小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)酶联免疫吸附测定
试剂盒
使用说明书
产品编号：E-EL-M0812
（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组NAG浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠NAG抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的NAG会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠NAG抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠NAG抗体与结合在包被抗体上的小鼠NAG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，NAG浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中NAG的浓度。
标本收集:
1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞
会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
（具体处理方法可参考：https://www.doczj.com/doc/787976353.html,/news2.asp?tid=477 ）
6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，
1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做
预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4.吸水纸
检测前准备工作:
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。
3.标准品: 加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，
轻轻混匀(浓度为2500pg/ml)。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2500、1250、625、312.5、156.25、78.13、39.06、0 pg/ml ，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。如配制1250pg/ml标准品：取0.5mL 2500pg/ml的上述标准品加入含有0.5mL样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。
4.生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5.酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
标准品稀释方法图例：(以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管)
2500 1250 625 312.5 156.25 78.13 39.06 0 pg/ml
洗涤方法:
1.自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。
2.手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸
去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μL，余孔分别加标
准品或待测样品100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液100μL（在使用前15分
钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μL/每孔，甩干并在吸水
纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加酶结合物工作液（临用前15分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育30分钟。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液(TMB)100μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右（根据实际显
色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。7.每孔加终止液50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶
液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源，预热
仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。
注意事项：
1.保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强
光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。
2.酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成
任何影响。
3.加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的
“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。
4.温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标
板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。
5.洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸
水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。
6.试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，
运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
7.显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很
明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。
8.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
9.混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量
振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。
10.安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本
时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
11.不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
12.试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！
结果判断:
1.每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准
品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2.推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3，在软件界面既可根据样品OD值，由标准
曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
灵敏度、检测范围、特异性和重复性:
● 灵敏度：最小可测23.44pg/ml。
●检测范围：39.06 – 2500pg/ml。
● 特异性：可检测重组或天然的小鼠NAG，且与其它相关蛋白无交叉反应。
● 重复性：板内，板间变异系数均<10%。
说明
1.限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析，本产品可能存在
一定的质量技术风险。
2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务
必准备充足的待测样品。
3.只有全部使用Elab TM试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守
Elab TM试剂的实验说明才会得到最佳的检测结果。
4.有效期：6个月。
5.本操作说明同样适用于48T试剂盒。
Mouse NAG (N-acetyl-β-D-glucosaminidase) ELISA Kit
Product Description
Catalog No: E-EL-M0812
（FOR RESEARCH USE ONLY. DO NOT USE IT IN CLINICAL DIAGONOSIS !）
Dear customer, Thank you for choosing our products. This product is produced using raw materials from world-renowned manufacturer, and professional manufacturing technology of ELISA kits. Please read the instructions carefully before use and check all the reagent compositions! If in doubt, please contact Elabscience Biotechnology Co., Ltd.
Intended use
This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of Mouse NAG concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
*: [96T/48T]
Test principle
This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to NAG Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for NAG and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain NAG, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ±2 nm. The OD value is proportional to the concentration of NAG. You can calculate the concentration of NAG in the samples by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
Sample collection and storage
Serum- Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°C before centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.
Plasma- Collect plasma using EDTA.Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.
Tissue homogenates:For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces.Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.
Cell culture supernate–Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.
Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing method: https://www.doczj.com/doc/787976353.html,/news2.asp?tid=477 )
Sample preparation –Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids.
Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor)
Other supplies required
Microplate reader with 450nm wavelength filter
High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips
37°C Incubator, Deionized or distilled water.
Absorbent paper
Reagent preparation
Bring all reagents to room temperature before use.
Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°C water bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard - Reconstitute the Standard with 1.0mL of Sample Diluent, let it stand for 10minutes until it dissolved fully. This reconstitution produces a stock solution of 2500pg/ml. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows: 2500、1250、625、312.5、156.25、78.13、39.06、0pg/ml . As if you want to make standard solution at the concentration of 1250pg/ml, you can take 0.5mL the standard at 2500pg/ml, add it to an EP tube with 0.5mL sample dilution, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (2500pg/ml). The Sample Diluent serves as the zero (0pg/ml).
