Long noncoding RNA
associated-competing endogenous RNAs in gastric cancer
Tian Xia *,Qi Liao,Xiaoming Jiang,Yongfu Shao,Bingxiu Xiao,Yang Xi &Junming Guo
Department of Biochemistry and Molecular Biology,Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology,Ningbo University School of Medicine,Ningbo,Zhejiang,315211,China.
Some long noncoding RNAs (lncRNAs)play important roles in the regulation of gene expression by acting as competing endogenous RNAs (ceRNAs).However,the roles of lncRNA associated-ceRNAs in oncogenesis are not fully understood.Here,based on lncRNA microarray data of gastric cancer,bioinformatic algorithm miRcode and microRNA (miRNA)targets database TarBase,we first
constructed an lncRNA-miRNA-mRNA network.Then,we confirmed it by data of six types of other cancer including head and neck squamous cell carcinoma,prostate cancer,papillary thyroid
carcinoma,pituitary gonadotrope tumors,ovarian cancer,and chronic lymphocytic leukemia.The results showed a clear cancer-associated ceRNA network.Eight lncRNAs (AC009499.1,GACAT1,GACAT3,H19,LINC00152,AP000288.2,FER1L4,and RP4-620F22.3)and nine miRNAs (miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-19a-3p,miR-20b-5p,miR-106a-5p,miR-106b-5p,miR-31-5p,
miR-139-5p,and miR-195-5p)were involved.For instance,through its miRNA response elements (MREs)to compete for miR-106a-5p,lncRNA-FER1L4regulates the expression of PTEN,RB1,RUNX1,VEGFA,CDKN1A,E2F1,HIPK3,IL-10,and PAK7.Furthermore,cellular experimental results indicated that FER1L4-small interfering RNA (siRNA)simultaneously suppressed FER1L4and RB1mRNA level.These results suggest that lncRNAs harbor MREs and play important roles in post-transcriptional regulation in cancer.
M
icroRNAs (miRNAs)play important roles in gene expression regulation 1.Each miRNAs may repress up to hundreds of transcripts,while each transcript may be targeted by multiple miRNAs 2.Their regulatory networks participate in a variety of biological processes,including development,oncogenesis and tumor
metastasis 3–5.
Salmena and colleagues previously proposed a competing endogenous RNA (ceRNA)hypothesis 6,which was supported by numerous evidences 7–11.The hypothesis described a complex post-transcriptional regulatory network mediated by miRNAs:by sharing one or more miRNA response elements (MREs),protein-coding and noncoding RNAs compete for binding to miRNAs and then regulate each other’s expression (Fig.1).Later,more studies provided convincing evidences for this hypothesis.Pandolfi group focused on phosphatase and tensin homologue (PTEN)and its ceRNAs 12,13.They demonstrated the existence of ceRNA interaction among mRNAs in vitro and in vivo .Sumazin et al.analysed gene expression data in glioblastoma,and found more than 7,000transcripts acting as ceRNAs 14.Further study showed that ceRNAs are not limited to mRNAs.Linc-MD1,a long noncoding RNA (lncRNA),regulates myoblast differentiation by competing for binding to miR-133and miR-13515.
To annotate the associations between noncoding RNAs and diseases,several disease-associated bioinformatic methods and databases including LncRNADisease 16,HMDD 17and dbDEMC 18have been developed.Otherwise,computational tools for miRNA-target interaction prediction have been developed 19.
The above studies showed a new layer of post-transcriptional regulation.However,to understand the roles of ceRNA networks in pathological conditions,more work is required.It is found that active translation of mRNA impedes interaction of miRNAs and their targets 20.Contrast to mRNAs,noncoding RNAs are more effective ceRNAs without any interference from translation 6.Considering these findings and the fact that gastric cancer is one of the most frequent causes of mortality in the world 21,in the current study,we first focused on gastric cancer associated-lncRNAs and constructed a ceRNA network in silico .Then,to confirm this network,we performed a regression analysis using several sets of gene expression data of other types of cancer including head
OPEN
SUBJECT AREAS:
GASTRIC CANCER CANCER GENOMICS
Received 7May 2014Accepted 30July 2014Published 15August 2014
Correspondence and requests for materials should be addressed to
J.G.(junmingguo@
https://www.doczj.com/doc/9616145229.html,)
*Current address:Yuyao Education Bureau,Yuyao,Zhejiang,315400,
China.
and neck squamous cell carcinoma,prostate cancer,papillary thyr-oid carcinoma,pituitary gonadotrope tumors,chronic lymphocytic leukaemia,and ovarian cancer.Finally,we used several experi-mental data to prove the ceRNA network.This new approach of predicting cancer associated-ceRNA network might help us easily searching for candidate cancer-associated
ceRNAs.
Figure 1|Competing endogenous RNAs (ceRNAs)function as microRNA (miRNA)sponges sequester miRNAs to regulate expression level of other transcripts sharing common miRNA response elements (MREs).(A)Downregulation of long noncoding RNAs (lncRNA)leads more miRNA molecules free to bind to mRNA that contain the same MREs,thus its protein expression level decreases.(B)Overexpression of lncRNA leads fewer miRNA molecules to bind to mRNA,thus its protein expression level increases.
Table 1|A collection of differentially expressed lncRNAs between gastric cancer tissues and paracancerous tissues
lncRNA Gene ID
Expression change Fold change
P -value AC009499.1ENSG00000203386Up-regulation 5.40.040GACAT1ENSG00000232991Up-regulation 4.10.008GACAT3ENSG00000236289Up-regulation 3.30.007H19
ENSG00000130600Up-regulation 5.90.025LINC00152ENSG00000222041Up-regulation 3.40.004RMRP
ENSG00000199916Up-regulation 3.80.043RP11-179G5.4ENSG00000235082Up-regulation 3.20.022RP11-187O7.3ENSG00000259124Up-regulation 3.10.031RPPH1
ENSG00000259001Up-regulation 3.00.001ABHD11-AS1ENSG00000225969Down-regulation 3.00.027AC073871.2ENSG00000182648Down-regulation 3.00.002AKR7A2P1ENSG00000229020Down-regulation 3.10.001AP000288.2ENSG00000227757Down-regulation 3.80.027FER1L4
ENSG00000088340Down-regulation 9.20.047RP1-15D23.2ENSG00000224228Down-regulation 5.20.048RP4-620F22.3ENSG00000238081Down-regulation 3.80.021RP4-740C4.4
ENSG00000229813
Down-regulation
3.0
0.039
Results
Aberrantly expressed lncRNAs in gastric cancer.From the lnc-RNAs expression profiles(data accessible at NCBI GEO database, accession GSE47850,Guo,2013),we selected53lncRNAs diffe-rentially expressed between gastric cancer tissues and paracan-cerous tissues(fold change$3.022,P-value,0.05).To enhance the data reliability,we only retained lncRNAs included in Encyclopedia of DNA Elements(ENCODE)23.Finally,17lncRNAs (9,up-regulated;8down-regulated)were selected(Table1). Gastric cancer associated-lncRNAs’MREs predicted by miRcode. Our previous study has found several gastric cancer-associated miRNAs that include miR-17-5p,miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-19a-3p,miR-20a-5p,miR-20b-5p,miR-21-5p,miR-31-5p,miR-106a-5p,miR-106b-5p,miR-133b,miR-139-5p,miR-195-5p, miR-340-3p,miR-378a-3p,miR-421,miR-497-5p and miR-65821. Here,we focused on whether these miRNAs are targeted on above lncRNAs.Since miRNAs are interacting with lncRNAs through their MREs within ceRNA network,the first thing we should do was to search for the potential MREs in lncRNAs.MREs predicted by miRcode showed that13miRNAs may interact with nine of seventeen lncRNAs(Table2).
mRNAs targeted by miRNAs.To establish lncRNA-miRNA-mRNA network(ceRNA network),the next step we should do was to search for miRNAs’mRNA targets.Based on those miRNAs that might interact with lncRNAs(Table2),we searched miRNAs’mRNA targets with experimental support using TarBase24.The results showed that nine miRNAs including miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-19a-3p,miR-20b-5p,miR-106a-5p,miR-106b-5p,miR-31-5p,miR-139-5p,and miR-195-5p may be included(Table3).Most of their targets are cancer-associated genes such as PTEN,TNF-a,STAT3,VEGFA,E2F1,RB1,p21,MMP16,BCL2,CCND1,CDK6, CyclinD1,etc.Their functions are involved in cell proliferation,cell cycle,apoptosis,invasion and metastasis.
ceRNA network.Based on the above data from gastric cancer (Table2and Table3),we constructed an lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA network.To get more robust results,we assigned a P-value to each relationship by re-sampling analysis(see Methods).As shown in Figure2,in this ceRNA network,eight lncRNAs and nine miRNAs were involved.
Positive correlation between ceRNAs’expression levels.Our constructed ceRNA network shows that lncRNAs could interact with mRNA in gastric cancer(Fig.2).To confirm this finding,we performed a regression analysis using several sets of gene expression data of other types of cancer including head and neck squamous cell carcinoma,prostate cancer,papillary thyroid carcinoma,pituitary gonadotrope tumors,chronic lymphocytic leukemia,and ovarian cancer.The results reveal a very good or perfect positive corre-lation between ceRNAs’expression levels(Fig.3).For example, FER1L4interacted with RUNX1mediated by miR-106a-5p (Fig.3A and B);LINC00152interacted with THBS1mediated by miR-18a-5p(Fig.3C and D);while H19interacted with MYCN mediated by miR-19a-3p(Fig.3E and F).
