Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:
一、原理
二、分类
i.放射自显影
ii.底物化学发光ECL
ECF
iv.底物DAB呈色
三、主要试剂
四、主要步骤
五、实验常见的问题指南
1.参考书推荐
2.针对样品的常见问题
3.抗体
4.滤纸、胶和膜的问题
5.Marker的相关疑问
6.染色的选择
7.参照的疑问
8.缓冲液配方的常见问题
9.条件的摸索
10.方法的介绍
11.结果分析
一、原理
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、分类
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+
鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
三、主要试剂
1、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。
2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。
3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。
4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL。
5、 TEMED原溶液N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.
6、 SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
7、 Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。8、转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。
9、丽春红染液储存液：丽春红S 2g 三氯乙酸30g 磺基水杨酸30g 加水至100ml 用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。
10、脱脂奶粉5%(w/v)。
11、 NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。
12、 Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。
13、 Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。
14、过氧化物酶标记的第二抗体。
15、 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。
16、 BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。
17、 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。
18、 100mmol/L NaCl。
19、 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/L EDTA。
（可以参看分子克隆）
四、主要步骤
主要包括以下4个基本步骤
1.样品制备
原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。
1．培养细胞或药物处理。
2．弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。
3．加入1X SDS样品缓冲液(6-well plate, 100 μl /w或75 cm2 plate, 500-1000 μl/瓶)，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。
4．超声10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。
5．煮沸样品5 minutes。
6．离心12000g, 5 min，取上清。
7．电泳分离：上样15μl~20 μl 至SDS-PAGE 胶( 10 cm x 10 cm)电泳。
如要定量检测某蛋白的表达水平，应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/ 100 mm dish/ 150 cm2 flask)裂解细胞，收集裂解液至离心管中，在振荡器上混匀4～
15min，14000g离心15min（4℃），弃沉淀，用Bradford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度以调整上样体积和上样量，进行Western杂交时还需设置内或外参照，通常用beta-actin。
注意：一般上样20~30 μg已足够，如待检蛋白为低丰度蛋白，可加大上样量至100μg，但电泳条带易拖尾，可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。
2.电泳分离（参照SDS-PAGE电泳方法）
3.转膜
杂交膜的选择是决定Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜。NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的NC膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45μm和0.2μm两种规格的NC膜。大于20kD的蛋白可用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如用0.45μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象。PVDF膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。但PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5秒钟。
蛋白质常用的转移方法主要有两种：槽式湿转和半干转移。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。以下为槽式湿转的操作步骤。
1. 将胶浸于转移缓冲液中平衡10min。
注意：如检测小分子蛋白，可省略此步，因小分子蛋白容易扩散出胶。
2. 依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入转移缓冲液中平衡10min。如用PVDF膜需用纯甲醇浸泡饱和3-5秒钟。
3. 装配转移三明治：海绵?3层滤纸?胶?膜?3层滤纸?海绵，每层放好后，用试管赶去气泡。切记：胶放于负极面（黑色面）。
4. 将转移槽置于冰浴中，放入三明治（黑色面对黑色面），加转移缓冲液，插上电极，100V，1h（电流约为0.3A）。注意：应再次检查三明治和电极是否装配正确，电源是否接通。
5. 转膜结束后，切断电源，取出杂交膜
4.免疫杂交与显色
1．用25 ml TBS 洗膜5min，室温，摇动。
2．置膜于25 ml 封闭缓冲液中1h, 室温，摇动。
3．15ml TBS/T洗3次（5 min/T）。
4．加入合适稀释度的一抗，室温孵育1-2h或4°C过夜，缓慢摇动。
5．15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）。
6．加入合适稀释度的碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗，室温孵育1h，缓慢摇动。
7．15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）。
8．15 ml TBS洗1次。
9．蛋白检测(显色法或发光法，按相应试剂说明操作)。
注意事项：
1．操作中戴手套，不要用手触膜。
2．PVDF膜在甲醇中浸泡时间不要超过5秒。
3．如检测小于20kD的蛋白应用0.2μm的膜，并可省略转移时的平衡步骤。
4．某些抗原和抗体可被Tween-20 洗脱，此时可用1.0% BSA代替Tween-20。
5．关于封闭剂的选择：5%脱脂奶/TBS or PBS: 能和某些抗原相互作用，掩盖抗
体结合能力；0.3~3% BSA in PBS：低的内源性交叉反应性。
6．如用0. 1% Tween 20、0.02% NaN 3 in PBS or TBS作封闭剂和抗体稀释液，抗体检测后可进行蛋白染色。
如要同时检测大分子量和小分子蛋白，最好用梯度胶分离蛋白。
五、实验常见的问题指南
根据问题的类型主要分成以下几类（以下资料权作参考，请勿盲目模仿！）：
1. 参考书推荐
A. 对初学者看什么资料比较好？
解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual，wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。
2. 针对样品的常见问题
B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？
解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查Western Blot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。
E. 同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗？
解答：当然可以，有的甚至可以同时测几十种样品。
F. 如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？
