斑马鱼繁殖有什么前兆斑马鱼繁殖注意
斑马鱼繁殖有什么前兆?对于这些小精灵来说，他们的繁殖可能不是人们所熟悉的事情，下面，我们来看一下斑马鱼繁殖需要注意的问题。
斑马鱼的雌雄鉴别
雄斑马鱼鱼体修长，鳍大，体色偏黄，臀鳍呈棕黄色，条纹显著;
雌鱼鱼体较肥大，体色较淡，偏蓝，臀鳍呈淡黄色，怀卵期鱼腹膨大明显。
斑马鱼繁殖
斑马鱼属卵生鱼类，4月龄进入性成熟期，一般用5月龄鱼繁殖较好。斑马鱼的繁殖比较容易。繁殖用水要求pH6.5-7.5,硬度6-8，水温25-26摄氏度。斑马鱼最喜欢自食其卵，因此繁殖缸内铺小石头及水草，便于落卵附着。繁殖时可按雌雄鱼1：2的比例防入繁殖缸内，一般头天晚上防入，第二天上午或中午就可以产卵受精。排完卵要将种鱼捞出另养。
一条雌鱼每次可排卵300-1000粒不等。受精卵经2-3天可孵出仔鱼，再经2天仔鱼开始游动觅食，开始先以“洄水”喂之，10天后可改喂其他小型鱼虫。斑马鱼的繁殖周期约7天左右，一年可连续繁殖6-7次，而且产卵量高。
繁殖仔鱼的水温约为25℃左右，仔鱼孵出后7~8天，仔鱼才会开始进食，此时投喂蛋黄灰水，以后再投喂小鱼虫。
斑马鱼发育阶段
斑马鱼的发育分为6个阶段：卵裂期，囊胚期，原肠胚期、分裂期、成形期和孵化期。
饲养斑马鱼幼鱼的正确方法 刚出声的小斑马鱼都很容易生病，所以饲养斑马鱼的饲主要加强管理，从而防病治病。刚孵出的小斑马鱼呈淡黄色，在解剖镜下可见到跳动的心脏，流动的血液，腹部有一很大的、未吸收的卵黄囊。头2～3天仔鱼静卧于水底，此时不需要饲喂。注意及时将卵膜和白色的死卵捞出，每天更换新水，将鱼苗置于温室内，温度为25℃（可放在空调房间内）。3～4日龄时仔鱼可自由游泳（平游）并开始觅食，此时可用绢网取少许蛋黄在水中轻轻地搅动，至水微呈淡黄色。适当加喂钙素母片、复方vb液、土霉素等，以提高鱼苗的成活率。喂要少量多餐，日喂3～4次。7～10日龄时加喂草履虫，啤酒酵母等，3周龄投喂卤虫的无节幼体，并逐渐添喂配合饲料。在饲喂过程中要注意水质的变化，勤换水，少喂勤添，以确保鱼苗健康生长。 斑马鱼孵化期间病害较少。不干净水质可引起纤毛虫等原生动物侵袭孵化卵，降低孵化率。导致死亡的主要因素还是高温和畸形卵引起的发育失败，只有通过合理控制孵化温度并及时清除畸形卵，才能有效提高孵化率。 斑马鱼很容易养，随便什么观赏鱼的干饲料都可以，颗粒小点，适口就行。 但如果你的斑马鱼是用来繁殖的亲本，就要弄点活的红线虫（饲喂前要用清水洗干净）或冷冻丰年虫了。营养好才能促进他们的性腺成熟，雄鱼性腺成熟后，体征上表现为腹部淡黄色，腹鳍根部也是淡黄色；雌鱼腹部膨胀，体色鲜艳。 养殖斑马鱼最重要的就是温度，虽然斑马鱼适应能力很强20~30度都能生存，但它最适宜的温度是26.5~28.5度，在冬季把水温可以适当调高点。光照平时不是很重要，但在孵卵前后很重要，要保持14：10，及光照14，无光照10。食物不用喂太勤，根据食物的种类来定饲喂次数，普通干饲料可以一日多次，活线虫一日一次，投喂量以3分钟能吃完为宜，如果是孵卵前后要增加投喂次数。换水不用太勤，如果有滤水装置，可以3天或5天换一次曝气自来水，换水量不超过总水量的1/2或1/3为宜。公母搭配比例，以2:1至4:1为宜，因为雌鱼一次产卵量很大，而且都是水中受精，所以雄鱼要足够才能保证卵在水中受精率较高，雄鱼太多也不行，为争取配偶互相打架太厉害。 哈，没想到隔了这么长时间，我的养殖经还是随口就来！ 斑马鱼是低温低氧鱼可以在10度的水中生活比孔雀鱼都好养是新手入门最好养的一个品种换水要看饲养密度养的鱼越多喂的多水脏的越快如果养的少半个月换一次没问题一般大家都是一星期左右换一次换水也不能整缸都换会死鱼看水的浑浊度可以换三分之一或三分之二不管哪个阶段都可以喂红线虫水蚤丰年虾人工饲料等没有具体要求都可以长的很好的养鱼主要是水水才是鱼生存的根本因为水是鱼生存的必要条件和环境即使5天不喂也未必会死可是水脏了鱼就容易生病除非是有些饲料是可以增加体色和抗病的也不知道含不含化学药品我觉得喂活饵长得快（这是经验）人工饲料慢一些但是夏天热鱼虫很容易死如果喂了不新鲜的会对鱼不好你也可以人工饲料和鱼虫换着喂营养会均衡些如果你指的是刚出生的小鱼所有的热带鱼不管大型还是小型的刚出生都可以喂蛋黄水水蚤丰年虾幼虫人工饲料等人工饲料要磨碎磨的很细小稍微长大一些后还是这些食物绝对没有特定要求 是你的养鱼用水出了问题，养斑马鱼很简单，只要你平时常观察，鱼很少会因鱼病导致死亡，何况你已经养了一年多了，养这种鱼，注意不要彻底换水，换不好就会死鱼，最好是攒水，三天攒一次就可以，一般攒四分之一为好，不过定期也要换水，注意我说的，所谓的换水，是把整缸的水换掉三分之二，要留三分之一的老水。在就是斑马鱼的寿命一般在2-3年，你养了一年多你养的已经很好了，不要伤心或心疼，养鱼是让我们在闲余时间，来放松心情，陶冶情操的。不要气馁，继续养好它，它会给你带来无穷无尽快乐，最后祝你养鱼成功。 没有器材也没关系，其实小型科的热带鱼，很好养的。只要你每天捞捞鱼的粪便，两天攒一次水就好了，跟硝化细菌每关系。一天要为鱼两次，早上一次，下午4点前一次，记住最好不要再下午4点以后喂食，因为4点以后气压会变低，喂完鱼后会导致水中溶氧减少，使鱼儿缺氧，一定要注意。鱼食吗，最好买微小颗粒的，喂食量在3分钟内吃完为好。以上是给你的建议，你养的很好了，不要在心疼了，在买些继续养好它，慢慢来你会养好的，实际上你已经养的很好了。
