基金项目:国家自然科学基金资助项目(项目批准号:30471528)通讯作者:王仲元(wzy2004177@https://www.doczj.com/doc/9d12640003.html,)?论著?
结核分枝杆菌p ho S2基因在大肠埃希菌中的
高效表达及其产物抗原性分析
苏锐1,2 李邦印2 王臻3 王仲元2 程小星2 张灵霞2 李国利2
(1.第四军医大学研究生院 西安 710032;2.解放军总医院第二附属医院结核病研究所 北京 100091;
3.中牧实业股份有限公司江西生物药厂 南昌 330200)
摘要:目的在大肠埃希菌中高效表达结核杆菌p ho S2,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法采用DNA重组技术构建结核分枝杆菌p hoS2抗原表达载体,用双酶切和PCR等方法鉴定转化子,重组质粒转化大肠埃希菌,诱导表达p hoS2;用SDS2PA GE初步鉴定其表达量;将表达产物进行纯化;重组蛋白用Western blot分析其抗原性和特异性。结果p hoS2基因在大肠埃希菌中得到高效表达,表达量占全菌蛋白的40%以上;重组蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应。结论重组p hoS2蛋白在大肠埃希菌中主要以包涵体形式表达,有很好的抗原特异性和免疫原性,对结核病诊断有潜在的应用价值。
关键词:大肠杆菌;磷酸转运蛋白质类;重组蛋白质类
High2level expression of Mycobacterium tuberculosis phoS2gene in E.coli
and antigenicity analysis of the recombinant protein
S u Rui1,2,Li Ba ngyi n23,Wa ng Zhen3,Wa ng Zhongyua n,Cheng Xiaoxi ng,Zha ng Li ngxia,Li Guoli
1.The Fourth Milita ry Medical U niversity,Xi’a n710032,Chi na;
2.The2nd Af f iliated of PLA General Hospital,Beiji ng100091,Chi na;
3.Zhongmu i ndust rial Co.limited,J ia ngxi330200,Chi na
Abstract:Objective To express p ho S2in Escherichia coli,p urify t he recombinant p rotein,pre2 liminary evaluate it s antigenicity and specificity by Western blot.Methods Exp ression plasmid of p ho S2was const ructed wit h DNA recombinant technique.Positive clones were chosen using emzyme digestion and polymerase chain reaction.Recombinant plasmid was transformed into E.co2 li.Then p ho S2was induced to exp ress.The exp ressio n of p hoS2was identified by SDS2polyacryl2 amid gel elect rop horesis(SDS2PA GE);t he recombinant p rotein was p urified;t he antigenicity and specificity of p ho S2p rotein was analyzed by Western blot.R esults p hoS2was highly exp ressed in E.coli,t he amount of p hoS2p rotein in E.coli BL21occupied more t han40%of total bacterial pro2 teins.Purified p rotein could react st rongly wit h serum samples f rom t he patient s wit h t uberculo sis, but could not react wit h serum samples f rom healt hy control.Conclusion The recombinant p ho S2 protein was exp ressed mostly in inclusion body form in E.coli.The result s indicated t hat t he re2 combinant p hoS2antigen showed higher antigenic specificity and immunoreactivity,had potential ap2 plication value in diagnosis of t uberculo sis.
K ey w ords:Escherichia coli;Phosp hate t ransport p roteins;Recombinant proterins Correspondence to:Wang Zhongyuan,e2mail:wzy2004177@https://www.doczj.com/doc/9d12640003.html,
目前全世界约1/3的人口感染了结核分枝杆菌,每年有900万人发病,200万人死于结核病[1]。机体受到M TB感染后,其表面的特异性蛋白抗原作为感染的直接证据已经成为结核病早期、快速、敏感、特异,并且适宜在发展中国家推广应用的新型诊断方法,越来越受到人们的重视[2]。近年来许多研究者应用大肠埃希菌来表达结核分枝杆菌基因,简便的获得了大量结核分枝杆菌单一的蛋白抗原[3]。国内外曾有2次报道用p ho S2裸抗原免疫小鼠后可以提高小鼠的抗结核感染能力[4-5],但是尚未发现关于应用p ho S2抗原诊断结核病的报道。本研究采用DNA重组技术构建结核分枝杆菌p ho S2抗原表达载体,转化大肠埃希菌,获得高效表达后,用免疫印迹反应分析其抗原特异性和免疫原性,为进一步研发有效的结核病免疫诊断试剂奠定了基础。
1 资料和方法
111 材料
11111 菌株和质粒来源 结核分枝杆菌标准株H37Rv株来源于生物制品鉴定所;E.coli D H5α、E. coli BL21(DE3)属于解放军总医院第二附属医院结核病研究室保存。p GEM2T vector(Promega), p ET224b(Novagen),蛋白质相对分子质量标准(sigma),辣根过氧化物酶标记的羊抗人Ig G(Solar2 bio),super ECL Plus超敏发光液(Solarbio),胶片(kodak);引物合成和测序(上海生物工程公司)。11112 临床抗血清 共12例血清标本。6例肺结核病患者血清标本,胸片显示肺部有病灶,痰涂片A FB(+),血清抗结核抗体阳性,PPD(++)以上,明确结核病诊断;6例健康人血清标本,胸片、痰A FB、抗结核抗体、PPD均为阴性。
