第47卷第8期2019年4月广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol.47No.8Apr.2019
天山雪莲叶和茎部位芦丁含量测定研究
康艳萍,刘苗苗,汤洪波
(江西宜春学院化学与生物工程学院,江西 宜春 336000)
摘 要:对天山雪莲不同部位中芦丁成分进行含量测定和初步的质量研究,利用超声提取二加热回流和冷浸三种方法制备
天山雪莲叶和茎部位的供试品溶液,采用高效液相色谱法进行含量测定和方法学考察,得知天山雪莲叶和茎的这二个不同部位的芦丁含量不同,茎的芦丁含量低于叶的芦丁含量;并且冷浸法芦丁含量最高,其次是超声提取法,加热回流法芦丁含量最少,为进一步开发利用提供了基础数据三
关键词:天山雪莲;芦丁;提取物;高效液相色谱
中图分类号:R917
文献标志码:A
文章编号:1001-9677(2019)08-0090-03
第一作者:康艳萍(1962-),女,副教授,主要从事药学教育与药物研究工作三第二作者:刘苗苗,江西宜春学院化学与生物工程学院12级药学班学生三
Determination of Rutin Content in Leaves and Stems
of Saussurea Involucrata
KANG Yan -ping ,LIU Miao -miao ,TANG Hong -bo
(College of Chemistry and Biology Engineering,Yichun University,Jiangxi Yichun 336000,China)
Abstract :The contents and preliminary qualities of rutin in different parts of saussurea involucrata were determined.The ultrasonic extraction,heating reflux and cold immersion were used to prepare the test solution of leaves and stems of saussurea involucrate.HPLC method was used for content determination and methodology investigation.It was found that the content of rutin in these two parts of leaf and stem were different.The content of rutin in stem was lower than that in leaf.The content of rutin in cold immersion method was the highest,followed by ultrasonic extraction method,and the content of rutin in heated reflux method was the lowest,which provided basic data for further development and utilization.
Key words :saussurea involucrata;rutin;extract;HPLC
天山雪莲(Saussurea involucrata (Kar.et Kir.)Sch.-Bip.)为菊科凤毛菊属干燥地上部分[1],其性质温和,味道稍苦,具有补肾活血二强筋骨二通经活血的功能,对治疗肾虚腰痛,祛风湿,通经活血等症疗效显著[2]三天山雪莲含有黄酮类二内酯类二木酯类二生物碱类二挥发油类二多糖类等化学成分,其中黄酮类是主要成分[3-4]三现在已经鉴定出的有14种[5]三到现在为止,对天山雪莲的全株二根二茎二叶二花苞二苞片等各部位的化学成分都有进行研究[6-7],为了很好的利用天山雪莲这种珍贵的药材,本实验利用了冷浸,加热回流和超声提取法制备天山雪莲叶和茎的供试品溶液,采用高效液相色谱法测定了雪莲中叶与茎不同部位的芦丁的含量,为天山雪莲的进一步开发利用提供有效的依据三
1 仪器与试药
1.1 仪 器
KQ-100B 型超声波清洗器,中国玉环曙峰企业制造;SHZ-D(Ⅲ)型循环水真空泵,上海耀特仪器设备有限公司;XFB-800中药材粉碎机,湖南中诚制药机械厂;Exceed-C 艾柯实验
室超纯水机,成都艾柯水处理设备有限公司;FL2200高效液相色谱仪,浙江福立分析仪器股份有限公司;FL2200紫外检测器,浙江福立分析仪器股份有限公司三
1.2 试 药
天山雪莲购自新疆乌鲁木齐;芦丁对照品,天津一方科技有限公司;甲醇,磷酸均为色谱纯,乙醇等其他试剂均是分析纯三
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:XB-C 18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲
醇:0.4%磷酸溶液为45?55;检测波长为340nm;体积流量为1.0mL /min;柱温为30℃;理论塔板数按芦丁峰计算,应不低于8000三
2.2 对照品溶液的制备
用电子天平精密称取芦丁对照品4.0mg 放到50mL 的容量瓶中,加50%甲醇溶液溶解并稀释到容量瓶的刻度线,配制成
228 第12卷 第5期 2010 年 5 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 12 No. 5 May，2010 桑叶为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥 叶，味苦甘、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功能，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等症。在《中华人民共和国药典》 2005版中[1] ， 桑叶中芦丁的含量测定采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作重复性差，对实验设备要求相对较高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。 1 仪器 试剂和药材 1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC-10A，日本）， KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 1.2 试剂 甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析纯。 1.3 药材 桑叶经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶。 2 实验方法 2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相，检测波长为358nm，流速： 1mL·min -1 。理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。芦丁与相邻成分色谱峰的分离度应不小于1.5。见图 1~2。图1 芦丁对照品溶液HPLC 色谱图 图2 桑叶供试品溶液HPLC 色谱图 2.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 10.32mg，置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL 含0.1032mg 的溶液，作为芦丁对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 精密称定桑叶1g, 置25mL 容量瓶中，甲醇超声提取30min，放冷，加甲醇至刻 HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量 周美环1，赵书楷1，陈 淼2，张东方3 （1.沈阳东北大药房连锁店，辽宁 沈阳 110023；2.神威药业有限公司，辽宁 沈阳 110003；3.中国医科大学药学院，辽宁 沈阳 110001） 收稿日期：2009-10-05 作者简介：周美环（1975-），女，辽宁大连人，工程师，学士，主要从事药品质量管理。通讯作者：张东方（1975-），男，辽宁朝阳人，副教授，博士，研究方向：中药复方研究及新药开发。E-mail: syzdf@https://www.doczj.com/doc/83592427.html,。 摘 要：目的：在《中华人民共和国药典》中，桑叶中芦丁的含量测定方法采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作 重复性差，对实验设备要求高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。