-ATP酶的活性而起作用;另外研究表明,在真菌感染治疗失败患者,体内hsp90(heat shock protein90)抗体量少或无,而治疗成功患者体内的hsp90抗体量多,因此hsp90抗体与抗真菌药物联合应用,对真菌感染治疗有效,特别是对免疫缺陷患者[11],Mycograb 为处于研究中的hsp90抗体。
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基金项目:国家自然科学基金资助课题(30271537)。
*通讯作者:娄红祥,男,教授,院长,博士生导师Tel:0531-*******;E-mail:louhongxiang@https://www.doczj.com/doc/9b11013782.html,,Tel:86-531-8382019,Fax:86-531-8382373
银杏黄酮的药学研究进展
朱 红1,高 尔1,2*,王德伟2,王汝琴1
(潍坊医学院1.天然药物研究所,2.麻醉系,山东潍坊261042)
摘 要:报告近年国内外在银杏黄酮药学方面的研究进展。银杏黄酮的制备、测定方法研究均有新的进展,其调血脂、舒张血管、抗氧化、拮抗血小板活化因子等药理作用的确定为银杏黄酮的开发应用提供了良好的发展前景。
关键词:银杏黄酮;制备;测定;药理作用
银杏,为银杏科银杏属植物(Ginkgo biloba Linn),又名公孙树,主产我国,我国银杏资源拥有量占世界总量的70%左右。银杏叶中主要有效成分为黄酮类和萜内酯类,其中银杏黄酮具有扩张血管、抑制血小板活化因子、抗氧化、调血脂等药理作用。我国拥有银杏资源优势,并有传统中医药经验,拥有很大的开发研究潜力,目前已分离的单体黄酮30余种,其中已鉴定化学结构的20种。近来,国内外对银杏黄酮的制备、测定方法和药理作用的研究十分活跃。1 银杏黄酮的制备方法
提取方法有水蒸气蒸馏法、有机溶剂提取法和超临界流体提取法[1]。水蒸气蒸馏法设备简单,但提取率较低,现已很少采用。现介绍后两种方法。
1.1 有机溶剂提取法
此法国内外使用最为广泛,其提取工艺的专利可归纳为两种形式:一种是制备银杏叶粗提物;另一种是制备银杏叶精提物。通常在粗提物制备基础上,进一步精制,常用方法为:液-液提取法,沉淀法和吸附-洗脱法。国内学者在这方面做了大量研
究,使得银杏叶提取物(GBE)中银杏黄酮的含量大大提高。吸附-洗脱法中大孔吸附树脂法具有简单易行的特点,应用较为广泛[2]。另有报道,采用超滤膜技术,通过膜孔的筛分、吸附等作用,达到分子水平上的分离、纯化和浓缩,效果较好。徐志红等[3]利用截留相对分子质量为10000的磺化聚醚砜(SPES)平板超滤膜对银杏黄酮提取物粗原料产品进一步纯化分离,从W(银杏黄酮)21.3%的粗原料中得到W (银杏黄酮)为39.2%的高纯GB E产品。
1.2 临界流体提取法
此法和有机溶剂提取法工艺比较,具有提取效率高,无溶剂残留毒性、活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏能保持其天然的特征等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,来达到选择性提取和分离纯化的目的。国外报道[4]在用70%乙醇提取的基础上,采用超临界C O2法进行提取分离,提供了一种高效、经济的从银杏叶中提取黄酮类和萜类化合物的方法。压力、温度和提取物中修饰成分的浓度可影响超临界流体提取法的结果。在最适宜的实验条件下,压力300MPa,温度60 ,和C O2含5%乙醇作为修饰成分,GBE粉末的产率为2.1%,传统的溶剂提取法的产率为1.8%。产物中黄酮类成分和萜类化合物成分分别为35.9%和7.3%,显著高于普通的24%和6%的标准。
意大利Bombardelli[5]发现,天然黄酮类化合物与磷脂有天然的亲和力,两者可结合形成复合物。近年来,国内学者有成功制备淫羊藿黄酮磷脂复合物的报道[6]。从理论上推测银杏黄酮磷脂复合物的制备是可行的。
2 银杏黄酮含量测定方法
测定方法主要有络合-分光光度法、衍生化-气相色谱法、高效液相色谱法、超临界流体色谱法等。