112 实验方法
11211 p ho S2编码基因的制备 上游引物P1序列为:5′2CA TA T GAAAC TCAACCGA T T T GGT GC2 CGCC23′,下游引物P2序列为:5′2CTCG A GTGCG2 GTCAACGCG ATCGCCCTCGA23′。以H37Rv基因组DNA为模板,用PCR技术获取目的基因。PCR 反应体系:10×扩增缓冲液10μl,4种dN TP混合物各200μmol/L,引物各50p mol,模板DNA015μg,TaqDNA聚合酶215U,加去离子水至100μl。PCR反应程序为:95℃×6min;94℃×30s, 62℃×30s,72℃×1min30s;30个循环;72℃延伸7min。
11212 p ho S2基因的克隆与鉴定 PCR产物与p GEM2T vector连接,具体步骤参照产品说明书,采用蓝白斑筛选初步鉴定克隆载体,然后以PCR和限制性内切酶酶切的方法鉴定,以上操作参照《分子克隆实验指南》进行。
11213 重组表达载体的构建 用限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ从阳性重组子上切下目的基因片段,将其与表达载体p ET24b连接、转化、克隆筛选、鉴定。具体步骤均参照《分子克隆实验指南》;DNA 测序在上海生物工程公司完成。
11214 重组p hoS2在大肠埃希菌中的诱导表达 将p ET24b阳性克隆质粒转化BL21(DE3),挑单克隆菌落接种于5ml含5μg/ml硫酸卡那霉素的LB 培养基中,37℃恒温振荡器振荡3h30min,测得菌液OD600值为110,此时加入IP T G(终浓度011mmol/L),诱导约6h后取出,冰浴30min, 4℃,12000rp m×30s离心,收集菌体。
11215 SDS2PA GE电泳鉴定表达产物,具体步骤参照《分子克隆实验指南》。
11216 重组蛋白的纯化 重组蛋白末端带有6×HIS,可通过形成配位键与金属螯和层析柱上固定化的二价金属离子Ni结合。故采用Ni2N TA层析柱进行纯化,具体步骤参照纯化试剂盒说明书。将纯化得到的蛋白进行复性处理,然后采用Lowry法定量。
11217 免疫印迹分析 纯化的蛋白进行SDS2 PA GE电泳,然后转到PVDF膜上(经丽春红S染色);依次经封闭液,人血清、羊抗人Ig G2HRP孵育后,漂洗干净,加入化学发光试剂,暗室中压片1min,经过显影、定影、固定,观察杂交结果。标本为6例临床确诊结核病病人血清和6例健康人血清(对照)。一抗为人血清,二抗采用辣根过氧化物酶标记的羊抗人Ig G。Western blot方法参照《分子克隆实验指南》和化学发光试剂盒说明进行。
2 结果
211 phoS2编码基因 根据GenBank中报道的结核分枝杆菌基因组序列,针对p hoS2设计2对引物。引物序列分别为:上游引物P1序列为:5′2 C TCGA GAAAC TCAACC GA T T T GGT GCC GCC2 3′,含NdeⅠ酶切位点;下游引物P2序列为:5′2
GTC GAC T GCGGTCAAC GC GA TCGCCC TCGA 23′,含Xho Ⅰ酶切位点。以结核菌H 37Rv 基因组DNA 为模板,PCR 扩增获得了大小111kb 左右的
DNA 片段,与预计的大小吻合(图1)
。
1:DNA Marker :D2000;2～3:phoS2基因的PCR 扩增产物
图1 phoS2基因PCR 产物2%琼脂糖电泳图
212 phoS2阳性重组子的筛选与鉴定 将获得的DNA 片段经过纯化后与p GEM 2T 载体连接、转化,
挑选单克隆菌落提取质粒,并以此为模板进行PCR 扩增;鉴定结果见图2,结果显示获得了阳性重组子。取重组质粒10μl ,用限制性内切酶Nde Ⅰ和Xho Ⅰ37℃酶切3h ,重组质粒可切下111kb 的片
段。鉴定结果见图3。将基因片段与表达载体p ET24b 连接获得的目的基因的重组质粒进行双向测序进一步证明,测序结果证实我们获得的p ho S2基因序列与GenBank 的完全一致
。
1～2:phoS2重组子的PCR 扩增产物;
3:DNA Marker :D2000
图2 重组质粒PCR 扩增的2%琼脂糖电泳图
213 重组phoS2的诱导表达、鉴定及纯化
p ET24b 阳性克隆质粒转化BL21(DE3),IP T G 诱
导6h 后,离心收集菌体。SDS 2PA GE 电泳鉴定表达产物,发现重组蛋白表达产物以包涵体形式为主
,
1:Marker Ⅲ;2:重组质粒Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切;
3:重组质粒单酶切;4:空载体
图3 重组质粒酶切鉴定图
重组蛋白产量约占菌体总蛋白的40%左右。采用Ni 2N TA 柱子纯化重组蛋白,发现蛋白纯度可达90%以上(图4)
。
1:BL21全菌体蛋白;2:诱导前;3:诱导后;4:上清;
5:包涵体;6:纯化后蛋白;7:纯化后蛋白;8:低相对分子质量蛋白Marker (14400～97400)
图4 重组蛋白的诱导表达及纯化电泳鉴定图谱
214 免疫印迹分析 纯化的重组蛋白Western blot 结果见图5。结果显示:重组蛋白与6例确诊
的结核病患者血清标本呈强阳性反应,重组蛋白与6例健康人血清标本反应不明显。
3 讨论
在结核病的诊治方面,金标准是结核病患者的
痰结核菌培养,但是阳性率较低,所需时间长。临床广泛应用的结核菌素皮肤试验,由于PPD 成分复杂,故其特异性较差。这些都不利于我们早期发现和确诊结核病。国内外学者都倾向于应用成分单一的结核菌特异性抗原标志物,使结核病的诊治更加简单、快速、准确。
关于p hoS2基因的研究国内外文献报道较少。
1～6:确诊的结核病患者血清标本编号
图5 Western blot 分析重组蛋白抗原性
它是一种暴露于膜表面的磷酸盐转运受体,其编码
基因包含370aa ,长度1110bp ,相对分子质量为37953D 。它对于诱导机体抗结核分枝杆菌的保护性免疫反应非常重要[6-7],其功能涉及无机磷酸盐通过细胞膜的主动运输,是结合蛋白介导的磷酸盐转运的一种必需蛋白。
当前,人们对38kD 的研究非常热衷,各种报道很多。通常所指的38kD 蛋白质的编码基因为Rv0934,含374aa ,长度为1122bp 。是一种被各独
立实验研究最深入的蛋白质,在不同的实验室有不
同的名称,美、日的参比系统用免疫电泳技术将其命名为抗原5(Antigen5,Ag5),挪威将其命名为抗原78(Antigen 78,Ag78),也有称之为蛋白抗原b (protein antigen b ,pab )[8]。虽然其分子量与我们研究的p ho S2蛋白十分相近,但与之完全不同。
