病理技术组特殊染色PDCA 循环 问题描述： 2018年4月诊断医师反应科室刚果红染色效果不佳影响疾病诊断，主要表现在淀粉样着色和纤维组织的着色不易区别，质控小组统计了上半年连续四个月特染结果数据（表一及图一 ），1-3月特染切片优良率统计均符合三级甲等医院要求（优秀率≥90%；优良率≥98%），而4月份统计数据显示该月特染质量明显下降且低于规范要求（优秀率84%；优良率90%），已经严重影响病理诊断的及时性和准确性。 表一 图一 75 80 85 90 95 100 一月 二月 三月 四月 优秀率 优良率
原因分析： 对2018年4月所有特染切片染色项目构成和评分结果为乙、丙、丁的染色项目进行统计，数据显示影响特染优良率的主要因素是刚果红染色和MASSON 染色（表二，图二），其中又主要是刚果红染色结果对优良率影响最大（表三，图三），因此最快时间内使优良率达到相关规范要求，可通过改进刚果红染色来实现。 表二. 图二 表三 图三 质控小组组织阅片医师及病理技师集体讨论和分析刚果红染色不合格的可能原因： 1.试剂原因：科室刚果红染色为手工染色法，所有试剂均为手工配制，由于标本量较小，染液用量不大且周期较长，很可能是刚果红染液近效期或过期导致试剂失效； 2.人员原因：该岗位人员是否依据SOP 操作；责任心；实践及理论培训是否合格； 3.方法学：本科室刚果红染色项目开展时间不长（2年），目前的方法学选择在当时并未经过严密的论证，且因为标本量很少，在阅片和染色两方面均没有积累太多经验，所以
不排除方法学本身的不足导致染色失败。 图四 预期改进目标： 制定改进计划措施并实施，在本年度5月底使特殊染色优良率≥98%，优秀率≥90。改进计划（PLAN）： 专业组全体人员就解决方案进行分析和讨论，针对不同的原因给出针对性的解决方案并明确责任人和实施时间表： 1.制度和规范因素排查：5月3-4日，实验室主任和专业组长一起核查刚果红染色所涉及的方法学及仪器设备SOP的书写和操作步骤规定是否存在错误和不当，如有不当和错误则进行全员讨论并进行更正（XX、XX、XX）。 2.试剂因素排查：5月3-11日由XX、XX、XX通过查阅试剂配制记录表及现场查看对刚果红染色所涉及的试剂有效期进行确认； 3.环境及仪器因素排查：5月7-9日，XX、XX、XX通过查阅室内温湿度记录表排除环境因素；对试剂配制中用到的玻璃器皿，试管等按规范进行彻底清洗。 4.人员因素排查：5月14-18日由XX替代当班特染操作者XX进行刚果红染色；如结果无变化则重新更换所有液体两人同时对标本进行染色。 5.方法学因素排查：如以上各因素均排查完毕但染色结果无改进则应该考虑方法学本身的问题，5月14-18日，XX、XX、XX分别通过查阅电子文献、纸质版文献书籍及同行求教等方式确定新的刚果红染色方法并进行方法学验证。 计划实施(DO)： 1.人员因素：XX代替XX对标本进行刚果红染色，染色结果与之前相比没有改进，因
细胞生物学期末复习题 Made by 1904 JJP.
