当前位置:文档之家› 多酚氧化酶的测定方法

多酚氧化酶的测定方法

多酚氧化酶的测定方法
多酚氧化酶的测定方法

多酚氧化酶的测定方法

试剂:1、0.02mol/l焦儿茶酚溶液:称0.22克焦儿茶酚溶于100毫升蒸馏水中,现用现配。

2、0.1mol/l碘酸钾:0.3567克碘酸钾溶于蒸馏水,定容至100毫升。

3、0.005mol/l碘液:碘化钾2.5克溶于200毫升蒸馏水中,加冰醋酸1毫升,再加0.1mol/l碘酸钾12.5毫升,最后加蒸馏水定容至250毫升。

4、pH6.0磷酸缓冲液:87.7毫升A+12.3毫升B,用蒸馏水稀释至200毫升。

贮备液A:0.2mol/l磷酸二氢钠(27.6g NaH2PO4·H2O用蒸馏水配成1000ml)。

贮备液B:0.2mol/l磷酸氢二钠(53.65g Na2HPO4·7H2O或71.7g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水配成1000毫升)

5、其它:1%淀粉;10%偏磷酸;0.1%抗坏血酸(现用现配)

方法:

1、粗酶提取:称取新鲜样品2克,剪碎,置于研钵中,加入少量pH6.0磷酸缓冲液和少许石英砂,于冰浴中迅速研磨至匀浆,将全部材料用缓冲液冲洗入50毫升容量瓶中,并定容至刻度。在18~20度下每隔3分钟摇动1次,共5次,然后再静置15~20分钟,其上清液即为粗酶提取液(可倾入干洁的三角瓶中备用)。

2、活性测定:取干洁50毫升三角瓶6只(编号),按照下表向各

瓶中加入pH6.0磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/l 焦儿茶酚,并向③号瓶及⑥号瓶各加10%偏磷酸。然后将三角瓶置于18~20度水浴或放在室温下使内外温度达到平衡之后,每隔1分钟向各瓶中依次加入酶液2毫升,全部加完后保温3分钟,再按原顺序仍然间隔1分钟向①、②、④、⑤号各瓶加入偏磷酸1毫升(注意:加完2号瓶后应间隔2分钟再加4号瓶),用于终止酶的活性。最后向各瓶中加入1%淀粉溶液3滴作为指示剂,摇匀后用微量滴定管以0.005mol/l 碘液滴定,当溶液呈现淡蓝色为止,记录碘液消耗量。

3、结果计算:A 多酚=0.44{[⑥-(④+⑤)/2]-[③-(①+②)/2]}*V 1/V 2/W/t V 1:提取时酶液总量(毫升) V 2:测定时酶液用量(毫升) ①、②、③、④、⑤、⑥:测定时消耗碘液量(毫升) t :酶反应时间(分)

磷酸缓冲液

抗坏血酸 焦儿茶

酚 酶 液 偏磷酸 备 注

1 4 2

2

测坏血酸氧化

2 4 2 2 同上

3

4 2 2 1 空白测定 4 4 2 1 2 测多酚氧化酶

5

4

2

1

2

同上

试 剂

6 4 2 1 2 1 空白测定

测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法

测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法 周建芹 , 陈韶华 , 王剑文 ( 1. 苏州大学医学部药学院 , 江苏苏州215123; 2. 苏州大学医学部 实验中心 , 江苏苏州215123 ) 摘 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产 生的过氧化氢浓度 , 经过标要准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力。研究 了缓冲液 pH 值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响。结果表明 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时 , 缓冲液最佳 pH 值为 4、最佳水浴温度为100 ℃、靛蓝胭脂红最佳用量为 1. 3 mL。此方法的重现性较好 , 反应系统较稳定。葡萄糖氧化酶在自然界中普 遍存在 , 在食品、医药和发酵等工业生产及分析检测中用途广泛 , 是高等院校生物化学、酶学和酶工程等相关实验课程中经常选用的一种重要的模式酶。在有氧情况下 , 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生葡萄糖酸和 过氧化氢 : 葡萄糖 + O2 葡萄糖酸 + H2 O2 。测定葡萄糖氧化酶活力 常用的方法有 2 种。一种是滴定法 , 即用碱滴定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖 产生的葡萄糖酸 , 这种方法误差比较大 , 灵敏度比较低 , 尤其是葡萄糖含 量比较低时。另一种是利用葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶—苯胺衍生 物或染料隐性体偶联反应体系测定。过氧化物酶在有氧存在时 , 催化葡萄糖氧化、生成的过氧化氢分解 , 分解出的氧又将苯胺衍生物或染料隐性体 (如邻 - 联二茴香胺 ) 氧化变成红色或棕色物质 , 颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。这种方法非常灵敏 , 但也存在显色物质不稳定、在 1 m in内有明显褪色、数据重复性不好等不足 , 而且因为要与辣根过氧化物酶 联用 , 因此这个方法比较昂贵 , 增加了测定成本。葡萄糖氧化酶活力测定的困难限制了其在学生实验及课外科研项目中的应用 , 因此寻找一种廉价、简便并且灵敏度高的活力测定方法很有意义。本研究采用靛蓝胭脂红褪色法测定葡萄糖氧化酶活力。靛蓝胭脂红褪色法测定葡萄糖氧化酶活力的机理 是 : 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定 pH 值的缓冲溶液中和加热条件下 , 能使靛蓝胭脂红发生褪色反应 , 并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比 , 据此测定出产生的过氧化氢的量 , 进而 计算出葡萄糖氧化酶活力。首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应 , 在 615 nm 波长处测定吸光度 , 建立标准曲线。然后 , 作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应 , 取反应液 , 研究温度、 pH 值和靛蓝胭脂红用量等条件对酶活力测定的影响 , 并对本方法的可重复性等进行验证。 关键词 : 葡萄糖氧化酶 ; 活力 ; 褪色中图分类号 : R331 文献标识 码 : B 文章编号 : 1002 2 4956 ( 2008 ) 12 2 0058 2 03

