不同产地续断中总皂苷的含量测定
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作者：刘永，卫莹芳，闫婕，郭山山，王化东，谢达温【摘要】目的测定全国不同产地续断药材中总皂苷的含量，为全面评价续断药材质量提供依据。方法以齐墩果酸为对照品，用紫外-可见分光光度法测定。结果9个省、市37个药材样品中总皂苷含量在2.20%～19.91%，平均加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。不同产地续断药材中总皂苷的含量存在差异，其中湖北鹤峰县野生续断总皂苷含量最高。结论此方法准确、可行，可作为续断药材的质量评价方法。
【关键词】续断；总皂苷；紫外-可见分光光度法
续断为川产道地药材之一，来源于川续断科川续断属植物川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根［1］。具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，临床上主要用于腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤等［1］。据报道［2～4］，续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分是三萜皂苷类成分，现已分离鉴定出22种三萜皂苷。随着对续断研究的不断深入，特别是在软组织损伤、
腰膝酸软、腰椎骨质增生等方面的广泛应用，使其需求量大增。为了评价续断质量的优劣，本实验以齐墩果酸为指标，采用紫外分光光度法测定续断中总皂苷的含量，从而为全面评价续断药材质量提供依据，为合理开发利用续断药材资源提供科学依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），万分之一电子天平(德国赛多利斯BP-121S)，十万分之一电子天平(日本岛津LIBROR AEG-45S)。
1.2 样品与试剂续断采自和购自全国9个省、市37个药材样品（见表2），均经成都中医药大学鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为川续断Dipsacus asperoides C．Y．Cheng et T．M．Ai的干燥根；齐墩果酸对照品(批号：110709-200505，购自中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定方法依据本文以齐墩果酸为对照品测定续断药材中总皂苷的含量,通过总皂苷和齐墩果酸皂苷元与香草醛-高氯酸反应在可见区都能获得稳定的特征吸收峰。
2.2 对照品溶液的配制称取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.141 mg的溶液，即得。
2.3 显色方法及测定波长的选择精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.5 ml至具塞试管中,水浴挥干溶剂, 以空白试剂为对照，加入新配制
的5%香草醛－冰醋酸0.2 ml，高氯酸0.8 ml, 密塞摇匀,于60℃水浴中加热20 min，立即取出，冰水浴冷却后加入冰醋酸5 ml，摇匀。于200～800 nm 波长范围内进行扫描,选取最大吸收波长548 nm为测定波长。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取上述对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9,1.2 ml至具塞试管中，随行试剂做空白对照，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，以吸光度(Y)为纵坐标,对照品含量(mg)(X)为横坐标，绘制标准曲线(见图1)，并计算回归方程得:Y=5.726 2X+0.004 5，r＝0.999 8。
2.5 样品溶液的制备取续断样品粉末(过3号筛）约1.0 g，精密称定，加入20倍量50%乙醇，超声提取2次，30 min/次，滤过，滤液置50 ml容量瓶中，加入50％乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.6 精密度实验精密吸取齐墩果酸对照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测量结果分别为0.621，0.626，0.634，0.627，0.625，0.618，平均0.625，RSD为0.88%，表明精密度较好。
2.7 稳定性实验精密吸样品溶液适量于具塞试管中，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，显色后不同时间测定其吸光度变化，放置5，10，15，30，45，60，90，120，150 min后，分别测定其吸光度，测定结果分别为0.637，0.640，0.636，0.632，0.625，0.622，0.616，0.613，0.604，平均0.625，RSD为1.97%，结果表明此显色反应在5～150 min内稳定。
2.8 重复性实验取同一批续断样品6份，每份约1.0 g，精密称定，照样品溶液制备方法制备,精密吸取各样品溶液适量，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测定结果分别为0.601，0.598，0.603，0.607，0.593，0.614，平均0.603，RSD为1.21%。结果表明该方法重复性较好。
