期大鼠
体重增加加快。
4.5 模型组及As 2O 3高剂量组肾上腺系数较正常组显著提高；高剂量As 2O 3能显著增高大鼠心、肝、肺系数。
4.6 中、小剂量As
2O
3
能使电离辐射后损伤的大鼠胸骨骨髓相得以有效恢复。
4.7小剂量的As
2O
3
被大鼠摄取后，可有其代谢机制排出体外，并不造成蓄积。
但随着染砷剂量的增加，大鼠各脏器砷蓄积加快，砷含量增加极为显著。各组织中的砷分布并不均匀，在皮毛、肝脏、脾脏、肺、肾脏中含量较高。
关键词：中药；砷；形态；原子荧光法；男性不育；药效学；电离辐射；
育宝胶囊
Biological dose-effect relationship and Speciation analysis
and contents of arsenic in CYB
Candidate for master: Tu Jianbo
Supervisor:Wang Siwang(Professor)
Instructor:Xie Yanhua(vice-professor)
Gao Shuangbin(vice-professor)
Institute of Medria Medical，School of pharmacy，Fourth Military Medical
University， Xi’an 710032，China
Abstract
Arsenic is an element which is widespread distributed in the natural world, its Clarke is 5×10-4 and cosmic abundance is 4.0. In addition to some natural arsenic, there has been about 150 kinds of arsenious mineral. It is reported that some Traditional Chinese Medcine, like arsenolite ore, realgar, arsenic trisulfide, contains arsenic, and also some frequently used Traditional Chinese Medcine contains arsenic. The biological effect of arsenic correlates with its dosage and speciation. For example, the half lethal dose (LD50) to mouse of arsenic trioxide is 20mg/kg, and that of dimethylarsenic is 700-2600 mg/kg, that of arsensugar is more than 8000mg/kg.Chinese crude drug is widespread, and its place of production, collection, processing drugs affect arsenic’s content. It is very important to test the content of arsenic to insure its safety and standard.
Capsule of YUBAO, which is triturated by our institution, has been used in Xijing Hospital of The Fourth Military Medical University. It is convenient to use and its curative effect is reliable with little side effect. But its arsenic content was
tested high in lab frequently. So in this study，we will investigate arsenic content and formation in defferent kinds of TCM and Chinese formulated products. It is very important to investigate the effect of arsenic’s biological dose-effect relationship on genital or hematopoietic system.
Purpose
To study the possible mechanism of action of CYB to treat male infertility and investigate the arsenic’s dose-effect relationship between genital system and hematopoietic system by test the arsenic content of the group.
Method
1.To analyse arsenic and its speciations in CYB.
1.1 Physical and chemical identification and preparation technology of CYB: Physical and chemical identified for the TCM to ensure its quality and amplified according to modo praescripto.
1.2 Arsenic content and speciation in CYB and its active compound: Use AFS to analyse arsenic content in CYB. The high arsenic content substances are been Choosed and analysed the arsenic speciations.
1.3 Uncertainty study for the arsenic content TCM: To discuss the uncertainty influence factors through arsenic content alalyse progress by AFS by use of direct cause and effect graph to find out the main influencing factors.
2. Method of experimental rat model mockup
Rats were exposed in Co60, than we find out the suitable expose dose for male rats’ reproduction functional disturbance and hematopoietic system inhibition.After irradiation 3 months, the number of spermatozoa, abnormity rate, persistence rate and self-recovery phase were observed.
3. The biological dose-effect relationship of arrhenic
3.1 The effect of YBC and different dosage As2O3 for rats’ genital and hematopoietic system: The rats were exposed in Co60 and the model was build. The rats were divided in to different groups according to different dose of YBC (0.2、0.15 、0.1 g/mL),different dose of As2O3 （0.15、0.3、0.75mg/mL）and model group, actinolitum group,control group.Different groups were treated differently.Three weeks later, blood were got and the rats were put to death humanitarianism. Dissect those animals and observe the index of the genital system. Compare the main organ coefficient and body weight growth factor, Bone marrow of sternum slides are common dyeing observed.
3.2 The arsenic content of arsenic administration team rats’ tissue: AFS is carried out to analyse arsenic content in the medication administration team’s main organ and tissue to find the imaginabale arsenic cumulative organ or target organ.
Results
1. Arsenic content and speciation in YBC and its active compound: The high arsenic content in Yubao in caused by coptis chinensis, actinolite, oyster, keel. It is mainly trivalence inorganic arsenic in YBC. We established the mathematic model via on the uncertainty study through arsenic analysis by AFS. Each constituent of the uncertainty were subdivision hypothesis, and each results were discussioned.
2.Screening the method of experimental rat model mockup:The differences of spermatozoa number, persistence, abnormity among each group which was exposed in 4.0Gy, 5.0Gyad to the normal group were significant（P<0.01）. The differences of spermatozoa number, persistence between groups which was
exposed in 4.0Gy, 5.0Gyad were significant（P<0.05）. There was no significant abnormity difference between the groups. None was lead to death throughout the progress by complication.
3.The biological dose-effect relationship of arrhenic:There were significant difference between the model group and normal group in spermatozoa number, persistence, abnormity (P<0.01),that is to say the rats model was stable and reliable. Compared with the model group, the CYB groups and low arsenic intaked group were higher in the number of spermatozoa(P<0.05).
Compared with the model group, the CYB groups and low As2O3 intaked group were higher in the number of spermatozoa(P<0.05),the Yubao groups and low As2O3 intaked group were lower in teratospermia rate (P<0.05). The LH,T, E level in the model groups were lower than that in normal group, there was significant difference in T and E level(P<0.05).Compared with the model group, the E level in As2O3 low-dose group and T were higher (P<0.05), and also the T level of YBC groups was higher, the media-dose YBC group was significant.
Compared with the normal group, there was significant difference in epididymis coefficient, testicle coefficient, no significance in spermary coefficient, prostate coefficient, cryptae odoriferae coefficient to the model group. Compared with the model group, testicle coefficient in As2O3 high dose group was lower, however, higher in Yubao low and media dose group(P<0.05).
There was no significant difference in body weight coefficient between the normal group and the model group, more higher in As2O3 high dose group, lower in actinolitum group. (P<0.05).There were significant difference adrenal coefficient between the normal group and model group, As2O3 high dose group
(P<0.05).No significance in thymus coefficient, spleen coefficient and kidney coefficient. No significance in cardiac coefficient, liver coefficient and pulmonary coefficient between model group and normal group. There was significance in cardiac coefficient, liver coefficient and pulmonary coefficient between As2O3 high dose group and normal group (P<0.05). Spleen coefficient in As2O3 low dose group was lower than that in normal group (P<0.05).
Bone marrow hyperplasia was active in normal rats, there was no change in form of bone marrow hyperplasia, granular cell, achroacyte.Being exposed in Go60 marrow apomorphosis widely,megalokaryocyte,giant plates,leukomonocyte, erythrolysis, bodies, cell membrane unsharpness,cell morphoge changed,Cellular proliferation to the utmost, vacuolar degeneration,much lattice fibers.There was vacuolar degeneration in arsenic high dose group, actinolitum group.It’s more than model group but also difference compared with normal group.Marrow aspect anastate better in low arsenic dose group and medium dose group,YBC intake group than that in other groups.
Conclusion
1. Those medical materials are rich of arsenic: coptidis rhizome: 188mg/kg; actinolitum: 115mg/kg；oyster: 22mg/kg；keel: 41mg/kg.The main arsenic speciation in TBC was As(Ⅲ).
2.The bone marrow depression and infertility model rats can be established by
use of 5.0GyCo60 exposion.
3.Therapeutic dose of CYB can improve the spermatozoa number, abnormity rate, persistence rate, and also enhance the T level postdose, while not in estrin level. Actinolitum in CYB could not enhance spermatozoa quantity and
hormone level, to hint that Yubao’s therapeutic action for sterility rats dose not depend on its arsenic content.
4.High dose As2O3 could accelerate the body weight gain of the anaplasis rats. Actinolitum could cause the deficiency of kidney-YANG deficiency medel.
5.Adrenal coefficient in model group and high dose As2O3 group was higher than that in normal group; High dose As2O3 could significantly enhance the rats’ cardia, liver pulmonary coefficient.
6.CYB, medium, low dose As2O3 can recover bone marrow of sternum condition of the ionising radiate impaired rats.
