日立L-8900全自动氨基酸分析仪
简易操作规程
一、联机
1、打开电脑。
2、打开主机电源。
3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-1
4、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击
联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized变成
Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。分离柱的温度会升到50℃。
1-2
1-3
二、手动各组件控制操作
1、泵1和泵 2
点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1
点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-2
2、自动进样器
点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-3
2-4
3、反应柱柱温箱
点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-5
2-6
三、编辑方法
1、依次点击、、出现3-1-1的画面。
3-1-1
2、选中，点击。再依次点击、
，出现3-1-2的画面。
3-1-2
3、在设置中选中各个柱，其余参数默认。
4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。
注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。
3-3-1
2、保存方法。
四、编辑Sequence
1、依次点击、、，出现4-1画面。选中，其余参数默认。
4-1
2、点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数。
4-2
3、点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数。
4-3
4、点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数。
4-4
5、点击，出现4-5画面。
4-5
6、通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。注意此时第一行是再生程序（RG），进样体积为0，Run Type是Unknown，第二行是标准样品，三行起是未知样。
7、将Sequence另存为Test。
五、采集数据
点击Control Single Run,运行Stand－By方法，进样体积为0。
点击Control、Sequence Run，运行Test。
数据采集完后，机器自动进入清洗程序，清洗一个小时，自动关泵，关灯，关柱温箱。
六、关机
点击断开连接，关闭程序，关闭主机电源。
七、试剂的准备
反应液R1、R2：醋酸钠(CH3COONa·2H2O)、冰醋酸(CH3COOH)、茚三酮(C9H6O4)、乙二醇单甲醚（CH3CH(OH)·CH2OCH3）、硼氢化钠（NaBH4）
缓冲液B1到B6：柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、氯化钠(NaCl)、无
水乙醇(C2H5OH)、氢氧化钠(NaOH)、硫代双乙醇（硫二甘醇）(S(C2H4OH)2)、苯甲醇（）、brij-35(聚氧乙烯十二烷基谜)、辛酸(C7H15COOH)
八、出峰情况
Asp：天门冬氨酸Thr：苏氨酸Ser：丝氨酸Glu：谷氨酸
Pro：脯氨酸Gly：甘氨酸Ala：丙氨酸Cys：胱氨酸
Val：缬氨酸Met：蛋氨酸Ile：异亮氨酸Leu：亮氨酸
Tyr：酪氨酸Phe：苯基丙氨酸Lys：赖氨酸NN3：氨气
His：组氨酸Trp：色氨酸（标准品中不含该组分）Arg：精氨酸
九、仪器使用注意事项
1、氮气压力：仪器需要的压力为0.05—0.1Mpa，压力过高会损坏仪器。
2、为避免堵塞，注意泵1泵2的打开顺序。
3、电脑严禁更改设置，严禁安装其他程序，严禁上网。注意避免染上病毒。
4、进样浓度范围：0.4—10 nmol，过高的浓度会影响分析结果，且容易堵塞反应柱。
十、样品的前处理
准备想做测试的样品，在开动氨基酸分析仪之前，需要进行适合该项检测目的的处理，在这上分有两大系统，一个是将氨基酸以及和它有关连的化合物为对象对游离氨基酸的测定法（以下称生物液分析法），另一个是由蛋白质加水分解而得到的氨基酸对它的分析法（以下称蛋白质加水分解物分析法）在此对其中的几个作介绍。另外，作为原则请用0.45um的过滤器对样品过滤。
（1）生物液分析法的前处理：
主要目的是做氨基酸成分的提取（萃取），除去蛋白质以及不溶性物质。
（a）血液
①把血液用7,000~10,000rpm(7000~10000G)离心分离15分钟
②在澄清液中加入5~10%三氯醋酸，稀释2~3倍。
③用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟。
④将澄清液作为样品。
注意事项：
1）澄清液有混蚀时，要么提高离心分离的转速，要么进一步使用过滤器。
2）虽然三氯醋酸的浓度根据蛋白质的量而不一样，通常把添加后的浓度做为3%左右。
3）将血液就这样做除蛋白操作，回收率很低，特别是Arg的消失明显。
4）最终样品量做成0.05~0.1ml
（b）滤纸提取血液（直径10mm的点约30ul，最少也是直径3mm×5片）
①剪开滤纸，沿着离心管的管壁放入（例如：
②加入0.5ml的1%三氯醋酸
③用超声波清洗器震动2分钟
④用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟
⑤用0.45um的过滤器将澄清液过滤，使用微量小玻璃瓶装进自动进样器
注意事项：样品的混浊多的时候，不要使用三氯醋酸，用水/乙醇提取（萃取），待减压干硬后，用0.02N-HCI稀释的话，分析柱的污染将减少。
（c）尿
①在原尿中加入1%三氯醋酸再稀释2~5倍（由于有异常的尿有大量的氨基酸出来，
所以要提高稀释倍率）。
②有混浊时，进行过滤或者离心分离。
③把得到的液体的0.05~0.1ml作样品。