多酚氧化酶活性测定及控制[文献综述]

毕业论文文献综述 生物工程 多酚氧化酶活性测定及控制 1 前言 多酚氧化酶(PPO)广泛存在于自然界,在果实和蔬菜收获后,PPO所引起的反应常常会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。本文总结了多酚氧化酶的活性测定方法以及对其活性的控制,主要研究了抑制剂对其活性的影响,为果蔬贮藏和加工中酶促褐变的防治提供思路。 多酚氧化酶(PPO)作为一种植物酶类,是引起果蔬褐变的主要因素。鲜切果蔬因组织被切分使PPO与酚类底物的接触机会增加,酚类物质被氧化成棕褐色的醌,导致产品褐变。抑制PPO活性取决于抑制剂的性质和浓度、底物的可利用性、pH值和温度。一些还原剂、酶类、螯合剂和蜂蜜等均已被用于防止果蔬酶褐变。本文主要总结了抑制剂对于控制果蔬PPO活性的研究。 2 主题部分 2.1 从果蔬中提取PPO(以莲藕为例) 2.1.1 丙酮法(丙酮法提取所得酶液比活力最高。适合需大量制样时使用) 将莲藕洗净,去皮,切碎,加4倍量预冷至.18。C的丙酮(w/v为1:4)捣碎,搅拌3min,抽滤,冷风吹干残渣后,混匀,得丙酮粉。称取丙酮粉O.5 g,加入0.2 mol/L,pH为5.4的预冷磷酸二氢钠.柠檬酸缓冲液20ml,搅拌3min,8 000r/min离心10min,所得上层清液即为粗酶液。【1】 2.1.2 匀浆法(匀浆法提取的酶液没有活性) 将莲藕洗净,去皮,切碎,加入0.05mol/L,pH5.4的预冷磷酸氢二钠.柠檬酸缓冲溶液(含5%的PVPP),料液比为1:2.2,捣碎,搅拌,抽滤。向滤渣中加入0.05mol/L,pH5.4磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液(W/V为1:1)再次搅拌,抽滤,两次滤液合并,8 000r/min离心10rain,所得上清液即为粗酶液。【2】 2.2.3 匀浆浸提法(匀浆浸提法提取所得粗酶液活性最高,操作简便,提取所得粗酶液活性

多酚氧化酶活性测定

实验二十六植物体内多酚氧化酶活性的测定 一、目的 通过实验,掌握植物体内多酚氧化酶活性的测定方法。 二、原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下: 多酚氧化酶 邻苯二酚(儿茶酚)+1∕2 O 2 ——————→ 邻醌+ H 2 O 三、材料、仪器及试剂 1. 材料:马铃薯块茎等 2. 仪器:UV-1206或UV-1240分光光度计;离心机;恒温水浴;研钵或匀浆机;试管;移液管;纱布袋等。 3. 试剂:聚乙烯吡咯烷酮(PVP);0.01mol·L-1pH 6.5磷酸缓冲液;0.1m mol·L -1pH6.5磷酸缓冲液;0.05 mol·L-1pH5.5磷酸缓冲液;30%饱和度硫酸铵;0.1 mol·L-1儿茶酚; 20%三氯乙酸。 四、实验步骤 1. 粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100ml 0.1mol·L-1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3ml 0.01mol·L-1 pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。 2. 活性酶的测定