FER1L4-RB1is one pair of ceRNAs associated by miR-106a-5p. RB1is one of miR-106a-5p’s targets,and has been validated by dual luciferase reporter assay25.In this study,the interaction between FER1L4and miR-106a-5p was first predicted by miRcode (Table2).Then dual luciferase reporter assay showed that the luciferase activity of the mutant FER1L4plasmid was about56% higher than that of the wild-type plasmid(Fig.4).This indicated that the mutations introduced in the seed matches impair the ability of miR-106a-5p to bind to FER1L4.Take together,both FER1L4and RB1are targets of miR-106a-5p.This is the basic condition of ceRNAs6.
Next,we observed whether FER1L4and RB1expression levels are associated.Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(qRT-PCR)analysis revealed that transfection of small interfering RNA(siRNA)against FER1L4not only reduced FER1L4levels in GES-1,AGS,MGC-803and SGC-7901,but also reduced RB1levels in all cells tested(Fig.5).Since FER1L4is the target of miR-106a-5p(Table2and Fig.4),FER1L4knockdown led to more miR-106a-5p free to bind to other targets;and RB1mRNA is one of them.
Discussion
Studies revealed that lncRNAs play important regulatory roles in gene expression regulation and contribute to oncogenesis and
tumor
Table2|Putative miRNAs targeting lncRNA
lncRNA miRNAs
AC009499.1miR-18a-5p,miR-18b-5p
GACAT1miR-106a-5p
GACAT3miR-195-5p,miR-497-5p
H19miR-17-5p,miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-19a-3p,miR-
20a-5p,miR-20b-5p,miR-106a-5p,miR-106b-5p
LINC00152miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-31-5p,miR-139-5p,miR-
195-5p,miR-497-5p
ABHD11-AS1miR-133b
AP000288.2miR-19a-3p
FER1L4miR-18a-5p,miR-18b-5p,miR-106a-5p,miR-133b,
miR-139-5p,miR-195-5p,miR-497-5p
RP4-620F22.3miR-195-5p,miR-497-5p
Table3|Validated mRNAs’targets from TarBase
miRNA mRNAs targeted by miRNAs
miR-18a-5p ATM,BCL2L11,CA12,CA13,CCNL1,CKAP5,CREBL2,CTDSPL,CTGF,DICER1,ER a,ESR1,HIF1A,HOXA9,MID1,PTEN,RAB23, RAB5A,SERTAD3,Smad4,TGFBR2,THBS1,TNFSF11,VIL2
miR-18b-5p ER a,ESR1
miR-19a-3p BCL2L11,Bim,CCND1,CTGF,DPYSL2,ERBB4,ESR1,HOXA5,MECP2,MYCN,NR4A2,PRMT5,PTEN,RAB14,Smad4,SOCS1, TGFBR2,THBS1,TNF-a,VPS4B
miR-20b-5p ARID4B,BAMBI,CDKN1A,ESR1,HIF1A,HIPK3,MUC17,PPARG,STAT3,VEGFA
miR-31-5p CASR,CXCL12,ETS1,FOXP3,FZD3,HOXC13,ITGA5,KLF13,LATS2,MMP16,MPRIP,NFAT5,NUMB,PPP2R2A,RET,RHOA,SELE, TIAM1,YY1
miR-106a-5p CDKN1A,E2F1,HIPK3,IL-10,PAK7,PTEN,RB1,RUNX1,VEGFA
miR-106b-5p AFP,AKAP11,BRMS1L,CABP2,CASP7,CD34,CDC37L1,CDK5R2,CDKN1A,CLOCK,DNAJB6,E2F1,EIF5A2,ELK3,HMGB3, IFNAR2,JAK1,KDR,KIF23,LIMK1,MXI1,p21,PCAF,PKD2,PTEN,RB1,RBL2,RUNX1T1,Smad2/3,Smad9,SSX2,T b RII,TLR2,
VEGFA
miR-139-5p HOXA10
miR-195-5p BCL2,BCL2L11,CCND1,CDK6,CyclinD1,E2F3,KRT7,MECP2,SKI,VEGFA,WEE1
metastasis 26,27.LncRNAs can function as endogenous miRNA sponges as a part of ceRNA network 15,28,29.In current study,based on lncRNA microarray and miRNA microarray data,we constructed the ceRNA network jointed by lncRNAs,miRNAs and mRNAs.Previous works have proposed several different strategies,such as RNA22and miRanda 12,30,to predict miRNA-target interactions.However,these algorithms were mainly used in the prediction of miRNA-mRNA interaction.Since that lncRNAs have recently emerged as major players in governing fundamental biological pro-cesses and disease occurrence;and that ,18%of the protein-coding genes that produce lncRNAs are associated with cancers,whereas only 9%of all human protein-coding genes are associated with can-cers 31,here,we focused on searching for lncRNA-miRNA interac-tions.We used miRcode,an lncRNA-miRNA interaction prediction algorithm,to predict MREs in lncRNAs.In addition,to enhance the data reliability,validated mRNA targets were acquired from TarBase only with effective experimental supporting data.These defined rules are beneficial to screening for candidate ceRNAs.
Our analysis suggested lncRNAs harbor potential MREs and par-ticipate in a complex ceRNA network (Fig.2).The network brings to light an unknown miRNA regulatory network in gastric cancer.It also suggests that lncRNAs may play crucial roles in gastric cancer occurrences and development (Table 1).As Sumazin et al.proved,ceRNA network is a scale-free network in which miRNAs mediated interactions exhibit symmetric behavior 14.We found that many oncogenes and tumor suppressors participate in the ceRNA network in gastric cancer (Table 3).For instance,mediated by miR-106a-5p,PTEN,RB1,RUNX1,VEGFA,CDKN1A,E2F1,HIPK3,IL-10,or PAK7may interact with lncRNA-FER1L4,GACAT1and H19.Previous study has showed that miR-106a-5p,the core element in this network,is one of the typical onco-miRNAs 32.FER1L4and RB1are targeted by miR-106a-5p.siRNA silencing of FER1L4led to RB1mRNA level decrease (Fig.5).
In addition,we analysed ceRNAs’expression in several sets of data from cancers including solid cancers and leukemia.We found that there were excellent positive correlations between their expression levels (Fig.3).This coexpression character corresponds with ceRNA hypothesis.
Recently,two groups have identified a circular RNA (circRNA)that contains ,70MREs with miR-733,34.The circRNA sequesters miR-7away from its targets and suppresses its function.Thus cir-cular RNAs are a new class of ceRNAs 35,36.On the other hand,to predict ceRNAs’effect on transcriptional network,Ala and collea-gues developed a computational model of ceRNA 37.Further investi-gations of ceRNA have implications in many fields.For instant,to block the functions of miRNAs,Tang et al.constructed an artificial ceRNA named short tandem target mimic (STTM)38.STTM is sim-ilar to miRNA sponge,but contains different kinds of MREs that bind various miRNAs.Based on the ceRNA hypothesis,Liu et al.further presented a long intergenic noncoding RNA (lincRNA)data-base named Linc2GO 39.Li et al .also developed a database named starBase v2.0for predicting miRNA-ceRNA interactions 40.Moreover,ceRNA might be a new therapeutic approach to diseases 41.In conclusion,we proposed a new approach to construct ceRNA network.It might help us to easily searching for ceRNAs involved in cancer-associated lncRNAs.Our findings suggest that lncRNAs may harbor MREs and participate in a complex ceRNA network.
Methods
The methods were carried out in ‘‘accordance’’with the approved guidelines.Tissue samples .Biopsy samples of gastric cancer tissues and paracancerous tissues were obtained from the Affiliated Hospital of Ningbo University School of Medicine.The paracancerous tissues were 5cm from the edge of tumor;and there were no obvious tumor cells,as evaluated by an experienced pathologist.There was no radiotherapy or chemotherapy prior to the endoscopy examination.The Human Research Ethics Committee from Ningbo University approved all aspects.Written informed consent was taken from all subjects.
RNA extraction .Total RNA was extracted by using TRIzol Reagent (Life
Technologies,Carlsbad,CA,USA)according to the manufacturer’s protocol.RNA quantity was measured by a SmartSpec Plus spectrophotometer (Bio-Rad,Hercules,CA,USA).RNA purity was evaluated by the A 260/A 280ratio.
lncRNA microarray and computational analysis .For lncRNA expression profiling,the Human LncRNA Array (Arraystar,Rockville,MD,USA)which covered 18,534lncRNAs was used.After hybridization and washing,the arrays were scanned by an Axon GenePix 4000B Microarray Scanner (Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA).Raw data were extracted and normalized by NimbleScan v2.5software package (Roche NimbleGen,Madison,WI,USA).
Construction of the ceRNA network .The construction of ceRNA network included three steps (Fig.6):(i)lncRNA screening:lncRNAs that were up-or down-regulated fold change $3.0and P -value ,0.05were first retained;then to enhance the data reliability,lncRNA whose sequences have not been recorded in ENCODE were removed;(ii)lncRNA-miRNA interactions were predicted by miRcode (https://www.doczj.com/doc/9616145229.html,/);(iii)mRNAs that were targeted by miRNAs with experimental support were from TarBase (http://www.microrna.gr/tarbase).
Re-sampling analysis of ceRNA network .To get more robust results of ceRNA network,we assigned a P -value to each relationship by re-sampling analysis 42.First,we re-sampled the set of above miRNAs from the pool of all human miRNAs in miRBase database and re-inferred the ceRNA relationships.Then we observed
whether the previously predicted ceRNA relationships occurred in the newly inferred dataset.We repeated the re-sampling 10,000times and counted the number of times that each ceRNA relationship occurred.The P-value was defined as the number of occurred times over 10,000.Finally,we obtained the ceRNA relationships using the cutoff of 0.01.