解答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上
NaF去抑制磷酸化酶的活性。
G. 我的样品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上，就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在，只是颜色变淡了，有什么办法可以解决？
解答：你可以加大上样量，没有问题，还有转移时你可以用减少电流延长时间，多加5－10％甲醇。
H. 想分离的蛋白是分子量260kd的，SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适？积层胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作Western Blot吗？
解答：260kd的蛋白不好做，分离胶用6％，Stacking Gel 3.5％。
I. 如果上样量超载，要用什么方法来增加上样量？如果需要加大上样量使原来弱的条带能看清楚。
解答：可以浓缩样品，也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超载30％是不会有问题的。如果已经超了不少了，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，可以试试1.5mm的comb。
J. 蛋白变性后可以存放多久？
解答：－80℃，一两年没有问题。最关键两条：不要被蛋白酶水解掉；不要被细菌消化掉(也是被酶水解了)。
K. 我所测定的蛋白分子量是105KD，按理说分离胶应当采用7.5%，但我所查资料却要求分离胶和浓缩胶均采用11％的配方，不知为何？
解答：上述您提到的两种凝胶均可以使用，因为105ＫＤ的蛋白在上述两种胶的线性分辨范围内，但需注意条带位置。
L. 接下来我准备采用DAB显色技术，二抗是生物素化的多克隆抗体，三抗是亲和素生物素体系，不知采用这样的方案后，封闭液是否要作调整，能否再用5％的脱脂奶粉呢？好像有资料说脱脂奶粉会影响亲和素生物素的生成，是吗？
解答：不能使用脱脂奶粉，因为脱脂奶粉中含生物素，用ＢＳＡ代替应该好一点．
M. 还有一问题，一般一次上样的蛋白总量是多少，跟目的蛋白的表达量有关系吗？
解答：Western Blot一般上样30－100微克不等，结果跟目的蛋白的丰度、上样量、一二抗的量和抚育时间都有关系，也与显色时间长短有关。开始摸条件时，为了拿到阳性结果，各个步骤都可以量多一点时间长一点，当然背景也就出来了。要拿到好的结果，如果抗体好的话比较容易，抗体不好的话就需要反复地试了，当然有的不适合Western Blot的怎样做也不行。所以拿到好的结果不容易。
N. 做组织样品的western的时候，处理样品有什么诀窍吗？还有，您用过大牛血清做封闭剂吗？浓度如何？效果是不是比BSA好一点？
解答：必须进行研磨、匀浆、超声处理，蛋白质溶解度会更好，离心要充分，膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要分步抽提(超速离心)。还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入ＰＭＳＦ和蛋白酶抑制剂cocktail），封闭剂一般5%脱脂奶粉较常用。如果一抗为多克隆抗体，使用ＢＳＡ也是不错的选择。
O. 您是否可以介绍一下大分子量蛋白200KD，在做western要注意什么呢？
解答：做200kd蛋白的Western Blot时要注意，分离胶最好选择>7%的；剥胶时要小心；转移时间需要相应延长；要做分子量参照（否则出现杂带不知道如何分析）。
P. 有什么方法可以提高上样量？
解答：可以浓缩样品；增大上样体积来增大上样量。
Q. 我要检测的目的蛋白是分子量大概为42kd的膜蛋白，膜蛋白提取可不可以不用到超速离心机，有没有直接用低温高速离心机就可以的提到膜蛋白的方法，42kd的蛋白分子量算不算大？
解答：如是需要提取膜蛋白，（而不是只需要提取膜蛋白），可以用Ripa buffer
提取膜蛋白和胞浆蛋白，用这个做Western Blot就可以了。如果是非要只提取膜蛋白就要用到超速离心机。42kd 不算大，也不算小，所以，可以按照一般的转移方法实施。
R. 蛋白的上样量有没有什么具体的要求？
解答：上样量要根据实验的要求来定，如果要求是定量和半定量的Western Blot 则上样量要均等，如果只是要定性，则没有太大的关系，尽量多上就行了，但是不要超过0.3μg/mm2。
S. 一抗，二抗的比例是否重要？
解答：比较重要，调整好一抗，二抗的比例，可以去掉部分非特异的本底。
3. 抗体
做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？
解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。
U. 同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜，一抗孵育也是过夜的，若封闭也过夜的话就要四天才看的到结果了。
解答：不同抗体，即使是同一公司的抗体，其最佳的抗体稀释度也是不一样的，需要你实验摸索。我觉得转膜过夜好像没有必要吧，转膜的目的也就是将蛋白转到膜上就行啦，何必浪费时间呢。至于具体的转膜时间，还要看你的目的蛋白分子量的大小；转膜的设备，是半干式，还是湿式。一抗当然可以过夜，如果你想所短Western Blot时间的话，可以增高一抗的孵育温度，我们实验室一般37度，两小时就足够了；你可以参照抗体说明书。至于一抗和二抗得稀释度，你可以一抗1：1500；二抗1：20000试试。另外建议你洗膜时，多洗几次，最好是在封闭；一抗和二抗后至少是5x5min，跑一张好膜不容易，多尽点心吧，这样不会浪费你的时间，只会节省你的时间！
V. 免疫组化和Western Blot可以用同一种抗体吗？
解答：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。（限于单抗）
W. Western Blot 中抗体的重复应用问题
解答：抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。
4. 滤纸、胶和膜的问题
X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？
解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。
就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－
100μg/cm2，对于200bp的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA 能力可达125－300μg/cm2。
就温度适应性而言：尼龙膜经烘烤或紫外线照射后，核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合；硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA，结合不牢固；PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。
就韧性而言：尼龙膜较强；硝酸纤维素膜较脆，易破碎；PVDF膜较强。
就重复性而言：尼龙膜可反复用于分子杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来；硝酸纤维素膜不能重复使用；PVDF膜可以重复使用。
Y. 在做Western Blot时，PBDF膜用甲醇浸泡的目的？
解答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。
Z. 检测磷酸化的JNK 和非磷酸化的JNK可以在同一张膜上吗？
解答：可以。
AA. 转膜后经丽春红染色的条带，为什么大蛋白分子的一端（即点样空的一侧）的转膜好象不是很好，为什么？
解答：这是正常的，大分子的蛋白转移的慢，你延长转移时间和电流，大分子一端就会好的多，但是小分子的就有可能会变淡。
BB. 我想问您裂解细胞用三去污裂解法，还是用上样缓冲液？
解答：用上样缓冲液，这样有几个好处，可以提取总蛋白，同时又可以让磷酸化酶失活。
CC. 采用tank system有什么讲究？
解答：建议低电压，长时间，（一般tank System 用衡压好点），如28V 14－16hrs。
DD. 做HSP WESTEN定量，同样的抗体免疫组化能做出，而WESTEN却不能？解答：这多半是抗体的问题，要看抗体的说明，是否能做Western Blot和IHC。
EE. 膜一般要如何处理？
解答：一般用甲醇泡泡就可以了。
FF. 如果是6×8转印膜，要加多少一抗？
解答：一抗的稀释度是有说明的，根据你的一抗看看就知道了，但是那么大的膜孵育体积一般最少为3－5ml。
GG. 上下槽缓冲液有何要求，怎样才能达到最佳效果。
解答：无要求。
HH. 跑电泳的时候配的胶总是“缩”是什么原因呢？是有的成分不对吗？
解答：没什么问题，就是你胶里的水分被蒸发了。过夜时拿保鲜膜包起来，在里面加点水保持湿度就可以了。如果过夜，胶里的水分被蒸发，采用保鲜膜包上也可以；也可能母液（30%聚丙酰胺）有问题，你可以重新配制一份观察；能够替换的试剂，尽量换一下，选用好的试剂，避免找问题麻烦。脱色液中甲醇的含量太高也会造成胶缩。
II. 膜、滤纸、胶大小有何讲究？
解答：如果是用的是半干转，顺序为：阴极－》滤纸－》胶－》膜－》滤纸。滤纸的长宽分别比胶小1－2mm，而膜的长宽分别比胶大1－2mm。绝对禁忌：上下两层滤纸因为过大而相互接触，这样会短路，电流不会通过胶和滤纸。
JJ. 蛋白质的分子量跨度很大，如要分离小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好吗？