2.9 加样回收率实验取已知含量的续断样品5份,每份0.25 g,精密称定,分别加入一定量的齐墩果酸对照品,照样品溶液制备方法制备,精密吸取各样品溶液适量, 参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度。结果见表1。加样回收率为100.32 % ,RSD为1.78%。
表1 加样回收率实验结果（略）
2.10 样品中总皂苷的含量测定精密吸取各样品溶液适量于具塞磨口试管中, 参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，随行试剂做空白,在548 nm处测定样品液的吸光度值，计算不同产地续断样品中总皂苷的含量。结果见表2。表2 全国不同产地续断药材总皂苷含量测定结果（略）
3 讨论
采用香草醛-高氯酸显色法测定续断中总皂苷的含量，在显色反应过程中吸光度会随水浴温度和加热时间的改变而变化，因此本实验通过考察不同的显色温度（50，55，60，65，70℃）、显色时间（5，10，15，20，25，30 min），确定水浴温度60℃，加热显色时
间20 min。
总皂苷是续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分。本文研究了续断总皂苷的制备方法，对提取方式、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数进行考察，最终确定提取条件为：20倍量的50%乙醇,超声提取2次，60 min/次。方法学研究结果表明,该含量测定方法准确度高、重复性好(RSD为 1.21%) ,加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。因此本法可作为续断中总皂苷的含量测定方法。
全国9个省、市37个产地样品中续断总皂苷含量在2.20%～19.91%，湖北鹤峰野生续断的总皂苷类有效成分均高于其他地区，达19.91%，购于成都荷花池药市的含量最低，只有2.20%，建议续断药材总皂苷含量不得低于8.4%。
不同加工方法的续断以不发汗的总皂苷含量最高。不同采收期的以秋季霜降时续断倒苗后采收其总皂苷含量为高，续断是否需要发汗处理值得进一步研究。
【参考文献】
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大青叶的化学成分与药理作用 摘要：近年来，随着人们对清热解毒类中药的广泛关注，关于大青叶的化学成分、药理作用的研究日益深入，取得了一些积极的进展，但大青叶药理作用的物质基础仍然不清楚，并且缺乏真正反映其内在品质和药效的规范化质控标准，这些均影响了大青叶的推广应用．综述国内外近年来大青叶的化学成分、药理作用的研究进展，为大青叶的续研究与应用提供必要的参考． 关键词：大青叶；靛蓝；靛玉红；药理作用 Abstract：Folium Isatidi， attracted great attention in recent years．Many reseamhers studied on chemical components， and pharmacological activities in it and have made someProgress。But，it iS still unclear about which chemical components to clear heat and detoxify and lack of quality standard which reflect its pharm acological activities． We summarized chemical components， and pharm acological activities in Folium ／satidis in recent years． provided references to its research and application． Key words：folium Isatidis；indigotin；indirubin；pharmacological activities 引言 大青叶为十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica Fort 的干燥叶，其根称板蓝根。性味苦寒、以清热解毒、凉血化斑为主要功效，主治呼
比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0．8 cm，长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯；大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml，制成 1 mg／ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0．2 g，准确称定，置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后，准确称重。浸泡60 min，超声提取30 min，再次称重，补加甲醇至超声前重量。过滤，精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用5 ml水溶解残留物，所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1：5)，以水50 ml洗脱，弃去水液，之后再以50 ml 95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml)，合并正丁醇层，减压蒸干。残留物用70％甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，定容，摇匀，即得。 2．3测定波长的选择 精密移取1．