在试管中加入3.9ml 0.05 mol·L-1 pH5.5磷酸缓冲液,1.0ml 0.1 mol·L-1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ,然后加入0.5ml酶液(可视酶活性增减用量),迅速摇匀,倒入比色杯内,于525nm波长处以时间扫描方式,在1~2min 内测定吸光度变化(A)值。 五、酶活性的计算 值变化0.01为1个酶活力单位,按下式计算多酚氧化酶的活力以每min内A 525 和比活性。 A 酶提取液总量(ml) 酶活力(0.01A·min-1)=———————×——————————— 0.01×反应时间测定时酶液用量(ml) A 酶提取液总量(ml) 酶的比活性(0.01A·g-1Fw·min)=————————×—————————— 0.01×W×反应时间测定时酶液用量(ml) 公式中:A —为反应时间内吸光度的变化值;W为样品鲜重(g)。

实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)

实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法) 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时,还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于:糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于:胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢,后者在过氧 化物酶的作用下,将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计,恒温水浴箱,移液器(枪),枪头,试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒,试剂盒主要成分与浓度: 新鲜无溶血血清。 【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀,即为工作液

分别混合均匀,37C水浴10?15分钟(避免太阳光直射),用波长505nm 比色杯光径1.0cm,用空白管调“零”点测定各管的吸光度(A)值。 【计算】 葡萄糖(mmol/L) = ------------------ ^校准液浓度 葡萄桃(mg/dl)二mmol/L X18 【参考值】 血清/ 血浆:3.89 —6.11 mmol/L (70 —110 mg/dl)。 此范围仅供参考,各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1. 全国临床检验操作规程(第二版),主编:叶应妩,王敏三,1997, P616. 2. Trinder P. Ann Clin Biochem,1969, 6: 24-27. 血糖测定实验所需器材: 1. 紫外分光光度计(比色杯光径1.0cm), 2. 恒温水浴箱(能调温度的,37C), 3. 移液器(枪)(规格1.0ml 6个,20山6个),枪头各100个 4. 试管50支,6个试管架 5. 烧杯100m一个,50ml (或25ml)6个 6. 记号笔6支 7. 蒸馏水1瓶

葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法)

葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法) 1.原理 (1)葡萄糖氧化酶的催化特性:葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD (黄素腺嘌呤二核苷酸),作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生过氧化氢。 C6H12O6+O2=氧化酶C6H12O7+H2O2 在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后,测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶的活力。 (2)葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应,并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比,据此测定出产生的过氧化氢的量,进而计算出葡萄糖氧化酶活力。 (3)首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应,在615nm波长处测定吸光度,建立标准曲线。然后,作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应,再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在615nm波长处测定吸光度,将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。 2药品 (1)0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用,2天内有效。 (2)1.0×10-3mol/L靛蓝胭脂红溶液:称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。(2)0.2M醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2):称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL (4)12mg/L过氧化氢标准溶液:准确称取0.040g 30%的过氧化氢溶液(过氧化氢需事先标定取实际值)定容于1000mL。 3实验方法 (1)标准曲线的绘制 准确吸取0、1、2、3、4、5、6mL过氧化氢标准溶液(12mg/L),分别置于

多酚氧化酶的活性测定的报告

朴东日:多酚氧化酶活性的测定。一、试验目的 本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原 理及操作技术。 二、试验原理 酚氧化酶(PPO)催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓 冲液PH6.0的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色 的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生 变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。 三、试验材料、试剂及试验用品 材料:李子样本80个(按照80个预算药品)李子处理:果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发 育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯 处理。 药品:预冷的磷酸缓冲液(pH6.4)20mL 1mL(0.1mol/L)邻苯二酚 4mL磷酸缓冲液(pH6.4) 四、实验方法:

1.PPO的提取取1g李子果肉样品,冰浴研磨,加入预冷的磷酸缓冲液(pH6.4)20mL,在4℃下离心(4200r/min)10min,取上清液为蜜柚果肉PPO酶提取液。 2.PPO活性测定采用比色法测定。将1mL(0.1mol/L)邻苯二酚加入4mL磷酸缓冲液(pH6.4)中,加入1mL酶液,立即于波长420nm下测定吸光度的变化,每隔20s记录1次,共记录3min。以不加酶提取液的反应液做对照,以每分钟吸光度变化0.01为1个PPO酶活性单位。 3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图,依据曲线最初直线段的斜率(ΔA/t)计算PPO活力。(注意空白为:2.5 mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液)一个酶活力单位定义为:以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。 4.多酚氧化酶酶活的计算公式:E=M×60/V (式1)式中:M—每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