国外曾先后有2次报道用p ho S2作为疫苗接种C57BL/6小鼠可以明显保护小鼠不受结核分枝杆菌的感染[4-5],国内顾田园等人用p ho S2免疫小鼠,3次免疫后经静脉结核菌强毒攻击,鼠的肺脏和脾脏的载菌数均比阴性对照少,表明它能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答[9]。但是关于其在结核病诊断方面尚未发现相关研究。
本研究在大肠埃希菌中高效表达了p ho S2蛋白质,表达量占全菌蛋白的40%以上;Western blot 分析显示重组蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应,这表明重组p hoS2有很好的抗原特异性和免疫原性,有很好的血清学诊断价值和潜在应用前景。本实验为进一步研究p hoS2蛋白质在结核病血清学诊断中的作用奠定了基础。
4 参考文献
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(收稿日期:2008-12-30)
一、大肠菌群是指：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 二、大肠杆菌是大肠菌群众多细菌的一个种类而已。大肠杆菌（E. coli）为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。 三、致泻大肠埃希氏菌生物学特性 大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，统称为致泻性大肠杆菌，一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。 大肠埃希氏菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。 此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：光滑型、粗糙型、粘液型。大肠埃希氏菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。 大肠埃希氏菌发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，录素酶试验阴性，IMVi试验++--，有些菌株如碱性异型菌群，微产碱，不产气，无动力，易与志贺菌混淆。大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(O)，鞭毛抗原(H)和荚膜抗原(K)三部分组成。现巳知有171个O抗原、99个K抗原和56个H抗原。 此菌对理化因素的抵抗力，在无芽胞菌中是最强的一种，在室温可存活数周，在土壤、水中存活数月，耐寒力强，但是在30分钟内快速冷冻，将37℃降至4℃的过程，可杀死此菌。加热60℃，30分钟，此菌可灭活。此菌对青霉素有中等抵抗力，对一般消毒剂都比较敏感对漂白粉，酚、甲醛等较敏感，水中1ppb氯可杀死此菌。此菌耐胆盐，在一定程度上能抵抗煌绿等染料的抑菌作用 三、肠致泻性大肠埃希菌： 大肠杆菌是人和动物肠道中的正常菌群，一般对人无害。本菌为革兰阴性的短杆菌，其抗原结构有3种，即菌体抗原(O抗原)、包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)。O抗原是血清分型的基础，目前已发现有170多种，其中一些特殊的血清型具有病原性，能引起人类腹泻，故称为致泻性大肠杆菌，而由其引起之肠炎称致泻性大肠杆菌肠炎。世界各地广泛存在本菌感染，婴儿腹泻中检出率较高，在成人中亦可呈散在或暴发流行。临床表现为旅游者腹泻或食物中毒。新生儿病房及托儿机构可引起交叉感染而发生流行。 大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，一般认为是非致病菌。但一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性、发病机制、临床特征、流行病学特征、O 抗原血清型及细菌的毒力测定可将致泻性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、侵袭性大肠杆菌(EIEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)和肠集聚粘附性大
微生物检验实验室致病性大肠埃希菌标准操作规程 1. 概述 致病性大肠埃希菌包括肠产毒型大肠埃希菌、肠致病型大肠埃希菌、肠侵袭型大肠埃希菌、肠出血型大肠埃希菌和肠凝聚型大肠埃希菌5群。与普通大肠埃希菌的生化反应相似，应结合血清反应（O、H和K抗原）、毒性试验（ST和LT肠毒素）和临床症状，分别鉴定5型致病性大肠埃希菌。 2. 标本类型 粪便标本。 3. 鉴定 3.1 形态染色与一般大肠埃希菌相同。 3.2 培养特性在麦康凯琼脂平板上形成不透明、粉红色或无色菌落。 3.3 生化反应与普通大肠埃希菌相似。 3.4 鉴别要点在山梨醇麦康凯琼脂平板上形成无色菌落。IMViC++--， 3.5 不发酵或迟发酵山梨醇，为本菌的主要特征。 3.6 操作步骤 3.6.1 氧化酶试验参见氧化酶试验标准操作规程。 3.6.2 致病型大肠埃希菌的鉴定 肠致病型大肠埃希菌（EPEC）婴幼儿水样或蛋花汤样便，鉴定为大肠埃希菌后用EPEC分型血清作O:H分型。
肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）水样便，鉴定为大肠埃希菌后需要测定ST和LT两种肠毒素及血清分型。ST的检查可用兔肠段结扎试验，免疫学或分子生物学方法（DNA 探针）检测。 肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）细菌性痢疾样便，生化特性与志贺菌相似，不发酵或迟发酵乳糖，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，符合EIECO:H血清分型，豚鼠眼结膜试验、HELA细胞侵入试验阳性。 肠出血型大肠埃希菌(EHEC) 早期为水样便后为血便，有50多个血清型，最具代表性的是O157：H7不发酵或迟发酵山梨醇，在山梨醇麦康凯琼脂平板上形成无色菌落，可用EHECO:H诊断血清进行分型。 4. 药敏 参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见质量管理程序。 6. 检验结果解释与分析 疑似致病性大肠埃希菌感染，分离菌应先鉴定为大肠埃希菌，再通过不同的方法鉴定到种型，如分离到上述4种腹泻病原菌，应立即向临床发出报告。 7. 临床意义
尿路感染大肠埃希菌耐药分析