Regression analysis of ceRNAs’expression level .Several sets of gene expression data in cancers were analysed (data accessible at NCBI GEO database,accession GDS1667,Slebos et al ,2005;accession GDS4159,Vitari et al ,2011;accession GDS1665,He et al ,2005;accession GDS4275,Michaelis et al ,2011;accession GDS4168,Gutierrez et al ,2010;accession GDS4066,Spillman et al ,2011).Regression analysis and correlation coefficient were generated using SPSS Statistics v20.0software package (IBM,Armonk,NY,USA).
Cells and culture conditions .Human gastric epithelial cell line,GES-1,was obtained from Cancer Institute and Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences (Beijing,China).Human gastric cancer cell lines,AGS,MGC-803and SGC-7901,were obtained from Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences (Shanghai,China).Human embryonic kidney cell line,HEK 293T,was obtained from GeneChem Co.,Ltd.(Shanghai,China).GES-1,AGS,MGC-803and SGC-7901were grown in RPMI Medium 1640(Life Technologies)plus 10%fetal bovine serum (FBS).HEK 293T was grown in DMEM (Life Technologies)plus
10%
Figure 2|ceRNA network in gastric cancer.Coloured nodes represent miRNAs;black nodes represent lncRNAs;gray nodes represent mRNAs;coloured edges indicate miRNA-target interactions.mRNAs’names are not shown.
FBS.All cell lines were grown at 37u C in a humidified atmosphere with 5%CO 2.Cells were counted using a TC10Automated Cell Counter (Bio-Rad).
Dual luciferase reporter assay .miR-106a-5p expression plasmid (GV268)was purchased from GeneChem Co.,Ltd.(Shanghai,China).The wild-type and mutant
DNA sequences of FER1L4were custom synthesized by GeneChem Co.,Ltd.and cloned into GV272Firefly luciferase plasmid (GeneChem).The miR-106a-5p MRE of wild-type FER1L4was 59-GCACUU-39,while the mutant sequence was 59-UACAGG-39.HEK 293T of 80%confluence in 24-well plates was transfected using Lipofectamine 2000Reagent (Life Technologies)according to the
manufacturer’s
Figure 3|Linear regression of ceRNAs’expression level.Dashed lines represent 95%confidence interval.(A)FER1L4vs RUNX1(head and neck squamous cell carcinoma,n 536).(B)FER1L4vs RUNX1(prostate cancer,n 515).(C)LINC00152vs THBS1(papillary thyroid carcinoma,n 518).(D)LINC00152vs THBS1(pituitary gonadotrope tumors,n 523).(E)H19vs MYCN (chronic lymphocytic leukemia,n 552).(F)H19vs MYCN (ovarian cancer,n 515).
protocol.Firefly luciferase plasmid and miR-106a-5p expression plasmid were co-transfected with pRL-TK Renilla luciferase vector (Promega,Madison,WI,USA)for normalization.48hours after transfection,luciferase activity was measured using Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega).All experiments were performed in triplicate.
Transient transfection .For the transfection of siRNA,GES-1,AGS,MGC-803and SGC-7901(23105)were seeded in 6-well plates.The following day they were transfected with 120nM siRNAs using Lipofectamine 2000Reagent (Life Technologies).FER1L4siRNA was:59-CAGGACAGCUUCGAGUUAATT-39
(sense)and 59-UUAACUCGAAGCUGUCCUGTT-39(antisense).Negative control siRNA was:59-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-39(sense)and 59-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-39(antisense).
qRT-PCR analysis .qRT-PCR was performed using GoTaq 2-Step RT-qPCR System (Promega)in a Mx3005P QPCR System (Stratagene,La Jolla,CA,USA)according to the manufacturer’s protocol.Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)was used as a control.Relative quantification of gene expression was performed with 2-DD C t method 43.FER1L4primers:forward 59-CCGTGTTGAGGTGCTGTTC-39and reverse 59-GGCAAGTCCACTGTCAGATG-39.RB1primers:forward 59-TGGCG-TGCGCTCTTGAGGTT-39and reverse 59-AGAGCCATGCAAGGGATTCC-ATGA-39.GAPDH primers:forward 59-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAA-39and reverse 59-AATGAAGGGGTCATTGATGG-39.All experiments were performed in triplicate.
Statistical analysis .Data were presented as mean 6SD.Differences among groups were evaluated by two-tailed Student’s t -test by using SPSS Statistics v20.0software package (IBM).P ,0.05was considered to be statistically
significant.
Figure 4|Relative Firefly/Renilla luminescence (mean 6SD,n 53)mediated by luciferase plasmid harboring the wild-type or mutant FER1L4sequence upon transfeciton with miR-106a-5p expression plasmid.It indicates the direct interaction between FER1L4and miR-106a-5p.***P ,
0.001.
Figure 5|qRT-PCR analysis of expression levels (mean 6SD,n 53)of FER1L4and RB1in GES-1,AGS,MGC-803and SGC-7901treated with siRNA against FER1L4.NC,negative control.*P ,0.05;**P ,0.01;***P ,
0.001.
Figure 6|A flowchart of ceRNA network construction.(i)lncRNAs that are fold change $3.0and P -value ,0.05were retained;(ii)lncRNAs that have not been recorded in ENCODE were removed;(iii)miRNA-lncRNA interactions were predicted by miRcode;(iv)mRNAs that targeted by miRNAs were captured from TarBase;(v)ceRNA network construction.
1.Pasquinelli,A.E.MicroRNAs and their targets:recognition,regulation and an
emerging reciprocal relationship.Nat Rev Genet13,271–282(2012).
2.Thomas,M.,Lieberman,J.&Lal,A.Desperately seeking microRNA targets.Nat
Struct Mol Biol17,1169–1174(2010).
3.Zhang,H.,Li,Y.&Lai,M.The microRNA network and tumor metastasis.
Oncogene29,937–948(2010).
4.Gennarino,V.A.et al.Identification of microRNA-regulated gene networks by
expression analysis of target genes.Genome Res22,1163–1172(2012).
5.Li,L.et al.3’UTR shortening identifies high-risk cancers with targeted
dysregulation of the ceRNA network.Sci Rep4,5406(2014).
6.Salmena,L.,Poliseno,L.,Tay,Y.,Kats,L.&Pandolfi,P.P.A ceRNA hypothesis:
the Rosetta Stone of a hidden RNA language?Cell146,353–358(2011).
7.Ebert,M.S.,Neilson,J.R.&Sharp,P.A.MicroRNA sponges:competitive
inhibitors of small RNAs in mammalian cells.Nat Methods4,721–726(2007).
8.Poliseno,L.et al.A coding-independent function of gene and pseudogene mRNAs
regulates tumour biology.Nature465,1033–1038(2010).
9.Wang,J.et al.CREB up-regulates long non-coding RNA,HULC expression
through interaction with microRNA-372in liver cancer.Nucleic Acids Res38, 5366–5383(2010).
10.Lee,D.Y.et al.Expression of versican3’-untranslated region modulates
endogenous microRNA functions.PLoS One5,e13599(2010).
11.Jeyapalan,Z.et al.Expression of CD443’-untranslated region regulates
endogenous microRNA functions in tumorigenesis and angiogenesis.Nucleic Acids Res39,3026–3041(2011).
12.Tay,Y.et al.Coding-independent regulation of the tumor suppressor PTEN by
competing endogenous mRNAs.Cell147,344–357(2011).
13.Karreth,F.A.et al.In vivo identification of tumor-suppressive PTEN ceRNAs in
an oncogenic BRAF-induced mouse model of melanoma.Cell147,382–395 (2011).
14.Sumazin,P.et al.An extensive microRNA-mediated network of RNA-RNA
interactions regulates established oncogenic pathways in glioblastoma.Cell147, 370–381(2011).
15.Cesana,M.et al.A long noncoding RNA controls muscle differentiation by
functioning as a competing endogenous RNA.Cell147,358–369(2011).
16.Chen,G.et al.LncRNADisease:a database for long-non-coding RNA-associated
diseases.Nucleic Acids Res41,D983–D986(2013).
17.Li,Y.et al.HMDD v2.0:a database for experimentally supported human
microRNA and disease associations.Nucleic Acids Res42,D1070–D1074(2014).
18.Yang,Z.et al.dbDEMC:a database of differentially expressed miRNAs in human
cancers.BMC Genomics11,S5(2010).
19.Jeggari,A.,Marks,D.S.&Larsson,E.miRcode:a map of putative microRNA
target sites in the long non-coding transcriptome.Bioinformatics28,2062–2063 (2012).
20.Gu,S.,Jin,L.,Zhang,F.,Sarnow,P.&Kay,M.A.Biological basis for restriction of
microRNA targets to the3’untranslated region in mammalian mRNAs.Nat Struct Mol Biol16,144–150(2009).
21.Guo,J.et al.Differential expression of microRNA species in human gastric cancer
versus non-tumorous tissues.J Gastroenterol Hepatol24,652–657(2009). 22.McKiernan,P.J.,Molloy,K.,Cryan,S.A.,McElvaney,N.G.&Greene,C.M.Long
noncoding RNA are aberrantly expressed in vivo in the cystic fibrosis bronchial epithelium.Int J Biochem Cell Biol52,184–191(2014).
23.Harrow,J.et al.GENCODE:the reference human genome annotation for The
ENCODE Project.Genome Res22,1760–1774(2012).
24.Vergoulis,T.et al.TarBase6.0:capturing the exponential growth of miRNA
targets with experimental support.Nucleic Acids Res40,D222–D229(2012). 25.Volinia,S.et al.A microRNA expression signature of human solid tumors defines
cancer gene targets.Proc Natl Acad Sci U S A103,2257–2261(2006).
26.Ying,L.et al.Downregulated MEG3activates autophagy and increases cell
proliferation in bladder cancer.Mol Biosyst9,407–411(2013).
27.Tripathi,V.et al.Long noncoding RNA MALAT1controls cell cycle progression
by regulating the expression of oncogenic transcription factor B-MYB.PLoS Genet9,e1003368(2013).
