硕士学位论文
论文题目：四君子汤药物血清对人胃癌细胞株BGC-823
BGC-823、、SGC-7901侧群细胞生物学特性的影响
Drug serum of sijunzi decoction impact on biological characteristics of side population cells in human gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901
研究生姓名:
张伟
指导教师:
钱军
学科专业:
肿瘤学
研究方向:
消化系统肿瘤
论文工作时间:
2011年10月至2013年4月
学位论文原创性声明
本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验研究工作所取得的成果，本论文中不包含其他人已经发表或已经获取得的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的实验研究以及论文撰写过程中给予帮助和建议等贡献的其他人士，也已作了致谢说明。
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学位论文作者签名：
日期：年月日
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声明人完全理解本声明的法律责任。
研究生签名：导师签名：日期：年月日
目录
中文摘要 (1)
英文摘要 (3)
正文
前言 (6)
第一部分
人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞检测及分选 (11)
实验材料 (11)
实验方法 (13)
结果 (16)
讨论 (18)
小结 (20)
第二部分
人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞的生物学鉴定 (21)
实验材料 (21)
实验方法 (23)
结果 (26)
讨论 (34)
小结 (35)
第三部分
四君子汤药物血清对人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞生物学特性的影响 (36)
实验材料 (36)
实验方法 (38)
结果 (41)
讨论 (47)
小结 (48)
结论 (49)
参考文献 (50)
致谢 (53)
附录 (54)
附录A缩略词表 (54)
附录B文献综述 (55)
四君子汤药物血清对人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细
胞生物学特性的影响
中文摘要
第一部分人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞检测及分选【目的】检测胃癌细胞株中的SP细胞比例，并分选出SP细胞。
【方法】选择低、中分化程度的人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901,应用流式细胞仪荧光激活分选法，以Hoechst33342染色，维拉帕米拮抗对照，检测2株人胃癌细胞株中的SP细胞比例，并分选出SP细胞。
【结果】BGC-823SP细胞比例为2.60%±1.25%，SGC-7901SP细胞比例为2.53%±0.85%。
【结论】人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中存在一定数量的SP细胞，且可被分选，不同分化程度的肿瘤细胞SP细胞的比例存在一定的差异。
第二部分人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901侧群细胞的生物学鉴定【目的】从体外增殖活力、侵袭能力、成瘤能力等方面对分选出的人胃癌SP细胞进行生物学特征的初步鉴定，探讨以SP细胞作为肿瘤干细胞研究切入点的可行性。【方法】通过细胞生长曲线（CCK-8法）、平板克隆形成实验比较SP细胞与NSP细胞及未分选细胞的体外增殖活力；应用细胞侵袭transwell试验比较胃癌SP与NSP 及未分选细胞的侵袭能力差异；应用异种移植NOD/SCID小鼠成瘤实验比较胃癌SP与NSP细胞及未分选细胞的体内成瘤能力差异；通过胃癌SP体内成瘤细胞分化现象鉴定其多向分化特性。
【结果】细胞生长曲线显示，BGC-823及SGC-7901SP细胞的增殖能力明显高于NSP细胞及未分选细胞（P<0.05）。平板克隆实验结果显示，BGC-823及SGC-7901 SP细胞克隆形成率大于大于NSP及未分选细胞(P＜0.05)。Transwell细胞侵袭实验显示，BGC-823及SGC-7901SP细胞侵袭力小于NSP细胞及未分选细胞（P＜0.05）。异种移植瘤实验结果显示，BGC-823及SGC-7901SP细胞在最早成瘤时间、瘤体生长曲线及最终成瘤重量上均显示出较NSP细胞及未分选细胞强的成瘤能力。胃癌SP细胞与NSP细胞及未分选细胞成瘤后，均可转化成不同分化程度的胃癌细
胞。
【结论】人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的SP细胞具有较NSP细胞及未分选细胞强的体外增殖活力、成瘤能力，侵袭力较弱，具有多向分化特性，符合肿瘤干细胞特性，SP细胞富集肿瘤干细胞，可以作为肿瘤干细胞研究的切入点。
第三部分四君子汤药物血清对人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群
细胞生物学特性的影响
【目的】从体外增殖活力、成瘤能力研究四君子汤药物血清干预后对人胃癌SP细胞生物学特性的影响，为中药四君子汤在胃癌的治疗及相关应用提供客观的实验及理论依据。
【方法】制作动物药物血清，高效液相色谱分析法检测血清药效浓度，药物血清干预胃癌SP细胞后通过细胞生长曲线（CCK-8法）、平板克隆形成实验比较对体外增殖活力的影响，应用异种移植NOD/SCID小鼠成瘤实验比较对体内成瘤能力的影响。
【结果】高效液相色谱分析法显示药物血清存在人参皂甙Rg1的药效成分，细胞生长曲线显示，经药物血清干预后BGC-823、SGC-7901的SP及NSP组细胞增殖活力低于未经干预组细胞（P＜0.05），异种移植瘤实验结果显示，经药物血清干预后BGC-823、SGC-7901的SP及NSP组细胞在瘤体生长曲线及最终成瘤重量上显示出较未经干预细胞组弱的成瘤能力（P＜0.05）。
【结论】四君子汤药物血清干预后，胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901SP及NSP细胞的体外增殖能力，成瘤能力均下降，四君子汤药物血清对胃癌株BGC-823、SGC-7901SP细胞的体外增殖、成瘤有抑制作用。
【关键词】胃癌肿瘤干细胞SP细胞四君子汤生物学特性
Drug serum of sijunzi decoction impact on biological
characteristics of side population cells in human gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901
Abstract
PartⅠIsolation of side Population cells in human gastric carcinoma cell lines
BGC-823、SGC-7901
Objective:Detection and isolation the proportion of SP cell in gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901.
Methods:Choice low、moderately degree of differentiation of gastric carcinoma cell lines SGC-7901、BGC-823,stained by fluorochrome Hoechst33342，controlled with the Presence of verapamil,SP cells Were analyzed and isolated by fluorescence-activated cell sorting(FACS).Detection and isolation the proportion of SP cell from human gastric carcinoma cell lines.
Results:SP cell was detected in gastric carcinoma cell line BGC-823with the proportion of2.60%±1.25%,gastric carcinoma cell line SGC-7901with the proportion of2.53%±0.85%.
Conclusion:There existing a certain number of SP cells in human gastric carcinoma cell lines SGC-7901,BGC-823,which can be isolation.There are some differences the proportion of SP cells in various of differentiation degree of tumor cells.
PartⅡIdentify the biological characteristic of side population cells in human gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901
Objective:Appraisal biology characteristics of the SP cells isolation from gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901through proliferation activity in vitro, matrigel invasion assay,tumorigenicity in vivo preliminary,to investigate the feasibility of starting Research on gastric cancer stem cell from the side population.
Methods:Compare the proliferation activity in vitro of the SP、NSP cells and the total cells by cell growth curve(CCK-8),and colony formation assay using matrigel invasion https://www.doczj.com/doc/7c11281728.html,pare the differences of invasive ability in vitro of the SP、NSP cells and the total cells using xenograft transplantation of NOD/SCID mouse tumor
experim https://www.doczj.com/doc/7c11281728.html,paring SP and NSP cells and the total cells with sorting tumorigenicity differences in vivo.Identified the characteristic of differentiation through the tumor in vivo differentiation phenomenon.
Results:Cell growth curve shows that the proliferation ability of BGC-823and SGC-7901SP cell is obviously higher than NSP cell and the total cell(P<0.05).Flat cloning experiment results shows that the clone formation rate of BGC-823and SGC-7901SP cell is greater than NSP cell and the total cell(P<0.05).Transwell cells invasion assay showed that BGC-823and SGC-7901SP cell invasive ability less than NSP cell and the total cell(P<0.05).Xenograft tumor experimental results show that BGC-823and SGC-7901SP cell showed stronger tumorigenicity than NSP cell and the total cell.SP and NSP cell and the total cell tumor in vivo,all can be transformed to different differentiation degree of gastric carcinoma cells.
Conclusion:People gastric carcinoma cell lines BGC–823、SGC–7901SP cell has a strong proliferation in vitro and tumorigenicity than NSP cell and the total cell without sorting,invasive ability is weak,has the multidirectional differentiation characteristics, properties in line with the cancer stem cell,the SP cell enrich cancer stem cells,can be used as starting Research on gastric cancer stem cell.
PartⅢDrug serum of sijunzi decoction impact on biological characteristics of side population cells in human gastric carcinoma cell lines BGC-823、SGC-7901 Objective:The intervention drug serum of sijunzi decoction impact on biological characteristics of SP cells in human gastric carcinoma cell lines through proliferation activity in vivo and tumorigenicity research,which is provided objective experimental and theoretical basis for traditional Chinese medicine in the treatment of gastric cancer. Methods:Make animal drug serum,high performance liquid chromatography(HPLC) detect the concentrations of serum drug,Compare the impaction on proliferation activity in vitro from cell growth curve(CCK8)and colony formation assay after intervention of drug serum,application xenograft transplantation of NOD/SCID mouse tumor experiments Compare the impact on tumorigenicity in vivo after intervention of drug serum.
Results:High performance liquid chromatography(HPLC)analysis shows that drug active components which are existed in serum,cell growth curve showed that BGC-823 and SGC-7901SP and NSP cells after the intervention of drug serum proliferation
activity below without which is the intervention(P<0.05),xenograft transplantation experiment results showed that BGC-823and SGC-7901SP and NSP cells after the intervention of drug serum showed weak tumorigenieity in vivo than the one without intervention by tumors growth curve(P<0.05).
Conclusion:The intervention of drug serum Sijunzi decoction in gastric cancer cell lines BGC-823and SGC-7901SP and NSP cells decreased in proliferation activity in vivo and tumorigenicity,drug serum of sijunzi decoction can inhibite proliferation activity and tumorigenicity of SP cells on gastric cancer BGC-823and SGC-7901.