解答：这么广的分布不好转移，一般建议：21kd和66kd可以一起转，12％SDS-PAge，湿转36V ，3－5hrs就可以了，可以根据你实验室的经验调节；170kd 用7%SDS－page，48V 10hrs－16hrs。
KK. 不能很好地将大分子量蛋白转移到膜上，转移效率低怎么样解决？
解答：可以考虑：转移缓冲液中加入20%甲醇（是指终浓度）(优化的转移缓冲液，可以参考《蛋白质技术手册》)，因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和NC膜的结合能力，甲醇可以防止凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间；转移缓冲液加入终浓度0.1%SDS，也是为了增加转移效率；用优质的转移膜，或使用小孔径的NC膜（0.2微米）；使用戊二醛交联；低浓度胶，如低至6％。太大时还可以考虑用琼脂糖胶；提高转移电压／电流；增加转移时间。
LL. 如何选择最合适的蛋白杂交膜？
解答：蛋白质印迹杂交是分子生物学实验中极为常用的一门技术。选择质量上层、合乎要求、方便适用的杂交膜是决定这项实验成败的重要环节。根据杂交方案、被转移生物大分子的特性以及分子大小等等因素，我们要量体裁衣，从杂交膜的材质、孔径和规格上都要做出合理的选择。
硝酸纤维素膜：硝酸纤维素膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，虽然这其中的机制还不是十分清楚，但由于硝酸纤维素膜的这个特性，而且易于封闭非特异性结合，从而得到了广泛的应用。在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，要选择不同孔径的硝酸纤维素膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。因此，我们通常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤维素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如果用0.45μm 的膜就会发生“Blowthroμgh”的现象。从膜的质地上来看，最重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关，市场上有些硝酸纤维素膜通常会还有大量的醋酸纤维素，因而降低了蛋白的结合量。S&S公司采用的是100%纯度的硝酸纤维素，保证了最大的蛋白结合量，可达80-150μg/cm2。由于100%的纯度，因而也大大减少了非特异性的结合，降低杂交背景，无需高严谨度的洗脱步骤。其次，膜的强度和韧性也是需要考虑的因素。常规的硝酸纤维素膜比较脆，漂洗一两次就会破损，不能反复使用。
PVDF转移膜：PVDF是一种高强度、耐腐蚀的物质，通常是用来制造水管的。PVDF膜可以结合蛋白质，而且可以分离小片段的蛋白质，最初是将它用于蛋白质的序列测定，因为硝酸纤维素膜在Edman试剂中会降解，所以就寻找了PDVF 作为替代品，虽然PDVF膜结合蛋白的效率没有硝酸纤维素膜高，但由于它的稳定、耐腐蚀使它成为蛋白测序理想的用品，一直沿用至今。PVDF膜与硝酸纤维素膜一样，可以进行各种染色和化学发光检测，也有很广的适用范围。这种PVDF
膜，灵敏度、分辨率和蛋白亲和力在精细工艺下比常规的膜都要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。但PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇进行浸泡饱和1-5秒钟。
离子交换型转移膜：硝酸纤维素和PVDF膜是靠疏水作用结合蛋白的，还有一类膜是根据离子交换的方式结合生物大分子的。由DEAE（二乙氨乙基）修饰的纤维素制成的DEAE阴离子交换膜同样可以作为蛋白质印迹的固相支持物。DEAE 可以有效的结合阴离子基团，包括那些高于其等电点的蛋白质。在pH10以下，DEAE基团都能带电荷，在低离子强度的转移液中结合蛋白分子。其最适的pH 环境为5-7。DEAE膜可以用于蛋白多糖、病毒、酶以及血红蛋白的研究。这种0.45μm孔径的DEAE膜，除了可以做Western Blotting外，还可以用于核酸结合研究。
还有一种离子交换型膜是羧甲基（CM）修饰的纤维素膜，它可以结合蛋白和多肽分子，以及其他的一些带正电荷的样品，最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来，用于氨基酸系列分析或微测序。
5. Marker的相关疑问
MM. 我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，请问什么原因？怎样改善？胶用过8％，10％，12％，都是这样。marker是新买的。
解答：一般来说，是小分子量Marker跑走了，增加胶浓度或减少电泳时间试试看。当然梯度胶也是不错的选择。
NN. 用的是Roche molecular Biochemicals公司的由100kd，75kd，45kd，30kd，20kd，10kd组成的marker。开始做Western Blot时还能够看到marker，当然也仅能看见其中最多三条带。用80V进行SDS-PAGE电泳，用恒压10V45min转印的。前几次做Western Blot时没有进行丽春红染色，但尽管用了此方法也仅能看到marker有一条大约是30KD的条带出现。再就是把70KD和130KD两个目的蛋白同时在一块胶上进行分析，用培养基样品进行分析，没有用间接法，而是
直接用融合蛋白C端的V5表位的酶联抗体（Anti-V5-HRP）。但就是出不来结果，我很茫然。谢谢您过给予指点！
解答：1、“我用的是Roche molecular Biochemicals公司的由100kd，75kd，45kd，30kd，20kd，10kd组成的marker。开始做Western Blot时还能够看到marker，当然也仅能看见其中最多三条带。”有的时候，Prestained Marker 放久了效果就会变差，电泳是条带不清晰，扩散。但是你的问题可能还有其他的方面的问题，可能是蛋白跟膜结合的不紧密。转移是多加点甲醇。
2、“前几次做Western Blot时没有进行丽春红染色，但尽管用了此方法也仅能看到marker有一条大约是30KD的条带出现。”转移时半干法建议用恒流，你这样的也就30kd-50kd的转移地比较好。
3、“再就是把70KD和130KD两个目的蛋白同时在一块胶上进行分析，用培养基样品进行分析，没有用间接法，而是直接用融合蛋白C端的V5表位的酶联抗体（Anti-V5-HRP）。”
是否检测了表达量，二抗是否是好的，你做了阳性对照？你要做这么大的蛋白最好转移时间延长到1.5hrs。
6. 染色的选择
OO. Western Blot哪种染色好？
解答：（1）阴离子染料是最常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达到1.5μg，考马虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去，以便进行随后的氨基酸分析。缺点是：溶剂系统的甲醇会引起硝化纤维素膜的皱缩或破坏。不能用语正电贺的膜。灵敏度低。
（2）胶体金，灵敏度高，检测范围可到pg级，但染色比稳定。
（3）生物素化灵敏度位于1、2之间，可用于任何一种膜。
7. 参照的疑问
PP. 是否Western Blot实验半定量一定要加ACTIN内参？
解答：对于发表文章的实验最好加内参，实验严谨。
QQ. 用BANDSCAN分析结果行吗？
解答：分析一般的结果没问题。
RR. 核内抗原Western Blot内参选择什么合适？
解答：可以选用组蛋白，组蛋白在细胞核中的表达是很稳定的，有很多都可以当成内参，在网上查查就可以选出你要的内参。
SS. 转膜时采用电流是否比电压准确，是否根据0.8mA/cm2，一般1小时左右？解答：不是的，半干法推荐用恒流，一般根据目的蛋白的大小来确定电流和时间。
TT. 做半定量人卵巢癌细胞系的Western Blot，内参B-actin，GAPDH，那个好？解答：选用beta-actin就可以。
8. 缓冲液配方的常见问题
UU. 转膜后的脱脂奶粉封闭时，所用的防沫剂A是什么？还有Tris-HCl是不是就是用Tris和盐酸配出来的呢？
解答：转膜后的脱脂奶粉封闭液是5%的TBST脱脂奶粉。Tris－HCl就是Tris 盐用HCl调ph值，配置而成。
VV. 准备做大鼠脑子的Western Blot，蛋白质位于细胞核中，请问此蛋白质的提取液及操作方法是？每一步都必须要低温吗？这种蛋白质是磷酸化的蛋白质，操作时如何防止去磷酸化的发生？
解答：可以用提取总蛋白的buffer提核蛋白，可以加NaF防止去磷酸化。
WW. 想问一下细胞裂解液选择蛋白酶抑制剂时有什么原则吗？受不受组织来源的影响？胞膜和胞浆有区别吗？
解答：一般来说提取时加入光谱的蛋白酶抑制剂就可以了，操作时保持低温。除非有文献特别指明用特殊的方法，一般来说都没有区别。
XX. 最近作了两次Western Blot，不但没阳性结果，显色背景都没有，电泳和转膜都染过，有条带。底片和显色液及DAB显色液均试过，没问题。1、检测GAD--分子量67kd，提取液有蔗糖，其余同三去污裂解液。蔗糖不会有影响把？样本--20度放置一周内测。2、一抗放置2年，可能效价不高！用的是1:100。如果是一抗的原因，不会背景都没有把？3、第一次有不均匀背景，因为一抗过夜时密封袋不均匀。后两次无背景显色。4、封闭液用的是含15%脱脂奶粉TBST，漂洗液用的是含1%BSA的TBST液，TWEEN-20为0.1%，不会是封闭液的问题吧？解答：可以在下面几个问题上找找原因。1. 封闭液用5％Milk，漂洗液（washing buffer 用TBST）2. 看看一抗是否能work，降到1：20。3. 看看二抗是否有问题。
YY. 加甲醇的目的是什么？
解答：加甲醇起着一定的固定作用，因为小分子蛋白质容易转出去.(特别是在硝酸纤维素膜上，因为NC膜结合蛋白质的能力较弱)。