茶叶多酚氧化酶活性测试

江南大学-食品化学实验讲义茶葉多酚氧化酶的活性測定 茶葉多酚氧化酶的活性測定 一、目的要求 通過實驗,掌握茶葉多酚氧化酶活性的測定方法。 二、基本原理 茶葉多酚氧化酶是茶樹體內最重要的酶類之一,它不僅在茶樹生理代謝 過程中起著重要作用,而且在茶葉加工,尤其在紅茶製造過程中,催化 多酚類物質的氧化也起著主導作用。 多酚氧化酶的活性檢測方法,包括檢壓法、分光光度法、氧電極法和滴 定法等。多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在一定的溫度、pH條件下, 有氧存在時,能使催化鄰苯二酚氧化生成有色物質,單位時間內有色物 質在460nm處的吸光度與酶活性強弱成正相關,即可計算出多酚氧化酶 的活力和比活性。反應式如下: 多酚氧化酶 鄰苯二酚(兒茶酚)+1∕2 O2——————→ 鄰醌+ H2O 三、材料、儀器及試劑 1、材料:茶樹鮮葉。 2、儀器:721型分光光度計;離心機;恆溫水浴;研缽或勻漿機;試管;移液管;紗布袋等。 3、試劑:聚乙烯吡咯烷酮(PVP);0.1M磷酸緩衝液(pH6.5);硫酸銨;1%鄰苯二酚溶液;0.1%脯氨酸溶液;6M尿素溶液或20%三氯醋酸。 四、操作步驟 1、粗酶液的製備 稱取洗盡茶樹鮮葉5.0g於研缽(或勻漿機)中,加入2g 不溶性聚乙烯吡 咯烷酮(事先用蒸餾水浸洗,然後過濾以除去雜質)和100ml 0.1M pH6.5磷酸緩衝液,磨成勻漿,用幾層紗布袋過濾,濾液加入30%飽和度硫酸銨,

離心除沉澱,上清液再加硫酸銨使達60%飽和度,離心收集沉澱。將所 得沉澱溶於2~3ml 0.1M pH6.5磷酸緩衝液中,即為粗製酶液。 2、活性酶的測定 取酶液1ml於離心管中,加入3ml反應混合液(2.0ml 0.1M pH6.5磷酸緩 衝液,0.6ml 1%鄰苯二酚溶液;0.4ml 0.1%脯氨酸溶液),在37℃恆溫水 浴中保溫10min,立即加入6M尿素溶液3ml或20%三氯醋酸1ml終止反應。 4000rpm離心10min。取上清液,用1cm比色皿,在460nm波長處,在1~2min內測定吸光度值(A)。空白對照用緩衝液代替反應液中的鄰 苯二酚,其它條件相同。 五、酶活性的計算 以每克樣每分鐘內A460增加0.1為1個酶活力單位。 A460×酶提取液總量(ml) 酶活力(0.1A?g-1?min-1)=—————————————————————————— 0.1×反應時間(min)×樣品鮮重(g)×測定時酶液用量(ml) 六、注意事項 1、反應混合液必須現配現用,否則會因鄰苯二酚自動氧化而失效;鄰苯 二酚還可用兒茶素代替。 2、脯氨酸是用作有色氧化產物形成的穩定劑和加速劑。

