中国医科大学网络教育学院毕业论文
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葛根芩连汤药代动力学研究进展
摘要
根、黄芩、黄连、甘草四味药组成，具有轻清解肌、清热止利等功效，主要用来治疗湿热所致的腹泻与痢疾。是中药治疗急性腹泻的经典方剂。中药的作用特点就是多途径、多组分、多靶点，因此中药的药代动力学研究是中药研究的关键技术之一。本文详细地阐述了葛根芩连汤的概况、化学成分、有效成分以及临床应用现状，并且较为系统地综述了葛根芩连汤有效成分及其药代动力学的研究进展，详细介绍了采用现代色谱及其联用技术对中药复方有效成分进行研究的方法，并展望了以后葛根芩连汤药代动力学的主要研究方向。
关键词：葛根芩连汤药代动力学研究进展
目录
引言 (4)
一、葛根芩连汤概述及临床应用现状 (4)
（一）概述 (4)
（二）化学成分 (4)
（三）临床应用现状 (5)
二、葛根芩连汤有效成分研究 (5)
（一）有效成分研究现状 (6)
（二）研究方法 (6)
三、葛根芩连汤有效成分的药代动力学研究 (7)
（一）仪器与材料 (7)
（二）实验方法 (7)
1、灌胃液制备 (7)
2、动物处理 (8)
3、色谱条件 (8)
4、血浆预处理及测定 (8)
（三）讨论 (8)
四、总结与展望 (9)
五、参考文献 (9)
葛根芩连汤药代动力学研究进展
引言
葛根芩连汤是中药中治疗急性腹泻的经典方剂，由葛根30g、黄连5g、黄芩20g、甘草5g组成，四药配伍，重在清热坚阴止利，兼透表邪，共成清热解肌之剂[1]。方中用药较少、药味间作用明确，是中医的经典方剂。该方剂见于《伤寒论》三十四条太阳病上篇，原文为：“太阳病，桂枝证，医反下之，利遂不止。脉促者，表未解也；喘而汗出者，葛根黄连黄芩汤主之。”本文主要阐述了葛根芩连汤的化学成分、有效成分及临床应用现状，介绍了采用现代色谱及其联用技术对中药复方有效成分进行研究的方法，较为详细得综述了当前对葛根芩连汤有效成分及其药代动力学的研究进展，并对以后葛根芩连汤药代动力学的研究方向进行了展望。
一、葛根芩连汤概述
(一)概述
葛根芩连汤是中药中治疗急性腹泻的经典方剂，本方之病味特点为主阳明经脉，张仲景治太阳阳明合病采用桂枝汤加麻黄及葛根，且葛根、黄芩、黄连皆为解肌功效，是用此以断太阳阳入阳明之路，非即为太阳药也；由此可以得出，葛根芩连汤是以葛根为君药，主治病位应在阴阳静脉。本方之病势特点为病及太阴，脏腑表里同病，根据《伤寒论》原文来看，本方证病因为桂枝汤证医用下法所至，表未解非太阳经表邪未解，而为邪传阳明经之表，脉促为表邪欲入于里，邪正交争的结果，因而本方证的病势他点为病及太阴，太阴阳明经脏腑表里同病。本方之病性特点为阳明风燥主表，太阴湿热主里；其主症可以表现为前额痛连后项，目痛而鼻干．苔白或薄黄，舌正常或偏红，脉浮。本方由于其病势表现由伤寒邪气由阳人阴，内犯太阴，故其症状表现可以为热利下迫，里急后重，或伴喘促汗出，而舌质红，苔可黄腻[2]。
（二）化学成分
葛根为豆科植物野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）或甘葛藤（Pueraria themsonii Bench）的干燥根。其味甘凉可口，常作煲汤之用；入药有解表退热、生津止渴、止泻的功效。葛根的主要成分为淀粉，其主要用药用成分葛根素、大豆苷、大豆苷元等，葛根中含有大量的黄酮类化合物，含量约为12%。另外，葛根中还有香豆素、有机酸、三萜类、尿囊类、胡萝卜苷、β－谷甾醇、以及多种微量元素等成分。
黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi.）的干燥根，别名山茶根、土金茶根，属于半野生半家种品种。黄芩味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血的作用；对温热病、上呼吸道感染、肺炎、痢疾、高血压都有很好的疗效；且黄芩的临床应用抗菌性要优于黄连，且不会产生抗药性。黄芩的主要成分包括黄芩苷元、黄芩苷、汉黄芩苷、换黄芩素、白羊黄素等三十多种黄酮类化合物及苯乙醇糖苷类化合物，有着极佳的抗菌作用；另外，黄芩还含有豆甾醇、挥发油以及14种氨基酸等成分[3]。
黄连是毛茛科植物黄连（Coptis chinesis Franch）、三角叶黄连（Coptis deltoiden C. Y.Cheng et Hsiao）或云连（Coptis teeta wall.）的干燥根茎，又名味连、川连、鸡爪连。黄连味入口极苦，有清热燥湿、泻火解毒之功效。黄连的主要成分包括黄连碱、甲基黄连碱、小檗碱、表小檗碱、掌叶防己碱、非洲防己碱、药根碱等多种生物碱化合物，另外，在黄连中还含有木兰碱等酚性化合物。
