荧光显微镜
一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ：
荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。
在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。
荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；
2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；
3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。
荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的
光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
二．工作原理
光源
多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。
超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。
新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一
些时间后，则需要高压启动（约为15000V），启动后，维持工作电压一般为50～60V，工作电流约4A左右。200W超高压汞灯的平均寿命，在每次使用2h的情况下约为200h，开动一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作20m i n，则寿命降低50%。因此，使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭，以免水银蒸发不完全而损坏电极，一般需要等15m i n。由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因此灯泡必须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。
超高压汞灯（100W或200W）光源的电路和包括变压、镇流、启动几个部分。在灯室上有调节灯泡发光中心的系统，灯泡球部后面安装有镀铝的凹面反射镜，前面安装有集光透镜。
国产超高压汞灯G C Q-200型性能良好，可以代替
H B O-200等型的进口灯泡，平均寿命在200h以上，价格也比较低。
我国研制的一种简易轻便型高色温溴钨荧光光源装置，体积小，重量轻，功率小，交、直流两用（自带直流电源），易于携带，使用方便，已推广应用。
滤色系统
滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。如德国产品（S c h o t t）B G12，就是种蓝色玻璃，B 是蓝色的第一个字母，G是玻璃的第一个字母；我国产品的名称已统一用拼音字母表示，如相当于B G12的蓝色滤板名为Q B24，Q是青色（蓝色）拼音的第一个字母，B是玻璃拼音的第一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530，就是表示压制滤长530n m以下的光而透过530n m以上
的光。还有的厂家的滤板完全以数字命名，如美国C o r n i n g厂的N O：5-58，即相当于B G12。
1．激发滤板根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。
紫外光激发滤板：此滤板可使400n m以下的紫外光透过，阻挡400n m以上的可见光通过。常用型号为U G-1或U G-5，外加一块B G-38，以除去红色尾波。
紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450n m范围内的光通过。常用型号为Z B-2或Z B-3，外加B G-38。
紫蓝光激发滤板：它可使350～490n m的光通过。常用型号为Q B24（B G12）。
最大吸收峰在500n m以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。
开始采用金属膜干涉滤板，由于针对性强，波长适当，因而激发效果比较玻璃滤更好。如西德L e i t z厂的F I T C专用
K P490滤板和罗达明的S546绿色滤板，均远比玻璃滤板效果好。
激发滤板分薄厚两种，一般暗视野选用薄滤板，亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得最明亮的荧光和最好的背景为准。
2．压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板：
紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫外光通过。能与U G-1或U G-5组合。常用G G-3K430或G G-6K460。
紫蓝光压制滤板：能通过510n m以上波长的光（绿到红），能与B G-12组合。通常用O G-4K510或O G-1K530。
紫外紫光压制滤板：能通过460n m以上波长的光（蓝到红），可与B G-3组合，常用O G-11K470A K490，K510。
反光镜
反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%；一般使用平面反光镜。
聚光镜
专为荧光显微镜设计制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。分明视野聚光器的暗视野聚光器两种。还有相差荧光聚光器。
1．明视野聚光器在一般荧光显微镜上多用明视野聚光器，它具有聚光力强，使用方便，特别适于低、中倍放大的标本观察。
2．暗视野聚光器暗视野聚光器在荧光显微镜中的应用日益广泛。因为激发光不直接进入物镜，因而除散射光外，激发光也不进入目镜，可以使用薄的激发滤板，增强激发光的强度，压制滤板也可以很薄，因紫外光激发时，可用无色滤板（不透
过紫外）而仍然产生黑暗的背景。从而增强了荧光图像的亮度和反衬度，提高了图像的质量，观察舒适，可能发现亮视野难以分辨的细微荧光颗粒。
3．相差荧光聚光器相差聚光器与相差物镜配合使用，可同时进行相差和荧光联合观察，既能看到荧光图像，又能看到相差图像，有助于荧光的定位准确。一般荧光观察很少需要这种聚光器。
物镜
各种物镜均可应用，但最好用消色差的物镜，因其自体荧光极微且透光性能（波长范围）适合于荧光。由于图像在显微镜视野中的荧光亮度与物镜镜口率的平方成正比，而与其放大倍数成反比，所以为了提高荧光图像的亮度，应使用镜口率大的物镜。尤其在高倍放大时其影响非常明显。因此对荧光不够强的标本，应使用镜口率大的物镜，配合以尽可能低的目镜（4×,5×，6.3×等）。
目镜