ZZ. “转膜后的脱脂奶粉封闭液是5%的TBST脱脂奶粉”，其中TBST最后那个T 是Tween吗，浓度多大？
解答：是Tween，配方如下:Tris-Buffered Saline Tween-20 (TBST), Dissolve 8.8g of NaCl，0.2g of KCl，and 3g of Tris base in 800ml of distilled H2O, Add 500ul of Tween-20, Adjust the pH to 7.4 with HCl, Add distilled H2O to 1L, Sterilize by autoclaving.
AAA. 封闭，一抗，二抗时的温度有没有什么规定呢，比如现在我就在室温里做，或者要在4度下?
解答：均可在室温进行，如果时间不够，一抗孵育可以先在室温进行一个小时，然后4度过夜。
BBB. 实验室暂无NP40我用sds可以吗？另外有过用尿素和硫脲提取膜蛋白吗？配方如下：7M 尿素，2M 硫脲，Triton-x-100 0.2ml，新鲜加入：65mM DTT 蛋白酶抑制剂：试剂盒HaltTM Protease inhibitor cocktail kit 1%(v/v)
是用于抽提双向电泳用蛋白的配方。不止用于抽提细胞全蛋白（主要是想得到其中的膜蛋白）是否可行？
改良的RIPA裂解缓冲液(Tris.HCl，50 mmol/L，pH 7.5; NaCl，150 mmol/L; NP-40，1%; 脱氧胆酸钠，0.5%; SDS，0.1%; EDTA，1 mmol/L; PMSF，1 mmol/L; Leupeptin，2 μg/ml)不知对于膜蛋白效果如何？此外该方中的EDTA，是否用做蛋白酶抑制剂？
解答：做２－Ｄ绝对不推荐使用ＮＰ－４０（因为即使进口的ＮＰ－４０也不纯，，其中的杂质会影响质谱结果）。对于动物细胞，其蛋白酶活性较弱（相对于组织和大肠杆菌等），可以不使用cocktail，因为7M尿素＋２Ｍ硫脲＋４％ＣＨＡＰＳ构成的变性环境已经足以抑制大部分蛋白酶的活性，２Ｍ硫脲＋４％ＣＨＡＰＳ对于抽提膜蛋白有很大的帮助，不过如果您专职做膜蛋白建议采用分级抽提法。此外还可以采用梯度离心法和一些基于去垢剂的方法。ＥＤＴＡ用于灭活金属蛋白酶（主要是其鏊合作用）。加过多的蛋白酶抑制剂可以导致蛋白质的修饰，做ＷＢ无所谓，做ＭＡＩＬＤＩ时会给正确鉴定带来麻烦。裂解缓冲液中少了两性电解质(在2-D裂解缓冲液中，两性电解质起的作用：提供连续的PH 梯度，从很大程度上增加蛋白质的溶解性;还可以去除一部分核酸)；也不推荐采用SDS，因SDS会与蛋白质结合导致其等电点发生改变，如果您实在要用，终浓度降到0.1%以下。
METHOD2
（50ml总量）：?-mercaptoethanol 342 μl；20% SDS 5 ml；Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml；
加ddH2O至50 ml。
方法：将用过的膜浸入stripping buffer中，置
50℃水浴箱中30min，间断振摇。之后用TTBS洗3*5min就好。此时你已经可以按新的转移好的膜来再次使用了。
该方法的优点：省事，省力，省钱，符合国际惯例。
METHOD3
1、beta-metaptoethanol 35ul
2、10%SDS 1ml
3、tris ( 0.5M，pH6.7) 625ul
4、dH2O 3.34ml
50 -55℃，30min。
METHOD4
stripping buffer应该是可以放置很久的。不过我习惯于现配——毕竟，加了
β-mercaptoethanol 以后太难闻了，配了就用；而且，有了现成的Tris-HCl缓冲液和SDS的母液，现配还是很方便的。每次用量5ml少了点，我每次用50ml。
METHOD5
0.5M NaCl，0.5M HAc；室温摇床15min。
METHOD6
将用过的膜泡在1*TBS中室温振摇过夜，中间可以换液2-3次，然后封闭，加一抗，二抗（同第一次发光），实践证明方法完全可行。
不管用那种方法，洗脱后都要用PBS或TBS再洗几次。
9. 条件的摸索
奇门遁甲怎样起局问卜 奇门遁甲怎样起局问卜 一:起卦时所依据的时间归属:[1]年月日时的天干地支[2]用事时辰在24节令中归属哪个节令[3]此时此刻在奇门遁甲中属阳遁还是阴遁[4]在阴或阳遁九宫十八局上中下三元中的哪一元[5]在日期距局象超前.或退后.或适逢的情况下你是选择置润或坼补 二:确定上述大条件后,一般地说在没有专业工具的情况下用笔在纸上谈兵起局[1]先画井字格或米字格,然后按阴阳遁阳顺阴逆排列出当时用局的位置在几宫确定地盘:戊.已.庚.辛.壬.癸.丁.丙.乙.(五宫寄生二宫)[2]然后找出当时天盘大值符值班星宿(六甲之一)在几宫并把它转加临在地盘时辰的天干上,这样天上九星位置就确定了[3[八门中当时值始门在人盘里是随天盘时干宫转走在哪里就定位在那里[4]鼑盘小值符八神是随大值符定位后按阳逆阴顺的办法妥善安置[5]纸上起局好了以后就要查看一下当时当地的地理方位,这点非常重要,不要分不清东南西北闹笑话 好啦!奇门遁甲的用事起局就这么简单,但怎么样去分析研究判断用事局象,那里的学问可就大啦,今天就谈到此为止吧.奇门定局 一、定局概述
我国古代把每天二十四个小时分为子、丑、寅、卯、辰、巳、午、未、申、酉、戍、亥十二个时辰，每个时辰相当于现在的两个小时。时家奇门是一个时辰一个格局，按奇门历法，每年冬至上元到第二年冬至上元为一个循环，总共是360日。每天十二个时辰，一个时辰一个格局，全年的局数是12＊360＝4320，为四千三百二十局。但在这4320局中，实际上每一局是重复了四次的。拿阳遁一局来说，冬至上元、惊蛰上元、清明中元、立夏中元，都完全一样，皆属于阳遁一局。这四个元共二十天，但落实到时家奇门排局，其格局类型以每个时辰一个格局计算，并不是12＊20＝240，而是12＊20/4＝60（因每一局重复了四次）。即六十个格局，正好占据了从甲子到癸亥这十天干与十二地支的六十种结合。阳遁一局是如此，其它各局也无不如此，即都重复了四次。所以全年360日，4320个时辰，因为就格局讲都重得了四次，全年时辰的格局类型则为4320/4＝1080（局）。这就是传说的黄帝命风后创立的一千零八十局。又据说传到姜太公吕望时，将这一千零八十局简化为七十二局。这七十二局不难理解，因按二十四节气论算，每个节气为十五天，一节又分上、中、下三元，每元为五天。一节三元，全年二十四节气的元数则是3＊24＝72。 全年1080个局，但并不是每一局都要用一个盘去演示，如果用活盘演示，每个活盘可演示从甲子到癸亥60个时辰
电磁门吸工作原理和安装方法 门吸是我们生活中一个非常不起眼的五金小配件，很多人会忽略这一个细节。今天要和大家来说说电磁门吸，这种门吸常常是和防火门一起使用，又被称为常开防火门电磁门吸。下面我们就来看看到底电磁门吸是什么以及电磁门吸的工作原理和安装方法。 什么是电磁门吸： 电磁门吸就是一种用于自动门的电磁铁，是采用电磁原理产生吸力的门体定位装置，又称为电子门吸。由于其机械结构简单、电磁原理可靠、低压微电流工作，因而其使用寿命可达几十年甚至上百年，与采用永磁铁的普通门吸手控特点不同，它需要提供直流DC24V才能工作，可以现场手控和远程电控，所以被广泛应用于建筑智能门控设施中，目前电磁门吸主要用于建筑物中的防火门，并且必须通过国家消防中心检测合格。 电磁门吸工作原理： 电磁门吸主要有磁铁主体(安装在墙上)、吸板(安装在门扇上)、安装底座或支架三部分组成，带有释放按钮和缓冲垫。电磁门吸的工作原理是由电流转化产生电磁力，吸附住安装固定在防火门背后的
吸板，牢牢地吸住大门，使大门不能关闭，保证消防通道畅通。比如，电磁门吸与防火门控制器组成的常开防火门释放装置，它具有使防火门平时保持常开，火灾时能自动关闭的功能，实现“断电关门”，平时可由市电供电，不占用有限的消防电源资源，不增加消防供电设备与回路成本，发生火灾时正好切断市电供电实现自动关闭，从而保证了平时消防通道的畅通性，火灾时，更好的实现防火门“隔烟阻火”的功效，从而保证了人员及财物的安全性。 电磁门吸分类： 电磁门吸根据不同的安装方式，可以分为墙式、地式、链式三类，地式电磁门吸由墙式电磁门吸和直角地面安装支架组成，链式电磁门吸由墙式电磁门吸和链条扣件组成。一般墙式门吸适用于门扇在最大开启角度时离墙面的距离很近的情况，地式电磁门吸则适用于门扇在开启后背后无墙因而无法使用墙式的情况。链式门吸就比较适合用于门扇在开启后背后有墙但距离较远的情况。所以选择门吸种类的时候，应该根据门与墙之间的距离累确定使用哪一款。 电磁门吸的安装方法： 首先，我们要确定门吸的安装方式以及选择一款合适的门吸产品，之后在门和墙上选择合适的安装位置，然后将吸板正面与电磁体正面对正贴合，不要留有缝隙，否则会影响磁力。再然后，将不干胶贴纸撕下，贴在吸板的背面，将吸板正面与电磁体正面对正贴合，
Project #1 硅的晶格常数和体弹模量的计算 一、平衡晶格常数和内聚能 自然条件下硅为金刚石结构(dc )。计算模拟时，我们可以假定它为各种结构，f cc, bcc, sc, dc. 可以预测，模拟的dc 结构的硅的体系能量最低，也即最稳定。下面我们将运用LAMMPS 来对硅的各种结构进行模拟。 定义晶格能量为Φ， 数密度为 ρ： pot E N Φ= N V ρ= 其中E pot 为势能， N 为体系总原子数，V 为体系的体积。选取 Stillinger-Weber (SW)，以下面命令执行 lammps 运算： 其中，lmp_serial 为 lammps 命令；”<” 符号为读取符；in.Silicon 为输入文件，里面包含运算所需要的各种数据和命令；-log 指定输出文件的名称。 可以看到屏幕上显示出lammps 运行的信息。这个计算量很小，所以很快就结束。接下来以如下命令来查看计算得到的数据： grep 是linux 中一个很重要的命令，用来搜索文本，读取匹配的行并打印出来。这里是搜索 dc.log 文件，将 @ 开头的行打印出来。如下： 晶格参数为5.4305埃,数密度为0.0499540303，每个原子的能量为-4.336599609eV.