Key words:gastric carcinoma cancer stem cell side population sijunzi decoction biological characteristics
前言
胃癌是常见的恶性肿瘤之一，在全球常见肿瘤发病率位居第四位，与恶性肿瘤相关的死亡原因中居第二位[1]。手术目前是唯一可能根治胃癌的手段，但实际仅限于部分病变较早的Ⅰ期胃癌，在我国80％的胃癌患者为进展期胃癌，这部分患
50％。近年来，随着“胃癌根治性手术的规范化”者术后5年生存率一般仅为30％
~
和“胃癌综合治疗方案的优化”的提出及应用，胃癌的综合治疗取得一定的进步，疗效有所提高，但与乳腺癌、结直肠癌等肿瘤相比，总体疗效仍不能令人满意，绝大多数胃癌患者仍因术后转移、复发而不治。胃癌的转移复发已成为影响胃癌患者生存的关键因素，因此，临床上迫切需要寻求新的干预治疗策略，以提高胃癌的疗效。
1994年Lapidot等在白血病细胞中通过细胞特异性表面标志分离出具有维持细胞恶性显型和不断自我更新的细胞，命名为急性粒细胞性白血病干细胞（leukemic stem cell，LSC），提出了肿瘤干细胞的概念。肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSC）理论由Reya等[2]正式提出，该理论认为肿瘤是由一群功能异质性的细胞组成，其中只有小部分的肿瘤细胞才具有自我更新和多向分化能力，是维持肿瘤的恶性增值、侵袭、转移的根源，被称为肿瘤干细胞，而肿瘤组织中其它细胞经过短暂的分化后最终死亡。肿瘤干细胞理论的提出为肿瘤的治疗提供了新的思路。研究认为肿瘤干细胞具有以下特点：（1）无限的自我更新能力：肿瘤干细胞通过对称分裂和不对称分裂不仅能够维持自身数量的恒定，而且能够产生具有强大增殖能力的子代细胞，是肿瘤生长和扩增的必备条件。（2）多向分化潜能：肿瘤干细胞能够产生不同分化程度的子代细胞，在体内形成新的肿瘤。（3）具有抗放、化疗的能力：Bao等[3]研究发现神经胶质瘤CD133+细胞在接受放疗时表现出更为优异的生存能力，其放射线诱导的凋亡比率明显低于CD133－细胞。乳腺癌患者给予4个周期的CTX方案化疗后，CD44+/CD24－细胞的比例由4.8%增加到14.8%，而且形成微球体的效率增加，从临床角度证明了肿瘤干细胞具有化疗抵抗性。目前认为肿瘤干细胞抵抗化疗的一个主要原因是CSC高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白（ATP-binding cassette,ABC）转运子，如ABCB1和ABCC1，前者编码ABCG2和P-糖蛋白，是目前在肿瘤中检测到的主要的多药耐药基因[4]。（4）高致瘤性:肿瘤
干细胞在体内外只要极少数量即可成瘤，而一般的肿瘤细胞很难形成集落或体内成瘤。Al-Hajj等[5]研究发现仅2×102个CD44+CD24－/low Lineage－乳腺癌细胞即可在NOD/SCID小鼠乳腺脂肪垫内成瘤，而注射5×104个非这种表现型的肿瘤细胞也不能形成肿瘤。（5）转移能力:Hermann等[6]在研究中发现胰腺癌肿瘤干细胞CD133+细胞中的一个亚群CD133+CXCR4+细胞具有侵袭和转移能力，而CD133+CXCR4－细胞则不能在小鼠体内形成转移灶。这说明肿瘤细胞中有部分肿瘤干细胞参与了肿瘤的转移过程，这部分细胞被称作转移性肿瘤干细胞。
肿瘤干细胞与正常干细胞具有许多相同的特性(1)肿瘤干细胞同干细胞类似，虽然不处于分化途径的终端，但保持着未分化状态，具有分化能力，细胞具有自我更新能力和相对无限的增殖分裂潜能同时能诱导血管的形成，在体外缺乏生长因子的条件下仍能迅速生长。(2)肿瘤干细胞和干细胞共同拥有许多细胞表面抗原标记，如CD133、CD90、CD44、ABCG2等，拥有许多相同的调控因子调控细胞的自我更新、分化及增殖，如Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog/SMO、Bmi及Oct-3/4等。(3)肿瘤干细胞和干细胞同样具有端粒酶活性以及扩增的端粒重复序列，而一般的终末端分化细胞是不具有或只具有较低的端粒酶活性。(4)干细胞和肿瘤干细胞均有两种分裂方式：一种是对称分裂，形成两个相同的干细胞；另一种是非对称分裂，由于细胞质中调节分化蛋白不均匀地分配，使得一个子细胞成为功能专一的分化细胞；而另一个保持亲代的特征，作为干细胞保留下来。(5)干细胞具有迁移的特性，而肿瘤干细胞也具有转移的能力。
肿瘤干细胞与正常干细胞有许多相似的特性并具有许多相同的信号通路，故目前肿瘤干细胞起源假说中支持肿瘤干细胞起源自正常干细胞的证据最多。Bonnet等[7]研究发现表型为CD34＋CD38－Thy-1＋c-Kit＋IL-3Ra－的初始造血干细胞Thy-1（CD90）的丢失可导致其恶性转化为肿瘤干细胞，认为白血病干细胞可能是由造血干细胞衍生而来。
肿瘤干细胞和干细胞也存在着很多本质的区别：（1）干细胞可以在某一时间内连续分裂，也可在较长时间内处于相对静止状态，干细胞的自我更新具有反馈机制调节，增殖和分化处于平衡状态，是有序的；而在肿瘤干细胞的增殖分化是无序的、失控的。（2）肿瘤干细胞分化程序异常，没有分化为成熟细胞的能力，而干细胞有正常分化程序。（3）肿瘤细胞易于积累复制错误，而正常干细胞则会预防这种现象的出现。
因此，肿瘤干细胞被认为是肿瘤无限增殖、复发及转移的根源，对肿瘤治疗的关键是以肿瘤干细胞为靶点，靶向杀灭肿瘤干细胞，才可能达到治愈肿瘤的目的。
CSC的分裂、增殖、和分化是由多种信号通路调控的，对这些信号通路的靶向治疗是肿瘤治疗的一个关键点。Hedgehog(HH)信号通路是控制干细胞自我更新的主要信号通路之一，HH信号通路成员的上调激活或其抑制剂HHIP(Hedgehog inhibitor)的下调失活与胃癌的发生、发展密切相关，特异性的HH阻断剂cyclopamine可抑制胃癌细胞的生长。McAuliffe等[8]研究认为针对Notch信号通路治疗可以明显提高卵巢癌肿瘤干细胞对铂类药物的化疗敏感性。Lin等[9]研究发现结肠癌肿瘤干细胞CD133可以通过PP2A、P38MAPK、MAPKAPK2及Hsp27信号通路抵抗抗血管生成治疗，认为可以针对这些信号通路来治疗结肠癌。
随着更多CSC特异标志物的发现，CSC标志有望成为治疗靶点，以高表达于急性髓性白血病干细胞中的黏附分子CD44为靶点，Jin等[10]发现H90抗CD44的单克隆抗体能有效靶向白血病干细胞，降低了白血病干细胞的自我更新和转移能力。
诱导CSC分化也是治疗癌症的一种方法，在利用全反式维A酸治疗急性早幼粒白血病患者中，大约90％患者获得完全缓解，超过70％的患者获得治愈，全反式维A酸可能诱导了白血病干细胞的分化。
微环境在肿瘤干细胞的自我更新中起着重要的作用。在神经系统肿瘤中CSC 存在于微血管丰富的微环境中，用Erlotinib（选择性EGFR和ERBB2酪氨酸激酶抑制剂）或Bevacizumab（抗VEGF的单克隆抗体）处理后，肿瘤微环境中的微血管的密度下降，肿瘤干细胞的数目也明显降低，提示其可以选择性地作用于肿瘤干细胞。
现已应用于临床的吉姆单抗/奥佐米星是人源化的抗CD33单抗和细胞毒抗肿瘤抗生素刺孢霉素的偶联物，用于治疗复发的AML。应用伊马替尼治疗CML也是靶向治疗的一项成功。Her-1和Her-2双抑制剂拉帕替尼在治疗乳腺癌的临床研究中亦表明能够抑制乳腺癌干细胞。随着对肿瘤干细胞研究的深入，开发出针对肿瘤干细胞的特异药物或诊断试剂将给肿瘤的预防、诊断及治疗带来新的希望。
对肿瘤干细胞研究的关键步骤是肿瘤干细胞的分选，目前肿瘤干细胞主要有3种分选方法：（1）免疫学分选法，包括FACS(fluorescence activated cell sorting
荧光活化分选法)和MACS(magnetic activated cell sorting免疫磁珠分离法)，两种分离技术都依赖于干细胞表面的分子标志物的识别。（2）功能学分选法，即侧群（SP）细胞分选法。（3）体外培养分选法。SP细胞分选法是利用CSC高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白（ATP-binding cassette,ABC）转运子能将核酸染料Hoechst33342排出细胞外的特性，用流式细胞仪分选出的一群分布特殊的细胞，在流式二维分析点阵图上，呈彗尾状分布细胞主群的一侧，可以被分选，称为SP 细胞。进一步研究发现，ABC转运蛋白家族中多重耐药蛋白泵出Hochest33342染料的特性有关；SP细胞富含造血重建细胞，具有自我更新和多向分化潜能这两个重要的干细胞特性。研究人员还陆续在皮肤、肺、肝脏、心脏、脑、乳腺以及骨骼肌等正常组织中发现了SP细胞及其表型的存在，这些源于成体组织的SP细胞在实验中也表现出了其干细胞样特性。
因此，在肿瘤干细胞研究缺乏可靠标记物的现阶段，SP细胞分选策略得到了部分研究者的青睐。研究显示，多数肿瘤的SP细胞相对NSP细胞有较高的增殖活力及成瘤能力，具有肿瘤干细胞的特性，可能富集肿瘤干细胞。研究发现，卵巢癌的SP细胞具有高增殖和高致瘤性等干细胞特性[11]。也有研究认为大部分的SP细胞高表达CD133、C-kit和干细胞抗原等干细胞表面标志物，具有干细胞特性[12]。因此，在缺乏干细胞特异性表面标志物的情况下，SP细胞分选法是一种有效的肿瘤干细胞的分选方法。
然而并非所有的恶性肿瘤中都能够检测到SP细胞，检测到的肿瘤SP细胞也并非都表型出干细胞样特性。近年来，国内外学者已检测到胃癌SP细胞的存在，但对胃癌SP细胞的生物学特性仍存在争议，尚无足够的证据表明胃癌SP细胞中富集胃癌干细胞，甚至有学者直接提出，胃肠道肿瘤SP细胞中并不富集干细胞。基于目前对胃癌SP细胞研究的不充分，该领域尚需更多的深入研究。
近年来，中医药在肿瘤的预防及治疗中的作用越来越受到重视，特别是中西医结合治疗可以提高肿瘤治疗的疗效和延长肿瘤患者的生存时间、改善肿瘤患者的生存质量。采用以健脾益气为基础的中药复方治疗无手术、化疗指证的中晚期胃癌以及手术、化疗后的肿瘤残存和微转移灶取得了一定的临床疗效，不仅部分控制肿瘤的进展，延长患者的生存时间，提高生存质量，而且对术后患者具有降低复发和转移的作用，且健脾益气类中药较化疗药物相比，具有毒副作用小，对患者无肝肾功能损伤、骨髓抑制等优点。