5 ml的对照品及l ml供试品溶液，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛一冰醋酸(临用新配)0．2ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml，摇匀。立即在紫外分光光度计于400～800 nm波长下扫描，同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm，故选取475 nm为检测波长。 2．4线性关系考察 精密量取对照品溶液0．60，1．50，2．40，3．30，4．20 ml，置具塞试管中，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛-冰醋酸(临用新配)O．2 ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml，摇匀，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，使用软件OriginPro 7．0进行回归分析，得到回归方程为：A=0．007 4+1．120 83c, r=0．999 97。在0．096—0．672 mg内线性关系良好。 2．5精密度试验 精密吸取对照品溶液1．5 ml，依“2．4”项下方法显色测定吸收度，连续测定5次，结果RSD为0．254％，说明仪器的测试性能良好。 2．6稳定性试验 取对照品和样品溶液，依“2．4”项下方法操作，按不同时间测定吸光度，结果见表1。2．7样品含量测定 取供试品溶液6份，每份精密吸取80 μ L，按“2．3”项的方法显色后，在540nm测定吸光度，计算样品含量。 2．8加样回收率试验 取供试品溶液8份，每份精密吸取80μL，加入0．2mg／mL齐墩果酸溶液50 u I。，按“2．3”项的方法显色后，在540hm测定吸光度，计算加样回收率。
中药材主产地（道地药材）“新编” 声明：本文转自神农本草精英会微信号，题目为张继中药诗话系列之一：中药材主产地（道地药材）“新编”。其版权归原作者所有，转载仅为传播中药基础知识和行业正能量。插入广告与原作者无关，感谢原作者辛苦付出。 道地中药材，是指经过中医临床长期应用优选出来的，产在特定地域，与其他地区所产同种中药材相比，品质和疗效更好，且质量稳定，具有较高知名度的中药材（摘自《中医药法》）。 中药材主产地（道地药材）“新编” ——张继 云南马关草果王，版纳砂仁天竺黄。 文山三七云佛手，云南重楼滇精黄。 朱砂琥珀五倍子，叙府半夏云木香。 檀香荜茇马钱子，云归昆明山海棠。 云连丽江山慈姑，苍山贝母药大黄。 天麻雪上一支蒿，滇西云归儿茶膏。 毕澄茄子鸡血藤，诃子云苓云胡椒。 贵州天麻吴茱萸，毕节半夏艾纳香。 雷丸山慈姑贵芍，朱砂五倍子雄黄。 黔川续断坚龙胆，杜仲百合茯苓乡。 姜形黄精九香虫，通脱通草贵白党。 四川松青芦贝母，泽泻佛手雅安黄。 川仲川朴川楝子，绿丝郁金川姜黄。 灌县川芎川牛膝，味连雅连川木香。 江油附子青川乌，中江薄荷川明党。 鸡骨常山川独活，瑞香狼毒川活羌。 中江丹参川续断，中江白芍川柏黄。 汉源花椒五倍子，慈姑干姜犍白姜。 雷丸甘松川故脂，川红梅花九虫香。 遂宁白芷自然铜，绵川麦冬云木香。 川蓬莪术川藁本，宜宾巴豆川山常。 川灯心草紫草茸，川金钱草苦楝皮。 保宁半夏西钩藤，康定硼砂川白蜡。 重庆綦合川红梅，秀山银花南大黄。 合江佛手涪麦冬，开县木瓜桔梗良。 万县江津青白壳，垫江丹皮川黄柏。 万县巴豆山栀子，万县常山云木香。 青海秦艽西羌活，马鹿茸角野麝香。 冬虫夏草川贝母，沙棘马宝西大黄。 胆草枸杞大青盐，青藏茵陈山莨菪。 西藏甘松胡黄连，大黄羌活红景天。
作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.doczj.com/doc/832374154.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法 T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)～15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187～189
1 总皂苷的测定（来源于《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版））1.1 试剂 1.1.1 Amberlite-XAD-2大孔树脂，Sigma化学公司、U.S.A.。 1.1.2 正丁醇：分析纯。 1.1.3 乙醇：分析纯。 1.1.4 中性氧化铝：层析用，100-200目。 1.1.5 人参皂甙Re：购自中国药品生物制品检定所。 1.1.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。 1.1.7 高氯酸：分析纯。 1.1.8 冰乙酸：分析纯。 1.1.9 人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂苷Re 2.0 mg 1.2 仪器 1.2.1 比色计 1.2.2 层析柱 1.3 实验步骤 1.3.1 试样处理 1.3.1.1 固体试样：称取1.000 g左右的试样（根据试样含人参量定），置于100 mL 容量瓶中，加少量水，超声30 min，再用水定容至100 mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0 mL进行柱层析。 1.3.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0 mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。 非乙醇类的液体试样：吸取1.0 mL试样（假如浓度高、或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。 1.3.2 柱层析：用10mL注射器作层吸管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（见1.3.1），用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