下面具体来看刚才给的输入文件，in.Silicon . dc.log 文件中有原子总数的信息， 每个金刚石晶胞中有8个原子，383216?=，所以是216个原子。如下给出各种结构下的体系的原子数：
晶体结构类型 晶胞中的原子数 总原子数 简单立方SC 1 27 体心立方BCC 2 54 面心立方FCC 4 108 金刚石DC 8 216 表1. 不同晶体结构中的原子数 下图是计算模拟得出的各种结构下的数密度与每个原子能量的关系图。 横坐标为数密度， 以金刚石为例，ρ= 8/5.4315^3=0.049926，也即我们直接通过 grep 命令得到的第二项值；纵坐标为每个原子的能量，为第三项值。 金刚石之外，还需计算其他结构。只需对 in.Silicon 做稍微改动： 首先，将in.Silicon 复制成in.fcc : 然后编辑 in. fcc 改动如下几项： 然后如下命令执行： 相应的，如下命令查看log 文件中的数据：
动态规划讲解大全 动态规划(dynamic programming)是运筹学的一个分支，是求解决策过程(decision process)最优化的数学方法。20世纪50年代初美国数学家R.E.Bellman等人在研究多阶段决策过程(multistep decision process)的优化问题时，提出了著名的最优化原理(principle of optimality)，把多阶段过程转化为一系列单阶段问题，逐个求解，创立了解决这类过程优化问题的新方法——动态规划。1957年出版了他的名著Dynamic Programming，这是该领域的第一本著作。 动态规划问世以来，在经济管理、生产调度、工程技术和最优控制等方面得到了广泛的应用。例如最短路线、库存管理、资源分配、设备更新、排序、装载等问题，用动态规划方法比用其它方法求解更为方便。 虽然动态规划主要用于求解以时间划分阶段的动态过程的优化问题，但是一些与时间无关的静态规划(如线性规划、非线性规划)，只要人为地引进时间因素，把它视为多阶段决策过程，也可以用动态规划方法方便地求解。 动态规划程序设计是对解最优化问题的一种途径、一种方法，而不是一种特殊算法。不象前面所述的那些搜索或数值计算那样，具有一个标准的数学表达式和明确清晰的解题方法。动态规划程序设计往往是针对一种最优化问题，由于各种问题的性质不同，确定最优解的条件也互不相同，因而动态规划的设计方法对不同的问题，有各具特色的解题方法，而不存在一种万能的动态规划算法，可以解决各类最优化问题。因此读者在学习时，除了要对基本概念和方法正确理解外，必须具体问题具体分析处理，以丰富的想象力去建立模型，用创造性的技巧去求解。我们也可以通过对若干有代表性的问题的动态规划算法进行分析、讨论，逐渐学会并掌握这一设计方法。 基本模型 多阶段决策过程的最优化问题。 在现实生活中，有一类活动的过程，由于它的特殊性，可将过程分成若干个互相联系的阶段，在它的每一阶段都需要作出决策，从而使整个过程达到最好的活动效果。当然，各个阶段决策的选取不是任意确定的，它依赖于当前面临的状态，又影响以后的发展，当各个阶段决策确定后，就组成一个决策序列，因而也就确定了整个过程的一条活动路线，如图所示：（看词条图） 这种把一个问题看作是一个前后关联具有链状结构的多阶段过程就称为多阶段决策过程，这种问题就称为多阶段决策问题。 记忆化搜索 给你一个数字三角形, 形式如下: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 找出从第一层到最后一层的一条路,使得所经过的权值之和最小或者最大. 无论对与新手还是老手，这都是再熟悉不过的题了，很容易地，我们写出状态转移方程：f(i, j)=a[i, j] + min{f(i+1, j)，f(i+1, j + 1)} 对于动态规划算法解决这个问题，我们根据状态转移方程和状态转移方向，比较容易地写出动态规划的循环表示方法。但是，当状态和转移非常复杂的时候，也许写出循环式的动态规划就不是那么
木门安装指南 一、门洞的测量方式 1．门洞的高度：垂直测量门洞上端至地板完成面的距离（若未铺装地板，则必须预留出地面铺装材料的厚度尺寸），选取左右两端两个点进行测量；取其中最小值为门洞的高度尺寸； 2、门洞的宽度：水平测量门洞左右的距离，选取三个以上的点进行测量，取其中最小值为门洞的宽度尺寸。 3、门洞墙体厚度：水平测量墙体厚度，左右各取三个以上的点进行测量；取其中最大值加最小值除以2即为墙体厚度尺寸；若最大值与最小值相差20mm以上，则应修正墙体偏差，达到规定值，如果墙面需要装修，则门洞墙体厚度应附加装饰材料完成面的厚度。 二、安装条件 1、必须采用预留洞口的安装方法，严禁边安装边砌口做法。 2、须在门口地面工程(如地砖、石材)安装完毕后，方可进行安装作业，若遇墙体潮湿应用隔潮材料隔离。
三、安装工具电锤、木头榔头、平锉、边刨、细齿锯(钢锯)、螺丝刀、角尺、卷尺、吊线锤、电钻、开孔器、戳子、相应规格钻头。 四、安装材料自攻螺丝、木牙螺丝、发泡胶、毛巾、小木条、胶水、门锁、合页、门吸、墙体隔潮材料。 五、安装前的准备 1、门扇、门套运到安装现场后，应把门扇、门套、用垫板或木枋纵向垫平放开放置，若需靠墙放置，倾角不得大于15度。 2、若不能及时安装，严禁与酸碱物一起存放，更勿在其产品上放置重物，室内应干燥、通风，并与热源隔开，以免受热变形。 3、检查现场情况，整理并清洁好工作区域，检查门洞或门套的预留尺寸是否符合设计要求。 4、确认安装尺寸、产品型号、清点产品及配件。 5、准备安装工具，详细阅读安装说明书。
六、安装步骤 1、把门套各个部分进行模拟组合，调整门套固定部位的垂直和水平位置，用自攻钉或直钉将其固定。 2、把整体门套置入洞口校正，在门套左右顶端与洞口处用斜型木块嵌入，将其左右竖套板与地面紧密配合。 3、门套两面要与墙体在同一平面上，然后检查门套整体与地面是否垂直，门套顶板与
奇门遁甲定局原理和起局方法 1、二十四节气与阴阳二遁关系 下面我们先简单介绍一下定局需要用到的24节气 二十四节气是根据太阳在黄道（即地球绕太阳公转的轨道）上的位置来划分的。视太阳从春分点（黄经零度，此刻太阳垂直照射赤道）出发，每前进15度为一个节气；运行一周又回到春分点，为一回归年，合360度，因此分为24个节气。 早在春秋战国时代，我国人民中就有了日南至、日北至的概念。随后人们把一年平分为二十四等份，并且给每等份取了个专有名称，这就是二十四节气。 到战国后期成书的《吕氏春秋》“十二月纪”中，就有了立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分、立冬、冬至等八个节气名称。 这八个节气，是二十四个节气中最重要的节气，因此它们也是衡量奇门中各
种五行旺衰的重要标准。这八个节气标示出季节的转换，清楚地划分出一年的四季。 后来到了《淮南子》一书的时候，就有了和现代完全一样的二十四节气的名称。这24节气中，反映四季变化的节气有：立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分、立冬、冬至8个节气。其中立春、立夏、立秋、立冬叫做“四立”，表示四季开始的意思。 反映温度变化的有：小暑、大暑、处暑、小寒、大寒5个节气。 反映天气现象的有：雨水、谷雨、白露、寒露、霜降、小雪、大雪7个节气。 反映物候现象的有：惊蛰、清明、小满、芒种4个节气。 节气主要的作用在于纪日纪月。它是我国古代记录时间的一种分段方式。以五日为候（一候为60时辰，正好是奇门一局走完），三候为气，六气为时，四时为岁，一年二十四节气共七十二候。 为何冬至起就要用阳局，夏至起就要用阴遁？这就是古人的研究成果，即对于季节的变化进行研究而来，他们用“圭表”测日影的办法。这也是目前太极图的来源，也是阴阳消长的概源所在。 古人用一根八尺的杆，立于地面，观察每天的日影长短变化，这样可以知道季节的变迁。古人把这种方式制作成“圭表”。因此用“圭表”来预测时间变化，从日影长短来看“阴阳消长”，这也才是“阴阳”的真正起源！大家看看下面的图表。 夏至，日影最短，就在图上记录最短的日影了。冬至，日影最长，就在图上记录最长的日影了。其他节气的日影记录，分别在图表上记录。把记录下来的点，连线，就成了太极图的样子了。
Project #2 金属中的点缺陷：空位和间隙原子 一、空位 从晶体中移去一个原子，即可形成空位。本例将运用 LAMMPS 计算空位形成能, E v. LAMMPS 输入文件为in.vacancy 1) 在 fcc 结构的完整Cu晶体中引入一个空位 沿<100>方向构造一个 4 ×N×N×N 的晶体。N为input 文件中lattice命令指定的个方向上的晶胞重复单元数。 2) 弛豫 当一个原子从晶体中移走之后，周围的原子将相应地调整位置以降低体系势能。为得到稳定的构型，需要对体系进行弛豫，relaxation. LAMMPS提供两种能量最小化方式，cg 和 sd。本例中选用 sd 方式进行能量最小化。 如下是输入文件，in.vacancy:
