?论著?盐酸拓扑替康、紫杉醇及顺铂对人卵巢癌
细胞株OC3体外作用的实验研究
刘冠媛,杨兴升,江 森
(山东大学齐鲁医院妇产科,济南 250012)
【摘要】 目的:研究国产盐酸拓扑替康(TPTHCh)、紫杉醇(PIX)与顺铂(cDDP)对人卵
巢癌细胞株OC3的生长抑制作用。方法:采用MTT法观察上述药物单药应用、双药联合
及3药联合使用对卵巢癌细胞株OC3生长的影响,评价药物联合应用的效果。结果:3种
药物单药应用、双药联合及3药联合应用均对卵巢癌细胞株OC3有显著的抑制作用,以卵
巢癌的标准化疗方案PIX加cDDP为对照组,3药联合应用的抑制效果显著增强,且三药
全量及半量联合应用效果差异无显著性。结论:PIX、TPTHCh及cDDP联合应用具有高效
协同抑制卵巢癌细胞株OC3的作用,可为临床难治性和复发性卵巢癌患者的化疗及小剂
量化疗提供参考。
【关键词】 盐酸拓扑替康;紫杉醇;顺铂;卵巢肿瘤;细胞株OC3;实验研究
中图分类号:R737.31 文献标识码:A 文章编号:1004-7379(2003)01-0016-03
Experimental study on anti2proliferation effect of topotecan hydrochloride,paclitaxel and cis2
platin on hum an ovarian carcinom a cell line OC3in vitro.Liu Guanyuan,Yang Xingsheng,
Jiang Sen.Department o f Obstetrics and Gynecology,Qilu Hospital o f Shandong Univer sity,Jinan
250012
【Abstract】 Objective:T o study the growth2inhibition effect of T opotecan hydrochloride
(TPTHCh),Paclitaxel(PIX)and Cisplatin(cDDP)on human ovarian carcinoma cell line OC3.
Methods:The growth2inhibition effects of single,tw o and three drugs combination on human ovarian
carcinoma cell line OC3were observed by MTT assay,and the synergistic effect of these drugs was e2
valuated.R esults:Single,tw o and three drug combinations all showed the anti2proliferation effects on
OC3cell line.The growth2inhibition effect of the three drugs combination was significantly enhanced
com pared with the control group2standard regiment of chem otherapy(PIX combined with cDDP).
Whole dose and half2dose combination of3drugs reached similar cell growth inhibitory rate.Conclu2
sions:TPTHCh combined with PIX and cDDP can synergistically inhibit the proliferation of human
ovarian carcinoma cell line OC3,which provided reference for the chem otherapy of refractory and re2
current ovarian carcinoma patients and low dosage use of drugs in chem otherapy.
【K ey w ords】 T opotecan hydrochloride;Paclitaxel;Cisplatin;ovarian neoplasms;Cell line
OC3;Experimental study
