小龙虾弧菌病防治技术 弧菌（Vibrio）菌体只有一个弯曲，呈弧状或逗点状。革兰染色阴性，长0.8~3μm、宽0.5~1.5μm，无芽胞和荚膜，有菌毛和一根单鞭毛，运动非常活泼。悬滴观察，可见其呈穿梭或流星样运动。。 一、生长条件 弧菌适应温度10-35℃，最适温度25℃左右，适应pH为6-10，于pH8.0-9.0的碱性环境中生长更佳。 解释：从生长条件来看，弧菌全年都存在，温度25℃、pH8-9生长最快，这就是为什么5月、6月是小龙虾弧菌病的发病高峰期，而5月以前和7月开始以后发病几率就大大降低。 二、常见致病种类 目前弧菌有91种，引起水生动物发病的主要有：霍乱弧菌、哈维弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌等。 三、弧菌的致病物质 1、鞭毛、菌毛： 弧菌鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面的粘液层，借菌毛粘附于肠粘膜，刺激养殖动物，使养殖动物食欲下降，肠壁变薄，甚至出血（小龙虾的血氧化后呈蓝色，也就是蓝血。并造成养殖动物持续应激，体力和抗病力显著降低。 2、胃肠毒素： 刺激细胞内的腺苷酸环化酶活化，使ATP（三磷酸腺苷）转化为cAMP （环磷酸腺苷），致细胞内cAMP（环磷酸腺苷）浓度升高，导致内皮细胞钠离子和氯离子的吸收被抑制，并大量分泌氯离子和碳酸氢根离子，由于大量电解质分泌至胃腔，使胃腔内渗透压升高，大量水分由细胞进入胃腔，进而使小龙虾胃部出现大量积液（弧菌感染严重时打开头胸甲会有积液）。 四、池塘中弧菌的分布情况
百分之九十以上的池塘，底泥中弧菌数量远超水体中弧菌数量，有时水体无法检测出弧菌，底泥中却依旧含有相当多的弧菌。主要原因是弧菌是异养生物，通常都依附在有机质和腐殖质上，有机质和腐殖质属于大分子物质，大部分会沉到水底。 五、弧菌病的发病特征 该菌常年均可发生，高峰期在5-6月，潜伏期5-72小时，平均24小时，对于小龙虾最基本的发病症状就是肠炎和胃积水，该病恢复较快，但病后免疫力不强，可重复感染。 六、诊断： 龙虾断须断爪（断须处发白），四处游走且爬坡上草，活力很差，受到惊吓也不逃跑，解刨后有肠炎（空肠、肠道有气泡、蓝色肠道等），严重者胃部有积液，一般发病的中虾大虾居多。 七、降低龙虾感染弧菌的方法 1、控制水体中的弧菌： 小龙虾的肠道菌相和水体菌相相同，水体中微生物的组成将直接影响到小龙虾肠道的菌相组成。如果水环境中的弧菌数量或者占比很少，就可以预防龙虾肠道弧菌感染，这也是定期进行水体消毒杀菌的意义，建议碘制剂和噬菌蛭弧菌制剂交替使用。 2、控制龙虾肠道内弧菌占的比例： 控制使用有定殖能力的乳酸菌，使乳酸菌在肠道内形成优势种群，黏附在肠道内壁上形成生物屏障，使弧菌沾不到肠壁上，免受感染，并且排出体外，同时乳酸菌产生的乳酸也可以抑制弧菌的生长（调节pH）。 3、抗菌类药物的使用: 恩诺沙星、氟苯尼考、三黄散等抗菌药物的使用，当然也可以内服噬菌蛭弧菌,不过不建议大家长期使用抗菌类产品。
第一章绪论 1.药物分离与纯化过程分为机械分离与传质分离，机械分离针对非均相混合物，传质分离（物质传递）针对均相混合物，分为平衡分离过程与速度控制分离。 2.分离剂可以是能量或物质（质量）。 第二章药物分离纯化前的预处理技术 1.预处理的目的：将目的产物转移到易于分离的相态中（液相），同时除去大部分杂质，改变流体特性，利于后续分离。 2.药物成分的形成阶段只能获得含有目的药物成分的混合物，难以进行药物分离。 3.预处理主要完成任务： （1）去除大部分可溶性杂质（阳离子、生物大分子） （2）采用凝聚或絮凝技术，将胶体状态的杂质转化为易于分离的较大颗粒。（3）改善料液的流动性，便于固液分离 （4）固液分离 （5）将胞内产物从细胞内释放出来 4.沉淀技术： （1）高价离子：Ca2+、Mg2+、Fe3+ a影响离子交换 b对药物降解加速催化作用 （2）生物大分子（可溶性黏胶状物）：蛋白、核酸、多糖 a粘度增大，影响固-液分离。 b乳化作用，吸附离子基团。 5.沉淀法去除杂质常用的方法：等电点沉淀法，变性沉淀法，盐析法，有机溶剂沉淀法，反应沉淀法。 6.等电点沉淀法原理：蛋白质是两性电解质，当溶液PH值处于等电点时，分子表面净电荷为0，双电层和水化膜结构被破坏，由于分子间引力，形成蛋白质聚集体，进而产生沉淀。
7.变性沉淀法原理：利用蛋白质、酶、核酸等生物大分子对某种物理或化学因素的敏感性差异，实现分离。 8.盐析法概念：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 9.盐析法影响因素： （1）盐析剂的性质和加入量 （2）溶液的pH值 （3）蛋白类化合物的性质 （4）蛋白浓度 （5）温度 10.常用的凝聚剂：AlCl3·6H2O、Al2(SO43·18H2O(明矾）、 K2SO4·Al2(SO43·24H2O、FeSO4·7H2O、FeCl3·6H2O、ZnSO4和MgCO3等。 11.凝聚作用与絮凝作用的区别：凝聚作用是指某些电解质（凝聚剂）作用下，破坏胶体系统分散状态，而使胶体粒子聚集过程，而絮凝作用是通过架桥作用将许多微粒聚集在一起，形成粗大的松散絮团的过程。 12.助滤剂：具有一定刚性的颗粒或纤维状的固体。 13.常用助滤剂：硅藻土，珍珠岩，活性碳等。 14.细胞破碎方法 （1）机械法：高压均浆法（可大规模操作），珠磨法（可较大规模操作）、超声破碎法、X－press法 （2）非机械法：酶解法、化学渗透法、渗透压法、冻结融化法、干燥法。 15.高压匀浆法原理：细胞悬浮液在高压的作用下从阀座与阀之间的环隙高速喷出，每秒速度高达几百米，高速喷出的浆液又射到静止的撞击环上，被迫改变方向从出口管流出。细胞在这一系列高速运动过程中经历了剪切、碰撞及由高压到常压的变化，从而造成细胞破碎。 第三章萃取技术