斑马鱼动物模型的应用 斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。 斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。 一、斑马鱼的品系 经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。 二、斑马鱼突变品系的筛选 斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。插入诱变是以逆转录病毒为载体，用显微注射法将目的基因片段导入斑马鱼受精卵，整合到基因组中，干扰正常基因表达。射线照射产生的突变率是ENU 化学诱导的10倍，但由于突变涉及多个基因，突变的表型是受若干基因调控的结果，不利于基因功能的分析，因此，ENU化学诱导法是斑马鱼突变的主要方法。研究含有纯合致死
毕业论文 论文题目：斑马鱼的内分泌系统的研究 学生姓名：王华飞 学号：1113030228 所在院系：生物工程学院 专业名称：生物技术 届别：2015届 指导教师：陈锦云 淮南师范学院教务处
目录 前言： (4) 1、作为模式生物斑马鱼的优点 (4) 2、斑马鱼内分泌系统研究在医学方面的发展 (4) 2.1斑马鱼模型能在医学上的应用原因 (5) 2.2 用斑马鱼突变体构来建疾病模型 (5) 2.3.神经学研究的模式生物 (5) 3、斑马鱼内分泌系统研究在环境检测中的应用 (7) 3.1斑马鱼能用与环境检测的原理 (7) 3.2筛选环境中的内分泌干扰物 (7) 4、斑马鱼内分泌系统研究在新药研究方向的应用 (8) 4.1斑马鱼内分泌系统模型在新药筛选中的应用 (8) 4.2在动物生殖内分泌学中的应用 (9) 5、人工内分泌统的基础 (10) 5.1人工内分泌系统的原理 (10) 5.2人工内分泌系统在未来研究中的展望 (11) 参考文献： (11)
斑马鱼内分泌系统的研究进展 学生：王华飞 （指导老师：陈锦云） （淮南师范学院生物工程学院） 摘要：本文综述了模式生物斑马鱼内分泌系统的研究进展。研究人员把斑马鱼的研究主要归纳为以下几个方面：1.突变体做为模型来研究人类的内分泌疾病;2.了解了其发病机制并且研制出了新药;3.斑马鱼内分泌系统的研究还在环境检测及毒理学方面有着重要的应用;4.最后展望在未来科技中人工内分泌系统。 关键词：斑马鱼；人工内分泌系统；医学；环境；药物 Study on the endocrine system in zebrafish Abstract:This paper reviews the research progress of zebrafish endocrine system. Researchers to zebrafish studies are summarized as the following aspects: 1. The mutant do as a model to study human endocrine disease; 2. Understanding the pathogenesis and the development of a new drug; 3. Zebrafish endocrine system research is still in the environment detection and toxicological aspects of has a important application. 4. Finally, the prospect in the future science and technology artificial endocrine system Keywords: zebrafish; artificial endocrine system; medical environment; drug;
中国海洋大学实验报告 年月日姓名：专业年级：同组者： 课程：发育生物学实验题目：硫酸铜对斑马鱼胚胎发育的影响 一．【实验目的】 1、锻炼独立开展科学实验、分析和解决实际问题的能力； 2、加深环境对动物受精及早期发育影响的理解 二.【实验原理】 重金属污染是近年渔业环境污染的公害之一。随着工农业的发展，浓度严重超标的一些重金属离子被排入水体而造成污染，对鱼类有毒害作用。目前水体中的重金属主要有Cd、Cu、Pb、Zn等。其中Cu离子就具有较强的毒性，可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐，使蛋白质变性，因此常被用作杀菌剂。 斑马鱼（Danio rerio）是常见的暖水性（21~32℃）观赏鱼，鲤科,个体小（4~5㎝），常年产卵，鱼卵易收集，性成熟周期短且胚胎透明，便于观察药物对其体内器官的影响。雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发育成形，繁殖水温24℃时，受精卵经2~3天孵出仔鱼；水温28℃时，受精卵经36小时孵出仔鱼，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因。由于斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87%，这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体，因此它受到生物学家的重视。 在斑马鱼的整个生活周期中，胚胎期和仔稚幼鱼早期发育阶段对重金属污染最为敏感。据报道，波罗的海春天产卵的鲱鱼，在10 ppb 的Cu2+，水的盐度为5.7条件下即对它的受精和发育有影响。30 ppb的Cu2+引起大西洋鲱鱼（Clupea harengus）卵的死亡，而35 ppb 的Cu2+也使太平洋鲱鱼（C.pallasi）的胚胎发生大量死亡[1]。吴玉霖等1990年依据不同金属对褐牙鲆胚胎的滞育、致畸、成活率及孵化率的综合影响指际，得出5种金属对褐牙鲆胚胎的毒性大小顺序为：Cu2+>Zn2+>Cd2+>Pb2+>Cr3+,对仔鱼的毒性大小顺序为Cu2+>Cd2+>Zn2+>Pb2+>Cr3+ [2]。 三.【实验步骤】 1、实验材料 斑马鱼囊胚、CuSO4为分析纯，充分曝气的去离子水、24孔细胞培养板、恒温培养箱、用充分曝气的蒸馏水配置成浓度为5 mg/L 的CuSO4母液，用时稀释。. 2、实验方法 1）硫酸铜浓度梯度的设定 经查阅文献，确定斑马鱼胚胎发育从受精到孵化出幼鱼过程中的CuSO4半致死浓度和安全浓度范围，设定5个浓度梯度和和1个对照组。 研究表明，Cu2+对大银鱼受精卵的安全浓度为0.00112 mg/L[3]，对鮸状黄姑鱼仔鱼的安全浓度为0.006mg/L[4]，所以设定对照组CuSO4的浓度梯度分别为0（空白对照），0.001 mg/L，0.01 mg/L，0.1 mg/L，1.0 mg/L，2.0 mg/L。每个浓度组设定4个平行组。使用暴晒后的
斑马鱼是一种常见的热带鱼。和人类有着高度的基因同源性，可以作为模式生物用于实验研究，同时饲养便捷、成熟周期短、排卵量大、体外受精发育、胚体透明，已广泛应用于科研实验室。目前，全球范围内大约有超过1500个斑马鱼实验室，斑马鱼养殖的需求带动了饲养设备的发展，市场火爆。下面简单介绍一下上海地区的斑马鱼饲养设备。 一、产品用途 1. 满足斑马鱼等小型模式生物的产卵、孵化、生长等过程； 2. 应用于胚胎学、发育生物学、毒理学、分子生物学等科目的相关分析测试研究； 3. 建立药物筛选、治疗的研究平台； 4. 应用于环境科学、农业科学的一些重大问题的研究与解决。 二、技术参数 1. 系统支架：不锈钢316L材质； 2. 养殖缸（可选）：PC材质，注塑一次成型，食品级、耐高温高压（国际标准），抗摔性强，防漏坚固。养殖水槽采用自洁性设计，能有效进行水体交换，每个养殖缸供水单独可控。 3. 水循环装置：包含供水、供气管路，循环泵，增氧泵，斑马鱼专用出水、出气调节阀； 4. 水处理装置（设有不锈钢网预过滤器，代替传统的过滤棉，节省耗材费用，降低运行成本）：包含过滤系统（四级过滤）、紫外线杀菌系统、加热系统等； 5. 全自动控制系统：可自动控制水循环、紫外杀菌、温度调节、
曝气等； 6. 鱼缸配置： 三、选配 1. 光照：T5灯管，微电脑时控开关，可根据实验需要进行光照时间的设置，自动开启或关闭，有记忆性； 2. 冷暖机：制冷范围10-30℃； 3. 净水供水单元：出水量4种规格可选，80L/H、250L/H、500L/H、1000L/H； 4. pH及电导率调节仪：可监测和调节pH和电导率，pH调节范围7.2-7.6，电导率调节范围500-550μS/cm。 上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！
《基因工程》课程综合实验转基因斑马鱼的构建 实施方案 《基因工程》课程综合实验教学在专业培养目标中的定位与目标 《基因工程》是生命科学学院等各专业的专业主干课，在这些专业的本科生教学打算中占有极为重要的地位。《基因工程》也是我们学校基地班和生技专业的专业必修课，差不多有10余年的开课历史。全国其他高等综合院校都十分重视《基因工程》课程建设，绝大多数院校都将《基因工程》作为学校精品课程进行建设。湖南师范大学大学在《基因工程》教学和研究方面具有坚实的基础，2008年《基因工程》建设成为了湖南省精品课程，从而为我校《基因工程》的教学改革提供了契机。 基因工程是以遗传学为理论基础的一门实践性专门强的学科，是生物学科中一门体系还欠完整却进展十分迅速的学科，对探究生命的本质、推动整个生物学科的进展起着庞大的作用；同时又是一门紧密联系生产实际的实验科学，对新品种选育和良种繁育、遗传疾病防治等都具有重要的应用价值。通过《基因工程》的学习，使学生把握基因工程的差不多原理、差不多方法和最新进展动态；通过《基因工程》课程综合实验教学，使学生熟悉基因工程的差不多操作方法，注重对学生的实验操作技能的培养。 基因工程课程综合实验---转基因斑马鱼的构建教学大纲 课程名称：基因工程（实践课程部分） 课程编号： 面向专业：生物技术、生物科学、基地班