在荧光显微镜中多用低倍目镜，如5×和6.3×。过去多用单筒目镜，因为其亮度比双筒目镜高一倍以上，但研究型荧光显微镜多用双筒目镜，观察很方便。
落射光装置
新型的落射光装置是从光源来的光射到干涉分光滤镜后，波长短的部分（紫外和紫蓝）由于滤镜上镀膜的性质而反射，当滤镜对向光源呈45。倾斜时，则垂直射向物镜，经物镜射向标本，使标本受到激发，这时物镜直接起聚光器的作用。同时，滤长长的部分（绿、黄、红等），对滤镜是可透的，因此，不向物镜方向反射，滤镜起了激发滤板作用，由于标本的荧光处在可见光长波区，可透过滤镜而到达目镜观察，荧光图像的亮度随着放大倍数增大而提高，在高放大时比透射光源强。它除具有透射式光源的功能外，更适用于不透明及半透明标本，如厚片、滤膜、菌落、组织培养标本等的直接观察。研制的新型
荧光显微镜多采用落射光装置，称之为落射荧光显微镜。三．C C D
简介
荧光显微镜C C D
荧光显微C C D是与荧光显微镜密切相关的数码摄像产品，一方面它可以将荧光显微镜拍摄的显微摄影产品通过u s b接口传输到电脑中，便于图像的采集研究，另一方面，通过荧光显微镜C C D我们可以拍摄到比单纯使用荧光显微镜更好的图片。
荧光显微镜C C D可以连接荧光显微镜组成显微成像系统。
使用范围
一般情况下，单独使用荧光显微镜即可以达到我们想要的成像效果，但在某些情况下，比如说当荧光比较微弱的情况下，仅仅通过荧光显微镜并不能达到理想的拍摄效果，或者我们希望可以将拍摄的荧光图片上传的电脑生面预览，修改甚至发表学术论文，这时候没有荧光显微镜C C D是不能达到要求的。
产品特点
荧光显微镜C C D一般具有良好的弱光捕捉能力，能够捕捉到极其微弱的荧光，因此成像能力好，此外，很多荧光冷C C D 生产上搜对此类C C D作了制冷处理，使得此类C C D的噪音大大降低，信噪比得以很大的提高。由于其方便应用效果，此类
C C D相机被广泛应用于荧光显微镜。
四．标本制作要求
荧光显微镜的标本制作要求
1、载玻片
载玻片厚度应在0.8～1.2m m之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片
盖玻片厚度在0.17m m左右，光洁。为了加强激发光，也可用于涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。
3、标本
组织切片或其他标本不能太厚，若太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重叠或杂质掩盖，影响判断。
4、封裱剂
封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在p H8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常
5、镜油
一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。五．使用方法
（1）使用显微镜时请保持周围环境的清洁。
（2）打开灯源，超高压汞灯要预热15m i n才能达到最亮点。
使用荧光进行观察时，不要频繁的开关荧光电源。开关间断时间要保持在20～30分钟以上。
（3）透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的压制滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离器、压制滤片的插块。
（4）用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。
（5）放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意：未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊镜油；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需待汞灯完全冷却后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
（6）观察荧光。例如：在荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，观察到经0.01%吖啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。
（7）显微镜使用过后，应立即切断电源。并保持载物台的清洁。如使用100X油镜，请在使用后，用清洁液清洗。
清洁液配比，乙醚：酒精=7：3
注意：
仪器的所有镜头均经校正，不得擅自拆开，如有灰尘沾
在镜头上可先用吹风球将灰尘吹去，再用毛笔拂除。
载物台在不使用时不应放置过重的物体，以防止升降机构损坏。
激光共聚焦染色
六．注意事项
（1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。
（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15m i n，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。
（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。
（4）检查时间每次以1～2h为宜，超过90m i n，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5m i n 后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。
（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。长时间的激发光照射标本，会使得荧光衰减和消失现象，故应尽可能缩短照射时间。暂时不观察时可用挡光板遮盖激发光。
（7）标本观察时候应采用无荧光油，应避免眼睛直视紫外
光源。
（8）电源应安装稳压器，电压不稳会降低荧光灯的寿命。荧光亮度的判断标准一般为四级，即“一”无或可见微弱自发荧光；“+”仅能见明确可见的荧光；“++”可见有明亮的荧光；“+++”可见耀眼的荧光。
荧光的性质：
?保持固有的荧光特性
?荧光波长＞激发波长
?荧光强度极小于激发光的强度
?有不同程度的衰减
?荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
荧光染色分类：
Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明 操作步骤： 本显微镜的荧光光路与明视场（相差、DIC也属明视场）光路相对独立。当使用明视场时，无需打开荧光光源，进打开总电源即可。当使用荧光观察时，可同时打开总电源和荧光电源。 明视场观察： 1.开机：按动总电源开关“1”处接通电源，此时开关和指示灯点亮，打开显微镜底座左侧的透射照明器开关，从小到大调节照明器开关下方的亮度调节旋钮，使照明亮度适当。 2.首先将聚光器模板A放入光路，用10×物镜对样品进行对焦，调节目镜的屈光度调节环，然后换用40×物镜观察样品。 3.关机：将亮度调节旋钮旋至亮度最暗位置，关掉显微镜底座左侧的透射照明器开关，然后按动总电源开关“0”处关闭电源。 DIC微分干涉观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的DIC模板N1及起偏器、检偏器，将其放入光路后，再使用专用的银白色DIC物镜对焦观察。在观察过程中可旋转起偏器，达到最佳的观察效果。 相差观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的相差模板PH1。 荧光观察： 1.开机：先打开荧光灯电源开关，然后按住电源开关上方的荧光灯激发按钮3秒钟后松开，即可见荧光灯点亮。 2.打开荧光转盘上的荧光拨杆至“0”位置，此时荧光光路打开。旋转荧光转盘，转入所对应的滤光片位置即可进行荧光观察；在观察过程中可插入位于荧光灯源前方的减光片，以改变荧光强度，减弱对活细胞样品的损伤。 3.关机：直接关掉荧光灯电源开关即可。 注意事项： 1.短时间内频繁开关荧光灯电源，将极大的缩短荧光灯寿命。 2.荧光光源打开后即可使用，但必须使用20分钟才可以关闭；关闭30分钟以后才可以再次打开，否则会导致荧光灯损坏。 3.不要同时反方向转动显微镜左右两侧的调焦钮，否则会导致显微镜损坏。 4.粗动调焦钮达到限定位置后，如果继续向同一方向旋转会引起显微镜故障。请不要旋转过度。 5.显微镜光源在工作时会产生高温，因此小心不要接触光源以防烫伤，也不要将易燃品如纸张、布、塑料和酒精等放置于光源附近。
WT-1000GM操作手册 上海微图仪器科技发展有限公司上海巍途光电技术有限公司
相机及操作软件介绍 上海微图仪器科技发展有限公司上海巍途光电技术有限公司专业开发显微镜数字相机CMOS系列(TCA-1.3C,TCA-1.3B/W,TCA-3.0C,TCA-5.0)及CCD 系列(TCC3.3MP、TCC-1.4HICE）广泛应用于显微镜成像、凝胶成像、化学发光成像等众多科研质检生产领域。 WT-1000GM 为通用相机操作、图像处理、图像测量软件，该软件操作方便，功能专业，性能稳定，界面友好，是您工作科研的得力助手。
相机安装及软件操作介绍 1.1 操作系统要求 本公司相机及软件支持windows XP, vista, 2000, 操作系统，但要求系统安装Directshow 9.0 components. 1.2Hardware requirement 1.2.1电脑要求配置 CPU: Intel Pentium 4－2.6G； 内存RAM: 512 MB 硬盘HDD: 10GB USB: USB2.0 interface 安装相机驱动 2.1安装相机 2.1.1. 自动安装 1．打开光盘内TCA-1.3驱动Driver文件夹，运行安装程序 。 2．出现下面窗口，选择下一步。
3．出现该窗口选择，仍然继续4．TCA-1.3已经成功安装到计算机内
5. 安装完毕右下角任务栏会提示硬件安装完成，选择设备管理器可以看到如下 位置有该相机的属性显示。 2.1. 3. 安装软件 直接运行WT-1000GM文件夹里的Sutup.exe文件就可以将软件安装到指定的位置了 1. 双击“setup.exe”
荧光显微镜操作手册 Olympus BX51 物镜： 4 ×0.16 （无DIC） 10×0.40 20×0.75 40×1.00 oil 100×1.40 oil 荧光滤色块转盘： 1. WU 蓝 2. WIB 绿（长通） 3. WIBA 绿（带通） 4. WIG 红 5. CFP 青 6. YFP 黄 操作步骤：（注意：样品须在低倍镜下放置和取下） DIC观察：
1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜应 与相应的物镜倍数相匹配 4.先选用低倍物镜（“10×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.换到高倍镜头，观察样品 7.DIC观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照 荧光观察： 1.打开明场电源开关 2.打开汞灯电源开关 3.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 4.检偏器、DIC棱镜在光路外 5.将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter 6.光路选择拉杆推至最里边 7.根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置 8.通过两组减光滤片调节激发光强度 9.从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野， 10.依次换到高倍镜头，观察样品 11.拍照时光路选择拉杆完全拉出 普通明场观察： 1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.起偏器、检偏器、DIC棱镜在光路外，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜拨到 明场（BF）位置 4.先选用低倍物镜（“4×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.依次换到高倍镜头，观察样品 7.光路选择拉杆拉到中间位置既可观察，也可拍照 关机： 1.关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次 开启） 2.将透射光调到最小，关闭明场电源开关 3.将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头 4.确认数据已经保存，关闭软件 5.使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据） 6.