实验一机械法分离培养动物细胞及计数
一.实验目的
1.掌握机械法分离培养动物细胞的原理及方法
2.掌握细胞计数的方法
二.实验原理
在机体中，器官通常由几种组织构成，组织又由细胞通过紧密连接锚定连接、通讯连接构成组织。采用机械法破坏细胞间的连接，能获得单个细胞。本实验采用剪碎小白鼠肝组织的方法获取单个肝细胞，该方法简单易行。
三.实验材料
1.动物：小白鼠（成年）
2.试剂：PBS缓冲液，RPMI-1640培养液
3.器材：手术器械、试管、滤网、离心管、离心机、显微镜等；
四.实验方法
1.无菌获取肝组织
取成年小白鼠一只，断颈处死，腹部向上置于解剖盘中，碘酒消毒1-2次，75%酒精洗碘。剪开腹壁，暴露肝脏组织，换手术器材，剪取0.3mm3肝脏组织块，置于培养皿中。
2.获取细胞
剔除脂肪组织，加PBS缓冲液1ml，反复冲洗2-3次，剪碎组织块至1mm3，加RPMI-1640培养液，滤网过滤至离心管。平衡、离心（1000rpm,5min），弃上清，加培养液1ml，吹打均匀，成细胞悬液。
3.细胞计数
取细胞计数板一个，盖上盖玻片，去细胞悬液，沿盖玻片便于滴1滴，显微镜下计细胞数，原则：计上不计下，计左不计右
4.细胞培养
加细胞培养液，稀释至1X105个/ml，移入培养皿，37℃，CO25%培养箱中培养
四.实验结果
实验二酶消化法分离培养小鼠胎儿成纤维细胞
一.实验目的
掌握消化分离培养小鼠胎儿成纤维细胞的基本方法
二.实验原理
胰蛋白酶是一种消化酶，它通过作用于精氨酸或赖氨酸之剑的肽键，能破坏细胞间的连接，进而从组织块中分离获得单个细胞；细胞之间是通过CAM相连，而很多粘性分子只有在+2价金属离子，如Ca2+,Mg2+的存在下，才能行使这种功能，在胰蛋白酶中加EDTA的作用是熬合这些二价例子，使细胞被消成单细胞状态；本实验就是采用胰蛋白酶和EDTA消化小鼠胎儿肌肉细胞获得单个细胞。
三.实验器材
1.试剂：10%犊牛血清（NBS）的1640培养液，0.25%胰蛋白酶，0.04%EDTA，PBS
2.器械：离心机，滴管，普通天平，手术器械，血球计数板，离心管等
3.材料：怀孕13-17天母鼠
四.实验步骤
1.取材：断颈处死怀孕小鼠，腹部向上置于解剖盘中，碘酒消毒1-2次，75%酒精脱碘，剪开腹壁，更换手术器械，取胎儿置培养皿中
2.剔除和清洗：从子宫中挤出胎儿，剪去胎儿头、尾、四肢、内脏和脊柱后，反复用PBS
冲洗3-4次
3.剪碎：将冲洗干净后的胎儿组织块置另一培养皿中，剪碎至1mm3（剪15-20min）
4.消化：加入4ml0.25%胰蛋白酶消化液，37℃消化5-7min
5.终止：加入4ml含10%NBS的1640培养液终止消化
6.收集细胞：离心用100目滤纱将细胞悬液过滤至离心管中，平衡离心（1000rpm,5min）
7.制备细胞悬液：弃上清，加1ml1640培养液，吹打成细胞悬液
8.细胞形态观察：取载玻片一张，滴细胞悬液一滴，盖上盖玻片，显微镜下观察
9.细胞计数：按上一实验介绍方法计数
10.培养细胞：将稀释至1X105个/ml细胞悬液加入培养皿中，置于5%CO2，37℃，75%湿度培养箱中培养
实验三牛镜子细胞冷冻与活率检验
一.实验目的
1.掌握细胞冷冻解冻原理及方法
2.掌握细胞活率检验原理及方法
二.实验原理
细胞培养液中加冷冻保护剂，并通过一定的冷冻程序冷冻细胞，一方面使细胞内形成的结晶体积较少，减少对细胞的机械性损坏；另一方面缓解细胞内因结晶引起的局部高渗对细胞的伤害。再者，细胞在液氮（-196℃）代谢缓慢，长期保存生命力。通过快速解冻的方法来解冻细胞
三.实验材料
1.材料：牛精子细胞、液氮
2.试剂：2.9%柠檬酸钠DMEM+10%NBS（小牛血清）DMEM+10%NBS+10%DMSO
3.器械：10ml离心管冷冻管水浴锅（37℃）离心机生物显微镜载玻片盖玻片擦镜纸盥水瓶60ml白滴瓶是管家滴管液氮罐纱布袋温度计
四，实验方法
1.细胞解冻：取烧杯一只，加37℃温水，作为解冻源。从液氮罐中取出精子细胞冷冻细管，直接快速投入37℃水浴解冻
2.解冻细胞活率检验：取1支牛精子毛细冷冻管，用75%酒精棉球消毒两端，剪开一端后，置于离心管上，剪开上端，放出精子细胞悬液。加柠檬酸钠缓冲液1ml，混匀，清洗细胞后，离心（1000rpm,5min）弃上清，加DMEM+10%NBS1ml，混匀，制备细胞悬液，取1滴细胞悬液于载玻片上，观察活力，再取一张载玻片，滴一滴细胞悬液和台盼蓝，混匀，静止
1min，计数200个细胞，计算牛精子冷冻解冻活率
3.细胞冷冻：离心稀释细胞，弃上清，加入细胞冷冻保护剂1ml，混匀，进入细胞冷冻管，封口，标记，装袋，放入液氮罐中，悬浮液氮面上过液，投入液氮保存
五．计算细胞活率：细胞活率=活细胞数/200X100%
实习一动物细胞工程常见仪器设备的使用
一.实习目的
通过参观、降解、操作常用仪器，掌握实用实验仪器设备使用方法及注意事项
二.动物细胞工程实验室布局
准备室、层流室、称量室、取材室、储备室
三.仪器及方法
1.准备室实验设备
蒸馏仪：单蒸水、双蒸水、三蒸水
酸缸：酸液由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸构成，比例是1:20:20
超声波清洗机：洗涤剂刷洗→自来水冲洗→双蒸水冲洗