方法：采用HPLC 法，以甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相等度洗脱，以建立芦丁的含量测定方法。结果：采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量稳定性良好，精密度良好，重复性良好，加样回收率良好，芦丁含量为0.46%~0.49%。结论：采用HPLC 等度洗脱测定桑叶中的芦丁方法可行。 关键词：桑叶；HPLC；芦丁 中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 05- 0228- 02 Content of Rutin from Follium Mori is Determined by HPLC ZHOU Mei-huan 1, ZHAO Shu-kai 1, CHEN Miao 2, ZHANG Dong-fang 3 （1.Shenyang North-East Drug Store Chain, Shenyang 110023, Liaoning, China; 2.Shenwei Pharmaceutical Company, Shenyang 110003, Liaoning, China; 3. College of Pharmaceutical Science, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China） Abstract： Objective : Content of rutin from Follium Mori is determined by HPLC in China Ph.，but gradient elution is difficult to repeat and equipment is not public. Methods : HPLC was used to determined content of rutin from Follium Mori, and its mobile phase is methanol-acetonitrile-acetic acid -water（15：10：2.6：72.4）. Results : Stability, Precision, repetition of HPLC all were better .Content of rutin was 0.46%~0.49%. Conclusion : The content determination of rutin from Follium Mori are feasible. Key words：Follium mori; HPLC; rutin DOI ：10.13194/j.jlunivtcm.2010.05.230.zhoumh.097
题目: 槐米中芦丁的提取及含量测定
目录 摘要 (3) 关键词 (3) 前言 (3) 1 槐米的简介 (3) 2 芦丁的简介 (4) 1 实验材料、仪器与试剂 (5) 1.1 实验材料 (5) 1.1 实验仪器 (5) 1.2 实验试剂 (5) 2 实验原理及实验条件 (5) 2.1 实验相关原理 (5) 2.2 实验条件的选择 (7) 3实验方法和结果 (7) 3.1芦丁的提取 (7) 3.2芦丁的精制 (7) 3.3芦丁的鉴定 (7) 3.3.1呈色反应 (7) 3.3.2薄层色谱检识 (8) 3.4芦丁的含量测定 (8) 3.4.1对照品溶液的配制 (8) 3.4.2标准曲线的制备 (9) 3.4.3样品测定 (10) 3.4.4样品稳定性试验 (10) 3.4.5加样回收率实验 (10) 4 讨论与小节 (11) 5 参考文献 (11) 6综述 (12)
槐米中芦丁的提取及含量测定 摘要：目的：测定槐米中芦丁的含量，掌握芦丁的提取工艺。方法：采用碱提酸沉法获得芦丁粗提物，利用多次碱提酸沉法获得较纯的芦丁，再通过显色实验以及薄层色谱鉴定槐米提取液中的芦丁，并通过标准曲线法测定提取物中芦丁的含量。结果：吸光度与标准溶液的浓度呈良好的线性关系，回归方程为A=30.1081C+0.0184,采样率为96％，没有太大的区别。结论：该方法易于操作，实验原理比较简单，薄层色谱与分光光度相结合实现了槐米提取液中芦丁的鉴定与含量测定。 关键词：槐米芦丁碱提酸沉法含量测定 Abstract:Objective: to determine the content of luding in acacia and the extraction process of luding.Methods: alkali, acid sinking method to obtain crude extract rutin using multiple alkali acid sinking method to obtain a more pure rutin, again through the color experiment and TLC identification of rutin in the sophora japonica extract, and through the standard curve method for determining the content of rutin in extracts.Results: the concentration of standard solution and absorbance had good linear relationship, the regression equation A = 30.1081 + 0.0184 C, R = 0.9997, the sampling rate is 96%, not much difference.Conclusion: this method, easy to operate, the experiment principle is simple, thin layer chromatography combined with a spectrophotomet Key Words：Sophora japonica rutin alkali extraction and acid precipitation content determination
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量 李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000） 摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。方法采用Zorbox SBC18 色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。 结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。结论本法结果 准确，重复性良较好，方法简便可行。 关键词：芦丁；槲皮素；HPLC Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China） ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid. KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC 芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。主要用于防治高血压病的辅 助治疗。同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。现行卫生部药品标准采用紫外分 光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲 皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。