关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册 目录: 1 系统得组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2 系统得使用 2、1 开机顺序 2、2 软件得快速使用说明 2、3 显微镜得触摸屏控制 2、4 关机顺序 3 系统得维护 1 系统得组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图: 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜扫描检测单元 实物照片说明: 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2 培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2 系统得使用 2、1 开机顺序 (1)打开稳压电源(绿色按钮) 等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关 (2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON” 电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON” 扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON” (3)打开[ 电动显微镜开关] 打开[ 荧光灯开关] (注:具有5 档光强调节旋钮) (4)Ar 离子激光器主开关“ON” 顺时针旋转钥匙至“—” 预热等待约15分钟, 将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至 “Laser run”状态,即可正常使用 (5)打开[ 电脑开关],进入操作系统
注:键盘上也具有[ 电脑开关] 2、2 软件得快速使用说明 (1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标 (2)进入ZEN 界面,弹出对话框: “Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、 分析等。 “Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已 存图像数据得处理、分析。 (3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用) 2 动作按钮; 3 工具组(多维扫描控制); 4 工具详细界面; 5 状态栏; 6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块 动作按钮: Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。 Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。 Stop ——暂停/结束扫描。 New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角): Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。 LSM ——共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置: “Ocular”——> “Light Path”——> 点击物镜图标,选择物镜——> 样品聚焦。 透射光控制(Transmitted Light Control) 反射光光闸控制(Reflected Light Shutter) 荧光激发块选择(Reflector) 共聚焦LSM 扫描设置 点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路: 光路设置: Smart Setup ——自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法, 应用“Apply”。 (注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫 描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺 序扫描。Best promise 为兼顾速度与信号得折
Nikon 80i荧光显微镜使用说明 △荧光显微镜属贵重仪器，未经保管人员同意请勿擅自使用。 △严格按照操作步骤进行，在使用过程中如发现问题应及时向保管人员反映。 △因违反操作规程，而导致仪器损坏，根据本中心《损坏仪器赔偿制度》进行赔偿。 △使用者在使用完毕后应进行登记. 维护和保养 本仪器应定期进行维护和保养。 ●防止镜头霉变，定期除湿。 ●为防止损坏荧光灯泡，荧光光源关闭后，15分钟内不得再重新开启。 ●荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，如发现荧光强度明显降低应更换荧光灯泡。 荧光显微镜操作步骤 △显微镜系精密仪器，务请不要碰击，要仔细耐心使用。 △荧光光源关闭后，15分钟内不得再开启。 △荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，因此每次使用时请尽量缩短时间。 1.插上电源插座，打开主机电源开关。 2. 将待检标本置于载物台上。 3. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 4. 调节光圈及灯光强度至合适位置。 5. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 6. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 7.保存图象至电脑中。 8. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 ●荧光光源操作 1.插上荧光光源电源插座，打开荧光光源电源开关。 2. 打开光栅。 3. 根据使用荧光素的不同选择不同的荧光滤光片。 4. 将待检标本置于载物台上。 5. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 6. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 7. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 8. 保存图象至电脑中。 9. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 10. 登记使用情况。 Nikon 80i主要技术参数：放大倍数40-1000，CFI60无限远光学系统，内置滤色镜，数字成像头。明场、暗场、简单偏光、荧光/明场、荧光/暗场。波长：330-380，450-490，510-560。主电压90~250V。频率：50~60HZ。功率消耗：最大160W。周围环境温度：10~36℃。相对湿度：0~80%。污染级别：2。 应用范围：正置明场、相差及荧光，主要用于细胞及细菌等的观察及荧光摄影。
