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紫苏叶中总黄酮超声波辅助提取工艺的初步研究

紫苏叶中总黄酮超声波辅助提取工艺的初步研究
紫苏叶中总黄酮超声波辅助提取工艺的初步研究

紫苏叶中总黄酮超声波辅助提取工艺的初步研究

摘要为充分利用紫苏叶资源,研究超声波辅助提取紫苏叶总黄酮的工艺条件。本文以总黄酮含量为指标,采用单因素试验和正交试验研究超声波辅助提取紫苏叶中总黄酮的工艺条件。结果表明,影响紫苏叶总黄酮超声波辅助提取效果的因素按其影响程度大小依次为:水浴温度>超声时间>乙醇浓度>料液比。紫苏叶总黄酮最佳提取工艺为:乙醇体积分数30%,料液比1:40,超声时间70 min,水浴温度80℃。此条件下制的的粗提液总黄酮含量为20.31 mg/g,回收率为95.97%。

关键词紫苏叶总黄酮超声波定性

The Pilot Study on Process of Extracting Total Flavonoids from Perilla Leaf by

Ultrasonic Wave Cooperated Method

Abstract The research aimed to study an extraction technology for total flavonoids from perilla leaves. The single factor test and the orthogonal test were taken to study the extraction conditions of total flavonoids by ultrasonic wave cooperated method through measuring the content of the total flavonoids. The effects of each factor on yield rate of total flavonoids in order was water-bath temperature >time with ultrasonic wave >the concentration of ethanol >the ratio of material to liquid. The optimum extracting conditions were theconcentration of ethanol of 30% ,time with ultrasonic wave of 70 min, ratio of material to liquid of 1:40(g/mL), water-bath temperature of 80℃. The optimized method was efficient, and the rate of total flavonoids extracted was up to 20.31 mg/g and the rate of recovery was 95.97%.

Keywords perilla leaves total flavonoids extraction ultrasound-assisted extraction determine the nature

目录

0引言 (1)

0.1 紫苏叶的研究进展 (1)

0.1.1 紫苏叶的化学成分 (1)

0.1.2 紫苏叶的药理作用 (1)

0.1.3 紫苏叶开发与应用 (2)

0.2黄酮类化合物 (3)

0.2.1 黄酮类化合物的结构与分类 (3)

0.2.2黄酮类化合物的生理活性[10] (4)

0.2.2黄酮类化合物的特征反应[11] (4)

0.2.2黄酮类化合物的提取方法[11] (4)

0.3课题提出及研究思路 (4)

1. 材料与方法 (4)

1.1 材料与仪器 (5)

1.1.1 原料: (5)

1.1.2 试剂: (5)

1.1.3 仪器 (6)

1.2 实验方法 (7)

1.2.1 芦丁标准曲线的绘制 (7)

1.2.1.1标准品和样品波长的确定 (7)

1.2.1.2 芦丁标准曲线的绘制 (7)

1.2.2超声波辅助提取紫苏叶总黄酮工艺流程 (8)

1.2.3 超声波辅助提取紫苏叶总黄酮的单因素试验设计 (8)

1.2.4紫苏叶总总黄酮含量的测定 (9)

1.2.5紫苏叶总黄酮提取条件的正交试验设计 (9)

1.2.6验证试验 (10)

1.2.7精密度试验 (10)

1.2.8回收率试验 (10)

1.3紫苏叶总黄酮粗提液初步定性试验 (10)

1.3.1与浓氨水反应试验 (11)

1.3.2与碱反应试验 (11)

1.3.3三氯化铁试验 (11)

1.3.4铅盐沉淀试验 (11)

1.3.5与浓硫酸反应试验 (11)

1.3.6与硼酸反应试验 (11)

2. 结果与讨论 (11)

2.1标准曲线的测定试验结果 (11)

2.1.1标准品和样品测量波长的确定 (12)

2.1.2芦丁标准曲线 (12)

2.2紫苏叶中总黄酮的提取条件试验结果 (13)

2.2.1超声波辅助提取紫苏叶总黄酮的单因素试验结果 (13)

2.2.2 超声波辅助提取紫苏叶总黄酮工艺条件的正交试验结果 (15)

2.2.3 验证试验结果 (18)

2.2.4 精密度实验结果 (18)

2.2.5回收率试验结果 (19)

2.3紫苏叶总黄酮粗提液定性试验结果 (19)

2.3.1与浓氨水反应试验结果 (19)

2.3.2与碱反应试验结果 (20)

2.3.3三氯化铁试验结果 (20)

2.3.4铅盐沉淀试验结果 (21)

2.3.5与浓硫酸反应结果 (22)

2.3.6与硼酸反应的结果 (22)

结论 (23)

致谢语 (24)

参考文献 (24)

0引言

紫苏(Perilla)系唇形科一年生草本植物,原产于喜马拉雅山及我国中南部地区。世界上主要分布于不丹、印度、缅甸、印度尼西亚、日本、朝鲜、韩国和前苏联,近年来美国、加拿大也开始商业性栽培。紫苏作为多用途的经济植物在我国已有2000多年的栽培历史,它是我国传统的药食两用植物,亦是国家卫生部首批颁布的既是食品又是药品的60种中药之一,资源遍布全国20个省份[1]。近年来,紫苏在医药、食品和工业领域均有着重要的开发价值[2],受到国内外的广泛关注。

0.1紫苏叶的研究进展

0.1.1 紫苏叶的化学成分

现代科学研究表明,紫苏叶含有蛋白质、黄酮类、苷类、酚酸类、色素类、精油等化学成分[3]。紫苏嫩茎叶含蛋白质13.11%,富含包括成人所必需的8种氨基酸和儿童必需的10种氨基酸。从紫苏中分离出16种黄酮类化合物,其中有5种花色素苷、2种黄酮及9种黄酮苷。黄酮类化合物具有调节血脂、抗氧化等保健作用。紫苏中的苷类包括萜苷、苯丙素苷、氰苷、茉莉苷和苯戊酸苷等成分。紫苏中的色素主要是花色素苷,还含有丰富的类胡萝卜素。紫苏叶经水蒸气蒸馏可得紫苏精油,含量为0.3%-0.7%[4],其成分因品

也较丰富。另种、产地等因素不同,差异较大。除了上述主要的成分,紫苏中维生素B

2

据报道,从紫苏叶中还分离得到干扰素诱导剂—1种磷糖蛋白及黄嘌呤氧化酶阻碍剂。叶中尚含有Na、Mg、Fe、Zn、Cu、Mn、Pb、Hg、Cd、Ni、Sn等多种矿质元素。