注意事项：检测微量成分的良好灵敏度时，在除蛋白后，减压干硬之后用稀释液再溶解。浓度就和原液吻合。
（d）酱汁（调味汁）、果汁等含有蔬菜原料的食品类
①用1~5%三氯醋酸溶液稀释10倍
②用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟
③把澄清液作样品
（e）酱油、酒等设有沉淀物的水系食品类
①在0.02NHCI稀释做样品（和PH的关系在3倍以上）
注意事项：食醋等虽然在低稀释度就可以，但酱汕等由于氨基酸浓度高，要稀释200~300倍左右再作样品。
（f）从植物叶的提取（萃取）
①用研钵将样品搓碎，或是截断成细小状。
②在含有乙醇的20%~30%水中让其散开（1g样品/3ml乙醇/水）
③在水浴器上用80℃，约20分钟以上提取（萃取）。
④将澄清液过滤提取，提取（萃取）要反复3次。
⑤使用漏斗将剩下的样品用酒精清洗。
⑥由④以及⑤的液体在水浴器上除去酒精。
⑦往残留下来的水溶液中加入乙醚提取（萃取）后，采取水层
⑧把水层减压干硬
⑨在0.02 N HCI给一定的容量
（2）蛋白质加水分解物分析法的前处理
把混合了药液的氨基酸，以及用蛋白质加水分解得到的氨基酸作对象。
（a）药液
①由0.02 N HCI稀释3倍以上（根据氨基酸的浓度）作样品，包含有糖、核酸、维
生素等水溶性物质，也不妨碍。
（b）盐酸加水分解
①将样品在加水分解用的玻璃试管上秤
②加入6N-HCI
③在减压状态下封管，此时，若置换N2的话，将更正确。
④在加水分解炉中，用110℃、22小时加热分解。分解时间以上面为准，根据目的
而变更。
⑤减压干硬，除去HCI
⑥在0.02NHCI稀释一定的容量作样品
注意事项：
1）最终浓度以0.5mg蛋白质/ml为标准。
2）加水分解时的容量以6NHCI1mg中，样品在3mg以下为基准。
3）减压干硬之际，在40~80℃之间加温。
（c）以回收Trp为目的的加水分解
①代替6N-HCI的是使用4N甲烷磺酸，依从前面所述，盐酸加水分解的方法让其分
解。
②分解后，由于不能减压干硬，加入4N-NaOH, 在PH=2调节。
③在0.02N-HCI给一定的容量作样品。
注意事项：
1）甲烷磺酸是用1ml小玻璃瓶装入，由技术化学制品株式会社出售，其组成是在4N甲烷磺酸中含有0.2% 3-(2-氨基乙烷)吲哚[氮（杂）茚]
2）中和时的PH，使用PH试纸
3）分析了20个被检体后，将分解柱用再生液清洗4小时左右，这是为除去从树脂中混入到试剂的吸附物质。
4）对氢硫基乙烷磺也有效
（d）以回收Cys 、Met为目的的加水分解
①精确秤量1~2mg样品。
②加入2ml过蚁酸，在0℃放置4~24小时。
③添加48%HBr0.3ml。
④减压干硬。
⑤依从盐酸加水分解的方法，减压进行到干硬为止。
⑥加入1ml的a2N-NaOH，放置1小时。
⑦在0.05N~a1NCHI，进行PH调制和给一定的容量。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程 一. 目的 为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。 二.适用范围 本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监 督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。 四. 内容 1．联机 （1）打开电脑。 （2）打开L-8900主机电源。 （3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。 1-1 （4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击
联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized 变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。 1-2
1-3 2、手动各组件控制操作 （1）泵1和泵2 点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.1ml/分钟，B6 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1 点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。 2-2 （2）自动进样器 点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-3 （3）分离柱柱温箱 点击，出现2-4画面，设置柱温50℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。 2-4 （4）反应柱柱温箱 点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。 2-5
全自动氨基酸分析仪招标书（2010-11-2） （NSYB 10-09） 根据工作需要，上海交通大学农业与生物学院需要购置壹套全自动氨基酸分析仪，现将技术及商务要求列举如下。 1技术要求 1)应用： 用于实验室检测,农业育种,土壤中游离氨基酸分析等科研工作 2)技术指标及性能要求： * 1. 落地式，具有更强的功能，更好的性能，更少的故障率，更快捷的维护维修2. 功能 * 2.1.1 蛋白水解标准净分析时间：≤30分钟；快速分析：≤20分钟 快速生理体液分析时间≤70分钟 * 2.1.2 保留时间重现性：≤CV0.3% (精氨酸)Arg * 2.1.3 峰面积重现性：≤CV1.0%（甘氨酸，组氨酸）Gly-His * 2.1.4 检出限：3 pmol（信噪比=2，天冬氨酸）Asp 2.2 氨基酸分析仪主机 * 2.2.1 分析柱：4.6mm × 60mm，3 μm专用离子交换树脂 2.2.2 进样泵：压力：0~ 20Mpa 流速：0.000~ 0.999mL/min (增量：0.001ml/min) 2.2.3 标配漏液传感器、在线脱气装置 2.2.4 含制冷单元的自动进样器： 进样方式：直接进样样品容器体积：1500μL 样品瓶数量：200个进样量：0.1~ 100μL * 2.2.4 反应单元：采用反应柱技术 反应柱规格：4.6mm ID × 40mm 温度设定：50~ 140℃ * 2.2.6 采用氨氮排除技术，可令结果更准确，图谱更清晰。 2.2.7柱温箱方式：半导体制冷加热温度设定：20~ 85℃ 2.2.8分光光度计:凹面衍射光栅闪跃波长：570nm，440nm (700nm参比) 2.3 数据分析管理系统