3) 运行lammps 4) 计算空位形成能 空位浓度由下式给出： [n ] = exp( ? F v / k B T ). 其中 F v = E v ? TS v 为形成一个空位所需要的Helmholtz 自由能. 忽略熵S v , 空位浓度公式简化为 [n ] = exp( ?E v / k B T ). 设 E 1 为完整晶体能量，含N 个原子；E 2 为弛豫后的晶体能量，含N – 1个原子。空位形成能 E v 为： 211v N E E E N -≡- 或 ()21v coh E E N E ≡--, 其中 E coh = E 1 / N , 为完整晶体的内聚能。 本例中以EAM 模型计算4×(20×20×20)=32000个原子的体系，得到空位形成能E v ~ 1.26 eV ，文献中的实验值为~1.28 eV ，符合较好。 另由上式计算得到，300K 温度下的空位浓度为~ 7.59×10-22 ，1350 K (T m ) 时的空位浓度~ 2.2×10-5（文献中的实验值为~2×10-4 ）。换算时注意(1 eV/k B = 1.1604×10?4 K) 图1. 空位处于4×(6×6×6) 的 FCC 晶体中心，106c a =,206c a =,306c a =. 颜色依据原子势能标注。
木门安装工艺流程图 说明： 1 、现场质检：产品运到现场放置于安装位置时，由安装队负责人、设计人员及安装师共同对门的状况进行检验，确认无误后方可进行安装； 2 、门套组装：按照门扇及洞口尺寸在铺有保护垫或光滑洁净的地面进行门套组装； 3 、配件定位：按照标准、设计或订购方要求确定合页、门锁的位置，进行开槽打孔；标准门合页为每扇三个，门锁中心距门扇底边距离： 900mm__1000mm ； 4 、复核洞口：确定洞口的尺寸偏差是否影响安装或有否改动； 5 、临时固定门套：将门套放予门洞口内，用木楔进行临时固定，临时固定点主要为门套左右两上角位置； 6 、安装门扇：将门扇与门套用合页连接固定； 7 、调整：运用木撑或专用工具在门套内侧进行横向和竖向支撑，进行门扇边缝等细部调整；运用垂线及其他工具进行垂直度调整， 8 、胶结固定：使用发泡胶结材料对已调整标准的成套门进行最终固定，将发泡胶注入门套与墙体之间的结构空隙内，填充密实度达百分之八十五以上；在四小时内不得有外力影响，以免发生改变；
9 、锁具安装； 10 、门脸线安装；在发泡胶结材料注入四小时以后，进行门脸线的安装； 11 、密封条安装； 12 、安装验收：分自检和甲方验收两部分，在自检合格后由甲方进行最后验收。
木门安装详细要求与工艺说明 木门安装流程示意图 一、安装条件 1、木门必须采用预留洞口的安装方法，严禁边安装边砌口做法。 2、木门须在门口地面工程（如地砖、石材）安装完毕后，同时在墙面乳胶漆作业最后一道工序之前，方可进行安装作业，若遇墙体潮湿应用隔潮材料隔离。 二、安装工具 电锤、木工榔头、平锉、边刨、细齿锯（钢锯）、螺丝刀、角尺、卷尺、吊线锤、电钻、开孔器、戳子、相应规格钻头。 三、安装材料 60铁钉、自攻螺丝（40、25）、502胶、毛巾、木钉、小木条、发泡胶、地板胶、门锁、合页、门吸、墙体隔潮材料。 四、安装程序 首先检查门各部件是否齐全，各部件尺寸是否正确，分配各套门到相应安装的位置是否与门洞尺寸相符。 1、装门套 （1）组合门套板：根据墙的厚度，调整好相应的门套板宽度，在门套板背面用25mm自攻螺丝将采口板和调节板紧固，螺丝之间的间距≤250mm，组合好后采口板与调节板间隙应小于0.2mm。 （1）锯立套板顶端组装缺口： ①先将组装好的立套板顶端锯成同一平面，且与立套板成90度直角。 ②在立套板的顶部锯凹口，凹口位置及尺寸应刚好合符。顶套板凸出的挡门块部份，要求切口必须平直，用平锉打磨光滑、平整、不能有毛口边。 （2）门套顶板与立板组合，将顶套板盖压在立套板上，顶套板的凸出挡门块部分镶入立套板切锯的凹下部分，两端各用3或4颗40mm的木螺丝将三块紧固，要求三块采口在同一平面，门套内侧立套板与顶套板连接处缝隙小于0.2mm，两立套板与顶套板必须是90度。门套采口部位内空尺寸：宽为门扇宽＋7mm，高为门扇高＋13mm。 2、安装门套： （1）用电锤在门洞口上打两排孔（略向内倾斜），间距约为300MM，用与之相应大小的木针敲击在里面使之填满。
Project #4 表面与界面能 铜的表面能 当物体形成表面时，表面上的原子键发生断裂，接近表面的几层原子不再如之前处于平衡状态，从而导致能量的升高，升高的温度便是物体的表面能。 利用LAMMPS 做出 20*20*40 fcc 的盒子，删去边缘的原子制造出一段真空层；算出此时体系的总能量0E ，然后从中间把盒子切成两半并移至足够远的距离，此时的体系总能量为E final ， 从而表面能： 02final surface E E A γ=? A 为表面的面积 (100) 面与 (111) 面 如下是输入文件in.surface_Cu_100 # LAMMPS Cu _Surface_100 units metal boundary p p p atom_style atomic lattice fcc 3.61 region box block 0 20 0 20 0 40 create_box 1 box create_atoms 1 box timestep 0.005 thermo 5 pair_style eam/alloy pair_coeff * * jin_copper_lammps.setfl Cu region boundary1 block INF INF INF INF 29.9 INF region boundary2 block INF INF INF INF INF 9.9 group boundary1 region boundary1 group boundary2 region boundary2 group boundary union boundary1 boundary2
3D木门安装流程 (点击:177) 3D小生 2007-11-16 10:40:20 发表于焦点装修家居网-装修总论坛-3D木门论坛 标签:3D木门3D3D门 第一步、张贴安装告示牌，位置在明显之处。 第二步、清理。安装人员到达现场后，必须清理现场，留有足够的空间摆放门料和安装，清理的物品在征询业主的意见后存放到指定的位置，地面保持平整、干净。把垃圾放在垃圾袋内。 第三步、拆装、摆放、验料、量尺。 步骤1、门扇拆装。用裁纸刀在门边3处划开3处。将门立与门夹之内，在靠墙，门底部和门与门之间用防护角防护立稳。同时检查门扇的质量，包括：弯曲度、划伤、清点数量是否与量尺单位相符等。 步骤2、清理包装。把拆开的包装膜叠好或放在垃圾袋中。 步骤3、辅料拆装。把包装膜先平整铺在地面，然后对套版、口线、档板、封边用裁纸刀划开，口线8支一组叠放在平放的地面，对档板、套板、封边分组平放地面，面对面上下放好，摆放整齐。同时清点数量是否与量尺单相符。 步骤4、清理包装膜。 步骤5、五金件拆装。对五金件拆装同时清点各部件和检查质量。摆放整齐。 步骤6、工具箱摆放离开墙面10cm位置，把各类胶摆放整齐，禁止靠在墙面，离开10cm 左右。 第四步、测量。测量的有关事项与验料项同步进行。 步骤1、门扇测量与量尺单核对，测量包括：门扇的型号，高、宽和垂直度的尺寸。 步骤2、门洞测量，包括：门洞的高、宽和墙壁厚度及垂直度，并做好记号。 步骤3、套板测量。套板的宽与墙体的厚度是否相符，套板的宽度和墙体的高度是否相符。 第五步、打眼。 步骤1、在门洞左右墙壁测量垂直度后，在同一直线上个选择7个点，上访选1-2点，用冲击钻打眼。 步骤2、墙壁掉下来的灰尘及时清理装入垃圾袋中。
奇门遁甲的起局（排盘）方式有飞盘和转盘之分；按时间起局来分，有年家奇门、月家奇门、日家奇门、时家奇门、刻家奇门之分；按定局方法，有阴盘、阳盘、有拆补法、超神置闰法、茅山法。 今天给大家整理了道家起局法的时家转盘奇门的排盘方法如下，如果你看懂了，你就有玄学天分啦！“玄”不只是玄乎、虚幻之意，还有至高无尚、顶极的意思喔！至于你学了玄学的人，是用虚幻的事来忽悠人还是拥有顶级智慧，那就看个人的师承和人品啦！ 奇门遁甲是按问事预测当时的时间（年、月、日、时辰）来起局断事的。事面上有好多软件可以查到当时四柱八字，这个就忽略了。这里是按已经知道当时的八字来讲奇门遁甲是怎样排盘的。
奇门遁甲排盘起局步骤如下： 一、定时空： 即起局当时的时间维年月日时、节气、阴阳遁、局数。用四柱八字的形式写出来：年干月干日干时干 年支月支日支时支 这里需要的数据： 1、农历月、日的数字即几月几日。 2、农历年、时用十二地支的序数为其所代表的数字： 计算方法：（年的地支+月+日+时的地支）/9，余数为几即为几局。 至于阴遁还是阳遁，看起局时的节气是在阳遁区间还是阴遁区间。 夏至到冬至期间用阴遁，冬至到夏至期间用阳遁。 夏至在每年公历6月21日或22日，过了夏至，虽然太阳直射点逐渐向南移动，但北半球白天一天比一天缩短，黑夜一天比一天加长。 冬至在每年的公历12月21日至23日之间。冬至是北半球全年中白天最短、黑夜最长的一天，过了冬至，白天就会一天天变长。 例： 公元：2016年10月23日17时30分