7.Low dose As2O3 was ingested by rats coud be discarded by via metabolic mechanism and not be cumulated. But with the increase of arsenical dose, it’s cumulated quickly, arsenic content quickly increase significantly. While it is uneven distributed in the tissue, High in fur, liver, spleen, lung, kidney.
Key words:TCM, arsenic, speciation, CYB, atomic fluorescence, sterility, ionising radiation, pharmacodynamics
前言和文献回顾
前言
作为一个中药研究工作者而言，砷是一个令人兴奋而又困惑的话题。砒霜系公众熟知的传统中药之一，早在《雷公炮炙论》中即有记载，其性辛、热、有毒，归肠、胃、肺经，功主平喘化痰、截疟、蚀疮祛腐，其后在《开宝本草》、《本草纲目》等多部古代医籍文献中均有论述。砒霜在临床上应用已有1500余年的历史，但因其峻烈大毒，应用一直较为谨慎。直至上世纪70年代初哈尔滨医科大学张亭栋教授对该药的临床应用进行挖掘整理，并在中医“以毒攻毒”理论的指导下大胆尝试，用于治疗癌症，经对1200多例各类白血病的治疗研究，发现其对急性早幼粒细胞白血病（APL）疗效独特，揭
开了对其系统研发的序幕，开辟了诱导细胞凋亡治疗肿瘤的新途径。As
2O
3也
成为中药新药研发成功的最著名的范例之一，《Science》及《Blood》等杂志均对其给予了高度评价，并引发了国际上一轮又一轮砷制剂的研究热潮。
但另一方面，由于近年来采煤及其它工业污染，使地下水中砷的浓度不断增加，砷污染已经成为一个潜在的公共卫生问题，继其之后，各动植物砷含量亦有所增高，中药材中的砷含量较高已成为中药规范化、标准化中的一个难点与重点。目前，中国药典对单味药及组方砷含量规定不多，2005版中国药典只对部分中药材有砷盐检查要求，如西瓜霜砷含量均不得高于百万分之十，冰片、石膏砷含量均不得高于百万分之二，阿胶砷含量均不得高于百万分之三，且该规定实际存在一定可信度与可执行度。因为国标目前推荐的方法只能测定总量，不能区分砷的形态，而不同形态的砷物理及化学性质截然不同，意即不同形态的砷具有不同的毒性和药效，且砷化物大部分是无毒或低毒的有机砷化合物，若仅以总砷含量高低对其进行评价未免有失偏驳。以中药中大家耳熟能详的砒霜和雄黄为例：砒霜主要成分为三氧化二砷（含
砷量75.76%），小白鼠口服半数死量20mg/kg；雄黄主要成分为硫化砷（含砷量70.09%），精制雄黄在25g/kg剂量对于小鼠仍然安全[3]。故药物中砷含量检测远不能单纯以“砷盐检测超标”简单的判定其对人体必然有害或有益。
医药研究者对此表示困惑，更毋论普通人群，民众莫不谈“砷”色变。例如近期某媒体报道：香港消费者委员会日前测试市面23款鱿鱼丝和鱼干后发现，所有鱿鱼丝都含有俗称砒霜的致癌重金属砷。其中8款鱿鱼丝的砷含量由每公斤12.7毫克至35.5毫克不等，大批名牌鱿鱼丝也被列入“黑名单”。根据专家分析，被检验出含砷的产品都是来自原材料，非零售商或制造商添加的。此类事件常可造成很多厂家因此倒闭，殊不知在所有的生物中都可以检出砷，而大部分鱼和其它海产品中的砷多是无毒的有机砷化合物。国内外由于此类事件引起的食品安全事件屡见不鲜。实际上，绝大多数产品并不一定超标，只是检测方法、分析方法存在问题罢了。由此可见区分砷元素不同形态的检测方法的研究的重要性与迫切性。
同样，研究中药中各种砷化物的代谢途径和作用机制对于研究砷化物的生物学量效关系至关重要，对于中药新药开发、中药砷含量的标准化、中药规范化具有举足轻重的意义。中国工程院院士、国家新药研究专家委员会委员姚新生认为，中药是个“暗箱”，当前中药活性成份研究困难，在于中药作用具有适应多样性的特点，难以建立适当的活性评价的模型，因此，必须通过相关学科的配合来尽快打开中药“暗箱”。以做到对中药防治疾病的知其然和知其所以然，搞清中药治疗疾病的作用靶点及与之相关的作用物质基础。我所科研人员通过多年的观察、研究、探索，希望籍由此找到中药材中砷的化学形态的分析方法，并对其在中药应用中的安全性做出评价，对其生物学量效关系进行探究。
文献回顾
砷属于类金属元素，原子序数33，原子量75，在615℃升华，熔点874℃，自然界存在的形式主要为三价和五价的有机或无机化合物。元素砷的毒性由大到小依次排列为氧化砷(+3价)、亚砷酸盐(无机)、砷酸盐、五价砷、砷化合物(有4个有机团，砷具阳电荷)。《本草纲目》曰：“砒，性猛如貔，故名。……皆欲救速效，不惜其毒也。”不仅砒石、雄黄、雌黄等中药材富含有砷，在一些常用中药如补骨脂、细辛、小蓟中砷含量也颇为丰富。冯江等[1]测定中药材微量元素含量发现， 大部分中药材中都含有一定量的砷，少部分中药材中的含量还较高。中药材中砷的含量主要决定于其生长环境和药材的种类[4]，若以我国食品中砷允许量标准(粮食中含砷量<0.7mg/kg)[5]衡量，许多中药材中的砷含量超标。就一般概念和传统观念而言，中药含有的砷对人体健康都是有害或有毒的，甚至具有致癌性。尽管如此，已有研究证实砷在生命活动过程中的基因表达、调控和DNA合成、以及对机体酶、生殖发育等方面存在大剂量负面作用和小剂量的正向调节作用，所以，砷剂对人体健康的利弊，关键在于生物学量效关系。然而，这方面的研究尚处起步阶段，特别是在中药含砷量及形态、规范含砷中药的检出限度和检测方法以及评判标准体系方面亟需研究。
砷是人体的一种正常成分，人体内含砷约14～21mg，居体内微量元素第十二位。砷可经消化道吸收，无机或有机的五价砷比三价砷更易被吸收。在山羊、微型猪和大鼠中，砷的缺乏可以导致生长减慢、生育力降低和围产期死亡率增高[6]。
实验结果显示，通过胃肠道吸收的无机砷与所摄入的砷化合物的水溶性有很好的相关性。无机砷酸盐和亚砷酸盐的水溶液中的砷有90%以上可被吸收，但是微溶于水的砷酸铅只有少量可被吸收[7]。进入人体的无机砷在肝脏
内还原发生甲基化，形成一甲胂酸(MMA)，再被进一步生成二甲胂酸(DMA)和三甲基砷酸（TMA）。砷的甲基化过程过去一直认为是砷的脱毒过程，但是近年的研究表明，砷的甲基化是砷作用机制的重要部分，砷的甲基化代谢产物可能具有细胞毒性。砷被吸收以后的转归取决于其存在形式，砷甜菜碱在体内不经过生物转化而从尿中排出。被吸收的砷经转化后主要通过尿液以无机砷、单甲基砷酸、二甲基砷酸和三甲基砷化合物的形式排出体外，排出体外的砷化物的比例与吸收的砷化物的种类密切相关[8]。
据报道砷化合物它可使癌细胞凋亡，如As
2O
3
和美拉胂醇(Melarsoprol)可
以诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡，从而有效的治疗急性粒细胞白血病
(APL)，其作用机理为As
2O
3
可抑制Bcl-2基因的表达水平[9]。Zheng等[10]认为大
部分人类癌均起源于上皮细胞．为探讨As
2O
3
对人类癌细胞的作用，他利用人
乳头瘤病毒16DNA无限增殖的人颈上皮细胞(HCE16／3细胞)株作为模型探讨
As
2O
3
对该细胞生长和基因表达的影响。培养细胞中As
2
O
3
浓度选用0、1、2和
5μmol/L，基因选择HPV16E7、c-myc、bax和p53，以β-actin作为内对照。暴
露砷2天后发现，As
2O
3
明显抑制HPV16E7基因的表达，相对于β-actin基因来
讲，C-myc、bax和p53基因的表达未发现改变。HPV16基因表达同HPV无限增殖
细胞的持续生长有关。As
2O
3
抑制了HCE16／3细胞的HPV16E7基因的表达，限制
