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DNA全血提取

DNA全血提取

全血提取

试剂:1.2% EDTA:称取EDTA 2g,加入80ml蒸馏水,完全溶解后补足100ml,过滤除菌。

2.红细胞裂解液:NH4Cl 3.9g 终浓度0.144ml

NH4CO30.4g 终浓度0.01ml

EDTA 0.9g 终浓度5ml

溶解于400ml蒸馏水,完全溶解后补足500ml,

高压灭菌,4℃保存。

3.白细胞裂解液:Tris 0.6g 终浓度100ml

EDTA 1.85g 终浓度0.5ml

Nacl 2.85g 终浓度5ml

溶解于400ml蒸馏水,完全溶解后补足500ml,

高压灭菌,4℃保存。

4.10% SDS:称取SDS 10g,80ml蒸馏水溶解后补足100ml。

5.蛋白酶K:100mg蛋白酶K溶解于10ml三蒸水,终浓度为10mg/ml,

-20℃保存。

6.70%乙醇:70ml 95% 乙醇加蒸馏水至95ml。

★7.6mol Nacl:称取Nacl 135.1g,80ml蒸馏水溶解后补足100ml。

(这一溶液很难溶解,所以需要将Nacl一部分,一部分溶解。)

操作步骤:

1.静脉血3 ~ 5ml,我们取5ml,枸橡酸钠抗凝。

2.离心2500rpm×10min,取血膜层。(有的病人的白膜层很好吸!)

3.加入红细胞裂解液10ml,放置>20min,每十分钟摇匀一次。

离心1000rpm×10min,弃上清。

*重复步骤3 一次,放置时间<20min。

4.加入白细胞裂解液3ml,充分混匀。

5.加入10% SDS 200ml,混匀。

6.加入蛋白酶K(10mg/ml)150ml,混匀。

7.放37℃O.N。

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