题型及分值分布 1.单选15道15分 2.多选5道5分 3.名词解释5道10分 4.简答8道40分 5.论述3道30分
简答题 第四章 1.许多小分子是被动运输进行转运，请回答如下问题： （1）何为被动运输，有哪几种运输方式？ （2）苯类通过哪种方式运输？ （3）哪两种被动运输需要转运蛋白介导，分别需要哪类转运蛋白？" (1)被动运输是物质顺着梯度由高浓度向低浓度转运且不需要代谢能的过程。 包括简单扩散，离子通道扩散，易化扩散三种。 (2)苯类通过简单扩散方式运输。 (3)离子通道扩散需要通道蛋白介导，易化扩散需要载体蛋白介导。 2.细胞进行物质转动时，许多物质必须通过主动运输的方式才能转运，请回答下列问题： （1）何为主动运输，包括哪几种运输方式？ （2）细胞内外钠离子和钾离子的浓度差靠哪种主动运输方式维持，其功能是什么？ (1)主动运输是物质逆浓度梯度，在载体的协助下，在能量的作用下运进或运出细胞膜的过程。包括ATP驱动泵，协同运输两种。 (2)主要靠ATP驱动泵维持，其功能是将胞内Na+逆电化学梯度运出细胞，将胞外的K+逆电化学梯度运入细胞，以维持胞内外Na+、K+的浓度差。 3.大分子和颗粒物质不能直接穿过细胞膜，需要通过特殊的运输方式进行转运，请回答相关问题： （1）这种运输方式为哪种运输？其特点是什么？ （2）细菌、液体和LDL分别是以哪种方式被摄入细胞？ （3）请详细叙述细胞摄取LDL的过程。 (1)小泡运输，特点是消耗能量。 (2)分别以吞噬作用、胞饮作用、受体介导的胞吞作用被摄入细胞。 (3)受体向有被小窝集中与LDL结合，有被小窝凹陷、缢缩形成有被小泡进入细胞;有被小泡迅速脱去外被形成无被小泡;无被小泡与内体融合，在内体酸性环境下LDL与受体解离;受体经转运囊泡返回质膜，被重新利用。含LDL的内体与溶酶体融合，LDL被分解释放出游离胆固醇。 4.细菌和LDL分别通过哪种方式摄取入细胞内？在LDL的摄取过程中，有哪些蛋白质分子参与其中？其各自作用是什么？ (1)分别通过吞噬作用和受体介导的胞吞作用摄取入细胞内。 (2)LDL受体:能特异性识别与结合含apoE或apoB100的脂蛋白 发动蛋白:水解与其结合的GTP，引起其构象改变，从而将有被小泡从质膜 上切离下来，形成网格蛋白有被小泡 网格蛋白:牵拉质膜向内凹陷，参与捕获特定的膜受体使其聚集于有被小窝内 衔接蛋白:参与包被的形成并起连接作用 第五章 1.与分泌性蛋白的合成直接相关的细胞器有哪些？它们各起什么作用？ （1）核糖体：合成分泌蛋白。 （2）糙面内质网：①新生肽链折叠与装配；②加工（N-连接糖基化）；③运输到高尔基复合体。 （3）高尔基复合体：①对蛋白质进一步加工（糖基化、蛋白质水解等）；②分拣；③分泌到细胞外。
【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3.材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到 重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。 另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。 【实验步骤】 一、大体流程 剪下合适大小的肝组织小块洗净 用詹纳斯绿B 染色20-30min 取着色部分加 Ringer 溶液制成悬 液 制片，高倍镜观察 断头法处死小 白鼠取肝组织
9、4溶酶体(l y s o s o me) 溶酶体就是动物细胞中一种膜结合细胞器,含有多种水解酶类,在细胞内起消化与保护作用,可与吞噬泡或胞饮泡结合,消化与利用其中的物质。也可以消化自身细胞破损的细胞器或残片,有利于细胞器的重新组装、成分的更新及废物的消除。 9、4、1溶酶体的形态结构 ■溶酶体的形态 溶酶体就是一种异质性(h e t e r o g e n e o u s)的细胞器,不同来源的溶酶体形态、大小,甚至所含有酶的种类都有很大的不同。溶酶体呈小球状,大小变化很大,直径一般0、25～0、8μm,最大的可超过1μm,最小的直径只有25～50n m。图9-36就是肝组织的K u p p e r细胞(肝星形细胞)中不同大小的溶酶体,该细胞主要就是吞噬衰老的红细胞。
图9-36溶酶体的形态大小 具吞噬作用的肝K u p p e r细胞中不同大小的溶酶体,图中示出至少10个不同大 小的溶酶体。 ■溶酶体膜的稳定性 溶酶体的外被就是一层单位膜,内部没有任何特殊的结构。由于溶酶体中含有各种不同的水解酶类,所以溶酶体在生活细胞中必须就是高度稳定的。溶酶体的稳定性与其膜的结构组成有关: ●溶酶体膜中嵌有质子运输泵(H+-AT P a s e),将H+泵入溶酶体内,使溶酶体中的H+浓度比细胞质中高;同时,在溶酶体膜上有C l-离子通道蛋白,可向溶酶体中运输C l-离子,两种运输蛋白作用的结果,就等于向溶酶体中运输了H C l,以此维持溶酶体内部的酸性环境(p H约为4、6～4、8)。 ●溶酶体膜含有各种不同酸性的、高度糖基化膜整合蛋白,这些膜整合蛋白的功能可能就是保护溶酶体的膜免遭溶酶体内酶的攻击,有利于防止自身膜蛋白的降解。 ●溶酶体膜含有较高的胆固醇,促进了膜结构的稳定。 9、4、2溶酶体的发现与溶酶体的酶类 溶酶体内含有50多种酶类,这些酶的最适p H值就是5、0,故均为酸性水解酶(a c i d h yd r o l a s e s)。图9-37就是典型的溶酶体的大小、所含主要酶类及膜中的V-型质子泵等。 酸性磷酸酶就是溶酶体的标志酶,正就是对这种酶的细胞定位研究导致溶酶体的发现。
姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验题目】 小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3. 材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。 活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线
1．检验目的 指导瑞氏染色的操作，进行各种涂片的分类。 2．方法原理 瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。各种细胞成分化学性质 不同，对刘氏染液（改良的瑞氏染液）中酸性染料曙红和碱性染料亚甲蓝的亲和力也不 一样，标本涂片经过刘氏染液染色后，各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态、特征的目的。 3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特异性） 3.1染色速度快，效果好。 3.2仅供形态学初学者初检观察染色使用。 3.3是临床最常用的染色技术之一，用于细胞分类、寄生虫检出及分类。 4．标本类型（如血浆、血清、尿液等） 4.1血细胞涂片、脱落细胞学标本（脑脊液、胸腹水等）。 4.2标本采集后要及时制片，以免时间久细胞形态发生退化改变。 5．要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统 5.1试剂组分： 5.2试剂存储和有效期： 6．校准程序（计量学溯源性）