摘要：噬菌蛭弧菌(Bdello vibrio bacteriouorus,简称Bd),是由Stolp和Petiold于1962年从菜豆叶烧病假单胞菌ATCC11355中发现。该菌所具有的独特“寄生”和“噬菌”生物特性被微生物界学者所关注。以后世界各国相继从土壤、自然水体、海水中分离到Bd,并进行了深入的研究。Bd现已列入Bergey氏细菌鉴定手册,许多国家将此菌编入医学及微生物学、微生态学教材中。对蛭弧菌形态特征、生化特征、噬菌机制、“宿主”菌菌谱研究予以介绍，提出研究蛭弧菌所要注意的问题以及对未来的展望，使得人们进一步对蛭弧菌了解，在应用方面更加的广泛。关键词：蛭弧菌；噬菌机制
Abstract：For the first time ,the Bdello vibrio bacteriouorus are found by the Stolp and Petiolds from the string bean in 1962 the leaf which burned the sick leave single afterbirth germ ATCC11355 in the detection, which had special to" live on" and" bit the germ" living creature characteristic drive the microorganism boundary scholar concern, later the international community one after another separates the Bd germ from the soil, natural body of water, sea water, and carried on the thorough research。Now the Bd germ hases already been included in the Bergey surname germs to authenticate the manual, many nations go this germ plait into the medical science and microbiology, tiny ecology teaching materials.To the BD germ appearance characteristic, bio-chemical characteristic, bite the germ mechanism," host" germ table research gives the introduction. Put forward studying the advertent problem that the germ of BD want to future outlook, make people further understand to the germ of BD , more extensive in the applied aspect. Key words: Bdello vibrio bacteriouorus ；Bite the germ mechanism
碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探 一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义: 1.国内外研究现状 碱性蛋白酶(Alkaline protease)广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中，1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。1945年瑞士的Dr.Jagg 等发现了微生物碱性蛋白酶,使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途。由于市场的需求，高产、高效、耐高温、耐高碱的四高型碱性蛋白酶成为国内外当前研究的热点之一[1]。 研究结果发现，海洋酶具有作用pH 范围宽，最适pH 和反应温度适中，随反应温度的降低酶活性下降缓慢等特点。海洋酶所具有的独特性质，引起学术界高度重视，日、美等国就此展开了深入的研究。迄今为止，由海洋微生物生产海洋酶的专利已达20 余项。海洋微生物酶的研究正逐渐成为发达国家开发新型酶制剂的重要途径[2,3]。 相比之下，国内在海洋碱性蛋白酶研究方面差距较大。综合多篇文献分析，目前针对海洋细菌产生的碱性蛋白酶，分离提纯的方法大致多采用饱和硫酸铵分级盐析和层级技术。首先是从发酵液取上清制备粗酶液（此酶为一种外分泌蛋白，无需通过溶菌酶溶解或超声波破碎细胞来制备粗酶液），通过超速离心沉淀，饱和硫酸铵分级盐析，透析，凝胶层析或离子交换层析来分离提纯该菌所产生的碱性蛋白酶。其中一些已经对酶的性质、序列等进行了研究[4-7]。 2.选题依据及意义 此毕业设计的课题为《碱性蛋白酶的分离纯化及性质初探》，主要是对海洋细菌进行培养及分离提纯方案的改进，并对其性质进行初步探究。大致是将各种相关参数和实验数据建立正交关系得到最佳培养条件，并对其产生的碱性蛋白酶进行分离提纯，同时得出最佳分离提纯方案。最后对碱性蛋白酶的性质进行初步研究。本设计针对目前研究较少的产碱性蛋白酶的海洋微生物新菌株，研发新型高效的碱性蛋白酶，这对满足人类生活、生产与技术开发的需求至关重要。这种积极采用微生物代替化学法的探究，有利于开发现代生物新产品的工业化生产技术研究，有利于加快现代生物领域产业的发展。 二、研究的基本内容，拟解决的主要问题 1.海水中碱性蛋白酶高产菌株的筛选；