四君子汤是健脾益气的经典方，是临床上治疗脾虚的基础方，由人参、白术、茯苓、甘草组成。胃癌属于中医学“胃脘痛”、“反胃”、“积聚”等范畴，病理性质总属本虚标实，本虚则以脾胃气阴两虚为主。由于胃癌的发生与脾虚的关系极其密切，所以四君子汤常用来治疗胃癌，且疗效显著。现代医学对四君子汤中各味药物进行了单独研究，发现它们均有较强的抗肿瘤活性。
本课题以肿瘤干细胞学说为理论基础，对国内常用的胃癌细胞株进行SP细胞的检测及分选，从体外增殖、克隆形成、细胞侵袭能力、体内成瘤、以及多向分化五个方面对胃癌SP细胞的生物学特性进行分析，以验证胃癌SP细胞的存在及是否富集肿瘤干细胞，具有肿瘤干细胞特性，探讨以SP细胞作为研究肿瘤干细胞切入点的可行性。并从体外增殖活力、成瘤能力研究四君子汤药物血清干预后对人胃癌SP细胞生物学特性的影响，为中药四君子汤在胃癌的治疗及相关应用提供客观的实验及理论依据。
第一部分
人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞比例检测及分选
实验材料
一、人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901
本实验所用细胞均购自中国科学院细胞库，两株胃癌细胞的背景资料见（表1）
表1两株胃癌细胞的背景资料
BGC-823SGC-7901
患者年龄（岁）6756
性别男女
分化程度低分化中分化
原代细胞来源原发灶转移淋巴结
建株国家中国中国
二、主要试剂
1、胎牛血清（杭州四季青）
2、RPMI-1640培养基（Hyclone，美国）
3、DMEM培养基（Gibco，美国）
4、双抗Pen-Strep Solution（Hyclone，美国）
5、0.25%胰蛋白酶（Hyclone，美国）
6、DMSO（Sigma，美国）
7、维拉帕米（上海禾丰制药有限公司）
8、Hoechst33342（Sigma，美国）
三、试剂制备
1、RPMI-1640全培养基：RPMI-1640培养基445ml添加FBS50ml、Pen-Strep Solution5ml。
2、DMEM全培养基：DMEM培养基445ml添加FBS50ml、Pen-Strep Solution5ml。
O，配制成10mg/ml储3、Hoechst33342溶液：Hoechst3334225mg溶于2.5mlddH
2
O稀释10倍至工作浓度1ug/ul。
存液，﹣20℃避光保存，使用时用ddH
2
O，配制成10ug/ul工作液。
4、维拉帕米溶液：10mg维拉帕米溶于1ml ddH
2
6、细胞冻存液：1份DMSO+9份FBS，混匀，4℃短期保存，﹣20℃长期保存。
四、实验器材
培养箱（NUAIRE,美国）
1、CO
2
2、医用净化工作台（SWCJ2FD-双人单面净化工作台）（上海五久自动化设备有限公司）
3、-80℃冰箱（SANYO,日本）
4、-20℃冰箱（合肥美菱股份有限公司）
5、电热恒温水槽（HSWX-60085）（上海新苗）
6、低温离心机（5810R）（Eppendorf，德国）
7、Olympus倒置显微镜（CKX41）（Olympus，日本）
8、流式细胞仪（BD FACS ARIA II SORP）（BD，美国）
9、制冰机(Angelantoni,意大利)
10、其他仪器设备：移液器，吸量管，培养瓶，离心管，40um细胞筛网，Eppendorf 管，冻存管等。
实验方法
一、胃癌细胞培养
1、细胞培养：两株人胃癌细胞均为贴壁细胞，BGC-823培养于含有10%FBS、青
霉素100U/ml、链霉素100μg/ml的DMEM培养液中，SGC-7901培养于含有10%FBS、
的青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml的RPMI-1640培养液中，置于37℃、5%CO
2
培养箱中培养。
90%，弃培养液，PBS 2、细胞传代：倒置相差显微镜下观察待细胞生长密度至80%
~
清洗1
2次，用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，每25cm2 ~
的培养瓶加入大约1ml消化液。于倒置相差显微镜下观察细胞变化，待细胞间隙
变大、贴壁细胞突起收缩、细胞由多角形变为球形时，弃消化液，加入全培养液
终止消化。吸管按顺序轻轻吹打培养瓶底，悬浮成单个细胞，计数，按1:3传代。
细胞培养箱中培养。
置于37℃、5%CO
2
3、细胞冻存：取对数生长期细胞，冻存前一天常规换液。消化细胞成单细胞悬液，
将细胞悬液移入15ml离心管中，1000r/min离心5min；弃上清液，在离心管中
加入新鲜配置的细胞冻存培养液(含10%DMSO)，控制冻存液中细胞终密度为（5～
10）×106/ml，移液管移入细胞冻存管中4℃放置30min，-20℃放置120min，-80
℃放置过夜后转至液氮中保存。
4、细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管，迅速置于预先准备的37℃～40℃恒温
水槽中，轻摇使之快速解冻。酒精消毒后开启冻存管，取0.lml解冻细胞悬浮液
作存活测试。注入离心管并加入培养液，混合后低速离心（200r/min,3min）,弃
细胞培养箱中培养。
上清液,加入适量的全培养液，置于37℃、5%CO
2
100倍，混匀。
5、细胞计数:取少量混匀后的细胞悬液，根据细胞数量稀释50
~
以微量加样器轻轻在血球计数板边缘滴加细胞悬液，使其充满计数板与盖玻片的
空隙。镜下计算四角大方格内的细胞数，按公式计算细胞密度，细胞数(/ml原悬
液)=(4大格细胞总数/4)×104×稀释倍数，连续计数3次，取平均值，即为细胞
的密度。
二、胃癌侧群细胞的检测及分选
流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，一方面经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析；另一方面通过电信号进入分选系统完成分选(图1)。
1、收集细胞制备细胞悬液：选取生长状态良好之细胞，常规方法消化、收集细胞。加适量预热至37℃的全培养基，调整细胞浓度至106/ml。取lml移入1.5ml EP管中。
2、常温低速离心(200r/min，3min)，弃上清，加预热至37℃的缓冲液(1640 +5%FBS)1ml。
3、加Hoechst33342至5ug/ml(lmg/ml Hoechst33342工作液，每毫升细胞样品加5ul)。对照组在加Hoechst33342前10min加入维拉帕米至100umol/L(10mg/ml 维拉帕米工作液，每毫升细胞样品加5u1)，并与Hoechst33342共同孵育。
4、37℃培养箱孵育90min，间隔10
15min振荡。孵育结束后，4℃下低速离心
~
(200r/min，3min)，弃上清。加入1ml预冷至4℃的缓冲液重悬细胞。
5、40um细胞筛网过滤，置于4℃保存，尽快检测。
6、取少量细胞接种于培养皿中，贴壁培养4h，换培养液，荧光显微镜下观察拍照。
7、进入流式SP细胞检测程序。355nmUV光源激发Hoechst33342，610nm双色短通反射滤镜，450nm和675nm边缘长通滤片分别检测散射光的蓝光及红光部分，线性模式采集信号。测量前向散射和侧向散射二维参数图，检测细胞均一性。以Hoechst Red为X轴，Hoechst Blue为Y轴作二维散点图，将低Hoechst Red及低Hoechst Blue且维拉帕米组缺失的区域设定为SP细胞的“门”(gate)，计算百分比。如SP细胞检测图谱无异常，则进入分选程序分选出SP细胞和NSP细胞。
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结果
一、人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901
光学显微镜下，胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901形态符合原始建系资料描述（图。
2、3）
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图3人胃癌细胞株SGC-7901
二、人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞比例分析
胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901进行了多次SP细胞比例检测。结果显示，SP 细胞比例基本稳定在4.0%以下水平(表2)。胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中SP细
胞比例分别为2.60%±1.25%和2.53%±0.85%，维拉帕米拮抗后，SP比例明显下降
BGC-823 1.3% 3.8% 2.7% 2.60%±1.25%
SGC-7901 3.5% 1.9% 2.2% 2.53%±0.85%