干燥箱：所有清洗仪器均需烘干，温度设置为75℃。玻璃物品均可采用干燥箱灭菌，通常温度设置为160℃，时间2h
高压灭菌锅：用于消毒塑料物品如墙头、滤器、橡胶管、手术器械等，试剂如PBS，生理盐水等，通常设置为15磅30min
真空泵：用于抽滤，1000ml或以上溶液
离心机：如制备血清，分离细胞
2.层流室的实验设备
超净工作台：操作、细胞分离、培养、传代、冷冻、解冻
CO2培养箱：培养细胞
倒置显微镜：观察细胞生长情况
小型离心机：收集细胞
生化培养箱
CO2瓶
3.称量室的实验设备
电子天平磁力搅拌器药品柜
4.取材室
紫外线提前30min打开无菌取材后及时清理
5.储备室的实验设备
冰箱液氮罐
实习二细胞培养液的配置、分装及保存
一.实习目的
掌握常用细胞培养液配置、分装及保存的方法与注意事项
二.实习内容
1.PBS（一）的配制、分装及保存
依次分别称量8.0gNacl，0.25gkcl，2.82gNa2PLPO4.12H2O，0.2KH2PO4，溶于500ml无离子水中，磁力搅拌器搅拌，充分溶解后，定容至1L，分装于250ml盐水瓶中，包装，高压灭菌（15P，30min）4℃保存
2.RPMI-1640细胞培养液的配制，分装及保存
称量2.0gNaHCO3溶于500ml无离子水中，再加入10gRPMI-1640，磁力搅拌器搅拌，溶解，定容至1L。真空泵抽滤后，分装于细胞培养瓶。4℃保存
3.胰蛋白酶消化液的配制、分装及保存
称量0.25g胰蛋白酶、0.04gEDTA，溶于100mlPBS（-）中，磁力搅拌至完全过滤溶解，定容至200ml。0.22μm滤膜过滤，分装于4ml瓶中。-20℃保存
实习三动物细胞船代培养
一.实习目的
1.掌握动物传代的基本过程和方法
2.深刻体会无菌操作基本过程
二.实习原理
当细胞生长扩增至70%融合时，由于受到空间和营养的限制，需要转移到心的培养空间进行培养。本实验大鼠上皮样细胞呈多角形贴壁生长，采用胰蛋白酶消化液作用于细胞基质糖蛋白中赖氨酸和精氨酸形成的肽键，破坏铣刨机之间的联系，使贴壁生长细胞悬浮。
三.实习料物
1.材料：贴壁生长的胰腺上皮样细胞
2.试剂：PBS(-)、胰蛋白酶消化液，细胞培养液（KPMI-1640+10%NBS），75%乙醇
3.器材：培养皿、移液枪、枪头、离心管、离心机、倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台
四.实习方法
1.准备：酒精擦拭超净工作台，准备好实习材料
2.观察细胞：取出细胞，显微镜下观察
3.清洗细胞：用2mlPBS（-）清洗一遍，弃洗液
4.消化细胞：加入2ml胰蛋白酶消化液，室温消化3min
5.终止消化：加入2ml细胞培养液
6.离心：加10ml细胞悬液，平衡、离心（1000rpm,5min）
7.悬浮细胞：离心后，加入2ml细胞培养液
8.培养细胞：取1ml细胞悬液，移至新的培养皿，再加3ml细胞培养液，混匀，观察，将培养皿置于培养箱，37℃，5%CO2，饱和湿度条件下培养
五.实习结果
隔天观察，记录细胞生长情况
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
动物细胞工程12月20日 动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养 1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 分散成单个细胞， 制成细胞悬液 注意： ①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。 ③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答： ⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养? 答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么? 答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 ⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高） ⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?