了该细胞的增长，导致细胞发生凋亡。
大多数研究指出，三价砷和五价砷在Ames鼠伤寒沙门氏菌/微粒体酶试验中是阴性的[11，12]，未能诱发基因突变，砷化合物也不能诱发大肠杆菌色氨酸缺陷型菌株发生突变[13-15]。一般认为，砷化合物对人和哺乳动物细胞也没有致突变性，或仅有极弱的致突变作用。最近研究指出，三价和五价砷化合物对小鼠淋巴瘤细胞胸苷激酶基因均没有或仅有微弱的致突变作用[16，17]。Lee 等和Jan等最近证明， 亚砷酸钠强力促进紫外线（UV）照射和烷化剂对哺乳
药物微生物 一.药源微生物 药物的来源无外乎化学合成、生物合成，以及化学半合成。 微生物作为天然药物的资源已经完全显露出它的优势： 首先，微生物种类繁多，并且生活环境条件复杂多样，从而使得微生物在生理代谢上和遗传上存在着其他生物类群无法比拟的多多样性，其生活过程中产生的代谢产物也因此多种多样，为我们寻找药物提供了充分的可能性。 其次，微生物生长快速，并且可以进行大规模的工业化生产。 第三，微生物的遗传背景简单，易于利用各种遗传突变手段，改变微生物的代谢途径和调控方式，使得各种微量的药用成分能够大量合成，开发价廉物美的药物 第四，药物的疗效包括两个方面，一是治疗疾病的效果，二是药物的毒性大小。 1.微生物的多样性 细菌真菌藻类植物动物 2.药源微生物 （1）放射菌（链霉菌庆大霉素） （2）细菌 （3）真菌 二.药用微生物 药用微生物通常是指传统中药（汉方药）中的大型药用真菌，如灵芝、虫草等。 三.基因工程菌 基因工程微生物的应用主要要求是：一个适宜外源基因操作的载体系统和一个适宜外源基因活性产物表达的宿主系统。 第二节微生物药物 在医药用微生物中，最重要的是药源微生物。一方面是由于大量的药物来自微生物的天然产物，另一方面，即使是药用微生物，其有效部位也是各种微生物的代谢产物。 一．初级代谢和次级代谢
从表中可以得出次级代谢产物合成的特点：1.次级代谢产物多在细胞生长停止以后合成；2.初级代谢产物可直接或修饰后成为次级代谢产物合成的前体；3.合成反应常包括聚合作用和修饰；4.次级代谢产物分泌胞外；5.合成反应受初级代谢影响，但控制较为间接、松弛，主要受次级代谢自身系统控制。 次级代谢产物可能的合成理由是：1.食物储备；2.拮抗作用；3.次级代谢过程的重要性；4.诱导产生菌的细胞分化；5.诱导其他生物的细胞分化。 将次级代谢系统按如下方式进行分类（1）I 级反应 在这一步反应中，初级代谢物被转化为次级代谢合成的中间体。 这类反应根据其相关的初级代谢途径可以进一步划分，如氨基酸的合成和代谢、核苷酸的代谢、糖的转化或辅酶的合成。（2）II 级反应 这是一类缩合反应，相近的小分子单元被聚合成大分子（1）乙酸-丙二酸单元的缩合（2）氨基酸的缩合 二.次要组分 通常是主要产物的同系物，但是在有些列子中它们会呈现不同的结构类型。 三.微生物药物的定义 微生物药物通常来源于微生物的次级代谢产物，但并不是所有的微生物次级代谢产物都可以作为药物。 抗生素是指能够以低浓度仰制其他微生物生长的低分子量的微生物代谢物。 低分子量的微生物代谢物：指的是在大多数情况下抗生素的相对分子质量为几千以内，而酶以及其他复杂蛋白质分子尽管可能具有抗微生物活性，却不认为是抗生素。 人们所说的抗生素还包括由天然产物经化学修饰后的产物，即半合成抗生素 一个狭义的微生物药物的定义为：微生物在其生命活动过程中产生的能以及低浓度有选择地抑制或影响其他生物机能的低分子量的代谢物。 微生物药物的广义定义为：能以低浓度有选择的抑制或影响其他生物机能的微生物或微生物的代谢。 四.微生物药物的几个相关基本概念 （1）最小抑制浓度 （MIC ）这是药物活性测定常用的参数。 （2）抑制谱 药物能够选择性抑制/影响（即MIC 值较低）的生物或生物分子的范围。抗菌药物的抑制谱是指选择性抑制微生物的范围，抗肿瘤药物的抑制谱是指选择性抑制肿瘤细胞的范围等， （3）药物活性 是指药物对病原体作用的强弱 （4）毒性 药物对宿主生物细胞的抑制或杀死作用，通常半致死剂量（50LD ）表示。 （5）化疗指数 判断一种药物的安全性和有效性的综合指标。 ((= (C CI T 明显疗效的最低给药剂量） 化疗指数）治疗对象对药物不呈明显毒性反应的最大耐受剂量） （6）抑制曲线 药物对作用对象的抑制活性随时间变化的曲线，如抑菌曲线。 （7）药物敏感性 药物对其所作用的对象的抑制活性的高低。 （8）药物的相互作用 不同药物同时存在时，将会对各自的活性产生相互的影响。 五.微生物药物的命名 一般有以下几种命名药物的方法： （1） 根据产生药物的微生物分类命名 如青霉素 链霉素等。 （2） 根据结构类型的特征命名 常常是一族药物，如四环素类药物、氯霉素药物等。 （3） 根据地名或纪念意义而命名 如井冈霉素、土霉素、制霉菌素等。
废水中的三价砷可以用沉淀法进行回收，如硫酸厂中的废水，可用硫化钠在20～40℃下进行处理，所得的硫化砷用硫酸铜在70℃进行处理，冷却后进行分离，分出硫化铜后，再与硫酸铜溶液反应，并在＞70℃通入空气或氧，使砷成为五价，再分出硫化铜，溶液通入二氧化硫或硫酸厂的尾气，使五价砷还原成三价砷，并结晶，过滤干燥，即可回收三氧化二砷[1]。 在从蒽醌磺酸制备氨基蒽醌过程中，以前曾用过Na2HAsO4作为催化剂，其废水可以先在90℃加入过氧化氢，再通过一个阳离子交换树脂处理，出水中形成的H3AsO4可以用20%的NR3（R＝C8～16的烷基）在二甲苯中的溶液进行萃取，约有95%以上的砷被回收，其纯度可达97～98%，可以回用于氨基蒽酯的生产。而出水中砷的最终浓度可降至～L[2]。 沉淀及混凝沉降法 砷的主要处理方法有硫化物沉淀法, 或与多价重金属如三价铁等络合并与金属氢氧化物进行共沉定。第二种方法是水处理技术中常采用的传统混凝沉降法。此外也可采用活性炭和矾土吸附或离子交换。 铁盐法 铁盐法是处理含砷废水主要方法，由于砷（V）酸铁的溶解度极小，所以除直接用铁盐处理[3][4][5][6][7][8][9][10]外，也可在处理含砷废水时，先进行氧化处理，使废水中的三价砷先氧化成五价砷，使沉淀或混凝沉降法的效果更好。由于空气对三价砷的氧化速度很慢，所以常用氧化剂进行氧化，常用的氧化剂有氯，臭氧，过氧化氢，漂白粉,次氯酸钠[11][12][13]或高锰酸钾，也可以在亚硫酸钠存在下进行光催化氧化[14][15]。如在活性炭存在下也可以进行空气催化氧化，再与镁，铁，钙或锰等盐作用，脱砷能力可以提高10～30倍[16]。结合铁盐处理，出水中的砷含量可以降至～L[17]。铁盐法可以用在饮用水的净化中去[18]。 废水中的砷可以用石灰乳、铁盐沉淀、中和，再用PTFE膜过滤，废水中的
神经生物学教学大纲（供基础医学、临床医学等专业使用） 四川大学华西基础医学与法医学院 组织胚胎学与神经生物学教研室 2006年5月