课程总学时：理论51学时，实验34学时_ 实验学时：34_ 课程学分：理论3学分，实践2学分 一、实验目的 本课程的教学目的是让学生对基因工程技术所涉及的要紧环节的差不多原理和差不多技术进行系统地学习和把握，培养学生基因工程差不多实验操作、实验设计、实验结果分析和创新实验能力，通过基因工程综合实验的开设，注重学生综合素养和实践能力的培养。 二、实验内容、学时分配与组织
鲁东大学生命科学学院学院20 10 －20 11 学年第二学期学院______________ 专业_____________ 年级________ 班________ 学号 _____________姓名______________ 密封线 学生须将文字写在此线以下 《发育生物学》课程论文 课程号：2522080
.关键词：斑马鱼；发育；葡萄糖；溶液浓度；温度；TCDD 一、斑马鱼简介 斑马鱼(zebra fish)，又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼。 斑马鱼是一种常见的热带鱼。斑马鱼体型纤细，成体长3-4cm，对水质要求不高。孵出后约3个月达到性成熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。发育温度要求在25-31℃之间。斑马鱼由于个体小，养殖花费少，能大规模繁育，且具许多优点，吸引了众多研究者的注意。经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库里有相关 斑马鱼的资料可供查询和下载，方便了研究。斑马鱼的细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟，且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体，是研究胚胎发育分子机制的优良资源，有的还可做为人类疾病模型。斑马鱼已经成为最受重视的脊椎动物发育生物学模式之一，在其它学科上的利用也显示很大的潜力. 二、斑马鱼的发育过程 1〕卵子的发生 斑马鱼卵子发生过程中乱母细胞的发育是不同步的。在卵子发生早期，核内许多小核仁开始富集，其数目在接下来的时期中可以达到1500个，他们分布在和的外围和靠近内部核膜。 斑马鱼卵子发生过程一般分为5个时期，即StageⅠ-Ⅴ;有时也将StageⅡ和Ⅲ作为一个时期将卵子发生分为4个时期。各个时期的基本特征是： StageⅠ是原始滤泡生长阶段，乱母细胞没有卵黄，是一个有细胞质包围着升值滤泡的圆形球体。其染色体去浓缩并出现灯刷装 状表型，此时DNA高度延伸，形成一个具有典型形态学上的包含RNA和蛋白质的恻环。染色体的这一构型被认为有利于母源性基因的转录激活，其出现与斑马鱼卵母细胞中RNA合成的高速率是一致的。在这时期，卵母细胞和滤泡细胞的微小突起（microvilli）开始伸展并延伸到彼此的区域。一旦形成，这些连接包含粘附连接、细胞桥粒和间隙连接，它们可能与滤泡细胞和卵母细胞间的交流和卵母细胞附近小分子的吸收有关。同时，卵黄膜组分开始在滤泡细胞和卵母细胞之间富集；其他结构，如线粒体、高尔基体和内质网等富集，反映了产生大量产物的需要。 StageⅡ卵母细胞的特点是富集了大量蛋白质和油脂，对于卵子激
斑马鱼雌雄鉴别与饲养 斑马鱼又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼，鲤科属，原产南亚印度，分布于缅甸、孟加拉、新加坡等地。 斑马鱼长4—6cm，体呈纺锤形，稍侧扁。斑马鱼头稍尖身上有斑马样的条纹，故得名斑马鱼。其背部为橄榄色，体侧从头至尾布满多条蓝色条纹，雄鱼为深蓝间柠檬色条纹，雌鱼为蓝色间银灰色条纹。斑马鱼眼眶虹膜黄色，泛红光。 斑马鱼的臀鳍宽大。与背鳍相对应，胸鳍较小。斑马鱼的品种约有10多种，主要区别在条纹和色彩上，也有鳍行上的变化。如有长鳍斑马鱼、金丝斑马鱼、闪电斑马鱼、大斑马鱼等。 饲养要求 斑马鱼性情温和，活泼好动，几乎一刻不停的游动。其对饲水水质要求不苛刻，喜在酸碱度中性的水中生活，喜新水，适宜水温21—26摄氏度。但斑马鱼既耐寒又耐热，水温在15—40摄氏度之间仍可生活。 斑马鱼喜在上层水域活动觅食，对饵料不挑剔，各种鱼虫及人工饲料均棵投喂。饲养斑马鱼最好在缸底铺些较大的卵石，便于沉淀物聚集，不使水浑浊。它不进攻杀害其他鱼，适宜混养。斑马鱼色彩美丽，饲养条件粗放，因而是人们最喜欢养的热带鱼之一。 雌雄鉴别与繁殖