(500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)
2500 1250 625 312.5 156.25 78.13 39.06 0 pg/ml
Biotinylated Detection Ab —Calculate the required amount before experiment (100μL /well). In actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the concentrated Biotinylated Detection Ab to the working concentration using Diluent for Biotinylated Detection Ab (1:100).
Concentrated HRP Conjugate —Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In actual preparation you s hould prepare 100~200μL more. Dilute the Concentrated HRP Conjugate to the working concentration using Diluent for Concentrated HRP Conjugate (1:100).
Washing Procedure:
1. Automated washer: add 350μL wash buffer into each well, the interval between injection and
suction should be set about 60s.
2. Manual wash: add 350μL wash buffer into each well, soak it for 1~2minutes, suck(no inside wall
touching) or get rid of liquid within the micro ELISA plate and pat it dry on thick clean absorbent paper.
Assay procedure
Allow all reagents to reach room temperature All the reagents should be mixed thoroughly by gently swirling before pipetting. Avoid foaming.
1.Add Sample: Add 100μL of Standard, Blank, or Sample per well. The blank well is added with
sample diluent. Solutions are added to the bottom of micro ELISA plate well, avoid inside wall touching and foaming to the best of your ability. Mix it gently. Cover the plate with sealer we provided. Incubate for 90 minutes at 37°C.
2.Biotinylated Detection Ab: Remove the liquid of each well, don’t wash. Immediately add 100μL
of Biotinylated Detection Ab working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Gently tap the plate to ensure thorough mixing. Incubate for 1 hour at 37°C.
3.Wash: Aspirate each well and wash, repeating the process three times. Wash by filling each well
with Wash Buffer (approximately 350μL) using a squirt bottle, multi-channel pipette, manifold
dispenser or automated washer. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting.
Invert the plate and pat it against thick clean absorbent paper.
4. HRP Conjugate: Add 100μL of HRP Conjugate working solution to each well. Cover with the
Plate sealer. Incubate for 30 minutes at 37°C.
5. Wash: Repeat the wash process for five times as conducted in step 3.
6. Substrate:Add 100μL of Substrate Solution to each well. Cover with a new Plate sealer. Incubate
for about 15 minutes at 37°C. Protect the plate from light. The reaction time can be shortened or extended according to the actual color change, but not more than 30minutes. When apparent gradient appeared in standard wells, you can terminate the reaction.
7. Stop: Add 50μL of Stop Solution to each well. Color turn to yellow immediately. The adding order
of stop solution should be as the same as the substrate solution.
8. OD Measurement: Determine the optical density (OD value) of each well at once, using a
microplate reader set to 450nm. You should open the microplate reader ahead, preheat the instrument, and set the testing parameters.
9. After experiment, put all the unused reagents back into the refrigerator according to the specified
storage temperature respectively until their expiry.
Important Note:
1. Storage: All the reagents in the kit should be stored following the instructions. Exposure of
reagents to strong light should be avoided in the process of incubation and storage. All the taps of reagents should be tightened to prevent evaporation and microbial contamination, or erroneous results may occur.
2. ELISA Plate: Little water-like substance may appear in the ELISA Plate just opened, this is
normal and will not have any impact on the experiment results.
3. Add Sample: The interval of sample adding between the first well and the last well should not be
too long, otherwise will cause different pre-incubation time, which will significantly affect the experiment’s accuracy and repeatability. The interval controlled within 10minutes is good. Parallel measurement is recommended.
4.Incubation: To prevent evaporation, proper adhesion of plate sealers during incubation steps is
necessary. Do not allow wells to sit uncovered for extended periods between incubation steps. Do not let the strips dry at any time during the assay. Strict compliance with the given incubation time and temperature.