答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。 ⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 4、重要概念 ①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。 培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。 ②细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ③原代培养：动物组织消化后的初次培养 ④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。 5、培养条件： ⑴无菌无毒环境：无菌——对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。；无毒——定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。 ⑵营养： 成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。 培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基） ⑶温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 ⑷气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养。O2：是细胞代谢所必需的CO2主要作用是维持培养液的pH。 6、应用：生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。基因工程中受体细胞的培养。用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据。
2.1.3动物细胞课堂活动 教学过程： 复习：1.制作临时装片的“七字步骤”；（擦、滴、取、展、盖、染、吸） 2.植物细胞的基本结构。（略）从而过度到本节。 师：上节课就有同学说：“老师，我真想看看自己身上的细胞呀，它和植物细胞一样吗？这节课就可以实现愿望了。 生：可是怎么看呢？ 师：出示实验题目——观察人的口腔上皮细胞，看到题目，你有什么疑问？ 生：口腔上皮细胞在什么部位？怎样取得？ 师：看着老师准备的用具，想一想？ 生：发现牙签，寻找解决问题的途径——在口腔侧壁上刮取（师引导、示范）。 师：再来认识一下其他的材料用具，有什么疑问？ 生：提问：关于生理盐水？（保持细胞的生理活性） 师：有了前两节课的经验，我们已经轻车熟路了，要想观察细胞，首先应做什么？ 生：制作临时装片。 师：利用这些材料用具，借鉴前面所学的方法，同学们自己设计一下制片的过程吧。 生：分组讨论、交流。设计方案如下： 1．方法步骤不变：擦→滴→刮→涂→盖→染→吸； 2．直接染色：擦→滴→刮→涂→染→盖→吸； 3．变化染色剂：使用高锰酸钾与碘液有何不同？ 4．变化取材部位：刮上颚与刮侧壁结果有何不同？ 选择一种方案制片，相邻同学尽量选择不同的方案，以增加对比性。 师：提示学生实验中的注意事项、规范操作。
生：观察。注意根据染色的结果区分细胞的结构，注意细胞数量的多寡、分散状况如何？分析原因。 师生交流实验所得： 1．取材于口腔内侧壁，细胞数量较多，但不易分散； 取材于上颚，细胞数量少，但分散较好，便于个体观察。 2．使用高锰酸钾溶液染色的结果较有层次：细胞核呈棕色，细胞质呈紫红色，细胞膜无色，效果不错。 绘图。学生依照自己观察到的细胞，实事求是画一个口腔上皮细胞图，注出各部分名称，较好的绘图在全班展示。 师：让我们再来认识人体或动物体一些其他的细胞。媒体演示（投影片或多媒体）。 生：归纳总结人体或动物体细胞的基本结构：细胞膜、细胞质、细胞核。 比较动、植物细胞结构的主要不同点，表达交流，取得共识。 师：让我们来动手制作一个“动物细胞”吧！ 生：模拟制作，可以在教师帮助下按照书中的方法制作，也可以在不用琼脂的情况下，利用现成的果冻加入一枚彩色糖粒示意细胞核，果冻即细胞质，包装果冻的塑料壳即细胞膜，能够达到效果，比较方便、卫生，不足之处是学生动手的成分要少一些。谨供参考。 小结略（可将连续三节实验课的情况进行总结）。 练习略。
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
《动物细胞》教学设计 七年级生物教案 教学目标： 知识与能力： 1.学生进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，提高制作与观察的技能 2.通过对其他动物细胞结构的观察，概括动物细胞的基本结构，提高学生的观察、归纳、总结能力。 3．区分动植物细胞的异同点，提高学生观察、比较的能力。 4. 通过模型制作进一步强化对动物细胞结构的认识，提高学生动手能力。 过程与方法： 1.通过复习植物细胞临时装片制作，学生阅读课本，找出动物细胞临时装片制作与植物细胞临时装片制作的不同，明确制作动物细胞临时装片的步骤。 2.使用显微镜观察口腔上皮细胞初步了解动物细胞结构，进一步通过对其他动物细胞结构图的观察，概括出动物细胞的基本结构。 3.对动植物细胞结构图进行比较，强化对动、植物细胞结构异同点的认识并得出细胞是生物体结构的基本单位这一核心概念。 4.通过模型制作进一步强化对动物细胞结构的认识。 情感、态度与价值观： 1.进一步让学生体会实验对生物学的重要性。 2.认同细胞的生物体结构基本单位。 教学重点： 制作口腔上皮细胞临时装片，正确使用显微镜。 区别动植物细胞结构的异同点。 教学难点： 口腔上皮细胞临时装片的制作和观察。 课时安排： 一课时 教学过程： 教学环节
