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分子生物学与细胞生物学实验基本技术

分子生物学与细胞生物学实验基本技术1

实验一 组织块培养法

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一、目的

学习原代培养方法,从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。

二、概述

组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。可以采用剪切法,即将组织块剪切成小块后,接种于培养瓶,组织小块贴壁24h 或更长时间后,细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤,并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理,如预先涂以胶原薄层,以利于上皮样细胞等的生长。(本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例)

三、材料

(一) 仪器

1. 净化工作台

2. 恒温水浴箱

3. 冰箱(4℃、-20℃)

4. 倒置相差显微镜

5. 培养箱

(二) 玻璃器皿

1. 培养皿(Φ100mm

1. 培养皿(Φ100mm)

2. 吸管(弯头)

3. 烧杯(500ml 、200ml 、10ml )

4. 广口试剂瓶(500ml )

5. 玻璃瓶(250ml 、100ml )

6. 培养瓶

7. 废液缸

(三) 塑料器皿

1. 吸头

2. 枪头

3. 胶塞

4. EP 管

(四) 其他物品

1. 微量加样枪

2. 眼科组织剪(直尖、弯)

3. 眼科组织镊(直、弯)

4. 12.5cm 组织镊(无钩、1×2钩)

5. 25cm 敷料镊(无钩)

6. 止血钳(18cm 直纹式、12.5cm 直纹式、弯纹式)

7. 解剖剪

(五) 试剂

1. D-Hanks 液

2. 小牛血清

3. RPMI1640

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(共40页)

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