5.Washing: The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in poor precision and
falsely elevated absorbance readings Residual liquid in the reaction wells should be pat dry against
absorbent paper in the washing process. But don’t put absorbent pa per into reaction wells directly.
Note that clear the residual liquid and fingerprint in the bottom before measurement, so as not to affect the microtiter plate reader.
6.Reagent Preparation: As the volume of Concentrated Biotinylated Detection Ab and
Concentrated HRP Conjugate is very small, liquid may adhere to the tube wall or tube cap when being transported. You better hand-throw it or centrifugal it for 1 minute at 1000rpm. Please pipette the solution for 4-5 times before pippeting. Please carefully reconstitute Standards, working solutions of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate according to the instructions.
To minimize imprecision caused by pipetting, ensure that pipettors are calibrated. It is re commended to suck more than 10μL for once pipetting. Do not reuse standard solution, working solution of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate, which have been diluted. If you need to use standard repeatedly, you can divide the standard into small pack according to the amount of each assay, keep them at -20～-80°C and avoid repeated freezing and thawing.
7.Reaction Time Control: Please control reaction time strictly following this product description!
8.Substrate: Substrate Solution is easily contaminated. Please protect it from light.
9.Mixing:You’d better use microoscillator at the lowest frequency, as sufficient and gentle mixing
is particularly important to reaction result. If there is no microsocillator available, you can knock the ELISA plate frame gently with your finger before reaction.
10.Security: Please wear lab coats and latex gloves for protection. Especially detecting samples of
blood or other body fluid, please perform following the national security columns of biological laboratories.
11.Do not use component from different batches of kit(washing buffer and stop solution can be an
exception)
12.To avoid cross-contamination, change pipette tips between adding of each standard level, between
sample adding, and between reagent adding. Also, use separate reservoirs for each reagent.
Otherwise, the results will be inaccurate!
Calculation of results
Average the duplicate readings for each standard and samples and subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve by plotting the mean OD value for each standard on the y-axis or x-axis against the concentration on the x-axis or y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph. It is recommended to use some professional software to do this calculation, such as curve expert 1.3. In the software interface, a best fitting equation of standard curve will be calculated using OD values and concentrations of standard sample. The software will calculate the concentration of samples after entering the OD value of samples. Also, you can enter the corresponding fitting equation
and OD value of samples into Excel to get the concentration of samples. If samples have been diluted, the concentration calculated from the standard curve must be multiplied by the dilution factor. If the OD of the sample surpasses the upper limit of the standard curve, you should re-test it after appropriate dilution. The actual concentration is the calculated concentration multiplied dilution factor.
Sensitivity
The minimum detectable dose of Mouse NAG is 23.44pg/ml (The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero).
Detection Range
39.06 – 2500 pg/ml.
Specificity
This kit recognizes recombinant and natural Mouse NAG. No significant cross-reactivity or interference was observed.
Repeatability:
Coefficient of variation were<10%
Declaration:
1. Limited by the current conditions and scientific technology, we can't completely conduct the
comprehensive identification and analysis on all the raw material provided. So there might be some qualitative and technical risks for users using the kit.
2. The final experimental results will be closely related to validity of the products, operation skills of
the operators and the experimental environments. Please make sure that sufficient samples are available.
3. To get the best results, please only use the reagents supplied by the manufacturer and strictly
comply with the instructions in the description!