尿路感染大肠埃希菌耐药分析 闫雳 ［作者单位］安徽省萧县人民医院检验科，235200 ［摘要］目的：探讨尿路感染中大肠埃希菌的耐药性变迁，为临床合理用药提供试验依据。方法：对2008~2010年度尿标本检出的234份大肠埃希菌进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测和药敏试验，并对药敏结果进行分析。结果：大肠埃希菌的产酶率呈增高趋势；药敏结果显示大肠埃希菌除对亚胺培南耐药率为0外，对其他常用抗菌药物均出现了不同程度的耐药性，且ESBLS(+)的细菌耐药率普遍高于ESBLs(-)细菌。结论：尿路感染的大肠埃希菌耐药现象严重，尤其是ESBLs(+)株，要不断加强耐药性检测，为临床合理用药提供参考。 ［关键词］尿路感染；大肠埃希菌；药敏试验；超广谱β-内酰胺酶 [中图分类号]R446.5 R378.2.1 [文献标识码] A The analysis of drug resistance of Escherichia coli in urinary tract infections Yan Li (Department of Clinical Laboratory,Xiaoxian People's Hospital,Xiaoxian Anhui 235200,China) \ [Abstract]Objective:To exploring the resistance changes of the Escherichia coli (E.coli) in urinary tract infection, and provid proofs about the reasonable use of drugs in clinic.Methods：Two hundred and thirty –foue strains of E.coli in 2008 to 2010 annual urine specimen with extended-spectrum β -lactamase (ESBLs) detection and drug susceptibility test,were detected,,and the drug susceptibility results were analyzed..Results:the rate of enzy production of E.coli showed a rising trend;the drug sensitivity test shows that the resistance exists in normal antibiotics was in different dgrees expect for Imipenem,,and the rate of medical resisitance in ESBLs(+) bacteria was higher than in ESBLs(-).Conclusions:The resistant of urinary tract infection which caused by E. coli. especially in ESBLs (+) strains, is so serious. It should be strengthen in the detections of the medical resistance ,which provide the references for the clinicl rational drug use. [Keywords] urinary tract infection; Escherichia coli; susceptibility test; extended-spectrum β-lactamase;
大肠埃希菌 Prepared on 24 November 2020
大肠埃希菌 1.概况：大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群，婴儿出生数小时后就进入肠道中并终生伴随，能为宿主提供一些营养作用的合成代谢产物，宿主免疫能力下降或细菌侵入肠道外组织或器官，即可成为条件致病菌，引起肠外感染，以化脓性感染和泌尿道感染最为常见，某些血清型大肠埃希菌具有致病性，能导致人类腹泻。 2.形态：中等大小的革兰阴性杆菌无芽孢，多数菌株有周身鞭毛，能运动；有菌毛包括普通菌毛和性菌毛 3.体内分布：大肠杆菌在人和动物的肠道内，大多数于正常条件下是不致病的共栖菌，在特定条件下（如侵入肠外组织或器官）可致病。但少数大肠杆菌与人和动物的大肠杆菌病密切相关，它们是病原性大肠杆菌，正常情况下极少存在于健康机体。 4.培养：兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通的琼脂平板37℃培养24小时后，埃希菌形成圆形凸起灰白色S型菌落。在液体培养基中均匀浑浊的生长。 5.生化反应：能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气，绝大多数菌株能发酵乳糖，可与沙门菌，志贺菌等区别。吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC 试验）为++--，IMViC试验为此结果，可判断为典型的大肠埃希菌，表明被检物已被粪便污染，有传播肠道传染病的危险 6.抗原构造：大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种，已确定的大肠杆菌菌体（O）抗原有173种，表面（K）抗原有80种，鞭毛（H）抗原有56种。O抗原凝聚相对较慢，呈颗粒状。H抗原刺激机体主要产生IgG类抗体，H抗原的凝集出现较快，呈絮状。K抗原位于O抗原外层，为多糖，与细菌侵袭力有关。
7.生物学特性：本属细菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可以生存数周或数月。对化学消毒剂的抵抗力不强，一般常用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。通常情况下，对多种抗菌药物敏感。但由于长期滥用抗生素，对常用抗生素耐药现象普遍，不仅影响该病防制效果，而且亦成为公共卫生关注的问题。 8.致病物质 定植因子：又称黏附素（adhesin），可与黏膜表面细胞的特异性受体相结合而定植于黏膜，这是大肠杆菌引起的大多数疾病的先决条件。 外毒素：大肠杆菌可产生外毒素，最为人所知的是ETEC产生的由质粒编码的不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）。LT有抗原性，分子量大，65℃经 30min即被灭活，可激活肠毛细血管上皮细胞的腺苷环化酶，增加环腺苷酸（cAMP）产生，使肠黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水；ST无抗原性，分子量小，100℃加热30min而不失活，可激活回肠上皮细胞刷状缘绒毛上的颗粒性的鸟苷环化酶，增加环鸟苷酸（cGMP）产生，同样引起分泌性腹泻。 K抗原：具有吞噬作用 9.肠道外感染： 败血症：由大肠埃希菌尿道和肠道感染引起的。 新生儿脑膜炎：大肠埃希菌和B组链球菌是婴儿中枢神经系统感染的主要致病菌，约75%大肠埃希菌新生儿脑膜炎分离株具有K1荚膜抗原 泌尿道感染：引起该病的大肠埃希菌多来源于结肠，污染尿道，上行至膀胱，甚至到肾脏和前列腺。 10.肠道感染