0.1.2 紫苏叶的药理作用

紫苏的药理作用主要有预防和抑制肿瘤作用、解热作用、抑菌作用、止呕作用、抗炎作用、止血作用、对中枢神经作用、降血糖作用、抗过敏作用、止咳平喘作用及增强

免疫力功能等。

紫苏叶中的紫苏醇有预防乳腺癌、肺癌、肝癌、神经瘤和白血病的作用,可以抑制老鼠的癌细胞增殖。据王静珍[5]等报道,给家兔耳缘经脉注射伤寒副伤寒甲、乙三联菌苗0.5 mL/kg后,立即灌胃给药,结果表明12.5 g/kg紫苏水提浸膏和3.65 g/kg紫苏挥发油均有明显解热作用,而且解热效果优于阿司匹林;而25 g/kg紫苏水提浸膏、3.56g/kg 紫苏挥发油分别灌胃给药后,给家鸽经脉注射0.02 g/kg洋地黄酊,结果表明,对洋地黄酊引起的家鸽呕吐均有抑制作用。紫苏在体外对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、肺炎杆菌、枯草杆菌及蜡样芽胞杆菌等有明显的抑制作用。日本的研究还表明,紫苏水提取液可以抑制肿瘤坏死因子(TNF)生成而起抗炎作用,并且有益于人体免疫机能[6]。临床和动物学实验中发现紫苏可缩短凝血时间和凝血酶原时间,从而具有止血功能。药理毒性实验证明,紫苏中的紫苏酮会产生神经毒抑制中枢作用,故可用于生物农药的生产。而紫苏醛和植物甾醇有协同作用,可使小鼠睡眠时间延长而现实镇静作用。紫苏苷A、C具有抑制醛糖氧化酶的作用,而醛糖氧化酶抑制剂在糖尿病综合症治疗中能起重要作用[7]。紫苏水提液可以减轻哑唑酮引起的过敏,黄丽[8]等研究结果表明,紫苏叶中抗过敏活性物质主要是黄酮类成分,提取率可达1.24%。紫苏叶的一米提取物能增强细胞的免疫功能,而乙醇提取物和紫苏醛有免疫抑制作用。紫苏能减少支气管分泌物,缓解支气管痉挛,临床上用紫苏复方治疗上呼吸道感染疾病有明显效果。

此外,紫苏叶的酚类成分是很好的抗氧化物质。紫苏叶提取物具有一定的消除自由基、防止过氧化、阻断亚硝酸受类物质的作用,对于人类防衰老、保健有很独特的意义。

0.1.3 紫苏叶开发与应用

紫苏茎叶中含有的粗纤维,对糖尿病、肥胖症、高血脂等现代病都有一定的防治作用,且其中丰富的类胡萝卜素可以减少患癌症、心血管病、眼病等疾病的危险。利用紫苏中不同的营养物质和活性物质加工生产果脯、保健饮料、点心、饼干、植物油等功能性保健品,前景十分广阔。目前我国首先利用紫苏叶制取了紫苏叶汁保健饮料、紫苏胡萝卜素微胶囊,并得到推广应用。

由于紫苏自古以来是药食同源植物,近年来利用红色紫苏叶提取花色素苷作为食用色素的逐渐增多。日本Sai-Fi化工有限公司已开发出提取紫苏叶色素的工业生产技术。它们均适用于食品、药品和化妆品,已成为商业色素。

紫苏精油可以作为皂用香精的配基组分,可用于食品及化妆品的加香[9]。特别是其中的紫苏醛具有特殊诱人的香气,利用现代科技方法提炼纯化可生产出高贵的香精物质。

紫苏精油的抑菌、防腐能力明显优于尼泊金酯和苯甲酸,且具有用量小、安全性高、不受pH制约等优点,并兼有防腐和风味的双重效果。因此可以用于食品、化妆品及药品的防腐剂。

紫苏精油可制取紫苏醛反苏醛反肟(1,8-对二烯-7-肟),一种超级甜味剂[10],其甜度为蔗糖的2000倍,对人体无毒副作用,可用于卷烟和食品工业。

0.2黄酮类化合物

黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物,是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物。它广泛存在于高等植物的根、茎、叶、花、果实等中,不仅数量种类繁多,而且结果类型复杂多样。黄酮类化合物因其独特的化学结构而对哺乳动物和其它类型的细胞具有许多重要的生理、生化作用。

0.2.1 黄酮类化合物的结构与分类

黄酮类化合物(flavonoids),又名生物类黄酮化合物(bioflavonoids),泛指两个具有酚羟基的苯环(A和B)通过中央三碳链相互连结而成的一系列化合物(图1)。

图0-1 黄酮和异黄酮类化合物的母核结构[11]

依据中央三碳链的氧化程度,B环连接位置(2-位或3-位)以及三碳链是否成环等特点,可将主要的黄酮类化合物分为黄酮类、异黄酮类、查尔酮类、花色素类及黄烷酮类等[11]。

0.2.2黄酮类化合物的生理活性[12]

现代医学研究表明,黄酮类化合物具有多种生物活性和药理作用,如防癌抗癌作用、抗肿瘤作用、抗心血管疾病作用、抗骨质疏松作用、消除自由基和抗氧化活性、雌激素样与抗雌激素样作用、对酒精中毒的解毒作用和治疗酒依赖的作用等。

0.2.2黄酮类化合物的特征反应[13]

黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基以及γ-吡喃酮环有关。黄酮类化合物的特征反应主要有还原试验、金属盐类实际的络合反应、硼酸显色反应以及碱性试剂显色反应。这些特征反应都是因为黄酮类化合物特定的官能团或者特殊的结构而发生的,故通过这些特征反应,可以对黄酮类化合物进行初步定性。

0.2.2黄酮类化合物的提取方法[13]

黄酮类化合物的提取方法主要有系统溶剂提取法、有机溶剂提取法、热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、超声提取法、微波提取法、酶解法等。

0.3课题提出及研究思路

课题以紫苏叶为原料,用乙醇超声辅助提取紫苏叶黄酮类物质,并确定最佳提取工艺条件。为紫苏叶的综合利用探索了一条新的途径,主要研究内容为:

1.研究紫苏叶总黄酮超声辅助提取的基本工艺。

2.单因素试验初步研究确定提取紫苏叶总黄酮的工艺条件。

3.通过正交试验确定紫苏叶总黄酮超声辅助提取的最佳工艺。

4.通过黄酮类化合物的特征反应对提取液中的黄酮类物质进行初步定性。

1.材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 原料:

紫苏叶,采摘于厦门市集美大学生物工程学院灿英楼一楼。挑选出新鲜翠绿饱满的紫苏叶子,洗净后自然风干,后于60℃下在恒温干燥箱中烘干,用高速粉碎机粉碎后,经40目分样筛,粉末再于60℃烘干至恒重,于PET瓶中密封避光保存备用。

图1 紫苏叶及紫苏叶粉末

1.1.2 试剂:

(1)0.500mg/mL芦丁标准品:准确称取0.0544g芸香叶苷,三水(AR,国药集团化学试剂有限公司),用体积分数为30%的乙醇溶解,定容至100mL。

(2)20%、30%、40%、50%、60%、70%乙醇:以95%乙醇(国药集团化学试剂有限公司)加蒸馏水配制。

(3)10%硝酸铝:称取硝酸铝Al(NO

3)

3

·9H

2

O(AR,上海振欣试剂厂)8.8028g,用蒸馏

水溶解,定容至50 mL。注意应当天配制。

(4)5%亚硝酸钠:称取亚硝酸钠(AR,西陇化工股份有限公司)2.5g,用蒸馏水溶解定容至50mL,当天配制。

(5)4%氢氧化钠:称取氢氧化钠(AR,西陇化工股份有限公司)10g,用蒸馏水溶解,定容至250mL。

(6)浓氨水(AR,国药集团化学试剂有限公司)

(7)10% Na

2CO

3

:称取无水碳酸钠(AR,国药集团化学试剂有限公司)1.0g,用蒸馏水

溶解,定容至10 mL。

(8)1% FeCl

3:准确称取FeCl

3

·6H

2

O(AR,西陇化工股份有限公司)0.1667 g,用

蒸馏水溶解,定容于10 mL容量瓶中。

(9)乙酸铅Pb(CH

3COO)