4. Valid period: 6 months.
5. This description is also suitable for 48T kit.
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
乙酰氨基葡萄糖苷酶是什么 乙酰氨基葡萄糖苷酶是一种用来检测肾损伤和肾小管的敏 感指标。也可以用来检查尿路感染和糖尿病肾痛早期诊断，它的临床意义通常在病理情况下出现，如果其他检查正常，单靠乙酰氨基葡萄糖苷酶偏高，建议低盐低脂高维生素饮食，戒烟戒酒。接下来我们就详细的了解一下乙酰氨基葡萄糖苷酶的作用，应该注意什么以及它的检查方法。 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检查的正常值 ★1、对硝基酚比色法：血清NAG21.54±6.4U/L，尿液NAG 呈正态分布，中位数为9.13U/g肌酐，第95百分位数上限为16.10U/g肌酐。 ★2、荧光光度法： 成人血清：9.94±2.O7U/L。 成人尿液：6.39±3.19U/LCre。 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检查的作用
血、尿NAG活性测定对反映肾实质病变，尤其是急性损伤和活动期病变更敏感，主要用于早期肾损伤的监测和病情观察。 ★1、肾小管疾病重金属(汞、铅、镉等)及药物性肾损伤、缺血、缺氧、失血、休克等均可引起NAG活性增加。 ★2、肾病综合征尿NAG常明显增加，缓解期下降，复发时迅速回升，故可作为临床观察指征。肾小球肾炎急性期变化较大，但与肾小管损伤相比，变化幅度较小。 ★3、尿路感染的定位诊断急、慢性肾盂肾炎尿NAG上升，能与单纯性膀胱炎区别。可用于早期上尿路感染的诊断。 ★4、肾移植排斥反应的监测肾移植排斥反应早期NAG即可升高，比尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率更敏感。 ★5、糖尿病肾痛早期诊断糖尿病肾病尿NAG升高，用于本病的早期诊断优于尿白蛋白及β2-微球蛋白。 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶结果偏高可能有的疾病：肾病综
仅供科研使用，不得用于临床检验。 人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择） 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 【摘要】目的应用VRA-GlcNAc为底物建立检测NAG活力的方法，用于尿液NAG活性测定。方法对离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。用该法在日立7180全自动生化分析仪上进行性能分析并测定多种肾病尿样NAG活性，结果该法最低检出限 1.5 U/L，线性范围可达200U/L(r=0.9979)，批内CV为＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。结论本法灵敏度高，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作。 【关键词】VRA-GlcNAc；N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶；动力学法 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，尿中NAG主要来源于肾近曲小管上皮细胞，当近曲小管上皮细胞受损时，尿NAG活性将显著升高且早于其他尿酶，对肾小管损害的早期诊断有较大价值［1］，且NAG上升程度与肾小管损伤程度成正比。［2］可作为早期诊断肾损害的尿标志性蛋白［3］。本文基于NAG催化VRA-GLCNAC生成红色VRA产物，经反复试验确定最佳实验条件，建立检测尿NAG活力的动力学分析法，该法用于尿NAG活力测定，均获得满意结果。 1 材料与方法 1.1 试剂和仪器(1)试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液150mmol/L、VRA-GlcNAc1.0g/L、稳定剂适量。(2)试剂2(R2)：pH碳酸钠缓冲液3 讨论近年来，随着对NAG的研究不断深入，其检测方法也在不断发展。主要 有荧光分光光度法和可见分光光度法。前者因所需仪器价格昂贵，且对底物溶液配制的要求较高而不宜用作一般医院常规检验；后者试剂稳定性欠佳，难以满足临床检验要求,目前都采用PNP-NAG和CNP-NAG、MNP-NAG作底物建立的方法[4-5],这些方法由于在液体状态下不稳定，造成试剂浪费严重，临床难于推广。本文以VRA-GLCNAC底物建立的NAG测定试剂优点在于试剂在液体状态稳定性好，该方法最低检出限为1.5 U/L，线性范围可达200U/L，批内CV＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。通过测定64例各种肾病患者和40例正常人尿NAG活性，结果肾病患者组尿NAG活性均明显高于正常对照组，两组有显著差异（P＜0.05）， 综上所述，本文用VRA-GLCNAC建立的测定尿NAG活性的方法，灵敏度高，线性范围宽、精密度好，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作，有利于临床对肾脏疾病的早发现、早治疗。 参考文献 [1]丛玉隆，马骏龙.当代尿液分析技术与临床[M]．北京：中国科学技术出版社，1998：l49-150．
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT底物法） 适用范围：用于体外定量测定人体尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。 1.1试剂盒包装规格 试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml； 试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml； 试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。校准品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。 质控品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。 1.2试剂盒主要组成成分