甘草为豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis fisch.）胀果甘草（Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎，又名国老、甜草、甜根子。甘草气微，味甜而特殊；有清热解毒，祛痰止咳、脘腹等功效。甘草的主要成分为甘草甜素，属三萜皂苷，水解后可生成甘草次酸和葡萄糖醛酸；另外，甘草中还含甘草甘、甘草素、异甘草苷、异甘草素等黄酮类化合物。
（三）临床应用现状
作为中药中治疗急性腹泻的经典方剂，葛根芩连汤在临床中也得到了极为广泛的应用。本方剂在方剂学中被列入解表清里之剂，葛根芩连汤有解表清里之功效，主治，主治胸脘烦热、身热下利、喘而汗出、口中作渴等病症。在现代运用
中主要用于急性肠炎、细菌性痢疾、胃肠型感冒等证属阳明里热甚者。在临床的实际应用中，还可用于经前期偏头痛、高血压头痛、额窦炎等多种病例[10]。二、葛根芩连汤有效成分研究
（一）有效成分研究现状
近几年，随着各学科的综合发展，中药复方方面的研究越来越多，其中以经典方剂葛根芩连汤的研究更具有代表性。曹佩雪[4]等对葛根芩连汤在不同配伍情况下对葛根素、黄芩苷、小檗碱等有效成分的含量进行研究比较，发现中药复方汤剂在煎煮过程中各个组分之间会发生明显的相互作用，这也会对葛根芩连汤陈芬的提取与研究产生影响；戴开金[5]等采用高效毛细管电泳法（high performancecapillary electrophoresis, HPCE）建立了葛根芩连汤的指纹图谱，并分离测定了其中的有效成分小檗碱、巴马汀、药根碱等含量；龚湛文等在前人的中药复方有效成分含量测定的基础上，建立了葛根芩连汤有效部位中黄芩苷以及葛根素的RP-HPLC 含量测定方法，方便了对其有效成分药代动力学的研究；李哲[6]等在葛根芩连汤有效成分的鉴定中引入了时间-吸收波长-紫外吸收度的三维高效液相谱图，精确得测定多种有效成分的含量；而陈丽红[7]等则对葛根芩连配方颗粒中三种主要成分葛根素、黄芩苷及小檗碱的含量采用新型反向高效液相色谱法-二极管阵列检测器进行了测定；吴艳萍[8]等采用HPLC法分别测定了葛根芩连汤中黄芩苷及小檗碱在犬体内的药代动力学研究，发现中药复方配伍能降低受体对黄芩苷的吸收总量并减缓黄芩苷在体内的代谢速率，使其能被受体充分吸收并产生相应的作用，对小檗碱的研究表明，葛根芩连煎剂在配伍后与单方比较，发现其有效成分小檗碱入血浓度及生物利用度都降低。谭晓梅[9]等通过测定葛根芩连煎剂和葛根单煎剂在兔血中的含量，分析研究了中药复方配伍对其药代动力学的影响，发现葛根芩连汤配伍能提高葛根素的浓度及利用度，可在很大程度上促进对于葛根素的吸收作用。
（二）研究方法
对于葛根芩连汤有效成分的研究可采用RP-HPLC含量测定、高效毛细管电泳法、反相高效液相色谱法－二极管阵列检测器、三维高效液相谱图检测法、HPLC 法等多种方法[11]。下文主要介绍的是采用二维液相色谱－质谱联用法分离鉴定葛根芩连汤中的有效成分。
多维液相色谱分离技术（multidimensional liquid chromatography，MDLC）是利用两根或多根性质不同的色谱柱对复杂样品中的待分析组分进行分离。并将不同液相色谱模式如亲和色谱(AC)、排阻色谱（SEC）、疏水作用色谱（HIC）等通过组构建多维液相色谱[12]。多维色谱分离系统比一维色谱可提供更多的波峰容量，因此适合用于分离复杂体系。葛根芩连汤组成成分复杂，将二维液相色谱与质谱检测相结合能够对复杂的中药组分进行分离鉴定，为中药复方的成分鉴定提供了一个很好的分析研究方法。
三、葛根芩连汤有效成分的药代动力学研究
中草药复方药物动力学，是指在中医药理论的指导下，利用药物动力学原理及数学处理方法，定量地描述中草药的有效成分及其复方通过各种给药途径进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律，并提出解释这些数据所需的数学关系式的科学[13]。中药复方药代动力学研究可以科学地阐述中药复方原理及作用机制，用以促进中药临床的科学、合理用药，还未设计开发新药提供了重要的理论基础。中药复方药代动力学研究方法主要包括生物效应法和血液浓度测定法两类。目前常用的测定方法包括荧光分光光度法、原子吸收分光光度法、紫外分光光度法、薄层色谱法、气象色谱法以及高效液相色谱法等。
