专题5 DNA 和蛋白质技术
课题1 DNA 的粗提取与鉴定
【学习目标】
1．知道DNA 的物理化学性质，尤其是DNA 的溶解性；
2．简述二苯胺法鉴定DNA 的方法和原理。
3．知道DNA 提取与鉴定实验操作过程
4．关注实验过程的注意事项，学会实验结果的分析与评价，培养学生的综合分析问题的能力
【重点与难点】
重点：DNA 提取与鉴定的原理
难点：实验过程的注意事项、结果的分析与评价
【知识链接】
1. DNA 存在于细胞的哪些部位？
2．提取生物大分子的一般思路是什么？
【自主学习内容一】DNA 的粗提取与鉴定的原理
1．DNA 粗提取的原理（结合右下方图形分析）
②DNA 粗提取的原理有些哪些？
ⅰ、
ⅱ、
2、DNA 鉴定的原理：
【自主学习内容二】DNA 粗提取的主要步骤 1、材料选择：
（1）适于作实验的材料：DNA 含量 ；动物材料比植物材料好；由于哺乳动物红细
胞中 ，因此不能作为提取DNA 的材料；
（2）鸡（红）血适宜作为实验材料的原因：①鸡血（红）细胞核 ；
② ；③ 。
▲若用动物肝脏等组织为材料，则需要研磨、匀浆和离心或过滤 ，对设备要求较高，操
作烦琐；若以植物组织（如菜花，又称花椰菜）为材料，则需要研磨并加入 、离心
或过滤，以破坏细胞膜。
▲实验材料——鸡血细胞液的提取：向新鲜鸡血液中加入抗凝固剂—— ，并
搅匀，使血液与柠檬酸钠混合，置于低温下静置1d 或离心；结果：血液分层：上层为淡黄色
液体，是 ，下层为红色深沉物，是 。
2、主要实验步骤（以鸡血红细胞为例）：
【合作探究】
1．本实验中几次过滤？过滤的目的是什么？
2. 本实验中几次加入蒸馏水？目的各是什么？
①破碎细胞，释放DNA （核物质） 方法：将5～10mL 鸡血细胞液加入20mL 中；用玻棒搅拌5min ；用3～4纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；收集 目的：破坏细胞，释放核物质 注意：搅拌不能用力过大，以防止打碎DNA 分子； DNA 存在：多数与蛋白质结合，存在于滤液中 ②溶解细胞核
内DNA
方法：向滤液中加入物质的量浓度为 NaCl 溶液，搅拌1min ；过滤获取 目的：使与DNA 结合的核蛋白解聚，释放出DNA ；DNA 溶解于高溶液NaCl 溶液中 注意：按同一方向搅拌 ③DNA 析出 方法：沿烧杯壁向滤液中缓慢加入 ，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA 析出，直到丝状物不再增加；可以在玻棒上收集到黏稠物 目的：降低NaCl 溶液浓度达到0.14mol/L 左右，使DNA 析出 注意：加入的蒸馏水不能过多，使NaCl 溶液浓度过低，DNA 又会重新溶解 黏稠物：丝状、略带黄色（DNA 分子上附着有少量蛋白质） ④DNA 的初步纯化 方法：向 2mol/LNaCl 溶液20mL 中加入黏稠物，并按同一方向搅拌3min ，使DNA 充分溶解；过滤，收集滤液；向滤液中贴壁缓慢加入50mL ，并用玻棒按同一方向缓慢、均匀地搅拌，在玻棒上收集白色丝状物（DNA ） 原理：
4. 分析教材中方案一、二、三的原理
方案一：
方案二：
方案三：；【自主学习内容三】DNA的鉴定
1、方法：①取甲、乙两支试管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；②向甲试管中加入粗提取的DNA，并搅拌使DNA溶解；③向两支试管中各加入4mL（等量）二苯胺试剂，混匀，沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管的颜色（蓝色）变化。
2、注意点：实验中需要对照，目的：证明
【合作探究】实验结果分析与评价
1、实验结果评价：是否提取到DNA？
2、粗提取得到的丝状物为什么略带黄色？
3、影响丝状物总量的因素有哪些？
【学习反思】
一、选择题
1．DNA粗提取的实验中，先后两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是
A稀释血液；冲洗样品B使血细胞破裂；降低NaCl浓度，使DNA析出
C使血细胞破裂；增大DNA溶解量 D使血细胞破裂；提取含杂质较少的DNA
2．NaCl的物质量为多少mol/L时，DNA的溶解度最小
A．0.12 B．0.13 C．0.14 D．0.15
3．在提取的细胞核物质的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是
A．溶解杂质 B．溶解蛋白质
C．析出DNA D．溶解DNA
4．从细胞核中提取DNA所用的提取溶液是
A．NaCl溶液 B．酒精
C．蒸馏水 D．柠檬酸钠
5．提取含杂质较少的DNA所用的溶液
A．NaCl溶液 B．冷却90%的酒精
C．加热95%的酒精 D．冷却95%的酒精
6．DNA遇二苯胺（沸水浴）时，会染成
A．砖红色 B．红色 C．紫色 D．蓝色
7.（2005年广东高考题）破译生物基因组DNA的遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核DNA。下列不适宜作为DNA提取的实验材料是
A．鸡血细胞B．蛙的红细胞
C．人的成熟红细胞 D．菜花
8．填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。
⑴提取鸡血细胞中核物质⑵溶解核内DNA：
⑶析出2mol/LNaCl溶液中的DNA ⑷DNA粘稠物的再溶解
⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物⑹DNA的鉴定
9.关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：
⑴鸡血细胞中红细胞，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞数目较多，可以提供丰富的。
⑵实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是。
⑶生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为这些动物和人一样，成熟的红细胞中若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为。
⑷若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞更易分离。
《DNA 的粗提取与鉴定》实验教学设计