显微镜使用说明 1，显微镜开关时卤素灯电压一般应调至最低。 2，转换物镜时，应旋转物镜架，不要用手直接转物镜。 3，荧光光源汞灯由于使用寿命短,为保证尽可能的延长使用时间和安全，汞灯电源开/关间隔时间必须大于三十分钟。 4，显微镜的各光学部件应调节到位（如，DIC 插件，荧光滤片，物镜等），以免影响显微镜的正常工作。如果不到位,那么观察时 通常会看到月牙形阴影. 5，使用油镜时应使用专业用油，不要用其它介质（如香柏油），以免损伤镜头。每次使用完油镜后，需将油镜擦拭干净（物镜及 玻片）。（正置显微镜，油滴在样品上。倒置显微镜，油直接滴 在物镜上。） 6，不要用手直接触摸光学部件的表面（如物镜，荧光模块，目镜等），以免留下手指印在上面，影响观察效果。 7，在拆卸全自动显微镜的聚光镜，荧光滤片盒（倒置显微镜）等部件时，应在断电的情况下进行操作。 8，因为各款显微镜的有效工作距离/特性等各有不同，使用前应充分了解所用仪器的特性及观测范围，以免因不恰当的操作，对 显微镜及其配件造成损害。 提示：1，观测样品时（特别是金相样品），切不可将物镜撞及样品，以免将物镜镜头压碎。 2，移动显微镜时，应做到小心轻放，以免因震动而对光学部件及光路造成损害，影响显微镜的使用。（建议移动显微镜时，先将各光学部件拆 除，移位后，再重新安装。） 二一般观察方式的调节 为了观察和拍摄好图像，需要对显微镜和CCD以及CCD软件都要求进行调节。 在进行显微观察和摄影前，首先要做的就是对显微镜进行调节。调节项目包括柯勒照明、相差环调节、荧光中心调节等。其中后两项一般在安装是已经调节好，以后一般情况下就不需要再调节了。 柯勒照明调节方法如下：
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。
（3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。 （5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。 （4）调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。 （5）当需要得到较强的荧光图像时，可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路，可获得较明亮的荧光图像。
德国Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 快速操作手册 制作制作：：Zeiss 光学仪器光学仪器（（上海上海））国际贸易有限公司 孙 凯 2009年6月
目录目录：： 1 系统的组成 系统组成及光路示意图 实物照片实物照片说明说明 2 系统的使用 2.1 开机顺序 2.2 软件的软件的快速快速快速使用使用使用说明说明 2.3 显微镜显微镜的的触摸屏控制 2.4 关机顺序 3 系统的维护
1 系统的组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：：电动荧光显微镜电动荧光显微镜、、扫描检测单元扫描检测单元、、激光器激光器、、电脑工作站及各相关附件组成电脑工作站及各相关附件组成。。 系统系统组成及光路组成及光路组成及光路示意图示意图示意图：： 电脑工作站 激光器 扫描检测单元 电动荧光显微镜
实物照片说明实物照片说明：： 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO 2培养系统控制器 激光器 电脑工作站
2 系统的使用 2.1 开机顺序 （1）打开稳压电源打开稳压电源（（绿色按钮绿色按钮）） 等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关 （2）主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON ” 电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON ” 扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON ” （3）打开 [ 电动显微镜开关 ] 打开 [ 荧光灯开关 ] （注：具有5档光强调节旋钮） （4）Ar 离子激光器离子激光器主开关主开关 “ON ” 顺时针旋转钥匙 至 “—” 预热预热等待约等待约15分钟分钟，， 将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby ”扳至 “Laser run ”状态状态，，即可正常使用 （5）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统 注：键盘上也具有 [ 电脑开关 ]
荧光显微镜使用指导书 一、荧光显微镜的整体布局说明 图中项目说明: A--荧光显微镜光路部分 B--光路电源及数据采集卡 C--数据采集电脑 A1----汞光 A2----卤素灯 A3----卤素灯(底光) A4----滤光模组 A5----目镜组 A6----观察模式切换(目镜/数据采集) A7----反光镜 A8----差分光度计 1----卤素灯A2电源 2----汞光A1电源 3----数据采集卡 二、观察外延表面状态 1，打开卤素灯A2电源开关1并通过卤素灯A2电源开关1上的旋钮调整其亮度(如图1，具体亮度可根据个人要求决定)。
2，同时确定卤素灯A2与汞灯A1之间的反光镜扳手A7处于如图2所示位置以使卤素灯A2的光线进入主光路。 图1 卤素灯电源1图2 反光镜扳手位置 图3 滤光片插条位置图4 滤光模组A4 3，确定左边的D/UV插条进入光路，调整其余两个ND4和ND32插条以使进入光路的亮度合适(如图3)，如需要微调可以通过改变右侧光栅插条(标注:A.STOP)的状态以达到合适的亮度，如需要调整视野的大小可以通过调整右侧的光圈插条(标注:F.STOP)来达到(一般情况下不需要调整)。 4，转动滤光模组A4的转盘选择4#滤光模组(如图4)。 5，在载物台上放上需要观察的样品，先选择目镜A5中低倍目镜去选取要观察的区域并且调整焦距使视野内的观察物体清晰，然后切换
到合适放大倍数的目镜进行观察。 注意：调焦时先用低倍后用高倍。 调焦时先顺时针旋转粗准焦螺旋(如图5)把载物台升到最高位置并观察不要让物镜碰到物体；然后眼睛靠近目镜观察视场同时逆时针旋转粗准焦螺旋让载物台下降，当观察到视场最亮时切换细准焦螺旋进行调整(如图6)。 图5 粗准焦螺旋的调整图6 细准焦螺旋的调整 6，如需要调整观测样品表面显示的颜色，则需要差分光度计A8中3 个透镜插条同时插入，然后通过其中带旋钮的插条调整表面颜色以方 便观察(如图7)。 图7 差分光度计插条插入状态图8 差分光度计插条退出状态 注意事项：确定目镜转换头A4前的遮光板打开(通过扳手扳动调节)。 确定左边的D/UV插条进入光路以阻挡紫外光伤害眼睛。 三、观察量子阱结构状态 1，按照观察外延表面状态的操作顺序把要观察的片子放号并调整好
显微镜及数码成像系统操作简要 第一部分观察方法步骤 1、明场观察方法步骤 2、相差观察方法步骤 3、荧光观察方法步骤 第二部分使用IPP拍摄图像流程(相差观察、荧光观察) 第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程(明场观察)