日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易标准操作规程 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程 一. 目的 为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。 二.适用范围 本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监 督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。 四. 内容 1．联机 （1）打开电脑。 （2）打开L-8900主机电源。 （3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。 1-1
（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击 联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized 变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。 1-2
1-3 2、手动各组件控制操作 （1）泵1和泵2 点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量分钟，B6 100%。点击 打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1 点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量分钟，R3 100%。点击 打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。 2-2 （2）自动进样器 点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
食物中氨基酸的测定方法 测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。 一、氨基酸自动分析仪法 1.原理 食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。 2.适用范围 GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。 本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定 3.仪器和设备 3.1真空泵 3.2恒温干燥箱 3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用去离子水冲洗干净并烘干。 3.4真空干燥器（温度可调节） 3.5氨基酸自动分析仪。 4.试剂 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。 4.1浓盐酸：优级纯 4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。 4.3苯酚：需重蒸馏。 4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L 4.5缓冲液： 4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2
4.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。 4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 4.6茚三酮溶液 4.6.1 pH 5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。 4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g 水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。 4.7高纯氮气：纯度99.99%。 4.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 5.操作步骤 5.1样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。 5.2称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。 5.3水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。 打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml 容量瓶内，用去离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。 5.4测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标
日立氨基酸分析仪操作步骤 (1) 日立氨基酸分析仪简介 (3) 日立氨基酸分析仪操作注意事项 (4) 日立氨基酸分析仪操作步骤 1、开机：计算机开机及仪器开机。 2、创建新项目：打开软件→“项目”→“创建新项目”→填名称和路径，两个“□”打钩，点“启用程序”→“确定”→将D盘Method文件夹的6个方法复制到F盘Method文件夹。 3、泵的排气：“仪器”→“启动”和/或“离线启动”→关掉弹出窗口→点左下角“控制”→“仪器状态”→“Connet”→待左上角灰色框显示“Idle”，点“OPTION”→点Pump 1的“Purge”→ B1：B2：B3：B4 = 25：25：25：25 →“Start”→手动打开泵1开关（逆时针旋转90°）→“确定”→点Pump 2的“Purge”→R1：R2：R3 = 34：33：33 →“Start”→手动打开泵2开关→“确定”→待泵2的废液管液体无气泡，点Pump 2的“Purge”→拧紧泵2开关→点Pump 1的“Purge”→B5：B6 = 50：50 →“Start”→“确定”→待泵1的废液管液体无气泡，点Pump 1的“Purge”→拧紧泵1开关。 4、进样器的排气：“L 8900”→“Autosample”→“Sampler Wash”→“OK”→重复排气，直到进样器无气泡。 5、创建序列：“帮助”→“仪器向导”→“创建序列”→选方法“PH 4.6×60-2622”→“打开”→“下一步”→“样品”命名，加后缀→“数据文件”命名，选“样品ID”，加后缀“日期与时