大肠埃希菌 1.概况：大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群，婴儿出生数小时后就进入肠道中并终生伴随，能为宿主提供一些营养作用的合成代谢产物，宿主免疫能力下降或细菌侵入肠道外组织或器官，即可成为条件致病菌，引起肠外感染，以化脓性感染和泌尿道感染最为常见，某些血清型大肠埃希菌具有致病性，能导致人类腹泻。 2.形态：中等大小的革兰阴性杆菌无芽孢，多数菌株有周身鞭毛，能运动；有菌毛包括普通菌毛和性菌毛 3.体内分布：大肠杆菌在人和动物的肠道内，大多数于正常条件下是不致病的共栖菌，在特定条件下（如侵入肠外组织或器官）可致病。但少数大肠杆菌与人和动物的大肠杆菌病密切相关，它们是病原性大肠杆菌，正常情况下极少存在于健康机体。 4.培养：兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通的琼脂平板37℃培养24小时后，埃希菌形成圆形凸起灰白色S型菌落。在液体培养基中均匀浑浊的生长。 5.生化反应：能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气，绝大多数菌株能发酵乳糖，可与沙门菌，志贺菌等区别。吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试验）为++--，IMViC试验为此结果，可判断为典型的大肠埃希菌，表明被检物已被粪便污染，有传播肠道传染病的危险 6.抗原构造：大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种，已确定的大肠杆菌菌体（O）抗原有173种，表面（K）抗原有80种，鞭毛（H）抗原
有56种。O抗原凝聚相对较慢，呈颗粒状。H抗原刺激机体主要产生IgG类抗体，H抗原的凝集出现较快，呈絮状。K抗原位于O抗原外层，为多糖，与细菌侵袭力有关。 7.生物学特性：本属细菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可以生存数周或数月。对化学消毒剂的抵抗力不强，一般常用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。通常情况下，对多种抗菌药物敏感。但由于长期滥用抗生素，对常用抗生素耐药现象普遍，不仅影响该病防制效果，而且亦成为公共卫生关注的问题。 8.致病物质 定植因子：又称黏附素（adhesin），可与黏膜表面细胞的特异性受体相结合而定植于黏膜，这是大肠杆菌引起的大多数疾病的先决条件。外毒素：大肠杆菌可产生外毒素，最为人所知的是ETEC产生的由质粒编码的不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）。LT有抗原性，分子量大，65℃经30min即被灭活，可激活肠毛细血管上皮细胞的腺苷环化酶，增加环腺苷酸（cAMP）产生，使肠黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水；ST无抗原性，分子量小，100℃加热30min而不失活，可激活回肠上皮细胞刷状缘绒毛上的颗粒性的鸟苷环化酶，增加环鸟苷酸（cGMP）产生，同样引起分泌性腹泻。 K抗原：具有吞噬作用 9.肠道外感染： 败血症：由大肠埃希菌尿道和肠道感染引起的。 新生儿脑膜炎：大肠埃希菌和B组链球菌是婴儿中枢神经系统感染的
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍 相互关系 大肠菌群（总大肠菌群） >粪大肠菌群&耐热大肠菌群> 大肠杆菌 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、总大肠菌群
所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。 耐热大肠菌群的卫生学意义 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。 作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。
大肠杆菌的研究与应用 中文摘要：大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症。本文通过对大肠杆菌的结构及其致病机理等进行分析描述，以供大家参考学习。 关键词：大肠杆菌；致病性；危害；预防 The English abstract：Escherichia coli (E.c oli) are usually called escherichia coli, Escherich is found in 1885, in a long period of time, has been regarded as the normal bowel flora, that is part of the pathogen. Until the 20th century, realized some special type of escherichia coli serum of people and animals, especially for the infants and young (birds), often cause severe diarrhea and sepsis. Based on the structure and pathogenic escherichia coli mechanism analysis of reference, the study. Keywords：escherichia coli；The pathogenicity；Hazards；prevent 一、结构特征 大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素b和k，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。其主要具有以下一些特征： 1、大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。 2、大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。 3、人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。 4、培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。 5、大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。 6、大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。[1]
目录 ? 1 概述 ? 2 分类 ? 3 性状及特点 (1) 原核生物 (2) 形态与染色 (3) 培养特性 (4) 生化反应 (5) 抗原构造 (6) 抵抗力 (7) 异养厌氧型 (8) 人体与大肠杆菌的关系 (9) 鉴别 (10) 生态系统中的地位 ? 4 致病性 (1) 致病物质 (2) 病原体 (3) 潜伏期 (4) 所致疾病 ? 5 检查法 (1) 细菌的分离鉴定 (2)卫生细菌学检查 ? 6 治疗方法 ?7传播途径 ?8 预防方法