1、明场观察方法步骤 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” 准备工作：柯勒照明光轴中心调节 第一次观察须完成此调试，完成后不需要再调节，直至装卸过部件后，使用过程中请不要扭动聚光镜中心调节旋钮。 ① 聚光镜升高到最高位置 聚光镜高度升降旋钮 ② 用10X 物镜聚焦至清晰 ③ 视场光阑打至最小 视场光阑 ④ 逐步下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像 聚光镜升降旋钮 ⑤ 调节聚光镜中心调节旋钮，使正多边形移至视场中心 聚光镜中心调节旋钮 ⑥ 逐步打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内切 视场光阑 ⑦ 稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可 视场光阑
步骤 涉及部件 I ” 载物台、标本夹 3、荧光观察方法步骤 准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” CD+或CD-钮
主开关拨到“I ” ND 片插槽 /孔径光阑 准备工作： 高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 调整完成后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。 ，待弧 载物台
观察筒 视场光阑中心调节钮 第二部分使用IPP 拍摄图像流程 1. 在桌面点击以下图标打开IPP。 2. 在菜单栏中，（采集）Acquire 菜单下点击（视频/数字图像采集）Video/Digital Capture，或点击工具栏中，即出现控制CCD 拍照的对话框。
致测维产品用户： 感谢您明智地选择了测维-里万光电的产品。 从您开始使用测维产品的那一刻起，测维便与您结下了不解之缘，无论何时，无论何地，您将享受测维切实和认真的服务。 测维更希望把您的要求作为我们的追求，以使测维产品的质量、性能、服务日臻完善。因此，您的任何建议和意见，我们都将予以充分的重视。 测维的信箱是：cwsh@https://www.doczj.com/doc/8118115476.html, 如果您想更多地了解测维的产品，欢迎登陆测维的网站：https://www.doczj.com/doc/8118115476.html,/或拨打我们的全国客服热线：400-711-6930。 手册导读 请您在使用仪器前务必仔细阅读本手册。 特别提示： 在操作前，务必把仪器左侧粗微动内侧的限位圈松开。 用途： LWD300-38LFT型倒置荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成。倒置显微镜具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点；落射荧光显微适用于荧光显微术。仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察，还配有特长或长工作距离聚光镜、同时配有相衬装置及相衬物镜，可以观察不经染色的透明活体；落射荧光显微镜采用落射光激发，荧光图象清晰。该仪器特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学，细胞学，肿瘤学，遗传学，免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫和农牧等部门使用一、规格1.目镜 2.物镜
3.总放大倍数 4.聚光镜：特长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离75mm； 5.大台面载物台：移动范围: 75mm×50mm； 6.带限位和调节松紧装置的同轴粗微动调焦系统；微动手轮格值为: 0.002mm； 7.瞳距调节范围：53mm~75mm； 8.照明系统: A.透射照明光源12V30W卤素灯（亮度可调）； B.落射荧光光源100W超高压直流汞灯； 9. 电源电压：110V（60Hz）或230V（50Hz） 10.激发滤色片组： 紫外光(UV)：激发光谱区域：330-400nm；可见荧光起始光谱：425nm. 紫光(V)：激发光谱区域：395-415nm；可见荧光起始光谱：455nm. 蓝光(B)：激发光谱区域：420-485nm；可见荧光起始光谱：515nm. 绿光(G)：激发光谱区域：460-550nm；可见荧光起始光谱：590nm. 11.防霉。
显微镜结构示意图
显微镜使用说明 您现在使用的是1600倍生物显微镜，配有三个目镜（5X、10X、16X）和三个物镜（10X、40X、100X） 1．低倍目镜和低倍物镜的使用（低倍镜容易找到目标）：（1）准备：将显微镜取出，平放于桌面上，转动粗调焦旋钮，将镜筒略升高使物镜转换器与载物台距离拉开，以便安装物镜，按任意顺序装上三个物镜（物镜转换器有一个孔上有防尘盖，装物镜时需取下），物镜需顺着螺纹方向旋到底；取下目镜筒上的防尘盖并插上一个低倍的目镜，安装完毕将显微镜置于前方略偏左侧，必要时使镜臂倾斜以便观察。再旋转物镜转换器，将低倍物镜对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒”声）。 （2）对光：打开光圈，转动聚光镜使其上升(其作用是把光线集中到所要观察的标本上)，双眼同时睁开，以左眼向目镜内观察，同时调节反光镜的方向，直到视野内光线明亮均匀为止。反光镜的平面镜易把其他景物映入视野，一般用凹面镜对光,光线不足时,可使用电光源（电光源的安装见下文）。 （3）放标本片：标本片朝上放到载物台上用移动尺的两个夹子夹住标本片（640倍的显微镜是用压片压住标本），调节移动尺的两个旋钮把要观察的部分移到通光孔的正中央。 （4）调节焦距：从显微镜侧面注视物镜镜头，同时旋转粗调焦旋钮，使镜筒缓慢下降，大约低倍镜头与玻片间的距离约5mm时，再用左眼从目镜里观察视野，左手慢慢转动粗调焦旋钮，使镜筒缓缓上升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调焦旋钮，使物像更加清晰。