分离性障碍的具体表现有哪些 对于疾病有很多，是非常可怕的，疾病的发生人们都是不知道的，所以有时候都是马马虎虎的，比如分理性障碍变现这个问题就引起了一部分人们的注意，当人们出现这些疾病的时候，还不知道它的具体情况，那么接下来就给大家讲一下分理性障碍的具体变现有哪些？ （1）分离性遗忘表现为突然出现不能回忆自己重要的事情，特点是丧失近期的阶段记忆，可为部分性和选择性，一般围绕创伤性事件。这种遗忘不是由器质性原因所致，也不能用一般的健忘或疲劳加以解释。 （2）分离性漫游指患者在觉醒状态下突然从家中或工作场所出走，往往离开的是一个不能耐受的环境，进行无计划、无目的的漫游。此时患者意识范围缩小，但能进行日常的基本生活和简单的社交接触。有的患者忘掉了自己既往的经历，以新的身份出现。漫游可持续几十分钟到几天，有的可以更持久。这种发作
突发突止，清醒后患者对病中的经历不能完全回忆。 （3）分离性木僵患者的行为符合木僵的标准，检查也不能发现躯体疾病的证据。通常在一定的生活事件之后，患者在相当长的时间内保持一个固定的姿势不动，对外界的刺激几乎或完全没有反应，完全或几乎没有言语及自发的有目的的运动。但患者的肌张力、呼吸运动均存在，有时可有睁眼及眼球的协调运动。 （4）出神与附体障碍本症表现为暂时性地同时丧失个人身份感和对周围环境的完全意识。患者的意识范围明显缩小，注意和意识仅局限于或集中在密切接触的环境的一二个方面，只对环境中的个别刺激有反应。常有局限且重复的一系列运动、姿势、发音。如果患者的身份被鬼、神、或死亡之人所代替，则被称为分离性附体障碍。发作过后患者对过程全部或部分遗忘。 （5）分离性运动障碍表现为一个或几个肢体的全部或部分运动能力丧失。常见的形式有肢体瘫痪、肢体震颤抽动或肌阵挛、起立或行走不能、失音症等。瘫痪可为部分性的，即运动减弱或运动缓慢；也可为完全性的。共济失调可为各种形式和不同程度，尤以双腿多见，引起离奇的姿势或不借扶助站立不能。也可有一个或多个肢端或全身的夸张震颤。
年产1500m3蛋白酶的工厂设计 摘要 蛋白酶是催化肽键水解的一类酶，它可迅速水解蛋白质为胨、肽类，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。同时大多数微生物蛋白酶都是胞外酶。微生物蛋白酶按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶三类。酸性蛋白酶是一种羧基蛋白酶，它的分子质量为30-40kD，等电点（pH3.0-5.0） 酸性蛋白酶现已广泛应用于食品、饲料、酿造、毛皮与皮革、医药、胶原纤维等各个行业之中。本设计采用豆饼粉、玉米粉、淀粉为主要的培养基原料，并选用黑曲霉（Aspergillus niger ）3.350菌种发酵。其中豆饼粉3.75%，玉米粉0.625%，鱼粉0.625%，氯化铵1%，氯化钙0.5%，磷酸氢二钠0.2%。 本设计利用通风搅拌式发酵罐进行发酵，同时利用离子交换树脂对母液进行提取，提高了酸性蛋白酶的生产效率，减少了生产成本。设计还包括发酵罐，全厂平面图，车间平面布置图，工艺流程图。 关键词：酸性蛋白酶发酵工厂设计
The Process Design of the Protease used for Section with the Capacity of 1500m3 Annually Abstract protease is a kind of Peptone and peptide. It has been discover across in animal giblets ,the stem of plant,fruit , microbial and so on.Most of the Microbial protease are ectoenzyme .According to its best Optimum pH function ,Microbial protease Can be divided into Acid protease ,Neutral protease and alkaline protease .Acid protease is a kind of Carboxyl protease , Its molecular weight is 30-40 kd, lower isoelectric point (pH3.0-5.0) Acid protease in food, medicine, textile, leather, feed, cosmetics, washing industries have applications, natural health, avirulent and harmless, quite safe. So in this paper the basic content of more acid protease, production process and application development were introduced. This design USES the bean cake powder, corn flour, starch