多酚氧化酶特性研究

多酚氧化酶特性研究 摘要: 采用分光光度法, 对板栗仁多酚氧化酶( PPO) 的催化特性、最适波长、最适反应时间、最适温度、最适pH 值、热稳定性等性质进行了研究, 同时研究了Vc、EDTA、NaCl、柠檬酸4种添加剂对板栗仁多酚氧化酶活性的影响。结果表明: 板栗仁多酚氧化酶催化氧化产物的最大吸收波长为410nm, 最佳反应时间为3min, 最适反应温度为30℃ , 最适pH 值为6. 0, 米氏常数Km = 0.0694mo l/L, Vmax = 3.918OD/min。95℃水浴处理5min该酶已基本失活, 其中V c和EDTA对板栗仁多酚氧化酶酶促褐变有很好的抑制效果。 关键词: 板栗; 多酚氧化酶; 褐变; 抑制多酚氧化酶( Polyphenolox idase, PPO ) 是由核基因编码的铜金属酶, 其酶促褐变机制是: 内源性酚类物质在多酚氧化酶的催化下氧化生成醌, 醌再相互作用生成高分子聚合物, 从而导致褐色素的生成。它能催化两类不同的反应, 可以使一元酚羟基化, 生成相应的邻二羟基化合物;也可以氧化邻苯二酚生成醌[ 1]。而酚类物质是果疏组织褐变的物质基础, 不同植物、同一植物的不同组织, 同一植物的不同品种、生长环境以及不同的发育期, 其褐变的主要酚类物质均有所不同, 导致酶褐变活性也有所差异。云南富产板栗, 但对板栗仁PPO 的活性及影响活性因素的研究则未见报道。1材料与方法 1.1材料 板栗市场购外观良好, 无病虫害, 无机械损伤新鲜的云南板栗。 1.2试剂与仪器 主要试剂: 聚乙烯吡咯烷酮( PVPP)、邻苯二酚、乙酸钠、冰乙酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醇、乙醛、盐酸、维生素C ( V c)、EDTA、柠檬酸、氯化钠等, 均为国产分析纯。 主要试验仪器: TGL - 16G 高速台式冷冻离心机、722W 型分光光度计、HH - 4型数显恒温水浴锅、冰箱等。 1.3试验方法 1.3.1粗酶液的制备 酶液提取参照文献[ 2] 的方法, 有所改进。称150g 冷冻鲜样, 加入PH 值6.0 的0.05mol /L冷冻磷酸缓冲液150mL 和15gPVPP, 打浆, 过滤, 于3℃下12000r /min 离心15min, 取上清液置于0~ 4℃保存备用。 1.3.2褐变度( BD) 的检测 称5g 样品加入15mL 蒸馏水中研磨, 离心( 14000r/min、15min)。沉淀溶于15mL 甲醇甲酸溶液(体积比1:1), 充分浸提15min 后离心。 将两次所得上清液混匀后用蒸水定容为25mL, 离心, 取上清液检测410nm 下的吸光值An ×10 表示。 1.3.3总酚( TP) 的提取和含量检测 称取5g 样品, 加入15mL 乙醛- 盐酸溶液( pH3.0) 研磨, 在恒温水浴中震荡1h, 取出离心15000r /min, 30min, 量取滤液体积, 吸取5mL, 用蒸水定容到50mL, 测定A 值, 用邻苯二酚做标准曲线。 1.3.4酶活性的测定 取2mL 0.2mol/L 邻苯二酚溶液和2mL一定pH值的磷酸缓冲溶液加入到试管中, 然后加入0.5ml的粗酶液, 水浴保温3min后立即倒人比色管中, 在410nm波长处测定反应混合液的吸光值变化(△A), 每30s读数1次, 共记录3min。空白用

多酚氧化酶检测试剂盒(PPO)说明书

货号:QS1404 规格:50管/24样 多酚氧化酶检测试剂盒(PPO)说明书 可见分光光度法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义: PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。 测定原理: PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收。 自备实验用品及仪器: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制: 提取液:液体,60mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:液体,40mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:液体,10mL×1瓶,4℃避光保存; 粗酶液提取: 1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)或果汁样本的处理: 按照血清(浆)或果汁体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)或果汁加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 测定步骤: 1、分光光度计预热30min以上,调节波长至525nm,蒸馏水调零。 5min 第1页,共2页

茶鲜叶多酚氧化酶的活性测定(3学时)解析

实验一茶鲜叶多酚氧化酶的活性测定(3学时) 一、目的要求 1、通过实验,掌握茶叶多酚氧化酶活性的测定方法。 2、理解酶活性测定常规方法及一般原理。 二、基本原理 茶叶多酚氧化酶是茶树体内最重要的酶类之一,它不仅在茶树生理代谢过程中起着重要作用,而且在茶叶加工,尤其在红茶制造过程中,催化多酚类物质的氧化也起着主导作用。 多酚氧化酶的活性检测方法,包括检压法、分光光度法、氧电极法和滴定法等。多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在一定的温度、pH条件下,有氧存在时,能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质,单位时间内有色物质在460nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下: 多酚氧化酶 邻苯二酚(儿茶酚)+1∕2 O2 ——————→ 邻醌+H2O 三、仪器及试剂 1、材料:茶树鲜叶。 2、仪器:721型分光光度计;离心机;恒温水浴;研钵或匀浆机;试管;移液管;纱布袋等。 3、试剂:聚乙烯吡咯烷酮(PVP);0.1M磷酸缓冲液(pH6.5);硫酸铵;1%邻苯二酚溶液;0.1%脯氨酸溶液;6M尿素溶液或20%三氯醋酸。 四、操作步骤 1、粗酶液的制备:称取洗尽茶树鲜叶5.0g于研钵(或匀浆机)中,加入2g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。 2、活性酶的测定:取酶液1ml于离心管中,加入3ml反应混合液(2.0ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液,0.6ml 1%邻苯二酚溶液;0.4ml 0.1%脯氨酸溶液),在37℃恒温水浴中保温10min,立即加入6M尿素溶液3ml或20%三氯醋酸1ml终止反应。4000rpm离心10min。取上清液,用1cm比色皿,在460nm波长处,在1~2min内测定吸光度值(A)。空白对照用缓冲液代替反应液中的邻苯二酚,其它条件相同。 五、结果计算 以每克样每分钟内A460增加0.1为1个酶活力单位。

葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍

葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍 ? 葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中,用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L 盐酸)调pH至7.0,用蒸馏水定容至1L。 2.酶试剂称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L NaOH调pH至7.0,用磷酸盐缓冲液定容至100ml,置4℃保存,可稳定3个月。 3.酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中,用棕色瓶贮存。4.酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合,4℃可以存放1个月。5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至l L。