1)、DNA 在NaCl 溶液中的溶解度，是随着NaCl 的浓度的变化而改变的。当NaCl 的物质的量浓度为0.14 mol／L 时,DNA 的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl 溶液中的DNA 析出。 2)、DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 鉴定DNA 的原理： DNA 遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。 2、实验过程：师生共同学习 以鸡血为实验材料进行DNA 的粗提取 鸡血细胞做实验材料的原因 ①鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 ①柠檬酸钠作用及作用机理 防止血液凝固。 柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液就不会凝固 ②注意事项 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA 的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 讨论：提取鸡血中的DNA 时，为什么除去血液中的上清液？ 答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆 3、过程（结合导学案边做边学） ①提取鸡血细胞的细胞核物质 ②溶解细胞核内的DNA 【合作释疑一】 （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？ 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破 （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA （3）滤去的是什么物质？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
DNA的粗提取与鉴定 一、选择题共15小题。 1．有时候，由于实验材料用品所限而需要设法替代。下列各项中正确的是（） A. 做植物细胞有丝分裂实验时，可用蒜叶代替洋葱 B. 做植物细胞质壁分离和复原实验时，可用30%的食盐溶液代替30%的蔗糖溶液 C. 做叶绿体色素提取和分离实验时，可用乙醇代替丙酮 D. 做DNA粗提取与鉴定实验时，可用新鲜猪血代替鸡血 2．在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 A．稀释血液，冲洗样品B．使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C．使血细胞破裂、增大DNA溶解量D．使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 3、下列操作中，对DNA 的提取量影响较小的是 A ．使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA 等核物质 B ．搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C ．在析出DNA 黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加 D ．在用酒精沉淀DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却 4．在实验中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是 ①DNA在NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时溶解度最低②DNA在冷却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出 A．两次都是①B．两次都是② C．第一次是①，第二次是②D．第一次是②，第二次是① 5．向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是 A．加快溶解DNA的速度B．加快溶解杂质的速度 C．减少DNA的溶解度，加快DNA析出D．减少杂质的溶解度，加快杂质的析出6．对三次过滤的叙述中，不正确的是 A．第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中 B．第二次过滤后，使用多层纱布，DNA存在于纱布上的黏稠物中 C．第三次过滤后，DNA存在于滤液中，可进一步除去非DNA物质 D．上述B、C均正确 9．在此实验中，具有和蛋白水解酶相似作用的物质是 A．蒸馏水B．NaCl溶液C．NaOH溶液D．盐酸10、在DNA提取实验中有三次过滤： （１）过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液（２）过滤含粘稠物的0.14mol/LＮaCl溶液（３）过滤溶解有ＤＮＡ的２mol/LＮaCl溶液以上三次过滤分别为了获得 Ａ、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含ＤＮＡ的滤液 Ｂ、含核物质的滤液、滤液中ＤＮＡ粘稠物、含ＤＮＡ的滤液 Ｃ、含核物质的滤液、滤液中ＤＮＡ粘稠物、纱布上的ＤＮＡ Ｄ、含较纯的ＤＮＡ滤液、纱布上的粘稠物、含ＤＮＡ的滤液 11 ．在“DNA 的粗提取实验”中，有两次DNA 的沉淀析出，其依据的原理是 ①DNA 在物质的量浓度为0 . 14mol / L 的氯化钠中的溶解度最低 ②DNA 在冷却的体积分数为95 ％的酒精中能沉淀析出 A ．两次都是① B ．第一次是①，第二次是② C．两次都是② D ．第一次是②，第二次是① 12. DNA 的粗提取和鉴定实验，与下列哪项原理无关 A . DNA 在0.14mol / L NaCl 溶液中的溶解度最低 B . DNA 易被龙胆紫染成紫色 C ．在DNA 溶液中加入二苯胺，加热后产生蓝色 D ．加入95 ％的冷酒精，DNA 会从溶液中析出
实验DNA的粗提取与鉴定 目的要求 1.了解实验原理。 2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。 3．通过本实验培养实验操作能力和观察能力。 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 注意事项 1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。 2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。 实验用具 鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100mL，1个，50mL，500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。 课时安排一课时 课前准备 制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180mL），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。（也可以用离心机离心2 min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。 板书（提前写好） DNA的粗提取与鉴定