神经生物学教学大纲 一、课程基本信息 课程名称：神经生物学（Neurobiology） 课程号：50125530 课程类别：临床医学基础课，基础医学专业课 学时：48 学分： 3 二、教材：《医学神经生物学纲要》关新民主编科学出版社2003年 三、主要参考资料：《医用神经生物学基础》蔡文琴主编西南师范大学出版社2001年 四、成绩评定：期终考试，100分 五、教学目的：神经生物学是一门研究神经系统的结构和功能的科学。大脑的结构和功能是 自然科学研究中最具有挑战性的课题。近代自然科学发展的趋势表明，21世纪的自然科学重心将在生命科学，而神经生物学和分子生物学将是21世纪生命科学研究中的两个最重要的领域，必将飞速发展。分子生物学的奠基人之一，诺贝尔奖获得者沃森宣称：“20世纪是基因的世纪，21世纪是脑的世纪。” 在医学这个大的学科内，神经生物学是一门在各个水平，研究人体神经系统的结构、功能、发生、发育、衰老、遗传等规律，以及疾病状态下神经系统的变化过程和机制的科学。它涉及神经解剖学、神经生理学、发育神经生物学、分子神经生物学、神经药理学、神经内科学、神经外科学、精神病学等等。 神经生物学的内容非常丰富，研究进展很快，作为医学生不仅要全面掌握，还要及时了解新的研究进展。 本门课程是在学习了神经解剖学、神经组织学、发育神经生物学、神经生理学的基本内容之后，继续给学生介绍关于神经生物学更深入、更感兴趣、更新以及更接近临床实际的知识。 授课将不拘泥于教材，有的老师会结合自己的研究领域；有的以课题进展或综述的方式；有的介绍某一领域研究的历史和现状，特别是研究过程中偶然性和必然性的发现； 有的通过介绍实验方法或实验技术的方式；除了重大进展的意义，还会介绍研究中的挑战、困难和艰辛。会介绍不同的观点或学说，少讲定论性的知识。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/b63035497.html, 改性离子交换树脂除砷方面的应用 作者：张萍陈卫李晓晨高雁 来源：《中国科技纵横》2017年第10期 摘要：本文结合砷污染现状，对离子交换树脂在砷污染水处理中的研究进展进行了综 述，阐述了离子交换树脂，特别是无机改性离子交换树脂性质及在砷污染水处理中的研究应用现状，并针对目前研究现状中存在的问题了研究展望。 关键词：砷污染；无机改性离子交换树脂；水处理 中图分类号：TU911 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）10-0010-02 砷污染是指由砷或其化合物所引起的环境污染。我国是受砷中毒危害最为严重的国家之一。2013年下半年，瑞士和中国研究人员在瑞士公布的一项最新研究成果显示遭受砷污染的 饮用水正在危害2000万国人的健康[1]。因此，开发高效廉价的砷污染处理产品和技术成为砷污染治理的热点之一，具有很大的社会、经济和环境意义。 吸附法[2，3]是重金属水污染处理方法中应用最为广泛、最有前景的技术之一。吸附法对重金属有高效的去除能力，而且成本低廉，有较强的经济可行性。在一定条件下，吸附剂可以解吸再生、重复利用，减少二次污染。相比于其它吸附剂，树脂尤其是离子交换树脂的优点比较显著，比如比表面积巨大，机械强度高，吸附容量大，再生简单，成本低廉等。随着对树脂的广泛研究和推广应用及新型吸附材料的研究进展，不少学者尝试对树脂进行改性得到新型高效吸附剂处理水中的重金属（包括砷）污染。 本文主要对改性离子交换树脂对水中砷污染处理的研究进展进行较为系统的分析，并对存在问题的解决途径及今后的研究方向作为进一步展望。 1 离子交换树脂除砷方面的应用研究 离子交换树脂是一类带有功能基的网状结构的高分子化合物，其结构由三部分组成：不溶性的高分子三维空间网状骨架、连接在骨架上的功能基团和功能基团所带的相反电荷的可交换离子。近年来，很多实验室研究通过改变吸附条件和改善树脂结构来提高离子交换树脂的去除效果，很多研究已经达到商业化水平，被广泛应用于实际水处理中。 胡天觉[4]等合成制备了一种对As（Ⅲ）离子高效选择性吸附的螯合离子交换树脂，研究了该螯合树脂从含砷溶液中脱除砷的最佳条件.结果表明：该树脂吃饭含As（Ⅲ）5g/L的溶液脱砷率高于99.99%，脱砷溶液中砷含量完全达标。 Anirudhan[5]等制成了一种新型的阴离子交换剂CP-AE，通过实验发现，当As（V）的初始浓度为1mg/L时，阴离子交换剂对As（V）的最大去除率可达99.2%。Korngold[6]等研究了Purolite-A-505和Relite-490两种强碱性树脂对砷的去除效果，结果表明后者由于连接有乙基、丙基或其它更长的官能团，对H2AsO4-以及
第40卷第3期 Vol. 40 No. 3 2019青岛理工大学学报Journal of Qingdao University of Technology 水中碑形态分析研究进展位晨希，马继平* *，吴阁格，李爽收稿日期：2018-05-22 基金项目：国家自然科学基金资助项目(21547002) 作者简介:位晨希(1994-)女，河北石家庄人.硕士，研究方向为环境分析化学.E-mail ： 1786O776O31@https://www.doczj.com/doc/b63035497.html, .* 通信作者(Corresponding author ):马继平，女，博士，教授? E-mail ：majiping2012@163. com.(青岛理工大学环境与市政工程学院，青岛266033) 摘要:；是一种自然界中广泛存在的元素,；的毒性与其存在形态密切相关.总结了近年来；形态分析的研 究进展，对水样中；形态的分析方法和应用进行了综述.总结了水中不同形态；的分离方法、光谱分析方法、 液相色谱-光谱在线联用方法，以及对于不同形态痕量；的样品预处理技术.关键词:；;形态分析;样品预处理;水样 中图分类号：X132 文献标志码：A 文章编号：1673-4602(2019)03-0080-08 Advances in speciation analysis of arseni c i n water WEI Chen-xi , MA Ji-ping * , WU Gege , LI Shuang (School of Environmental & Municipal Engineering , Qingdao University of Technology, Qingdao 266033, China)Abstract : Arsenic is an element widely found in nature. The toxicity of arsenic is closely re -lated to its form in existence. This paper summarizes the research progress of arsenic specia- tonanalys3s3nrecentyears , andrev3ewstheanalytcalmethodsandapplcatonsofarsen3c speciation in water samples. In this paper , we also summarize the separation methods and spectral analysis methods of different speciation of arsenic in water. For trace arsenic specia- tion0n0lysis #liquidchrom0togr0phycoupledwithspectroscopyon-line0ndthes0mplepre- treatment techniques are also summarized.Key words : arsenic ； speciation analysis ； sample pretreatment ； water samples 碑是一种广泛分布于自然环境中的元素,在土壤、水、矿物、植物甚至人体中都能检测出微量的；.由 于采矿和冶炼等工业活动，未经处理排放出的废渣、废水成为水源地；污染的主要来源.而通过食物链对 碑的富集吸收，或直接饮用；污染的饮用水，成为人体面临；的毒害作用的主要途径?慢性接触饮用水中 低浓度的生物可利用；会导致严重的人类健康问题，包括皮肤损伤、糖尿病和心血管疾病以及肺癌和肝癌 等癌症?国际癌症研究机构和美国环保局已将；指定为“已知”人类致癌物的一组. 碑污染饮用水是全球关注的健康问题，受影响人数超过1亿,其中仅孟加拉国高达5700万人.在一些 受污染地区，地下水中；的浓度达到几百,g/L,地下水受污染的地区有数百万人饮用；浓度大于50 mg/ L 的水，而未受污染的地下水中；的含量通常在1?2 mg/L 之间孔世界卫生组织(WHO )对饮用水中； 的限值浓度已从50 ,g/L 降至10 ,g/L(每日摄入量)'(.美国的现行标准是10 ,g/L,欧盟的目标也是10 ,g/L , —些欧洲其他国家的饮用水的；浓度甚至低于10 ,g/L '(.