农历：2016年九月二十三日酉时 例中，2016年是丙申年，申在12地支中排第9, 公园10月23日对应的农历九月廿三，17点30分对应酉时，酉在12地支中排10位。 （9+9+23+10）/9=5余6 10月23日在夏至后冬至前，为阴6局。 二、排地盘（按九宫数字跳宫排布三奇六仪） 是几局就把三奇六仪队伍里打头的“戊”写在九宫格中这个局数那个宫位，其他的三奇六仪按“戊己庚辛壬癸丁丙乙”的顺序，在九宫中按数字，阳遁顺跳、阴遁逆跳。 天干（三奇六仪）的顺序永远是：戊己庚辛壬癸丁丙乙。 阳遁用天干（三奇六仪）在九宫格里跳：123456789，从小数到大数跳。 阴遁用天干（三奇六仪）在九宫格里逆跳：987654321，从大数到小数跳。
《奇门遁甲》入门学习总结 参考学习清华大学崔国文教授《奇门遁甲入门课程PPT》 一、何谓“奇门遁甲” 十天干：甲、乙、丙、丁、戊、己、庚、辛、壬、癸。 十二地支：子、丑、寅、卯、辰、巳、午、未、申、酉、戌、亥。 奇：指乙、丙、丁三奇。乙为日奇、丙为月奇、丁为星奇。所谓“日生于乙、月明于丙、丁为南极”。三奇分布在奇门遁甲中的天盘和地盘，并随天地盘转动，凡遇着三奇皆为吉。 六甲：当天干与地支相配时，满一周天为60年，即六十甲子。六十甲子中，正好有：甲子、甲戌、甲申、甲午、甲辰、甲寅，称为六甲。六甲为统帅，然而甲为阳木，怕庚金所克，顾需将六甲隐藏起来。 六仪：天干剩余的：戊、己、庚、辛、壬、癸称为六仪。六仪则相当于六甲元帅的“仪仗队”。 遁甲：把六甲隐与六仪之下，避免六甲被庚金所克，即为遁甲。 门：指八门，人的八种因素。八门为：休、生、伤、杜、景、死、惊、开。八门分布在奇门遁甲的人盘上，其中：开、休、生为三吉门，死、惊、伤为三凶门，杜、景为中平。 故，“奇门遁甲”乃指三奇、八门及遁甲。是古代最高决策学与预测学，融合了阴阳五行、易经八卦、古天文学等知识与理论在内，为古中国三大术数之一，被奉为帝王之学。其价值：时空选择模型。 三大术数指：太乙、奇门、六壬。其中太乙管国家大事、奇门管军事、六壬管民生百事。
二、奇门遁甲的体系结构 2.1奇门遁甲的五个坐标 天、地、人、神、时间。 天地为空间，神为外力，融合了时间、空间、人及自然的各种因素。古人认为人与宇宙天地、时间、自然环境等因素存在关联，处于一种整体和谐、平衡的状态，在各种事物的发展中，遵循宇宙时空的一般规律。奇门遁甲就是研究这种规律，进行预测。 2.2奇门遁甲的64个参数 天干（10）、地支（12）、八卦（8）、九宫（9）、九星（9）、八门（8）、八神（8），总和共计64，为奇门遁甲预测学的64个参数。
动态规划在火力分配中的应用 1.问题描述 设有m个目标，目标价值(重要性和危害性)各不相同，用数值A K( K=1, 2, ..m )表示，计划用n枚导弹突袭，导弹击毁目标的概率P= ，其中是常数，取决于导弹的 特性与目标的性质；为向目标发射的导弹数，问题：做出方案使预期的突击效果最大。 2.问题建模 上述问题可以表述为 约束条件为 ( 为非负整数) 3.算法描述 下面通过一个实例说明：设目标数目为4 (m=4),导弹为5 (n=5), 和a K取值情况如下表所示：表1：A k，取值情况 将火力分配可分为4个阶段，每个阶段指标函数为: 可能取值为0，1, 2，3, 4，5,将函数值带人如下表: 表2函数值
k=le ngth(x(1,:)) % x_is nan=~is nan( x); % t_vubm=i nf*on es(size(x)); % 判断决策级数 非空状态矩阵 性能指标中间矩阵 动态规划问题基本方程为： c =0 逐次向前推一级 K=4 K=3 K=2 K=1 ( 只需要求解的最大值然后反推回去就可以获得最优的分配方案 可取等号) 4. Matlab仿真求解 因为与取值为整数，可以采用动态规划的方法，获得的最大值, fun cti on[ p_opt,fval]=d yn prog(x,DecisFu n,SubObjFu n, Tra nsFu n,ObjFun) % 规划问题最小值函数对应的最优方 求解动态
f_opt=nan*ones(size(x)); % 总性能指标矩阵 d_opt=f_opt; % 每步决策矩阵 tmp1=find(x_isnan(:,k)); % 最后一步状态向量 tmp2=length(tmp1); % 最后一步状态个数for i=1:tmp2 u=feval(DecisFun,k,x(tmp1(i),k)); tmp3=length(u);% 决策变量 for j=1:tmp3 % 求出当前状态下所有决策的最小性能指标 tmp=feval(SubObjFun,k,x(tmp1(i),k),u(j)); if tmp <= t_vubm(i,k) %t_vub f_opt(i,k)=tmp; d_opt(i,k)=u(j); t_vubm(i,k)=tmp; end; end; end for ii=k-1:-1:1 tmp10=find(x_isnan(:,ii)); tmp20=length(tmp10); for i=1:tmp20 % 求出当前状态下所有可能的决策 u=feval(DecisFun,ii,x(tmp10(i),ii)); tmp30=length(u) ; for j=1:tmp30 % 求出当前状态下所有决策的最小性能指标 tmp00=feval(SubObjFun,ii,x(tmp10(i),ii),u(j)); % tmp40=feval(TransFun,ii,x(tmp10(i),ii),u(j)); % tmp50=x(:,ii+1)- tmp40; % 找出下一状态在x tmp60=find(tmp50==0) ; if~isempty(tmp60) if nargin<6 % 矩阵不同需要修改 tmp00=tmp00+f_opt(tmp60(1),ii+1); % set the default object value else tmp00=feval(ObjFun,tmp00,f_opt(tmp60(1),ii+1)); end % 当前状态的性能指标 if tmp00<=t_vubm(i,ii) f_opt(i,ii)=tmp00; d_opt(i,ii)=u(j); t_vubm(i,ii)=tmp00; end; end; end; end; end fval=f_opt(:,1); tmp0 = find(~isnan(fval)); fval=fval(tmp0,1); p_opt=[];tmpx=[];tmpd=[];tmpf=[]; 单步性能指标 下一状态 矩阵的位置 nargin 的值，很重要
LAMMPS手册-中文解析一、简介 本部分大至介绍了LAMMPS的一些功能和缺陷。 1．什么是LAMMPS? LAMMPS是一个经典的分子动力学代码，他可以模拟液体中的粒子，固体和汽体的系综。他可以采用不同的力场和边界条件来模拟全原子，聚合物，生物，金属，粒状和粗料化体系。LAMMPS可以计算的体系小至几个粒子，大到上百万甚至是上亿个粒子。 LAMMPS可以在单个处理器的台式机和笔记本本上运行且有较高的计算效率，但是它是专门为并行计算机设计的。他可以在任何一个按装了C++编译器和MPI 的平台上运算，这其中当然包括分布式和共享式并行机和Beowulf型的集群机。LAMMPS是一可以修改和扩展的计算程序，比如，可以加上一些新的力场，原子模型，边界条件和诊断功能等。 通常意义上来讲，LAMMPS是根据不同的边界条件和初始条件对通过短程和长程力相互作用的分子，原子和宏观粒子集合对它们的牛顿运动方程进行积分。高效率计算的LAMMPS通过采用相邻清单来跟踪他们邻近的粒子。这些清单是根据粒子间的短程互拆力的大小进行优化过的，目的是防止局部粒子密度过高。在并行机上，LAMMPS采用的是空间分解技术来分配模拟的区域，把整个模拟空间分成较小的三维小空间，其中每一个小空间可以分配在一个处理器上。各个处理器之间相互通信并且存储每一个小空间边界上的”ghost”原子的信息。LAMMPS(并行情况)在模拟3维矩行盒子并且具有近均一密度的体系时效率最高。 2．LAMMPS的功能 总体功能： 可以串行和并行计算 分布式MPI策略 模拟空间的分解并行机制 开源 高移植性C++语言编写 MPI和单处理器串行FFT的可选性（自定义） 可以方便的为之扩展上新特征和功能 只需一个输入脚本就可运行 有定义和使用变量和方程完备语法规则 在运行过程中循环的控制都有严格的规则 只要一个输入脚本试就可以同时实现一个或多个模拟任务 粒子和模拟的类型： （atom style命令）原子粗粒化粒子DNA 全原子聚合物，有机分子，蛋白质，联合原子聚合物或有机分子金属粒子材料粗粒化介观模型延伸球形与椭圆形粒子点偶极粒子刚性粒子所有上面的杂化类型力场：）（命令：pair style, bond style, angle style, dihedral style, improper style, kspace style, tabulated.