【课题】：课题5 DNA的粗提取与鉴定【主备人】：苗贤举 【备课时间】： 3月10日【审核人】：宋利刚 【复习目标】 本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 【复习重点与难点】 复习重点：DNA的粗提取和鉴定方法。 复习难点：DNA的粗提取和鉴定方法。 【知识回顾】一、实验原理 1、提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 1）DNA的溶解性 思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ 思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？ 2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。 3）DNA的鉴定 思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？ 在条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。 二、实验设计 1、实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料： 鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 1）制备和提取细胞核物质：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例。 在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，得到鸡血细胞液。过滤后收集研磨液； 如果实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和，进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。 思考：①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ ③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 2）溶解细胞核的DNA： 向收集的滤液中加入的溶液，搅拌使DNA呈溶解状态。 3、去除滤液中的杂质 方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。 思考： ①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ ②方案二与方案三的原理有什么不同？
实验十一 DNA 的粗提取与鉴定 教学目的 1． 初步掌握DNA 粗提取和鉴定的方法。 2． 观察提取出来的DNA 物质。 实验原理 1． DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是随NaCl 的浓度变化而改变的。DNA 在0．14mol/L 的NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl 溶液中的DNA 析出。 2． DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA 。 3． DNA ＋二苯胺??→?沸水浴蓝色（用于DNA 的鉴定） 实验步骤 1．材料制备 0.1G/ml 柠檬酸钠100ml 500ml 烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min 离心2min →吸去上清液→ 活鸡血180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀） 2．方法步骤 取血细胞液5-10ml ＋20ml 蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌 （1）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含DNA 和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂 （2）溶解核内DNA ：滤液＋2mol/L NaCl 溶液40ml ，玻璃棒沿一个方向搅拌 （3）析出含DNA 的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl 溶液相当于稀释到0．14mol/L ） （4）滤取含DNA 的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA 的粘稠物留在纱布上 （5）（纱布上的）DNA 粘稠物再溶解： 20ml2mol/L NaCl 溶液 50ml 烧杯， 上述粘稠物 缓慢搅拌3 min （6）过滤含DNA 的2mol/L NaCl 溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA （7）提取含杂质较少的DNA ：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。 （8）DNA 鉴定： 实验关键： 本实验成功的关键是获取较纯净的DNA ，因此应注意： 1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA 存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA 2．沉淀DNA 必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小时。 3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌
DNA 的粗提取与鉴定 实验目标 初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。 实验原理 DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氧化钠的物质的量浓度为0. 14 ml/L时DNA的容解度最低。利用这原理，可以使溶解在氧化钠溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原 理,可以进步提取出含杂质较少的DNA。 DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验器具 鸡血细胞液(5~ 10 mL)。 铁架台、铁环、镊子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒(100 mL,1个)、烧杯(100 mL,1个;50mL,500 mL各2个)、试管(20 mL,2个)、漏斗试管夹、纱布。 体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)蒸馏水、质量浓度为 0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂。 实验探究与过程 实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成),制备的方法是:取质量依度为0.1gml 的柠檬酸钠济液(抗凝剂)100 ml,置于500 ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血(约 180mt)注人烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒人离心管内,用1000 r/min(转每分)的离心机离心2 min,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时,用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。