产地初加工药材品种 产地初加工（趁鲜加工），日益成为国家支持方向和行业发展趋势，对于药材规范性、标准性和安全性，以及产区农民增收、农业转型和农村创富均具有重要作用。 为理清相关药材产地初加工产品范围，有效指导相关生产与经营，现整理如下，请各位参用。 少说多做，初衷不变，淡然前行----- ↑趁鲜加工的64种药材（2015药典） 1.药材切片（共28个品种）干姜、土茯苓、山柰、山楂、山药、川木通、三棵针、片姜黄、乌药、功劳木、地榆、皂角刺、鸡血藤、佛手、苦参、狗脊、粉萆薢、浙贝母、桑枝、菝葜、绵萆薢、葛根、紫苏梗、黄山药、竹茹、桂枝、狼毒、滇鸡血藤。 2.药材切段（共18个品种）大血藤、小通草、肉苁蓉、青风藤、钩藤、高良姜、益母草、通草、桑寄生、黄藤、锁阳、槲寄生、颠茄草、野木瓜、广东紫珠、首乌藤、桃枝、铁皮石斛。 3.药材切块（共3个品种）何首乌、茯苓块、商陆； 4.药材切瓣（共4个品种）木瓜、化橘红、枳壳、枳实 5.药材切瓣或片、段（指可选用多种切制方法加工的药材，共11个品种）丁公藤、大黄、天花粉、木香、白蔹、防己、两面针、虎杖、香橼、粉葛、大腹皮。↑可以在中药材专业市场专营区经营的73种趁鲜切制和初加工中药材品种 具体如下：茯苓、何首乌、赤茯苓、茯神、葛根、粉葛、岗梅根、虎杖、八角枫根、白芍、白术、桑白皮、牡丹皮、桔梗、白芷、大黄、商陆、乌药、地榆、苦参、雷公藤、白首乌、菝葜、土茯苓、黄药子、绵萆薢、桑枝、川木通、皂角刺、紫苏梗、佛手、干姜、山奈、狗脊、浙贝母、丁公藤、两面针、八角莲、瑞香狼毒、紫葳根、菊叶三七、粉萆薢、片姜黄、山楂、十大功劳根、防己、天花粉、木香、土木香、高良姜、檀香、樟木、桂枝、大血藤、青风藤、苏木、降香、钩藤、红木香、桑寄生、槲寄生、锁阳、肉苁蓉、益母草、通草、黄藤、颠茄草、白蔹、木瓜、枳实、枳壳、鸡血藤、香橼
不同产地大青叶中有机酸含量的测定（作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的比较不同产地大青叶中有机酸的含量。方法根据大青叶药材中3种主要有机酸紫外吸收图谱的特点,采用日本岛津UV-2401型紫外分光光度计测定不同产地大青叶药材中有机酸含量,并进行了方法学考察。结果不同产地大青叶中的有机酸含量差异显著。结论本法操作简单、准确、重复性好,可作为大青叶中有机酸定量分析的方法。 【关键词】大青叶；有机酸；紫外分光光度法 Abstract：Objective To compare the content of organic acid in Folium Isatidis from differernt Habitats. Methods According to ultraviolet absorption atlases characteristics of the three main organic acid in Folium Isatidis, DSA UV-2401 was used to determinate the acidcontent of Folium Isatidis from differernt Habitats, and carried on to inspect the methodology. Results The difference of the acidcontent of Folium Isatidis from differernt Habitats is notable. Conclusion The method is simple, accurate and duplicated good, and can be used as quantitative
中国医药指南 2010 年 2 月第 8 卷第 6 期Guide of China Medicine, February 2010, V ol.8, No.621 论 著 和预后的辅助指标。 综上所述，采用免疫组织化学SP法检测p53、VEGF、PCNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达，对于判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后有较好的临床应用价值。 参考文献 [1] Lane DP. P53 guanlian of the genoma [J].Nature,1992,358(6381): 15-16. [2] 阎洪涛,龚百生,廖勇,等.膀胱移行细胞癌组织中P53和血管内皮 生长因子表达的关系及临床意义[J].中华泌尿外科杂志,2006, 27(3):178-180.[3] Ferrara N,Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding. Growth factor. Speci? c for vascular endothelial cells [J]. Biochem Biophys Res Commun,1989,161(2):851-858. [4] 郭雪涛,崔明玉.P53、P16、TGF-α、EGFR、VEGF在膀胱移行 细胞癌组织中的表达及意义[J].现代泌尿外科杂志,2007,14(4): 225-228. [5] Miyachi K,Frilzler MJ,Tan EM,et al. Autoantibody to a nuclear antigen in proliferating cells [J].J Immunol,1978,121(6):2228-2234. [6] 卢童,杨为民,章群. 