2.1 外观 试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色或淡黄色液体。 校准品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。 质控品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于1.5。 2.3.2试剂空白吸光度变化率
在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.05。 2.4 分析灵敏度 测定活性为100U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.01。 2.5 线性范围 在（0，200）U/L线性范围内，线性相关系数r应不小于0.996。在（20，200）U/L范围内的线性相对偏差应不大于±15%；在（0，20] U/L范围内的线性绝对偏差应不大于±3U/L。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。 2.8 准确度 与已上市产品进行比对试验：在（0，200）U/L线性范围内，与参比试剂的相关系数r应不小于0.975。在（20，200）U/L范围内与参比试剂的相对偏差不大于±15%；在（0，20] U/L范围内与参比试剂的绝对偏差不大于±3U/L。 2.9 质控品赋值有效性 测定结果在靶值范围内。 2.10瓶间差（均一性） 校准品和质控品的瓶间变异系数（CV%）应不大于5%。 2.11含水量（冻干品） 校准品和质控品的水分含量应不大于8%。
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.doczj.com/doc/787976353.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(MNP-GlcNAc底物法) 适用范围：用于体外定量测定人尿液中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。 1.1 规格 试剂盒是由试剂1和试剂2组成的液体双试剂；校准品1为液体剂型，校准品2与质控品均为冻干粉。规格及装量见表1。 表1 规格及装 量 1.2主要组成成分
试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 校准品主要组分： 质控品主要组分： 2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1应为无色或浅黄色液体，试剂2应为无色或淡黄色液体；校准品1为无色透明液体，校准品2为白色至浅黄色冻干粉，复溶后为无色至浅黄色透明液体，质控品为白色至浅黄色冻干粉，复溶后为无色至浅黄色透明液体。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 在340nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.8；
2.4 分析灵敏度 测试50U/L的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.0031。 2.5 准确度 参照EP9-A2的方法，用比对试剂盒同时测试40例线性区间内的不同浓度的尿液样本。其相关系数（r）不小于0.990。每个浓度点在[1，12）U/L区间内绝对偏差不超过±1.44U/L；[12，100]U/L区间内相对偏差不超过±12%。 2.6 重复性 批内变异系数（CV）应不超过10％。 2.7 线性 2.7.1在[1,100]U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2 [1,12)U/L区间内绝对偏差不超过±1.44U/L；[12,100]U/L区间内相对偏差不超过±12%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差≤12％。 2.9校准品批内瓶间差 变异系数（CV）应≤10%。 2.10质控品批内瓶间差 变异系数（CV）应≤10%。 2.11溯源性 根据GB/T 21415-2008的规定，本试剂盒内校准品溯源至企业工作校准品，与已上市公司试剂盒进行比对赋值。 2.12质控品赋值有效性
人P16ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人P16的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。用纯化的人P16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P16，再与HRP标记的P16抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人P16浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
联合尿N—乙酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶与尿／血渗透压比测定在 糖尿病肾病早期诊断中的价值 目的：评价联合尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）与尿/血渗透压比测定在糖尿病肾病早期诊断中的价值。方法：2型糖尿病患者150例，按尿白蛋白排泄率（UAER）分为A组65例（UAER5年69例。血糖控制良好，HbA1c11.5 U/L为阳性，提示近端肾小管受损；远端肾小管功能评价：禁饮12 h后，尿/血渗比<3为阳性，提示远端肾小管的尿浓缩功能减低。 1.3 统计学处理使用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析，正态分布计量资料用（x±s）表示，非正态分布计量资料用中位数（四分位数间距）表示，经对数转换成近似正态分布后进行统计分析，相关性分析采用Spearman相关分析，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 Spearman相关性分析 2.1.1 尿NAG与各项指标的相关性尿NAG与病程、UAER、BUN、年龄呈显著正相关（r=0.296、0.424、0.247、0.266，P＜0.01），与HbA1c、尿糖、血肌酐呈显著正相关（r=0.217、0.205、0.245，P＜0.05）。 