7．质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施 8．程序步骤 8.1标准方法： 8.1.1加刘A（0.5-0.8ml）染色30S。 8.1.2再将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。以洗耳球轻吹，让两液充分 混合，染色1min。 8.1.3水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。 8.2快速染色，适用于脱落细胞学标本： 8.2.1加刘A（0.5-0.8ml）后，立即将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。以 洗耳球轻吹，让两液充分混合，染色10-20S。 8.2.2水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。 9．计算结果原理 10．生物参考区间 11．警告值、危急值（适用时） 12．检验结果可报告区间 12.1红细胞呈淡红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染 紫红色，核染色质结构清楚。 12.2脱落细胞学标本如脑脊液、胸腹水沉渣涂片，因其细胞通透性较高，应行快速染色 如染色偏深，无法辨识核结构，应适当缩短染色时间，以免误判。 13．对超出可报告范围的结果的处理 14．实验室解释 15．安全防护措施 所有标本按具有潜在传染性的标本处理。 16．最常见的误差源。 17．方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等） 18．参考文献 18.1全国临床检验操作规程-第三版 18.2《刘氏染液厂家说明书》 19．有关引用程序与文件 20．SOP涉及的记录与表格
实验四线粒体的活体染色 实验目的： 1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。 2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。 3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 实验原理： 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 实验用品： 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。 三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。 实验内容和方法： 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）方法 1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。 2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。 3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。染色期间翻动组织块几次，使其各表面均有机会接触空气和染液。 4. 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，去除大组织块，就会
9.4溶酶体(l y s o s o me) 溶酶体是动物细胞中一种膜结合细胞器,含有多种水解酶类,在细胞内起消化和保护作用,可与吞噬泡或胞饮泡结合,消化和利用其中的物质。也可以消化自身细胞破损的细胞器或残片,有利于细胞器的重新组装、成分的更新及废物的消除。 9.4.1溶酶体的形态结构 ■溶酶体的形态 溶酶体是一种异质性(h e t e r o g e n e o u s)的细胞器,不同来源的溶酶体形态、大小,甚至所含有酶的种类都有很大的不同。溶酶体呈小球状,大小变化很大，直径一般0.25～0.8μm，最大的可超过1μm,最小的直径只有25～50n m。图9-36是肝组织的K u p p e r细胞(肝星形细胞)中不同大小的溶酶体,该细胞主要是吞噬衰老的红细胞。
图9-36溶酶体的形态大小 具吞噬作用的肝K u p p e r细胞中不同大小的溶酶体,图中示出至少10个不同大 小的溶酶体。 ■溶酶体膜的稳定性 溶酶体的外被是一层单位膜,内部没有任何特殊的结构。由于溶酶体中含有各种不同的水解酶类,所以溶酶体在生活细胞中必须是高度稳定的。溶酶体的稳定性与其膜的结构组成有关： ●溶酶体膜中嵌有质子运输泵(H+-AT P a s e),将H+泵入溶酶体内,使溶酶体中的H+浓度比细胞质中高；同时,在溶酶体膜上有C l-离子通道蛋白，可向溶酶体中运输C l-离子,两种运输蛋白作用的结果，就等于向溶酶体中运输了H C l,以此维持溶酶体内部的酸性环境(p H约为 4.6～4.8)。 ●溶酶体膜含有各种不同酸性的、高度糖基化膜整合蛋白,这些膜整合蛋白的功能可能是保护溶酶体的膜免遭溶酶体内酶的攻击,有利于防止自身膜蛋白的降解。 ●溶酶体膜含有较高的胆固醇,促进了膜结构的稳定。 9.4.2溶酶体的发现与溶酶体的酶类 溶酶体内含有50多种酶类,这些酶的最适p H值是5.0,故均为酸性水解酶(a c i d h yd r o l a s e s)。图9-37是典型的溶酶体的大小、所含主要酶类及膜中的V-型质子泵等。 酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶，正是对这种酶的细胞定位研究导致溶酶体的发现。
瑞氏-姬姆萨复合染色液使用说明 货号：G3990 保存：室温避光保存，有效期至少2年。 产品内容： 2×100ml2×500ml Storage 试剂(A):Wright-Giemsa Stain100ml500ml RT避光试剂(B):磷酸盐缓冲液100ml500ml RT 产品说明： 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。 Wright-Giemsa Stain以进口瑞氏色素和姬姆萨色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。染液中加中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。该染液的特点：由瑞氏-姆姆萨复合染色液和磷酸盐缓冲液组成，等量混合使用或分别处理标本使用。 使用方法(仅供参考)： 1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。 2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。