as the main medium of raw materials, and selects the Aspergillus Niger, Aspergillus Niger) 3.350 bacterial fermentation. With bean cake powder 3.75%, corn flour 3.75%, 0.625% fish meal, 1% ammonium chloride, calcium chloride 0.5%, disodium hydrogen phosphate 0.2%. This design using the ventilation agitator in fermentor, using ion exchange resin in mother liquid was extracted at the same time, improve the efficiency of the acid protease production, reduce the production cost. The design also includes Fermentor, The factory plan, Shop floor plan, Flow Chart. Key Words: Acid protease ; fermentation; plant-design;
水产动物养殖过程中十六种细菌性疾病简介 细菌是一种具有细胞壁的单细胞原核生物，不同于真核生物之处在于它有原始核。但无核膜、核仁，也缺乏内质网、线粒体、叶绿体等细胞器。水产动物细菌病的种类较多，危害严重的主要是革兰氏阴性菌引起的疾病，如柱状屈挠杆菌引起的烂鳃病、假单胞菌引起的败血病、嗜水气单胞菌引起的疖疮、腐皮病等。今日小鱼就为大家简单介绍下细菌性疾病。 1.细菌性烂鳃病 病原为柱状嗜纤维菌，革兰氏染色阴性，菌体无鞭毛。 被感染的病鱼行动缓慢，反应迟钝，呼吸困难，食欲减退，常离群独游。体色变黑，尤其头部颜色更为暗黑，因而称此病为“乌头瘟”。肉眼观察，病鱼鳃盖骨的内表皮往往发炎充血，严重时中间部分的表皮常腐蚀成一个圆形不规则的透明小区，俗称“开天窗”。鳃丝腐烂，特别是鳃丝未端粘液很多，带有污泥和杂物碎屑，有时在鳃瓣上可见血斑点。鳃丝骨条尖端外露，附着许多粘液和污泥，并附有很多细长的细菌。 主要危害草鱼，从鱼种至成鱼均可受害，许多淡水鱼类也能被感染。本病在水温15℃以上时开始发生；在15～30℃范围内，水温趋高易暴发流行，致死时间也随之变短。水中病原菌的浓度越大，鱼的密度越高，鱼的抵抗力越小，水质越差，则越易暴发流行。本病常和传染性肠炎、出血病、赤皮病并发。一般流行于4～10月，尤以夏季流行为多。 2．白皮病 又叫白尾病，病原是柱状嗜纤维菌和白皮极毛杆菌。 病鱼发病初期，尾柄处发白，随着病情发展迅速扩展蔓延，以至自背鳍基部后面的体表全部发白。严重的病鱼，尾鳍烂掉，或残缺不全。病鱼的头部向下，尾部向上，与水面垂直，时而作挣扎状游动，时而悬挂于水中，不久病鱼即死亡。 白皮病为鲢、鳙的主要病害之一。此病主要发生在饲养20～30天的鲢、鳙鱼苗及夏花阶段。常可形成急性流行病，1龄及2龄以上的成鱼偶然可以发病。病程较短，病势凶猛，死亡率很高，发病后2～3天就会造成大批死亡。 3．白头白嘴病 病原尚未完全查明，一般认为是一种黏细菌。
品种名称：庆大霉素琼脂 编号：025050 用途：用于霍乱弧菌的选择性分离培养。 形态与特性： 古典型霍乱弧菌和ELtor弧菌比较典型，为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察，可见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。营养要求不高，在霍乱弧菌PH8.8～9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。 图册： 原理： 蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;蔗糖提供碳源;亚硫酸钠可刺激弧菌生长;柠檬酸钠、庆大霉素和亚碲酸钾及较高的pH可抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性杂菌;霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长;琼脂是培养基的凝固剂。 培养基配方(每升)： 蛋白胨 10g 牛肉膏粉 3g 氯化钠 5g
蔗糖10g 柠檬酸钠10g 无水亚硫酸钠3g 庆大霉素500U 琼脂15g 最终pH8.5±0.2 使用方法： 1、称取本培养基56g，加入蒸馏水或去离子水1 L，加热煮沸充分溶解，冷至50℃左右，每500mL培养基加入配套试剂1支 (SR0190)( 2.5mg亚碲酸钾)，摇匀，立即倾注平皿，待凝固后，备用。 2、取待微生物检测菌的新鲜纯培养物划线接种于琼脂平板上，于36±1℃培养20—24h。 质量控制： 下列菌株接种后于36±1℃培养20—24h，结果如下： 菌名菌号生长状况菌落特征 霍乱弧菌V60 好淡灰色 大肠埃希氏菌 ATCC25922 被抑制—— 贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。 规格：250g