动态规划经典案例详解之背包问题 【摘要】本文主要从动态规划经典案例——背包问题的动态规划设计思路出发，结合具体实例，对动态规划在程序设计中的典型应用以及衍生拓展进行详细分析。 【关键字】动态规划信息学奥赛0/1背包问题 动态规划并非一个算法，而是一种解题的思路，其核心思想是通过使用大量的存储空间把中间结果记录下来，大大减少重复计算的时间，从而提高的程序的执行效率，因为信息学奥林匹克复赛题目的解决程序一般是有时间限制的，对于某些用搜索必然耗费大量时间的题目，动态规划几乎是唯一的选择。但是动态规划并没有一个简单的模型可以套用，对于每个不同的题目都有对应的不同规划思路，我们只能通过对一些动态规划经典案例的学习来训练自己的动态规划思维能力，从而以不变应万变，应付各种复杂的程序设计，本文通过对动态规划经典案例之一的背包问题进行详细阐述，旨在让学生了解动态规划和搜索的不同设计思路以及动态规划的优越性。 【原型例题】 从n个物品中选取装入背包的物品，每件物品i的重量为wi，价值为pi。求使物品价值最高的选取方法。 【输入文件】 第一行一个数c，为背包容量。 第二行一个数n，为物品数量 第三行n个数，以空格间隔，为n个物品的重量 第四行n个数，以空格间隔，为n个物品的价值 【输出文件】 能取得的最大价值。 【分析】 初看这类问题，第一个想到的会是贪心，但是贪心法却无法保证一定能得到最优解，看以下实例： 贪心准则1：从剩余的物品中，选出可以装入背包的价值最大的物品，利用这种规则，价值最大的物品首先被装入（假设有足够容量），然后是下一个价值最大的物品，如此继续下去。这种策略不能保证得到最优解。例如，考虑n=2,w=[100,10,10],p=[20,15,15],c=105。当利用价值贪婪准则时，获得的解为x=[1,0,0]，这种方案的总价值为20。而最优解为[0,1,1]，其总价值为30。 贪心准则2：从剩下的物品中选择可装入背包的重量最小的物品。虽然这种规则对于前面的例子能产生最优解，但在一般情况下则不一定能得到最优解。考虑n=2,w=[10,20], p=[5,100],c=25。当利用重量贪婪策略时，获得的解为x=[1,0],比最优解[0,1]要差。
奇鹏奇门遁甲|奇门遁甲排盘步骤 本文向大家介绍奇门遁甲排盘步骤，供广大奇门爱好者参考。 一、确立奇门局象 首先将公历或是农历的时间换算成干支历，再根据万年历得出该年月日时使用得是阳几局或是阴几局。 二、三奇六仪落宫 六仪者：甲子戊、甲戍己、甲申庚、甲午辛、甲辰壬、甲寅癸也。在排局时只要写出戊、己、庚、辛、壬、癸即可。三奇者：乙、丙、丁也。在阳遁中按照戊、己、庚、辛、壬、癸、丁、丙、乙进行顺布，而在阴遁中按照戊、己、庚、辛、壬、癸、丁、丙、乙进行逆布。 戊为始，为元首，无论阳遁或是阴遁，用几局？戊就首先落在哪个宫中，其余依次排布，例如：阳遁一局，则甲子戊在一宫，甲戍己在二宫，甲申庚在三宫，甲午辛在四宫，甲辰壬在五宫（中宫，寄坤二宫），甲寅癸在六宫，丁奇在七宫，丙奇在八宫，乙奇在九宫。 如果是阴遁一局的话，则甲子戊在一宫，甲戍己在九宫，甲申庚在八宫，甲午辛在七宫，甲辰壬在六宫，甲寅癸在五宫（中宫，寄坤二宫），丁奇在四宫，丙奇在三宫，乙奇在二宫。余者可仿此类推。 三、值符值使 查找值符值使非常的简单，首先确立你目前所使用的时辰是什么？则旬首即是值符，该宫里的八门即是值使，例如：甲申年乙亥月壬寅日乙巳时，乙巳时属于甲辰旬，那么甲辰壬
即是值符，该宫中的门即是值使。 四、九星排布 九星者：天蓬星、天任星、天冲星、天辅星、天禽星、天英星、天芮星、天柱星、天心星也。因所用的局不同，他们所携带的三奇六仪也不同。、值符落宫的方法就是将值符加临于所用时辰的天干宫中即可，以上阴遁九局为例，值符天禽星甲辰壬（并带有二宫的丙）在一宫，接下来就好办了，一个一个往前推就行了———天柱星甲申庚加于艮八宫，天心星甲午辛加于震三宫，天蓬星乙奇加于巽四宫，天任星甲戍己加于离九宫，天冲星丁奇加于坤二宫，天辅星甲寅癸加于兑七宫，天英星甲子戊加于乾六宫。 五、八门排布 值使的布局就是阳遁从旬首顺数至所用的时辰，阴遁从旬首逆数至所用的时辰，如上例中，死门为值使，死门（比较特殊，如果是天芮星为值符，则死门从二数起，现天禽星为值符，天禽星在中五宫，所以死门从五数起）在旬首为五数，即：甲辰时死门在五宫，乙巳时逆数则为四宫，丙午时则在三宫，丁未时则在二宫，戊申时则在一宫。知道了死门值使在哪个宫，其余的门便依次排布即可——————死门在巽四宫、惊门在离九宫、开门在坤二宫、休门在兑七宫、生门在乾六宫、伤门在坎一宫、杜门在艮八宫、景门在震三宫。 六、八神排布 八神即是：值符、螣蛇、太阴、六合、白虎、玄武、九地、九天，以值符（通常称为小值符）为首，看九星值符（通常称为大值符）落在哪个宫？则此小值符就在哪个宫？其余的七神依次排布即可，但是是按照阳遁顺时针排布，阴遁逆时针排布的方法，此阴遁九局之例
1、单调递增最长子序列 描述 求一个字符串的最长递增子序列的长度 如：dabdbf最长递增子序列就是abdf，长度为4 输入 第一行一个整数0 2、最长公共子序列 描述 如题，需要写一个程序，得出最长公共子序列。 tip：最长公共子序列也称作最长公共子串(不要求连续)，英文缩写为LCS（Longest Common Subsequence）。其定义是，一个序列S ，如果分别是两个或多个已知序列的子序列，且是所有符合此条件序列中最长的，则S 称为已知序列的最长公共子序列。 输入 第一行给出一个整数N(0 3、括号匹配 时间限制：1000 ms | 内存限制：65535 KB 描述 给你一个字符串，里面只包含"(",")","[","]"四种符号，请问你需要至少添加多少个括号才能使这些括号匹配起来。 如： []是匹配的 ([])[]是匹配的 ((]是不匹配的 ([)]是不匹配的 输入 第一行输入一个正整数N，表示测试数据组数(N<=10) 每组测试数据都只有一行，是一个字符串S，S中只包含以上所说的四种字符， S的长度不超过100 输出 对于每组测试数据都输出一个正整数，表示最少需要添加的括号的数量。每组 测试输出占一行 样例输入 4 [] ([])[] ((] ([)] 样例输出 3 2 一、简介 1.SiC热分解制备石墨烯 自2004年Novoselov、Geim和合作者们从石墨上剥离出世界上第一种二维材料——单层石墨：石墨烯（Graphene）以来，石墨烯就受到了科技界的广泛重视[1]。Novoselov 和Geim两人因此在2010年获得了诺贝尔物理学奖。因为石墨烯的独特特性，在许多技术领域例如光电子学上它都被寄予厚望。研究石墨烯这种材料相关的物理化学特性和发展大面积、高质量生长石墨烯的技术，同时将其与器件物理学联系起来是我们研究和应用石墨烯的必由途径。 石墨烯是由碳元素组成的二维六边形材料，其在光学、电学、热学、力学等性质十分优异。它有可能在后摩尔定律时代成为硅（Silicon）的继任者，在单分子气体传感器[2]、自旋电子学[3]、量子计算[4]、太赫兹振荡器[5]等等领域发挥重要作用。如今，从石墨上剥离出石墨烯仍然是一种重要的石墨烯制备方方法。然而，这种方法产生的石墨烯大小通常不超过1000 μm2，只适合实验室研究，尚不能在工业上大规模应用。科学家发展了其他的石墨烯制备方法，包括将石墨烯视作一种薄膜来生长的化学气相沉积（Chemical Vapor Deposition, CVD）法、热分解碳化硅法（SiC thermal decomposition）、氧化石墨烯还原法（Graphene oxide reduction）等。 CVD法通过使含碳气源在有催化作用的金属表面分解或者使溶入到这些有催化作用的金属中的碳（C）发生表面偏析，使得在金属表面生成石墨烯或者多层石墨烯（Few-Layer Graphene, FLG）。能否直接在半导体/绝缘体上生长石墨烯呢？碳化硅热分解成功的解决了这一问题。最早试图使六方晶系的SiC晶体石墨化的研究报告见于1961年，Badami在高温和真空环境下得到了发生了一定石墨化的SiC[6]。在一定的退火条件下，SiC晶体表面发生热分解，Si原子发生解吸附，而C原子留下来重新排列和组合可以生长成外延型的石墨烯层[7]。更细致的研究发现用热退火的方法在六方SiC的Si面上生长的石墨烯比C面有更好的可控性，例如：可以更好的控制石墨烯的层数。Si面上生长的石墨烯生长方向与基底晶体结构有密切关系，这样提供了在基底上均匀覆盖和特定方向生长石墨烯的可能性。特别地，石墨烯直接生长在半导体SiC上使得我们无Lammps 石墨烯实例
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