[综 述]
制备高效液相色谱在天然产物分离中的应用
杨振寰, 刘 霞
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(中国科学院兰州化学物理研究所甘肃省天然药物重点实验室,甘肃兰州730000)
收稿日期:2004209212
基金项目:中国科学院专攻方向性项目“两部特色民族药资源标准的研究(No .KGCX22213208)
作者简介:杨振寰(1976～),女,山东省烟台市人,硕士研究生,研究方向:高效液相色谱对天然药物制备分离的研究。通讯作者:刘 霞(1958～),女,研究员,博士生导师,电话:0931********。
关键词:制备高效液相色谱(PHP LC );天然产物;分离纯化
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:100121528(2005)1221444205
1 前言
色谱法是1906年俄国植物学家M ichael Ts wett 将含有有色的植物叶子色素和溶液通过装填有白垩粒子吸附剂的柱子,企图分离它们时而发现并命名的。而首次真正意义上的制备型液相色谱分离是20世纪30年代对植物代谢产物———色素(如叶绿素及胡萝卜素等)的分离[1]。20世纪
70年代初,高效液相色谱(HP LC )问世。此后的30年,由于HP LC 具有高的分辨率及分离纯化鉴定一次性完成的特点,
使其在许多学科的研究领域得到广泛的应用。但是由于传统的分析型HP LC 分离的样品量少,使样品的制备分离受到限制。为了克服这一缺点,后来将分析型HP LC 放大为制备型HP LC (PHP LC ),使产品的分离量达到克数量级及以上,并最终实现了工业化。
天然产物中包含的成分复杂,有的达到几十种甚至上百种,因此对其中化学成分的分离纯化一直是一项十分艰巨的工作。由于传统的方法不仅步骤繁琐和有机溶剂等方面消耗大,而且最终的产率及纯度不高,所以需要采用一种新型的分离纯化方法,PHP LC 正好可以解决这些问题。因此几十年来,PHP LC 在天然产物的分离中得到了广泛的应用。本文就20世纪90年代以后有关PHP LC 在天然产物分离方面的应用做一综述。
2 应用
2.1 PHP LC 分离纯化糖类及其衍生物
糖类是植物光合作用的初生产物,是一类最丰富的天然产物,糖类在植物中的分布十分广泛,常占植物干重的80～90。糖类又可根据其碳链的长度分为单糖、低聚糖和多糖。糖类的衍生物也十分复杂,如氨基糖、去氧糖、糖醛酸、糖醇、环醇类、糖的磷酸酯及一些苷类还有糊精等。
2.1.1 PHP LC 对糖类混合物的分离
在糖类的提取方面,P .Abreu 等[2]用制备色谱纯化了来自植物Sarcocephalus latifolius 中的糖类物质。他们首先将提出的糖混合物甲酰化后,用正相PHP LC 以己烷2乙酸乙酯为流动相进行梯度(90∶10到10∶90)洗脱,进样量为250
mg,将其分离为11个组分,每一个组分再用PHP LC 或制备
薄层色谱等进一步纯化后,发现上一步所得的11个组分,有的为纯品有的为混合物,经过二次纯化后最终均得到了纯品。将这些纯品用配有示差折光检测器的HP LC 定量,用核磁(NMR )确定化合物的结构。
M ary F .Evangelist o 等
[3]
对Parr Bomb 合成反应生成的
糖类混合物进行了分离纯化。他们首先将混合物用正相制备柱色谱分离,并通过薄层色谱核对,然后将分离出的物质再用反相PHP LC 分离制备,并对最终制备纯化出的化合物用质谱(MS )和核磁NMR 鉴定结构。结果纯化出了12g
arafluor o 222Cd A (99.7)和3g a 2头异构体(a 2anomer )
(99.2
)。反相PHP LC 所用的色谱条件为:C 18色谱柱(500
mm ×50mm i .d .),填料用量为500g,流速为50mL /m in,流
动相为乙腈2水(10∶90v /v ),梯度洗脱至(50∶50v /v ),检测波长为254n m 。
Guile G .R.等[4]
研究了阴离子低聚糖的分离制备,他
们采用的是弱阴离子交换HP LC,所用的缓冲溶液为甲酸铵,因为甲酸铵是易挥发的组分,可以使最后的分离纯化变得简单易行。色谱柱为隋性的聚合物柱,这种聚合物柱比硅胶柱有更宽的pH 使用范围,在pH 值为5.5～9.0时,阴离子糖都可以得到极好的分离。这个方法可以用作对包含硫酸、磷酸、唾液酸(sialic acid )和质子酸等结构的分离。