膀胱移行细胞癌组织中P16、P53和PCNA的 表达及其意义[J].临床泌尿外科杂志,2008,23(1):58-60. 复方丹参片是2005年版《中国药典》一部收载的品种，由丹参、三七和冰片三昧药组成，有活血化瘀、理气止痛之功效，用于心血管疾病可显著扩张冠状动脉，增加血流量，减少心肌耗氧量，改变血液流变性。同时也能改善糖尿病患者心、脑血管及神经系统并发症的症状及体征。三七是复方丹参片的重要药物组成，国内文献报道[1-3]。对不同厂家生产的本品的含量比较只是针对丹参中主要成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B。三七总皂苷含量变化幅度较大，致使药品质量和疗效存在很大的差异。三七中的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1，已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制剂的质量[4,5]。本文采用HPLC法，同时对复方丹参片中的三七总皂苷3种主要有效成分进行了含量测定，可用于控制复方丹参片的质量，保证其临床用药有效性提供参考。 1 资料与方法 1.1 资料 仪器与试剂：Agilentl100高效液相色谱仪（美国惠普公司）； Agilentl100系列可变波长检测器；Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪马公司）；BP211D电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公1 广东省肇庆市第一人民医院药剂科（526021） 2 广东省肇庆医学专科学校（526021） HPLC测定复方丹参片中三七总皂苷的含量 曾荣华1邓雪媚1卢慧娴1莫肇江1刘燕2 【摘要】目的建立复方丹参片中三七有效成分的含量测定方法。方法采用HPLC法测定本品中三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1线性范围分别依次为0.850~8.524、0.922~9.013、0.377~3.317μg；平均回收率分别为101.1%、101.2%、103.2%，RSD分别为1.5%、1.6%、1.8%。结论本方法简便可靠，结果稳定，可用于丹心舒胶囊中三七的有效成分的含量测定。 【关键词】复方丹参片；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；三七皂苷R1；含量测定 中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2010）06-0021-03 Determiation the Contents of Panax Notoginseng Saponins in Compound Danshen Tablets by HPLC ZENG Rong-hua1,DENG Xue-mei1,LU Hui-xian1,MO Zhao-jiang1, LIU Yan2 (1 Department of Pharmacy, The First People' s Hospital of Zhaoqing, Zhaoqing 526021,China; 2 Zhaoqing Medical College, Zhaoqing 526021, China) [Abstract]Objective To analyze the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Compound Danshen Tablets. Methods HPLC was used to analyze the contents of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1 and notoginsenoside R1 in Compound Danshen Tablets. Results The linear ranges of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, and notoginsenoside R1 were 0.850~8.524, 0.922~9.013, 0.377~3.317μg. With average recoveries of 101.1%(RSD=1.5%), 101.2% (RSD =1.6%), 103.2% (RSD=1.8%). Conclusion The method is simple, reliable and stable, which could be used for the quality control of Compound Danshen Tablets. [Key words]Compound Danshen Tablets; Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Rb1; Notoginsenoside R1; Determination 司）；KQ100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 人参皂苷Rg1（批号：110703-200637）、人参皂苷Rb1（批号： 110704-200634）、三七皂苷R1（批号：110745-200619），对照品均供 含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。实验中乙腈为色谱纯， 水为纯净水，甲醇为分析纯；复方丹参片（广州白云山中药厂）。 1.2 方法 1.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；以乙腈为 流动相A，0.05%磷酸水溶液为流动相B，进行二元梯度洗脱，洗脱程 序[6]：0→12min流动相A 22%，12→20min流动相A 22%→28%，20→ 60min流动相A 28%→43%；流动相B 81%→64%；流速：1.0mL/min； 柱温：30 ℃；检测波长：203nm，进样量为10μL。 1.2.2 供试品溶液的制备 取复方丹参片20片(除去包衣)，研碎，精密称取约0.8g，加乙醚DOI:10.15912/https://www.doczj.com/doc/832374154.html,ki.gocm.2010.06.024