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立 目的建立过表达CCR3人SGC7901胃癌细胞细胞株，为后续CCR3在胃癌转移的研究奠定基础。方法分离正常人外周血单个核细胞，提取总RNA，PCR 扩增CCR3基因CDS序列，连接至质粒pEFP-N1，进行CCR3基因的克隆，构建含有CCR3基因的pEFP-N1-CCR3重组质粒。重组质粒通过脂质体转染法对人SGC7901胃癌细胞进行转染。结果Realtime-PCR及Westernblot证实CCR3基因能够在人SGC7901胃癌细胞中正确表达。结论成功建立稳定表达CCR3基因的SGC7901胃癌细胞株，为研究CCR3在胃癌细胞株转移中的机制奠定了基础。 标签：CCR3；SGC7901细胞；胃癌转移 趋化因子受体（Chemokine receptor）是表达在一些特定的细胞表面的G蛋白偶连的七跨膜域受体[1]。这些受体与细胞外的配体趋化因子结合。与特异的趋化因子结合后，趋化因子受体引发钙离子内流而产生细胞趋化反应，从而诱导细胞到生物体的特定部位。CCR3在胃癌远端迁移上到底扮演什么样的角色也未完全清楚。目前，将外源性CCR3基因转入人胃癌细胞使其过度表达未见报道。本实验尝试构建含有CCR3的重组质粒pEFP-N1-CCR3并转染至人SGC7901胃癌细胞，并检测转染后SGC7901细胞CCR3的表达情况。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1质粒菌株和慢病毒包装细胞pEFP-N1慢病毒穿梭载体，psPAX2和pMD2G包装质粒，大肠杆菌DH5。人SGC7901胃癌细胞，生长培养基为高糖DMEM培养基，含10%胎牛血清。 1.1.2 主要试剂及引物Lipofectine2000转染试剂盒；T4连接酶；质粒抽提试剂盒；限制性内切酶EcoRI和BamHI；胎牛血清；CCR3一抗；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG。 1.2人SGC7901胃癌细胞的培养人SGC7901胃癌细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖的完全培养基中，置于37℃，5%CO2孵育箱中贴壁培养， 0.25%胰酶3d传代换液一次。 1.3 pEFP-N1-CCR3的构建及鉴定 1.3.1 CCR3的CDS序列扩增取健康人外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞并抽提总总RNA，在Pubmed中的nucleotide上查询CCR3的CDS编码区并设计克隆引物，并在克隆引物中加入BglII和EcoRI酶切位点，用taq聚合酶扩增CCR3的CDS序列，
胃癌的发病机制及预防 姓名：孟慧佳学号：2011013281 班级：生物工程111 正文： 胃界于食道和十二指肠之间，是消化道最宽大的部分，它的形状和位置随内容物的多寡和体位变化而改变。胃分4个部分，靠近食道的部分是贲门部，胃上部膨大部分是胃底部，自胃底部往下是胃体部，靠近十二指肠的部分叫幽门部。 在胃内壁上覆盖着一层厚约0.3-1.5毫米的胃黏膜，胃黏膜上生长着三种腺体：即贲门腺、胃底腺和幽门腺。三种腺体加起来的数量是惊人的，每天分泌的胃液的数量约有1500-2500毫升，贲门腺和幽门腺主要分泌黏液，起到保护胃黏膜的作用。胃酸的强刺激和胃蛋白酶的强消化力，都不能破坏胃黏膜，主要就是因为黏液总是先于胃酸和胃蛋白酶分泌出来，并均匀地布散到胃壁上的缘故。胃黏膜的这种巧妙的自我保护功能，是令人叹为观止的大自然的杰作之一。 胃的功能有：1．存放食物。液体食物在胃里停留时间很短，油脂性食物在胃里停留时间较长，混合性食物在胃里停留时间约4-6个小时。 2．胃蛋白酶可消化食物中的蛋白质。 3．制造内因子及吸收维生素B2。 4．胃酸可杀灭随食物进到胃里的细菌。 胃内有食物时，胃的蠕动方向是由贲门向幽门进行，当胃内容物排空后、血糖也消耗到较低水平时，胃会由幽门向贲门方向逆性蠕动，这叫饥饿蠕动，使人产生饥饿感。 胃癌介绍： 恶性肿瘤胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位（胃窦幽门区最多、胃底贲门区次之、胃体部略少），可侵犯胃壁的不同深度和广度。癌灶局限在粘膜内或粘膜下层的称为早期胃癌，侵犯肌层以深或有转移到胃以外区域者称为进展期胃癌。肉眼或胃镜观察胃癌有多种形态，如表浅型、肿块型、溃疡型、浸润型、溃疡癌（为慢性胃溃疡癌变）。显微镜放大观察癌细胞有多种类型（组织学分类），如腺癌（占约90%，包括乳头状腺癌、管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌）、腺鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、类癌。更细微的癌细胞内部的分子结构也有很多差异，因此，虽都称为胃癌，即使肉眼和显微镜下所见类型是相同的，但个性仍有很大差异，目前并不知晓究竟有多少个性独特的胃癌。 胃癌的发病机制： 正常胃粘膜上皮细胞是由原始新生细胞（干细胞）不断分裂生长分化而来，何时生长何时死亡都是受机体控制的，不会疯狂失控生长。干细胞都有各种原癌基因和抑癌基因，绝大多数情况下原癌基因的特性不表达出来，不会形成致癌物质，因此也就不能发育成胃癌细胞。 有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表达出来，这就是遗传的因素。除了遗传等内在因素外，还有很多外在的致癌因素，如上述高危人群面临的各种非遗传因素，也可直接诱发或长期破坏胃粘膜屏障使促癌物质更易诱发干细胞癌基因表达或基因突 变而产生致癌物，使新生不成熟的原始细胞不能分化成具有正常功能的胃粘膜上皮细胞，而是变成各种分化程度不良且生长失控的非正常细胞。 若机体的免疫监测功能正常，往往可以清除少量的异常细胞，但当长期心里状态不佳引起内分泌系统异常及免疫功能长期低下、或异常细胞由于某种未知原因逃逸了机体的免疫监测，则异常细胞最终发展成机体无法控制其生长的胃癌细胞，完成癌变过程。
四君子汤抗衰老药理学研究 M150879 吴鹏 四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》,由人参、白术、茯苓和炙甘草4味中药组成。因其均为补气之药，故称为四君子汤。四君子汤以脾虚胃弱为其主证，方中人参性甘大补脾胃之气，为君药; 白术苦温，助君药燥湿健脾，为臣药;茯苓甘淡，渗湿利尿，为佐药; 炙甘草甘平，和中益气，为使药。四药相辅，具有益气健脾之功效，主治脾虚胃弱，言语低微，四肢无力，舌色淡，脉弱细无力，食欲锐减，满腹肠鸣，伴有寒证者。近年来，国内外对该方进行了深入研究，阐明了不少新的药理作用和临床应用［1］。笔者就近十年来有关该方的药理研究与临床应用进展作一综述，以期为该方的应用及深入研究提供参考。 药理研究 1 抗胃肠黏膜损伤的作用 彭成等［2］观察到，四君子汤有增加脾虚动物胃肠细胞表面黏液糖蛋白的趋势，能促进肠上皮细胞更新，有增强胃肠黏膜屏障的作用，可提高胃肠细胞线粒体琥珀酸脱氢酶空肠细胞膜Na+ ,K+ ,ATP 酶的活性，为维持黏膜的完整性和提高空肠吸收上皮细胞吸收营养物质提供前提条件。保持胃肠黏膜细胞的完整性，必须供给其足够的氧和营养物质，而此必须依靠胃肠血液循环来完成。四君子汤不仅可使食醋致脾虚小鼠的肠系膜微动脉管径扩张、毛细血管开放数增多、胃黏膜血流量增加; 还可使正常小鼠胃黏膜血流量增加，为胃肠细胞保护提供可靠的物质运送渠道。此外，四君子汤还能降低食醋致脾虚小鼠的血清LPO 含量、增强超氧化物歧化酶(SOD)活性。LPO是体内细胞膜性结构中的脂质遭受氧自由基损伤的氧化产物，反应氧自由基损伤的程度; SOD是抗氧化物质，能清除超氧阴离子，保护细胞免受损伤，测定血清LPO的含量和SOD 的活性，间接反应胃肠细胞的损伤程度和清除自由基的能力［3－5］。因此四君子汤能改善脾虚症状，纠正胃肠病损，消除细胞变性、坏死脱落的病理变化，恢复细胞、亚细胞、细胞连接的形态，增加细胞表面微绒毛、细胞质颗粒及细胞器的数量。提示四君子汤具有胃肠细胞保护、抗脾虚动物胃肠细胞损伤的作用。 2 调节胃肠活动的作用 张曼等［6］采用大鼠离体胃运动试验，分A、B(以下简称为四君子汤A 和四君子汤B) 2 组研究了四君子汤组对大鼠胃运动的调节作用，以探讨四君子汤的双向调节胃肠运动有效成分及其M 受体作用途径。四君子汤A 和B 由四君子汤水煎剂经化学提取而得。实验观察四君子汤B 对乙酰胆碱负荷离体大鼠胃内压和四君子汤A 对正常大鼠胃内压的影响，并观察阿托品对四君子汤A 的拮抗作用。2.5 mg/L乙酰胆碱负荷使大鼠胃内压升高后，250，500，1000，1500及2000 mg/L下同浓度四君子汤B可对乙酰胆碱的兴奋作用起到抑制作用，且呈现量效关系，与空白对照组相比，差别有统计学意义( P＜0.05 或P＜0.01)。250， 500及1000 mg/L四君子汤A可使正常大鼠胃内压力增高，且呈现量效关系。如先用阿托品负荷后再给予A 成分，则升压作用消失; 与蒸馏水组相比较，差别有统计学意义( P＜0.05 或P ＜0.01)。实验结果提示四君子汤组分A 对离体大鼠胃运动有兴奋作用，组分B则表现为抑制性调节作用，2者均可通过M受体机制调节胃的运动。彭成等［7］的实验证明了四君子汤对正常动物胃液量、胃酸pH 值、胃肠蠕动无明显影响，但能提高正常动物胃蛋白酶活性，增加脾虚动物胃主细胞内酶原颗粒的含量，增强脾虚动物胃肠蠕动功能，升高脾虚动物血清D－木糖，促进脾虚动物肠上皮细胞微绒毛生长，提高动物消化、运动、吸收功能，具有健脾益气作用。张曼［8］的实验证明了四君子汤提取物不同提取部位对番泻叶致小鼠腹泻的作用不同: 四君子汤正丁醇部位止泻效果最佳，且有明显的量效关系;不同浓度四君子汤正丁醇部位可对乙酚胆碱兴奋所致胃内压升高起到抑制作用，且呈现量效关系，与空白对照组
四物汤 配方：熟地12g，当归9g，白芍9g，川芎6g 功用：补血活血 主治：营血虚滞证。心悸失眠，头晕目眩，面色无华，妇人月经不调，经量少或闭经，表现为舌淡，脉细弦或细涩。 使用方法： 1、取四物汤一包，清水冲洗并浸泡15分钟左右。砂锅内加入大约800ML水大概（4小碗）。 2、武火15分钟后再用文火10-15分钟，煮出来大概300ml，建议餐后半小时趁热饮用。可加入少量红糖或红枣味道更佳。 注意事项： 1、一包四物汤可以煎煮两碗，早晚喝一碗，建议在饭前半小时喝，需要等月经干净后再喝； 2、女性月经期间不能喝四物汤，需要等月经干净后再喝； 3、老中医提醒：孕妇、感冒发热、腹泻、经期不宜喝，服用期间禁食辛辣生冷； 4、服用后出现上火的人，请暂停服用，或煎煮时加入贡菊、金银花等去火原料。 5、身体主要是以调理为主，所以四物汤需要连续服用后才能慢慢见效，一个疗程1个月14包。建议1-2个疗程。 6、一般建议例假结束3天后连用两周。 桃红四物汤 配方：桃仁6克、红花4克、熟地12g，全当归9g，白芍9g，川芎6g 功用：补血活血，使瘀血祛、新血生、气机畅，化瘀生新是该方的显著特点 主治：营血虚滞证。心悸失眠，头晕目眩，面色无华，妇人月经不调，经量少或闭经，表现为舌淡，脉细弦或细涩。 使用方法： 1、取四物汤一包，清水冲洗并浸泡15分钟左右。砂锅内加入大约800ML水大概（4小碗）。 2、武火15分钟后再用文火10-15分钟，煮出来大概300ml，建议餐后半小时趁热饮用。可加入少量红糖或红枣味道更佳。 注意事项： 1、一包四物汤可以煎煮两碗，早晚喝一碗，建议在饭前半小时喝，需要等月经干净后再喝； 2、女性月经期间不能喝四物汤，需要等月经干净后再喝； 3、老中医提醒：孕妇、感冒发热、腹泻、经期不宜喝，服用期间禁食辛辣生冷； 4、服用后出现上火的人，请暂停服用，或煎煮时加入贡菊、金银花等去火原料。 5、身体主要是以调理为主，所以四物汤需要连续服用后才能慢慢见效，一个疗程1个月14包。建议1-2个疗程。 6、一般建议例假结束3天后连用两周。 三白汤 配方：白芍5克、白术5克、茯苓丁5克、甘草3克 功用：益气养阴、润肤增白，延缓衰老