分离性焦虑：是指6岁以下的儿童，在与家人，尤其是母亲分离时，出现的极度焦虑反应。男女儿童均可得病，与患儿的个性弱点和对母亲的过分依恋有关。【形成原因】 1.遗传因素：患焦虑症父母的子女，焦虑症的发生率明显高于正常父母的子女。单卵双生子焦虑症的同病儿童分离性焦虑率可高达50％。说明本症与遗传有关。亲子过分依恋。孩子平时一直与母亲待在一起，不与外界接触，而母亲对孩子过于珍爱、过分保护，使孩子养成胆小、害羞、依赖性强、不能适应外界环境的个性弱点。一旦与母亲突然分离，就容易出现分离性焦虑。 2.生活事件影响：常见的生活事件有与父母突然分离、在幼儿园受到挫折、不幸事故、亲人重病或死亡等。 【专家支招】 1.扩大孩子的接触面：要让孩子尽量多接触家庭以外的小朋友和大人，拥有多个伙伴。培养孩子与陌生人打招呼的习惯，以克服孩子在陌生环境里的恐惧感。培养孩子的自理生活能力。要注意培养孩子的生活自理能力，如吃饭、穿衣、洗手、大小便等。不要让孩子养成对母亲过分依赖，进入幼儿园或学校时，孩子才能很快地适应集体生活。 2.培养孩子的合群能力。家长要鼓励孩子把玩具拿出来与其他孩子一起玩，以培养孩子与人相处的能力，减少或避免分离焦虑的发生。做好入学前的准备工作在入托前，父母可经常给孩子描述托儿所或幼儿园的生活。告诉孩子那里有许多小朋友，大家在一起非常开心。也可以带孩子到托儿所或幼儿园看看、玩玩，当他对托儿所或幼儿园比较熟悉时，再正式送孩子入托，可防止分离性焦虑发生。 3.不要硬性强迫孩子入托。不应生硬地把孩子推进托儿所或幼儿园，自己一走了之，而应给孩子一个适应的时期，在孩子入托或入园的头几天中，家长可以陪孩子在托儿所或幼儿园里玩，随着孩子与陌生的小朋友和老师熟悉之后，家长可逐渐减少陪伴时间，直到最后完全放手。切莫操之过急，以免加重焦虑发作。严重的患儿要立即请儿童心理医师进行系统脱敏治疗。 4.对父母进行教育。对有焦虑倾向的父母，要帮助他们认识自身的个性弱点，及其会对子女产生不良的影响。并应明确告诉父母，要想治疗好患儿，必需先治疗好家庭其他成员。
8.蛋白酶（酸性、中性、碱性）的特征与相应的发酵微生物菌。 答：中性蛋白酶生产菌枯草杆菌1.398,S114,172,放线菌166，栖土曲霉3.942； 碱性蛋白酶生产菌地衣芽孢杆菌2709，短小芽孢杆菌289，209； 酸性蛋白酶生产菌黑曲霉3.350，宇佐美曲霉537，肉桂色曲霉No.81，浆油工业用的米曲霉3042。 按酶的最适pH分类： ①酸性蛋白酶，最适pH2.0-5.0。 ②中性蛋白酶，pH7-8。 ③碱性蛋白酶，pH9.5-10.5。 为方便起见，微生物蛋白酶常用此分类法。 酸性蛋白酶主要来源于哺乳动物的消化道, 如胃蛋白酶; 部分微生物是酸性蛋白酶的主要来源, 如:目前的商品酸性蛋白酶制剂主要是由黑曲霉发酵生产 分子特性: 酸性蛋白酶的最适pH在2-5范围, 酶蛋白的等电点在pI3-5, 分子量MW30,000-35,000。 ②催化特性: 酸性蛋白酶的最适温度因来源不同而有差异, 一般霉菌的蛋白酶的最适温度较高, 大部分在50-60℃范围, 而来源于动物胃粘膜的蛋白酶的最适温度较低, 一般在40℃左右, 但酸性蛋白酶的热稳定性都较差, 一般在50℃都很快失活, 此外, 酶的热稳定性还受到基质的pH的影响; 有些酸性蛋白酶不耐低温, 在低温条件下,很快失活。许多酸性蛋白酶分子中含5-10%多糖，对酶的稳定有益。 中性蛋白酶是最早用于酶制剂工业化生产的蛋白酶, 目前的微生物生产的商品酶制剂的菌种主要有: 枯草杆菌、耐热解蛋白芽孢杆菌、灰色链霉菌、寄生曲霉、米曲霉、栖土曲霉。 除上述微生物生产中性蛋白酶外, 来源于植物的木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶等都属于中性蛋白酶。 ①分子特性: 大部分微生物产生的中性蛋白酶属于金属蛋白酶, 一分子酶蛋白含有一个锌原子, 酶蛋白的分子量在35,000-40,000范围, 等电点pI 8-9, 微生物蛋白酶中, 中性蛋白酶的稳定性最差, 分子之间最容易发生自溶, 即使在低温条件下, 也会发生明显的自溶, 造成分子量明显降低。 ②催化特性: 中性蛋白酶的热稳定性较差, 如枯草杆菌的中性蛋白酶在pH7, 60℃处理15min, 失活90%; 栖土曲霉的中性蛋白酶在pH7, 55℃处理10min, 失活80%以上; 以酪蛋白为底物时, 枯草杆菌蛋白酶的最适pH7-8、热解蛋白芽孢杆菌的中性蛋白酶的最适pH7-9、栖土曲霉的中性蛋白酶pH6.5-7.5; 最适温度受测定时的反应时间有直接关系, 因为酶蛋白的稳定性较差, 所以反应时间的长短影响着反应结果, 一般在10-30min 最适温度为45-50℃。钙离子可以增加酶蛋白的稳定性,并减少自溶。 碱性蛋白酶主要是由微生物产生, 微生物中主要是细菌的部分菌种产生碱性蛋白酶, 目前碱性蛋白酶主要是用于洗涤剂、皮革工业、丝绸脱胶。 几乎所有的细菌碱性蛋白酶都是胞外蛋白酶, 主要包括两类: 其一是在中性条件下生产的碱性蛋白酶, 如枯草杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等; 其二是嗜碱微生物, 其必须在碱性条件下[pH8-10]才能生产的碱性蛋白酶。 ①酶蛋白特性: 碱性蛋白酶的分子量比中性蛋白酶的分子量小, 一般在20,000-34,000Da, 而且等电点较高, 一般在pH8-9。 ②催化特性: 大部分碱性蛋白酶的最适pH在7-11范围, 当以酪蛋白为底物时, 最适pH为9.5-10.5, 碱性蛋白酶除能够水解肽键外, 还具有水解酯键的能力和转肽能力, 最适温度因菌种不同而有差异, 一般在50 ℃左右, 酶蛋白的热稳定性不高, 50-60℃处理15分钟, 几乎有50%的酶活力丧失, 我国目前生产的几种碱性蛋白酶的热稳定性一般都在60℃以下。 中性蛋白酶——枯草芽胞杆菌、栖土曲霉、灰色链霉菌、放线菌等 碱性蛋白酶——地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等 酸性蛋白酶——大都采用曲霉 中性蛋白酶作为一种内切蛋白酶，具有纯天然、安全无毒、水解能力强、作用范围广等。2、中性蛋白酶应用于焙烤，可降低面团湿筋度、改良面团可塑性及理化性质，同时使蛋白质大分子水解成短肽和氨基酸，从而有利于糖类和氨基