教学内容及教师组织引导 学生活动 设计意图 激发兴趣 通过多媒体展示两组植物图片和动物图片，激发学生的学习兴趣。 配合老师提出的问题，积极投入对新课程内容的学习。 激发学生学习兴趣，确定本节课程内容——观察动物细胞。 复习旧知 新课学习一、动物细胞临时装片制作及观察 ●二、总结动物细胞基本结构 ●三、模型制作强化动物细胞结构认识 ●四、比较动植物细胞异同点 启发学生回顾制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片的实验步骤，并尝试用一个字概括。 布置学生阅读制作口腔上皮细胞的实验步骤，同样用一个字概括。 引导学生找出动植物细胞临时装片制作之间的差异。 思考讨论：
实验十五动物细胞培养技术及其应用 一．实验目的 通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。 二. 实验内容 1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术； 2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术； 3.细胞污染检测方法与技术； 4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。 三．实验用品 1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等 2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH 计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液 管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、 24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH 试纸、酒精棉球等 3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、 Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris 碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、 DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。 四．实验方法与步骤 （一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏 1. 缓冲液及培养基配制 Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。4℃下保存。 胰蛋白酶液： 称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s 液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。 MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。4℃下保存。Grace培养基：取一份GIBCO公司的Grace培养基粉剂，按说明用量加入1000ml三蒸水100单位／毫升青、链霉素，充分混匀使溶解，调节pH值至6.8左右。 0.22 μm 滤膜抽滤除菌，4℃下保存。此为基础培养基。使用前加入10%胎牛 血清。 细胞冻存液：基础培养基加入10%DSMO，20%胎牛血清，用前配制。 PBS缓冲液：137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.1 mmol/L Na2HPO4, 1.5 mmol/L KH2PO4,
台州学院生命科学学院 09科学教育2班实验教案 实验名称：观察动物细胞和植物细胞 姓名：____________ 参与人员：景双双钱志扬柳长隆郑如观察动物细胞和植物细胞教学设计
姓名：景双双钱志扬柳长隆郑如学号：35 36 37 38 课题七年级上第二章第4节细胞（第三课时）观察动物细胞和植物细胞 2011版课程标准对本节内容的要求与活动建议1、学会制作简单的临时装片。 2、熟练掌握显微镜的使用，观察装片，学会绘制简单的生物图。 3、知道细胞的基本结构。 学习者的认知起点 学习者是七年级的学生，学生在之前的课中认识了生物，认识了生物的分类，也认识了微观的细胞和其结构。细胞作为生物体结构和功能的基本单位是生物学的基础知识，其重要性是显而易见的。上一节课也已经学习使用了显微镜，所以在本节课中要学会如何制作临时装片来进一步巩固显微镜的使用并且进一步对细胞进行观察以及学习生物实验绘图的方法。 基于学习者实际所设计的具体教学目标知识与技 能目标 1、熟练掌握显微镜的使用和观 察方法。 2、学习如何绘制生物绘图，并能 够掌握画图技巧。 3、进一步明确动植物细胞的区 别。 4、会根据植物细胞装片的制作 自己推出动物临时装片制作 的过程，并自己动手操作。 学习者 达到教 学目标 的证据 和表现 1、自己能够使用显微镜观 察装片，并且说出一些主 要步骤及注意事项。 2、能够观察装片并且具有 绘制生物图的能力。 