润文宝 | 日期：2011-06-25 胃癌干细胞的研究进展 恶性肿瘤的克隆性增殖生长、维持及转移潜能取决于一群数量稀少、具有自我更新(self-renewal)潜力的细胞群体——肿瘤干细胞(Cancer stern cell，CSC)。目前肿瘤的放射和化学治疗对细胞周期活跃的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用，但不能根除细胞周期相对沉默的肿瘤干细胞，这可能是肿瘤复发的主要原因。胃癌对人类健康危害极大。研究胃干细胞及胃癌干细胞发生、发展的分子和细胞学机制，发现相关的特异分子靶点和针对这些靶点的药物，将为胃癌相关基础研究及临床靶向治疗提供新的切人点。 一、肿瘤干细胞学说的提出 肿瘤组织与胚胎组织间具有相似性，肿瘤可能起源于胚胎样组织。肿瘤细胞与胚胎干细胞及成体干细胞间存在许多相似性。近年来提出的肿瘤干细胞学说认为，肿瘤组织中存在极少量细胞，具有无限自我更新和高度增殖能力以及多种分化潜能，能产生不同表型的肿瘤细胞，使肿瘤在体内不断扩大或转移形成新的肿瘤。1994年分离获得的人髓系白血病干细胞证明了肿瘤干细胞的客观存在，之后又相继从乳腺癌、脑肿瘤和前列腺癌组织中分离并培养出各种肿瘤干细胞，证实了实体肿瘤干细胞的存在。 二、胃干细胞、炎性反应与胃癌的发生 胃干细胞是具有自我更新和复制能力的原始细胞，属于成体干细胞，通过向祖细胞分化。进一步分化形成胃的各种腺体细胞，维持胃黏膜更新及组织内环境稳定。由于缺乏特异性标志和理想的分离纯化技术，故目前对胃干细胞的研究较少。有研究证实G蛋白偶联受体(Lgr5)表达于胃腺体底部细胞中，通过分化细胞学示踪实验发现，胃腺体细胞均来自于Lgr5阳性的细胞。另有研究通过结合转基因技术和绿色荧光蛋白示踪技术，成功示踪了数量极少的胃祖细胞，这些细胞正常情况下呈静息状态，当受到炎性刺激时，祖细胞发生对称分裂，进行数量扩增，同时还可进行不对称分裂分化为各种腺体细胞。胃干细胞受到持续的炎性刺激、自身抗体或其他因素作用时可发生肠上皮化生，此过程可能是组织细胞干细胞水平分化异常所致。胃干细胞可产生胃型和肠型细胞，胃癌表型表达的异质化反映了胃祖细胞向这两个方向分化的内在潜能。已有研究证实幽门螺杆菌通过对胃上皮干细胞的影响和作用，在慢性萎缩性胃炎向胃腺癌的转化过程中起关键作用。小鼠胃上皮祖细胞系(mGEP)能支持胃癌相关幽门螺杆菌的吸附。对感染后的mGEP进行基因芯片表达谱分析显示。mGEP代谢和信号传导路径发生改变，氨基酸代谢的免疫过氧化物酶抗体路径(IPA)表达上调，多胺合成相关的限速酶鸟氨酸脱羧酶1(Odel)表达明显上调，该酶与胃肠型化生及慢性胃炎到胃癌的转化相关；抗酶抑制剂(Azinl)的表达亦显著上调。该蛋自在人胃癌组织中高表达，并与Odcl的表达量和活性相关。慢性炎性刺激使得胃上皮干细胞发生转化进展，促进肿瘤形成和进展。有研究称肿瘤为“不可治愈的炎性反应。慢性炎性反应能
常用方四君子汤((太平惠民和制局方)) [组成]人参白术茯苓炙甘草各等分(各9g) [用法]上为细末。每服二钱(15g),水盏，煎至七分，通口服，不拘时候:人盐少许，白汤点亦得(现代用法:水煎服)。 [功用]益气健脾。 [主治]脾胃气虚证。面色萎白，语声低微，气短乏力，食少便溏，舌淡苔白，脉虚弱。 [方解]本方证是由脾胃气虚，失其健运所致。脾胃为后天之本，气血生化之源，脾胃气虚，受纳与运化乏力则饮食减少、大便溏薄;脾主肌肉，脾胃气虚，四肢不得禀水谷气故四肢乏力:气血生化不足，血液不能上荣于面，则面色萎白;脾为肺之母，土不生金，故见气短、语声低微:舌淡苔白，脉虚弱皆为气虚之象。治宜补益脾胃之气，以复其运化受纳之功。 方中人参甘温益气，健脾养胃，为君药臣以苦温之白术，健脾益气，燥湿和中，与人参相合，益气补脾之力更著。佐以甘淡之庆苓，益气健脾，渗湿止泻，与白术相配，则健脾祛湿之功益彰。使以炙甘草，益气健脾，调和诸药。四药配伍，共奏益气健脾之功。本方配伍特点有二:一是选药皆味甘人脾，益气之中兼能燥湿，补虚之中重在健脾，甚合脾欲甘、喜燥恶湿的生理特性，体现了治疗脾胃气虚证的基本大法;二是方中药物甘温平和，补而不滞，利而不峻，作用缓和平淡，犹如宽厚平和的君子，故有“四君子汤”之美名。 [临床运用] 1.运用要点本方为治疗脾胃气虚证的常用方，亦是补气的基础方，后世众多补脾益气方剂多从此方行化而来。临床以面白食少，气短乏力，舌淡苔白，脉虚弱为辨证要点。 2.加减变化若呕吐者，加半夏、生姜以降逆止呕;胸膈痞满者，加枳壳、陈皮以行气宽胸;心悸失眠者，加酸枣仁、柏子仁以宁心安神:兼畏寒肢冷、脘腹疼痛者，加干姜、附子以温中祛寒。 3.现代运用本方常用于慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡等属脾胃气虚者。 [附方] 1.异功散《小儿药证直诀》) 人参茯苓白术陈皮甘草各等分(各6g)上为细末，每次6g，加生姜五片，大枣二个，水煎，食前温服。功用:益气健脾，行气化滞。主治:脾胃气虚兼气滞证。饮食减少，大便溏薄，胸脘痞闷不舒，或呕吐泄泻等。 2.六君子汤(《医学正传》)即四君子汤加陈皮一钱(3g) 半夏一钱五分(4.5g)上为细末，加大枣二枚，生姜三片，水煎服。功用:益气健脾，燥湿化痰。主治:脾胃气虚兼痰湿证。食少便溏，胸脘痞闷，呕逆等。 3.香砂六君子汤(《古今名医方论》) .人参一线(3g)白术F钱(6g)茯苓二钱(6g)\甘章七分(2g)陈皮八分(2.5g)半夏一钱(3g) 砂仁八分(2.5g) 不查七分(2g)生姜二钱(6g)水煎服。功用:益气化痰，行气温中。主治:脾胃气虚，痰阻气滞证。呕吐痞闷，不思饮食，脘腹胀痛，消瘦倦息，或气虚肿满。 以上三方均由四君子汤加味而成，皆有益气健脾之功，均为补气药与行气化痰药相配，使补气而不滞气，适用于脾胃气虚兼有气滞痰湿中阻之证。但异功散中加了陈皮，功兼行气化滞，适用于脾胃气虚兼'气滞证;六君子汤中配半夏、陈皮，功兼和胃燥湿，适用于脾胃气虚兼有痰湿证;香砂六君子汤中伍半夏、陈皮、木香、砂仁，功在益气和胃，行气化痰，适用于脾胃气虚、痰阻气滞证。 [方歌]四君参术苓草全，益气健脾此方先。 知识链接 四君子汤与理中丸均用人参、白术、炙甘草以补益中气，仅一药之差，而功效迥异。理中丸以干姜为君药，重在温中祛寒，适用于中焦虚寒证;四君子汤以人参为君，并配茯苓，重在益气健脾，主治脾胃气虚证。
大补元煎联合八珍汤治疗眩晕症的疗效观察 发表时间：2018-12-21T11:22:27.467Z 来源：《中国结合医学杂志》2018年10期作者：梁文 [导读] 探讨大补元煎联合八珍汤治疗眩晕症的疗效观察。 益阳市人民医院 413000 【摘要】目的：探讨大补元煎联合八珍汤治疗眩晕症的疗效观察。方法：选取我院2017年1月至2018年6月期间收治的60例眩晕症患者，按照随机数字表的方法分为观察组和对照组，各30例。其中对照组实施常规西医进行治疗，观察组则实施大补元煎联合八珍汤治疗，分别对两组患者的临床疗效和不良反应进行客观比较。结果：经比较，观察组的临床总有效率为93.33%，对照组临床总有效率为 76.66%，两者间差异显著（P<0.05）；此外，观察组不良反应发生率低于对照组，差异显著（P<0.05）。结论：大补元煎联合八珍汤治疗眩晕症的临床疗效确切，且不良反应小，具备一定的推广优势。 【关键词】大补元煎；八珍汤；眩晕症；临床疗效 眩晕是临床中常见的疾病之一，其在神经科的发病率仅次于头痛。一般而言，眩晕发病时还会经常伴随其他的临床症状及体征，给人们的生活质量造成了严重的负性影响[1]。西医中针对眩晕的治疗方法主要分为对症、改善前庭微循环或脱水及激素治疗，其虽然可以缓解患者症状，但治疗难度度，病情反复，且迁延不愈，故具备一定的局限性。祖国医学认为眩晕主要为风火痰瘀、病邪入络、络脉瘀阻、痰瘀互结、阻滞脑窍而为眩晕，瘀则始终贯穿其中[2]。基于此，本研究通过对收治的眩晕患者实施了大补元煎联合八珍汤的中药方案进行治疗，拟为患者提供更多的治疗意见。 1.资料与方法 1.1一般资料 选取我院2017年1月至2018年6月期间收治的60例眩晕症患者，纳入标准：（1）经西医相关诊断确诊为眩晕；（2）中医诊断标准按照《中医诊断学》中眩晕的分类标准；（3）对本研究知情同意，且签署同意书等。同时排除合并其他严重疾病、精神障碍以及妊娠期女性等。将符合上述标准者按照随机数字表的方法分为观察组和对照组，各30例，其中观察组包括男性17例，女性13例，平均年龄为（46.29±3.11）岁，平均病程为（1.68±0.32）年；对照组包括男性19例，女性11例，平均年龄为（49.41±3.04）岁，平均病程为（2.03±0.46）年，经比较，两组患者的一般资料比较差异不显著（P>0.05）。 1.2方法 对照组实施西医治疗，即包括谷维素30mg、维生素B6 20mg、培他司汀8mg，tid，氟桂利嗪5mg，睡前口服，连服两周，观察组则实施大补元煎联合八珍汤治疗，其中大补元煎的组方为：党参30g、杜仲15g、枸杞15g、熟地20g、炒山药20g、、山茱萸15g、当归10g、炙甘草5g，以水煎服，取汁后每天口服2次，连服两周，血瘀者加桃仁和红花，恶心呕吐加代褚石和竹茹等；八珍汤的组方为：葛根30g，黄芪、党参、白芍各20g，白术、酸枣仁和当归15g，茯苓、威灵仙和川芎各12g，甘草和红花各6g，以水煎服2次，连服两周。 1.3观察指标 分别对两组患者的临床疗效和不良反应进行客观比较。