28.Wang,Y.et al.Endogenous miRNA sponge lincRNA-RoR regulates Oct4,Nanog,
and Sox2in human embryonic stem cell self-renewal.Dev Cell25,69–80(2013).29.Kallen,A.N.et al.The imprinted H19lncRNA antagonizes let-7microRNAs.Mol
Cell52,101–112(2013).
30.Jalali,S.,Bhartiya,D.,Lalwani,M.K.,Sivasubbu,S.&Scaria,V.Systematic
transcriptome wide analysis of lncRNA-miRNA interactions.PLoS One8,e53823 (2013).
31.Khachane,A.N.&Harrison,P.M.Mining mammalian transcript data for
functional long non-coding RNAs.PLoS One5,e10316(2010).
32.Xiao,B.et al.Detection of miR-106a in gastric carcinoma and its clinical
significance.Clin Chim Acta400,97–102(2009).
33.Memczak,S.et al.Circular RNAs are a large class of animal RNAs with regulatory
potency.Nature495,333–338(2013).
34.Hansen,T.B.et al.Natural RNA circles function as efficient microRNA sponges.
Nature495,384–388(2013).
35.Karreth,F.A.&Pandolfi,P.P.ceRNA cross-talk in cancer:when ce-bling rivalries
go awry.Cancer Discov3,1113–1121(2013).
36.Tay,Y.,Rinn,J.&Pandolfi,P.P.The multilayered complexity of ceRNA crosstalk
and competition.Nature505,344–352(2014).
37.Ala,U.et al.Integrated transcriptional and competitive endogenous RNA
networks are cross-regulated in permissive molecular environments.Proc Natl Acad Sci U S A110,7154–7159(2013).
38.Tang,G.et al.Construction of short tandem target mimic(STTM)to block the
functions of plant and animal microRNAs.Methods58,118–125(2012).
39.Liu,K.,Yan,Z.,Li,Y.&Sun,Z.Linc2GO:a human lincRNA function annotation
resource based on ceRNA hypothesis.Bioinformatics29,2221–2222(2013). 40.Li,J.H.,Liu,S.,Zhou,H.,Qu,L.H.&Yang,J.H.starBase v2.0:decoding miRNA-
ceRNA,miRNA-ncRNA and protein-RNA interaction networks from large-scale CLIP-Seq data.Nucleic Acids Res42,D92–D97(2014).
41.Almeida,M.I.,Reis,R.M.&Calin,G.A.Decoy activity through microRNAs:the
therapeutic implications.Expert Opin Biol Ther12,1153–1159(2012).
42.Li,J.et al.Identification of high-quality cancer prognostic markers and metastasis
network modules.Nat Commun1,34(2010).
43.Yu,X.et al.Growth inhibitory effects of three miR-129family members on gastric
cancer.Gene532,87–93(2013).
Acknowledgments
This work was supported by the Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (Grant No.LY14C060003),the Applied Research Project on Nonprofit Technology of Zhejiang Province(Grant No.2014C33222),the National Natural Science Foundation of China(Grant No.81171660and31301068),the Natural Science Foundation of Ningbo (Grant No.2013A610207),the Scientific Innovation Team Project of Ningbo(Grant No. 2011B82014),the Outstanding(Postgraduate)Dissertation Growth Foundation of Ningbo University(Grant No.PY2012004),and the K.C.Wong Magna Fund in Ningbo University. Author contributions
T.X.and J.G.conceived and designed the experiments.T.X.Q.L.X.J.Y.S.B.X.performed the experiments.T.X.Q.L.X.J.B.X.Y.X.J.G.analyzed the data.T.X.J.G.wrote the paper. Additional information
Competing financial interests:The authors declare no competing financial interests. How to cite this article:Xia,T.et al.Long noncoding RNA associated-competing endogenous RNAs in gastric cancer.Sci.Rep.4,6088;DOI:10.1038/srep06088(2014).
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-
NoDerivs4.0International License.The images or other third party material in
this article are included in the article’s Creative Commons license,unless indicated
otherwise in the credit line;if the material is not included under the Creative
Commons license,users will need to obtain permission from the license holder
in order to reproduce the material.To view a copy of this license,visit http://
https://www.doczj.com/doc/9616145229.html,/licenses/by-nc-nd/4.0/
虚拟与实体经济的比较 与实体经济相比,虚拟经济明显具有不同的特征,主要表现在以下几个方面 第一,虚拟性。这是虚拟经济最根本的特征,也是虚拟经济区别实体经济最突出的特点。虚拟经济虚拟资本是建立在虚拟性的基础上当然网络经济在这里不是本文研究的内容。主要表现在,虚拟资本中所包括的股票、债券等交易都是在虚拟的运动中完成的,并无实物进行交换,是虚拟交易行为。 第二,高风险性。虚拟经济可以为实体经济提供风险管理服务,但由于影响虚拟资本价格的因素众多,这些因素自身变化无常,加之非专业人士受其专业知识、信息采集、信息分析能力、资金、时间精力等多方面限制,虚拟资本投资成为一项风险较高的投资领域,尤其是随着各种风险投资基金、对冲基金等大量投机性基金的介入,加剧了虚拟经济的高风险。 第三,复杂性。随着虚拟经济的快速发展,其交易规模和交易品种不断扩大,同时虚拟经济的交易载体、交易主体、交易决策及影响因素不断趋向多元化,这就使虚拟经济的存在和发展变得更为复杂手难以驾御。 第四,高度流动性。实体经济活动的实现需要一定的时间和空间,即使在信息技术高度发达的今天,其从生产到实现需求均需要耗费一定的时间。但虚拟经济是虚拟资本的持有与交易活动,只是价值符号的转移,相对于实体经济而言,其流动性很高随着信息技术的快速发展,股票、有价证券等虚拟资本无纸化、电子化,其交易过程在瞬间即刻完成。正是虚拟经济的高度流动性,提高了社会资源配置和再配置的效率,使其成为现代市场经济不可或缺的组成部 分。 第五,不稳定性。虚拟经济相对与实体经济而言,具有较强的不稳定性。这是由于虚拟经济自身所具有的虚拟性,使得各种虚拟资本在市场买卖过程中,价格的决定并非像实体经济价格决定过程一样遵循价值规律,而是更多地取决于虚拟资本持有者和参与交易者对未来虚拟资本所代表的权益的主观预期,而这种主观预期又取决于宏观经济环境、行业前景、政治及周边环境等许多非经济因素,增加了虚拟经济的不稳定性。