斑马鱼的雌雄不难区分：雄斑马鱼鱼体修长，鳍大，体色偏黄，臀鳍呈棕黄色，条纹显着；雌鱼鱼体较肥大，体色较淡，偏蓝，臀鳍呈淡黄色，怀卵期鱼腹膨大明显。 斑马鱼属卵生鱼类，4月龄进入性成熟期，一般用5月龄鱼繁殖较好。斑马鱼的繁殖周期约7天左右，一年可连续繁殖6—7次，而且产卵量高。 斑马鱼的繁殖比较容易。繁殖用水要求pH6.5-7.5，硬度6-8，水温25-26摄氏度。由于斑马的卵为无粘性的沉性卵，并且斑马鱼和其他鲤科鱼一样会吃掉自己的卵。所以大家应该在繁殖缸底铺设一些可以将卵隐蔽起来的物品。笔者以前是将玻璃弹球（也就是小孩子玩的玻璃球）密密的在缸底铺上一层，这样卵会从玻璃球的空隙落到繁殖缸底部，玻璃球可以将亲鱼和卵分开以免亲鱼吃掉卵。另外，还可以用玻璃作出一个一个格子，放到繁殖缸里，每一格约10×10cm，这样就可以将多对亲鱼放到一起产卵。然后同时孵化，幼鱼也可以同时喂养和管理了。 繁殖时可按雌雄鱼1:2的比例防入繁殖缸内，一般头天晚上防入，第二天上午或中午就可以产卵受精。排完卵要将种鱼捞出另养。一条雌鱼每次可排卵300-1000粒不等。受精卵经2-3天可孵出仔鱼，再经2天仔鱼开始游动觅食，开始先以“洄水”喂之，10天后可改喂其他小型鱼虫。
年月日姓名：专业年级：同组者 科目：发育生物学实验题目：斑马鱼性腺促熟及早期发育模式 一【目的要求】 1、通过实验操作掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术 2、通过斑马鱼早期发育的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识 二【实验材料】 （一）器材 培养缸、控温棒、解剖镜、显微镜 (二)试剂 经太阳晒过至少一天的自来水 （三）动物 斑马鱼（Danio sp.） 三【实验内容】 （一）亲鱼培育和性腺促熟 挑选体长大于4厘米的斑马鱼放养于鱼缸中，水温保持在28℃左右，放养数量根据鱼缸中水体体积而定，密度5尾\L左右。饲喂亲鱼用的饲料有活性饲料和配合饲料两种，直接购自于观赏鱼市场，要求每天投喂4次，及时清除残饵，隔天换水，快到繁殖季节时将雌雄分养，加强管理。 （三）繁殖 繁殖前一天中午，将雌雄合养于繁殖缸里，要求雌雄比例为2:1。由于斑马鱼有食卵的习性，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔为2-3毫米的网将亲鱼限制在繁殖缸的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。一般次日凌晨到中午可以产卵和受精，受精卵便沉降于缸底，将繁殖后的亲鱼及时转移至别的培养缸中，吸取缸底受精卵，剔除异物以及眼观有白色小斑点、畸形异常卵。 （三）斑马鱼胚胎发育模式 孵化期间，培养用水温度控制在25-28℃，每天要及时清除败育卵，并换水1-2次。按时观察记录斑马鱼胚胎的早期发育过程，绘制斑马鱼的胚胎发育模式图。 1、受精卵：斑马鱼的卵呈圆球形，橙黄色、微透明，直径0.8-0.9 mm。在水中，受精卵卵膜(壳膜)迅速膨胀，出现透明的卵周隙，在壳膜上可以看到呈漏斗状的卵膜孔。 2、卵裂：卵子受精后，细胞质迅速向动物极流动，并集中形成帽状的胚盘。卵裂即在胚盘范围内进行，卵裂属于不全裂，盘状卵裂。第一次分裂为经裂，分裂沟自上而下，但不到达底部，结果分为两个相等的不完整分裂球。第二次分裂仍为经裂，分裂面与第一次垂直，仍是不完全分裂，于是分成大小相似的四个分裂球。第三次分裂亦为经裂，两个分裂面在第一次分裂面两侧，并与第一次分裂面平行，形成两排，每排四个，共八个分裂球。第四次分裂仍为经裂，两个分裂面在第二次分裂面的两侧，并与第二次分裂面平行，分裂为四排每排有四个分裂球，共形成十六个分裂球。第五次分裂，有经裂也有纬裂，分裂面己不整齐，分裂球大小也不一致。以后几次分裂，分裂球愈分愈小。 3、囊胚期：由于细胞不断分裂，数目增多，细胞体积逐渐变小，分裂球层次增加，同时在胚盘与卵黄之间产生一空腔，即为胚盘下腔，此时称囊胚期，又分为囊胚早期、中期和晚期，也称高囊胚、中囊胚和低囊胚。 4、原肠胚期：囊胚晚期后，细胞逐渐向植物半球下包，胚盘变扁，开始进入原肠期。当胚盘下包到卵黄的一半时，胚环最大，背唇呈新月状，此即胚盾开始，即原肠早期。胚盘继续下包到胚胎的三分之二时，由于细胞不断集中于胚环的一处，致使该处呈一盾状隆起即
斑马鱼成熟期短，繁殖能力强，在养殖过程中经常会遇到自然繁殖和人工繁殖等情况，这时饲养者就需要格外注意一些问题，以保障卵子受精率和幼苗的成活率。 斑马鱼是一种常见的热带鱼。体型纤细，成体长3～4cm，对水质要求不高。孵出后约4个月达到性成斑马鱼熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明，发育温度要求在25～31摄氏度之间。斑马鱼由于个体小，养殖花费少，能大规模繁育。饲养者在养殖过程中遇到繁殖情况，就需要格外注意。 首先，斑马鱼在繁殖期对水质水温有所要求。一般而言，斑马鱼繁殖期需要用到软性水，水质偏硬，水温维持在25-26摄氏度即可。不少养殖设备厂家生产制造的养殖单元配有恒温设备，可以根据不同研究需要调节水温。对于水质问题，则需饲养者勤观察，勤换水，以调整到适宜的水质。 另外，需要注意的是斑马鱼在产卵后会有吸食鱼卵的习惯。因此，饲养者需要提前在养殖单元底部铺上一层网板或者小的鹅卵石。这样一来，在斑马鱼产卵后，其鱼卵会散落到网板下面或散落在小卵石的空隙中，可有效防止亲鱼蚕食鱼卵，保证斑马鱼卵成活率。在亲鱼产卵一段时间后，即会有一些没有受精的鱼卵开始发白时，就可以用吸管将鱼卵吸出，放置到培养皿中进行孵化。