大肠杆菌简介 大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，1885年由Escherich发现，分布在自然界，大多数是不致病的。主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病。 婴儿出生后即随哺乳进入肠道，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。 在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。技术上，大肠菌群被定义为所有好氧或兼性好氧。 常引起流行性婴儿腹泄和成人肋膜炎。侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。 1. 大肠杆菌性状及特点 （1）原核生物 大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。 （2）单个菌体的形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um，无芽胞，大多数菌株有动力。有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。 （3）代谢类型 大肠杆菌的代谢类型是异养厌氧型。 （4）菌落特性 在血琼脂平板上，有些菌株产生β型溶血。在鉴别性或选择性培养基上形成有颜色、直径2～3mm的光滑型菌落。大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。IMViC试验为“+、+、-、-”。即为典型大肠杆菌。培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。 （5）抗性 较复杂，有O、K、H、F四种抗原。O抗原为脂多糖，已有171种，其中162种与腹泻有关，是分群的基础。K抗原有103种，为荚脂多糖抗原。从病人新分离的大肠杆菌多有K抗原，有抗吞噬和补体杀菌作用。根据耐热性等不同，K抗原分为L、A、B三种，其中L、B不耐热，有60种。F抗原至少有5种，与大肠杆菌的粘附作用有关、表明大肠杆菌血清型的方式是按O：K：H排列，例如O111：K58（B4）：H2。
疾病名：肠侵袭性大肠埃希杆菌感染 英文名：enteroinvasive escherichia coli infection 缩写： 别名：enteroinvasive escherichia coli enteritis；肠侵袭性埃希大肠杆菌感染；肠侵袭性埃希氏大肠杆菌感染；侵袭性大肠杆菌肠炎 ICD号：A48.8 分类：感染内科 概述：肠侵袭性大肠埃希杆菌(enteroinvasive E.coli，EIEC)首先于1967年日本报告自患痢疾样腹泻的大儿童和成人中发现，常误为菌痢。 流行病学：主要在大儿童及成人中致病。新生儿对此菌易感性差。至今未有在小婴儿中暴发的报道。曾有在学校、部队、社团及医院内流行的情况，但较多为散发病例。 病因：由EIEC引起的肠道传染病。EIEC是1967年从“痢疾”病人大便中分离获得的一组致腹泻大肠埃希杆菌。EIEC与志贺菌有类似的生化特性，无动力，对乳糖不发酵或发酵缓慢，有共同抗原，均为侵袭性致病菌，也称痢疾样大肠埃希杆菌，可侵入上皮细胞，并在其中生长繁殖，引起炎性反应。要注意对两者进行鉴别，鉴别培养基有枸橼酸盐培养基、醋酸钠培养基。常见之O血清型有：O28、O29、O32、O112、O124、 O136、O143、O144、O152、O164、O167等。EIEC不产生肠毒素，主要侵犯结肠，形成肠壁溃疡。致病毒力强，只要10～100个细菌即可发病。污染水和食物可引起暴发流行，也可因接触传播，形成散发病例。成人、儿童均可发病。 发病机制：EIEC侵袭肠黏膜上皮细胞，细菌死亡后释放出内毒素，破坏细胞形成炎症和溃疡，引起腹泻。临床较少见，主要侵犯较年长儿童和成人。临床表现类似菌痢。
大肠杆菌及其检验 大肠杆菌的生物学特性 ?简介： 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。 附：肠杆菌科各属 大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 ?形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。 附：有动力是什么意思？请看动力试验。 革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。 大肠杆菌扫描电镜照片 大肠杆菌透射电镜照片 大肠杆菌分裂照片 最新：大肠杆菌革兰氏染色照片 ?培养特性 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为 15-46℃。 在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：
（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。 （2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。 （3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。 此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。 附：菌落形态有什么用处？菌落形态学 生化反应 大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。 IMViC试验为“+、+、-、-”。即为典型大肠杆菌。 ?抗原构造 比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原组成。 ?抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。 致泻性大肠杆菌简介 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道 外感染。 某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（enterovirulent E. coli ）。 一般包括四种： 肠毒素性大肠杆菌（ETEC） 致病性大肠杆菌（EPEC）