2.1.2 PHP LC 对苷类的分离
PHP LC 在苷类的提取方面也得到了广泛的应用,如Q ingguo Tian 等
[5]
对柑橘(C itrus tangerina )皮中的葡萄糖苷
(glucosides )进行了制备纯化和定性。实验的目的是找到一
种快速可靠的方法从柑橘皮中在线分析葡萄糖苷的存在和分布情况。他们首先将柑橘皮用己烷除去油分,再用丙酮及
70的甲醇2水溶液将其中的葡萄糖苷提取后,将其通过离
子交换色谱柱XAD 柱、WA 柱及XAD 柱洗脱下其中的葡萄糖苷,得到的干物质溶于20mL 水中用于HP LC 2DAD 和ESI 2
MS 分析。PHP LC 的色谱条件为色谱柱(250mm ×20mm,10
μm ),流动相为乙腈2水为25∶75(含0.05的TF A ),进样
4
441
量为200μL,流速为6mL/m in,检测时间为60m in,检测波长为210n m。用HP LC/M S进行结构鉴定,为了确认结构的正确性,又对PHP LC制备出的纯化合物进行NMR验证。
雷厉等[6]利用反相PHP LC结合溶剂萃取、大孔吸附树脂柱色谱和葡聚糖凝胶LH20柱色谱方法,从管花肉苁蓉的乙醇提取物中纯化制备了苯乙醇苷类化合物松果菊苷的标准品,纯度达到98以上。方法操作简便,重现性好,可用于松果菊苷及其他苯乙醇苷类化合物的大量制备。
丁朝武[8]用化学和PHP LC方法分离制备了红景天属植物提取物中苷及苷元的标准物,标准品纯度分别由1～2和1提高到99和97以上。他们首先用大花红景天粉末的水提取液用乙酸铅除去其中的黄酮类物质,用活性炭吸附法除去糖类等杂质,最后用PHP LC分离纯化所需的红景天苷及苷元的标准品,所用的色谱条件为色谱柱:C
18
柱(250mm×20mm i.d.),流动相为甲醇2水(75∶25v/v);流速:15mL/m in;波长:254n m;进样量:2mL。
Cat o Fr oytl og等[8]就黑醋栗(blackcurrant)中的花青苷(anthocyanins)进行了分离研究,实验中首先将甲醇提取物浓缩后萃取,再经过色谱柱后将收集到总的花青苷样品加载到硅胶色谱柱,将收集的组分通过PHP LC进行一次性的分离制备,其原理是根据分子量的大小进行分离的,他们还将所得到的纯品用UV/V is在分析型HP LC进行在线鉴定并用核磁确定结构式。结果证明,在分辨率方面T oyopearl HW2 40F填料明显优于Sephadex LH220,而最引人注目的是Toyo2 pearl HW240F填料随着流速度增加分辨率增加。
M aurizi o Fi orini等[9]也用PHP LC制备了草莓(stra wber2 ry)、接骨木果(elderberry)、茄子(eggp lant)、小萝卜(radish)及enocyanin等中的花青苷(anthocyanins),并与标准品做参照,对每一种植物中的花青苷的制备过程都做了优化。他们还用UV/V is对所有纯化了的花青苷进行定性,并用M S和NMR测定了酰化的花青苷的结构。每种植物都经过一定的预处理步骤后,加载到离子交换树脂的色谱柱洗脱,再用于PHP LC的分离。所用色谱条件为C18柱,流速为3mL/m in,流动相为含5蚁酸(20℃时pH值为2.2)和甲醇按照分离的需要设成不同的比例等度或梯度洗脱,不同植物的进样量为5～18mg不等,紫外检测波长为500～530n m,最后将制备出的物质用MS和NMR鉴定结构。
J.2P.Goiffon等[10]在分析越桔(bilberry)、黑醋栗(blackcurrant)、草莓(stra wberry)、黑莓(blackberry)、黑樱桃(black cherry)、欧洲酸樱桃(morell o)、悬钩子(ras pberry)及接骨木(elderberry)等的红色果实中的花青苷(anthocyanins)时也用到了半制备HP LC,并在实验中研究了影响HP LC保留时间的不同参数,尤其对于配糖基(aglycone)和糖(sug2 ars)可以分离和定量。并研究了流动相组成的影响及解决了共洗脱问题。
2.1.3 其它糖类的衍生物的分离制备
不同的烟草(t obacco)属和栽培植物及西红柿(t omat o)植物的根由于灌木菌根(mycorrhizal r oots)中的真菌的集群作用导致了几种糖基化C13环己烯酮衍生物(glycosylated C13cycl ohexenone derivatives)的生成,在这篇文章中W alter Maier等[11]用HP LC分析比较了植物的菌根和非菌根,并用PHP LC对其中的八种C13衍生物进行了制备分离。他们将