常用中药品种论述之常用中药续断 续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperWall.exhenry的干燥根。又名川断、马蓟、六汗、小续断、山萝卜、川萝卜根。原植物川续断又名苦小草、和尚头、滋油菜、鼓锤草、黑老鸦头、帽子疙瘩菜，分布于四川、湖南、湖北、贵州、陕西、云南、西藏。 本品药材性状：呈圆柱形，略扁，有的微弯曲，长5~15cm，直径0.5~2cm。表面灰褐色或黄褐色，有稍扭曲或明显扭曲的纵皱及沟纹，可见横裂的皮孔样斑痕和少数须根痕。质软，久置后变硬，易折断，断面不平坦，皮部墨绿色或棕色，外缘褐色或淡褐色，木部黄褐色，导管束呈放射状排列。气微香，味苦，微甜而后涩。 本品味苦、辛，性微温；归肝、肾经。功能：补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏。中医临床用于肝肾不足，腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折，崩漏，胎漏。现代药理研究表明：本品有抑菌，抗滴虫，止血，抗炎，镇痛，促进骨损伤愈合作用。对心血管、对子宫有作用，并有抗氧化活性、抗维生素E缺乏症的作用。 续断为常用中药，始载于《神农本草经》，列为上品。谓“味苦，微温。主伤寒，补不足，金疮，痈伤，折跌，续筋骨，妇人乳难。久服益气力。一名龙豆，一名属折。”陶隐居云：“按《桐君药录》云：
续断生蔓延，叶细，茎如荏大，根本黄白有汁，七月、八月采根。今皆用茎叶，节节断，皮黄皱，状如鸡脚者，又呼为桑上寄生。恐皆非真。时人又有接骨树，高丈余许，叶似蒴藋（音朔濯）。皮，主疗金疮，有此接骨名，凝或是。而广州又有一藤名续断，一名诺藤，断其茎，器承其汁饮之，疗虚损绝伤；用沐头，又长发。折枝插地即生，恐此又相类。李云是虎蓟，与此大乖，而虎蓟亦自疗血尔。”《本草图经》曰：“续断，生常山山谷，今陕西、河中、兴元府、舒、越、晋州亦有之。三月已后生苗，秆四棱，似苎麻，叶亦类之，两两相对而生。四月开花，红白色，似益母花。根如大蓟，赤黄色，七月、八月采。谨按《范汪方》云：续断即是马蓟，与小蓟叶相似，但大于小蓟耳。叶似旁翁菜而小厚，两边有刺，刺人，其花紫色，与今越州生者相类。而市之货者，亦有数种，少能辨其粗良。医人用之，但以节节断，皮黄皱者为真。” 从续断在历代本草文献记载所述形态考证，不但来源有变化而且比较复杂。据王家葵等本草考证认为，古代续断共涉及续断科、唇形科、菊科、桑寄生科、忍冬科、买麻藤科、灯芯草科及豆科等8个科的十数种植物。续断在汉代为常用中药，但汉代文献均无续断原植物的描述。据推断，似乎为豆科或唇形科植物。陶弘景《本草经集注》共提到了3种续断为齐梁时所用，即桑寄生科的槲寄生Viscum
总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法（香草醛法）：实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中，而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量，便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液（测试液）配制：精密称取25mg香草醛，加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制：将待检测的样品用甲醇溶解，配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定， 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制：精密称取齐墩果酸1mg，加甲醇定容至5mL，配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。（也可以使用其他的皂苷物质，如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物） 4. 高氯酸：分析纯试剂。 5. 冰醋酸：即纯的无水乙酸（分析纯） 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】（齐墩果酸） 取上述齐墩果酸溶液x μL （x=0，40，80，120，160，200），依“实验流程图”，在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液（x=0）作为空白对照，测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量，为横坐标，A540nm值为纵坐标，绘制标准曲线。以此标准曲线计算，得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液，进行实验，并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程，即可计算出其总皂苷的含量（以齐墩果酸计）。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以，其结果应表示为，如：“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷（以齐墩果酸计）”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中，在“彻底挥干溶剂”一步中，如果溶剂挥干不彻底，哪怕是有一点点，都 会干扰。水也要彻底挥干。 1