『技术分析』- 形态分析的经典资料 形态分析是技术分析领域中比较简明实用的分析方法，把汇价走势中若干典型的形态作出归纳，并命名之。被分为两大类：反转形态和中继形态。我们先说说反转形态。反转形态表示趋势有重要的反转现象，整理形态则表示市场正逢盘整，也许在修正短线的超卖或超买之后，仍往原来的趋势前进。 反转形态：头肩型三重顶与底，双重顶与底，V型顶与底，圆型还有三角形,菱形,楔形,矩形整理形态：三角型对称三角型上升三角型下降三角型扩散三角形菱型旗型楔型矩型 第一部分反转形态
反转形态-----1、头肩型 绝大多数情况下，当一个价格走势处于反转过程中，不论是由涨至跌还是由跌至涨，图表上都会呈现一个典型的“区域”或“形态”，这就被称为反转形态。一个大的反转形态会带来一轮幅度大的运动，而一个小的反转形态就伴随一轮小的运动。 反转形态的特性 1、反转形态的形成在于先有一个主要趋势的存在 2、趋势即将反转的第一个信号通常也表示重要趋势线的突破 3、图形愈大，价格移动愈大 4、顶部形态形成的时间较底部图形短，且震荡较大 5、底部形态的价格幅度较小，形成的时间则较长。 头肩顶／底是最为人熟知而又最可靠的主要反转形态，其它的反转形态大都仅是头肩型的变化形态。形成的时候，通常在最强烈的上涨／下降趋势中形成左肩，小幅回调后再次上行／下降形成头部，再次回调（幅度可能略大些）后的上行／下降，形成右肩。两次回调，通常为简单的ｚｉｇｚａｇ形态（该形态，常常反映了市场急于完成回调）。 头肩顶/底形态在实际中，并不都是很完整的，也不一定很标准。然而，在形成的时候，成交量/动量都相应地表现出某种共同的特征。即：在左肩形成时，由于通常伴随在在最强烈的上涨／下降趋势中（第三浪特征）形成，动量最大，市场交投活跃，充斥着大量的各种利好传言，动量/成交量达到最大高峰状态。头部形成时，尽管各种利好消息仍然不断出现，汇价也随之不断w创出新高，然而此时，动量/成交量出现萎缩，递减的现象。这是见利好出货的阶段，对后市转向悲观的投资者开始逐步抛出/买进（下跌中，头肩底），出现了头部。然而，仍然有部分投资者出于对原有趋势继续维持的乐观状态，继续逢低买入/逢高卖出（下跌中，头肩底），但是动量明显下降，交投量不再活跃，趋于衰竭，于是形成了右肩。鉴于维持原有运行趋势的动能衰竭，再次朝向与原有的运行方向，不同的运行，势不可免。对原有趋势继续维持乐观的，对此看作是回调。然而，一旦颈线位的跌破，恐惧心理聚起，抛盘如潮，虽然，随后出现一次反抽，但是回抽通常无法越过颈线价位，无力回天，通常成为市场大跌前的最后一次出货机会。 判别： 利用各种时间框架的图表，可以直观看出大小头肩顶／底的外围形态。然而，缺乏具体成交量数据，其内在的特征，可利用布林带辅助判别。头肩顶／底形态中，汇价和布林带间对应位置的变化关系，可以推测出市场在这一方向上的动能逐步衰弱的过程。一般说来，鉴于形成过程中的能量特征，左肩会越出布林带得上轨（上涨中，头肩顶）／下轨（下跌中，头肩底），而头部也会触及到布林带得上轨，然而，右肩，通常仅仅触及／越过布林带的中轨。同时，关注每次回落时显示不同方向上的ｋ线数量的变化，也是对判断动量递减是否，一个很有用的信息之一。比如：上涨时，每次回落的阴线逐渐增多，本身，就说明了，空方的力量在增强。 几项注意事项 （１）头部与双肩不成比例者，不应视之头肩顶（底），不应套用头肩顶（底）的操作策略。 （２）理论上，头肩顶的左肩成交量最大，头部次之，右肩最少。但并非所有的情形都如此。 （３）突破颈线是确认头肩顶（底）的重要条件 （４）头肩顶（底）形态形成之后，股价突破颈线，成交量会在随后的一个短时间内出现低谷，这是市场犹豫的表现，之后，通常会有一个反抽的过程，使得价格回试颈线水平。 失败的头肩形态 一旦突破颈线，完成头肩形态后，便不应再度穿过颈线。以顶部形态来说，价格向下突破颈线后，如果再度回到颈线上，便是个严重的警告，表示最初的突破可能是个恶兆。这样的头肩型就是失几的头肩型。
生物工程专业神经生物学实验指导 实验内容一：大鼠脑立体定位及帕金森病（PD）模型制作 目的要求：掌握大鼠脑立体定位仪的设计原理、基本结构、用途和正确使用；PD 模型制作要点和注意事项。 实验分组：4人/组 实验课时：5学时 实验用动物、器械和药品： 健康成年SD大鼠，体重200-250g，雌雄不拘；脑立体定位仪、水平仪、电吹风；麻醉药（0.4%戊巴比妥钠：戊巴比妥钠0.4 g，生理盐水100 ml）；碘酒、酒精、生理盐水、蒸馏水；5或10ul微量注射器；手术器械，如手术刀、镊、止血钳等；大鼠脑立体定位图谱；6-羟基多巴胺（6-OHDA）溶液（按3ug/ul 配制，加Vc，即6-OHDA溶液1ml：将6-OHDA3mg，VitC0.2mg，溶于灭菌生理盐水，在1.5ml离心管中定容至1ml，分装后-20℃保存）。实验操作及注意点： 1．根据老师的讲解和指导，认识脑立体定位仪主要部件，即主框、电极移动架及动物头部固定装置（即固定上颌的结构和耳杆与耳杆固定柱）及用途。 2．脑立体定位仪的调试:摆稳定位仪，用水平仪测水平。检验电极移动架上各个轴向滑尺是否保持互相垂直，微量注射器针尖是否光滑垂直。检查定 位仪各衔接部位的螺丝有无松动。检查头部固定装置两侧是否对称。检查 耳杆使两耳杆尖端相对,以此判定耳杆固定的准确程度。然后,使两耳杆尖 端相对间隔1～2 mm ,前后移动固定有注射器的注射装置纵轴,使注射器的 针体向后移时,恰好通过两耳杆尖端之间的1～2 mm 间隙; 向前移时,恰 好与切牙固定架的正中刻线在一条直线上。 3．大鼠称重并麻醉（腹腔注射戊巴比妥钠，40mg/kg），动物麻醉不可过深或过浅，注意呼吸情况。抓取大鼠时要轻柔，防止抓咬伤。 4．鼠颅的固定:将麻醉大鼠置于脑立体定位仪上，鼠颅依靠两耳杆及切牙钩三点固定。在向外耳道内插入耳杆时,鼠眼球向外凸出。一旦进入鼓膜环 沟内,穿破鼓膜,则会发出轻微的“嘭”声,同时出现眨眼反射,眼球不再凸出,
微生物药物研究进展与发展趋势 摘要：微生物药物作为广泛使用的临床药物具有重要的地位。尤其是在抗感染、抗肿瘤、降血脂和抗器官移植排异方面具有不可替代的作用。自1929年青霉素被发现后20世纪4年代以来，已有上百种抗生素先后用于临床的细菌感染治疗、肿瘤化疗、降血脂以及器官移植康排异反应。总体上，由于微生物药物特别是抗生素的广泛应用使人类的寿命延长了15年。广义的微生物药物即由微生物发酵获得的药物现约占全球医药生产总值的50%。 1功能基因组学研究为创新微生物药物提供更多的药物靶标。 随着人类基因组学和微生物学要就的深入，近期将有5000个功能基因或蛋白被认为是潜在的药物靶标，是20世纪末已经确定的药物靶点的10倍以上，这为微生物新药的筛选与发展奠定了更广阔的基础。具不完全统计，截止2009年，世界范围内已有2500种以上的病毒，582种细菌，100多种的真菌的基因组完成测序。与此同时，蛋白基因组学研究正在兴起，2002-2005年我国科学家领衔的“人类肝脏蛋白组学计划”，鉴定和发现了一大批有重要功能的蛋白质，构建了大规模的蛋白中数据库，系统测定了一部分人类重大疾病相关的蛋白质结构，全面系统的解析出108个独立蛋白质三维结构，发现了一批潜在的药物作用靶标，制备了国际上最大规模的蛋白质单克隆抗体库。 作为病原微生物来讲，功能基因组研究成果为微生物必须基因和治病基因的确定提供了前提。对于一般的病毒来讲，其整个基因组可