菌根用80的乙醇溶液提取离心取上清液用于HP LC的分析。在PHP LC的过程中,先将根用乙醇水溶液提取,悬浮物离心烘干溶于水后,离心取上清液用于PHP LC。色谱条件为:C
18
色谱柱(250mm×40mm i.d.10μm),流速11m l/ m in,流动相为0.4的甲酸水溶液(A),甲醇(B),梯度为前10m in从30B到50B,紧跟着是50B的等度洗脱。最终将PHP LC分离的几种衍生物用M S和NMR鉴定为62(92羟丁基)21,1,52三甲基242环己烯232酮的单、双或三葡萄糖苷(mono2,di2and triglucosides of62(92hydr oxybutyl)21,1,52 tri m ethyl242cycl ohexen232one)和62(92羟丁基)21,52二甲基242环己烯232酮212羧酸的单葡萄糖苷(monoglucosides of62(92 hydr oxybutyl)21,52di m ethyl242cycl ohexen232one212carboxylic acid)和62(92羟丁基)21,12二甲基242环己烯232酮252羧酸(62(92hydr oxybutyl)21,12di m ethyl242cycl ohexen232one252car2 boxylic acid)。结果表明与诱导的环己烯酮衍生物相比,香豆素东莨菪苷原(cou marins scopoletin)和它的葡萄糖苷的积累大大的被抑制了。
Naoki Noda等[12]分离和纯化了来自海洋环节动物N eanthes diversicolor中的5种糖鞘脂(glycos phingoli p id)。最终的单一化合物用制备薄层、反相PHP LC等制备出来,并用MS及NMR测定了它们的结构式。最后指出它们是半乳糖部分(galact ose moiety)中携带磷酸胆碱(phos phocholine gr oup)的单半乳糖神经酰胺(monogalact osyl cera m ides),其中之一包含有奇数的脂肪酸。
Tom s Rezanka等[13]用PHP LC对小球藻(alga Chl orella kessleri)中包含三至五糖苷酰基鞘氨醇(tri2t o pentaglycosyl2 cera m ides)的6个部分进行了制备分离,然后用反相HP LC 将每个糖苷酰基鞘氨醇(glycosylcera m ide)部分进一步分为12个部分,并用气相色谱(GC)和M S进行鉴定。最终确定了400多种糖苷酰基鞘氨醇(glycosylcera m ides)分子结构式。
E.Andria mboavonjy等[14]用PHP LC对糊精(dextrins)进
行了制备,其中所用的流动相为水,色谱柱为C
18
柱,他们是通过把α2环糊精(α2cycl odextrin)转化为葡萄糖苷(gluco2 sides)得到糊精。由于所用的流动相很简单,糊精的回收率稳定。
2.2 PHP LC对黄酮类物质的分离纯化
黄酮类化合物广泛存在于自然界中,是一类重要的天然有机化合物,其不同的颜色为天然色素家族添加了更多的色彩,黄酮类化合物主要包括黄酮、黄酮醇类、黄酮苷类等等。
Christian W.Huck等[15]将报春属(Pri m ula veris)的花用甲醇粗提,再用氧化铝正相固相萃取法得到粗总黄酮(G12 G6),然后将总黄酮的混合物依次通过正相中压色谱、制备正相薄层色谱及反相PHP LC对其进行分离制备,其中正相中压色谱除去总黄酮中的大部分杂质,并将其粗分为G1、G2
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\G3、G4、G5、G6,用制备正相薄层将其每种组分进一步净化,并将G2\G3分开,再用PHP LC将其中的6种黄酮完全分离制备出来。并且在制备分离之前他们还将黄酮的粗提物分别用正相和反相以紫外和荧光检测器检测,对其中的5种黄酮进行确定,从中发现用反相HP LC作为纯物质的分析手段更为可取。当最终得到6种纯净的产物之后,他们又用质谱对G3、G4进行鉴定。为了工业上可以正确的鉴定这6种黄酮,又在实验中采用了HP LC2M S,成功的对6种黄酮做出鉴别。