(如果没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置天,使血细胞自行沉淀。) 1.提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液5~10 mL,注人到50 ml,烧杯中。向烧杯中加人燕馏水探 20 m,同时用坡璃棒沿一个方向快速搅拌5 min ，使血细胞加速破裂。然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过德至500ml,的烧杯中,取其滤液。 2.溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液40 mL加人到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1 min, 使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。 3.析出含DNA的黏稠物
DNA的粗提取与鉴定 （2012江苏）18. 下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是（） A. 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度 B. 将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C. 常温下菜花匀浆中有些酶类会影响 DNA 的提取 D. 用玻棒缓慢搅拌滤液会导致 DNA 获得量减少 【答案】C 【解析】洗涤剂能够瓦解细胞膜，但不能增加DNA的溶解度，A错；将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝，不需要冷却，B错；常温下菜花匀浆中有些酶类可破坏DNA，而影响DNA的提取，C正确；用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量，而在粗提取时，缓慢撑拌有利于DNA附着，D错【试题点评】本题主要是对实验内容的考查，主要是涉及“DNA 粗提取与鉴定实验”这一实验中的原理、方法和操作步骤等内容。属于实验考查中比较基础的内容。 （2011江苏）19．在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 【答案】B （2010江苏）32．(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0 g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于—20℃条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤．取滤液备用。 第二步：先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液，再加人20 mL体积分数为95％的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol／L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。
ＤＮA的粗提取与鉴定实验 一、实验原理 ①DNA主要存在于细胞核 ②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为０.１4mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA 析出。 ③DNＡ不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的ＤＮＡ。 ⑷ＤNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DＮA的试剂。 二、实验材料和用具 鸡血细胞液(５~10ｍl）;体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24ｈ）;蒸馏水；质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mｏｌ/L 的氯化纳溶液(新教材不要求0、015的浓度了，都是用的2mｏｌ/Ｌ)；二苯胺试剂;铁架台;镊子;水浴锅;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒（１0０ml,一个）；烧杯；(1０0０ｍl，一个，５0ml、100 mｌ、500ｍl各二个）;试管(20ｍｌ,二个）;漏斗;试管夹;纱布。 三、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为０．1g／ｍl的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）1０0ml,置于5００ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约180ｍｌ）,同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。(也可以将血液倒入离心管内,用100０r/min(转每分)的离心机离心2miｎ,血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。 四、方法步骤 ①提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液５mL～10mL,注入到５0 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20ｍL，同时用玻璃棒充分搅拌5 ｍin，使血细胞加速破裂。然后，用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1０0０mＬ。取其滤液。 ②溶解细胞核内的ＤNA 将氯化钠的物质的量浓度为２mol/L的溶液40ｍL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀,这时DＮA在溶液中呈溶解状态。