如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成： ①转动调焦旋钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距． ②物镜没有对正，应对正后再观察。 ③标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。 ④光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时，易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。 2．低倍物镜转高倍物镜（40倍物镜）的使用 （1）依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。 （2）眼睛从侧面注视物镜，用手转动物镜转换器，换高倍镜（40倍）。注意，此时不需要调节粗调焦旋钮。 （3）眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调焦旋钮，直至视野内看到清晰的物像为止。 如按上述操作仍看不到物像时，可能由下列原因造成： ①观察的部分不在视野内，应在低倍镜下寻找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。 ②标本片放反了，应把标本片放正之后，再按上述步骤操作。 ③焦距没调好，应仔细调节焦距。 如需要更换标本片时，应该先把镜筒升高，然后把标本片取下再换上。 3．油镜的使用（100倍的物镜称为油镜） 应先按上述步骤用低倍镜、高倍镜找到要观察的物像，然后再用油镜观察，操作如下： （1）先用10倍物镜观察标本的概况； （2）更换40倍物镜，把所要观察的部分移到视野中央； （3）把镜筒上升约厘米，再把油镜转到工作位置；
资料内容仅供您学习参考，如有 不当或者侵权，请联系改正或者 删除。 显微镜结构示意图 光阑调节杆 截物台 移动尺 聚光撓调节器 遞色片托架 底座 —反光镜
删除。 显微镜使用说明 您现在使用的是1600 倍生物显微镜, 配有三个目镜（ 5X、10X 、16X）和三个物镜（ 10X、 40X 、100X） 1．低倍目镜和低倍物镜的使用（低倍镜容易找到目标） : （ 1）准备: 将显微镜取出, 平放于桌面上, 转动粗调焦旋钮, 将镜筒略升高使物镜转换器与载物台距离拉开, 以便安装物镜, 按任意顺序装上三个物镜（物镜转换器有一个孔上有防尘盖, 装物镜时需取下） , 物镜需顺着螺纹方向旋到底; 取下目镜筒上的防尘盖并插上一个低倍的目镜, 安装完毕将显微镜置于前方略偏左侧, 必要时使镜臂倾斜以便观察。再旋转物镜转换器, 将低倍物镜对准载物台中央的通光孔（可听到”咔哒”
删除。 声）。 （ 2）对光: 打开光圈, 转动聚光镜使其上升（其作用是把光线集中到所要观察的标本上）,双眼同时睁开, 以左眼向目镜内观察, 同时调节反光镜的方向, 直到视野内光线明亮均匀为止。反光镜的平面镜易把其它景物映入视野, 一般用凹面镜对光,光线不足时, 可使用电光源（电光源的安装见下文）。 （ 3）放标本片: 标本片朝上放到载物台上用移动尺的两个夹子夹住标本片（ 640 倍的显微镜是用压片压住标本） , 调节移动尺的两个旋钮把要观察的部分移到通光孔的正中央。 （ 4）调节焦距: 从显微镜侧面注视物镜镜头, 同时旋转粗调焦旋钮, 使镜筒缓慢下降, 大约低倍镜头与玻片间的距离约5mm时,再用左眼从目镜里观察
Leica TCS SP2 激光共聚焦显微镜系统操作手册一、荧光显微镜Leica DMRE的使用 A：步距调节 B：电动升台按钮 C：电动降台按钮 D：微调 E：上限设置 F：下限设置 1、观察、扫描转换拉杆 2、卤素灯开关 3、透射光探测器开光横档 4、荧光光路开关 5、荧光滤镜转盘1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN 6、镜头侧DIC棱镜转盘 7、与镜头相配DIC滤块 8、起偏器 9、检偏器
10、镜头侧DIC棱镜微调旋钮 11、光强调节纽 12、减光滤光片 13、孔径光阑 14、视场光阑 选择合适的镜头 Leica TCS SP2 镜头配置 镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号 HC PL APO CS DRY 10X /0.4 506511 HC PL APO CS DRY 20X/ 0.7 506513 HC PL APO CS DRY 40 X 0.85/ CORR 506140 HC PL APO Ibd.BC OIL 63X /1.4 506192 Leica TCS SP2 AOBS 镜头配置 镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号 HC PL FLUOTAR DRY 10X/0.3 506505 HC PL FLUOTAR DRY 20X/0.5 506503 HCX PL APO OIL 40X/1.25-0.75 506176 HC PL APO Ibd.BC OIL 63X/1.4 506192 HCX PL APO CS OIL 100X/1.40-0.70 506038 WATER HCX APO L U-V-I WA TER 63X/0.9 506148 荧光观察 荧光光路开关至“O”位， 转轮至“1.0×”位， 转换拉杆完全推进， 荧光滤块换到相应号位（1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN） 图像输出扫描 荧光光路开关至“I”位， 转轮至“UV”位， 转换拉杆完全拉出， 荧光滤块换到4：SCAN） 荧光观察（以油镜观察为例） 1、样品正面朝上正确放在显微镜样品台上，点上镜油。 2、长按电动升台按钮，使镜头和样品上镜油接触，调节微调旋钮，找到样品。 3、将光路转换成荧光观察位置，找到预扫描目标，将光路转换至扫描状态。
荧光显微镜使用说明及注意事项 （1）严格按照荧光显微镜厂家说明书要求进行操作，不要随意改变程序。 （2）观察对象必须是可自发荧光或已被荧光染料染色的标本。 （3）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。 （4）载玻片、盖玻片及镜油应不含自发荧光杂质，载玻片的厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚可吸收较多的光，并且不能使激发光在标本平面上聚焦。载玻片必须光洁，厚度均匀，无油渍或划痕。盖玻片厚度应在0.17mm左右。 （5）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。 （6）选用效果最好的滤光片组。 （7）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。 （8）荧光标本一般不能长久保存，若持续长时间照射（尤其是紫外线）易很快褪色。因此，如有条件则应先照相存档，再仔细观察标本。 （9）荧光显微镜光源寿命有限，启动高压汞灯后，不得在15min内将其关闭，一经关闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁开闭，否则，会大大降低汞灯的寿命。标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。 （10）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。 （11）若暂不观察标本时，可拉过阻光光帘阻挡光线。这样，既可避免对标本不必要的长时间照射，又减少了开闭汞灯的频率和次数。 （12）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。 （13）较长时间观察荧光标本时，一定要戴能阻挡紫外光的护目镜，加强对眼睛的保护。在未加入阻断滤光片前不要用眼直接观察，否则会损伤眼睛。 (14) 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。 (15) 作油镜观察时，应用“无荧光油”。 (16) 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。