研究证明在盐渍的橄榄核果(olive drupes)中的酚类和类黄酮类化合物(phenolic and avonoid compounds)具有抗氧化性和抗癌活性,R.W.Owen等[16]将橄榄皮用索氏提取器除去脂肪类物质,再用甲醇提取及甲醇的水溶液进一步处理后溶于乙腈中,用己烷提取除去脂类物质,乙腈溶液干燥后的剩余物溶于甲醇中,然后用于半制备HP LC的制备分离。最终对物质定性时,用的是UV、M S及NMR。其中用半制备HP LC制备酚类化合物时,色谱柱为C18反相柱(250mm×10 mm i.d.),流动相A为2的醋酸水溶液,流动相B为甲醇,梯度洗脱,检测器为278n m和340n m UV双波长检测器,酚类化合物的量用标准物质的标准曲线计算得到。
2.3 PHP LC对色素的分离纯化
PHP LC在叶绿素的分离方面的应用也很多,如M.Isabel M inguez2Mosquera等[17]在空气中的氧气存在下通过碱性处理得到了脱镁叶绿素a和b(pheophytins a and b)的氧化产物,并通过正相薄层和半制备HP LC进行分离,并用UV2V is 和M S鉴定为31,322二脱氢21512羟基21512羟基2玫红二氢卟酚2152乙酸(31,322D idehydr o21512hydr oxy21512hydr oxy2rhodo2 chl orin2152acetic acid)δ2内酯21522甲基2172phytyl酯(a和b) (δ2lact one21522methyl2172phytyl ester(a and b))和31,322二脱氢2玫红二氢卟酚2152二羟乙酸21732叶绿基酯(a和b)(31, 322D idehydr o2rhodochl orin2152glyoxylic acid21732phytyl ester(a 和b))。化合物与二价铜络合后,用反相离子对HP LC进行分离,并报告了铜络合物的正相薄层和反相离子对HP LC的色谱特征,用二极管阵列检测器在线给出了其相关的UV2 V is光谱。其中半制备HP LC的色谱条件为:C18色谱柱(250 mm×10mm i.d.),流速为7.5mL/m in,流动相为:(A)水2离子对试剂2甲醇(1∶1∶8v/v)和(B)丙酮2甲醇(1∶1v/ v),离子对试剂为0.05mol/L四丁基醋酸铵和1mol/L醋酸铵的水溶液,进行梯度洗脱。
H.I noue等[18]通过反相HP LC测定叶绿酸铜(II)(Cop2 per(II)chl or ophyllin),叶绿酸铜(II)包括脱镁叶绿酸铜(II) a(copper(II)pheophorbide a),氯化铜(II)e6(copper(II) chl orin e6),香茅酸铜(II)g7(copper(II)rhodin g7)及氯化
铜(II)e
4(copper(II)chl orin e
4
)时也用到了PHP LC,他们
先用半制备HP LC对其进行了分离制备,而后叶绿酸铜(II)的组成用反相HP LC进行了测定。最终说明了用反相HP LC 对叶绿酸铜钠(s odiu m copper(II)chl or ophyllin)进行检测是可行的。
H idenari I noue等[19]用半制备HP LC分离了叶绿素Zn (II)a and b(zinc(II)chl or ophyll a and b),其中色谱柱为C
18柱,流动相为甲醇2丙酮(75∶25V/V),检测波长为425n m。R.Rauscher等[20]为了研究类胡萝卜素(car otenoids)的抗诱变性,他们对杏(ap ricots)、胡萝卜(carr ots)、西红柿(t oma2 t oes)、桔子(oranges)、布鲁塞尔苗芽(brussels s p r outs)、黄2红胡椒(yell ow2red peppers)等的水不溶物的己烷提取物用半制
备HP LC做了分离制备,从中分离出所需要的类胡萝卜素等
物质,所用的色谱柱均为C
18
反相柱,流动相为乙腈2甲醇2氯仿(47∶47∶6,v/v/v),流速为6.3m l/m in,进样体积为1000μL。结果表明,己烷提取物中的抗诱变活性主要来自于类胡萝卜素(car otenoids),蕃茄红素(lycopene),叶黄素(xanthophylls)和叶黄素酯(car otenolesters)。
2.4 PHP LC对酸性物质的分离纯化