2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。弄成碎末，加水两次煎熬后提取，浓缩，添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-，添加甲醇溶解，离心，取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a 2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克，精密称取，置于SOmI瓶中，加70%乙醇溶解并稀释到刻度，得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照 品溶液。 2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备 2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中，均加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度，摇匀，放置15分钟。以相应试剂为空自，在400一800 nm 范围内进行光谱扫描，得510 nm处为可见最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度，得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。 2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。以甲醇作为空自试剂参照，在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描，得359nm处为紫外最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度，得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。 2. 4紫外一可见分光光度法测定中药复方总黄酮含量 2. 4. 1可见分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，加甲醇到刻度，再取1. SOmI置于25 ml容量瓶中，加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的Al (N03) 3溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml，再加水到刻度，摇匀，放置巧分钟。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 2. 4. 2紫外分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，再取1. SOmI 置于25 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 3.结果 比较可见分光光度法与紫外分光光度法测定全方与缺药的黄酮含 量，如表1所示。结果表明，可见分光光度法测定的中药复方总黄酮含量
实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量 一、实验目的 1 ．理解反相色谱的原理和应用。 2 ．掌握外标定量方法。 二、实验原理 芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。 高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。 三、实验试剂、仪器及设备 仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。 样品:桑叶、芦丁标准品。 试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。 四、实验内容 1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μ g) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。 2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。 3. 色谱测定 用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定
新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 新乡医学院化学教研室年月日
实验分光光度法测定芦丁的含量 一、实验目的 1．掌握比色分析的一般操作方法； 2．学习分光光度计的使用方法。 二、实验原理 分光光度法定量分析分为单组分定量分析，多组分定量分析，本实验是单组分定量分析，单组分定量分析方法包括吸光系数法、校正曲线法、对照法等，分析中最常用的是校正曲线法。校正曲线法：先配制一系列不同浓度的标准溶液，然后在选定的分析条件下测定吸光度，然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，这条直线称为校正曲线，在相同的测定条件下，测得样品溶液的吸光度，通过校正曲线就可以求出样品的浓度了。 本实验通过校正曲线法测定芦丁的含量，芦丁溶液的颜色较浅。不能直接用分光光度法进行测定，那么，需要用显色剂将其变为有颜色的溶液，芦丁与Al3+在亚硝酸钠碱性溶液中生成红色配合物，该红色配合物最大吸收波长在510nm，所以可以在510nm测定吸光度。 三、仪器与试剂 721型分光光度计，容量瓶；芦丁标准品，60%乙醇，亚硝酸钠溶液（1:20），硝酸铝溶液（1:10）， 1 mol?L-1氢氧化钠。 四、实验步骤 1．标准溶液的制备 取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50mg精密称定，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴上微热，使溶解，放冷后用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。 2．绘制标准曲线 精密吸取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00mL，分别置于50mL容量瓶中，各加60%乙醇使成5.0mL，各精密加入亚硝酸钠溶液（1:20）0.5mL，摇匀，放置6分钟后，加硝酸铝溶（1:10)1.5mL，摇匀，放置6分钟，加1 mol?L-1氢氧化钠试液4mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。在510nm 波长下测定各溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。 3．样品测定
实验三十六标准曲线法测定芦丁含量 一、目的要求 1．掌握标准曲线制备的方法。 2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。 二、实验原理 显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量等条件。 显色法的定量方法可采用标准曲线法。 三、仪器与试剂 1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。 2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。 四、实验内容与步骤 1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。 2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的吸光度。 五、注意事项 1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。 2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，以利反应完全。
A.1芦丁含量的测定 A.1.1 试剂和溶液 a) 甲醇:色谱级 b) 1%的冰醋酸溶液 c) 芦丁标准品 A.1.2 仪器和设备 高效液相色谱仪，带紫外检测器。 A.1.3 参考色谱条件 a) 色谱柱：C18柱，或其他等效的色谱柱。 b) 流动相：甲醇：1%冰醋酸溶液=32：68，用 0.45μm 滤膜过滤后备用。 c) 进样量：10μL 。 d) 检测波长：257nm 。 A.1.4 分析步骤 A.1.4.1 标准品的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲醇制成每1mL 含0.1mg 的溶液。 A.1.4.2 试样液的制备 精密称定样品10mg ，置100mL 容量瓶中，加适量的甲醇，超声溶解30分钟，冷却后用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤后上样。 A.1.4.3 测定 分别精密吸取标准品溶液和试样液各10μL ，注入液相色谱中，记录色谱图。重复进样两次。 A.1.5 结果计算 根据供试品与标准品的峰面积与浓度的比值，计算试样中含芦丁的百分含量。 P C A C A ???11 …………………………（A.1） 式中： C 1——标准品的浓度，mg/mL ； A ——试样的峰面积值，mV ； C ——试样的浓度，mg/mL ； A 1——标准品的峰面积值，mV ； P ——标准品的百分含量。
1、色谱柱：C 柱； 18 2、检测波长：350nm； 3、流速：1.0 mL/min； 4、流动相 先配制0.5%磷酸水； A：50 mL乙腈加入磷酸水至1 L； 进样：10μl 称样量：取25mg标准品用80%甲醇溶解定容至50ml，微孔滤膜过滤后取滤液进样。