其中疗效评定标准为：（1）治愈：眩晕及其伴随症状消失；好转：眩晕及其伴随症状基本消失，但有时尚有不适感；有效：眩晕及其伴随症状减轻，时有轻度发作；无效：眩晕及其伴随症状无改变。 1.4统计学方法 应用SPSS13.0统计软件包进行数据处理，计量测量结果资料使用（）表示，两组之间差异的比较使用t检验，计数资料的两组之间比较采用检验。P<0.05认为差异具有意义。 2.结果 2.1两组患者的临床疗效比较 经比较，观察组的临床总有效率为93.33%，对照组临床总有效率为76.66%，两者间差异显著（P<0.05）；见表1 表1 两组患者的临床疗效比较 眩晕是一种机体对自身或外界物体的运动性幻觉，患者感到外境旋转或运动，有时亦可感到外周景物向一侧移动、摇晃感或上升下降感。目前，临床中关于部分眩晕病因尚未完全明确，但关于该病的病理基础则已经确定，认为其主要因患者的前庭系统的供血不足，以及患者血管痉挛等致使前庭系统功能紊乱等因素。针对眩晕症的治疗措施不仅需要对症治疗如改善微循环，还需要分析不同病症进行辩证治疗[3]。 中医学认为，眩晕病位在清窍，病机为清窍失养或被扰，与肝脾肾有关，尤其和肾脏密切相关，为本虚标实之症。笔者经临床实践及查阅相关文献认为：脏腑亏损，气血阴阳不足，夜间睡眠不佳为导致眩晕重要因素。本研究通过对收治的眩晕患者实施了不同药物方案进行治疗，其中中药所用方案中的大补元煎救本培元，以补肾益髓和补充气血为目的，组方所用党参和炙甘草均可以发挥补气之用，杜仲、枸杞、熟地和山药可以补肾益气，熟地及当归养肾补血；诸药合奏可以起到补肾益髓和气血双补的功效[4]。此外，再联合实施八珍汤进行
柴芍六君子汤的功效与作用 中药方剂是传统医学的一枚瑰宝，它主要依赖于君、臣、佐、使药这几大部分。虽然见效慢，但是因为对人体几乎没有任何的副作用而备受养生人群的青睐。柴芍六君子汤就是一种中药方剂，你对它了解吗？ 【处方】 人参、白术（土炒）、茯苓、陈皮、半夏（姜制）、甘草（炙）、柴胡、白芍（炒）、钓藤钩。 【功能主治】 慢惊。脾虚肝旺，风痰盛者。 【用法用量】 加生姜、大枣，水煎服。 【临床应用】 ①眼睑润动《湖南中医学院学报》（1989；4：209）：瞿某，男，8岁。双目上眼睑不自主跳动，时作眨眼状，历时3个月。发作较剧时1分钟达20余次，父母劝阻不能罢，打骂不能止，苦于不能自制。伴见色萎形瘦，纳差，神疲懒动，咳嗽吐痰，舌淡红，
苔白微腻，脉虚。证属土虚木贼，肝风内动之候。治当健脾化痰，柔肝止风。予柴芍六君子汤加天麻6g，僵蚕5g。服药2剂，眼脸跳动即现好转，精神稍佳，仍纳差，守原方加鸡内金6g，又4剂。服后精神振，胃纳增，眼睑跳动恢复正常。②慢惊风《湖南中医学院学报》（1989；4：209）：欧某，女，18个月。阵发性抽搐2月余。始则10日半月一次，最近日发2-3次，多方诊治，疗效不好。惊风发作则手呈鸡爪，目上视，面呈青色，不省人事。须臾自止。症见面色苍白，头发稀疏而直立，纳呆，舌淡，指纹浅红。证属脾虚血少，木失滋荣，肝风内动。方以柴芍六君子汤加僵蚕3g，天麻6g，全蝎2g。服上方2剂惊风止，4剂胃纳增，后去虫药，守原方复进3剂，追访至年底，惊风未再发，神态颇佳。 【摘录】 《金鉴》卷五十一 【处方】 六君加柴胡、芍药、葛根。 【功能主治】 健脾退热。主小儿表热，退后又热。
胃癌细胞凋亡基因 西安国医肿瘤医院研究人员通过大量的研究分析发现，胃癌细胞凋亡是有相关基因控制的，目前发现的有以下三个基因：bcl-2基因、Bax和Fas/FasL。下面来详细介绍： 1.bcl-2基因 bcl-2基因编码26kD的膜蛋白，是第一个被确认有抑制凋亡作用的基因。bcl-2基因激活、过表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡不平衡，而且会使具有遗传改变又得不到修复的细胞免于死亡而进入细胞循环，多种遗传成分改变可导致肿瘤的发生。因此，bcl-2在肿瘤发生发展中起着重要的作用。 乳腺癌中，高表达的Bcl-2与乳腺癌细胞凋亡指数呈负相关，而且与有丝分裂指数呈正相关，提示在细胞增殖活跃期，Hcl-2阳性细胞凋亡减少，即Bcl-2过表达影响了细胞凋亡。Nakamum检测了肠型胃癌、胃腺瘤、肠化生及非化生胃黏膜，发现在肠化生中Bcl-2蛋白表达量最高(77.1%)，胃腺瘤(37.5%)和肠型胃癌(10.8%)中较低。 因而认为，Bcl-2蛋白的过表达主要是在胃癌的早期阶段起作用，使转化细胞逃避凋亡，以进一步积累其他基因的异常。Lauwers采用单克隆抗体124检测正常、伴有肠化生的萎缩性胃炎及异型增生胃黏膜，发现正常胃黏膜仅在胃小凹与腺体交接处增生的干细胞中有Bcl-2蛋白的微表达，而在肠化生黏膜的过增生区域及胃小凹表面分化不良的细胞中均可检测到Bcl-2，这些分化不良的细胞正是胃癌癌前病变的一个特征。 因此推测，胃黏膜受损后增生加快，导致一些分化不良的细胞出现，这些分化不良的细胞又因Bcl-2蛋白的过表达而逃避凋亡，呈现生长优势，细胞寿命延长，基因变异积累的机会增加，为进一步向恶性细胞转化提供了条件。 2.Bax Bax是第一个被分离到的Bcl-2家族成员之一，与Bcl-2的同源区主要集中在BH1和BH2区。Bax的功能与Bcl-2相对，可促进细胞的凋亡。Bax与Bcl-2在体内的表达呈部位互补形式。Bcl-2倾向于分布在生长细胞、增殖细胞，而Bax倾向于分布在终末分化细胞、退化细胞，在凋亡旺盛的细胞中表达更强。 国外Komatauin报道，在胃黏膜癌变的早期阶段，即已发生Bax的表达异常。
CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比 星的耐药 作者：吴达龙睢凤英张成文吕焕章 【摘要】目的: 探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法：将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养，采用MTT法检测其细胞毒作用；采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果：SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到 2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01) 和14倍(P< 0.01)。DOX蓄积实验表明，CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论：通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性 【关键词】多药耐药; 氯喹; 胃癌; 逆转剂 肿瘤多药耐药(multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。MDR是一种独特的广谱耐药现象，
是导致化疗失败的重要原因，许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine, VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin, DOX)、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeability glycoprotein, Pgp)过表达。作为一个ATP依赖性的药物转运泵，Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外, 从而减少细胞内药物蓄积, 增加药物外排［3］。MDR逆转剂，如维拉帕米和环孢菌素A，能与Pgp结合，抑制Pgp的药物外排功能，增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积，从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。然而，大量的临床研究结果表明，上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大，体内难以达到有效逆转浓度［3］。因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂，已成为肿瘤MDR研究的热点。 氯喹 CQ11 图1 氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构 CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础, 经侧链改造而获得的新化合物(化学结构见图1)，由本课题组合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型，研究CQ11对SGC7901/VCR 细胞的体外MDR逆转效应。
1．八珍汤加减。 人参、熟地黄、白术、茯苓、当归（酒拌）、川芎、白芍药各9克，甘草（炙）5克，生姜3片，大枣3枚。随证加减。 四君子汤加右归丸，十全大补加阿胶、鹿角胶等。 2．人参10克，大枣5枚。人参切片备用。大枣洗净备用。人参放入砂锅中，加清水浸泡半天，加大枣，煮约1小时即成。 本方有大补气血功效。适用于气血亏虚，虚弱劳损。 本方出自《十药神书》，原方用于“止血后此药补之”，为大补气血的代表方。日久调摄不当，久病失于调治，或失血过多，均可导致气血严重亏虚和虚弱劳损，法宜大补气血。方中以人参为主，大补元气； 以大枣为辅佐，补气养血。人参与大枣配伍，并可益气生血，合用而成大补气血之方。 本方可用于贫血。 本方补益之力较强，对实症、热症者不宜食用。 3．取3叫斤母鸡1只，粳米2两。将母鸡剖洗干净，浓煎取计，以原汁鸡汤分次同粳米煮粥，先用旺火煮沸，再改用微火煮到粥稠即可。 本方滋养五脏、补益气血适用于年老体弱、病后羸瘦，气血亏损所引起的一切衰弱病症4．大枣10——15个，粳米2两。加水，二者一起煮粥。 本方补气血，健脾胃，对于胃虚食少，脾虚便溏，气血不足，以及血小板减少、贫血、慢性肝炎、营养不良有较好疗效。 有哪些简便的养血中药方? ①桑椹50g，枸杞子20g。水煎服。 ②黄芪50g，大枣10枚，当归9g，枸杞子9g。水煎服。 ③人参6g，大枣10枚，水煎服。治失血性贫血，大出血后引起的虚脱和身体虚弱。 ④熟地12g，当归10g，白芍10g，川芎6g 。水煎服。 ⑤生地30g，麦冬12g，枸杞子12g，先煎汤，再煮鸡、鸭血汤，放调料。用于缺铁性贫血阴虚型患者。 ⑥熟地12g，首乌12g，黄精12g，灵磁石30g，代赭石30g，麦饭石30g，大枣5枚，水煎服。适用于缺铁性贫血。 ⑦黄芪30g，当归12g，水煎服。用于气血两亏型的贫血。 治疗贫血的中成药有哪些? ①八珍丸：由人参、白术、茯苓、甘草、地黄、当归、白芍、川芎组成，具有气血双补的作用，对外伤出血、消化道出血、妇女功能性子宫出血等失血性贫血引起的形体瘦弱、面色苍白、食欲不振、倦怠乏力、动辄气促等气血不足的症状尤为适宜，久服无妨，并常能取得良好效果。 ②人参养荣丸：由人参、黄芪、白术、茯苓、甘草、熟地黄、当归、白芍、肉桂、陈皮、五味子、远志、生姜、大枣组成，具有补益气血，安神定志的作用，适用于贫血兼有失眠症者。 ③归脾汤：由人参、黄芪、白术、茯神、甘草、当归、龙眼肉（桂圆肉）、酸枣仁、远志、木香、生姜、大枣组成，具有补脾养心，益气生血的作用，适用于贫血兼食少心悸的患者。 ④七宝美髯丹：由何首乌、茯苓、牛膝、枸杞子、当归、菟丝子、补骨脂组成，具有滋补肝肾，补血乌发的作用。适用于贫血属肝肾阴虚者。 ⑤龟鹿二仙胶：由龟板、鹿角、人参、枸杞子组成，具有补阴填精，益肾壮阳的作用，适用于贫血属