在鱼卵孵化期间，需要格外注意其水温。斑马鱼鱼卵的孵出水温需要保持在24摄氏度左右，两三天后受精卵会孵出仔鱼。如果在水温28摄氏度时，受精卵经36小时会孵出仔鱼。雌鱼每次产卵300余枚，多时能有上千枚。繁殖仔鱼的水温约为25摄氏度左右，仔鱼孵出后7~8天，才会开始主动摄取食物，此时，饲养者需要投喂蛋黄灰水，以后再投喂小鱼虫，以帮助幼鱼进食。 上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！
斑马鱼作为一种模式生物，与人类的基因有着较高的相似性，这表明对其所做的实验结果大多情况也同样适用于人类，因此受到科学实验的重视，被广泛应用在高校以及各大科研场所。实验室中是如何进行斑马鱼饲养的呢？相信这是很多人比较好奇的一点。 为不影响实验效果，需要保障斑马鱼的健康体质，这就需要在饲养过程中注意水温水质、饵料、养殖设备以及病鱼处理等方面格外注意。 一、水温水质要求 无论是用作日常观赏，还是科研实验，斑马鱼对水质的要求都不高。一般而言，饲养水温要保持在26～28℃即可，但是水温低于这一范围，甚至达到11～15℃时，也不影响斑马鱼的正常生存。在水质方面，斑马鱼饲养的水质保持在中性即可，但若为偏软性水，斑马鱼也是比较喜欢的。当然，在斑马鱼繁殖下一代期间，水质需要用软水，软水可以提高受精和孵化率。这时选择的水族箱和养殖缸应该具有完整且独立的循环系统以提供良好的水质，可使用于淡海水养殖均，同时配有恒温设备，能够根据不同科研需要调节到适宜的水温。 二、饵料要求 其实，斑马鱼很好饲养，因为不仅对水温水质的要求不高，还不挑饵料。不论是天然饵料，还是人工配合饲料都可以满足它的生长需要，斑马鱼都会摄食。为了能够满足实验需求，一些养殖设备厂家还特别针对斑马鱼配置了相应的饵料，能够满足不同数量及成长阶段的斑马鱼饲养要求。在投喂次数上，每天投喂2-3次就能够满足斑马鱼一天的食物量需求，而繁殖期的斑马鱼需要增加一次投喂。
三、设备要求 实验室的斑马鱼饲养量比较大，所需的斑马鱼饲养设备也就比较大。市面上的斑马鱼饲养设备规格全，质优良、参数性能过关，可满足实验室饲养需求。此外，还需要注意，斑马鱼成长过程中对氧气的需求量会越来越大，饲养设备的选择也应该注意到这一点。 四、病鱼处理 斑马鱼很少生病，但在饲养过程中，难免会遇到斑马鱼生病的情况。遇到这种情况不要着急，需要先把病鱼及时捞出，进行隔离。同时对病鱼及时进行药物治疗，当然，对于治疗无效的病鱼，要及时淘汰，以防止造成大面积感染。 上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！
《生物实验“奇兵”---斑马鱼》说课稿 一、实验教学目标 （一）教材分析： 苏教版七年级下册 第十章第二节《人体血液循环》 第十三章第一节《保护生物圈---环境在恶化》 八年级上册 第十四章第二节《千姿百态的动物世界》 八年级下册 第二十六章第一节《远离烟酒》 培养学生实事求是的科学态度，体验科学探究的过程，增强关爱生命、保护环境的社会责任。 （二）课标分析：概述血液循环；发展科学探究能力；建立保护生物圈的意识；说明酗酒对人体健康的危害。 （三）学情分析：我校为每位生物老师配备生物学科生物实验教室，日常的生物课堂教学在生物实验教室进行，学生接触实验机会多，参与实验的积极性高，乐于探究和钻研，小组实验协作和操作能力强，不拘泥于课本实验，课后主动探索。 （四）制定目标： （一）学生发现现实中的生物学问题，针对特定的生物学现象，提出问题，做出假设，实验设计并实施方案，增强科学探究能力。 （二）《观察斑马鱼尾鳍血液流动》实验后，学生能够基于生物学事实和证据，阐述毛细血管、动脉、静脉及血管内血液流动情况，并作图，树立生命观念。 （三）学生利用结构与功能观，完成《探究鱼鳍与运动的关系》实验。了解鱼鳍在运动中的作用，提升了科学探究的能力。 （四）《探究模拟酸雨对斑马鱼生命活动的影响》，通过实验，学生学会定性定量分析实验数据，提升科学思维的能力，增强关爱生命，保护环境的社会责任。 （五）《探究酒精对斑马鱼幼鱼心率的影响》实验，培养实事求是的科学态度，树立健康的生活观、珍爱生命的意识。
（一）实验设计创新 图1一种实验材料完成课本中不同章节的多个实验 原实验中使用金鱼、植物种子、鲫鱼及水蚤，实验改进后使用斑马鱼这一种实验材料，就可以完成课本中不同章节的多个实验，做到了实验材料的循环利用，节约成本。 （二） 实验设计思路 图2 实验设计思路-思维导图
万方数据