化疗在卵巢癌患者的治疗中具有重要地位,在晚期卵巢癌患者治疗中尤为重要。新的化疗药物的开发利用及新的联合化疗方案的研究应用,是提高晚期卵巢癌患者疗效的主要途径。我们利用MTT 法观察了目前对卵巢癌疗效较高的3种化疗药物2盐酸拓扑替康(T opotecan hydrochloride,TPTHCh)、紫杉醇(Paclitaxel,PIX)和顺铂(Cisplatin,cDDP)的单药应用及联合化疗对人卵巢癌细胞株OC3的作用,现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 药物及试剂 TPTHCh系贵州汉方制药有限公司产, PIX系北京协和药厂产,cDDP为德州制药厂产。使用时新鲜配制,使最终浓度分别为:TPTHCh0.8、1.6、3.2、6.4、1
2.8、
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25.6μg/ml;PIX为12.5、25、50、100、200、400μg/ml;cDDP为5μg/ml,测定细胞抑制情况。联合用药的浓度TPTHCh为800ng/ml(全量)和400ng/ml(半量),PIX为100μg/ml(全量)和50μg/ml(半量)。RP MI1640培养基、MTT(四氮唑蓝)、胰蛋白酶均购自美国S igma公司;An T h os TH2酶标仪为Austria生产。
1.2 细胞培养 OC3细胞在含10%胎牛血清的RP MI1640培养基(内含0.1%青霉素链霉素)中培养并置于37℃、5%
C O2饱和湿度的培养箱内备用。
1.3 MTT实验 OC3细胞培养于含10%胎牛血清的RP MI 1640培养基中,以0.25%胰酶消化后制成5×104/ml细胞悬液,于2个96孔板中每孔接种200ul,37℃、5%C O2培养箱中培养24h后,于96孔板(1)中加入一系列浓度的TPTHCh和PIX,测定细胞生长抑制率。96孔板(2)分为细胞对照组和药物实验组,后者又分为单药组TPTHCh(800ng/ml和400ng/ ml)PIX(100μg/ml和50μg/ml)cDDP(5μg/ml)]、双药联合化疗组(TPTHCh+PIX、TPTHCh+cDDP、PIX+cDDP)、3药联合化疗组(TPTHCh+PIX+cDDP)。每组设5个复孔。2种药物联合用药时采用1:1方案,使药物浓缩1倍后各加100μl,使每孔的药物浓度、体积和总量不变;3种药物联合应用时,采用1:1:1方案,使药物浓缩2倍后各加50μl,再补加50μl培养基以使药物浓度及总量不变。37℃、5%C O2培养箱48h后,每孔加入MTT20μl,继续培养4h,弃培养液,每孔加DMS O15μl,充分溶解10min,全自动酶标仪测定波长620nm处的光密度值,计算细胞存活率和抑制率。
细胞存活率=药物实验组光密度值/细胞对照组光密度值×100%,抑制率=100%-存活率。
1.4 双药联合作用评价1 两药相互作用系数(coefficient of drug interaction,C DI)的计算公式为C DI=AB/(A+B),其中AB=两药联合组光密度值/细胞对照组光密度值,A(或B) =两药单独使用组光密度值/细胞对照组光密度值。C DI<1时两药有协同作用,C DI<0.7时协同作用非常显著。
1.5 统计学方法 采用方差分析和t检验。
2 结 果
2.1 TPTHCh及PIX对细胞株OC3生长抑制作用 测定经过系列稀释浓度的TPTHCh和PIX对细胞株OC3生长的抑制作用,分别绘制生长抑制曲线,得出对OC3的I D50值分别约为11.6μg/ml和190μg/ml。
2.2 TPTHCh、PIX及cDDP不同方式的联合用药对细胞株OC3生长的抑制作用 由表1可见, TPTHCh、PIX及cDDP在1×PPC(血浆峰浓度)时对细胞株OC3均具有显著的抑制作用(P<0.01)。全量及半量TPTHCh对细胞株OC3的抑制作用差异无显著性(P>0.05);同样,全量和半量的PIX对细胞株OC3的抑制作用亦无显著性差异(P>0.05)。
全量及半量的PIX及TPTHCh与cDDP双药联合组对细胞株OC3的抑制作用差异有显著性(P< 0.05)。PIX加cDDP对细胞株OC3具有显著的抑制作用(P<0.01),全量与半量的作用无差异(P> 0.05),但与单独用药相比差异有显著性(P<0.01或P<0.05);TPTHCh加cDDP对细胞株OC3亦有明显的抑制作用(P<0.01),但明显弱于PIX加cDDP (P<0.05)。
不同剂量的TPTHCh与PIX的组合对OC3细胞的抑制作用差异无显著性(P>0.05),均对OC3细胞有明显的抑制作用(P<0.01),效果明显优于单药的作用(P<0.05),但与对照组(PIX加cDDP)相比无明显差异(P>0.05)。