2

·3H

2

O(AR,西陇化工股份有限公司)

(10)硫酸(AR,西陇化工股份有限公司)

(11)10%硼酸溶液:称取1.0g硼酸(AR,中国上海试剂总厂),用蒸馏水溶解,定容至10 mL。

1.1.3 仪器

试验所用的主要仪器见表1-1。

表1-1 仪器类型及制造商

仪器名称仪器型号制造商

高速药物粉碎机WK-1600A 青州市精诚机械有限公司

电子分析天平EL104 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司

电子天平SL600 上海民桥精密科学仪器有限公司电热恒温水浴锅SY-1-2 天津欧诺仪器仪表有限公司电热恒温鼓风干燥箱DHG-9146A 上海精宏实验设备有限公司

三频数控超声波清洗器KQ-300VDV 昆山市超声仪器有限公司

紫外可见分光光度计UV-2600 东南化学仪器有限公司

电热恒温鼓风干燥箱DHG-9146A 上海精宏实验设备有限公司高速离心机TDL-5-A 上海艾测电子科技有限公司

旋转蒸发器RE-52AA 上海亚荣生化仪器厂

循环水真空泵SHZ-Ⅲ上海亚荣生化仪器厂

冷冻干燥机RE-52AA 北京博医康实验仪器有限公司

其他所需仪器如下:

各种规格的烧杯、容量瓶,玻璃棒,比色管,量筒,锥形瓶,称量纸,洗耳球,药匙,移液管,长滴管,离心管,比色皿等。

1.2 实验方法

1.2.1 芦丁标准曲线的绘制

1.2.1.1标准品和样品波长的确定

用分析天平精密称取芦丁标准品0.0544 g,用30% 乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中,摇匀,得到芦丁标准溶液(0.500 mg/mL),同时用30%乙醇溶液提取紫苏叶总黄酮,得到紫苏叶总黄酮提取液。将芦丁标准溶液、紫苏叶总黄酮提取液及两者混合液分别取一定体积经亚硝酸钠-硝酸铝显色反应后,以30%乙醇溶液为参比,在紫外分光光度计于400-800 nm范围内进行扫描从而确定其最大吸收波长。

1.2.1.2 芦丁标准曲线的绘制

采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法[14],按表1-2加入不同体积的芦丁标准测定液,

再用30% 乙醇定容至4ml,再加入0.3 ml的5% Na

2NO

2

溶液,摇匀,静置6 min,后加

入10% Al(NO

3)

3

溶液,摇匀,静置6 min后加入2 mL 4% NaOH溶液,摇匀,以30% 乙

醇定容至10 mL,摇匀,静置15 min,以试剂为空白,在找出的波长下测得吸光度A。以芦丁质量浓度c为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。实验要求相关系数≥0.999。

表1-2 芦丁标准曲线的绘制试剂添加量表

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 芦丁标准液V(mL)0.00 0.40 0.80 1.20 1.60 2.00 2.40 2.80 质量浓度(mg/mL)0.000 0.020 0.040 0.060 0.080 0.100 0.120 0.140 30% 乙醇 4.00 3.60 3.20 2.80 2.40 2.00 1.60 1.20 5% Na2NO2(mL) 0.30

10% Al(NO3)3(mL) 0.30

4% NaOH(mL) 2.00

1.2.2超声波辅助提取紫苏叶总黄酮工艺流程

紫苏叶粉末→乙醇浸提,超声处理→恒温水浴1h→离心(4000 r/min,15 min)→上清液收集于圆底烧瓶中→旋转蒸发→烧杯分装→冷冻干燥→紫苏叶总黄酮粗提物准确称取0.5000 g紫苏叶粉末于50 mL离心管中按一定料液比加入浸提液,超声处理(25℃,100 kHz)一段时间,然后在一定温度水浴1h,离心(4000 r/min,15 min)15 min。将上清液转移至50 mL容量瓶并定容至刻度,摇匀,作为待测液。准确吸取2.00 mL待测液于10 mL比色管中,用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定总黄酮含量。

1.2.3 超声波辅助提取紫苏叶总黄酮的单因素试验设计

将制备得到的紫苏叶粉末,做室温下用乙醇超声辅助提取总黄酮的单因素实验。乙醇体积分数20%~70%,料液比1:10~1:60,超声时间10~110 min,水浴温度50~90 ℃。

1.2.3.1乙醇体积分数的影响

准确称取(1.1.1)中得到的紫苏叶粉末0.5000 g左右置于烧杯中,分别加15 mL体积浓度为20%,30%,40 %,50 %,60 %,70 % 的乙醇溶液。超声处理30 min,然后在60℃水浴中恒温1h进行提取。将提取液以4000 r/min离心15 min,取上清液,以其总黄酮提取率为指标,选出合适的乙醇浓度作为正交试验的考察条件。

1.2.3.2料液比的影响

准确称取(1.1.1)中得到的紫苏叶粉末1.5000,0.7500,0.5000,0.3750,0.3000,0.2500 g置于烧杯中,分别加入15 mL 体积浓度为50% 的乙醇溶液,即相当于料液比分别为1:10,1:20,1:30,1:40,1:50,1:60。超声处理30 min,然后在60℃水浴中恒温1h进行提取。将提取液以4000 r/min离心15 min,取上清液,以其总黄酮提取率为指标,选出合适的料液比作为正交试验的考察条件。

1.2.3.3超声时间的影响

准确称取(1.1.1)中得到的紫苏叶粉末0.5 g左右置于烧杯中,分别加入体积浓度为50% 乙醇,超声处理时间分别为10,30,50,70,90,110 min,然后在60℃水浴中恒温1 h进行提取。将提取液以4000 r/min离心15 min,取上清液,以其总黄酮提取率为指标,选出合适的超声时间作为正交试验的考察条件。

1.2.3.4水浴温度的影响

准确称取(1.1.1)中得到的紫苏叶粉末0.5 g左右置于烧杯中,分别加入体积浓度为50% 乙醇,超声处理30 min,然后分别在40,50,60,70,80,90 ℃水浴中恒温1 h

进行提取。将提取液以4000 r/min离心15 min,取上清液,以其总黄酮提取率为指标,选出合适的水浴温度作为正交试验的考察条件。

1.2.4紫苏叶总总黄酮含量的测定

采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法,取2.00 mL样品待测液于10 mL的比色管中,

再用30% 乙醇定容至4ml,再加入0.30 ml的5% Na

2NO

2

溶液,摇匀,静置6 min,后加

入0.30 mL的10% Al(NO

3)

3

溶液,摇匀,静置6 min后加入2.00 mL 4% NaOH溶液,摇

匀,以30% 乙醇定容至10.00 mL,摇匀,静置15 min,以试剂为空白,在所选的波长下测得吸光度A。将测得吸光度A带入标准曲线所得线性方程,求得总黄酮含量。

1.2.5紫苏叶总黄酮提取条件的正交试验设计

正交试验设计法(简称正交法),是统计数学的重要分支。它是以概率论数理统计、专业技术知识和实践经验为基础,充分利用标准化的正交表来安排试验方案,并对试验结果进行计算分析,最终达到减少试验次数,缩短试验周期,迅速找到优化方案的一种科学计算方法。它是产品设计过程和质量管理的重要工具和方法。

本实验选择影响紫苏叶中黄酮类物质提取的乙醇体积分数、料液比、超声处理时间和水浴温度4个因素作为考察因素,每个因素选择3个水平,编制因素水平,采用L

9

(34)正交表进行试验,以总黄酮提取率为考察指标。正交试验设计见表1-3。

表1-3 正交试验设计表

序号

A(乙醇体积分数)