间”→填样品数（样品数= n+3，n为样品个数）→重复次数“1”→“下一步”→输入第一个样品瓶的编号→进样量“20”μL →“下一步”→“下一步”→“完成”→更改第一针方法为“PH 4.6×60-2622（Stand-by）”→更改第二针方法为“PH 4.6×60-2622（RG）”→更改样品瓶序号，与样品盘中一一对应→“文件”—“保存”—“序列”→命名文件夹→点“序列运行”。 6、关机
氨基酸分析仪实验 测试中心吕雪娟 一、实验目的 了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。 二、原理 氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。 氨基酸和茚三酮反应
氨基酸分析仪结构示意图 二、操作步骤 1.准备工作 1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置 1.2氮气压力调整 1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。 1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。 1.2.3脱气瓶中液体的更换 1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。 2.开稳压器 3.启动L－8800ASM应用程序 3.1系统初始化，OK 3.2打开Module Operation界面
3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1； 3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2； 3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。 3.6泵的压力归零 4.分析程序 4.1选择应用程序 4.2选择分析方法 4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存； 4.4打开数据采集监控画面 4.5选择样品表 4.6打开泵1和泵2 4.7按样品表顺序放置样品。 4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。 4.9开始结束后，关闭采集监控画面 4.10关闭L－8800ASM应用程序 4.11关电源 三、实验报告要求 1.实验原理及分析条件； 2.实验结果。
氨基酸自动分析仪 1.实验目的 ①了解氨基酸自动分析仪的分析原理； ②掌握氨基酸自动分析仪的操作技巧。 2.实验原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。 3.实验仪器与耗材 实验仪器： 耗材： 4．实验步骤 ①样品处理： 测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。测定必须在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析
一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1～3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 5.结果计算 带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外，根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 6.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。
天津市第三中心医院全自动氨基酸分析仪项目需求书数量：一台 一、环境条件： 1.电源电压：220V±10%，50Hz。 2.温度：15～30℃。 3.湿度：25～85%。 二、全自动氨基酸分析仪功能要求及配置： （一）功能要求： 1.蛋白水解液及生理体液分析。 2.缓冲液、反应液试剂配方公开，可采用国产试剂。 3.色谱工作站，能够实现仪器的控制、数据采集和处理。能够实现系统的自动清洗，符合GLP/GMP规则，能够进行系统校验性试验、订制客户报告。 （二）配置要求： 1.蛋白水解液的标准分析系统。 2.生理体液分析系统。 3.色谱柱装填工具：1 套。 4.树脂。 5.光源灯：2个。 6.泵密封件：若干。 7.清洗密封件。 8.保护柱芯：若干。 9.电脑系统和打印机。 三、全自动氨基酸分析仪技术要求： （一）系统指标： 1.净分析时间：蛋白水解≤ 50 min； 生理体液90-180 min。 2.保留时间重现性：全部氨基酸平均≤0.5%CV。 3.峰面积重现性：全部氨基酸平均≤1.0%CV。 4.检测限：全部氨基酸平均≤10pmol。
5.分离度：平均≥1.2。 （二）分离柱:可自行填充。 1.柱温范围：室温～99℃。 2.温度稳定性：≤±1℃。 （三）自动进样器：带制冷单元。 1.进样体积：1～500 uL 2.样品位：≥80 （四）检测器： 1.检测波长：570nm，440nm。 2.反应器温度范围：40-140℃。 3.温度稳定性：≤±1℃。 （五）泵系统：具备梯度控制功能。 1.流速稳定性：RSD≤1.0%。 2.最大压力：≥19.6MPa。 3.压力波动≤0.1%。 （六）数据处理工作站： 1.硬件：CPU Pentium IV以上，内存≥1GB，硬盘≥120 GB，DVD刻录光驱，17寸液晶彩显。 2.操作系统：32位操作系统。 四、技术服务：在用户单位现场提供应用技术培训，符合用户指定安装，要求完善的售后服务，以确保临床使用。 五、售后服务：保修期两年，保证开机率95%以上（以365天计算），软件终身免费升级。提供10年以上备件供应。境内具备正规维修机构，出具相关法律文件。境内具备零备件保税库，出具相关法律文件。 六、投标价为免税美元价，按7.7比率折合人民币价格。