以编码10个左右的蛋白基因，其中有4~6个功能蛋白可作为药物靶标，如再加上特定的病毒的细胞辅助蛋白，可有10个以上的药物靶标。真菌的基因组在2、5-81、5mb，作为真核生物，其许多蛋白质是保守的，在生物的进化当中被保留下来，另一些蛋白在进化中被遗弃了，并代之以新的蛋白基因。通过与人类功能基因的比较，找出真菌必需的和与人类有差异的基因与蛋白，对医疗上重要真菌基因组的分析有可能抗真菌药物靶标。 2高通量药物筛选在微生物药物早期发现的应用，加速了苗头化合物的获得。 从土壤微生物中筛选抗生素，是现代规模化药物筛选的开端，随着高通量技术的发展，利用微生物发酵产物粗提品的药物筛选，由于重复性较差，活性成分纯化的难度大，限制了创新微生物药物筛选的速度和成功率，也是大的药物公司更倾向于利用组合化学制备的大规模化合物库的高通量药物筛选。虽然筛选效率大大提高，但得势不得利，其获得新的化学实体的数量并没有显著提高，而且随着新药标准的提高，新的化学实体反而成下降趋势。因此，天然药物作为创新药物的筛选资源再度受到重视。而微生物次级代谢产物的相对于动植物次级代谢产物来讲，具有更易开发利用，不不破坏生态环境，可通过发酵大量获得和易于采用生物技术等优点。高通量微生物药物筛选模型已达150种，年筛选量已由“十五”期间的20万样次，发展到“十一五”期间的100万样次。就微生物药物的筛选规模和水平来讲，我国的创新微生物药物筛选已达到国际先进水平。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 国内外除砷技术研究现状 国内外除砷技术研究现状康雅，李涛，高红涛 (郑州市自来水总公司,河南郑州 450007) 摘要： 本文介绍了砷对人体的危害，饮用水去除砷的重要性，着重介绍了目前国内外应对饮用水砷超标问题的策略以及常用除砷技术及其优缺点，最后展望了除砷技术今后的发展趋势。 关键词： 饮用水；除砷； MCL 标准；零处理策略根据联合国世界卫生署的报道，自 1990 年起，全世界总人口净增了六亿，而人们赖以生存的水资源却日益枯竭。 水资源的枯竭大部分的原因直接来自水的资源污染，这引起全世界的高度关注。 目前，全世界 43% 的人口其饮用水没有达到足够的卫生标准，而有 22 %的人口其饮用水的情况非常糟糕[1]。 随着人口的增加和用水量的增加，地表水的供应已常常满足不了需要。 人们不得不转向地下，寻找地下水资源。 然而地下水的过度开发，又引起一系列新的问题。 P． Bagla 在《科学》期刊中披露[2]，印度和孟加拉国由于地下水的污染，产生了种种新的疾病，严重地威协人类的健康。 在孟加拉湾三角州地区，大约 3600 万的居民喝了被砷污染的 1 / 10
水而导致中毒。 最新一期美国《化学与工程新闻》[3]，又专门报道了孟加拉国砷污染的严重情况，并且有科学家义务前往该地，进行调查研究。 世界各地不断有关于饮用被砷污染的水而导致中毒的报道。 这其中有亚洲的印度、孟加拉国、越南、泰国、中国的台湾、新疆、陕西、内蒙古，南美的阿根挺、智利、巴西、墨西哥，欧洲的德国、西班牙、英国，以及北美的加拿大和美国。 砷是一种有毒元素，其化合物有三价和五价两种，三价砷的毒性更大。 五价砷对大鼠、小鼠径口半数致死量为 100mg/kg，三价则为10mg/kg，相差 10 倍。 天然地下水和地表水都可能含有砷，除来源于地壳外，砷污染也来自农药厂、玻璃厂和矿山排水。 地下水含砷量高于地表水，砷可通过呼吸道、食物或皮肤接触进入人体，在肝肾、骨胳、毛发等器官或组织内蓄积，破坏消化系统和神经系统，从而具有致癌作用[4] [5]。 欧洲、美国、日本等西方国家实行饮用水的最高允许含砷质量浓度 10 g/L 的标准，美国环境保护协会（EPA）规定： 2006 年 1 月 23 日，美国所有地区均强制实行饮用水的最高允许含砷质量浓度 10 g/L 的标准[6]。 我国目前实行的饮用水最高允许含砷质量浓度 50 g/L 的标准，随着经济实力的不断增强和全民健康意识的普遍提高，最近建设部
神经生物学实验指导书 实验一 脑内重要神经核团和神经生物学研究方法简介 Methods for neuroscience research and nuclei in brain 1.实验目的 理解神经核团的概念，理解重要的神经核团；掌握脑立体定位图谱的使用方法；了解神经生物学研究的常用方法。 2.实验器材、试剂及实验材料 手术刀、毛剪、注射器， 1%戊巴比妥钠(Pentobarbital Sodium)、依文氏蓝(Evans Blue)， 大鼠。 3.实验步骤 3.1脑的大致结构和重要神经核团 脑膜至外由内分别有：硬脑膜、蛛网膜、软脑膜，其下是大脑皮层，边缘系统等结构。重要的核团（神经内分泌相关的丘脑下部核团）有：PVN（室周核）、PeN （室旁核）、SON（视上核）、ME（正中隆起）、Hippocampus（海马）等。下表给出几个重要核团的大致范围，值得注意的是：核团在不同截面上的位置和形状是不同的，因此具体位置应查阅图谱。 神经核团距离前囟（mm）中心线两侧（mm）距脑背侧（mm） PVN（室周核）-1.0~-4.2 0.0~0.8 5.0~5.5 PeN（室旁核）0.0~-3.2 0.0~0.5 6.5~9.5 SON（视上核）0.0~-1.8 1.0~2.3 8.5~8.8 ME（正中隆起）-2.4~-3.4 0.0~0.5 9.5~10.0 Hippocampus（海马）-1.8~-6.2 0.5~6.3 3.2~8.0 3.2实验内容 a)戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠（40mg/kg）； b)在颅骨前囟后3-5mm处打孔； c)用微量注射器吸入3μl依文氏蓝，注入大鼠背侧三脑室。 d)大鼠断头，除去颅骨，观察脑的结构。 George Paxinos and Charles Watson，The Rat Brain in Stereofaxic coordinates，Academic press，1986 4.江湾Ⅰ型脑定位仪的使用 6.1脑立体定位仪的原理 a)脑立体定位仪分为两大类：直线式和赤道式。