3、滴加适量Wright-Giemsa Stain覆盖涂片，室温染色1～2min。 4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷 酸盐缓冲液不Wright-Giemsa Stain混匀，室温静置3～10min。 5、步骤3、4亦可以采用如下方法:取Wright-Giemsa Stain和磷酸盐缓冲 液等量混合，即为Wright-Giemsa工作液，滴加该工作液于血液涂片或骨髓涂片上，室温静置3～10min。 6、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。(注:也可用磷酸盐缓冲液等量 稀释后，冲洗玻片，时间控制在30s左右。） 7、干燥。镜检:先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。 染色结果： 细菌、细胞核蓝色 组织细胞的细胞质、血红蛋白、嗜酸性颗粒粉红或橘红色 注意事项： 1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色效果。 2、涂片染色中，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液，以免染料 沉着于涂片上。 3、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。 4、染色过深可用甲醇或乙醇适当脱色，最好不复染。 5、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液浓度。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
线粒体(Mitochondrion)的活体染色 及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 【实验用品】 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。 三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。 【实验内容】 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）原理 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 （二）方法 用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。 将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 (三)结果 显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。 二、线粒体的光镜切片观察 用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 三．线粒体的电镜照片观察 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
实验三 1实验目的与原理 1.1实验目的： 观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；掌握一些细胞活体染色的原理和技术。 1.2实验原理： 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 2实验材料与方法 2.1实验材料： 洋葱鳞茎内表皮 2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色： 撕取洋葱鳞茎内表皮→中性红溶液染色5~10min→吸去染液，滴加Ringer液→盖上载玻片，显微镜观察。 2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→詹纳斯绿B溶液染色10min→吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。 3实验结果 图1中性红染色洋葱内表皮细胞图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮(X100) (X100) 在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边 图2是经詹纳斯绿B染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。
瑞氏染色液说明书 【产品名称】 瑞氏染色液 【包装规格】 货号：DM0005 单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。 【预期用途】 主要用于对血细胞进行染色。 【检验原理】 瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(MethyleneBlue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇 2、磷酸盐缓冲液磷酸盐
【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。 2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。 3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。 4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。 【检验方法】 1、滴加瑞氏染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色； 2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色； 3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上； 4、干燥、镜检。 【检验方法的局限性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】
瑞氏-吉姆萨染色液说明书 【产品名称】 瑞氏-吉姆萨染色液 【包装规格】 货号：DM0007 单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、 2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。【预期用途】 主要用于对血细胞进行染色 【检验原理】 瑞氏染料是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用；吉姆萨染料由天青Ⅱ与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，吉姆萨染色对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深，核结构显色不佳，常与瑞氏染色联合使用。 瑞氏-吉姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成的，细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用，各种细胞及相关成分由于其化学性质不同，对瑞氏-吉姆萨染色液中的酸性染料(伊红)和碱性染料(亚甲蓝)的亲和力也不一样，标本涂片经瑞氏-吉姆萨染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、瑞氏-吉姆萨染液瑞氏染料、吉姆萨染料、甲醇 2、磷酸盐缓冲液磷酸盐 【储存条件及有效期】 5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。 