各种类型氨基酸分析仪性能比较一览表 常规氨基酸分析是指20种蛋白水解氨基酸和40余种游离氨基酸的分析。氨基酸分析仪自1958年问世以来，不断借助现代化的硬件和软件更新换代，现已发展成为现代食品、饲料、生物技术、医药卫生和生命科学等行业氨基酸分析必不可少的自动化常规检测设备。 氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。两类方法的特性比较见表1。 表1：氨基酸分析方法的分类和特性比较表[1]
说明：IEC离子交换色谱；PITC异硫氰酸苯酯；OPA邻苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羟基琥贝酰亚胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯 由表1可见，IEC标准方法优于HPLC非标准方法，且此类仪器为专用型自动氨基酸分析仪器。 国外氨基酸分析仪器中，基于I EC标准方法原理并按照国家计量法规规定迄今业已正式通过国家技术质量监督总局型式认证的，有日立公司的L-8800，安玛西亚公司的30系列和安米诺西斯公司的A200型三种氨基酸分析仪。尚待通过计量认证的有Sykam和Jeol。而提供HPLC型氨基酸分析仪器的外国厂家有沃特斯、安捷伦、岛津和戴安等。但此类仪器用做氨基酸分析仪器时，还须首先通过氨基酸分析的计量认证。上述三家IEC型仪器的性能和技术参数见表2。 表2：三种IEC型氨基酸分析仪主要性能和技术参数对比一览表[2]
氨基酸自动分析仪 氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的自动化分析系统，广泛用于制药、食品、饲料、农业、育种、医学研究、临床诊断和地质考察等领域。 仪器类别：仪器仪表 /成份分析仪器 /氨基酸分析仪 指标信息：分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留时间重现性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 峰面积重现性：RSD≤1% (水解，所有峰) 1．原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm 有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。
2．操作方法 ①样品处理： 测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。测定必须 在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下 进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析 一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1～3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 3.结果计算 带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量 峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外，根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 4.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。 5.应用举例
烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法（YC/T 282—2009） 日期：2009/6/2 10:39:18 作者：来源： 烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法（YC/T 282—2009）由国家烟草专卖局于2009年3月30日批准发布，自2009年5月1日起实施。 前言 本标准的附录Ａ、附录B、附录C为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（TC144/SC1）归口。 本标准起草单位：湖北中烟工业有限责任公司、中国烟草总公司郑州烟草研究院。 本标准主要起草人：王娟、李丹、刘建锋、马舒翼、宋旭艳、郭国宁、刘克建。 烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法 1 范围 本标准规定了烟叶中游离氨基酸的氨基酸分析仪测定方法。 本标准适用于烟叶中天冬氨酸（Asp）、苏氨酸（Thr）、丝氨酸（Ser）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酸（Glu）、脯氨酸（Pro）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、β-丙氨酸（β-Ala）、β-氨基异丁酸（β-Aia）、γ-氨基丁酸（γ-Aba）、赖氨酸（Lys）、组氨酸（His）、色氨酸（Trp）、精氨酸（Arg）等21种游离氨基酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 YC/T 31-1996 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 烟叶中游离氨基酸 dissociated amino acid（free amino acid）in tobacco leaf 烟叶的盐酸浸出物中，以游离状态存在、未结合在蛋白质分子中的氨基酸。 4 原理 氨基酸为两性电解质，在酸性环境下形成阳离子。烟叶中的游离氨基酸经酸溶液萃取后，经氨基酸分析仪的磺酸型锂离子交换柱分离，然后与茚三酮混合，通过加热反应，伯胺与之生成蓝紫色化合物，仲胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用波长分别为570 nm和440 nm的双通道紫外检测器同时进行定性定量分析测定（氨基酸分析仪管路图参见附录A）。 5 试剂 除特别要求以外，本标准所使用的试剂均为分析纯试剂，水为去离子水。 5.1盐酸溶液，0.005 mol/L。