【实验】DNA的粗提取与鉴定 一、实验原理 1.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的不同而不同。当NaCl的浓度为0．14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的其他许多物质溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性。上述两种方法均可用于鉴定DNA的存在。 二、材料用具 鸡血细胞液；铁架台，铁环，镊子，三脚架，酒精灯，石棉网，载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（100mL，1个），烧杯（100mL，1个，50mL、500mL各2个），试管（20mL，2个），漏斗，试管夹，纱布；体积分数为95%的酒精溶液（实验前置于冰箱内24h），蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L 和0.015mol/L的氯化钠溶液，二苯胺试剂 1.从鸡血细胞核中提取的物质是DNA吗？ 在鸡血细胞中加入蒸馏水，并且搅拌，利用渗透作用原理使鸡血细胞破裂，搅拌进一步促进了鸡血细胞的破裂，于是释放出其中的DNA，当然也有少量的RNA，还的蛋白质。因此，释放出的物质是DNA、RNA和蛋白质的混合物，不仅仅只有DNA。 2.怎样提高血细胞因低渗而破裂的效率？ 血细胞的细胞膜对低渗溶液有一定的抵抗能力，这称为渗透脆性。一般而言，血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于极度的低渗环境之中，细胞因大量失水而致最终破裂并释放出胞内物（包括细胞核）。为促进细胞在低渗条件下破裂，可以辅以快速而有力的搅拌，使之受机械震荡而更易破裂。
DNA的粗提取与鉴定实验 一、教学背景分析 【教材分析】 生物体的性状之所以能够遗传给后代，是由于生物体内具有DNA或RNA这些遗传物质。通过必修2《遗传与进化》的学习，学生已经学习了证明DNA是主要的遗传物质的实验证据。那么DNA究竟是什么样的呢？本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理，使学生对DNA有一定的感性认识。 “DNA的粗提取与鉴定实验”在《普通高中生物课程标准》和《考试大纲》对实验内容考查的要求中属D级要求，新课标强调能力培养，高考对实验能力的考核比重也逐年加大。学生通过本次实验探究活动，可进一步提高动手能力和创新能力。 【学情分析】 通过必修2《遗传与进化》的学习，学生已经了解了证明DNA是主要的遗传物质的实验证据，知道生物体的形状之所以能够遗传给后代，是由于生物体内具有DNA或RNA这些遗传物质。通过本课题的学习，使学生对DNA有一定的感性认识。 二、教学目标 【知识目标】 本实验通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取方法以及DNA鉴定的原理内容。 【能力目标】 1.实验中能运用已有的知识，选择实验材料用具； 2.通过具体的材料，学生尝试课题研究，体验科学探究的一般过程。 3.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 4.在对实验原理、步骤的理解和分析过程中发展学生的科学思维。 5.熟悉粗提取生物大分子的的一般性方法 【情感态度与价值观目标】 1.通过小组之间的分工合作，逐渐养成协作精神； 2.通过科学与数学的整合，逐渐形成简约、严谨的思维品质；
课题1DNA的粗提取与鉴定 教材内容解读 要点1提取DNA的方法 （1）分离 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 （2）DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl的浓度变化，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，在0.14mol/L的NaCl溶液中DNA会析出。 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步分离。 （3）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 （4）DNA的鉴定 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。要点2实验设计 （1）实验材料的选取 选用DNA含量相对较高的生物组织，如鸡血。 （2）破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 植物细胞需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 （3）去除滤液中的杂质 方法有三种： ①在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 ②直接在滤液中加入嫩肉粉反应10～15分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白质酶能够分解蛋白质。 ③将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟。 （4）DNA的析出与鉴定 ①析出较纯净的DNA 将处理后的溶液过滤，加入与溶液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置2～3分钟，溶液中会出现白色丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。 ②DNA的鉴定 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5分钟，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。溶解有DNA的溶液变蓝。 要点3实验案例 案例一以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取
生物笔记-dna的粗提取与鉴定 本卷须知 1.答题前，考生先将自己的姓名、准考证号填写清楚，将条形码准确粘贴在考生信 息条形码粘贴区。 2、选择题必须使用2B铅笔填涂；非选择题必须使用0.5毫米黑色字迹的签字笔书写，字体工整、笔迹清楚。 3、请按照题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效； 在草稿纸、试题卷上答题无效。 4、保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸 刀。 【一】提取DNA的原理 利用DNA与RNA、DNA与蛋白质、DNA与脂质物理化学性质的差异提取DNA ①0.14MOL／L的NACL溶液：DNA的溶解度最小，使DNA析出。 ②冷95％乙醇：DNA不溶于酒精，可以用于提取出含杂质较少的DNA。 ③洗涤剂：能溶解细胞膜，有利于细胞内DNA的释放，并且不会破坏DNA结构〔用 于植物细胞〕 ④二苯胺：在沸水浴中，DNA遇二苯胺变成蓝色〔鉴定原理〕 【二】实验材料的选择 选用DNA含量较高的生物材料〔如：鸡血〕 补充：向血液中添加柠檬酸纳防止血液凝固 【三】方法步骤 1、获取含DNA的滤液〔动物只用蒸馏水，植物用洗涤剂〕 5ML鸡血细胞液＋10ML蒸馏水，搅拌过滤，收集滤液 2、除去不溶性杂质 滤液中加入2MOL／L的NACL溶液，再加入蒸馏水，稀释至0.14MOL／L，过滤得到 黏稠物 3、DNA的析出 将黏稠物转移到2MOL／L的NACL溶液中，加冷酒精〔体积分数95％〕，析出黏稠物 〔即为粗提取的DNA〕 4、DNA的鉴定 流程：取鸡血鸡血细胞滤液黏稠物 过滤+蒸馏水，过滤+95%冷酒精白色黏稠物 【四】蛋白质分离方法 蛋白质分离的常用方法：凝胶色谱法、电泳法 凝胶色谱法分离原理：相对分子质量大小〔分子质量越大，迁移速率越大〕 电泳法分离原理：带电性质的差异，分子本身的大小和形状