微生物发酵中药的相关调查 中药发酵制药技术是在继承中药炮制学发酵法的基础上,吸取了微生态学研究成果,结合现代生物工程的发酵技术而形成的高科技中药制药新技术,是从中药(天然 药物) 制药方面寻找药物的新疗效。传统的中药发酵多是在天然的条件下进行的, 而现在的中药发酵制药技术是在充分吸收了近代微生态学、生物工程学的研究成果 而逐渐形成的。其先进发酵工艺特点是:以优选的有益菌群中的一种或几种、一株 或几株益生菌作为菌种,加入中药提取液中,再按照现代发酵工艺制成产品,它是一 种含有中药活性成分、菌体及其代谢产物的全组分发酵液的新型中药发酵加工制剂。 一、微生物发酵中药的应用历史 早在千余年前,我国已开始用发酵方法制药,直到现在临床仍在应用的发酵(制品) 中药有六神曲、半夏曲、淡豆豉、豆黄等,其工艺均为固体发酵。 1、微生物发酵中药中所应用到的很多微生物是药用真菌或者含有真菌的混合菌群，其中药用真菌很多本身作为中药来应用。因此一定意义上讲，中药与微生物，特别 是与一些药用真菌具有密切的联系。 早在东汉年间《神龙本草经》中，就有灵芝、茯苓、猪苓、雷丸等药用真菌分 别列项论述，这些药物至今沿用不衰。 2、微生物发酵中药应用历史悠久，也是传统中药加工炮制的重要方法之一，一般 主要是起到中药复合炮制的作用。而且很多发酵之后的药物在临床应用上取得了较 好效果。 微生物发酵中药在中医药应用中得到了很大的体现。如片仔癀的主要成分是三 七的微生物发酵物；神曲由面粉、赤小豆、苦杏仁、鲜青蒿、鲜苍耳、鲜辣蓼按一 定比例混匀后经发酵而成的曲剂。 3、某些传统的微生物制剂一直使用至今，其中以不同中药作为辅料，采用微生物 处理后自身成为发酵物组成的一部分，如半夏炮制，神曲制备等。同时随着历史的 发展，微生物发酵中药的应用也在不断变化。 半夏在整个炮制过程中使用到了一些中药，最终形成具有一定功效的以半夏为 主要组成部分的中药炮制品。半夏至汉代始用汤洗去毒，即为炮制品。南北朝时增 加生姜制、热汤洗、白芥子末制、头醋制等炮制品。唐代增加姜汁制，宋代增加麸炒、热洒炒、酸浆浸、米醋炒浸、生姜甘草桑白皮制、猪苓制、白矾制、萝卜制、 姜矾牙皂制和半夏曲。金之时期，增加米泔浸、香油炒、菜油拌炒。明代增加盐水洗、面炒醋制、杏仁炒。清代增加巴豆制、活生姜制、猪胆汁炒、皂荚白矾姜汁竹 沥制，有仙半夏和法半夏。由此可见，半夏的炮制方法繁多，而且种类各异，如仙 半夏、半夏曲等，已经成为含半夏的一个复方 二、微生物发酵中药的研究现状 中药发酵研究开始于80 年代,但仅是对真菌类自身发酵的研究,如灵芝菌丝体、冬虫夏草菌丝体、槐耳发酵等,大都是单一发酵。虽有报道加入中药,但也仅是将中 药当做菌丝体发酵的菌质,同时研究发现,含有中药的菌质对原发酵物的功效有影响,只是未见深入研究。目前,已有学者呼吁中药发酵制药可按新药审批办法规定开发新药。同时也开展了另一项研究,即生物转化,我们认为它与中药发酵是密不可分的 1、利用中药为培养基的组成部分，构建药性菌质，比较发酵前后中药相关成分的
砷的形态分析技术 摘要:砷的毒性与其形态有着直接的关系，对砷的形态的进行分析十分必要。本文阐述对不同含砷的环境样品中的形态，包括砷的分离技术与检测技术以及其联用技术。同时，对砷的形态分析技术的发展进行了展望。 关键词：砷，形态分析，联用技术 0 引言 砷是自然界中常见的有毒致癌性元素之一，其原子序数为33。砷的生物毒性不仅与其含量有关，更大程度上还与其存在形态有关。不同形态的砷化合物性质往往不同，毒性差异很大。因此在评价环境、食品安全时只检测总砷量而不探明其形态是不科学的，砷形态分析是现代生命分析化学的一个重要研究课题。 常见的砷化合物有：亚砷酸(As(Ⅲ) )、砷酸( As(Ⅴ) )、一甲基砷酸( MMA )、二甲基砷酸(DMA)、砷甜菜碱和砷胆碱，此外还有砷糖、砷酯类化合物等。其中，无机砷的毒性大于有机砷，砷与有机基团结合越多，毒性越小。它们的毒性排序为：As(Ⅲ) > As(Ⅴ) > MMA > DMA，而砷胆碱和砷甜菜碱普遍认为是无毒的。 由于砷的毒性、致癌性、迁移性质和生物效应均取决于它的化学形态，并且各砷形态随着所处环境的不同处于动态互变之中，所以测定总砷含量无法准确表示出砷的暴露水平及砷对环境、生态的影响。因此，对砷的各种存在形态分别进行分析测定十分必要。所谓砷的形态分析是指分离、富集、鉴定和测定各种砷化合物的分析方法。对环境样品中的砷含量进行细致的分析，不同化合价态和化合物质进行检测，计量出其在样品中的所占比例。 1 样品前处理技术 环境样品中有多种不同形态的砷化合物, 由于基体复杂、含量低，一般的检测器难以同时进行识别，所以需要在样品分析之前对不同形态砷化合物进行有效的分离。目前对于砷的分离方法主要有氢化物发生法(HG)、色谱法、毛细管电泳法(CE)、溶剂萃取法、离子交换法等。 1.1 氢化物发生法(HG) 氢化物发生法是利用As(Ⅲ)容易生成易挥发的AsH3来测定As(Ⅲ)的含量，它可以大大降低基体的背景干扰，该法在砷形态分离中应用较多。近年来，常将
股市价格形态 形态名称形态 定义 标准图形心理解释常见位置 头肩顶反转 A.强劲上涨,成交量巨大,回落时成交量减少。 B.高于A点,底部必须低于左肩顶部。 C.低于B点,成交量减少。 在最终放弃并屈服之前 头肩底反转 1.头肩底突破时必须是高成交量,否则无效。 2.头肩底比头肩顶更圆。 3.头肩底比头肩顶构筑需要更长时间。多重头肩反转 两肩+一头+两肩,两肩+两头+两肩, 复合肩+一头+复合肩,头肩+头肩+头肩圆顶反转是多重头肩顶的变种庞然大物的转身 圆底反转是多重头见底的变种 休眠底部反转 流通在外的股票数量相 对称三角持续、反转 1.一个三角至少有四个小趋势的反转 2.出现突起的第三点,需重新画第一点 和第三点的连线,包含第二点。疑虑、犹豫和摇摆不定
上升三角持续、反转 1.如果第三个底部太低,需要重新画线 。 有计划的出货 下降三角持续、反转 有计划的购买 矩形持续、反转 1.矩形上下边界可以偏离水平不太的幅度 2.看成矩形还是三角对分析结果无关紧要。 冲突 双顶 反转 1.真正的双顶和双底非常罕见。 2.双顶和双底往往进化成为矩形或三角 形等中继形态而非反转形态 3.顶部间隔三周或一个月以上双底 反转 三重顶/底反转 1.头肩顶的变形,但三个顶价位相差不能大于3%股价。 2.顶部相当宽,回落深而圆。 3.成交量逐渐衰竭。
扩散形态反转正统的扩散具有逐渐放大的三顶两底。亢奋长期牛市的末钻石反转活跃主要和中等趋 楔形反转两边同时上倾或下倾,逐渐衰弱的上升 通道。 逐渐衰弱中等趋势 单日反转反转 1.成交量极大的一天; 2.一开始上攻开始强烈; 3.后来反转下跌; 4.收盘价与昨收价差不多。 抛售高潮(出 反转被迫扔进水里 一般不发生在长钉(长影线 短期现象 逃逸日(长阳 短期现象牛市低开高走,熊市高开低走。 关键反转日短期现象上升趋势中开新高收昨低 旗形巩固形态直线运动后面,形态内成交量逐渐萎缩牛市后期,充三角旗形巩固形态直线运动后面,形态内成交量逐渐萎缩牛市后期,充 形态原则
砷和含砷废水 更新时间：09-1-5 13:59 砷在地壳中含量并不大，但是它在自然界中到处都有。砷在地壳中有时以游离状态存在，不过主要是以硫化物矿的形式存在如雌黄（As2S3）、雄黄（As2S2）和砷黄铁矿（FeAsS）。无论何种金属硫化物矿石中都含有一定量砷的硫化物。砷的硫化物矿自古以来被用作颜料和沙虫剂、灭鼠药。硫化合物具有强烈毒性，砷和它的可溶性化合物都有毒。砷作合金添加剂生产铅制弹丸、印刷合金、黄铜（冷凝器用）、蓄电池栅板、耐磨合金、高强结构钢及耐蚀钢等。黄铜中含有重量砷时可防止脱锌。高纯砷是制取化合物半导体砷化镓、砷化铟等的原料，也是半导体材料锗和硅的掺杂元素，这些材料广泛用作二极管、发光二极管、红外线发射器、激光器等。砷的化合物还用于制造农药、防腐剂、染料和医药等。用于制造硬质合金；黄铜中含有微量砷时可以防止脱锌；砷的化合物可用于杀虫及医疗。砷和它的可溶性化合物都有毒。 随着冶金和化工等行业发展以及贫矿的开发，砷伴随主要元素被开发出来，进入废水中的砷数量相当大。据1995年中国环境状况公报报道，95年砷排放量达到1084吨，比94年增长4.4%，1996年中国环境状况公报报道，96年砷排放量达到1132吨，比95年增长4.2%。含砷废水有酸性和碱性，当中一般也含有其它重金属离子。砷与铅等共同作用会使废水的毒性更大，国内外都曾发现废水中砷的中毒事件。 含砷废水中砷的存在形态受pH的影响很大，在中性条件下，可溶砷的数量达到最大，随着pH的升高或降低其溶解的数量都将降低。pH为5.0时，溶液中砷主要以无机砷的形态存在，当pH为6.5时，有机砷为其主要存在形态。但由于含砷废水的来源并不单一，其成分也是复杂多变的。 含砷废水的处理在六十年代就已得到世人的关注。如能回收利用则不仅可解决了砷对环境的污染问题，而且经济效益显著，节约资源。目前，比较系统的处理方法有化学沉淀法、物理法以及新兴的、最具发展前途的微生物法。 砷污染及砷污染的来源