比色法测定甘草中总皂苷的含量 【摘要】目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。方法用香草醛 高氯酸试剂，在589 nm处有最大吸收，并对比色条件进行了优化。结果该法精密度高，1 h内稳定，平均加样回收率为99.03%。结论此法简便、准确、稳定性、重复性好，可用于甘草总皂苷的测定。 【关键词】甘草；总皂苷；香草醛 高氯酸 Determination of Total Saponins in Glycyrrhiza by Colorimetry Abstract：ObjectiveTo establish the method of determination of total saponins in Glycyrrhiza. MethodsUse Vanillin HClO4 as the chromogenic reagent and detect the maximum absorption at the wavelength of 589 nm. Choose the best chromogenic preparation to determine the contents of the samples. Results The precision of the method is high. The color of the treated samples was stable within 1h. The average value of the recovery was 99.03%.ConclusionThe method is simple, accurate, highly sensitive and reproducible. It may be used for the quantitative determination of total saponins in Glycyrrhiza. Key words：Glycyrrhiza; Total saponins; Vanillin- HClO4 甘草为豆科（Leguminosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种，我国有8种，分布在内蒙、西北、东北等地。目前，被《中国药典》认定的甘草药材原植物有3种［1］，即乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草的根及根茎。其中以乌拉尔甘草分布最广，产量最多，质量最好。研究发现甘草属植物中三萜类皂苷具有含量高、生理活性强的特点，不仅具有抗溃疡、消炎、解毒等生理活性，今年研究还发现具有抗病毒、抗癌活性。 皂苷定量分析方法的研究已有很多报道［2～7］，包括重量法、比色法、薄层扫描法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）等。重量法具有测定值稳定、重现性好等特点，但分析流程时间长，操作繁琐，试剂消耗量大，得到的皂苷中一般混有一定量的杂质，使结果偏高，误差较大。比色法一般采用香草醛－硫酸比色法［2］。张中伟发现香草醛－硫酸法稳定性差，而香草醛 高氯酸作为三萜皂苷常用的显色剂，较香草醛 硫酸的精密度高，且受糖类干扰较小［6］。薄层扫描法和高效液相法对测定样品、设备要求较高，且只适合一些特定皂苷的测定。综合考虑，以香草醛 高氯酸作为显色剂，测定甘草中总皂苷的含量，建立一种简便、准确的方法。 1 器材 1.1 仪器721型分光光度计，上海分析仪器厂；KQ 50DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；AB204 S型分析天平，METTLER公司；紫外扫描分光光度计，岛津UV 240。 1.2 试剂高氯酸，甲醇，香草醛，冰醋酸（以上试剂均为分析纯），甘草酸单铵盐标准品（甘草酸单铵盐10 mg溶解于甲醇中定容至10 ml，浓度为1 mg·ml-1，甘草（购于黑龙江省大庆市大同区）。 2 方法 2.1 最大波长的确定准确吸取0.5 ml标准品溶液，置于10 ml具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，加入0.2 ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8 ml的高氯酸，摇匀，于
三七总皂昔工艺方法 【摘要】目的研究氧化铝柱层析精制三七总皂昔工艺。方法采用HPLCfe测定三七总皂昔的含量，考察洗脱剂的浓度、洗脱剂的用量和吸附剂用量对工艺的影响。结果确 定最佳精制工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂昔的用量。结论通过氧化铝柱层析精制后，三七总皂昔的收率大于70%含量大于80%说明此精制工艺是可行的。 【关键词】三七总皂昔氧化铝高效液相法 三七为五加科植物三七的干燥根及根茎[1],三七总皂昔是中药三七的有效部位，主要含有三七皂昔R1,人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1等达玛烷型三站皂昔类化合物[2] c 现代药理研究证明：三七总皂昔具有多方面的生物活性，主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、