Shandong Liaocheng Ehua Medicine CO., LTD 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。用4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）和靛基质（Indole）试验检查大肠埃希菌，检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole 试验为阳性或阴性即可报告结果。 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。实验证明，96%的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶（GUD）。MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色的反应强，易于观察。通常将MUG与靛基质试验结合，来检测大肠杆菌。如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。 2．仪器、设备及用具 2.1无菌室微生物检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。 2.2 净化工作台 2.3 培养箱（36℃±1℃）。 2.4 高压蒸汽灭菌器。 2.5 显微镜（1500×）。 2.6 恒温水浴（45℃±1℃）。 2.8 离心机（500~4000r/min）。 2.9 电冰箱。 2.10 匀浆仪。 2.11 366nm紫外灯。 2.12 玻璃器皿、器具[参照细菌、霉菌和酵母菌计数2.2.2]。 3．试液、指示液。 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液。 3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 3.3 pH7.2无菌磷酸盐缓冲液。 3.4 靛基质（Kovacs）试液。 3.5甲基红试液。
大肠埃希菌检查法 Escherichia Coli Test Method 1.目的 建立大肠埃希菌检查法的标准操作程序。 2.范围 适用于大肠埃希菌检查的操作。 3.责任者 QC化验员。 4.程序： 4.1.简述 4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。 4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β -D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。 4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。 实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。单一的MUG鉴别大肠埃希菌其漏检率达6％，鉴于98％的大肠埃希菌其靛基质试验为阳性，故将MUG与靛基质试验结合，比单用MUG可提高大肠埃希菌的检出率。如MUG与Indole 试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。该法理论上可使大肠埃希菌的检出率达98％。如仅用IMViC生化试验来鉴别大肠埃希菌属中的大肠埃希菌，其结果是含混的。 4.2.仪器、设备及用具 4.2.1. 无菌室 4.2.2. 净化工作台 4.2.3. 培养箱(36±1℃) 4.2.4. 高压蒸汽灭菌器 4.2. 5. 显微镜(1500X)
第九章肠道杆菌 肠道杆菌(Enteric bacilli)是一大群寄居于人和动物肠道中的革兰氏阴性无芽胞内杆菌,常随人与动物粪便排出,广泛分布于水、土壤或腐物中。 肠道杆菌属于肠杆菌科（Enterobacteriaceae），分类尚未完全统一，过去主要依据生化反应和抗原结构进行分类。近十多年来，应用DNA同源性研究、抗生素敏感谱、种和型特异性噬菌体，以及电子计算机分析技术等，使其分类日趋合理。目前肠杆菌科至少有25个菌属，90个以上菌种、生化群和血清群，其中与医学关系较密切者见表。 表9-1 肠杆菌科中与医学有关的细菌 属代表种致病性埃希氏菌属 （Escherichia）大肠埃希氏菌 (E.coli) 肠道外感染， 急性腹泻志贺氏菌属 （Shigella）痢疾志贺氏菌 (Sh.dysenteriae) 细菌性痢疾爱德华氏菌属 （Edwardsiella）迟纯爱德华氏菌 (E.tarda) 蛇类等血动物的正常肠道寄居菌，偶见于健康人或腹泻者粪便内沙门氏菌属（Salmonella）伤寒沙门氏菌 (S.typhi) 肠热症、急性肠炎、败血症枸橼酸杆菌属 (Citrobacter) 弗劳地氏枸橼酸杆菌
(C.freundii) 条件致病菌，引起继发性感染克雷伯氏菌属(Klebsiella) 肺炎克雷伯氏菌 (K.pneumoniae) 肺炎，泌尿系、创伤感染 败血症等肠杆菌属 (Enterobacter) 产气杆菌 (E.aerogenes) 很少引起原发性感染哈夫尼亚菌属 (Hafnia) 蜂窝啥夫尼亚菌 (H.alvei) 对人无致病性沙雷氏菌属 (Serrati) 粘质沙雷氏菌 (S.marcescens) 条件致病菌，引起泌尿系， 呼吸道及创伤感染变形杆菌属 (Proteus) 普通变形杆菌 (P.vulgaris) 食物中毒，泌尿系、呼吸道感染 等耶尔森氏菌属 (Yersinia) 鼠疫耶尔森氏菌 (Y.pestis) 鼠疫欧文氏菌属 (Erwinia) 草原居民欧文氏菌 (E.herbicola) 植物寄生菌，曾从人体肠道及化脓扁桃体中分离到
肠出血型大肠埃希菌 新华网： 两周来在德国蔓延的肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染29日和30日又夺去3名重症患者的生命，在此次疫情中已有13人因感染EHEC不治身亡。与此同时，德国医师协会告诫民众不必过于恐慌，只要采取必要的防范措施，这一来势汹汹的病魔还是“可控的”。 据德国媒体报道，新死亡病例中的两例发生在德西部的北威州，两名死者均为女性，其中一名91岁，另一名是中年妇女。这是德国北部以外地区首次报告EHEC死亡病例。此外，德北部的梅前州30日也报告了该州首例EHEC死亡病例，死者是一名87岁老妇。 此前的死亡病例分别发生在德国北部的石荷州、汉堡、不来梅和下萨克森，其中绝大多数是女性患者。德国各地报告的EHEC确诊或疑似病例总数目前已超过1400例。据德国负责流行病预防研究的权威机构罗伯特·科赫研究所30日最新统计，EHEC所造成的溶血性尿毒综合征重症患者已达329人。在正常情况下，德国每年最多会发现约60个溶血性尿毒综合征病例。 另据本次EHEC感染病例最多的汉堡市埃彭多夫大学医院30日报告，汉堡市周末接治的EHEC病例及溶血性尿毒综合征重症病例较前几天均明显减少。当地卫生官员希望这是EHEC感染已过高峰的一个迹象。 这家医院的负责人说，目前该院接治的EHEC病例中有25%至30%出现溶血性尿毒综合征并发症，发展到这一严重综合征的平均时间是出现腹泻症状后的5至7天，其中有三分之一的重症患者已丧失肾功能，必须接受透析治疗。重症患者中还有超过一半的人表现出神经系统紊乱症状，焦躁不安，有语言障碍或出现癫痫病般的抽搐。 由于EHEC病菌对很多抗生素具有抗药性，而且使用抗生素有时反而会使病菌产生更大的毒性，目前德国一些医院除对重症患者施用“血浆析离”这一标准疗法外，已开始小范围试用注射单克隆抗体“Eculizumab”的新疗法。汉诺威医学院30日报告说，该院自25日开始对一些肾衰竭的溶血性尿毒综合征患者施用这种新疗法，近日已取得初步成效，但比较准确地判定新疗法的有效性还需几周时间。 在当前EHEC传染源仍未最终确定的情况下，罗伯特·科赫研究所30日再次告诫民众不要生吃黄瓜、西红柿和通常用来做色拉的生菜等带叶蔬菜。德国消费者保护部长艾格纳也指出，在专家尚未就传染源下定论的情况下，人们还是应该警惕生吃上述蔬菜。 德国医师协会副主会长蒙哥马利30日对此间媒体说，尽管EHEC病菌来势汹汹，但人们不必过于惊慌。只要消费者严格执行防疫部门推荐的防范措施，特别是勤洗手和不生吃可疑蔬菜，病菌传播还是可以得到控制的。 还有专家指出，相对于非典和甲型流感等飞沫传染的疾病，EHEC病菌主要通过食物和染病人畜的排泄物传播，因此人们只要严格注意个人、食品和餐具的卫生，避免病从口入，就能有效防范EHEC病菌。 罗伯特·科赫研究所所长布格尔则对媒体说，仅清洗蔬菜还不足以提供保护，为消灭病菌，加热消毒是更好的办法，为此蔬菜有必要在超过70摄氏度的温度条件下炖2至10分钟。