登录失败： 未授予用户在此计算机上的请求登录类型。无法访问。您可能没有权限使用网络资源。 请与这台服务器的管理员联系以查明您是否有访问权限。 如果出现“xxx计算机无法访问，您可能没有权限使用网络资源。请与这台服务器的管理员联系以查明您是否有访问权限”的报错，这可能是计算机的安全设置被改动过了，导致目标计算机无法被访问。可以采取以下步骤解决： 1.取消简单xx。 打开“我的电脑”，在菜单上选择“工具”->“文件夹选项”->“查看”，清除“使用简单文件共享（推荐）”的选择。 2.启用guest账户。 右键点击“我的电脑”，选择“管理”，选择“本地用户和组”->“用户”，右键点击Guest用户，选“属性”，清除“帐户已停用”的选择。 3.在组策略中设置，安全策略。 开始--运行--gpedit.msc--计算机配置--windows设置--安全设置--本地策略--“用户权力指派”，双击右边的“从网络访问此计算机”，保证其中有Everyone，双击左边的“拒绝从网络访问此计算机”，保证其是空的。 4.选择左边的“本地策略”->“安全选项”， a.确认右边的“网络访问：
本地帐户的共享与安全模式”为“经典”； b.确认右边的“Microsoft网络客户： 为通讯启用数字签名（总是）”为“已停用”； c.确认右边的“Microsoft网络客户： 1 / 8 为通讯启用数字签名（如果服务器允许）”为“已启用”；d.确认右边的“Microsoft网络服务器： 为通讯启用数字签名（总是）”为“已停用”； e.确认右边的“Microsoft网络服务器： 为通讯启用数字签名（如果服务器允许）”为“已启用”。 5．正确配置网络防火墙 1>很多机器安装了网络防火墙，它的设置不当，同样导致用户无法访问本机的共享资源，这时就要开放本机共享资源所需的NetBIOS端口。笔者以天网防火墙为例，在“自定义IP规则”窗口中选中“允许局域网的机器使用我的共享资源”规则，最后点击“保存”按钮，这样就开放了NetBIOS端口。 2>关闭windows自带防火墙。 6．合理设置用户访问权限 网络中很多机器使用NTFS文件系统，它的ACL功能（访问控制列表）可以对用户的访问权限进行控制，用户要访问这些机器的共享资源，必须赋予相应的权限才行。如使用Guest账号访问该机器的CPCW共
论虚拟性实践 李超元 内容提要 虚拟是“超越现实性的思维方式和实践方式”。虚拟性实践是人们思维虚拟的物化手段和外化过程，它普遍地存在于人类的实践活动中。按照物质中介的特征，可以把虚拟性实践划分为四种基本类型。在电脑和网络应用之前，虚拟性实践的价值功用主要表现在满足主体交流、传播和储存知识、信息等精神和文化生活的需要；电脑数字化虚拟的出现，则使虚拟性实践最大限度地摆脱“实物符号”现实性的限制，以新的实践方式为人类开辟了新的生存和发展空间。 “虚拟性实践”是人类实践的基本方式之一。它作为人的本质力量感性表现出来的对现实性局限的超越，很早就存在了，只不过在电脑数字化虚拟方式出现之前，由于虚拟还没有达到纯粹的形态，所以没有引起人们的特别注意，更没有把它作为一个独立的哲学范畴来对待。近些年来，由于电脑和网络的迅速发展，纯粹形态的虚拟性实践越来越醒目地凸显出来，从而引发了哲学的深层次思考。 虚拟的含义和虚拟的两种形态 对于虚拟的含义，人们的理解和界定不尽相同，主要观点归纳起来大体有以下几种。 一种是把虚拟界定为同“实物”、“事实”相对应的“假设”、“虚构”或“模拟”；另一种是狭义地从技术层面把虚拟界定为“用0—1数字方式去表达和构成事物以及关系”，“是数字化方式的构成”；第三种是从广义的文化哲学角度把虚拟界定为“符号化”，或界定为“规则文明，指各种规则的合成、选择及其演化”；第四种是从思维方式角度把虚拟界定为“一种超越现实的创造性的思维活动”；第五种是把虚拟界定为“对现实实在性的超越”；是通过理性具体建构成的“不具有如现实的生活世界中那样的外在可感知的客观实在性”；等等。 比较以上几种观点，我认为把虚拟界定为“对现实性的超越”更具哲学的一般性。这里需要特别说明的是，在对虚拟定义时，应注意虚拟存在着两种不同的形态，即“思维虚拟”和“实践虚拟”。“思维虚拟”是指在抽象的思维活动中对现实性的超越，即概念的非现实性重构；“实践虚拟”则是在实践活动中感性表现出来的对现实性的超越。“思维虚拟”和“实践虚拟”是两个既有联系又有区别的虚拟形态。作为更具一般性的虚拟定义，应该涵盖思维和实践两个领域。因此，我主张把虚拟界定为“超越现实性的思维方式和实践方式”。这样界定可以避免把虚拟误解为只有一种形态。 虚拟性实践的普遍性和基本类型 虚拟性实践作为感性表现出来的对现实性的超越，不仅很早就出现了，而且普遍地存在于人类的实践活动中。譬如大量的艺术实践活动就具有“超越现实性”的品格：舞台上演员
提示无法访问你可能没有权限使用网络资源，从以下几种方法试一试。 （1)安装NWlink IPX/SPX/NetBIOS Compatible Transport Protocol协议。 （2)开启guest账号：右击我的电脑\管理\用户有个guest，双击之去掉“账户已停用”前面的勾。 （3)右击我的电脑\属性\计算机名，查看该选项卡中出现的局域网工作组名称 （4）使用winxp防火墙的例外：winxp防火墙在默认状态下是全面启用的，这意味着运行计算机的所有网络连接，难于实现网上邻居共享。同时，由于windows防火墙默认状态下是禁止“文件与打印机共享的”，所以，启用了防火墙，往往不能共享打印，解决办法是：进入“本地连接”窗口，点“高级”\“设置”\“例外”\在程序与服务下勾选“文件和打印机共享”。 （5)删除“拒绝从网络上访问这台计算机”项中的guest账户：运行组策略（gpedit.msc）\本地计算机\计算机配置\windows 设置\安全设置\本地策略\用户权利指派\拒绝从网络访问这台计算机。如果其中有guest，则将其删除。（原因是：有时xp的guest 是不允许访问共享的） （6)取消“使用简单文件共享”方式：资源管理器\工具\文件夹选项\查看\去掉“使用简单文件共享（推荐）”前面的勾。 （7)工作组名称一致。 （8)勾选“Microsoft网络的文件和打印机共享”。 （9)运行服务策略“Services.msc”。启动其中的“Clipbook Server”(文件夹服务器)：这个服务允许你们网络上的其他用户看到你的文件夹。当然有时你可把它改为手动启动，然后再使用其他程序在你的网络上发布信息。 （10)win98的计算机无法访问win2000/winxp的计算机，原因是：win2000/winxp的计算机中的guest用户被禁用了或者win2000/winxp采用NTFS分区格式，设置了权限控制。一般要允许win98访问的话，win2000/winxp里的安全控制里不要将everyone的账号组删除。 注意：a、如果您没有加入域并想查看“安全”选项卡，则设置显示“安全”选项卡：资源管理器\工具\文件夹选项\查看\去掉“使用简单文件共享（推荐）”前面的勾。b、查看文件和文件夹的有效权限：资源管理器\右击要查看有效权限该文件或文件夹\“属性”\单击“安全”选项卡\“高级”\“有效权限”\“选择”\在“名称”框中键入用户或组的名称，然后单击“确定”。选中的复选框表示用户或组对该文件或文件夹的有效权限。c、只能在格式化为使用NTFS 的驱动器上设置权限。 从网上邻居我能访问别人的计算机,但别人无法访问我的计算机2009-04-29 16:07从网上邻居我能访问别人的计算机,但别人无法访问我的计算机 1. 打开“我的电脑”，在菜单上选择“工具”->“文件夹选项”->“查看”，清除“使用简单文件共享（推荐）”的选择。 2. 右键点击“我的电脑”，选择“管理”，选择“本地用户和组”->“用户”，右键点击Guest用户，选“属性”，清除“帐户已停用”的选择。 3. 点击“开始”->“运行”，输入secpol.msc，选择左边的“本地策略”->“用户权力指派”，双击右边的“从网络访问此计算机”，保证其中有Everyone，双击左边的“拒绝从网络访问此计算机”，保证其是空的。 4. 选择左边的“本地策略”->“安全选项”，a.确认右边的“网络访问：本地帐户的共享与安全模式”为“经典”；b.确认右边的“Microsoft网络客户：为通讯启用数字签名（总是）”为“已停用”；c.确认右边的“Microsoft网络客户：为通讯启用数字签名（如果服务器允许）”为“已启用”；d.确认右边的“Microsoft网络服务器：为通讯启用数字签名（总是）”为“已停用”；e.确认右边的“Microsoft网络服务器：为通讯启用数字签名（如果服务器允许）”为“已启用”。 f.在“本地策略”->“安全选项”->“帐户：使用空白密码的本地帐户只允许进行控制台登录”为禁用。 5.重新启动计算机。Windows网上邻居互访的基本条件： 1) 双方计算机打开，且设置了网络共享资源； 2) 双方的计算机添加了"Microsoft 网络文件和打印共享" 服务； 3) 双方都正确设置了网内IP地址，且必须在一个网段中； 4) 双方的计算机中都关闭了防火墙，或者防火墙策略中没有阻止网上邻居访问的策略。 Windows 98/2000/XP/2003访问XP的用户验证问题 首先关于启用Guest为什么不能访问的问题：