6.100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g,溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中,以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7.5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。 【操作步骤】 1.自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2.手工操作法取试管3支,按下表操作。 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml)空白管标准管测定管 血清--0.02 葡萄糖标准应用液-0.02- 蒸馏水0.02-- 酶酚混合试剂 3.03.03.0 混匀,置37℃水浴中,保温15min,在波长505nm处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89~6.11mmol/L。 【临床意义】 1.生理性高血糖可见摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2.病理性高血糖 (1)糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。

实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质

实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶(PPO)活性测定及酶学性质一、实验目的 1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。 2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。 二、实验原理 马铃薯不耐储藏,在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变,使外观品质和营养价值大为降低,制约着马铃薯的开发利用。酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。 多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等.是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶.普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,使组织形成褐变.以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。因此,检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在一定的温度、pH条件下,有氧存在时,能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质,单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。 多酚氧化酶 邻苯二酚(儿茶酚)+1∕2O 2——————→邻醌+H 2 O

三、试验材料、试剂及试验用品 1.材料:马铃薯块茎。 2.仪器:分光光度计;离心机;恒温水浴;研钵;试管;移液管;容量瓶 3.试剂:L 磷酸缓冲液(pH=);L邻苯二酚;L磷酸氢二钠;L磷酸二氢钠;10mmol/L 柠檬酸;10mmol/L抗坏血酸;10mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA);10mmol/L亚硫酸钠 四、实验方法: 1.多酚氧化酶的提取 取马铃薯块茎样品,加入预冷的磷酸缓冲液()3ml,研磨匀浆,转移到离心管中,再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵,合并提取液,在4℃下离心(8000r/min)5min,取上清液为多酚氧化酶提取液,并量取粗酶液体积。 2.多酚氧化酶活性测定 采用比色法测定。将ml邻苯二酚加入2ml磷酸缓冲液(pH)中,加入ml酶提取液,立即于波长410nm下测定吸光值,2min后再计吸光值,以不加酶提取液的反应液做对照(注意空白为: ml缓冲液和 mL邻苯二酚溶液)。以每分钟吸光度变化为1个多酚氧化酶活性单位。 表1 多酚氧化酶活性测定

苹果中多酚氧化酶最适-pH-的测定

实验二苹果中多酚氧化酶最适pH 的测定 一、实验原理 存在于果蔬中的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)在适宜的条件下能引起果蔬的酶促褐变。因此,多酚氧化酶对于食品加工具有重要意义。多酚氧化酶是一种含铜离子的酶,它能催化两类不同的反应。一是一元酚羟基化,二是邻-二酚氧化。在一些植物中,多酚氧化酶能同时催化这两类反应;而在另一些植物中,多酚氧化酶仅能催化邻-二酚氧化,却不能催化一元酚羟基化。如果采用邻-二酚作底物,那么随着酶催化反应进行,反应混合物的吸光值因邻-苯醌的量的增加而增大,因此可采用分光光度法测定多酚氧化酶的活力。 二、试剂和仪器 试剂:0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液,pH分别为3.6、4.0、4.6、5.0和5.6、0.2mol/L 磷酸盐缓冲液,pH分别为6.0、6.5、7.0、7.5和8.0、0.01mol/L儿茶酚溶液、0.05mol/L 磷酸盐缓冲液,pH=6.5、丙酮 仪器:组织捣碎机、抽滤装置、721分光光度计(含比色皿)、秒表、常规玻璃仪器、离心机 三、实验步骤 1、从苹果中萃取多酚氧化酶 将100 g苹果迅速去梗和核后切成小块,和400mL左右预先冷冻至-26℃的丙酮一起倒入组织捣碎机中均质(20,000 rpm,2 min),然后迅速抽滤,保留滤纸上的沉淀部分,将沉淀薄层中残留的丙酮用冷风吹去,至沉淀无丙酮味。将所得丙酮粉转移至150 mL 0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.5)中,搅拌30 min,然后离心(4℃,10000 r/m,20 min),离心所得上清液如有混浊,则用8层纱布过滤,从而得到多酚氧化酶提取液。 2、不同pH下多酚氧化酶活力的测定 在比色皿中分别加入1.8~1.1 mL pH为3.6的缓冲液和0.7mL儿茶酚溶液,搅匀后加入0.5~1.2mL多酚氧化酶提取液,迅速搅匀,测定反应混合物在400 nm 下的吸光值随时间的变化,参比以缓冲液代替酶液。依次测定4.0、4.6、5.0、5.6、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0几个pH。