络合-分光光度法的测定设备价廉,操作简便,但因样品未经分离纯化,受杂质干扰,定量测定误差较大。分光光度法国内研究取得了一些进展:上官小东等[7]提出了钨酸钠-分光光度法测定药物制剂中银杏黄酮含量的新方法。该法是基于银杏黄酮能与钨酸钠反应生成黄色钨酸酯,该物质在304nm处有最大吸收。其线性范围为4~120 g ml,r= 0.9997,回收率为100.0%~100.6%。紫外分光光度法(UV)是银杏黄酮的主要检测方法之一。曾凡骏等[8]建立一种改进UV法,并对其进行准确性、重现性、线性关系、添加回收率的研究。与未经改进的UV法相比,改进UV法具有检测准确度高、重现性和线性关系较好的特点,能满足科研实验和工业生产的要求。
衍生化-气相色谱法由于装置较贵、操作繁琐,不易普遍应用。
高效液相色谱法目前使用较多,由于黄酮类化合物能溶解在有机溶剂中,样品不需经过衍生化反应,而直接经液相色谱进行分离测定。该方法比络合-分光光度法简便,但仍有一定的误差。
超临界流体色谱法是一种新的分离技术,它综合了气相色谱法和高效液相色谱法的优点,发展较快。
另外,国外报道[9]联合应用高性能毛细管电泳法和电化学法测定银杏叶中具药理活性的银杏黄酮成分。在1000mV时,一个直径300 m的碳圆盘状电极作为工作电极测定其中的6种黄酮成分。在最适宜的条件下,pH=9.0的硼砂缓冲器中,在22min 内,6种成分就被分离开。6种黄酮成分从1.4 10-7到5.0 10-7g ml排列,在此范围内可得到良好的线性关系。该法在一个相关的简单的提取过程后,就能成功的应用于银杏及其相关植物的药理学研究。
3 银杏黄酮的药理作用研究
3.1 抑制血小板聚集
体外给予异银杏双黄酮对ADP和胶原诱导的血小板聚集均有抑制作用,同时也抑制胶原诱导的血小板变形和减慢血小板最大聚集程度,抑制血栓形成[10]。
3.2 调血脂
银杏黄酮可明显提高HDL,对抗血小板活化因子,降低血液黏度、血浆胆固醇、血纤蛋白原,改善血浆胆固醇和磷脂的比例。
3.3 对血管的作用
槲皮素、山萘酚及异鼠李素3个化合物均具有扩张血管和解除痉挛的作用。此外能扩张冠脉血管,增加冠脉血液流量。Kubota等[11]实验证实GBE 导致血管舒张的主要成分是槲皮素,它可通过促进血管内皮细胞内钙离子浓度的升高,促进NO的合成和释放,导致血管舒张。
3.4 改善脑循环,保护大脑作用
GBE能降低脑血管阻力,改善脑循环,使脑血流量增加,改善脑的营养,有助于改善记忆和脑功能不全或与年龄有关的中枢神经系统功能障碍,对大脑及血脑屏障有保护作用。
3.5 抗氧化作用
实验证实,银杏黄酮对细胞氧化损伤具有保护作用。预先给予大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞2 mmol L过氧化氢,银杏黄酮标准提取物能提高PC12细胞的生存能力。氧化损伤后给予抗氧化剂效果最明显。银杏黄酮防止细胞死亡最有效的浓度是160 mg ml,能明显降低过氧化脂质产物。在PC12细胞中,抗氧化剂对氧化所致的蛋白质损伤保护效果不明显,对脂质保护效果较强[12]。
雌激素能阻断氧化损伤所致的神经元变性。实验表明,两种银杏提取物EGb761和Cp202都能阻止肾上腺和神经PC12细胞死亡,对神经PC12细胞,槲皮素和17- 雌二醇能逆转MPP(甲苯吡啶)+神经毒性效应。蛋白质印迹技术显示,MPP+损伤能影响多巴胺载体蛋白表达,但不影响雌激素 受体蛋白的表达。在神经细胞中EGb761和Cp202也调节多巴胺和雌激素 受体蛋白的表达。从以上结果可见,银杏黄酮具有抗氧化作用并可影响蛋白质表达[13]。
3.6 抗动脉粥样硬化作用
银杏黄酮苷对人巨细胞病毒(human cytomegalo virus,HC MV)感染在促进动脉粥样硬化发生和发展中有保护作用。银杏黄酮苷可抑制HC MV感染HU VEC304的超常增生及NO分泌量的降低,因而可能对防治动脉粥样硬化有一定的作用[14]。
3.7 促进脂肪细胞的脂解作用