香砂六君子汤的药理作用及临床应用 摘要：香砂六君子汤由人参、白术、茯苓、甘草、陈皮、半夏、砂仁、木香八味药组成。主治脾胃气虚，痰阻气滞证。本方在四君子汤补气的基础上合用行气化痰之品，具有益气化痰、行气温中之功。现代多用于治疗脾胃气虚夹有寒湿的多种消化系统疾病，诸如各种胃炎、消化道溃疡、十二指肠炎、消化不良以及其他系统疾病表现有上述症状者。实验研究表明，香砂六君子汤在保护胃黏膜、促进胃动力、调节胃功能紊乱、止泻以及抗氧化等方面有着良好的作用[1]。 关键词：香砂六君子汤；药理作用；临床应用； 香砂六君子汤是调和脾胃的良方，可广泛应用于胃肠道疾病的治疗。本文采用文献整理与回顾方法，主要对香砂六君子汤的药理作用与临床应用进行研究总结与归纳。研究发现，香砂六君子汤能抑制胃粘膜瘀血、水肿等病理变化，对胃黏膜损伤有促进自愈的疗效,能调节免疫功能，改善胃肠道分泌，对胃肠道疾病的治疗有积极意义。香砂六君子汤治疗消化系统疾病的疗效已为临证所首肯，目前，它的药理作用主要与保护胃黏膜、调节胃肠动力、调节免疫神经内分泌等有关，其加味及配合西药还可治疗临床多种疾病，因此值得我们去深入研究。 香砂六君子汤出自《古今名医方论》，由清代新安医家罗美编撰，该书精选古今常用名方及方论编撰而成，共收方剂150余首，方论180余则。香砂六君子汤为引用柯琴之方论，柯琴乃清代伤寒学家。因此香砂六君子汤并不是新安医家的处方。方中用党参补脾益气为主药；辅以白术健脾燥湿，扶助运化；配以茯苓甘淡渗湿，健脾和胃；陈皮、木香行气止痛；半夏燥湿化痰；砂仁健脾化湿，温中止呕；炙甘草甘温益气，并可助诸药达补气健脾之功。诸药合用，补而不滞，温而不燥，消除痰湿停留，促进脾胃运化，是治疗脾胃病尤其是脾胃气虚证的要方[2]。香砂六君子汤历代古籍中同名异方颇多，龚廷贤的《万
胃癌细胞表面,唾液酸糖链的表达与其与侵染、转移相关 性的研究
摘要 本设计为了研究唾液酸在胃癌发病过程中的相关作用，探讨,唾液酸糖链结构在胃癌发生中所造成的影响。设计内容主要分为两部分：,唾液酸糖链结构在不同分化程度的胃癌细胞表面的表达对胃癌细胞侵染能力相关性的研究；,唾液酸糖链结构对胃癌细胞的转移能力相关性的研究；第一部分分为两个实验设计用MAL细胞化学染色法选出阳性细胞计算出MAL胃癌细胞的阳性率和体外细胞粘附试验测得吸光度测试唾液酸跟细胞粘度的关系；第二部分通过重组基底膜实验来计数胃癌细胞的穿膜细胞数，确定,唾液酸对胃癌细胞的侵染、转移的影响。为胃癌疾病的研究和治疗提供一定的理论及实验基础。 关键词：,唾液酸；表达；胃癌细胞；侵染；转移
第一部分：文献综述 1 唾液酸 0 1.1简介 0 1.2唾液酸的生物学功能 0 2 胃癌 (1) 2.1胃癌发生的过程 (1) 2.2胃癌的侵染、转移 (1) 3 唾液酸与肿瘤作用 (2) 3.1唾液酸与恶性肿瘤 (2) 3.2唾液酸与胃癌 (3) 4凝集素 (4) 4.1简介 (4) 4.2 MAL简介 (4) 4.3 MAL对胃癌细胞表面糖链的标记 (5) 第二部分课程设计部分 1材料 (7) 1.1细胞株及细胞培养 (7) 1.2试剂 (7) 1.3试剂配制 (7) 1.4仪器设备 (8) 2方法 (9) 2.1 MAL细胞化学染色 (9) 2.2 体外细胞粘附试验 (10) 2.3 重组基底膜侵袭实验 (10) 3 设计 (11) 3.1 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其转移能力的相关性 (11) 3.2 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其侵染能力的相关性 (11)
四君子汤治疗慢性胃炎的疗效和安全性观察 慢性胃炎系复杂原因引起的慢性胃黏膜病变，现如今人们的生活压力加大，饮食不规律，慢性胃炎已经成为一种常见疾病。此病的常规治疗以抑制胃酸、抗幽门螺杆菌感染为主，但是效果并不十分理想并且不良反应较多。近年来临床表明采用中医药方法治疗慢性胃炎具有良好效果，本文中就四君子汤治疗慢性胃炎的临床疗效进行探讨，具体如下文叙述。 1 资料与方法 1. 1 一般资料选取本院2021年1月～2021年4月收治的96例慢性胃炎患者，按照随机数字表法分为对照组及观察组，各48例。观察组：男25例、女23例，平均年龄（53.5±11.4）岁，平均病程（4.08±0.52）年。对照组：男27例、女21例，平均年龄（55.2±10.5）岁，平均病程（4.12±0.55）年。两组患者的性别、年龄、病程等一般资料比较，差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。本组入选患者均符合慢性胃炎的西医和中医诊断标准，自愿选择相应方法治疗并处于知情同意状态。排除合并其他器官器质性病变、合并十二指肠溃疡和胃黏膜异常、药物过敏患者。 1. 2 治疗方法 1. 2. 1 对照组对照组患者使用常规西药进行治疗，服用抑制胃酸和抗幽门螺杆菌药物进行治疗。抑制胃酸药物服用奥美拉唑肠溶胶囊（商品名：立卫克，悦康药业集团有限公司，国药准字H***-*****，规格：20 mg×14粒），1次/d，20 mg/次。抗幽门螺杆菌药物包括：阿莫西林胶囊（商品名：白云山，广州白云山制药股份有限公司广州白云山制药总厂，国药准字H***-*****，规格：0.25 g×50粒），2次/d，0.5 g/次。克拉霉素片（汇仁，江西汇仁药业有限公司，国药准字H***-*****，规格：0.25 g×6片），2次/d，0.25 g/次。用药2个疗程（6个月）。
四君子汤的功效与配方详解全面认识四君子汤 说起中药方剂，大家在日常生活中时常都碰见或者听闻某某配方能够治疗什么疾病，四君子汤也不例外，四君子汤是中医补益剂方，常用于脾胃气虚证。那么，四君子汤的功效与配方有哪些?想要进一步了解的跟随小编一起来科普一下吧。 一、四君子汤的功效 四君子汤是传统中医流传下来的药方，最早出现记载于宋朝的“和剂局方”。它具有滋胃健脾、补阳益气的效果，常应用于治疗慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡、慢性肝炎、慢性肠胃炎、贫血、胃肠虚弱、食欲不振、呕吐、下痢、老人虚弱出血、四肢无力症、痔疾、脱肛、半身不遂、遗尿症等证属脾胃气虚者。 二、临床运用 1、用方要点本方为治疗脾胃气虚证的基础方，后世众多补脾益气方剂多从此方衍化而来。临床应用以面色萎白，食少气短，四肢乏力，舌淡苔白，脉虚弱为辨证要点。 2、现代运用本方常用于治疗慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡等属脾胃气虚者。此外，亦可用于乙型肝炎、冠心病、妊娠胎动不安、小儿感染后脾虚综合征等辨证属脾胃气虚者。 三、四君子汤处方 【配方】人参(9克)、白术(9克)、茯苓(9克)、炙甘草(6克); 【用法】上为细末。每服(15克)，水一盏，煎至七分，通口服，不拘时候;入盐少许，白汤点亦得(现代用法：水煎服)。 【方解】本方证由脾胃气虚，运化乏力所致。脾胃为后天之本，气血生化之源，脾胃气虚，运化失常，则饮食减少，大便溏薄;脾虚化源不足，脏腑组织器官失养，则面色萎白，语声低微;脾主肌肉，脾胃四肢肌肉无所禀受，故四肢乏力;舌淡苔白，脉虚弱皆为气虚之象。治宜补益脾胃之气，以复其运化受纳之功。方中人参大补元气，健脾养胃，为君药。脾喜燥恶湿，脾虚不运，则易生湿，故用甘苦温的白术，健脾燥湿以助运化，
各种中药功效大全 各种中药功效大全 、补气药 【黄芪】 补气升阳：用于脾肺气虚所致地倦怠乏力，气短多汗，便溏腹泻及中气下陷、脱肛等. 固气益表：用于虚汗证.《牡蛎》《神农普惠方》 托毒生肌：用于气血不足，疮痈脓成不溃或溃不收口. 利水消肿：用于气虚脾弱，水肿，小便不利等.《神农普惠方汤》【白术】 补脾益气：用于脾胃气虚，运化失常所致地纳少、气短、脘腹虚胀、倦怠便溏等. 燥湿利水：用于水肿和痰饮.《五苓》《苓桂术甘汤》《汤》《实脾》固表止汗：用于表虚自汗.《神农普惠方》 【山药】 补脾益胃：用于脾胃虚弱，食少倦怠，便溏久泻，小儿疳积及脾虚白带等.《参苓白术》 养肺固肾：用于肺虚喘咳、虚痨痰嗽等.《神农普惠方说，》
益气补中：用于心气虚，心悸怔忡，脉结代及脾胃气虚，倦怠乏力等.《炙甘草汤》 清热解毒：用于痈组疮疡、咽喉肿痛等.《神农普惠方》《桔梗汤》祛痰止咳：用于气喘咳嗽.《神农普惠方说》《苓甘五味姜辛汤》 缓急止痛：用于胃痛、腹痛及腓肠肌挛急疼痛等.《芍药甘草汤》 缓和药性：用于缓和某些药物地烈性或作为药引使用. 【党参】 补气益脾：用于脾胃虚弱，食少便溏或肺虚咳嗽、气短倦怠及各种原因引起地气虚体弱证. 养血生津：用于血虚头晕或面黄浮肿，久病失血，气血两亏.《八珍汤》《竹叶石膏汤》 、补血药 【当归】 补血活血：用于血虚所致各种症候.《四物汤》《当归补血汤》 调经止痛：用于心肝血虚，月经不调，经闭，痛经等.《四物汤》《桃红四物汤》 润肠通便：用于阴血虚少地肠燥便秘.