计算机网络虚拟局域网概述 VLAN（Virtual Local Area Network）又称虚拟局域网，是指在交换局域网的基础上，采用网络管理软件构建的可跨越不同网段、不同网络的端到端的逻辑网络。一个VLAN组成一个逻辑子网，即一个逻辑广播域，它可以覆盖多个网络设备，允许处于不同地理位置的网络用户加入到一个逻辑子网中，如图7-10所示，就是一个公司内部网VLAN模型。 图7-10 VLAN模型 由于一个VLAN中的成员看不到另一个VLAN中的成员。一个VLAN内部的广播和单播流量都不会转发到其他VLAN中，从而有助于控制流量、减少设备投资、简化网络管理、提高网络的安全性。 VLAN在使用带宽、灵活性、性能等方面都显示出很大优势。它能够方便地进行用户的增加、删除、移动等工作，提高网络管理的效率。他具有以下特点： 1．灵活的、软定义的、边界独立于物理媒质的设备群 VLAN技术的引入，使交换机负责了网络的分段工作，而不再使用路由器来完成。通过使用VLAN，能够把原来一个物理意义上的局域网划分成很多个逻辑意义上的子网，而不必考虑具体的物理位置，每一个VLAN都可以对应于一个逻辑单位，如部门、车间和项目组等。2．广播流量被限制在软定义的边界内、提高了网络的安全性 由于在相同VLAN内的主机间传送的数据不会影响到其他VLAN上的主机，因此减少了数据被窃听的可能性，极大地增强了网络的安全性。 3．在同一个虚拟局域网成员之间提供低延迟、线速的通信 VLAN技术通过把网络分成逻辑上的不同广播域，使网络上传送的数据包只能与位于同一个VLAN的端口之间交换。这样就限制了某个局域网只与同一个VLAN的其它局域网互相连，避免了带宽的浪费，从而消除了传统的桥接／交换网络的固有缺陷——数据包经常被传送到并不需要它的局域网中的情况。它也改善了网络配置规模的灵活性，尤其是在支持广播／多播协议和应用程序的局域网环境中，会遭遇到如潮水般涌来的数据包。而在VLAN结构中，可以轻松地拒绝其他VLAN的包，从而大大减轻网络负担。 4．可靠性 VLAN的可靠性是指无论一个VLAN中的广播信息和数据是处在一个或多个VLAN设备中，还是处在具有动态VLAN成员资格的网络环境中，都能准确地转发到目的地。为了实现VLAN 的可靠性，需要有下面两个协议来保证：GMRP（Group Multicast Registration Protocol，组多点转发注册协议）和GVRP（GARP VLAN Registration Protocol，通用属性注册协议VLAN注册协议）。GMRP允许组播在单个VLAN中发送而不影响其他VLAN；GVRP是GARP（Generic
默认情况下，Windows XP的本地安全设置要求进行网络访问的用户全部采用来宾方式。同时，在Windows XP安全策略的用户权利指派中又禁止Guest用户通过网络访问系统。这样两条相互矛盾的安全策略导致了网内其他用户无法通过网络访问使用Windows XP的计算机。你可采用以下方法解决. 方法一：解除对Guest账号的限制 点击“开始→运行”，在“运行”对话框中输入“GPEDIT.MSC”（或者输入：secpol.msc，打开本地安全设 置），打开组策略编辑器，依次选择“计算机配置→Windows设置→安全设置→本地策略→用户权利指派”，双击“拒绝从网络访问这台计算机”策略，删除里面的“GUEST”账号。这样其他用户就能够用Guest 账号通过网络访问使用Windows XP系统的计算机了。 方法二：更改网络访问模式 打开组策略编辑器，依次选择“计算机配置→Windows设置→安全设置→本地策略→安全选项”，双击“网络访问：本地账号的共享和安全模式”策略，将默认设置“仅来宾?本地用户以来宾身份验证”，更改为“经典：本地用户以自己的身份验证”。 现在，当其他用户通过网络访问使用Windows XP的计算机时，就可以用自己的“身份”进行登录了（前提是Windows XP中已有这个账号并且口令是正确的）。 3、将安全选项中的使用空密码的本地账户只允许控制台登录改为已禁用。原来在“安全选项”中有一个“账户：使用空白密码的本地账户只允许进行控制台登录”策略默认是启用的，根据Windows XP 安全策略中拒绝优先的原则，密码为空的用户通过网络访问使用Windows XP的计算机时便会被禁止。我们只要将这个策略停用即可解决问题。 一般情况下上述方法可实现局域网之间文件共享了。倘若仍不能访问，需检查一下设置： 1、关闭防火墙，防火墙会阻止计算机之间的访问； 2、启用guest账户； 3、本地连接-属性- Microsoft网络的文件和打印机共享； 4、我的电脑→工具→文件夹选项→查看→去掉“使用简单文件共享（推荐）”前的勾； 5、注册表：HKEY_LOCAL_MACHINE\SYSTEM\CurrentControlSet\Control\Lsa右边窗口 RestrictAnonymous的值是否为0； 6、检查电脑是否在工作组计算机中；右击“我的电脑”→“属性”→“计算机名”，看该选项卡 中有没有出现你的局域网工作组名称，如“workgroup”等。然后单击“网络ID”按钮，开始“网络标识向导”：单击“下一步”，选择“本机是商业网络的一部分，用它连接到其他工作着的计算机”；单击“下一步”，选择“公司使用没有域的网络”；单击“下一步”按钮，然后输入你的局域网的工作组名，如“work”，再次单击“下一步”按钮，最后单击“完成”按钮完成设置。 7、Server服务是否启动；运行-services.msc- 找到"server"服务，启动该服务即可； 8、设置密码访问的方法改下以下设置即可: （1）.开始-运行secpol.msc -本地策略-安全选项-在右边找到“网络访问：本地用户的共享和安全模式-属性-改成”仅来宾-本地用户以来宾身份验证“确定。
打印机连接出现：无法访问，你可能没有权限使用网络资源 2009-06-04 08:24:18| 分类：电脑| 标签：|字号大中小订阅 不少电脑出现“XXX无法访问。你可能没有权限使用网络资源......”，ping得通,即使重新系统也不能解决。具体解决方法，在这里跟大家分享一下。 方法一：出现这一类的问题有可能的防毒软件可能出于安全考虑做了什么设置，让电脑自己重新刷新一下网络设置。具体操作：网络连接—>网络安装向导—>此计算机通过居民区的网关或网络上的其它计算机连接到 Internet—>接下来跟据你的电脑信息填写—>启用文件和打印共享—完成。 方法二：通过更改设置与策略 a、文件夹选项—>去掉“使用简单文件共享” b、开启guest帐号 c、本地安全策略—>本地策略—>用户权利指派—>拒绝从网络访问这台计算机，删除GUEST帐号 d、本地安全策略—>本地策略—>安全选项—>网络访问：本地帐户的共享和安全模式，选择经典本地用户经自己的身份验证 e、本地安全策略—>本地策略—>安全选项—>网络访问：不允许SAM 帐号和共享的匿名枚举，停用 局域网无法互访，在网上邻居点击该机时弹出提示：无法访问，您可能没有权限使用网络资源。 解决办法：打开控制面板----管理工具----本地安全策略，继续点击本地策略----安全选项----使用空白密码的用户只允许只行控制台登录，双击，把该项的值改为“已禁用”。问题即 如仍不能访问，检查该机是不是打开了网络防火墙，请把防火墙关闭。 （注：3.0有上述问题，4.0版并无此问题。） 相信很多人都有和笔者一样的经历，由WIN XP构成的网络所有设置和由WIN 2000构成的完全一样， 但还是出现了根本不能访问的情况，笔者认为这主要是因为XP的安全设置和2000不一样所导致。 针对这个问题笔者在网上查了一些资料，并将各种网上提供的常见解决方法做了相应测试，现在 整理介绍给大家，希望能对遇到此问题的网友有所帮助，并请高手继续指点。部分内容摘自网络，
网络的虚拟性与实体性 姓名：学号：班级： 摘要：网络的诞生是科技世界里一项很重要的发明，它超越了国界、超越了时间空间的限制，本文从网络政治、网络文化、网络经济三个方面论述了网络虚拟性与实体性的矛盾和统一，来表现两者的密不可分。 关键词：虚拟性、实体性、矛盾、统一 1946年第一台电子计算机在美国诞生，电子计算机在短短的50多年里经过了电子管、晶体管、集成电路（IC）和超大规模集成电路（VLSI）四个阶段的发展，使计算机的体积越来越小，功能越来越强，价格越来越低，应用越来越广泛，现在朝着第5代发展，计算机在最开始出现的时候就是为了更好的服务人类，而现在这一根本目的更是完美的体现出来。 最开始的计算机是单体的，功能有所限制，随着需要的发展，要求资源共享的呼声越来越高，于是适应时代需要，网络发展了起来。关于计算机网络的最简单的定义是：一些互相连接的、自治的计算机的集合。计算机网络的功能之一就是资源共享。现如今互联网成为世界第一大网络，每天都有成千上万人在使用互联网。 随着网络的出现，便出现了网络的虚拟性与实体性。所谓虚拟性是指网络世界的存在形态是无形的,它以图像、声音、信息等电子文本作为自己的存在形式.在网中人们可以用匿名或虚拟身份,因此不必考虑自己发表言论而造成的实际后果。在这里,并不存在现实世界中的身体属性、阶级属性以及地域属性所造成的各种沟壑[1]。而所谓的实体性是指网络的组成及其在网络中能够实际体验的，它以网络本身为基础，是网络产生后才随之产生的，具有同一性。 网络产生后给人们的生活带来了巨大的改变，任何事物都具有两面性，网络也不例外，它带给人们的影响是巨大的。但网络的虚拟性与实体性却矛盾又统一在了一起。 网络在信息传递、舆论形成中的重要作用，高层政治人物对网络效用的认可和与网民的互动，对于中国的政治演变来说尤其重要的是，网络政治从一开始就具有民主政治的性质。普通民众，只要具有上网的能力，理论上就可以获得发言的渠道，有机会对各个层面的公共事务发表自己的意
解决： WORKGROUP无法访问．您可能没有权限使用网络资源．请与这台服务器的管理 员联系以xx您是否有访问权限． “网上邻居”无法互访问题解决方法大全 “网上邻居”无法互访的问题实在是太常见了，无论在学校，网吧还是家里多台电脑联机，都有可能遇到网上邻居无法互访的故展。“网上邻居”无法访问的故障多种多样，总结起来基本上有下面的几个： 1，没有共享资源/共享服务未启用。 症状： 电脑与电脑间可以Ping通，但无法访问共享资源，在“计算机管理”中查看“本地共享”后会弹出“没有启动服务器服务”的错误对话框。 解决： 在控制面板－管理工具－服务中启动Server服务。并设置“启动类型”为“自动”。 2，IP设置有误。 症状： 双机之间无法互Ping，连接用的双绞线经过测试没有问题，没有安装防火墙。 解决： 检查两台电脑的IP是否处在同一网段，还有子掩码是否相同。 3，WINXP默认设置不正确。 症状：