TPTHCh、PIX及cDDP三药联合应用均对细胞株OC3具有显著的抑制作用(P<0.001),不同剂量组合的效果之间差异无显著性(P>0.05),与单用药相比差异显著(P<0.01),且效果明显优于对照组(P<0.05)。可见,半量的联合应用可收到全量联合应用的效果。两药联合应用的C DI均<0.7,提示两药的联合应用均有明显的协同作用。
表1 单药及联合用药对细胞株OC3生长抑制情况
组别
OD值
( x±s)
细胞生长
抑制率
(%)
CDI 细胞对照组 1.795±0.062
全量TPTHCh 1.072±0.13740.28
半量TPTHCh 1.135±0.10936.77
全量PIX 1.071±0.14240.33
半量PIX 1.067±0.24640.56
cDDP0.93±0.11248.19
全量TPTHCh+cDDP0.858±0.044352.190.43半量TPTHCh+cDDP0.916±0.018348.970.44全量PIX+cDDP0.74±0.01958.770.36半量PIX+cDDP0.776±0.05456.770.388全量TPTHCh+全量PIX0.8401±0.0753.20.39全量TPTHCh+半量PIX0.851±0.0552.590.40半量TPTHCh+全量PIX0.909±0.01949.360.41半量TPTHCh+半量PIX0.778±0.05156.660.35全量TPTHCh+全量PIX+cDDP0.617±0.082365.65
全量TPTHCh+半量PIX+cDDP0.684±0.032361.91
半量TPTHCh+全量PIX+cDDP0.69±0.081361.56
半量TPTHCh+半量PIX+cDDP0.703±0.029360.84
3P<0.05vs全量PIX+cDDP
3 讨 论
卵巢癌患者对化疗药物的耐药已成为获得疗效的最大障碍。新抗癌药物的不断开发、应用是提高卵巢癌患者疗效的主要途径之一,对新的有效联合化疗方案的探索研究是当今的重要任务。目前,cD2 DP、PIX和TPTHCh是得到公认的对卵巢癌有效的化疗药物,且彼此之间无交叉耐药。本实验的目的就是探索3种药物联合用药效果及小剂量联合的效果。由于PIX联合铂类已成为公认的卵巢癌标准化疗方案2,3,故本实验以PIX加cDDP为对照组。
本实验采用的PIX的终浓度为100μg/ml, TPTHCh的终浓度为800μg/ml,这是根据临床常用药
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物浓度换算出来的4,分别相当于成人化疗时所用的175mg/m2和1.2mg/m2剂量时的血药浓度。实验结果表明,该浓度的PIX联合cDDP(对照组)对细胞株OC3具有明显的抑制作用,TPTHCh联合PIX的抑制作用与对照组相似,而TPTHCh与cDDP的联合应用的作用明显弱于对照组。PIX、TPTHCh与cDDP3药联合应用对细胞株OC3的抑制作用显著,明显强于对照组,提示此3药联合将成为卵巢癌的高效化疗方案。3药具有明显的协同作用,可能与它们的不同的抗肿瘤机理有关。TPTHCh与T opoⅠ、DNA 形成三元复合物与复制酶相互作用时对双股DNA 产生损伤,其细胞毒作用在DNA合成期,为S期细胞周期特异性药物;PIX作用于微管2微管蛋白系统,促进微管蛋白组装成微管,抑制微管解聚,微管异常使纺锤体失去正常功能,导致细胞死亡,主要作用于G2/M期;而cDDP可与DNA形成链内、链间交叉连结,破坏DNA功能,阻止DNA复制,为细胞周期非特异性药物5。由此可见,3种药物具有不同的抗肿瘤机理,3者联合应用可以通过互补而增强抗肿瘤效果。
不同剂量的3药联合应用及TPTHCh与PIX2药联合的组内差异不显著,故半量联合可取得全量联合应用相同的抑制效果,有助于减轻化疗的副作用。
总之,本研究显示,PIX、TPTHCh及cDDP3药联合应用对细胞株OC3的抑制作用明显强于对照组,并且半量联合与全量联合效果相似。因此,在临床应用中对于难治性、复发性的卵巢癌病人可采用3药半量联合方案,既可提高疗效,又能减轻副作用,但由于体外实验与体内药物联合应用在药物代谢上还有差距,故仅能为临床应用提供参考。
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5 廖子君,南克俊,韩军主编.现代肿瘤治疗药物学M.
西安:世界图书出版社西安公司,2002.2632284
(收稿日期 2002210221)第一作者简介:刘冠媛(1970-),女,山东大学齐鲁医院妇产科在读博士。研究方向:妇科肿瘤。
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