复旦学报（医学版）２００６年１月，３３（１） 脏的发生与发育过程中的作用提供依据。 材料和方法 斑马鱼胚胎固定收集不同发育时期的ＡＢ野 生型斑马鱼（购自俄勒冈大学，斑马鱼养殖系统从美国ＡｑｕａｔｉｃＨａｂｉｔａｔｓ公司引进）胚胎：６ｈｐｆ（ｈｏｕｒｓｐｏｓｔ—ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，受精后６ｈ）、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、２０、２４、３６、４８ｈｐｆ，用４％多聚甲醛溶液固定过夜（至少固定１２ｈ），保存于甲醇溶液中，置一２０℃备用。 引物设计与合成首先根据Ｇｅｎｂａｎｋ数据库查得斑马鱼Ｍｅｆ２ｃｃＤＮＡ序列（Ｇｅｎｂａｎｋ：３０５７５），以包含密码子１３１９～２３８５位的基因序列为ＲＮＡ探针序列，探针序列总长１０６６ｂｐ。ＲＮＡ探针的引物序列（由上海赛百盛生物有限公司合成）为：Ｆｏｒ—ｗａｒｄ：５＇－ＣＴＣＡＡＡＴＡＣＧＧＡＡＡＡＧＣＴＡＣ一３ ７Ｒｅｖｅｒｓｅ：５＇－ＣＧＣＣＣＧＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＧＡ ＧＡＧ一３ ７。 ＰＣＲ扩增以斑马鱼基因组总ＤＮＡ为模板，用以上两条引物特异扩增ＲＮＡ探针序列。扩增条件为：９５℃预变性２ｍｉｎ，９５℃变性４５Ｓ，５７℃复性４５Ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ，重复３０个循环，最后７２℃延伸７ｍｉｎ。１％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。 合成反义ＲＮＡ探针将纯化的扩增产物连接到ｐＧＥＭ—Ｔ载体（Ｐｒｏｍｅｇａ）中，然后转化到ＤＨ５ａ感受态菌株（博大泰克）中进行克隆。根据Ｈａｒｌａｎｄ的方法［４３抽提转染后的连接载体质粒（测序验证质粒中插入序列是否正确），ＮｏｔＩ内切酶（ＮＥＢ）酶切完全，以其为模板转录合成反义ＲＮＡ探针。 整体原位杂交取不同发育时期的胚胎，用１×ＰＢＳＴ溶液洗去多余的甲醇溶液，将胚胎置于６５℃水浴进行预杂交３ｈ，然后加入所合成的反义ＲＮＡ探针６５℃水浴杂交过夜。多余的探针用０．２×ＳＳＣ溶液洗去，加入ａｎｔｉ—Ｄｉｇ—ＡＰ（Ｒｏｃｈｅ）与反义ＲＮＡ探针结合过夜。未结合的抗体用１ＸＰＢＳＴ溶液洗去，再加入ＢＣＩＰ／ＮＢＴ／ＮＴＭＴ溶液显色３０ｍｉｎ，迅速用１ＸＰＢＳＴ溶液洗去多余的显色液，在显微镜下观察并记录结果。 结果 探针合成效果琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，本实验中设计的引物能够特异性地扩增目标基因片段。图１Ａ为特异扩增的ＲＮＡ探针序列电泳检测结果，扩增的ＲＮＡ探针序列大小约１０６６ｂｐ。图１Ｂ为酶切后电泳迁移率的改变，２、３泳道是未被酶切的质粒序列，４、５泳道是酶切后的质粒序列。酶切后质粒电泳速率要比未酶切质粒的速率要快。同时，我们将该序列测序后进一步验证（由上海赛百盛生物有限公司测序），连接至ｐＧＥＭ—Ｔ载体中的ＲＮＡ探针的序列是正确的。 图ｌ凝胶分析ＰＣＲ结果（Ａ）和质粒酶切结果（Ｂ）Ｆｉｇ１ＧｅｌａｎａｌｙｓｉｓＰＣＲ（Ａ）ａｎｄｐｌａｓｍｉｄ（Ｂ） Ａ：１：ｍａｒｋｅｒ；２－５；ＲＮＡｐｒｏｂｅ．Ｂ：１：ｍａｒｋｅｒ；２－３：Ｍｅｆ２ｃＲＮＡ—ｐＧＥＭＴ； ４－５：Ｍｅｆ２ｃＲＮＡ－ｐＧＥＭＴｃｕｔｂｙＮｏｔ－１ 斑马鱼整体原位杂交在斑马鱼胚胎发育早期，Ｍｅｆ２ｃ在胚体中没有自身的转录产物，仅少许从母体自带的Ｍｅｆ２ｃｍＲＮＡ存在，胚体染色呈现为弥散均染状态（图２：ａ，ｂ见封二）。当胚胎逐步发育到１３ｈｐｆ，Ｍｅｆ２ｃ在体节中开始表达，此时约已形成８个体节，表现为在背侧出现两条条带状的深染部位；同时，在心脏中的表达也开始出现，在靠近头侧部出现有深染的片状区域，代表早期的生心区的细胞中有Ｍｅｆ２ｃ表达（图２：ｃｌ，ｃ２见封二）。当胚胎发育至１５ｈｐｆ时，体节以及心脏中Ｍｅｆ２ｃ的表达更加明显，Ｍｅｆ２ｃ在体节的表达表现为各个体节之间能清晰区分，并表现为典型的Ｖ型结构；同时，心脏中的表达表现为生心区细胞开始集中，逐步靠近体轴开始形成心管结构，体现出染色更为集中，由片状染色转变成为线状（图２：ｄｌ，ｄ２见封二）。随着胚胎进一步发育，体节逐步完善，心管逐步形成，Ｍｅｆ２ｃ仍然保持较高的转录水平，体节中表现为随着体节的增多，Ｖ型染色的体节也随之增多；在心脏的表达呈现出明显的线管状结构（图２：ｅ，ｆ见封 －－）。斑马鱼的胚胎发育随着时间的进展而逐步完 万方数据
斑马鱼是国际标准组织推荐的毒性实验的标准用鱼之一,一直被广泛的应用于环境监测领域。为了满足科研机构对斑马鱼的大量需求，需要对斑马鱼进行人工繁殖，下面一起来看一下吧。 简单来看，斑马鱼是属于比较小型的淡水鱼类，成年的个体体长一般在20-40毫米之间，其食性较复杂, 比较容易饲养和管理。即使在小容器内进行人工饲养，它们也能正常生长、繁殖，丝毫不会产生影响。目前，斑马鱼的生存情况堪忧，是一种濒临绝种的鱼类，很少有比较自然的水域能够满足它的栖息，主要原因是外来种鱼类、农药和水土保持不当，严重破坏了斑马鱼鱼的生存空间。 简单了解了斑马鱼后，我们可以再来看看它的繁殖情况。斑马鱼繁殖力强，几乎一年四季都可繁殖，每次产卵约10至20粒，产卵量依雌鱼体型大小不同，在食物充足的水域，2至3天产卵一次，仔鱼孵化约8至14日，快慢跟水温有关。体外受精，出生卵直径约0.1公分，仔鱼孵化出来约为0.3公分，一星期可达0.5公分，一个月长到1公分，约半年就成熟达3公分，大的约4公分左右，寿命约3至4年。 雄鱼发情时腹鳍会明显变黑，头顶两眼中有明显黑线，会占地盘，怀卵之雌鱼进入会立即上前交配，未怀卵雌鱼或其他雄鱼进入时会立即上前驱赶。青鳉鱼若有适当环境非常容易繁殖，不过授精卵应迅速移开到其他环境，否则会被成鱼吃掉。