从上无法访问另一台WINXP的机器。 解决： 在“控制面板”中的“用户帐户”启用Guest帐号。然后在运行中输入secpol.msc启动“本地安全策略”。 本地策略->用户权利指派，打开“从网络访问此计算机”，添加Guest帐户本地策略->安全选项，禁止"帐户： 使用空白密码的本地帐户只允许进行控制台登陆"。 另外有时还会遇到另外一种情况： 访问XP的时候，登录对话框中的用户名是灰的,始终是Guest用户，不能输入别的用户帐号。 解决： 本地策略->安全选项-> "网络访问： 本地帐户的共享和安全模式"，修改为"经典-本地用户以自己的身份验证" 4，系统漏洞修补软件修改了安全策略。 症状： 在“网上邻居”中可以看到对方的计算机，但是访问共享时却提示“没有权限访问网络”解决： 在开始菜单运行中输入secpol.msc启动“本地安全策略”，本地策略->用户权利分配，打开“拒绝从网络访问这台计算机”，删除guest用户。 5，防火墙规则。 症状：
网络虚拟财产的性质
提纲： 本文对网络虚拟财产的性质进行分析，并对侵犯网络虚拟财产的犯罪进行研究，力求对网络虚拟财产的定性做一个最好的判断，以求能够在最大程度上保护好相关权利人的利益。根据我国以及国外相关理论研究的内容，并且结合目前我国的国情，提出我国目前应当采取将网络虚拟财产定性为一种“新型财产”这一范畴，并且采取相关的立法模式。 一、网络虚拟财产侵权案例所引发的思考 （一）相关案例以及判决结果 （二）相关总结和观点 二、网络虚拟财产的性质及其评价 （一）非法律权利说及其评价 1.非法律权利说 2.非法律权利说过于逃避现实，闭关自守 （二）物权说及其评价 1.物权说 2.物权说在所谓的“物权绝对支配权下”有所欠缺 （三）债权说及其评价 1.债权说 2.债权说，对于赔偿方面有违公平正义 （四）知识产权说及其评价 1.知识产权说 2.知识产权说，对于时间性而言存在相关漏洞 （五）无形财产说及其评价
1.无形财产说 2.无形财产说，无法完整描述网络虚拟财产 三、我国法律的相关规定及存在的主要问题 （一）相关规定 1.宪法 2.民法 3.刑法 4.几大基本法 （二）不足之处 1.主法的不到位 2.民法不完善 3.刑法不落实 4.其他基本法的不明确 5.制度不完善 四、国外对网络虚拟财产的法律性质的看法以及相关立法 （一）美国的相关立法 （二）英国的相关立法 五、关于完善网络虚拟财产法律保护的建议 论我国网络虚拟财产的法律保护 【摘要】： 伴随着网络的快速发展，侵害网络虚拟财产的事件也是层出不穷。这不但侵害当事人的合法利益，同样也危害到了社会的经济利益。但是对于这类犯罪应该如何定性，
新手如何绘制网络计划图 导语： 网络计划图分双代号网络计划和单代号网络计划。双代号网络计划一般以箭线及其两端节点的编号表示工作的网络图，单代号网络计划图以节点及其编号表示工作。在建筑工程中，主要以双代号网络计划图为主。本文为新手们极力推荐一款很容易上手的网络计划图绘制软件。 免费获取网络拓扑图软件：https://www.doczj.com/doc/9616145229.html,/network/ 什么软件绘制网络计划图比较适合新手？ 亿图网络图绘制作软件是由亿图软件公司推出的一款专门用来绘制电脑网络计划图的软件。软件功能强大，容易上手，几乎包含所有网络图的绘制，例如基本网络图、双代号网络图、单代号网络图、Cisco网络图、机架图、网络通信图、3D网络图、AWS图等等，可以完美替代Visio。软件采用拖拽的绘图方式，界面简单明了，操作方便，用户即看机即会，无需花费多少时间学习。
软件不仅提供各种专业图库，还提供海量模板，这点是其他软件无法比拟的。强大的定制功能使得用户不仅可以自定义图形的填充和线条颜色，也可以自行绘制图库里的形状。一键导出到PDF，Word, Visio, Png 等17种文件格式，无障碍与他人分享。新版本不仅实现了跨平台，而且还支持云存储，使得团队协作更加容易。亿图网络图绘制软件是您绘制单代号网络图的不二选择。
双代号网络图的三要素： 1、工作：即箭线。是用来表示一项工作需要消耗的人力、物力以及时间的具体活动过程。也称之为工序或者作业。 2、节点：网络图中，箭线出发点和交汇处会使用圆圈，来表示该圆圈前面一项或者多项工作的结束以及允许后面一项或者多项工作的开始的时间，即为节点。 3、线路：在网络图中，从起点节点开始，沿箭头方向连续通过一系列箭线与节点，最后到达终点节点的通路称为线路。 双代号网络图的绘制规则： 1、不能出现从一个节点出发，又顺着箭头方向又回到原出发点的循环回路。 2、不能有两个或者两个以上的箭线从同一节点出发又同时指向同一节点。 3、网络图中的箭线(包括虚箭线，以下同)应保持自左向右的方向，不应出现箭头指向左方的水平箭线和箭头偏向左方的斜向箭线。 4、网络图中的节点编号应该自左向右，由小到大，确保工作的起点节点的编号小于工作终点节点的编号，而且不能出现重复编号的节点，但是可以是非连续的编号。 5、网络图中不能出现双向箭头和无箭头的连线。 6、网络图中不允许出现没有箭尾节点的箭线和没有箭头节点的箭线。 7、禁止在箭线上引入或者引出其他箭线，除非网络图的起点节点有多条箭线引出(外向箭头)或者重点节点有多条箭线引入(内向箭线)，此时为了让图形更简洁，则可以使用母线法绘图。 8、绘制网络图时，宜避免箭线交叉。但是当交叉不可避免时，也可以采用过桥法或指向法进行处理。 9、一个网络图中只能有一个起点节点和终点节点。 10、同一项工作不能在一个网络图中重复表达。
浅谈虚拟网络结构 姓名：许彪学号：20114030116 班级：工商管理一班 纵观周围，似乎我们生活的世界越来越虚拟化。如今人们购物越来越多的选择网上购物而不是去实体店，越来越多的人喜欢上了网络社区，造就了譬如帖吧、人人网等社交媒体的发展壮大。除此之外企业内部虚拟网络结构也日益发展起来并形成了很大规模，如今现代企业都一定程度的包含了虚拟网络结构。那么什么是虚拟网络结构？它产生的背景是什么？它有什么特点？在企业中有什么作用？有什么优缺点呢？下面我将一一分析阐述。 虚拟网络结构可以被视作外部专业人士网络所环绕的中心。分布在世界各地的合作者可以借联机电脑或网络快速流畅的交换信息，使得供应商、制造商、分销商组成的松散网络联系看起来像是一个无缝对接的公司。虚拟组织结构是指临时把人员召集起来，以利用特定的机遇，待目标完成后即行解散的一种临时组织。虚拟组织结构，也称为网络型组织，虚拟组织结构是一种只有很精干的核心机构，以契约关系的建立和维持为基础，依靠外部机构进行制造，销售或其他重要业务经营活动的组织结构形式。具有不同资源与优势的企业为了共同开拓市场，共同对付其他的竞争者而组织的、建立在信息网络基础上的共享技术与信息，分担费用，联合开发的、互利的企业联盟体。虚拟网络企业出现常常是参与联盟的企业追求一种完全靠自身能力达不到的超常目标，即这种目标要高于企业运用自身资源可以达到的限度。因此企业自发的要求突破自身的组织界限，必须与其他对此目标有共识的企业实现全方位的战略联盟，共建虚拟企业，才有可能实现这一目标。虚拟组织中的成员可以遍布在世界各地，彼此也许并不存在产权上的联系，不同与一般的跨国公司，相互之间的合作关系是动态的，完全突破了以内部组织制度为基础的传统的管理方式。通俗地讲，虚拟组织指两个以上的独立的实体，为迅速向市场提供产品和服务、在定时间内结成的动态联盟。它不具有法人资格，也没有固定的组织层次和内部命令系统、而是一种开放的组织结构，因此可以在拥有充分信息的条件下，从众多的组织中通过竞争招标或自由选择等方式精选出合作伙伴，迅速形成各专业领域中的独特优势，实现对外部资源整合利用，从而以强大的结构成本优势和机动性、完成单个企业难以承担的市场功能，如产品开发、生产和销售。 虚拟网络结构的产生有两个必要条件。一是社会分工专业化生产的出现。随着生产力的不断发展，社会分工日益精细化专业化。精细分工专业生产提高了生产效率，促进了生产技术的不断提高，是一个良性循环过程。专业化生产可以使企业专注于主要业务，集中主要
Win7旗舰版访问共享计算机提示"您可能没有权限使用网络资源"解决方法在局域网环境下，使用局域网来访问网络共享计算机是一个高效的文件共享解决方案，在win7旗舰版中我们可以自由的访问网络中的共享计算机来操作共享文件，不过有时访问的时候也会出现一些问题，比如在访问共享计算机的时候出现“您可能没有权限使用网络资源”就是一个经常出现的故障，下面分享一下解决方法。 推荐win7旗舰版下载最新整理【快速】【稳定】的Win764位旗舰版下载 以下步骤需要在你无法访问的计算机中设置，如果已经设置过的项目则跳过。 1、点击开始菜单中的“运行”选项，输入gpedit.msc 并回车； 2、打开策略组编辑器后，依次点开【计算机配置】-【windos 设置】-【安全设置】 -【本地策略】-【用户权限分配】； 3、双击“拒绝从网络访问该台计算机”删除其中的Guest用户或组，然后确定。
4、删除完成后，再点击点击【用户权限分配】下面的【安全选项】，在右侧找到“网 络模式：本地用户的共享和安全模型”项目；
5、双击该项，然后设置访问模式为”仅来宾-对本地用户进行身份验证，其身份为来宾，应用保存； 6、同样在安全选项里面，双击“账户：使用空白密码的本地用户只允许进行控制台登陆” 更改设置为“已禁用”； 7、最后我们还要查看GUEST帐户是否开启，没有开启的话则开启； 操作方法：打开控制面板——用户账户——管理其他账户中启用来宾用户Guest——启用，如下图：
8、最后我们还要确定一下访问计算机跟目标计算机是不是在同一个工作组中，右键点击桌面上的“计算机”图标，然后选择属性，在属性界面就可以看到了。 如果不在一个工作组中，通过下面的步骤修改本人计算机的工作组与共享计算机的工作组名相同。