抗凝、钙拮抗等方面［3］。 目前三七总皂昔的富集与纯化一般采 用大孔吸附树脂来完成［4］,纯化后二七总 皂昔的含量达到60%U 上。为了提高药物的 安全性和有效性，提高其成药原料药的纯度 本实验拟米用氧化铝柱层析对三七总皂昔 的纯化物进行精制［5］,并对工艺进行了考 察，为进一步的制剂学研究打下基础。 1仪器与试药 仪器与设备 RE52-99旋转蒸器；DK-S22型电热恒温 水浴锅；JA-1003型电子分析天平；电热鼓 风干燥箱；美国Tsp 高效液相色谱仪； TspP-2000 泵、 TspUV-1000UV-VIS 检测 TspPC100咱谱工作站； 材料与试剂 三七总皂昔提取物； 三七皂昔R1、人参皂昔 对照品；乙月青为色谱纯，水 为二次蒸偕水。 2方法与结果 色谱条件 色谱柱：ODSC1魁；流动相：A 为乙月青， 犯? 希; 色谱柱：ODSC1三七总皂昔对照品： Rg1、人参皂昔Rb1
绪论 概念题 1.药用植物资源：指自然资源中对人类有直接或间接医疗作用和保健护理功能的植物总称。 2.药用植物资源学：研究药用植物资源的种类、分布、蕴藏量、活性成分及其时空变化规律和评价方法、生物多样性保护、可持续利用以及相关信息管理的学科。 3.现代技术调查方法包括：RS技术、GIS技术、GPS技术，以及“3S”技术集成应用等。 4.地道药材：指在一特定自然条件、生态环境的地域内所产的药材，因生产较为集中，栽培技术、采收加工也都有一定的讲究，以致较同种药材在其他地区所产者品质佳、疗效好。 简答 一、植物道地：刺五加---黑龙江，细辛---辽宁，天麻---贵州，三七---云南，黄连之乡四川石柱，福建泽泻，安徽牡丹---风丹皮，车前主产江西。 二、地道药材形成的原因？ 道地药材的形成主要是优质品种遗传特性、特定的生态环境、成熟的栽培与加工技术、中医实践等综合作用的结果。 1.优质品种遗传特性是形成道地药材的内因 药材质量的好坏，首先决定于品种特性。同一物种能在不同的地点上形成大大小小的群体单元，称为“居群”。如果某一“居群”产生质优效佳的药材，即为道地药材， 2.特定的生态环境是道地药材形成的重要条件 同一种药材，由于分布地域不同，相应的土壤、水分、气温和光照等生态环境亦不相同，造成药材外部形态、内部结构及生理生化成分都不相同，因而形成疗效上的差异。 3.悠久的栽培历史和成熟的种植技术 许多道地药材都是由野生变家种后形成的，中药材道地性形成与成熟的种植与加工技术直接相关。 4.中医实践促进了道地药材的形成 道地中药材是古代在中医临床实践中反复总结、优化对比筛选出来的. 三、道地药材的特点？ (1)道地药材具有明显的地理性 (2)道地药材具有特有的质量标准 (3)道地药材具有丰富的文化内涵 (4)道地药材具有较高的经济价值 四、五味子、刺五加生长环境特点？ 1.生长环境：五味子喜微酸性腐殖土。野生植株生长在山区的杂木林中、林缘或山沟的灌木 丛中，其耐旱性较差。自然条件下，在肥沃、排水好、湿度均衡适宜的土壤上发育最好。刺五加生于森林或灌丛中，喜温暖湿润气候，耐寒、耐微荫蔽。适宜向阳、腐殖质层深厚、土壤微酸性的砂质壤土。 2.伴生植物：五味子缠绕在其它林木上生长， 3.地理分布：刺五加：分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北和山西。朝鲜、日本和苏联也有分布。 五味子：黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、宁夏、甘肃、山东。也分布于朝鲜和日本。 五、药用植物资源特点？ 药用植物资源的种类繁多，来源复杂、分布零散、性质各异，它们在自然界均占有特定的位置，也都具有各自的特点，归结起来为： 1.地域性：药用植物资源的一个突出特点就是具有明显的地域性，药用植物资源的地域性是
不同产地大青叶中有机酸含量的测定 （作者：________ 单位：____________ 邮编：___________ ） 【摘要】目的比较不同产地大青叶中有机酸的含量。方法根据大青叶药材中3种主要有机酸紫外吸收图谱的特点，采用日本岛津UV-2401型紫外分光光度计测定不同产地大青叶药材中有机酸含量,并进行了方法学考察。结果不同产地大青叶中的有机酸含量差异显著。结论本法操作简单、准确、重复性好，可作为大青叶中有机酸定量分析的方法。【关键词】大青叶；有机酸；紫外分光光度法 Abstract : Objective To compare the content of organic acid in Folium Isatidis from differernt Habitats. Methods According to ultraviolet absorption atlases characteristics of the three main organic acid in Folium Isatidis, DSA UV-2401 was used to determinate the acidcontent of Folium Isatidis from differernt Habitats, and carried on to inspect the methodology. Results The differenee of the acidcontent of Folium Isatidis from differernt Habitats is no table. Con clusi on The method is simple, accurate and duplicated good, and can be used as qua ntitative analysis method of organic acid in Folium Isatidis.