养血滋阴：用于血虚萎黄、眩晕、心悸失眠、月经不调、崩漏等.《四物汤》 补精益髓：用于肝肾阴虚，腰膝酸软、耳鸣眩晕、盗汗、遗精及消渴等.《六味地黄丸》 【何首乌】 补血生精：用于肝肾两虚、精亏血虚所致地头昏耳鸣、失眠健忘、心悸怔忡、腰膝酸软、遗精带下及须发早白等. 通便解毒：用于老人或血虚阴亏，大便秘结、疮痈、皮肤搔痒等. 【白芍】 养血敛阴：用于肝阴不足、肝阳上亢所致地头痛、眩晕、耳鸣或烦躁易怒等.《镇肝熄风汤》 平抑肝阳：用于肝郁脾虚，大便泻泄，痛必腹泻或血虚、阴虚血热、失血、盗汗等. 柔肝止痛：用于血虚或肝气不和所致腹部疼痛或四肢拘挛疼痛、痛经、妊娠腹痛等. 【阿胶】 补血止血：用于血虚萎黄、眩晕或虚痨咯血、吐血、尿血、便血、崩
四逆散合六君子汤治疗慢性胃炎200例疗效观察 发表时间：2016-06-24T15:13:38.953Z 来源：《医药前沿》2016年6月第17期作者：赵秋芬[导读] 此疾病的病理特征主要是胃黏膜变薄或点状糜烂，且固有腺体萎缩或者伴随着程度不同的异型增生及肠上皮化生等[1]。 赵秋芬 （杨凌示范区医院康复医学科陕西杨凌 712100）【摘要】目的：分析讨论四逆散合六君子汤应用于慢性胃炎治疗中的临床效果。方法：回顾性的分析我院2013年11月～2015年11月收治的200例慢性胃炎患者的临床资料，采用随机数字法分成对照组与实验组，其中对照组选择常规西医方法治疗，实验组选择四逆散合六君子汤加减治疗。结果：对照组患者的总有效率为72.00%，实验组患者的总有效率为95.00%，实验组患者的临床疗效明显好于对照组， 比较两组数据，存在明显差异（P＜0.05），具备统计学意义。结论：四逆散合六君子汤应用于慢性胃炎治疗中，其具备着较好的临床效果，可以有效解除或缓解患者临床症状，并使患者的生活质量与临床疗效得到提升，在临床中值得广泛推广。【关键词】四逆散；六君子汤；慢性胃炎；临床疗效【中图分类号】R283 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）17-0301-02 慢性胃炎是一种临床中常见与多发的消化系统疾病，其常见类型为慢性糜烂性和慢性萎缩性胃炎，隶属祖国医学之“痞满”及“胃脘痛”等范畴。此疾病的病理特征主要是胃黏膜变薄或点状糜烂，且固有腺体萎缩或者伴随着程度不同的异型增生及肠上皮化生等[1]。因此，临床中积极的探索寻求有效的临床治疗方法对于慢性胃炎患者具备着至关重要的作用。本研究中回顾性的分析我院2013年11月～2015年11月收治的200例慢性胃炎患者的临床资料，旨在分析讨论四逆散合六君子汤应用于慢性胃炎治疗中的临床效果，现将研究结果作如下汇报：1. 资料与方法 1.1 一般资料 本研究中回顾性的分析我院2013年11月～2015年11月收治的200例慢性胃炎患者的临床资料，采用随机数字法分成对照组与实验组，每组100例患者。其中对照组中，男性患者为55例，女性患者为45例，其年龄为29～65岁，平均为(43.5±12.5)岁。而实验组中，男性患者为53例，女性患者为47例，其年龄为28～65岁，平均为(43.6±12.3)岁。全部患者的年龄及性别等基本资料对比无明显差异（P＞0.05），具备可比性。 1.2 方法 对照组选择常规西医方法治疗，治疗药物主要包含甲硝唑，每次0.2克，每天3次；羟氨苄青霉素，每次0.5克，每天3次；枸缘酸铋钾胶囊，每次0.6克，每天2次，每个疗程为1个月，坚持治疗3个疗程。而实验组在对照组前提下，选择四逆散合六君子汤加减治疗，其药方组成主要为：柴胡12克，炒白芍12～15克，枳壳12克，陈皮8～12克，半夏12克，砂仁6克（后下），党参15克，炒白术15克，茯苓15克，厚朴10克，麦冬12，炙甘草6克，木香6克。其中，痛甚者加用香附10克，元胡10克；食欲不振者加用鸡内金10克，炒山楂10克，炒麦芽10克；泛酸者加用左金丸（吴茱萸1.5克,川黄莲6克），煅瓦楞子30克，煅海螵蛸30克，浙贝母12克；胃胀者加吴茱萸3克，荜拨4.5克，台乌药10克；如果胃镜及病理检查发现有胃黏膜肠化加莪术10～12克，生牡蛎30克。水煎服，取汁400毫升，每次200毫升，每天2次，每个疗程为1个月，坚持治疗3个疗程。两组患者在接受治疗的过程中均给予心理调节，且叮嘱患者饮食清淡，七八分饱；忌烟酒、油腻、浓茶等刺激性食物。 1.4 疗效评定标准 患者经过3个月临床治疗后，对两组慢性胃炎患者的临床疗效进行评估，分成3个等级。其中，患者临床症状的总分下降超过2/3，且经胃镜复查显示黏膜活动性炎症完全消失为显效；患者临床症状的总分下降介于1/2～2/3之间，且经胃镜复查显示黏膜活动性炎明显得到改善为有效；患者临床症状无变化或加重为无效[2]。总有效率=[（显效+有效）/治疗患者总数]*100.0%。 1.5 统计学方法 对本研究中所得数据实施统计学处理，采用统计学SPSS17.0实施分析其中计量资料采用x-±s表示,通过t检验；而计数资料用百分比（%）表示，通过卡方检验，P＜0.05，则说明差异具有统计学意义。 2. 结果 对两组患者的临床疗效进行对比分析，其中对照组患者的总有效率为72.00%，实验组患者的总有效率为95.00%，实验组患者的临床疗效明显好于对照组，比较两组数据，存在明显差异（P＜0.05），具备统计学意义。具体数据如下表所示。 3.讨论 现阶段，慢性萎缩性胃炎被现代医学公认为是癌前状态，由此逆转或者阻断其癌变在临床研究中具备着至关重要的作用。因此，积极的探索寻求有效的临床治疗方法对于慢性胃炎患者具备着至关重要的作用。祖国医学认为四逆散具有透邪解郁，疏肝理脾的作用，临床用于治疗肝郁而致四肢厥逆或肝脾不和所致脘腹胁肋诸痛；而六君子汤健脾止呕，主治脾胃气虚兼有痰湿。证见不思饮食，恶心呕吐，胸脘痞闷，大便不实，或咳嗽痰多稀白等证。四逆散合六君子汤加减治疗七情郁结及饮食劳倦损伤脾胃，既能解除病因又能针对病机治疗，故临床上取得满意疗效。现代药理研究显示，四逆散具备着抑制胃液分泌、解热、镇静、抗炎、解痉及镇痛等疗效，而六君子汤可以提高胃蛋白酶活性与抑制胃肠平滑肌痉挛、保护胃黏膜、缓解痉痛及促进胃黏膜修复等效果，由此确保患者的体液免疫功能与细胞免疫功能得到提升，从而促使胃黏膜有效得到修复[3]。通过此次临床研究的结果显示：对两组患者的临床疗效进行对比分析，其中对照组患者的总有效率为72.00%，实验组患者的总有效率为95.00%，实验组患者的临床疗效明显好于对照组，比较两组数据，存在明显差异（P＜0.05），具备统计学意义。 4.结语 总而言之，四逆散合六君子汤应用于慢性胃炎治疗中，其具备着较好的临床效果，可以有效缓解患者临床症状，并使患者的生活质量与临床疗效得到提升，在临床中值得广泛推广。表比较两组患者的临床疗效[例（％）]