1.简介 采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似，但针对氨基酸分析进行了细节优化（例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等）2.系统 通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25 种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。 3.效果 分析效果：从目前已知的氨基酸分析方法比较来看，除灵敏度（最低检测限）比HPLC柱前衍生方法稍低以外（HPLC：<0.5pmol；氨基酸分析仪：<10pmol)，其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面，都优于其他分析方法。 4.如何选择质量可靠的氨基酸分析仪 1、原理。基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。此类方法由Stein和Moore两人
1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。 2、重要指标。满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。 3、指标的真实性。有些厂家只标出个别氨基酸的指标如Asp 或Arg，或只用平均数据替代全部数据等等，而仪器性能好，经营信誉较高的厂家就会标出全部氨基酸的指标供用户参考。 4、仪器的可靠性。如果仪器今天堵了、明天漏了，用户不仅要付出大量人力财力，分析结果的可信度也将大打折扣。 5、仪器的运行成本。例如是否可以使用国产试剂、柱子寿命（以多少次进样计算、而不以多少年计算）等。 6、仪器设计是否有利于氨基酸分析。例如是否有惰性气体保护（茚三酮极易被氧化）、是否提供在线脱气、是否提供溶液和样品的制冷控制等。 7、售后服务。分析过程中遇到困难是在所难免，厂家必须能够快速响应、尽快解决问题。另外，常用备件的价格也是一个重要因素，因为用户在购买前一般难以注意到售后的问题，而很多厂家也没有公示自己的常用备件价格，这就为将来的使用埋下了隐患，事实上，也的确有很多仪器在出现一些看似微小的故障之后，就因为维修费用太高而被“束之高阁”。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪 简易操作规程 一、联机 1、打开电脑。 2、打开主机电源。 3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。 1-1 4、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击 联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized变成 Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。分离柱的温度会升到50℃。
1-2 1-3
二、手动各组件控制操作 1、泵1和泵 2 点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。 2-1 点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-2 2、自动进样器 点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。 2-3 2-4 3、反应柱柱温箱 点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。 2-5 2-6 三、编辑方法 1、依次点击、、出现3-1-1的画面。
3-1-1 2、选中，点击。再依次点击、 ，出现3-1-2的画面。 3-1-2
3、在设置中选中各个柱，其余参数默认。 4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。 注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。 3-3-1 2、保存方法。 四、编辑Sequence 1、依次点击、、，出现4-1画面。选中，其余参数默认。
德国sykamS433D/S433（赛卡姆）氨基酸分析仪 仪器主要特点：
1、经典的茚三酮柱后衍生法、符合国家标准 2、带制冷功能的溶液存放单元，全部试剂均有惰性气体保护，试剂瓶带独立阀门 3、全自动进样器带电子制冷，进样体积可编程，无样品损失 4、四元梯度泵内置在线真空脱气，优化后的洗涤梯度只需2-3种缓冲液 5、检测系统包含可精确控温的柱温箱及衍生系统，双波长同时检测 6、中英文、图形化软件极易操作，具有日志记录及权限管理，符合GLP/21CFR规范 7、优异的定性定量重复性，超长的分离柱使用寿命 仪器技术参数： 1、分析柱 ●电子恒温（制热或制冷） ●柱温 可梯度编程 20℃～99℃ ●温度准确度 0.1℃ ●柱 PEEK，4.6 x 150mm, 7um，10%交联（最适于氨基酸分析的强度） ●安全保护 过热保护 2、自动进样器 ●进样模式 100μl体积可变环进样 ●进样体积 可变； 1μl～5000μl，0.1μl增量 ●样品清洗 最高5000μl清洗液，1μl增量 ●记忆效应 低于0.01%（自动清洗进样回路） ●重现性 10μl 变体积进样时变异低于1% ●进样/样品瓶 每个系列1～9次进样，可设不同体积 ●样品盘 两个盘，每盘60个样品位，1.5ml样品瓶 ●温度控制 +5℃～70℃（电子恒温） 3、溶液存放单元，带电子恒温装置 ●可存放所有缓冲液、再生液及茚三酮试剂 ●温度 4℃ ●内置式冷却器，可进行温度控制 4、四元梯度泵（输液单元） ●活塞 双活塞短行程技术，自动清洗 ●流速 0.000ml/min～9.999ml/min ●流速稳定性 RSD<0.1% ●最大压力 40MPa (400bar，6000psi) ●操作方式 恒流，恒压 ●梯度混合室 100μl～500μl ●材料 PEEK 5、检测系统 ●检测波长 570nm, 440nm（可同时检测） ●荧光检测（选配）
