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分子生物学与细胞生物学实验基本技术

分子生物学与细胞生物学实验基本技术1

实验一组织块培养法

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一、目的

学习原代培养方法,从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。

二、概述

组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。可以采用剪切法,即将组织块剪切成小块后,接种于培养瓶,组织小块贴壁24h或更长时间后,细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤,并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理,如预先涂以胶原薄层,以利于上皮样细胞等的生长。(本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例)

三、材料

(一)仪器

1. 净化工作台

2. 恒温水浴箱

3. 冰箱(4℃、-20℃)

4. 倒置相差显微镜

5. 培养箱

(二)玻璃器皿

1. 培养皿(Φ100mm)

2. 吸管(弯头)

3. 烧杯(500ml、200ml、10ml)

4. 广口试剂瓶(500ml)

5. 玻璃瓶(250ml、100ml)

6. 培养瓶

7. 废液缸

(三)塑料器皿

1. 吸头

2. 枪头

3. 胶塞

4. EP管

(四)其他物品

1. 微量加样枪

2. 眼科组织剪(直尖、弯)

3. 眼科组织镊(直、弯)

4. 12.5cm组织镊(无钩、1×2钩)

5. 25cm敷料镊(无钩)

6. 止血钳(18cm直纹式、12.5cm直纹式、弯纹式)

7. 解剖剪

(五)试剂

1. D-Hanks液

2. 小牛血清

3. RPMI1640

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