开题报告 生物技术 鳗弧菌卵黄抗体的制备 一、选题的背景与意义 鳗弧菌是一种对水产鱼类具有严重危害性的细菌病原。目前，鳗弧菌引起的水产养殖动物疾病在世界范围内广泛流行，可感染鱼、虾、鳖类，并常给水产养殖业造成巨大的经济损失。鳗弧菌在危及水产鱼类的同时，也会通过食物链危害人类健康。因此，研究由鳗弧菌等弧菌引起的细菌性疾病的相关治疗方法具有重要的意义。 目前在动物细菌性疾病防治上使用抗生素过多，造成药物残留。破坏环境的同时极大的打击了消费者的信心。而近些年来卵黄抗体的发展为弧菌病的治疗提供了良好建议。卵黄抗体，是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，母鸡经免疫应答后，可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量均一高效的卵黄抗体IgY。它能预防和治疗多种细菌性和病毒性疾病,无任何毒副作用,在很大程度上可替代抗生素和化学合成药物,同时还具有促生长的作用。卵黄抗体已成为特异性抗体最方便、最廉价的来源，在动物疾病防治上取得了喜人成绩。 本实验的目的是借鉴陆生人、畜、禽相关研究的成功经验，以纯培养的鳗弧菌作为抗原，探讨鳗弧菌卵黄抗体的制备技术,并研究其对人工感染的保护作用，以期对水产鱼类的细菌性疾病提供良好的治疗建议，并为水产鱼类的养殖生产提供指导意义。 二、研究的基本内容与拟解决的主要问题： 基本内容： 1、培养鳗弧菌，制作灭活疫苗。 2、用鳗弧菌疫苗对蛋鸡多点注射，经初免和加强免疫后，收集鸡蛋。 3、由收集的鸡蛋纯化卵黄抗体 4、检测纯化的卵黄抗体效价； 拟解决的问题：
借鉴陆生畜禽病原相关研究的成功经验，经多次免疫制备出抗鳗弧菌的高免鸡蛋，建立简易、高效的由鸡蛋纯化鳗弧菌卵黄抗体的技术，建立ELISA鳗弧菌卵黄抗体的技术。 三、研究的方法与技术路线： 1、取实验室已分离、鉴定后保存的鳗弧菌菌种,经活化后扩大培养，离心沉淀、 用PBS清洗后悬浮、计数； 2、用甲醛对鳗弧菌进行灭活，经涂板检测确定灭活即为抗原鳗弧菌卵黄抗体的 制备； 3、选择健康蛋鸡，用上述抗原多点注射免疫，免疫3-4次； 4、收集高免鸡蛋，用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化卵黄抗体； 5、用ELISA进行卵黄抗体的效价检测。 技术路线： 四、研究的总体安排与进度： 2010.10-2010.12 查阅资料，撰写开题报告和综述。 2011.01-2011.02 抗原的制备、蛋鸡免疫。 2011.03-2011.04 抗鳗弧菌卵黄抗体的纯化和效价检测。 2011.04-2011.05 实验数据的整理、分析，撰写论文，结题、答辩。 五、主要参考文献： [1]杨菲菲．卵黄抗体研究进展及应用［J］．现代农业科技，2008，（20）：231－232．
霍乱弧菌的分离与鉴定 濮阳市疾病预防控制中心 一、标本的采集和送检: 1.标本的采集： 1)粪便标本：应争取在发病早期、服用抗菌药物之前采集； 2)采便方法：可用棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉 拭采便管由肛门插入直肠内3～5厘米处采取。 3)采样要求： ?水样便采取1～2毫升，成形便采取指甲大小的粪量。病人呕吐物、沾染粪便的衣物、尸体的肠腔和口腔内容物亦可作为检材。 ?外环境样本可采取病人的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、坑塘水、井水、公厕粪便、苍蝇等。 ?按1:10比例臵入碱性蛋白胨水增菌液中，迅速送往实验室。4）肛拭采集的注意事项： 1.棉拭子要用竹签，圆形、光滑以免采样时易断； 2.棉拭子做的要稍大而紧固(避免采集时脱落)； 3.采集者应穿戴一次性手套； 4.采集前将棉拭子用碱性蛋白胨水(APW)蘸湿，多余的液体紧靠管壁挤出； 5.采集时要求被采集者双腿分立、微屈、手扶墙或凳子趴下，劝其用
单手或双手协助分开股沟(或采集者用左手分开股沟)，右手持棉拭子轻轻旋转插入肛门内约4～5cm(幼儿约2～3cm)处，转动数秒钟从紧靠肛环边的隐窝旋转擦取直肠表面黏液后退出； 6.棉拭子在推进时如感觉遇到阻力，应调整角度后缓缓旋转推进，避免用力过大或推进太快造成肛壁出血而影响病原菌的检出；棉拭子进入的深度一定要够，否则采集的有效标本量会很少； 7.采集的标本拭子应立即臵入APW内，手接触的部分在管口折断弃去。填写采样登记表(单)，并在采样管上填写被采集者的样品编号、姓名、性别、年龄，尽快送检。 二、快速诊断： 1.直接镜检： 为争取最快速度作出诊断，采取病人“米泔水样”大便或呕吐物，悬滴法镜检(最好用暗视野)，可见具有流星状动力的细菌。 2.特异性制动试验： ?取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴，臵于载玻片上，再加霍乱弧菌O1多价或O139诊断血清，加盖玻片，用暗视野显微 镜观察，3分钟内流行状运动细菌被抑制的即为阳性，此法优 点是快速而特异，操作简便，可 ?在几分钟之内做出初步诊断。但要求标本必须有较多数量的弧菌，免疫血清最好是不加防腐剂的。 3.早期玻片凝集试验： ?埃尔托弧菌在TCBS、4号琼脂及庆大霉素平皿上生长较快，37℃