（1）故障现象：泵1泵2压力均高（正常压力泵1约9MPa，泵2约1MPa） 产生原因：反应柱被堵塞。 判断方法：将泵1泵2通往混合器的连接管路取下，此时如果两个压力明显下降则可断定。解决方法：将反应柱取下放入干净的容器中并注入蒸馏水，利用超声波清洗器清超30分钟，然后反装回原位利用泵2走水（用R3），流量视压力而设定，由小到大直至压力正常为止，最后将反应柱恢复原状（注意：反相冲洗反应柱时脱开通往流动池的管路，以防流动池堵塞）。（2）故障现象：仅泵1压力高 产生原因1：在线过滤器被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法1：将在线过滤器与分析柱脱离后压力远远大于0.5MPa。 解决方法1：将过滤器的滤芯取出，利用超声波清洗30分钟后反相开路用缓冲液1冲洗，直至压力恢复正常；如果无效则要更换滤芯。 产生原因2：分析柱入口被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法2：将在线过滤器与分析柱脱离后压力小于0.5MPa。 解决方法2：参考清洗反应柱方法。 产生原因3：分析柱内树脂被样品污染。 判断方法3：氨基酸组分出峰拖尾，分辨率下降。 解决方法3：参照说明书方法处理树脂后再填装。 产生原因4：除氨柱堵塞。 判断方法4：脱开除氨柱出口管路后压力远远大于0.3MPa。 解决方法4：参考清洗反应柱方法或重新填充除氨柱。 产生原因5：自动进样器有关管路被堵塞。 判断方法5：将通往在线过滤器的管路开路后压力仍高。 解决方法5：此故障较难判断，一般规律多发生在六通阀及取样环部位。 产生原因6：压力传感器出口过滤网被堵塞。 判断方法6：脱开除氨柱入口的管路后压力仍高。 解决方法6：取出过滤网后用超声波清洗。 （3）故障现象：仅泵2压力高 产生原因1：反应柱被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法1：将反应柱输出管路开路后压力仍高。 解决方法1：参考上述方法。 产生原因2：泵2输出软管被堵塞。 判断方法2：将软管与混合器处的连接脱开后压力仍高。 解决方法2：利用泵2走水，流量设定为0.1ml/min，长时间冲洗直至压力降下来，如无效则要更换输出软管。 产生原因3：压力传感器出口过滤网堵塞。 判断方法3：脱开压力传感器出口的软管后压力仍高。 解决方法3：取出过滤网用超声波清洗。 （4）故障现象：泵1或泵2压力低 产生原因1：有关管路漏液。 判断方法1：用滤纸在有关连接处试漏。 解决方法1：再紧固有关连接处。 产生原因2：缓冲液或茚三酮试剂瓶中吸管头的过滤器堵塞，不能吸液。 判断方法2：将良好的泵停止运转，仅启动有问题的泵，检查废液管排液量。 解决方法2：利用超声波清洗或更换新的过滤头。
氨基酸自动分析仪 氨基酸是蛋白质的组成成分，是蛋白质化学研究的主要内容之一。蛋白质是一切生命物质的基础，因此，探讨和揭示生命现象的发生、生长、新陈代谢、遗传变异过程，都与氨基酸的研究有关。 随着近代物理学、化学和电子学的飞速发展，氨基酸的分析技术亦在不断更新。氨基酸分析仪是本世纪50年代研制的，仅40多年，已发展到现在的进样、分离、检测和数据处理全部自动化的程度。检出量由微克分子到毫微克分子，分析时间由原来的24小时到现在的半个小时，分析技术的提高促进了其他科学领域的发展。 一、氨基酸自动分析仪的进展 用于氨基酸分析的方法很多，有纸色谱法、柱色谱法、薄层色谱法、电泳法及气相色谱法等。一般认为离子交换柱色谱法是较为精确的检测方法，氨基酸分析仪就是在此基础上研制成功的。1951年Moor和Stein采用离子交换树脂色谱，用茚三酮试剂显色和分光光度计检测而设计，后来在Spaekman的协助下，使分析操作自动化。迄今氨基酸分析仪的条件和自动程度有了很大的改观，其特点主要表现以下几个方面。 ⒈树脂粒径减小近年来制成的小颗粒球状树脂，使氨基酸分析仪得到很大改进。由于树脂粒径减小就对应地增加等
量树脂的总面积，使现在少量树脂达到过去大量树脂的分离效果，从而减小了树脂柱的内径和体积，节省了试剂用量，缩短了分析时间。树脂的粒径从200→20→10→5μm。 ⒉色谱柱内径缩小树脂粒径减小使填充树脂床的色谱柱内径减小，由过去的粗长柱变为微柱。色谱柱内径的变化为18→6→2.8→1.75mm。 ⒊输压泵压力增高一般氨基酸分析仪采用低压泵，其施加于输液的压力只有几9.80665×104Pa，以后增加至几十 9.80665×104Pa，现在发展到2068×104Pa。 ⒋分析时间缩短由于树脂粒径的改善，色谱柱内径缩小和泵压增高，使分析时间大大缩短。蛋白质水解液的分析时间从过去的24小时缩短到现在的半个小时左右。 ⒌仪器灵敏度提高由于仪器的不断改进，使灵敏度大为提高，过去仪器的最高灵敏度已远不及现在仪器的最低灵敏度。现在一般氨基酸分析仪的灵敏度均达到0.1nmol。 ⒍试剂用量减少由于分析时间大大缩短，致使试剂消耗量大为降低。氨基酸分析的试剂要求纯度很高，且价格昂贵，试剂用量减少会降低分析费用，试剂流量(每小时茚三酮试剂的用量)的变化为70→35→18→3.5ml。 ⒎样品用量少由于仪器灵敏度不断提高，同时不少仪器采用单柱分析法，所以样品用量逐渐减少，从过去一次分析需要样品几ml到现在只用20μl。这对科研中难以收集和制
氨基酸分析仪使用调试技术 一、仪器安装调试 仪器安装最好外接稳压器，安装安全闸防止突然停电造成难以排除的故障。还要安装铜板地线，这样可使峰谱线稳定。仪器各项技术指标的调试采用18种氨基酸混合标样（日本和光试剂公司H型氨基酸混合标准液）。 1. 基酸分辨率的检测该仪器要求苏一丝氨基酸分辨率为70%以上，甘-丙氨基酸分辨率为80%以上，采用5个标样经检测苏-丝氨基酸分辨率为85%以上，甘一丙氨基酸分辨率为以95%上（试验数据表略）。 2. 氨基酸峰位重现性检测：5个标样连续多次检测，丙氨酸最高和最低出峰保留时间不超过1分钟，精氨酸出峰时间最高和最低偏差在1%以内（试验数据表略）。 3. 氨基酸蜂面积重现性检测：5个标样、经多次检测甘氨酸和丙氨酸峰面积重现性编差平均值均达仪器指标2.5%以下（数据表略）。 4. 仪器重复性检测：仪器分离柱重新装树脂后，对10个标样进行检测,，17种氨基酸（不包括氨峰）的出峰保留时间（t）和峰面积（A）的变异系数（CV）值列表1。 表1看出种17氨基酸值均在以1%内，说明各种氨基酸峰面积再现性较好，仪器重复性好。