% 误差项

B(料液比)

g/mL

C(超声时间)

min

D(水浴温度)

提取率

mg/g

1 1

2 1 1 1

2 1

3 2 2 2

3 1 1 3 3 3

4 2 2 1 2 3

5 2 3 2 3 1

6 2 1 3 1 2

7 3 2 1 3 2

8 3 3 2 1 3

9 3 1 3 2 1

K1

K2

K3

K

1

K

2

K

3

R

1.2.6验证试验

为了验证选定最佳提取工艺,准确称取0.5000 g紫苏叶粉末5份,以正交试验得出的最佳提取工艺进行5次平行试验,分别按照(1.2.4)中的方法进行总黄酮含量的测定。

1.2.7精密度试验

为了验证分光光度法所用仪器测定紫苏叶总黄酮含量的精密度,以正交试验得出的最佳提取工艺进行一次试验,然后分别准确量取2.00mL待测液于5个10 mL比色管中,分别按照(1.2.4)中的方法进行总黄酮含量的测定。

1.2.8回收率试验

准确称取已知总黄酮含量的紫苏叶粉末5份,每份0.5000 g,以正交试验得出的最佳提取工艺进行5次平行试验,然后分别准确吸取2.00mL待测液于5个10 mL比色管中,并在每管加入0.20 mL 0.500 mg/mL芦丁标准溶液,然后分别按照(1.2.4)中的方法进行总黄酮含量的测定,计算回收率。

1.3紫苏叶总黄酮粗提液初步定性试验

1.3.1与浓氨水反应试验

取紫苏叶提取液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5 min,立即在紫外光下观察。

1.3.2与碱反应试验

取紫苏叶提取液1 mL,加入10% Na

2CO

3

5滴,轻轻摇匀,观察溶液变化。

1.3.3三氯化铁试验

取紫苏叶提取液1 mL,滴加1% FeCl

3

溶液,轻轻摇匀,观察溶液变化。

1.3.4铅盐沉淀试验

取紫苏叶提取液2 mL,滴加乙酸铅试剂,轻轻摇匀,然后静置一会儿,观察溶液变化。

1.3.5与浓硫酸反应试验

取紫苏叶提取液5 mL于试管中,加入1 mL浓硫酸,轻轻摇匀,观察颜色变化。

1.3.6与硼酸反应试验

取紫苏叶提取液5 mL放入试管中,加入10%硼酸溶液5 mL,轻轻摇匀,观察颜色变化。

2.结果与讨论

2.1标准曲线的测定试验结果

2.1.1标准品和样品测量波长的确定

从图2-1可以看出,空白对于样品测定的影响较小,芦丁标准品、紫苏叶乙醇提取液、标准液和提取液混合液的最大吸收波长均在500nm附近,因此选择500nm为测量波长。

图2-1 空白、芦丁标准溶液、紫苏叶乙醇提取液、混合液四种吸收曲线

2.1.2芦丁标准曲线

以吸光度(A)为横坐标,芦丁标准品含量M(mg/mL)为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程及相关系数如图2-2所示。

图2-2 芦丁标准曲线

由标准工作曲线可以看出,标准工作曲线的线性关系较好,相关系数为0.9991,达到了测定的实验要求。

2.2紫苏叶中总黄酮的提取条件试验结果

2.2.1超声波辅助提取紫苏叶总黄酮的单因素试验结果

2.2.1.1 乙醇体积分数的影响

图2-3 乙醇体积分数对提取效果的影响

称取一定量紫苏叶的粉末,料液比为1:30,25℃下,选择不同体积分数的乙醇溶液作为提取剂,超声处理30 min,后置于恒温水浴锅中在60℃水浴浸提1 h,结果如图2-3所示。随着乙醇体积分数增加,紫苏叶总黄酮提取率先增大后减小,当其达到40%,总黄酮提取率最高,然后下降,原因可能是其他物质溶解度随着乙醇体积分数的增大而增大,参与显色反应进而影响最终的测定。因此,乙醇体积分数选在20%-40%之间为宜。

2.2.1.2 料液比的影响

图2-4料液比对提取效果的影响

称取一定量紫苏叶的粉末,乙醇体积分数30%,选择不同的料液比(m/V),在25℃下对紫苏叶粉末进行超声处理30 min,后置于恒温水浴锅中在60℃水浴浸提1 h。由图2-4所得结果显示,随着料液比的增大,紫苏叶总黄酮提取率先增大后减小,因此,液料比选取1:20-1:40为宜。

2.2.1.3 超声提取时间的影响

图2-5 超声时间对提取效果的影响

称取一定量紫苏叶的粉末,料液比为1:30,乙醇浓度50%,25℃下,以不同超声时间对紫苏叶粉末进行超声处理,后置于恒温水浴锅中在60℃水浴浸提1 h。由图2-5可知,

随着提取时间的延长,紫苏叶总黄酮提取率不断增加,达到70min左右时总黄酮提取率最大,超过70 min反而降低,原因可能是由于提取时间的延长,造成紫苏叶粉末中其他醇溶性物质同时被溶解提取,这些物质的存在影响实验结果的准确性,因此超声时间选取在30-70min为宜。

2.2.1.4水浴温度的影响

图2-6 水浴温度对提取效果的影响

称取一定量紫苏叶的粉末,乙醇体积分数在50%,料液比(m/V)1:30,在25℃下对紫苏叶粉末进行超声处理30 min,后选择不同的水浴温度水浴浸提1 h。由图2-6所得结果显示,随着水浴温度的增大,紫苏叶粉末中黄酮类化合物的提取效果先是增大后减小,因此,水浴温度选取60-80℃为宜。

2.2.2 超声波辅助提取紫苏叶总黄酮工艺条件的正交试验结果

本实验采用正交试验设计,按照表2-1的因素水平建立L

(34)正交表,采用极差

9

法,结果见表2-2。同时,对试验因素进行显著性分析,结果见表2-3。

表2-1 正交试验因素水平设计

水平

A(乙醇体积分数)

% B(料液比)

g/mL

C(超声时间)

min

D(水浴温度)

1 30 1:20 30 60

2 40 1:30 50 70

3 50 1:40 70 80 表2-2 正交试验结果

序号乙醇浓度(%)误差项

料液比

m/V 超声时间

(min)

水浴温度

(℃)

提取率

mg/g

1 30

2 1:20 30 60 9.91

2 30

3 1:30 50 70 11.73

3 30 1 1:40 70 80 19.95

4 40 2 1:20 50 80 14.70

5 40 3 1:30 70 60 10.26

6 40 1 1:40 30 70 10.85

7 50 2 1:20 70 70 12.02

8 50 3 1:30 30 80 15.76

9 50 1 1:40 50 60 9.05 K1 41.59 39.84 36.64 36.52 29.22

K2 35.81 36.64 37.75 35.48 34.60

K3 36.83 37.75 39.84 42.23 50.42 1

K13.86 12.21 12.17 9.74 2

K11.94 12.58 11.83 11.53 3

K12.28 13.28 14.08 16.81

R 1.93 1.07 2.25 7.07

中草药叶下花总黄酮提取方法

中草药叶下花总黄酮提取方法 作者:杨发忠,杨斌,杨德强,陈厚琴,代红娟,张丽,李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等,研究黄酮种类,考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物;所考察的影响因素中,对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数>温度>时间>固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃,提取时间180 min,固液比1∶80),在此提取条件下,提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the