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斑马鱼性腺促熟和早期发育模式 XXX,YYY,ZZZ 一、目的与要求： 1、掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术。 2、加深硬骨鱼早期形态发育模式的理解。 二、实验内容： （一）斑马鱼性腺促熟和产卵调控。 1、斑马鱼特性： 斑马鱼一般4月龄性成熟，5月龄鱼繁殖较好；繁殖周期短，一般7天左右。 雌雄分辨：雌性（偏银灰色，体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性）；雄性（偏柠檬色，腹部扁平，身材显得修长）。【如图一、图二】 图一：雄鱼图二：雌鱼 精、卵体外受精，体外发育，且速度快。发育速度与温度密切相关：在25℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需36h；在28℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需24h，即胚胎发育成熟。 2、斑马鱼繁殖准备： 将亲鱼雌、雄分开饲喂2～3天（要在饲养箱中加一玻璃隔板，将雌、雄分开，但同时相互之间又要能够看到），繁殖时将雌、雄按1：1或2∶1比例放入产卵池中进行产卵受精。在此过程中一般采用10h光照，14h黑暗的光周期。斑马鱼一般在混合的次日凌晨产卵，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔2～3mm的网将亲鱼限制在产卵池的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。每条雌鱼可产卵300～1000粒。 （二）斑马鱼早期发育观察： 斑马鱼早期胚胎发育主要有以下七个时期（附有相应的时间）： （1）合子期Zygote Period(0-0.75h) （2）卵裂期Cleavage Period(0.75-2.2h) （3）囊胚期Blastula Period(2.25-5.25h) （4）原肠胚期Gastrula Period(5.3-10h) （5）体节期Segmentation Period(10-24h) （6）咽期Pharyngula Period(24-48h) （7）孵化期Hatching Period(48-72h)
“斑马鱼的培养及TALENs技术的应用”预习报告 一、实验原理 1、TALENs实验技术原理 类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease, TALEN)是最近发展起来的一类新型的人工核酸内切酶, 它由特异性的 TALE DNA 结合结构域和非特异性的 FokⅠ核酸内切酶切割结构域组成。TALEN 能够根据用户需要切割特定的核苷酸靶序列, 造成 DNA 双链断裂, 从而诱导该靶序列产生 indel突变。 2、斑马鱼的生活习性以及作为模式生物的优势 斑马鱼是生长在印度、巴基斯坦淡水河流中的一种硬骨鱼（鲤鱼），成年鱼全身仅长4－5厘米，因全身横向分布着一道一道褐色的斑马线而得名。斑马鱼很容易在实验室饲养，一般3个月就可以达到生殖成熟期，雌鱼每次产卵200枚左右，一生可产卵数千枚，斑马鱼所产之卵经24小时即可胚胎发育成熟，仔鱼期只有1个月。更独特的是，斑马鱼的卵是透明的，整个胚胎发育在体外完成，也是透明的。 优势：显著优势在于体积小( 3cm～4 cm)，可在较小的空间大量繁殖；产卵量高(每周200多个)；发育快，许多组织在受精后24 h开始形成；成熟周期短；体外受精且胚胎透明，可在体视解剖镜下观察；单倍体、雌核发育二倍体的制作和突变体的获得均较容易；精子可以冷冻保存。所有这些特点都使斑马鱼非常适合于遗传学的研究。斑马鱼的基因组中大约含有30000个基因，这个数目与人类差不多，而且它的许多基因与人类存在一一对应的关系。它的神经中枢系统、内脏器官、血液以及视觉系统，在分子水平上85%与人相同。 二、实验目的 通过本实验可以了解TALENs实验技术的基本原理，熟悉其几个关键实验步骤的操作，学习显微注射技术，从而能够独立应用这些技术进行相关学术研究。 三、实验器材 1、实验仪器 超净工作台(细菌操作用)、细菌培养摇床、台式离心机、凝胶电泳仪、凝胶电泳槽、凝胶成像仪、水浴锅、恒温培养箱、漩涡振荡器(Vortex) 、 NanoDrop(ND-1000 Spectro pho tometer)、PCR 仪，体视显微镜、恒温培养箱、配鱼缸、台式冷冻离心机 1.3.2 耗材细菌培养皿、移液枪、移液枪枪头、Eppendorf 离心管、PCR 管、显微操作仪，倒置显微镜，拉针仪，胶头滴管，胶固定板。 2、实验试剂 NEB 限制性内切酶：BstNI-HF、KpnⅠ、NheⅠ-HF、NotⅠ-HF 或 SacⅡ、SpeⅠ-HF。试剂盒：DNA 连接试剂盒(TaKaRa, D6020)、微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、质粒小提试剂