3、能够在观察的基础上说 出动植物细胞的不同点 和相同点。 4、可以较好的完成动物临 时装片的制作。 过程与方 法目标 观察和分析实验及相关的实验注 意点的探究学习方式。 学生具有敏锐的观察和良好 的归纳能力，学会自己制作动 物细胞的临时装片。 情感态度 与价值观 目标 1、体会对事物的观察要透过现象 看本质； 2、感受科学的发展往往需要付出 几代人的共同努力，是一个长期 的过程，从而培养协作的精神； 3、初步感受物质世界的统一性和 多样性。 4、体会归纳思想的重要性，学会 自己去发现和解决问题。 1、能够理论联系实际，将之 前所学的动植物细胞的 结构与自己制作的临时 装片进行对比。 2、学会归纳思想，并且应用 到生活实际。 科学、技 术、社会 与环境 （STSE） 目标 知道细胞是生命活动的基本单 位，我们只有通过这样对微观世 界的学习才能更好的了解生命的 本质，为例如农业、生物等提供 一些本质性的帮助，为社会服务。 体会到细胞对于生命的 意义，学会透过现象看本质的 方法，科学地看待事物，更好 的为以后的学习和工作服务。
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
第三节动物细胞教学设计案例 张建平 教学目标 ①进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构，区别动植物细胞结构的主要不同点。 ②提高制作以及观察临时装片的技能。 ③设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想和方法是不断发展的；继续形成“胆大心细”的心理素质；在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。 重点和难点 重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点；提高实验能力和观察能力。 难点：制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞，学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果）；细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察，略有难度）；设计实验（应用以往的学习经验，是较高层次的学习）。 课前准备 学生：预习；3H铅笔，绘图纸；各种各样的果冻，彩色糖粒，果脯，小塑料食品袋，线等物品；上课前漱口。 教师：生理盐水，稀碘液，高锰酸钾溶液（质量分数为1％～5％），消毒牙签，滴管，纱布，镊子，吸水纸，载玻片，盖玻片，显微镜，清水，琼脂。 人口腔上皮细胞的结构挂图，不同种类的人体、动物体细胞挂图或投影片、投影仪或多媒体设备（若条件许可），提前制作临时装片、摆放示范镜。 教学设计
教学过程 复习：1．制作临时装片的“七字步骤”；（擦、滴、取、展、盖、染、吸）2．植物细胞的基本结构。（略）从而过度到本节。 师：上节课就有同学说：“老师，我真想看看自己身上的细胞呀，它和植物细胞一样吗?这节课就可以实现愿望了。 生：可是怎么看呢？ 师：出示实验题目──观察人的口腔上皮细胞，看到题目，你有什么疑问？ 生：口腔上皮细胞在什么部位？怎样取得？ 师：看着老师准备的用具，想一想？ 生：发现牙签，寻找解决问题的途径──在口腔侧壁上刮取（师引导、示范）。 师：再来认识一下其他的材料用具，有什么疑问？ 生：提问：关于生理盐水？（保持细胞的生理活性） 师：有了前两节课的经验，我们已经轻车熟路了，要想观察细胞，首先应做什么？ 生：制作临时装片。 师：利用这些材料用具，借鉴前面所学的方法，同学们自己设计一下制片的过程吧。 生：分组讨论、交流。设计方案如下： 1．方法步骤不变：擦→滴→刮→涂→盖→染→吸； 2．直接染色：擦→滴→刮→涂→染→盖→吸； 3．变化染色剂：使用高锰酸钾与碘液有何不同？ 4．变化取材部位：刮上颚与刮侧壁结果有何不同？ 选择一种方案制片，相邻同学尽量选择不同的方案，以增加对比性。 师：提示学生实验中的注意事项、规范操作。 生：观察。注意根据染色的结果区分细胞的结构，注意细胞数量的多寡、分散状况如何？分析原因。
动物细胞培养总结 一．实验准备 1.实验器械、器皿的清洗和消毒 （1）清洗和包装 离心管，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。 蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。 过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。 过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。 玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用
蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。 （2）消毒灭菌 1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。 2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。 玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。 2.无菌间消毒及设备检查 用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。 用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
一．建设方案之动物细胞培养实验室（设备片） 在生命科学科领域中细胞学有着至关重要的地位，近年来细胞学发展迅速，并取得了相当大的进展，细胞学相关实验室的建设也是各个研究院及院校生物学科必备的实验室。 细胞相关实验所需仪器及耗材种类繁多，接下来就细胞培养实验室常用仪器作下简单介绍：一、纯水系统 细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8MΩ以上），实际上普通蒸馏水经玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化。因此建议配置正式的水纯化系统。 二、液氮罐 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。 三、超净工作台/生物安全柜 细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。 四、CO2培养箱 CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。 五、恒温水浴 从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。 六、超低温冰箱 细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般4℃下存放30 min，转放-20℃ 1 hour，再转入-70至-80℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-196℃)，这时就必须配备一台-86℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。 七、离心机 细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的
《观察动物细胞》说课稿 作为一名老师，通常需要用到说课稿来辅助教学，说课稿有利于教学水平的提高，有助于教研活动的开展。那么优秀的说课稿是什么样的呢？以下是作者整理的《观察动物细胞》说课稿，欢迎大家分享。 一、教材分析 1、教材的地位和作用 本节课是生物学人教版七年级上册第二单元第一章第三节的内容，本单元主要是引导学生在细胞水平上认识生物体，教学上会有一定困难。这是因为细胞结构微小，距离学生的生活经验较远。因此，应当多给学生提供用显微镜观察细胞的机会，增加学生对细胞的感性认识。本节课尽管内容比较抽象，但是学生有了前面的植物细胞的观察作为基础，学起来还是比较容易的。 2、三维目标 知识目标 ①进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构。 ②区别动植物细胞结构的主要不同点。 能力目标 提高制作以及观察临时装片的技能。 情感态度价值观 设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想和方法是不断发展的;继续形成“胆大心细”的心理素质;在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。 3、重点和难点 重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点;提高实验能力和观察能力。 难点：制作临时装片过程中的刮取(首次观察自己身体上的细胞，学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果) 细胞结构的观察(与植物细胞相比不易观察，略有难度);
设计实验(应用以往的学习经验，是较高层次的学习)。 二、学情分析 七年级的学生还是处于一个好动的年龄，在学生已经观察了植物细胞的结构并有一定的了解下，这节课采用灵活的教学方式，让学生在动手中进一步了解动物细胞的结构。而且在学生实验能力没有得到充分的锻炼下，还不是很强，所以只有充分的感性认识才能吸引学生兴趣，把握课堂的重点。 三、设计理念 新课程标准提出“提高学生科学素养”，就是要把我们在教学中只注重对学生科学知识的传授转向全面提高学生科学素养的教育，强调学生在生物学知识、科学探究技能、情感态度与价值观等领域的全面发展。因此，我在教学中遵循“从做中学，学中做”的原则，运用实验法、比较法、多媒体演示法等方法进行教学，学生在教师的指导下可以运用小组合作法、比较法、观察法等方法学习。 四、教学环节 (一)创设情境，引入新课 复习：临时装片的制作方法;植物细胞的基本结构。 温故而知新，提出问题： ①想看看自己身上的细胞吗? ②人的细胞与植物细胞有什么相同和不同之处? 引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境，引入新课。 (二)组织实验，合作交流 出示题目，交流：“看到题目，你有何疑问? 疑问:人的口腔上皮细胞在哪?怎样取材?引导、分析。 ①设计：根据已有的经验，设计实验方案(注意取材、方法、染色剂的变化); ②制作：同组同学尽量选择不同的方案制作临时装片，增加对比性。 ③观察自己制作的临时装片，然后同学间交换观察。 (三)归纳反思，学以致用 绘制细胞的基本结构图，感知动物(人)细胞的形态结构，注意绘图要领。多媒体演示不同种类的动物细胞。 (四)模拟制作，能力拓展