多酚氧化酶活性测定

多酚氧化酶活性测定 实验二十六植物体内多酚氧化酶活性的测定一、目的 通过实验,掌握植物体内多酚氧化酶活性的测定方法。 二、原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下: 多酚氧化酶 邻苯二酚(儿茶酚),1?2 O ——————? 邻醌, HO 2 2 三、材料、仪器及试剂 1. 材料:马铃薯块茎等 2. 仪器:UV,1206或UV,1240分光光度计;离心机;恒温水浴;研钵或匀浆机;试管;移液管;纱布袋等。 ,13. 试剂:聚乙烯吡咯烷酮(PVP);0.01mol?L pH 6.5磷酸缓冲液;0.1m mol?L,1,1pH6.5磷酸缓冲液;0.05 mol?L pH5.5磷酸缓冲液;30%饱和度硫酸 铵;0.1 ,1mol?L儿茶酚; 20,三氯乙酸。 四、实验步骤 1. 粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏,1水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100ml 0.1mol?LpH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加,1

硫酸铵使达60,饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2,3ml 0.01mol?L pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。 2. 活性酶的测定 ,1,1在试管中加入3.9ml 0.05 mol?L pH5.5磷酸缓冲液,1.0ml 0.1 mol?L 儿茶酚在37?恒温水浴中保温10min ,然后加入0.5ml酶液(可视酶活性增减用量),迅速摇匀,倒入比色杯内,于525nm波长处以时间扫描方式,在1,2min内测定吸光度变化(A)值。 五、酶活性的计算 以每min内A值变化0.01为1个酶活力单位,按下式计算多酚氧化酶的活力525 和比活性。 A 酶提取液总量(ml) ,1 酶活力(0.01A?min),———————×——————————— 0.01×反应时间测定时酶液用量(ml) A 酶提取液总量(ml) ,1酶的比活性(0.01A?gFw?min)=————————×—————————— 0.01×W×反应时间测定时酶液用量(ml) 公式中:A —为反应时间内吸光度的变化值;W为样品鲜重(g)。

过氧化氢酶活力的测定实验报告doc

过氧化氢酶活力的测定实验报告 篇一:过氧化氢酶活性测定 实验29 过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法) 过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中,其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系,故常加以测定。 一、原理过氧化氢酶(catalase)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:小麦叶片 (二)仪器设备:1. 研钵;2. 三角瓶;3. 酸式滴定管;4. 恒温水浴;5. 容量瓶。 (三)试剂:1. 10%H2SO4;2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液;3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称:取KMnO4(AR)3.1605g,用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml,再用0.1mol/L 草酸溶液标定;4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L,取30%H2O2溶液5.68ml,稀释至1000ml,用标准0.1mol/L KMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定;5.

0.1mol/L 草酸:称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g,用蒸馏水溶解后,定容至1000ml。 三、实验步骤 (一)酶液提取:取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量,研磨成匀浆,转移至25ml容量瓶中,用该缓冲液冲洗研钵,并将冲洗液转至容量瓶中,用同一缓冲液定容,4000rpm离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 (二)取50ml三角瓶4个(两个测定,另两个为对照),测定瓶加入酶液2.5ml,对照加煮死酶液2.5ml,再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2,同时计时,于30℃恒温水浴中保温10min,立即加入10%H2SO42.5ml。 用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定,至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。 四、结果计算 酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示:过氧化氢酶活性(H2O2mg/g/min)=(A-B)×VT/(W ×VS×1.7×t) 式中:A对照KMnO4滴定ml数;B酶反应后KMnO4滴定ml数;VT提取酶液总量(ml); VS反应时所用酶液量(ml);W样品鲜重(g);t反应时间(min);

酶活性测定方法

一、过氧化物酶(POD)活性的测定 POD测定参照李合生等(2003)的愈创木酚法方法进行测定,略加改动。 测定:称取样品0.5g,加入5mL 1/15mol/L PH=7.0的磷酸缓冲溶液,冰浴研磨成匀浆,4℃条件下12000r/min离心15min,上清液为粗酶液。然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml,愈创木酚(0.2%)0.5ml,浓度为0.15%的H2O2 0.5ml,取0.3ml的酶提取液加入到试管中,空白以缓冲液代替。在470nm下测定其吸光度,加入酶液时开始计时,每隔30s读数一次,连续记录5分钟。以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。 △470 ×V T POD活性= 0.01×t×Vs×W 式中:△470----反应时间内吸光度值的变化; V T ----提取酶液的总体积(ml) t----反应的时间(min) Vs ----测定时取用酶液体积(ml) W----样品鲜重(g) 二、多酚氧化酶(PPO)活性的测定 多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法,略加改动。 酶液制备:称取样品0.5g,加入5mL 0.1mol/L PH=6.0的磷酸缓冲溶液,冰浴研磨成浆,4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。 PPO活性测定:反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol/L的邻苯二酚。混匀后于30℃保温10 min,迅速加入2 mL质量分数为20%的三氯乙酸终止反应,立即于525nm下测定其吸光度值,计算酶活。 PPO活性= O D×V T 0.01×t×0.5g×V s = O D×V T 0.005 OD——反应时间内吸光值的变化; V T ----提取酶液的总体积(ml) Vs ----测定时取用酶液体积(ml) T———反应时间(min);