Jung Il Ki m等[21]也研究了色谱柱填料粒度大小对韩国绿茶(Korean green tea)儿茶酸(catechin)中的EGCG(ep igal2 l ocatechin gallate)的分离情况的影响。实验中用C18色谱柱(250mm×22mm i.d.),色谱填料粒度为15,40263,and150μm,流动相的组成为0.1的醋酸水溶液2乙腈2甲醇2乙酸乙酯,并等度洗脱,进样量为400μL,流速随着粒径的增加提高,结果表明随着填料粒径的增加,虽然分离度和柱效变差,但是对于EGCG的分离并没有太大的影响,只有在粒径为150μm的填料上的洗脱使EGCG和EC(ep icatechin)一同洗脱下来,不过,由于EGCG和EC都有很强的抗氧化性和抗癌性,因此粒径为150μm填料的制备色谱可以用来生产抗氧化和抗癌作用的EGCG和EC的混合物。
Prabha Painuly等[22]用HP LC和结晶作用对芥子酸(erucic acid)纯化,芥子酸(C22:1脂肪酸)对于治疗脑白质肾上腺营养不良症(ALD)是有用的。它是通过降低血液中的长链脂肪酸(VLCF A s)起作用的,而长链脂肪酸能摧毁神经髓鞘质的外皮因此对身体有害。利用反相HP LC纯化芥
子酸,所用的色谱柱为C
18
柱(10～20μm,120!),流动相为乙醇2水,芥子酸的回收率为69,用GC检测其纯度超过97,实验中发现饱合脂肪酸VLCF A s的量处于治疗ALD的限度之内,但产率很低。而如果用甲醇2水代替乙醇2水做流动相,虽然芥子酸的回收率为65,稍有降低,但是产率提高了9倍,而纯度为98,也有一定的提高。在PHP LC以后,在低温下进行结晶,产率进一步提高142,这样比用乙醇2水做流动相提高22倍,结晶的芥子酸纯度达到99。2.5 PHP LC提取分离生物碱
生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮化合物,是许多中草药的重要有效成分。它们在中性或酸性条件下以正离子形式存在,通常人们用阳离子交换树脂从其提取液中富集分离生物碱。但是由于植物中所含的生物碱成分复杂,采用传统的方法很难从总生物碱中通过一步法分离纯化其中组分,而用PHP LC可以达到纯化分离的目的。例如Jean2Pierre Rey[23]等从虞美人(Papaver rhoeas L.)花瓣的总生物碱中用硅胶色谱柱初步分离总丽春花宁(rhoeagenine)
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和总异丽春花宁(is orhoeadine),再用PHP LC进一步分离,所用的色谱柱为L i Chr os orb Si60柱,流动相为包含0～5(v/ v)甲醇的氯仿溶液,先用等度接着用线性梯度洗脱。用分析型HP LC定性异丽春花宁和丽春花宁。在总碱中得到3种不同的异丽春花宁分别为71.1,42.4,0.5mg/g;而3种丽春花宁为(rhoeagenine)是29.7,424.2,117.3mg/g。
2.6 PHP LC对萜类物质的分离纯化
由于真菌polaris sorokiniana在植物上形成的最多且活性最大的植物毒素为前长蠕孢(菌)醇p rehel m inthos por ol (C
15
H22O2),它是一种疏水性的热不稳定的倍半萜,H.Carl2 s on等[24]从无性孢子(conidia),菌丝(hyphae)及周围环境中用硅胶“flash”色谱及PHP LC检测并制备了前长蠕孢(菌)醇p rehel m inthos por ol。纯度控制用正相和反相HP LC及R I 检测器检测。并用PHP LC2MS得到了在m/z219处的5ng 毒素。
2.7 PHP LC对其它物质的分离纯化
PHP LC除了以上的应用以外,它也在其它天然产物方面得到了广泛的应用,如单宁质磷脂等。
Duk Hui Kang等[25](2002)在用PHP LC分离大豆磷脂(s oybean phos pholi p ids)的过程中,比较了用W aters生产的Nova2Pak色谱柱(50mm×3.9mm i.d.,4μm)和自制的色谱柱的差异,其中自制的色谱柱采用了粒度为15,5220,252 40,和40263μm的色谱填料。实验证明用Nova2Pak色谱柱能将大豆磷脂中的P I(phos phatidylinosit ol),PE(phos phati2 dylethanolam ine)和PC(phos phatidylcholine)很好的分离,而自制的色谱柱用更小的粒度为15μm并且均匀的色谱填料有利于对磷脂中的P I,PE和PC的分离。在实验中所用的流动相为己烷2异丙醇2甲醇,并采用了一定的梯度,流速为1.5 mL/m in,洗脱时间为25m in,紫外检测波长为208n m和210 n m的双波长检测,进样量为10μL。