利用在线稀释的方法消除LC-ICP-MS测试过程形态转化问题 —以尿液中砷形态分析为例 C. Derrick Quarles, Jr, * Patrick Sullivan, M. Paul Field, Scott Smith and Daniel R. Wiederin 摘要 尿液中砷形态分析能为临床和病理学诊断提供重要的支持信息。许多学者通过多种方式研究砷形态转化过程，并试图提升样品保存时间，但没有人将在线稀释作为砷形态分析中样品稳定的解决方案。本工作建立了在线稀释测定尿液中AsB，DMA，MMA，As III和As V 的方法。通过在线稀释标准储备液，建立标准曲线，获得了很好的线性相关性，检出限在ppt 级别。将样品在线稀释30、50、100倍，导致0.1到1.1s的保留时间变化。同时本工作还对比了人工处理样品和在线稀释方法对于As III回收率的影响，人工的处理样品由于As III转化为As V，在24内测定As III的回收率仅有61%，而在线稀释的方法As III回收率为101%，As III到As V的转化率降为1%。利用本方法测定了尿液标准物质NIST SRM 2669，对于五种砷形态测定值与文献参考值具有一致性。 关键词：LC-ICP-MS；PrepFAST；价态转化；在线稀释；砷形态分析；尿液分析 前言 痕量元素分析对于工业生产、医疗健康和科学研究具有重要意义。元素的总量信息固然重要，但不能提供样品里的元素形态信息。元素的化学形态直接影响了其生物活性和毒性，例如无机砷的毒性远大于有机砷，而有机汞的毒性远大于有机汞。 砷污染来源于地质过程、工业排放和矿山开采。在污染的饮用水或稻米中主要存在的是As III和As V，而这两种形态也是毒性最强的。另外，人体对于砷的摄入还来源于海鲜，海鲜中的砷主要是有机砷，包括一甲基砷（MMA），二甲基砷（MMA）和甜菜碱。有机砷被认为是低生物活性，因此毒性低于无机砷砷(As III (LD50 = 14 mg kg-1 ) or As V (LD50 = 20 mg kg-1 )。砷暴露下会对人类健康造成不利影响，比如导致呼吸疾病，肺癌和肾脏、肝脏损伤。砷通过尿液排出，因此检测人类尿液可以反映其2天内砷的摄入情况。 一般的形态分析是利用形态分离设备和元素检测器的联用来完成。常见的是液相色谱（LC）和电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）联用。在过去的几十年里已有大量的基于LC-ICP-MS进行形态分析的报道。大型的商业化实验室配备了专门的仪器进行形态分析，而一些小的实验室只有一两台ICP-MS用于所有测试的测试任务，LC系统需要经常与ICP-MS 系统进行联用和拆换，这些过程耗时费力，因此渴求一个可以同时胜任总量分析和形态分析两种任务的仪器设备。 形态在样品中的稳定性是形态分析中另一个关注的重点。我们希望目标形态在溶液中是最初的状态，不发生任何转化。样品的采集和处理过程是引起价态转化的主要影响因素，比如，改变温度，酸度或添加氧化剂都会使价态发生转变。离子交换色谱是进行砷形态的分析的首选方法，它可以根据不同的电荷数分离不同形态，同时除去可能造成干扰的氯离子。然而，大部分色谱柱的样品容量很小，样品只能以小体积载入或稀释至更低浓度。 本工作评价了注射泵驱动-阴离子交换色谱结合ICP-MS进行砷形态分析的方法。PrepFAST IC是一台可以同时实现形态分析和总量分析的先进的技术设备。通过柱子的重现性、方法的稳健性，精确度、准确度和检出限这几方面对该仪器的砷形态分析能力进行了评价。同时对比了人工稀释和在线稀释样品处理过程对于形态稳定性的影响。
实验一反射时的测定及反射弧的分析 [目的] 1．学习测定反射时的方法。 2．了解反射弧的组成。通过实验证明任何一个反射，只有当实现该反射的反射弧存在， 并保证其完整的情况下才能出现。 [原理] 机体在中枢神经系统参与之下，对刺激所发生的反应叫做反射；反射弧是反射的解剖学基础(反射弧一般包括感受器、传入神经、中枢、传出神经、效应器等五个部分)。 要引起反射，首要条件是反射弧必须完整。反射弧的任何一部分受到破坏，反射即不出现。 [实验动物] 蛙或蟾蜍 [器材及药品] 蛙类常用手术器械、支柱台、蛙嘴夹、蛙板、蛙腿夹、小烧杯、大烧杯、培养皿玻璃 (2个)、小滤纸片、棉花、秒表、纱布、0.5％及1％硫酸溶液、水。 [方法与步骤] 一、脊蟾蜍的反射 1．制备脊蛙（或脊蟾蜍）：利用毁髓针从枕骨大孔处捣毁脑，保留脊髓制备脊蛙，用蛙嘴夹夹住蛙的下颌，挂在支柱台上 2. 屈曲反射 正常反射活动的观察及反射时的测定：用培养皿盛0. 5％硫酸溶液，将蛙右后肢的最长趾浸入0.5%硫酸溶液中2～3mm ( 浸入时间最长不超过10s )，立即记下时间（以秒计算）。当出现屈腿反射时，则停止计时，此为屈腿反射时（即从浸入时起至后肢发生屈曲时所需要的时间）。立即用清水冲洗受刺激的皮肤，并用纱布擦干。重复三次，求出平均值作为右后肢最长趾的反射时。用同样方法测定左后肢最长趾的反射时。 3. 搔扒反射 用浸有1%硫酸的滤纸片刺激脊蟾蜍一侧胸腹部或背部皮肤，引起同侧或双侧后肢运动，扒掉滤纸片。二、反射弧 1、反射弧模式图
2、屈曲反射的反射弧 最长趾感受器→传入神经纤维→脊髓→传出神经纤维→下肢屈肌 3、搔扒反射的反射弧 腹部感受器→传入神经纤维→脊髓→传出神经纤维→下肢肌 三、反射弧完整才能发生反射 1、破坏感受器 手术剪自右后肢最长趾基部环切皮肤，然后再用手术镊剥净长趾上的皮肤。用硫酸刺激去皮的长趾，记录结果。 2、麻醉传入和传出神经纤维 沿右后肢的股二头肌沟剪开皮肤，分离出坐骨神经。在神经下穿细棉线后，在细棉条上滴几滴2％普鲁卡因溶液，每隔2min重复刺激 (记录加药时间)。当屈反射刚刚不能出现时(记录时间)，大约五分钟后，用浸有1%硫酸的滤纸片刺激脊蟾蜍一侧胸腹部皮肤，观察搔扒反射。然后15分钟后，再用滤纸片刺激胸腹部皮肤，观察搔扒反射。 3、破坏效应器 将蟾蜍一侧皮肤从根部环切，剥离后浸入含20%的甘油任氏液中，大约经过三十分钟后，该侧肢体不能发生搔扒反射 4. 破坏脊髓中枢 用细探针插入髓管内，上下抽动破坏中枢——脊髓，蛙四肢松弛。重复实验，记录结果。 四、小结 1、反射是机体通过神经系统对内外环境的刺激所发生的反应 2、反射弧是反射的结构基础，由感受器、传入神经纤维、传出神经纤维、效应器组成。 3、反射的完成依赖反射弧的完整性。 [讨论] 1. 说明屈腿反射的具体过程。 2. 以实验结果为根据，以严密的逻辑推理方式说明反射弧的几个组成部分。 [注意事项] 1、每次实验时，要使皮肤接触硫酸面积不变，以保持相同的刺激强度 刺激后要立即洗去硫酸，以免损伤皮肤。