中药复方的药代动力学研究较为复杂，当前主要的研究方法是通过测定中药复方中一种或多种已知成分的动力学来反映该复方在体内的药代动力学[14]。下文介绍的实验研究是以SD雄性大鼠为实验对象，利用HPLC在双波长下同时测定血浆中小檗碱和黄芩苷的含量并对其动力学进行研究，以综合分析葛根芩连汤的药代动力学。
（一）仪器与材料
主要实验仪器包括：LC-20AB 高效液相色谱仪， 5417R 超速低温离心机（德国Eppendorf公司），TGL-16G 低速离心机（上海安亭科学仪器厂），PB-10 型pH 计（德国Sartorious 股份公司），XW-80A 旋涡混合器（上海青浦沪西仪器厂），移液枪20μL，200μL，1000μL（法国Gilson 公司）。
实验主要试剂包括:葛根、黄芩、黄连、甘草,盐酸小檗碱、黄芩苷标准品,甲醇（色谱纯）,色谱用水,三乙胺、磷酸。
实验动物为SD雄性大鼠16只，体重（240±15）g，由常州卡尔斯实验动物有
限公司提供。
（二）实验方法
1、灌胃液制备
根据《伤寒论》处方各味药比例，称取葛根5 g、黄芩3 g、黄连3 g、甘草2 g置于烧杯中，加水浸泡20分钟。先煎葛根，加热回流20分钟后加入剩余药物，加热回流30分钟后将药液倒出并加入水二次回流30分钟，合并两次药液；用纱布粗滤，浓缩滤液，制成1g∕ml灌胃液。
2、动物处理
将SD雄性大鼠随机分为8组，每组2 只，实验前禁食12小时，自由饮水。葛根芩连灌胃液2 mL/只灌胃处理。在灌胃后分别在0.16，0.5，1，2，4，6，8，12，16，24小时取血，置有肝素钠抗凝剂的离心管中，离心10分钟（7000rpm），选取上层血浆。
3、色谱条件
色谱柱：Daiso C18（250 mm×4.6 mm I.D.，5 μm，Unimicro Technologies. https://www.doczj.com/doc/9112253363.html,A），柱前加保护柱Agilent C18（8.0 mm×4.0 mm）；流动相：甲醇－0.5％三乙胺（磷酸调 pH 3.0）（55∶45）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：室温；检测波长：280 nm（黄芩苷最大检测波长），346 nm（盐酸小檗碱最大检测波长）；进样量：20 μL。
4、血浆预处理及测定
在测定生物样品时，样品的预处理对于检测尤为重要。在测定前，对血浆样品采取除蛋白法、提取法、化学衍生化以及缀合物水解法等方法的预处理，以保护实验仪器，提高测定的灵敏度[15]。本实验主要采用了提取法及除蛋白法进行血浆预处理。对血浆进行预处理后，取20μL注入高效液相色谱仪，采用相同方法处理空白血浆样品及血浆对照品。
（三）讨论
本实验通过对葛根芩连的主要活性成分小檗碱和黄芩苷的药代动力学分析来反映该复方汤药在体内的代谢规律，以对葛根芩连汤的药代动力学进行研究。采用高效液相色谱法，甲醇－0.5％三乙胺（磷酸调pH 3.0，55∶45）做流动相，利用岛津紫外双波长检测器，在黄芩苷和小檗碱的紫外最大吸收波长（280 nm，
346 nm）处同时测定其在大鼠血浆中的浓度。通过分析实验数据发现SD雄性大鼠在灌胃葛根芩连汤后，体内小檗碱的达峰时间为3 小时，黄芩苷的达峰时间为4 小时，且对于黄芩苷吸收呈现不规则峰值，并出现多峰现象，有待于对葛根芩连汤药代动力学进一步的深入研究。
四、总结与展望
葛根芩连汤是葛根芩连汤是中药中治疗急性腹泻的经典方剂，在当今的临床治疗也得到了越来越广泛的应用。该方有坚阴止利、兼透表邪、清热解阴的功效，除了治疗急性肠炎、细菌性痢疾、肠伤寒、胃肠型感冒等证属阳明里热病症，还可用于经前期偏头痛、高血压头痛、额窦炎的治疗。
近几年，随着对葛根芩连汤的研究报告不断增加，其研究范围不断扩大，研究技术也不断提高，对于葛根芩连汤的有效成分及其药代动力学的研究也不断增加，研究者也采用了RP-HPLC含量测定、高效毛细管电泳法、反相高效液相色谱法－二极管阵列检测器、三维高效液相谱图检测法、二维液相色谱－质谱联用法等多种新的研究方法，取得了很大的突破。但是相对而言，由于葛根芩连汤中有效成分复杂，对其药代动力学的研究仍显滞后，今后需在此方面加大研究力度，以对葛根芩连汤的药代动力学有一个完整准确的认识，也为阐明中医药理论提供完整的理论基础。
五、参考文献
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