黄酮的提取实施方案

黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1材料 1.2试剂 芦丁,无水乙醇,氢氧化钠,石油醚,硝酸铝,三氯化铁,三氯化铝,浓氨水,浓盐酸,镁粉,亚硝酸钠(以上均为国产分析纯),实验所用水均为蒸馏水。 1.3实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平(感量0.0001g) 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒(100ml,10ml)25ml比色管移液管小试管白瓷板圆底烧瓶100m 容量瓶 锥形瓶 2实验原理 2.1提取原理 溶剂提取原理游离黄酮黄酮昔备注 乙辱溶解范围广+ + (甲醇)著■甘元均可溶(90-95%) (6M)甲醇毒性大 沸水多糖昔易于水+ 成本低、安全, 水溶性杂质多 臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇酚强基的酸性 + +石灰水除杂质效果好

分离依据 之间的极性(分配系数K )差异 分离工艺 回收 回收 单糖瞽 多糖昔 誓元 爸游离黄酮的乙瞇液 2 黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元 )溶剂萃取法 2.2分离方法及原理 (二)pH 梯度萃取法 分离依据: 游离黄酮类化合物的酸性差异(见黄酮酸性规律) 分离工艺: 依次以 5%NiiH0h . 5%Na2C0 0. 2%N SL OH. 4%NaOH^取 5%NaHCO3< 5%Na2CO3液 0. 2KNaOH 液 4%NaOH 液 母液 (脂溶性杂石油駆液 乙豔液 乙酸乙酯 (脂溶性杂质)| | 丄酸化 水饱和正丁醇 母液 (水溶性杂质) 减压回收 原料的提取苹缩液(水溶液) 依次以石油耿、乙馳、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取

3 实验部分 3.1 原料的预处理 金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎 3.2 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶液配制成100.00mL 的溶液,备用。 3.3 测定波长勺选择 精确移取芦丁标准溶液0.50mL, 置于25.00mL 勺比色管中,用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处,加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀,放置10min; 加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀,放置10min, 再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min, 加入85%勺乙醇溶液至刻度,摇匀,10min后在460?560nm处测定吸光度,⑷(以试剂样品做空白)选择最大吸收波长。 3.4 芦丁标准曲线勺绘制 精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中,用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处,加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀,放置10min; 加入1 0%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀,放置10min, 再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度,摇匀,10min后于波长500nm处测定吸光度,(以第一瓶为空白溶液)然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图,绘制标准曲线。 3.5 黄酮类化合物的特征性实验[5]-[6] 在一定条件下对提取的黄酮类化合物进行特征性实验,具体内容如 下: (1)盐酸一镁粉反应:取 1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀,再加入浓盐酸数滴(1次加入),观察其泡沫颜色。(2)三氯化铝反应:取提取液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液, 吹干,观察颜色变化。(3)三氯化铁反应:取几滴提取液于白瓷板上,滴加1%三氯化铁乙醇溶液, 观察其颜色。(4)浓氨水反应:取乙醇提取液点在滤纸上,将滤纸在浓氨水上方熏0.5min ,观察 其颜色变化。 3.6 单因素实验 2.6.1 较佳提取剂质量分数的确定 准确称取3g 处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中,分别用无水乙醇、95%、85% 80%、 75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕,用与提取剂的 质量分数相同的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包,将其定容于100:00mL 容量瓶中,然后精确吸取 0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中,用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处,加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀,放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL ,混匀,放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度,摇匀,10min 后 于波长500nm处测定其吸光度,同时做三组平行实验。

总黄酮的提取方法

总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上,兼有气体和液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质,利用酶反应的高度专一性,破坏细胞壁,使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物,黄酮类物质的提取率为91%,提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取,黄酮得率分别是%,% 和%,和传统的方法相比,游离酶法的总黄酮得率提高了81%。

黄酮提取工艺

黄酮提取工艺 2-1 微波辅助提取金银花总黄酮工艺流程图 3.实验方法 3.1 标准曲线的制备 3.1.1最大吸收波长的选择方法 以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显色剂,分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线,在510nm处均有1个强吸收峰,因此选择510nm为测定波长。 3.1.2对照品溶液的制备方法 精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中,加适量甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀备用。 3.1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0,1,2,3,4,5mL,分别置10mL容量瓶中,加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL,振荡摇匀,放置6min;再加入10%硝酸铝0.3mL,振荡摇匀,放置6min;最后加入4%氢氧化钠试液4mL,加甲醇定容至刻度,摇匀,放置15min。采用分光光度法,在510nm处测定吸光度,以对照品量(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

3.2 微波提取单因素实验方法 分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,乙醇浓度,固液比对提取效果的影响 3.3 提取工艺正交试验设计方法 系统考察微波提取法的工艺参数,根据已有的资料及实际情况,选用微波辐射功率(A),辐射时间(B),乙醇浓度(C),固液比(D)作为考察因素,以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标,选用L9(34)正交表设计,得到供试液。 3.4微波辅助提取法与乙醇回流法比较 比较两种提取方法的处理时间和液固比对总黄酮提取量的影响。传统乙醇回流法提取总黄酮的所需时间比微波辅助提取法提取长得多,且金银花总黄酮提取量比较低;而微波辅助提取的总黄酮较乙醇回流法高。比较此两种方法在最佳条件下的总黄酮含量。 3.5总黄酮含量测定方法 取0.5mL液,加入5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀,放置6min加入10%硝酸铝0.3mL荡摇匀,放置6min入4%氢氧化钠试液4mL,30%(V/V)乙醇定容至刻度,摇匀,放置15min分光光度法,在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。 4. 结果 4.1 标准曲线绘制 表4-1 标准曲线表 编号 0 1 2 3 4 5 芦丁浓度 0 0.02 0.03 0.05 0.07 0.09 (mg/mL) 吸光度 0 0.206 0.381 0.548 0.738 0.911 (OD)

举例说明黄酮的提取分离方法

举例说明黄酮的提取分离方法 组长:崔宁 组员:翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶:采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量,发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草:过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80~95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %~95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2~4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶:使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为:乙醇的浓度为70%,料液比为1:15,在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹:使用无水乙醇为提取剂,按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2~4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶:从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜:生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花:各取5g干菊花4份, ,在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低;pH为11时,虽然黄酮

银杏叶中黄酮的提取原理及方法

银杏叶中黄酮提取及含量测定 一、实验目的 提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。 二、实验原理 银杏系银杏科银杏属落叶乔木,银杏叶中含有多种生理活性成分,其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质,具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此,将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用,这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法,成本低但浸取率低;有机溶剂浸取法中,乙醇浸取的效率高且无毒,是目前采用较多的方法;韩玉谦等采用超临界流体萃取法,在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分,银杏黄酮回收率为84 . 4 % ,是常规萃取法回收率的2倍多;乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取,建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。 三、实验仪器和试剂 材料:银杏叶粉末50g 试剂:标准芦丁样品,无水乙醇(600ml),50mlAl(NO3)3(0.1mol/L),乙醚,5%NaNO2溶液,10%AL(NO3)3,4%NaOH溶液。