哪些是分离性障碍症临床表现 导读：分离(转换）性障碍，也翻译成癔病，又称歇斯底里，是指以意识、身份或行为的突发暂时性变化为特征的精神障碍。此病多在精神刺激下忽然发病，表现出鲜明的感情色彩的精神障碍及躯体功能障碍。分离性障碍在学术界上争议很多，有些学者认为应该把它归为神经症。有些学者对此有不同看法。 发病机理上，社会文化因素起很大的作用。悔恨内疚，悲伤性一般事件可诱发此病发作。与遗传也有一定程度的关系。一般来说，这些患者在发病前的性格特征为：对事物感情反应强烈，肤浅且不稳。对事物的受暗示性很高。 临床表现： ①一般特征，多见于青年女性，起病较急，多数有心理社会因素作为诱因。患者暗示性极强，常有“继发受益”。患者的功能障碍往往不符合解剖学特点，发作时无危险性； ②分离症状，分离性遗忘常为部分的和选择性的，且一般围绕着创伤性事件；分离性漫游具有分离性遗忘的特征，同时有离家或离开工作岗位的游历；分离性身分障碍表现为突然的身份改变，两种或多种身分可以相互交替； （1）情感爆发：很多见。表现为情感的发泄，时哭时笑，吵闹，对自己的情况以夸张性来表现。发作时意识范围可狭窄。冲动毁物，伤人，自伤和自杀行为。有些患者表现为痉挛发作。 （2）分离性遗忘：主要表现为对创伤性事件的遗忘。 （3）分离性漫游：老百姓所说的“梦游”于此很相似。 （4）假性痴呆：给人傻呆幼稚的感觉。 （5）双重和多重人格：表现为忽然间身份的改变。患者忽然变成另一个人，语调和态度完全变成二个人。比较典型的就是民间上的“鬼怪披身”。 （6）分离性木僵； （7）精神病状态：这一点的鉴别诊断很重要。发病时可表现为重型精神病状态，如错觉、幻觉及妄想。与分裂症的区别主要在于幻觉和妄想的内容不太固定，多变化，并且很易受暗示。 ③转换症状，转换性运动和感觉障碍为其常见形式，主要表现为各种运动功能受妨碍和运动功能或感觉功能丧失。诊断主要据临床表现，排除相关的精神科疾病。本障碍可分为分离性遗忘症、分离性漫游症、分离性身份障碍、转换性运动和感觉障碍、混和性分离（转换）障碍和其他分离（转换）性障碍六个亚型。本病以心理治疗为主，如暗示治疗、系统聪敏疗法等，辅以药物对症治疗。
课堂报告名称：高产蛋白酶菌株的选育方法 武汉轻工大学食品学院王宏勋 一、课堂报告依据的知识背景 1、遗传变异的物质基础 遗传变异有无物质基础以及何种物质可承担遗传变异功能的问题，是生物学中的一个重大理论问题。利用微生物这一实验对象进行了三个著名的实验，才以确凿的事实证实了核酸尤其是 DNA 才是遗传变异的真正物质基础。三个经典实验是: 一是1928年进行的转化实验。二是美国人1952年开展的噬菌体感染实验。三是1956年创立的植物病毒的重建实验。 朊病毒的发现和思考。无论是 DNA 还是 RNA 作为遗传物质的基础已是无可辨驳的事实。但朊病毒的发现对“蛋白质不是遗传物质的定论也带来一些疑云。 PrP 是具有传染性的蛋白质致病因子，迄今未发现蛋白内有核酸，但已知的传染性疾病的传播必须有核酸组成的遗传物质，才能感染宿主并在宿主体内自然繁殖。那么这是生命界的又一特例呢？还是因为目前人们的认识和技术所限而尚未揭示的生命之谜呢？还有待于生命科学家去认识和探索。 2、遗传物质在细胞内的存在形式 除部分病毒的遗传物质是 RNA 外，其余病毒及全部具有典型细胞结构的生物体的遗传物质都是 DNA 。按其在细胞中存在形式可分成染色体 DNA 和染色体外 DNA 。原核细胞和真核细胞中的 DNA 存在形式不完全相同。
1）DNA 在原核细胞中的存在方式 原核细胞最大的细胞学特点就是无核膜与核仁的分化，只有一个核区称拟核。其染色体 DNA 处于拟核区，无组蛋白，近年来发现与非组蛋白结合。结构上为双链环状 DNA 。几种微生物染色体的物理特性见表。原核细胞的染色体外DNA 主要指质粒（如 F 因子、 R 因子、 Col 因子）。 2）DNA 在真核细胞中的存在方式 真核细胞 DNA分为核 DNA和核外 DNA。核 DNA即染色体 DNA ，它与组蛋白结合构成具有复杂结构的染色体。核外DNA是指线粒体和叶绿体等DNA ，其结构与原核细胞的 DNA相似，亦能编码结构蛋白。 3、基因和性状 1）基因的概念 基因是由丹麦生物学家 W ． Johansen 于 1909 年提出来的，他用“基因”这个述语来代替孟德尔的“遗传因子”。直到本纪世 50 年代以后，“基因”才有一个较明确的概念。概括地说：“基因”是一个具有遗传因子效应的 DNA 片段，它是遗传物质的最小功能单位。2）性状的决定——基因表达 性状是构成一个生物个体的有关结构、形态、物质和功能等各方面特征的总称。基因表达是遗传信息表现为生物性状的过程，这一过程是通过基因产物的生物学功能来完成的。基因决定性状，而性状则是基因表达的最终结果。基因依其功能的差别可分成调节基因、操纵基因和结构基因 3 大类。