动物细胞 九江市都昌县北炎中学艾冰华 一、教学分析 1.教材分析 本节内容是“植物细胞”内容的自然延续。本节的实验活动也是以上一节的实验知识与技能作为铺垫。 学生在了解植物细胞的基本结构之后，自然就想知道动物细胞的基本结构。这两类细胞有哪些共同的特点？又有哪些不同之处？“想一想，议一议”活动安排的内容，就是依据这种想法进行设计的。这体现了教材在帮助学生建构概念时，利用了学生已有的一些前概念的思想。 本节中的实验活动，因为有了制作植物细胞临时装片的经验，因此，实验活动的难度不大。但需要教师理解的是，教材选择的材料是人的口腔上皮细胞，一方面因为材料取自学生自身，可以有效地激发学生的好奇心，保证学生顺利地观察到人的口腔上皮细胞；另一方面，由于口腔内壁上脱落的细胞较少，而且有不少是食物残渣，因此，采用人的口腔上皮细胞，无形地增加了学生操作的难度。教师需要在教会学生取材以及后期染色方面多加指导。 关于动物细胞的结构，同上一节一样，引导学生通过实验观察、归纳、总结后获得相关知识。在具体的操作层面上，制作人的口腔上皮细胞临时装片的步骤中，强调要将上皮细胞放置在质量分数为0.9%的生理盐水中，其目的是保持细胞的正常形态，滴加碘液的目的是便于观察细胞，特别是观察到细胞核。 在讲述植物细胞和动物细胞基本结构的基础上，教材在正文中总结出“细胞是构成生物体的基本单位”这一重要概念。从教材呈现这一重要概念的位置来看，教材是非常重视帮助学生逐步形成概念的，概念的形成是有事实性材料来支撑的。不仅如此，教材还在“科学家的故事”栏目中，介绍了施莱登和施旺建立细胞学说的过程和成功的原因，以及细胞学说建立的重要意义，让学生全面理解“细胞是构成生物体的基本单位”这一概念的重要意义。 “制作动物细胞模型”的活动，一方面通过学生的动手动脑活动，进一步巩固加深动物细胞基本结构的知识；另一方面，制作模型的材料成本并不高，如果注意卫生是完全可以食用的，这也无形地激发了学生动手的兴趣。 2.学情分析 学生经过了前面的学习，知道了植物细胞的基本结构，初步学会了制作植物细胞临时装片的基本方法。很自然会想知道动物细胞结构和人（自己）细胞结构的冲动和极大的兴致和好奇心。所以，同样会出现操作的盲目性，以及在操作过程中因为找不到细胞而出现心理波动，这些教师一定要注意。比较植物细胞和
实验报告 生命科学学院系（部）生物科学专业级班指导教师雷志华 课程动物学实验姓名学号 实验名称动物细胞 一、实验目的： ①掌握动物细胞的基本结构。 ②掌握有丝分裂各期的特点。 二、实验内容： ①人体口腔上皮细胞临时装片的制作及观察。 ②马蛔虫卵有丝分裂装片的观察。 三、实验材料和用品： 显微镜、培养皿、滴管、载玻片、盖玻片、牙签、0.9%生理盐水、0.1%亚甲基蓝、擦镜纸、吸水纸、马蛔虫卵有丝分裂切片 四、实验操作：略 五、实验报告： 1、绘1－2个空腔上皮细胞结构图图，并标志各结构名称 2、在图中标注马蛔虫卵细胞有丝分裂各时期名称 实验地点：4408 实验日期：第1页共1页
实验报告 生命科学学院系（部）生物科学专业级班指导教师雷志华 课程动物学实验姓名学号 实验名称多细胞动物的胚胎发育和基本组织 一、实验目的： ①通过对蛙胚胎发育的模型和切片、封片的观察，了解动物胚胎发育的基本概念和一般规律。 ②通过对上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织四类动物基本组织切片标本的观察，熟悉这些组织的结构特点、机能和分布，为理解动物器官形成打下基础。 二、实验内容： ①蛙胚胎发育切片观察。②上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织装片的观察。 三、实验材料和用品： 显微镜、蛙胚胎发育早期各阶段装片、四大组织装片 四、实验操作：略 五、实验报告：通过观察各玻片结构，在图中标注各结构名称 实验地点：4206 实验日期：第1页共1页
实验报告 生命科学学院系（部）生物科学专业级班指导教师雷志华 课程动物学实验姓名学号 实验名称原生生物的观察与鉴定 一、实验目的： 通过已掌握的知识分辨出各种原生生物的类别，进一步掌握原生生物各纲的结构特点。 二、实验内容： （一）鉴别洄水中不同的原生生物，重点观察草履虫结构 （二）团藻、草履虫生殖及整体装片的观察。 三、实验材料和用品： 显微镜、培养皿、滴管、载玻片、盖玻片、洄水、棉花（蛋白或胶水）、1%醋酸、碘液、擦镜纸、吸水纸、团藻装片、草履虫整体装片，草履虫生殖装片、各种原生生物实体显微观察图 四、实验操作：略 五、实验报告：绘草履虫结构图并标注各部分结构名称 实验地点：4206 实验日期：第1页共1页