win7 您没有权限访问XP。请与网络管理员联系请求访问权限 症状：XP能访问win7,但win7死活不能访问xp.我在网上找了很多方法，唯有这个有效。 今天在虚拟机里尝试访问主机文件时遇到无法访问资源的状况，提示信息为“你可能没有权限使用网络资源。请与这台服务器的管理员联系以查明您是否有访问权限。”，经过反复实验，总结出了如下几步解决方案。 打开网上邻居→本地连接→属性里，“看是否安装了Microsoft网络的文件和打印机共享”，如没有安装，将其安装；控制面板→管理工具→本地安全策略→本地策略→用户权利指派里，“从网络访问此计算机”中加入guest帐户，而“拒绝从网络访问这台计算机”中删除guest帐户； 我的电脑→工具→文件夹选项→查看→去掉“使用简单文件共享（推荐）”前的勾； 控制面板→管理工具→本地安全策略→本地策略→安全选项里，把“网络访问：本地帐户的共享和安全模式”设为“仅来宾-本地用户以来宾的身份验证”（可选，此项设置可去除访问时要求输入密码的对话框，也可视情况设为“经典-本地用户以自己的身份验证”）； 右击“我的电脑”→“属性”→“计算机名”，看该选项卡中有没有出现你的局域网工作组名称，如“workgroup”等。然后单击“网络ID”按钮，开始“网络标识向导”：单击“下一步”，选择“本机是商业网络的一部分，用它连接到其他工作着的计算机”；单击“下一步”，选择“公司使用没有域的网络”；单击“下一步”按钮，然后输入你的局域网的工作组名，如“work”，再次单击“下一步”按钮，最后单击“完成”按钮完成设置； 最后在用户和组管理里面检查是否开通GUEST用户，然后修改注册表， hkey_local_machine/system/currentcontrolset/control/lsa/restrictanonymous值设为0 ，重启一下电脑，就可以访问了。 友情提醒：以上的方法同样适用于解决两台局域网内的计算机在互相访问遇到的类似问题。
施工进度计划网络图绘 制 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
施工进度计划网络图绘制的实用方法任何一门知识都有从理论到实践，再从实践到理论的反复过程。或者说从课本到应用，再从应用到课本的过程。烧饼是反复烘烤才熟的，剑是反复捶打而成的。 施工进度计划网络图，在市场上许多年轻人就感到很难，老虎吃天无从下手，要个计划，就好像问他要孩子那么难，有所感，故写这篇文章。 进度计划图，有三种表达方式： ⑴里程碑计划表，（某月某日达到什么程度）适用于初步计划，或合同约定的条件。是进度计划的前提限制条件。 ⑵平行线条图，各项工作都可以用此方法表达所需的时间，缺点是：不能明确的表示相互之间的逻辑关系。 ⑶网络图，不但可以表达多项工作所需的时间，还可以直观的表达相互之间的逻辑关系。 三种表达方式，综和运用互为补充效果最好。不要企图在一张表上全部列出。如同地图册编辑逻辑或方式进行表达。可以分层表达。先粗后细。先略后详。 单一的工作，前后小段工作紧跟，没有其他干扰，适宜于用线条图绘制，绘制出来的图，基本上是从左上角到右下角的对角线条带。 多项工作，各不一样，他们平行展开，相互之间在时间上，前后有逻辑关系。此时，最适合用网络图表达。他能给读者一个明晰的工作接续概念。以便于工程各方积极配合。这是绘制网络图的目的。 让我们用“直接、简单、形象”的描述方法，说明网络图的绘制思路。 我们可以把某项工作看成是一把筷子，或者贴上标签，在桌面上平摆，前后梛动，调整几次，就知道他们的逻辑关系。然后把它搬到纸上，予以描述。按网络图绘制要求，补充其内容，就成了施工网络图。 而网络图的要求是什么呢 ⑴只有一个起点和一个终点。首尾各一。 ⑵用带箭头向右的直线，和前后各一个圆圈，共同代表一项工作。因为时间过去了，不能再回去，所以箭头只能向右。线条上标明工作名称，线条下标明持续时间（小时，天） ⑶用虚线将相互有关系的节点连起来，并加上箭头，表示逻辑关系。 ⑷用波浪线将节点和线段连接，表示自由时间。 ⑸将持续时间最长，前后紧相接的有逻辑关系的各项工作时间加起来，总时间最长的线路就是关键线路。关键线路上的所有各项工作是关键工作。关键工作并不是关键线路。在一个网络图中，关键线路可以是多条。即他们持续时间总和相等。 ⑹按时间先后给节点编号，即给各项工作命名一个名称。编号不容许重复。 注意：各工作的持续时间，一般依据经验确定，要反复研究商量（和劳务包工头商量）后，确定。必要时还要计算。例如，投入几台机械，台班产量是固定的，就可以计算出每天产量，工程量除以每日产量，就得出持续时间。而工作面上不容许增加机械，那么持续时间就不能缩短。其他工作可以增加劳动力解
浙江大学远程教育学院 《网络营销》课程作业 姓名：学号： 年级：学习中心：————————————————————————————— 第1章网络营销导论 一、名词解释 1、网络营销：网络营销是以现代信息技术和计算机技术为手段，通过与顾客的双向沟通，从而达到满足顾客需求和达到商家诉求（盈利目的）的过程。 2、4C ：4C(Consumer消费者、Communication沟通、Convenience方便、Cost成本) 3、同质性市场：即认为市场中的消费者有着相类似的需求特征。这是指细分的子市场间相似的程度。如果市场上消费者的需求和爱好相同或相似，对市场营销刺激的反应基本一致，即市场的同质性较高，企业可以采用无差别营销策略；反之，则应选择差别营销或集中营销策略。 二、填空题 1. 网上商店能每天24小时，每周7天随时随地地提供全球性营销服务，这是由于网络营销具有（跨时空性）特点。 2.网络营销服务管理包括（营销服务战略计划）、网络市场调研、网络广告、网络公共关系管理、（网络渠道策略）和网络营销服务测试。 三、简答题 （一）网络营销的发展对企业传统营销管理会形成哪些冲击？ 答：网络营销对传统营销所带来的冲击是多方面的，也是不可避免的。 1. 网络营销对传统营销策略的冲击 (1) 对标准化产品的冲击 (2) 对品牌全球化管理的冲击 (3) 对定价策略的冲击 (4) 对营销渠道的冲击 (5) 对传统广告障碍的消除 2. 对传统营销方式的冲击 (1) 重新营造顾客关系 (2) 对营销战略的影响 (3) 对跨国经营的影响
(4) 企业组织的重整 （二）与传统营销相比，网络营销有哪些优势和特点？ 答：优势： （1）网络营销强调个性化的营销方式 （2）网络营销可以实现全程营销的互动性 （3）网络营销可提高消费者购物效率 （4）网络营销的价格优势 特点：跨时空、多媒体、交互式、拟人化、成长性、整合性、超前性、高效性、经济性、技术性 （三）简述网络营销系统应包括哪些功能？ 答：一个完整的包括有营销功能的网络营销系统应该包括这样几大功能：商品信息发布与用户信息沟通、电子单据的传输、网上支付与结算、货物配送以及完善的网上售后服务等。 （四）网络营销的产品与传统营销产品的内涵有什么差异？ 答：在传统市场营销中，产品满足的主要是顾客一般性需求，因此产品的相应分成三个层次分别满足顾客不同层次需要。传统营销中产品分成核心利益或服务、有形产品和延伸产品三个层次。 传统产品中的三个层次在网络营销产品中仍然起着重要作用，但产品的设计和开发的主体地位已经从企业转向顾客，企业在设计和开发产品时还必须满足顾客的个性化需求，因此网络营销产品在原产品层次上还要附加两个层次，一个是顾客期望产品层次和潜在产品层次，以满足顾客的个性化需求特征 （五）如何对网络营销服务进行分类？它们各有何特点? 答：根据企业可提供的产品和服务的比例，可以将服务分为以下四类： （1）纯有形货物的伴随服务 （2）伴随服务的有形货物。 （3）主要服务伴随小物品和小服务。 （4）纯服务。这是一种纯粹的网上服务产品的营销，不附带任何有形的商品。 特点： 服务区别于有形产品的主要特点是不可触摸性、不可分离性、可变性和易消失性。同样，网络营销服务也具有上述特点，但其内涵却发生了很大变化，具体体现在以下五个方面： (1) 增强顾客对服务的感性认识。 (2) 突破时空不可分离性。 (3) 提供更高层次的服务。 (4) 顾客寻求服务的主动性增强。 (5) 服务成本效益提高。 （六）简述整合营销的概念 答：网络营销与传统营销的整合为整合营销。 整合营销包括了传播统一性、双向沟通和目标营销三个方面的内容。 整合营销已从理论上离开了在传统营销理论中占中心地位的4P's理论，逐渐转向以4C's理论为基础和前提
网络图的绘制 学习内容： 重点： 掌握单代号网络图与双代号网络图的画法。 能根据计划的安排（实例）绘制单代号网络图和双代号网络图。 掌握关键路径的求法。 难点：根据实例绘制双代号网络图 需理解的基本概念： 逻辑关系、网络图、基本符号、虚工作、关键路径 4.1编制计划的有关概念 1、 计划：为实现一定目标面制订的未来行动的方案。 计划按反映的时间长短可分三类：短期计划、中期计划和长期计划。 如果我打算明天从郴州到长沙湖南大学出差，我可以作一个短期计划：到郴州火车西站30分钟，到售票处排队买票20分钟，坐火车到长沙60分钟，坐公交车到湖大40分钟 为了清楚的表示工作之间的逻辑关系，作出工作明细表如下： 两个人去？（增加买水果零食的工作 2、逻辑关系：工作之间相互制约或依赖的关系称为逻辑关系。具体表现为紧前工作、紧后工作、平行工作 D 的紧前工作是B ，是说D 工作只能在工作B 完成之后才能进行。 D 的紧后工作是G 、H ，是说工作D 完成之后，工作G 、工作H 紧接着进行。 工作D 、E 可同时进行，叫平行工作 工作G 、H 可同时进行，叫平行工作 P108习题4-1 第3题作出工作明细表
4.2网络图 1.网络图的概念： 网络计划的表达形式是网络图。 (对一些与时间因素相关密切的工作来说，用网络图对计划作务进行描述分析，是常用的方法。) 所谓网络图是指由箭线和节点组成的、用来表示工作流程的有向、有序的网状图形。 分类：按箭线和节点所代表的含义不同，可分为两大类 单代号网络图 双代号网络图 2.单代号网络图 (节点式网络图) 以节点(圆圈)表示工作，以箭线表示工作之间的逻辑关系的网络图称为单代号网络图。 即每一个节点表示一项工作，节点所表示的工作代号和持续时间等标注在节点内，如图所示。 举例： P108-第 3题绘单代号网络图.doc P111学中做3绘单代号网络图 P110例4.2.doc 绘单代号网络图