小龙虾弧菌病防控技术 弧菌病是由弧菌属细菌引起的在世界各地海水养殖鱼、虾、贝类等动物中普遍流行，危害最大的细菌性疾病。 弧菌不单单可以引起海水养殖水生动物的疾病，也可以感染淡水养殖的水生动物，致使其发病。 据报道，弧菌属中的鳗弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌等在弧菌种群中占优势，广泛存在于自然界的海、淡水中。导致弧菌病在全世界水产养殖范围发生。且具有流行性广、发病率高、死亡率高、危害大等特点。 感染弧菌的小龙虾活力减弱、爬边、反应迟钝，触须容易断折，头胸甲外壳处有积水，黑膜发灰同时伴随有部分肠炎。 感染初期，小龙虾会出现断须，红爪，烂尾，甲壳溃疡；随着感染的加重，会出现空肠空胃、肝胰脏发白的现状；感染后期，小龙虾会出现肝胰脏坏死，头胸甲积水，引起大量死亡。弧菌真正意义上来说，属于一种条件致病菌。弧菌病本身的爆发多数由于养殖池塘底质变坏、水体菌相失衡，导致有害病菌的大量滋生；外界各种环境因素突然变化，导致小龙虾应激反应；以及营养不良，小龙虾体质下降等多方面作用的结果。 小龙虾弧菌病的爆发，会给养殖户带来很严重的损失，我们养殖过程中主要是从源头上进行预防. 1.改底解毒 小龙虾属于底栖动物，养殖池底又是最容易积蓄残饵粪便等有机物质的位置，只有加强养殖池塘底部管理，给小龙虾创造一个良好的生存环境，为其成功养殖奠定基础。 2.消毒杀菌
随着养殖的进行，有机物质的增多，为微生物的生长创造了条件，为了防止弧菌等有害微生物的大量繁殖，定期对养殖水体进行消毒杀菌处理是预防疾病爆发行之有效的措施。 1）每日对水体进行消毒处理，可以杀灭部分弧菌，防止疾病爆发。 2）蛭弧菌对弧菌具有很强的裂解能力，利用弧菌的营养物质进行生长繁殖。每7天使用2次蛭弧菌产品外泼水体，可以有限减少水体中弧菌的数量，同时可以拌饲投喂，减少弧菌病的发病频率。 3.调水 养殖水体是一个小型的生态系统，有害微生物和有益微生物共同生活在其中，具有相互抑制的关系，有益菌的数目多了，有害菌自然就无法繁殖。 4.增强体质 维生素是维持生命的必要元素，人类每天需要补充大量的维生素，水产动物亦是如此，但小龙虾、螃蟹和南美白对虾等动物肠道较短、吸收能力较差，因此维生素的颗粒越小越容易吸收。 养殖过程中，要拌饲投喂复合丁酸梭菌和多维应激宁，可以改善虾体的肠道菌群，提高虾体的免疫力，促进饲料的消化吸收，降低饵料系数。
酶的分离纯化方法介绍 酶的分离纯化一般包括三个基本步骤：即抽提、纯化、结晶或制剂。首先将所需的酶从原料中引入溶液，此时不可避免地夹带着一些杂质，然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来，或者从此溶液中选择性地除去杂质，然后制成纯化的酶。 关键词：酶抽提纯化结晶制剂细胞破碎cell disruption 盐析亲和沉淀有机溶剂沉淀 生物细胞产生的酶有两类： 一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶，称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶，如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶，就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高，容易得到； 另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，如柠檬酸、肌苷酸、味精的发酵生产所进行的一系列化学反应，就是在多种酶催化下在细胞内进行的，在类酶在细胞内往往与细胞结构结合，有一定的分布区域，催化的反应具有一定的顺序性，使许多反应能有条不紊地进行。酶的来源多为生物细胞。生物细胞内产生的总的酶量虽然是很高的，但每一种酶的含量却很低，如胰脏中期消化作用的水解酶种类很多，但各种酶的含量却差别很大。 因此，在提取某一种酶时，首先应当根据需要，选择含此酶最丰富的材料，如胰脏是提取胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂酶的好材料。由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料的限制，如不能综合利用，成本又很大。目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶制剂。从微生物中来生产酶制剂的优点有很多，既不受气候地理条件限制，而且动植物体内酶大都可以在微生物中找到，微生物繁殖快，产酶量又丰富，还可以通过选育菌种来提高产量，用廉价原料可以大量生产。 由于在生物组织中，除了我们所需要的某一种酶之外，往往还有许多其它酶和一般蛋白质以及其他杂质，因此为制取某酶制剂时，必须经过分纯化的手续。 酶是具有催化活性的蛋白质，蛋白质很容易变性，所以在酶的提纯过程中应避免用强酸强碱，保持在较低的温度下操作。在提纯的过程中通过测定酶的催化活性可以比较容易跟踪酶在分离提纯过程中的去向。酶的催化活性又可以作为选择分离纯化方法和操作条件的指标，在整个酶的分离纯化过程中的每一步骤，始终要测定酶的总活力和比活力，这样才能知道经过某一步骤回收到多少酶，纯度提高了多少，从而决定着一步骤的取舍。 酶的分离纯化一般包括三个基本步骤：即抽提、纯化、结晶或制剂。首先将所需的酶从原料中引入溶液，此时不可避免地夹带着一些杂质，然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来，或者从此溶液中选择性地除去杂质，然后制成纯化的酶制剂。下面就酶的分离纯化的常用方法作一综合介绍： 一、预处理及固液分离技术 1.细胞破碎（cell disruption） 高压均质器法：此法可用于破碎酵母菌、大肠菌、假单胞菌、杆菌甚至黑曲霉菌。将细胞悬浮液在高压下通入一个孔径可调的排放孔中，菌体从高压环境转到低压环境，细胞就容易破碎。菌悬液一次通过均质器的细胞破碎率在12%-67%。细胞破碎率与细胞的种类有关。