Yong An Jung等[26]研究了从韩国桔皮(Korean orange peel)中提取和纯化紫苏基醇(perillyl alcohol)的工艺,他们首先在20～60℃将桔皮用溶剂搅拌3h提取,再浓缩,将浓缩物用水2氯仿萃取,将水相浓缩物加载到柱色谱,并分段用GC分析,后又用PHP LC制备其中的醇,其中PHP LC所用的
色谱条件为:C
18
柱(300mm×3.9mm i.d.15μm),流动相为水2甲醇2乙腈,进样量为100μL,流速为0.5mL/m in。在这篇文章中他们对各步的优化都做了较详细的描述。
Tai2Sun Shin等[27]从大豆油(s oybean oil)和小麦胚芽(wheat ger m)的混合物中分离了四种生育酚(t ocopher ols),从小麦麸皮(wheat bran)和橡胶胶乳(rubber latex)中分离出四种三烯生育酚(t ocotrienols),并做了定量测定,他们在分离制备的时候用的是半制备HP LC,色谱柱为硅胶柱(250 mm×10mm i.d.10μm),流动相为含2215四氢呋喃的己烷,纯化产物用M S来鉴定,浓度通过吸收系数确定,回收率从54283,用GC和HP LC检测纯度达到99以上。
S.Gi ovanni De Si m one等[28]用离子对PHP LC从桑科植物(A rtocarpus integrifolia)中分离了植物凝集素lectin jacalin,他们选用了最优的梯度洗脱参数,快速对α2andα′2jacalin 进行了分离纯化,色谱柱为聚丙烯酸酯(polyacrylate)2DE AE 柱,这两种分离出来的多肽用端基氨基酸排序法(N2ter m inal am ino acid sequence analysis)确定了结构。
Ezi o Bolzacchini等[29]用免疫亲合式色谱(I m munoaffinity chr omat ography)和离子对HP LC对梯牧草(Phleum pratense)的花粉提取物进行了纯化,梯牧草花粉过敏源通过硅胶过滤离子交换色谱(HP I EX)和排阻色谱或者是通过连续的胶体过滤层析2免疫亲合式色谱(gel filtrati on2i m munoaffinity)和HP I EX进行纯化制备,实验证明后者用于制备更为合适的。夏栎(Quercus r obur L.)木心中含大约10的鞣花单宁质(ellagitannins),Augustin Scalbert等[30]用Sephadex LH220和反相高效液相色谱对其中五种鞣花单宁质进行了分离制备,并对其中的两种鉴定为栗木鞣花素(castalagin)和栎木鞣花素(vescalagin)。
3 应用前景
综上所述,在天然产物的实际分离过程中,如果在粗提物中存在相差很大的几类化学成分,可以用传统的分离方法如萃取等将其分类分离开,再针对每一类物质进行进一步的分离,在这个过程可以要用到各种柱色谱、薄层色谱等,最后再用PHP LC进行分离,其分离的基本指导原则可以归纳为先分离性质差别大的物质,再分离相似的物质,最后用最精密的手段分离极相似难分离的成分,只有这样才可能达到化合物每一成分的完全分离。因为制备高效液体色谱具有分辨率高、检测方便、收集产物准确等特点,因而它在天然产物提取分离研究与生产中的应用必将日益广泛。一般而言,在色谱技术用于天然产物的制备时,用制备型色谱对样品进行分离和纯化,用分析型色谱对有效成分进行检测和鉴定,并进行产品质量控制。如果需要确定化合物的结构式,可以考虑使用质谱、核磁等方法。
我国的天然产物分布范围广,种类繁多,而对它们的组分结构与生理活性关系的研究以及对天然产物的综合利用是当今非常感兴趣的课题。这就要求我们在对其中成分的分离过程中做到至纯至微,为此我们必须将各种分离手段结合起来,并最终用高分辨率的仪器将其一一分离鉴定。在此过程中,制备型高效液相色谱由于具有分辨率高等特点,在将来会成为在天然产物分离方面的主要手段之一。
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