二、不同样品氨基酸含里测定 1. 仪器检测原理和方法：该分析仪不锈钢分离柱内装有专利2619混合离子交换树酯（Hitachi Cuiuomion-Exchange Resin），根据离子吸附交换的原理,，样品用6摩尔盐酸水介法处理后，经自动进样器定量，然后进入分离柱，用流量稳定的泵1输送规定的缓冲液，按事先编好的程序卡规定的程序自动淋洗，样品水介后的酸性、中性和碱性氨基酸分别从分离柱上被洗脱下来，各种氨基酸分次与泵2输送的茚三酮显色液在混合器中充分混合，在温度为100℃左右的反应浴中进行显色，生成紫色色素Dikepohydrindlidene Dikerohydrinaomine（DrDA），此紫色发色液经单色分离器的分光光度计，用570 纳米和440 纳米两个注长连续检测，得到的吸光度进行信号放大，记录仪自动绘出各神氨基酸峰谱，以标准氨基酸峰谱为基准，采用峰面极H·W 法进行结果计算，或通过数据处理系统进行计算打印，得出各种氨基酸含量。 2. 分析结果：为了检测仪器的稳定性，选用了各种不同样品20个，进行氨基酸含量的测试，测定数据列表2。
A200-IC（A200-IC Chromatography System）全自动氨基酸分析仪 全自动氨基酸分析仪技术参数 一.全自动氨基酸分析仪: 具双用的锂盐体系和经济的钠盐体系 独特锂盐体系兼作21种水解氨基酸和43种游离氨基酸，不更换柱子。 钠盐体系高效完成21种水解氨基酸分析，测定一次样品试剂成本约1元人民币。 水解氨基酸检测限全部≤1pmol，平均0.5pmol；平均分离度≥98%；保留时间重现性CV≤0.3%，峰面积重现性CV≤1%；试剂和能源消耗及排污量为同类仪器1/3 - 1/4 二.全自动氨基酸分析仪、离子色谱分析浓度范围：ppb–ppm 离子色谱检测限(质量数)：抑制电导法：阴离子Cl:0.02ng 非抑制电导法：阳离子Li:0.05ng 柱后衍生法：重金属离子0.1ng 仪器线性：0.9990 保留时间重现性：CV≤0.5% 峰面积或峰高重现性：CV≤1% 分离度：≥1.3 6分钟分析7种常规阴离子，10分钟分析EPA10种阴离子 2分钟分析Ca-Mg；一次测定甜菜碱氯化胆碱和一价阳离子 Cr(III)-Cr(VI) 连测；13种高价金属离子连测 80余种离子色谱分析。 全自动氨基酸分析仪主要特点 A200-IC Chromatography System 是一代新型氨基酸分析仪。 主要特点: 高灵敏度,高稳定性,高性价比,双梯度（浓度＋温度梯度〕分离，黑匣子自动记录技术，低耗，环保。 具迄今最好的氨基酸检测限:水解氨基酸检测限平均0.5pmol，游离氨基酸检测限平均2 pmol。 连续分析水解和游离氨基酸而无须更换体系。在线化学除氨除氧过滤和脱气。 A200-IC 同时又是一代新型离子色谱仪。 借助氨基酸分析仪高度自动化的主机、高灵敏度紫外可见检测器和电导检测器，适合80余种离子自动分析。 仪器介绍 一.A200-IC主机全自动氨基酸分析仪组成： 含8流路电子监控高位试剂架； 在线化学脱氨脱氧脱气和过滤四项保护装置； 带制冷室的120位三维自动进样器； 高精度钛合金微型高压输液泵； 流路电磁阀； 温度梯度用高级柱温炉； 柱后高温反应器； 二.A200-IC检测器全自动氨基酸分析仪： UV.Vis 紫外可见光度检测器：波长190-900nm，恒温检测池；具汞灯和钨灯双光源，极高的信/噪比和极低的检测限； 双光路同时检测，可扫描光谱。供直接和间接或柱后衍生光度检测用。为氨基酸分析必备和离子色谱可选检测器。 电导检测仪：为离子色谱分析可选检测器。带电化学自再生抑制器供抑制电导检测；也可作范围在10 nS/cm–100,000 uS/cm 的非抑制电导检测。 三.A200-IC工作站：aminoControl+aminoPeak 控制软件aminoControl精确控制仪器全部运行参数，每分钟一次自动记录(黑匣子技术) ，可及时故障定位和远程服务。
湖北一半天制药有限公司 目录 1 设备基本情况 1.1概述 1.2基本情况 2 验证目的 3 职责 3.1验证小组职责 3.2保障部职责 3.3质量管理部职责 4 验证内容 4.1安装确认 4.1.1安装确认所需文件资料 4.1.2关键性仪表及消耗性备品 4.1.3 评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求 4.1.4评价设备的安装是否符合设计规范、GMP及供应商提议的要求 4.1.5 起草操作规程 4.1.6 仪器仪表校正 4.2运行确认 4.3性能确认 4.4拟订再验证项目及周期 4.5验证结果评定与结论 5 附件
1设备基本情况： 1.1概述 工作原理：氨基酸分析仪是利用样品中各组分，在分析柱中的缓冲液(流动相)和固定相间的分配及吸附系数不同，由流动相把溶液样品带入分析柱中进行分离，并与泵2 吸入的茚三酮溶液在混合器混合, 送入反应柱反应后生成深蓝色的液体并通过检测器进行检测的仪器，根据各组分的保留时间和响应值进行定性、定量分析。 本仪器由液路系统、进样系统、柱分离系统、染色系统、检测系统和数据采集系统组成。 1.2基本情况 设备编号： 设备名称： 型号： 系列号： 生产厂家： 供货厂家： 出厂日期： 到货日期： 使用部门： 工作间： 管理员： 维修服务： 服务单位名称： 地址： 邮政编码： 联系人： 联系电话： 传真： 2 验证目的： 为确认本仪器测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对此仪器进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书（附件1），报验证小组批准。 3 职责： 3.1 验证小组 3.1.1负责验证方案的审批； 3.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施； 3.1.3负责验证数据及结果的审核； 3.1.4负责验证报告的审批； 3.1.5 负责发放验证证书；