仪器:紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶(100ml1个、50ml1个、10ml6个)、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。 四、实验步骤 1.1提取银杏叶中总黄酮 (1)将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉(2)准确称取10.0g,置于索氏提取器中,按下列条件加热回流提取:乙醇浓度80%,料液比1:20(g/ml),回流温度85℃,回流时间2 h,平行进行1~3次实验。 (3)将圆底烧瓶中提取液倒入烧杯,加入一倍蒸馏水,再加入相同量的乙醚,混合均匀,倒入分液漏斗中,静置20min,分层后,收集下层液体。 (4)减压蒸馏,回收乙醇,得到淡黄色黏液,干燥得到银杏叶中总黄酮提取物。 1.2银杏叶中总黄酮含量测定 (1)芦丁标准溶液的配置:称取0.0100g芦丁标准品,放入烧杯中,加入80%的乙醇溶液使其溶解,置于100ml的容量瓶中,制成0.1g/L的芦丁标准溶液。定容,摇匀备用。 (2)绘制芦丁标准曲线:分别移取0,0.4 ,0.8,1.2,1.6,2.0 ml 芦丁对照品溶液,于6个10ml 容量瓶中,标记1~6,分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的80%乙醇溶液,加入5%NaNO2溶液0.5ml,摇匀,放置6min,加入0.5ml10%AL(NO3)3,摇匀,放置6min,加入4%NaOH 溶液4.0ml,加入80%乙醇定容,摇匀,放置20min。在波长510nm处分

黄酮类化合物的提取纯化方法

黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要:对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用,为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词:黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分,是自然界中存在的酚类物质[14],又称生物黄酮或植物黄酮,属植物次级代谢产物,广泛存在于各种植物的各个部位,尤其是花、叶,主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今,已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现,人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面,自20世纪20年代,槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后,才开始引起人们的关注,研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性,例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性,改善记忆,抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1.1 传统提取方法 1.1.1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂,是地球最丰富的物质,无色无味无毒,对人体和环境无害,挥发性不大,具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时,从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多,往往因泡沫或粘液很多,给进一步分离带来许多麻烦,而且浓缩也会很困难。此外,水提取物容易发霉发酵[22]。1.1.2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物,因其结构中具有酚羟基[7],故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定,当碱的浓度过高,加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1.1.3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同,可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等),一般采取乙醇为提取溶剂[15]。

黄酮提取工艺设计思路

黄酮提取工艺设计思路 1、黄酮类化合物含量测定的原理 在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯合物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色。黄酮类化合物能与金属离子络合产生有色反应,于波长510nm附近有吸收,可用分光光度法进行测定。实验采用在碱性条件下,亚硝酸盐存在时,硝酸铝与黄酮形成红色络合物,在波长510nm附近有吸收可进行比色分析。 在中性或弱碱性及硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,硝酸钠还原黄酮,加硝酸铝络合,加氢氧化钠使黄酮类化合物开环,生成2’-OH查耳酮而显色。 利用黄酮类化合物中的3-羟基、4-羟基、5-羟基、4-羰基或邻二位酚羟基,与Al3+进行络合反应,在碱性条件下生成红色络合物的原理测定其含量 2、测定波长的确定 取样品溶液和标准溶液2mL,加70 %的乙醇至5 mL, 然后加入5 %的NaNO2 溶液1 mL, 室温放置6min, 再加入10 %的Al(NO3)3 1mL, 混匀, 室温放置6 min, 加入4%的NaOH 10mL, 用水稀释至25 mL,混匀, 放置15 min, 在分光光度计上扫描波长从400 nm~600 nm 之间的吸收度, 结果在510nm 波长处有最大吸收值。 配合物在Kmax1= 354nm 及Kmax2= 510nm有两个吸收峰, 经实验后得出Kmax1= 354nm波长处得到的工作曲线线性关系及精密度数据均不佳, 故本实验选取Kmax2= 510 nm为测定波长。 3、标准溶液的配制 精确称取105℃干燥恒重芦丁对照品50mg, 加乙醇适量, 使之充分溶解, 用乙醇定容到100mL, 摇匀, 制得芦丁溶液。精确量取芦丁溶液20mL, 置于50mL容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。每1mL溶液含芦丁对照品0.2mg。或精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg, 置50mL容量瓶中, 加无水乙醇20mL, 轻摇使充分溶解,定容, 摇匀, 得0. 2mg /mL芦丁标准液。 精确称取芦丁标准品5mg,用70%乙醇溶解,于50 mL容量瓶中定容,即得每1mL溶液含芦丁对照品0.1mg芦丁标准品溶液。 称取约20mg芦丁标准品于称量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重,干燥器中冷却,精确称

银杏叶中黄酮提取方法

银杏叶黄酮的提取 一、溶剂提取法:国内外使用最广泛的方法,步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。溶剂系统主要有乙醇,水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。精提物常在粗提物制备基础上精制,常用液-液提取法、沉淀法和吸附.洗脱法。 以60%丙酮为起始溶剂粗提取,再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。NaOH-水溶液提取效果最好,NaOH-乙醇溶液次之,正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷,获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次,萃取物中黄酮苷含量为57%。V水:V正丙醇=1:25最佳。银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取,再以80%乙醇回流提取,减压浓缩,新型澄清剂沉降,树脂分级吸附,pH值为3—4酸水和酸性25%乙醇洗涤,75%乙醇洗脱,喷雾干燥 将银杏叶洗净,于60℃烘干至恒重,粉碎,过50目筛。称取粉末25 g,置于索氏提取器中恒重,粉碎,过50目筛。称取粉末25 g,置于索氏提取器中加入60%乙醇至250.0 ml,80℃下回流提取3.0 h,蒸馏回收乙醇,并用活性炭脱色,得银杏叶黄酮提取物。乙醇浓度为50%一70%时,提取率随浓度增加提高,当浓度70%时提取率达最大。随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。当温度80℃时提取率达最大。提取时间为三小时为佳。 二、超临界流体萃取法(SFE法):利用临界或超临界状态的流体及被萃取的物质在不同蒸汽压力下所具有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离纯化的操作。最佳萃取实验工艺条件为萃取压力15 MPa、乙醇浓度90%、萃取温度55℃,此时,黄酮类化合物萃取得率较理想. 三、高速逆流色谱技术提取法:是一种不用任何固定载体的液一液分配色谱技术W=70%的乙醇连续循环喷淋逆流6级萃取,m乙醇:m银杏叶=5:1,总萃取时间240min,萃取温度50~55度,萃取率99%以上。 四、微波提取法:微波提取法能对萃取体系中的不同组分进行选择性加热,受溶剂亲和力的限制较小,可供选择的溶剂较多及热效率较高,升温快速均匀,大大缩短了提取时间,提高了萃取效率。以水为介质的条件下,对银杏叶进行微波处理。 工艺流程银杏叶一干燥一粉碎一加入适量氢氧化钙溶液一微波预处理一加入适量碱水一调节pH和硼砂含量→恒温水浴浸提—过滤一定容 通过对提取温度、提取时间、液料比、微波功率、微波时间、解析剂比6个因素进行正交实验,优选得到最佳的萃取工艺条件为:提取温度80℃,提取时间60min,液料比.50:1,微波功率700W,微波时问180s,解析剂比7:l。 五、超声提取法:超声技术应用于天然活性产物的提取,具有速度快、提取率高、节省溶剂、节约能耗、不破坏有效成分的特点。最佳操作条件为超声波频率40kHz处理时间10min、静置时间12 h。以水为介质,在较低温度下 六、酶提取法: 加入淀粉部分水解产物及对葡糖基有转移作用的葡糖苷酶或转糖苷酶,使油溶性或难溶于水或不溶于水的有效成分转移到水溶性苷糖中,既提高了有效成分的提取率,又促进难溶于水或不溶于水的有效成分在体内的吸收. 在常规的醇一水浸提之前用纤维素酶对原料进行酶预处理(酶解时间为2h) 七、分子烙印技术:在极性溶剂中,以丙烯酞胺作功能单体,以强极性化合物槲皮素为模板,