一.细胞增殖周期（cell proliferatinal cycle）概念 细胞周期是描述细胞增殖和分化交替发生变化的概念。而细胞增殖周期主要是从细胞增殖角度赋予细胞活动的概念，两者不应混为一谈。细胞增殖周期是指细胞从一次分裂结束开始生长，到下一次分裂结束所经历的过程。根据细胞增殖周期不同时期的生化特点，划分为四个连续的时期，即G1期（DNA合成前期），S期（DNA合成期），G2期（DNA合成后期），M期（有丝分裂期）。如以G1期为起点，那么细胞增殖周期的各时期应循着G1-S-G2-M的顺序进行，G1、S、G2三期合称为细胞间期，此期完成细胞生长过程。M期完成遗传物质的分配。 因此，细胞增殖周期=间期（G1期+S期+G2期）+分裂期（M期）。 二.培养细胞生命期（life span of culture cells） 很多细胞特别是正常细胞，在体外的生存不是无限的，而是具有一个生命期。索维培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。培养细胞的生命期与细胞的种类、性状和原供体的年龄、健康等情况有关。人胚二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下，科传30~50代，相当于150~300个细胞
增殖周期，能维持1年左右的生存时间，最后衰老凋亡。如供体为成体或衰老个体，则生存时间较短；其他细胞如肝细胞或肾细胞，生存时间更短，仅能传几代或十几代。只有当细胞发生遗传性改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生存期才可能发生改变。正常细胞培养时，不论细胞的种类和供体的年龄如何，在细胞生命的全过程中，大致都经历以下三个阶段：原代培养期、传代期、衰退期。 三.培养细胞一代生存期 培养细胞的生存空间和营养是有限的，当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代（Passage或Subculture）。每次传代以后，细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞的数量和细胞增殖的速度等有关。接种细胞数量大，细胞基数大。相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快（实际上细胞接种数量大时细胞增殖速度比稀少时要快）；连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增值快；；培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。以上情况都会缩短传代时间。 所谓细胞“一代”一词，仅指从细胞接种到分离培养时的一段时间，这已成
姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX 实验题目:动物细胞培养同组者: XXXXX 动物细胞培养技术 【实验目的】 1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法； 4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率； 【实验原理】 （一）. 动物细胞培养技术 动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。 细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于 单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用 细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离； (2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。 培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。 细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直 至第一次传代为止。2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法 细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察 悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代 单层培养细胞的生长过程分为：游离期，吸附期，繁殖期，维持期，衰退期 培养细胞的形态分型：A. 贴附型 B.悬浮型 （二）. 细胞死活鉴定 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异： ①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只