2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。 3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。 4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。 【检验方法】 1、滴加瑞氏-吉姆萨染液于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片，染色； 2、将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏-吉姆萨染液上面，以嘴或洗耳球使两液充分混合，染色； 3、水洗，冲洗时不能先倒掉染色液，可缓慢从玻片一端冲洗，以防有沉渣沉淀在标本上； 4、干燥、镜检。 【检验方法的局限性】 仅供形态学初检观察染色使用。 【注意事项】
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60 JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究 Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。密封干燥保存。S24/25 小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双
淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法) 简介： 淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。 Leagene 淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。该染色法性能稳定，是非常经典的淀粉样物质染色的方法。 组成： 自备材料： 1、10%中性福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、常规固定，常采用中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度，常规脱蜡至水。 3、入Bennhold 苏木素，浸染。 4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗后镜下控制至恰当程度。 编号 名称 DG0021 5×50ml Storage 试剂(A): Bennhold 苏木素染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT 试剂(C): Scott 蓝化液 50ml RT 试剂(D): 刚果红染色液 50ml RT 避光 使用说明书 1份
细胞生物学试题 一、填空题（20分） 1 、细胞是___的基本单位，是____的基本单位，是____的基本单位，是____的 基本单位。 2、目前发现的最小最简单的细胞是____。 3、分辨率是指显微镜能够分辩____。 4、生物膜的基本特征是____。 5、膜蛋白可以分为____和____ 6、物质跨膜运输的主要途径是____。 7、按照所含的核酸类型，病毒可以分为____。 8、信号假说中，要完成含信号肽的蛋白质从细胞质中向内质网的转移需要细胞质中的____和内质网膜上的____的参与协助。 9、被称为细胞内的消化器官的细胞器是。 10、在内质网上继续合成的蛋白中如果存在____序列，则该蛋白将被定位到细胞膜上。 11、细胞内膜上的呼吸链主要可以分为两类，既____和____。 12、体外实验表明，MF正极与负极都能生长，生长快的一端为____，慢的一端为。 13、微丝在体内的排列方式主要有____、____和____。 14、真核细胞中，大分子的跨膜运输是通过____和____来完成的。 15、蛋白质的糖基化修饰主要分为____，和____。 16、具有将蛋白进行修饰、分选并分泌到细胞外的细胞器是____。 17、蛋白质的糖基化修饰主要分为____，指的是蛋白质上的____与____直接连接，和____，指的是蛋白质上的____与____直接连接。 18、真核细胞中，_____是合成脂类分子的细胞器。 19、内质网的标志酶是____。 20、70S核糖体可以分为____，80S核糖体可以分为____。 二、名词解释（20分) 1、细胞生物学cell biology 2、分子细胞生物学molecular cell biology 3、质粒 4、类病毒 5、糙面内质网 6、半自主性细胞器 7、核小体 8、端粒 9、细胞骨架 10、踏车现象 三、选择题(20分） 1、对细胞的概念，近年来比较普遍的提法是：有机体的（）
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察 学时数：3 一、实验目的和要求: 1.观察动、植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布。 2.学习一些细胞器的超活染色技术。 二、实验原理 超活染色又称体外染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 詹娜斯绿B是一种弱碱性染料，可以被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化成蓝绿色，而细胞的其他部位因为不含有细胞色素氧化酶，无法将詹纳斯绿B氧化，呈现无色。 中性红是一种毒性最低的活体染色剂，是液泡系的专一染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。（在pH发生变化的条件下，中性红还具有转变颜色的特性：pH7.0~7.2 红色；pH7.2~7.6 橙色；pH7.6~8.0 黄色。PH不同表明液泡中酶原颗粒的成熟度的不同，完全成熟的酶原颗粒为乳白色，不再为中性红着色）。 三、实验材料：小麦根尖 四、实验步骤 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 1.取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。 2.实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色30min（注意不可使染液干燥，必要时可加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 3.在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 1.用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，