多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶的测定

多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶的测定方法 (一) 试剂:1、0.02mol/l焦儿茶酚溶液:称0.22克焦儿茶酚溶于100毫升蒸馏水中,现用现配。 2、0.1mol/l碘酸钾:0.3567克碘酸钾溶于蒸馏水,定容至100毫升。 3、0.005mol/l碘液:碘化钾2.5克溶于200毫升蒸馏水中,加冰醋酸1毫升,再加0.1mol/l 碘酸钾12.5毫升,最后加蒸馏水定容至250毫升。 4、pH6.0磷酸缓冲液:87.7毫升A+12.3毫升B,用蒸馏水稀释至200毫升。 贮备液A:0.2mol/l磷酸二氢钠(27.6g NaH2PO4·H2O用蒸馏水配成1000ml)。 贮备液B:0.2mol/l磷酸氢二钠(53.65g Na2HPO4·7H2O或71.7g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水配成1000毫升) 5、其它:1%淀粉;10%偏磷酸;0.1%抗坏血酸(现用现配) 方法: 1、粗酶提取:称取新鲜样品2克,剪碎,置于研钵中,加入少量pH6.0磷酸缓冲液和少许石英砂,于冰浴中迅速研磨至匀浆,将全部材料用缓冲液冲洗入50毫升容量瓶中,并定容至刻度。在18~20度下每隔3分钟摇动1次,共5次,然后再静置15~20分钟,其上清液即为粗酶提取液(可倾入干洁的三角瓶中备用)。 2、活性测定:取干洁50毫升三角瓶6只(编号),按照下表向各瓶中加入pH6.0磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/l焦儿茶酚,并向③号瓶及⑥号瓶各加10%偏磷酸。然后将三角瓶置于18~20度水浴或放在室温下使内外温度达到平衡之后,每隔1分钟向各瓶中依次加入酶液2毫升,全部加完后保温3分钟,再按原顺序仍然间隔1分钟向①、②、④、⑤号各瓶加入偏磷酸1毫升(注意:加完2号瓶后应间隔2分钟再加4号瓶),用于终止酶的活性。最后向各瓶中加入1%淀粉溶液3滴作为指示剂,摇匀后用微量滴定管以0.005mol/l碘液滴定,当溶液呈现淡蓝色为止,记录碘液消耗量。 3、结果计算:A多酚=0.44{[⑥-(④+⑤)/2]-[③-(①+②)/2]}*V1/V2/W/t V1:提取时酶液总量(毫升)V2:测定时酶液用量(毫升) ①、②、③、④、⑤、⑥:测定时消耗碘液量(毫升) t:酶反应时间(分) 2 4 2 2 同上 3 4 2 2 1 空白测定 4 4 2 1 2 测多酚氧化酶 5 4 2 1 2 同上 6 4 2 1 2 1 空白测定

多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚微板法)

多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚微板法) 简介: 多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性,多酚氧化酶是一种蛋白体 Leagene 多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于酶标仪420nm 处检测吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性,尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 自备材料: 1、蒸馏水 2、研钵或匀浆器 3、离心管或试管 4、低温离心机 5、酶标板 6、酶标仪 操作步骤(仅供参考): 1、准备样品: ①植物样品:取植物组织或水果中层果肉加入预冷的PPO Lysis buffer 研磨或匀浆,10000g,4℃离心,留取上清液,-20℃冻存,用于多酚氧化酶的检测。 ②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于多酚氧化酶的检测。 ③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用PPO Lysis buffer 进行适当匀浆,10000g,4℃离心,取上清液,-20℃冻存,用于多酚氧化酶的检测。 编号 名称 TE0427120T Storage 试剂(A):PPO Lysis buffer 500ml 4℃避光试剂(B):PPO Assay buffer 5ml 4℃避光使用说明书 1份

葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖背景知识讲解

葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖 实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林(4-AAP)和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖(1)糖尿病患者。(2)内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。(3)颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。(4)脱水引起的高血糖:如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见,依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等)。(1)胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。(2)对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。(3)严重肝病患者,由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为α型,64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶,可加速这一反应,但在终点法中,延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型,故须放置2h以上(最好过夜),待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量,这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g,氟化钠4g,加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内,在80摄氏度以下烤干使用,可使2~3ml 血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。 4.本法用血量甚微,建议使用微量加样器进行加样。如果使用吸管加样,应直接

相关主题
相关文档 最新文档