一起侵袭性大肠埃希菌食物中毒调查分析 目的查明本起群体性食物中毒的原因，为今后预防和控制类似事件提供借鉴。方法根据流行病学调查、临床表现、实验室检验和食物中毒诊断标准进行分析。结果在4份患者肛拭样品及4份剩余食品中检出生物学形状一致的鸭沙门氏菌4株。结论该起事件为侵袭性大肠埃希菌（EIEC O29：K？）污染食物引起的食物中毒。 标签：大肠埃希菌；食物中毒；实验室检验；流行病学调查 2011年7月12日弥勒县巡检司镇发生一起因在饭店举办婚宴引起的食物中毒。根据流行病学调查、患者临床表现、现场卫生学调查，在排除化学性因素后进行实验室微生物检验，证实为一起侵袭性大肠埃希菌引起的食物中毒。现将调查结果报道如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料 2011年7月12日，巡检司镇某教师举行婚礼，共宴请298人集体在某饭店就餐。因该饭店较小，接待婚宴后，未接待其他客人。就餐时间从17时开始，晚餐后22时10分出现首例患者，发病87例，发病率29.2%。多数为农民、教师；最大77岁，最小2岁；其中男29例、女58例；发病时间最短2 h，最长23 h。临床表现主要症状为头昏、头痛、发热（最高温度40℃）、畏寒、腹痛、腹泻、粘液便、呕吐、四肢酸痛、全身乏力。 1.2 卫生情况 此饭店为巡检司镇所在地的一个较大私营饭店，食品加工场所卫生条件一般，砧板生、熟无标识，无专用的凉拌冷荤间，使用水源为自备井水。加工间比较狭小，洗菜、洗鱼、洗肉、洗餐具的水池混用，无餐具及容器用具的消毒设施，餐具不经消毒直接使用。盛放生菜、肉的容器用自来水清洗后直接盛放熟菜。该饭店有卫生许可证，但部分临时性工作人员未经过任何食品卫生知识、法规知识培训，未进行健康体检，无健康证明和培训合格证明。 1.3 现场调查方法 首先进行核实诊断结果，明确病例，由卫生人员为就餐发病者逐例填写《食物中毒个案调查表》，收集病例基本情况、就餐情况、发病情况、临床表现以及治疗等；对就餐未发病者逐例进行登记，了解未进食食谱情况，饭店的厨房卫生、饮用水卫生、环境卫生和食品原料采集、采购、储存、加工以及熟食品上桌等情况进行了调查登记，初步判断引起中毒可疑因素。
大肠埃希菌 埃希菌属：大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌、伤口埃希菌 致病因素；侵袭力K抗原和菌毛与炎症相关 内毒素与发热、休克、DIC相关 肠毒素耐热肠毒素和不耐热肠毒素cAMP水平升高，与腹泻相关 所致疾病：肠道外感染：泌尿系统感染、菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎 常见于肠穿孔激发腹膜炎、腹腔内脓肿、肠道手术后激发感染肠道内感染：微腹泻至霍乱样严重腹泻、溶血性尿毒综合征 根据其不同的血清型，毒力和所致临床症状的不同，分为： 危险因素感染类型发病年龄主要临床表现 肠毒素型大肠埃希菌（ETEC）海外旅行旅行者腹泻成人、儿童水样便 肠致病型大肠埃希菌（EPEC) 急性腹泻﹤2岁婴儿、成人水样便 肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC) 海外旅行志贺样脓血便成人粘液脓血便，含红白细胞 肠出血型大肠埃希菌（EHEC) 未熟牛肉牛奶出血性肠炎儿童、老人血便、发热（白）肠凝聚型大肠埃希菌（EaggEC）急、慢性腹泻儿童腹泻水泻、呕吐 ETEC：儿童腹泻和旅行者腹泻 EPEC;：黏液便但无血液 EIEC：志贺样脓血便（有红细胞、白细胞） EHEC：多为水源性或食源性感染，人与人之间通过粪口感染，产生Veno细胞毒素，抑制蛋白质合成并致Veno细胞病变， 潜伏期3--5天，血便中无白细胞 EaggEC:：:与世界各地慢性腹泻有关。 形态结构;:格兰阴性直短杆菌，多有鞭毛，能运动；引起场外感染的菌株有荚膜和周身菌毛 抗原成分：O抗原多糖磷脂复合物(LPS），耐热，分型基础 H抗原不耐热蛋白质 K抗原多糖荚膜抗原，对热稳定 血清型按O:K:H顺序 培养特性：兼性厌氧，营养要求不高 血琼脂上产生β溶血 肠道选择培养基，发酵乳糖，形成有色菌落 发酵多种糖产酸产气，吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐（1MVC)试验结果为+ + - - 动力、吲哚、脲酶（MIU）反应为+ + - 克氏铁琼脂上斜面和底层产酸产气，硫化氢阴性（AA+ -） 微生物学检验 采集标本;：静脉血，血培养 痰液、脓、分泌物等
大肠杆菌，一生的“朋友” 人出生几小时后，大肠杆菌就能通过口腔进入人的消化道，并在消化道后段大量繁殖，以后终生存在，直到死亡降临。因此，说大肠杆菌是人一生最老的朋友一点也不过分，因为它陪伴了人一生，无论贫穷富裕，疾病健康，年轻衰老，一直不离不弃，祸福相依。但这个朋友与一般的朋友不同，它的多重身份让它非常与众不同…… 简介 大肠杆菌，1885年被德国医师Escherich从婴儿粪便中分离出来，学名大肠埃希氏 菌(E.coli)，简称大肠杆菌。大肠杆菌是肠杆菌科细菌的模式种，为中等大小的革兰阴性直杆菌。多数菌株有周鞭毛和菌毛，有些菌株有包膜，兼性厌氧，由于多寄生于人和动物肠道中，进化为嗜温菌，最适生长温度为37℃。在营养琼脂上的菌落有多种形态，一种为光滑型，低凸起，湿润，灰白色，表面有光泽，边缘整齐，在生理盐水中易乳化；一种为粗糙型，干燥，在生理盐水中不易乳化；也有中间型菌落和黏液型菌落。 大肠杆菌营养要求不高，在普通培养基中生长良好。生化反应活泼，能发酵乳糖和葡萄糖，由于体内有甲酸解氢酶，能将发酵糖产生的甲酸进一步分解为CO2和H2，故产酸又产气。作为革兰阴性菌，大肠杆菌外膜由脂质双层、脂蛋白和脂多糖（又称内毒素）3部分组成。脂多糖又由脂质A、核心多糖、特异性多糖3部分组成。脂质A与致病性有关，核心多糖具有属特异性，特异性多糖具有种特异性，是菌体抗原。大肠杆菌分类时，根据其菌体（O）、表面（K）、鞭毛（H）三种主要抗原划分，称为血清型，如O111、K58、H2。 作用 大肠杆菌属于正常寄居菌，是肠道正常菌群的组成部分，通常情况下，认为它和人属于共生关系。大肠杆菌的作用主要有：1、保护动物肠道的微生态平衡。人和动物肠道中