黄酮类化合物的提取分离方法

一.黄酮类化合物的提取分离方法 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取 (2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸 (3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取. 2.按提取条件不同分类 (1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素 (2)索式提取法----------柑橘属类黄酮 (3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物 (4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质 (5)超滤法----------黄岑甙 (6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率 (7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油 PH 梯度萃取法:石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮 高效液相色谱分析法:五味子、葛根 高速逆流色谱分离法:甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位 柱色谱法 (1)硅胶柱色谱:姜黄素 (2)聚酰胺柱色谱:紫锥菊 (3)葡聚糖凝胶柱色谱:回心草、茵陈蒿 (4)大孔吸附树脂分离法:川草乌、三七总皂甙 二. 槐米中芸香苷(芦丁)的提取方法有哪些(设计) 方法:渗漉法、煎煮法、回流提取法 (1) 槐米粗粉20g 加约120ml 的%硼砂水溶液, 搅拌下加入石灰乳至pH8-9, 并保持该pH 值煮沸20分钟,四层纱布 趁热滤过,反复2次 提取液 药渣 浓盐酸调pH2~3 搅拌,静置放冷,滤过。 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芸香苷结晶 碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图 (2)取30g 槐花米,置于250mL 烧杯中,加入%硼砂沸水200ml ,在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8~9,在此pH 下保持微沸20~30min ,趁热用棉花滤过,残渣再加水,同上法再煎一次,趁热抽滤。合并滤液,在60~70℃下用浓盐酸调至pH=4—5,静置。 提 碱 取 溶 分 酸 离 沉

黄酮提取方法 (2)

总黄酮的提取方法 1、熔剂法 热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、 2、1 微波提取法 微波提取就是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点就是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。 2、2 超声波提取法 用超声波提取法提取黄酮类物质,就是目前比较新的方法。原理就是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。 2、3 超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术就是利用超临界流体处于临界温度与临界压力以上,兼有气体与液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度与溶质与夹带剂分子间的作 用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度与选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大 规模的生产。 2、4 酶法提取 酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质,利用酶反应的高度专一性,破坏细胞壁,使其中的黄酮类化合物 释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物,黄酮类物质的提取率为91%,提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶与常规法提取,黄酮得率分别就是1、43%,0、94% 与0、79%,与传统的方法相比,游离酶法的总黄酮得率提高了81%。 2、5 双水相提取法 双水相提取技术就是瑞典Per Albersson首先发现并研究 的一种技术,双水相萃取法属于液- 液萃取,当物质进入双 水相体系后,由于表面性质、电荷作用与各种力的作用,溶 液环境的影响,其在上、下相中的浓度不同,即各成分在两 相间选择性分配,从而达到萃取的目的。由于双水相体系分 相快、使用温度低、容易操作、无污染、提取率高,因此成 为黄酮化合物富集分离的一种有效方法。张春秀等[24]取一 定量的银杏叶浸提液,加到PEG1500/ 磷酸盐体系双水相 系统中,则黄酮类化合物进入上相PEG,从而将黄酮类化合 物分离,提取率可达98、2%。 2、6 半仿生提取法 半仿生提取法就是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合,模拟口服给药后药物经胃肠道转运的环境,为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。这种提取方法的特点就是可以提取与保留更多的有

大豆异黄酮提取工艺

大豆异黄酮提取工艺 和药理功效 一、提取工艺 每100克大豆样品中含有异黄酮128毫克,可分离约102毫克。 大豆异黄酮的提取可以采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂进行浸提。 不同的溶剂其提取工艺也不同。现以乙醇为例,介绍其浸提工艺。 (1)原料制备将脱脂豆粕进行粉碎。如果采用大豆为原料,需要先进行脱脂,使豆粕残油率<1%,干燥后粉碎备用。 (2)提取采用乙醇为浸提液,先在豆粕粉中加入含0.1~1.0摩尔/升(mol/l)的盐酸,再在95%的乙醇溶液中进行回流提取,过滤收集滤液。 (3)回收提取溶剂将滤液进行减压蒸发,回收乙醇,得到大豆异黄酮的粗水溶液。 (4)纯化将粗水溶液中加入0.1摩尔/升的氢氧化钠溶液,调节pH值至中性。这时,中性溶液中将出现沉淀,然后过滤,得到的沉淀物即为含大豆异黄酮的产物。 (5)精制将上述产物溶解于饱和的正丁醇溶液中,加于氯化铝吸附柱上进行吸附,然后用饱和的正丁醇溶液淋洗,洗出大豆异黄酮的不同组分 各种大豆制品中异黄酮含量和种类分布不同,不仅与大豆品种和栽培环境有关,还与大豆制品的加工工艺密切相关。水处理、热处理、凝固、发酵等加工环节和方法显著地影响了大豆制品中异黄酮的含量和种类分布,特别是大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白的不同提取方法其中异黄酮含量影响极大。 1)水处理:浸泡使10%的异黄酮流失于浸泡水中,且水处理后的大豆中游离型异黄酮增加,这是因为豆类自身存在的β-glucosidases酶水解葡萄糖苷的结果。

2)加热:水煮加热增加了异黄酮向外渗透速率,使大量异黄酮因渗入加热水中而丢失,同时热处理还显著改变了豆制品中异黄酮种类的分布,因为热处理时β-glucosidases酶活性增强,使异黄酮葡萄糖苷水解为游离型异黄酮,因而制品中游离型异黄酮较原料大豆或大豆粉中的有所增加。 3)凝固:在豆腐生产中,凝固使一部分异黄酮丢失于乳清中,丢失率为44%。 4)发酵:发酵不影响异黄酮的含量,但改变了异黄酮种类的分布,发酵后的产品以游离型异黄酮为主要存在形式,这是因为在发酵过程中,真菌产生的大量β-glucosidases水解酶使异黄酮葡萄糖苷大量水解,从而导致游离型的异黄酮显著增加。 5)加工提取方法:提取方法对大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白中异黄酮含量的影响非常大。如用湿热水洗法去除可溶性碳水化合物所得浓缩蛋白的异黄酮含量与原料豆中的相近,而用60\%-65\%的酒精水溶液洗涤浓缩法提取的大豆浓缩蛋白的异黄酮仅为原料中的1/10。二、药理作用 延缓女性衰老、改善更年期症状、骨质疏松、血脂升高、乳腺癌、前列腺癌、心脏病、疏松症、心血管疾病等。 大豆提取物作为营养补充食品使用,此外,大豆异黄酮显著的降低了乳腺癌的发病率,产生这种结果被认为是与它的产物植物雌激素有关。研究还指出在平时多食用富含大豆异黄酮的食物有助于抑制前列腺癌细胞的生长,那些多吃低脂肪,富含大豆蛋白食品的人患(前列腺癌)的概率会更低。 抗氧化作用 金雀异黄素(genistein)含5.7.4三个酚羟基,大豆甙元含7.4二个酚羟基。酚羟基作为供氧体能与自由基反应使之生成相应的离子或分子,熄灭自由基,终止了自由基的连锁反应。大豆异黄酮对整体动物也有比较明确的抗氧化作用,大豆异黄酮提取物对阿霉素引起的小鼠过氧化水平提高和抗氧化酶活性的降低也有明显的抑制作用。 雌激素样作用