实验证实,银杏黄酮能促进脂肪细胞的脂解作用。用完全不同的3T3-L1脂肪细胞,银杏黄酮浓度范围为0.005~100 mol L时对脂肪细胞的脂解作用的影响作了分析。银杏黄酮0.5~100 mol L时对细胞脂解活性产生影响。未处理过的细胞脂解活性是每1h(0.62 0.15) mol甘油 mg DNA,除金松双黄酮外其它银杏黄酮以浓度依赖性方式促进脂肪分解。银杏黄酮0.1~0.5 mol L时,细胞脂解活性出现最高峰。随着浓度逐渐升高,细胞脂解活性逐渐降低,在100 mol L时消失。银杏黄酮10~100 mol L时只有部分细胞失去活性[15]。
3.8 替代雌激素
实验证实,银杏黄酮可作为雌激素受体调节器的一部分,成为绝经后妇女雌激素替代疗法的一种选择。在竞争性捆绑实验中,发现银杏黄酮对雌激素 受体和雌激素 受体有双重作用,但对 受体亲和力强于 受体。在E-screen筛选实验中,这些化学物质诱导的细胞,受体阳性的MC F-7细胞增生,受体阴性的MDA-MB-231细胞不增生。三苯氧胺能阻断这种化学物质诱导的细胞增生。而且,银杏黄酮能诱导MCF-7细胞中pS2和黄体酮受体的转录。这些结果显示,银杏黄酮通过雌激素受体作用途径有微弱的雌激素活性[16]。
3.9 抗肿瘤作用
银杏黄酮可防护环磷酰胺的致畸作用,对体内体外肿瘤细胞的增生均具抑制作用[17]。
3.10 对细胞转录的影响
在人膀胱癌细胞索给予银杏黄酮后孵育,然后应用基因芯片研究mRNA的表达。结果显示银杏黄酮能够促进转录,血红素加氧酶-1、线粒体超氧化物歧化酶、谷胱甘肽合成酶调整的亚型和相应的蛋白质合成都增加。银杏黄酮也使细胞内谷胱甘肽、DNA修补和合成增加,使3H-T的合成降低。银杏黄酮影响的转录反应增强了细胞的抗氧化能力,阻断了DNA的受损[18]。
总之,银杏黄酮具有较高的药用价值,它的开发和利用前景十分广阔。目前限于生产工艺,它的提纯和深加工尚面临许多问题,因此,应紧密结合药理、化学、药学的现代知识和传统的中医药经验,进行规范化、标准化开发研究,以便使其进一步走向世界。
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*通讯作者:高尔,男,教授,硕士生导师,所长,系主任,Tel:0536-*******
从科学发展观谈我国动物源食物
安全生产中的若干问题
张子仪
(中国农业科学院畜牧研究所,北京100094)
动物源食物的安全生产包括多重涵义,一是根据人民生活对动物源食物的需要,从量的供应上要平衡有余;二是养殖业生产的可食产品从其源头开始经过产、供、销各个流通环节,最后进入餐桌的全过程要保证其安全、卫生、营养;三是健全养殖业上游的种植业、草业、饲料工业与其下游的食品工业、餐饮业,最后回归到种植业的良性循环保障体系。上述各行业是既有分工又有联系而不可分割的整体,但其核心是养殖业。
改革开放以来,我国养殖业有了很大发展。2003年全国肉、蛋、奶总产量分别达到6850万吨、2535万吨和1625万吨,跃居世界前列。人均年占有各种可食动物性产品总量也分别比改革开放前增长了4~8倍,稳居发展中国家前列。多年来价格平稳,供销两旺,这是一个来之不易的伟大成就,但是,饲料资源问题、能源问题、排污治理问题及养殖业产品的质量问题仍然是制约我国养殖业进一步科学发展的障碍。党的十六届三中全会明确提出了 要树立以人为本,全面协调可持续的发展观 。今年2月21日温家宝总理在省级干部专题研究班结业仪式上又作了关于 树立和落实科学发展观 的报告,进一步指出科学发展观的实质是要实现我国经济社会更快地发展,不能片面追求GDP的增长,只有统筹协调才能更快发展等指导方针。为此,认真总结半个世纪以来我国在养殖业的可食产品的安全生产中的若干经验和教训,对巩固和科学发展我国动物源食物的进一步安全生产是十分重要的。
1 动物源食物安全生产要从 多快好省 向 省好快多 的方向做战略转移
建国初期,百废待兴,首要问题是康复战争创伤与解决温饱问题。当时能源,肥力、畜力严重不足、农机不成体系,农业工作的重点多着力于农耕及粮食增产方面。全国养殖业属于副业,工作的重点是 控制疫病,畜为耕用,猪为肥用,耕牛禁宰,扩大畜群 ,当时还提出 见母就留 的措施。
上个世纪5、60年代经济发达国家集数十年动物、饲料、医药、食品等领域的科技储备为一体,处于综合应用现代化养殖业的启动阶段;特别是在进入