2.1.2 尿/血渗比与各项指标的相关性尿/血渗比与病程、UAER、血肌酐、年龄呈显著负相关（r=-0.259、 -0.371、-0.252、-0.282，P＜0.01），与HbA1c呈负相关（r=-0.227，P＜0.05），与GFR呈正相关（r=0.200，P＜0.05）。 2.2 不同病程及血糖患者各项指标比较病程越长者，肾小管功能受损越明显，与病程短的患者比较，尿NAG显著升高（P＜0.05），尿渗透压及尿/血渗比显著降低（P＜0.05），血渗透压显著升高（P＜0.01）；血糖控制差者，肾小管功能受损越明显，与血糖控制良好的患者比较，尿NAG及血渗透压显著升高（P ＜0.05），尿渗透压及尿/血渗比显著降低（P＜0.05），见表1。 2.3 四组各项观察指标比较糖尿病各组与对照组比较，尿NAG、尿渗透压及尿/血渗比差异均有统计学意义（P＜0.05）。B、C组血渗透压均较对照组明显升高（P＜0.05），而A组与对照组比较差异无统计学意义。A、B、C三组随着蛋白尿的增加，尿NAG逐渐增高，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）； A、B、C三组尿渗透压逐渐减低，尿/血渗比逐渐减低，组间差异亦有统计学意义（P＜0.05）；血渗透压逐渐升高，C组较A、B组显著升高（P＜0.05），而A、B组间比较差异无统计学意义，见表2。
人脂多糖结合蛋白（LBP）ELISA试剂盒说明书 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）脂多糖结合蛋白（LBP）ELISA检测试剂盒使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预 先包被脂多糖结合蛋白（LBP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂多糖结合蛋白（LBP）呈正相 关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞 刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟 取上清。 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 -20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，最终结果乘以5 才是样本实际浓度。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注 微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无 标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（CNP-NAG底物法） O-适用范围：用于体外定量测定人血清或尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。 1.1规格 a）试剂1：1×50ml，试剂2：1×10ml； b）试剂1：4×60ml，试剂2：1×48ml； c）试剂1：1×60ml，试剂2：1×12ml； d）试剂1：1×70ml，试剂2：1×14ml； e）试剂1：1×40ml，试剂2：1×8ml； f）试剂1：1×80ml，试剂2：1×16ml； g）试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml。 1.2 组成 试剂主要组分见表1： 2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1：无色或淡黄色透明溶液，试剂2：淡黄色透明溶液。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度
在405nm处测定试剂空白吸光度，应不超过1.2。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率△A/min应不超过0.1。 2.4 分析灵敏度 测试380U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.005。 2.5 准确度 回收率应在85%～115%范围内。 2.6 重复性 变异系数（CV）应不超过5%。 2.7 线性 2.7.1在[2,400]U/L范围内，线性回归的相关系数不低于0.990； 2.7.2测试浓度(60,400]U/L的样品，相对偏差应不超过±15%；测试浓度[2,60]U/L的样品，绝对偏差应不超过±9U/L。 2.8 批间差 相对极差应小于10%。 2.9 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到18个月后的试剂进行检测，应符合本技术要求2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
仅供科研使用，不得用于临床检验。 大鼠CD36分子（CD36 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称：大鼠CD36分子（CD36 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒） 英文名称：Rat Cluster of differentiation 36（CD36 ）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗大鼠CD36分子（CD36 ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入大鼠CD36分子（CD36 ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗大鼠CD36分子（CD36 ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品检测范围：0.218-14ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。