银杏叶中黄酮的提取(原理及方法)

生物化学研究性实验——银杏叶中黄酮的提取及含量测定 班级:____________________________ 姓名:____________________________ ____________________________ ____________________________ ____________________________ ____________________________ 指导老师:________________________

银杏叶中黄酮提取及含量测定 一、实验目的 提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。 二、实验原理 银杏系银杏科银杏属落叶乔木,银杏叶中含有多种生理活性成分,其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质,具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此,将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用,这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法,成本低但浸取率低;有机溶剂浸取法中,乙醇浸取的效率高且无毒,是目前采用较多的方法;韩玉谦等采用超临界流体萃取法,在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分,银杏黄酮回收率为84 . 4 % ,是常规萃取法回收率的2倍多;乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取,建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。 三、实验仪器和试剂 材料:银杏叶粉末50g 试剂:标准芦丁样品,无水乙醇(600ml),50mlAl(NO3)3

黄酮类化合物提取工艺研究

黄酮类化合物提取工艺研究 唐鹰1 (1.湖北民族学院湖北恩施445000) 摘要黄酮类化合物是一类存在于高等植物及蕨类植物中的活性物质,具有特殊的保健及治疗功能。本文综述了天然黄酮类物质的多种提取工艺,分别是水提法、碱性水或碱性烯醇提取法、有机溶剂提取法、微波法、超声波法、酶解法、大孔树脂吸附法、超滤法、超临界萃取法,比对各工艺利弊进行了分析。 关键词黄酮类化合物提取工艺研究 The extracting technology of flavonoids compounds Tang Ying1 (1.Hubei institute for nationalities Hubei Enshi 445000) Abstract There is a type of flavonoids in higher plants and ferns of active substances, with special care and treatment function.This paper analyses summarized the natural flavonoids substances respectively,a variety of extraction process was water -extraction and alkaline water or alkaline propylene alcohol extraction, organic solvent extraction,microwave-extraction method, ultrasonic method, enzyme hydrolysis and macroporous resins, ultrafiltration , supercritical fluid extraction, each process than and analyzed the advantages and disadvantages. Keywords Flavonoids extraction technology research 黄酮类化合物在植物界中分布广泛,,属于植物次级代谢产物 ,在植物的叶子和果实中少部分以游离形式存在,大部分与糖结合成苷类以配基的形式存在。黄酮类化合物广泛存在于植物的各个部位 ,尤其是花叶部位 ,主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞性科、银杏科与菊科等。有文献记载 ,约有 20 %的中草药中含有黄酮类化合物。它是以黄酮 ( 2一苯基色酮)为母核,同时黄酮母核上连有羟基、甲氧基、氢氧基等取代基,是植物经光合作用产生的一大类化合物。到目前为止,已发现2000多种。它们包括黄酮(Flavone)、黄烷醇(Fla-vano1)、异黄酮(Isoflavone)、双氢黄酮(Flavanone)、双氢黄酮醇(Flavanono1)、黄烷酮(Flavanone)、花 色素(Anthocynidia)、查耳酮(Chal—cone)、色原酮(Chromarme)等。近年来,科学家们发现其具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病及抗衰老等作用。随着对其研究方法和技术的不断提高,又发现了许多新的种类和生理作用。特别是抗自由基和抗癌、防癌的

黄酮类化合物的提取分离方法

一.黄酮类化合物的提取分离方法 1.1 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取 (2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸 (3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取. 2.按提取条件不同分类 (1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素 (2)索式提取法----------柑橘属类黄酮 (3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物 (4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质 (5)超滤法----------黄岑甙 (6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率 (7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油 3.1 PH 梯度萃取法:石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮 3.2高效液相色谱分析法:五味子、葛根 3.3高速逆流色谱分离法:甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位 4.4柱色谱法 (1)硅胶柱色谱:姜黄素 (2)聚酰胺柱色谱:紫锥菊 (3)葡聚糖凝胶柱色谱:回心草、茵陈蒿 (4)大孔吸附树脂分离法:川草乌、三七总皂甙 二. 槐米中芸香苷(芦丁)的提取方法有哪些?(设计) 方法:渗漉法、煎煮法、回流提取法 (1) 槐米粗粉20g 提取液 药渣 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芸香苷结晶 碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图 (2)取30g 槐花米,置于250mL 烧杯中,加入0.4%硼砂沸水200ml ,在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8~9,在此pH 下保持微沸20~30min ,趁热用棉花滤过,残渣再加水,同上法再煎一次,趁热抽滤。合并滤液,在60~70℃下用浓盐酸调至pH=4—5,静置。 提 碱 取 溶 分 酸 离 沉

黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展

黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展姓名常姣专业微生物学 摘要文章综述了黄酮类化合物的结构特征及提取、分离纯化技术介绍了黄酮类化合物的生物活性,并对其开发利用进行了展望。旨在为黄酮类化合物的研究、开发以及应用提供参考。 关键词黄酮;提取;分离纯化;生物活性 民以黄酮类化合物也称黄碱素, 是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在植物体内大多与糖结合成甙的形式存在, 也有部分以游离状态的甙元存在。由于最先发现的黄酮类化合物都具有一个酮式羰基 结构, 又呈黄色或淡黄色, 故称黄酮[ 1]。 目前对天然黄酮类化合物的提取方法较多,如溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法及半仿生提取法等, 每种方法都有它各自的优点和点。用上述方法提取的黄酮类化合物仍然是一个混合物, 不仅是含有其它杂质的粗品, 而且是几种黄酮类成分的混合物, 需进一步分离纯化, 常用的方法有柱层析法、重结晶法、铅盐沉淀法和高效液相色谱法等。 黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常的通透性、降血脂、降血压、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝脏病毒、抗炎、抗菌、解栓、抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗癌、防癌、降血糖、镇痛和免疫等生理活性[ 2-5]。这些生理活性已被关注,对该类化合物的研究成为医药界的热门课题。人体自身不能合成黄酮类化合物而只能从食物中摄取,因此多年来科学家都在积极研究探讨从植物体中分离 纯度高、活性强的黄酮类化合物[6]。 1黄酮类化合物的理化性质 黄酮类化合物是以2-苯基色原酮为母核而衍生的一类通过三碳链相互连接而成的大多具有基本碳 架的一系列化合物,且母核上常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等助色取代基团。黄酮类化合物多为晶体固体,多数具有颜色,少数(如黄酮苷类)为无定形粉末,除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外,其余则无旋光性) 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态(苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大差异) 一般游离态苷元难溶于水,易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂) 其中,黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子,因堆砌较紧密,分子间引力较大,故更难溶于水;而二氢黄酮及二氢黄酮醇等,因系非平面型分子,故排列不紧密,分子间引力降低,有利于水分子进入,水中溶解度稍大。 2黄酮类化合物的提取分离及纯化 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷元的形式存在,而在根部坚硬组织中,则多以游离苷元形式存在。因此,不同来源、部位、种类黄酮提取所采取的方法不同[6]。分离黄酮类化合物的方法很多,根据黄酮类化合物与混入其他化合物的极性不同可采用溶剂萃取法,根据黄酮化合物在酸性水中难溶、碱性水中易溶的特点可采用碱提酸沉法等。 2.1溶剂法 2.1.1 热水提取法

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