德国Zeiss激光扫描共聚焦显微镜 快速操作手册 制作：：Zeiss 光学仪器（（上海））国际贸易有限公司孙凯 2009年6月
目录：： 1 系统的组成 系统组成及光路示意图 实物照片说说明明 2 系统的使用 2.1 开机顺序 2.2 软件的快快速速使使用用说说明明2.3 显微镜的的触摸屏控制 2.4 关机顺序 3 系统的维护
1 系统的组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：：电动荧光显微镜、、扫描检测单元、、激光器、、电脑工作站及各相关附件组成。。系统组组成成及及光光路路示示意意图图：： 电动荧光显微镜扫描检测单元 激光器 电脑工作站
实物照片说明：： 电动荧光显微镜扫描检测单元 CO2培养系统控制器 激光器 电脑工作站
2 系统的使用 2.1 开机顺序 （1） 打开稳压电源（（绿色按钮）） 等待 2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关 （2）主开关[ MAIN SWITCH ] “ON” 电脑系统[ SYSTEMS/PC ] “ON” 扫描硬件系统[ COMPONENTS ] “ON” （3）打开[ 电动显微镜开关] 打开[ 荧光灯开关] （注：具有 5 档光强调节旋钮） （4）Ar 离子激光器主主开开关关“ON”顺时针旋转钥匙至“—” 预热等等待待约约15 分钟，， 将激光器[ 扳钮] 由“Standby ”扳至 “Laser run ” 状态，，即可正常使用 （5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]
2.2 软件的快速使用说明 （1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标 （2）进入ZEN 界面，弹出对话框： “Start System ” ——初始化整个系统，用于激光扫描取图、 分析等。 “Image Processing ”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已 存图像数据的处理、分析。 （3）软件界面： 1 扫描取图（（Acquisition 图像处理（（Processing 维护（（Maintain ） 功能界面切换：：）、图像处理）、维护 （注：Maintain 仅供Zeiss 专业工程师使用）） 2 动作按钮；； 3 多维扫描控制））； 4 工具详细界面；； 5 状态栏；；6 工具组（（视窗切换按钮；； 7 图像切换按钮；；8 图像浏览/预扫描窗口；；9 文档浏览/处理区域；；10 视窗中图像处理模块
免疫荧光（IF）实验操作步骤及详细说明 一、试剂和溶液 10X PBS：80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1L 纯水，调pH 至7.4 洗涤液：1× PBS：纯水稀释10X PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS 固定液：4%多聚甲醛：4g 多聚甲醛溶于100ml PBS 通透液：0.1% triton-100 封闭液：PBS 配制的3% BSA 抗体稀释液：一抗稀释液：3% BSA；二抗及鬼笔环肽稀释液：1X PBS；DAPI: 纯水稀释 二、实验步骤 1.细胞爬片：将盖玻片在酒精灯上灼烧片刻灭菌，铺在12 孔板中，然后 接种细胞，置于37℃，5% CO2 培养箱过夜，待细胞形态完全伸展开并 且处于健康状态，细胞密度为40%-50%（做爬片的细胞一般是复苏细 胞传代2 代后的细胞）； 2.洗涤：倒掉细胞培养液，1×PBS 轻微振荡洗涤2 次,每次5min； 3.固定：4%多聚甲醛固定细胞，室温放置20min,倒掉多聚甲醛，加入适 量PBS； 4.冻存：-20℃保存（如果直接使用，可跳至7）； 5.解冻：常温下放置30 min； 6.洗涤：PBS 轻微振荡洗涤2 次,每次5min； 7.通透：加入适当体积的通透液室温放置10min。（若蛋白为膜表达则无 需此步） 8.洗涤：PBS 轻微振荡洗涤2 次,每次5min； 9.封闭：加入适当体积的封闭液，室温放置30 min；
10.一抗孵育：倒掉封闭液，加入适当体积及浓度的一抗，37℃孵育60min； 11.洗涤：PBST 轻微振荡洗涤3 次,每次5min； 12.二抗孵育：加入适当体积及稀释比的荧光二抗，37℃避光孵育50 min； （如果一抗是荧光素标记的则无需此步）； 13.洗涤：PBST 轻微振荡洗涤3 次,每次5min； 14.核染色：加入适当体积及稀释比的核染料DAPI 室温反应10min （如 果无需加鬼笔环肽，可洗涤后跳至16）； 15.洗涤：PBST 轻微振荡洗涤3 次,每次5min； 16.细胞骨架染色：此步骤只针对有细胞核定位的项目；加入反应体积为 0.2ml，适当稀释比的鬼笔环肽，避光37℃孵育60 min 或4℃孵育过夜； 17.洗涤：PBST 轻微振荡洗涤2 次,每次5min，纯水轻微振荡洗涤5min； 18.封片：取干净的载玻片，分别标记和编号，在载玻片上滴加适量防荧光 猝灭封片剂，用镊子取出盖玻片，细胞面朝下，盖在载玻片上； 19.荧光显微镜观察，记录结果。
荧光显微镜 一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。 在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的
光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 二．工作原理 光源 多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一
发布时间:2011-06-15 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是光学显微镜中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。 （3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。
（5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。