反相高效液相色谱法同时测定小根蒜中
尿苷、鸟苷和腺苷
刘红，陈燕芹，邓峰，贾娇
（毕节学院化学与化学工程学院，贵州省应用化学特色重点实验室，贵州毕节 551700) 摘要：建立同时测定小根蒜中尿苷、鸟苷和腺苷含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）梯度洗脱法。采用ZORBAX-SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；以水-甲醇为流动相，梯度洗脱，流速为0.6 mL/min，柱温为25 ℃；检测波长：260 nm。尿苷在0.0784~0.784 μg范围内线性关系良好, 线性相关系数r=0.9995；鸟苷在0.0798~0.798 μg范围内线性关系良好，线性相关系数r=0.9995；腺苷在0.0852~0.852 μg范围内线性关系良好，线性相关系数r=0.9994。该法操作简便，方法可靠，重现性好，可以作为小根蒜的质量控制方法之一。
关键词：高效液相色谱法；小根蒜；尿苷；鸟苷；腺苷
文章篇号：1673-9078(2013)5-1128-1130
Determination of Uridine, Guanosine and Adenosine Contents in
Allium Macrostemon Bunge by RP-HPLC
LIU Hong, CHEN Yan-qin, DENG Feng, JIA Jiao
(School of Chemistry and Chemical Engineering, Bijie University, Key Laboratory on applied Chemistry, Bijie 551700,
China)
Abstract: A new method for determination of uridine, guanosine and adenosine contents in Allium macrostemon bunge were established by using RP-HPLC gradient elution. The extracts were separated on a ZORBAX-SB-C18 analytical column (4.60 mm×250 mm, 5 μm) with CH3OH-H2O as mobile phase at 260 nm. The flow rate was 0.6 mL·min- 1and the column temperature was 25 ℃. The linear ranges of uridine,guanosine and adenosine were 0.0784~0.784 μg（r=0.9995）, 0.0798~0.798 μg（r=0.9995）and 0.0852~0.852 μg (r=0.9994), respectively. This method showed high reproducibility and can be used for quality control of the Allium macrostemon bunge.
Key words: HPLC; allium macrostemon bunge ; uridine; guanosine; adenosin
小根蒜又名苦蒜、野蒜、山蒜等，属于百合科多年生草本植物。味辛微苦，性温，是食用地下鳞茎及嫩茎叶的野生蔬菜，分布广泛，营养价值丰富，具有抑菌防腐作用，并且具有保健和食疗效用，属药食同源植物[1~2]，有较大的药用和市场开发价值。其干燥鳞茎是中药薤白的药用来源之一[3]，薤白具有通阳散结、行气导滞的功效，主要用于胸痹疼痛、痰饮咳喘和泄痢后重[4]。现代药理研究[5]表明小根蒜含有抗菌活性物质，具有抗菌消炎、降压利尿、抗癌、抗血栓、抗动脉硬化等作用。同时小根蒜又是餐桌上的美味佳肴，通常炒食或腌制吃。
收稿日期：2013-01-14
基金项目：贵州省科技创新人才团队项目(合同号：黔科合人才团队（2010）4011号)
作者简介：刘红（1980-），男，硕士，副教授，主要从事光谱及色谱分析的教学及科研工作
目前，学者们对小根蒜的生物学特征、营养价值及其医疗保健功效等方面都做了一定的研究，并取得了不错的结果[6]。但是尚未见文献对小根蒜中鸟苷、尿苷、腺苷等核苷类化合物同时进行分析测定。据报道腺苷可以改善心脑血液循环，防止心率失常，抑制神经递质释放和调节酸环化酶活性等[7]，鸟苷等核苷类成分能够干扰病毒核酸的合成，常常是中成药抗病毒的活性成分[8]。本文采用反相液相色谱法[9]同时检测小根蒜中鸟苷、尿苷、腺苷的含量，操作简便，方法可靠，重现性好，可以作为小根蒜的质量控制方法之一。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260 高效液相色谱系统（包括VL型二级管阵列检测器、VL型二元泵、自动进样器、液相
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色谱工作站）；AUY220电子分析天平，日本岛津；MDS-10微波消解萃取工作站，上海新仪；UPT-II-40L 超纯水机，成都超纯水有限公司；SG5200HPT超声波清洗器，上海冠特超声仪器有限公司；SHB-III循环水真空泵，郑州长城科工贸公司。
鸟苷（含量≥98%）对照品购于中国药品生物制品检定所，腺苷(含量≥98%)对照品为sigma试剂，尿苷(含量≥99%)对照品为sigma试剂。流动相用水为超纯水经0.45 μm膜过滤；甲醇为色谱纯，小根蒜购于贵州毕节市场。
1.2 色谱分析条件
色谱柱：ZORBAX-SB- C18 色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流速为0.6 mL·min-1；检测波长：260 nm，柱温：室温25 ℃。流动相及梯度：A为超纯水，B为甲醇；0~10 min，95% A~82% A；10~15 min，82% A~80% A；15~20 min，80% A~60% A。
1.3 对照品、供试品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的鸟苷、腺苷、尿苷对照品适量，配成含腺苷42.6 mg/L、鸟苷39.9 mg/L、尿苷39.2 mg/L的混合对照品溶液。
准确称取0.5 g粉碎均匀的试样（精确到0.0001 g）于50 mL锥形瓶中，加入超纯水25 mL，称重，于25 ℃下超声提取30 min，取出，用超纯水补足减失重量，过0.45 μm滤膜，取续滤液供测定用。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
选择高灵敏度的检测波长可以提高分析的精密度，同时也可以降低最小检测量。在190~400 nm下用二极管阵列检测器对混合对照品进行光谱扫描并保存全光谱，可以观测到尿苷、鸟苷和腺苷在260 nm处都有较大的吸收峰，故选择260 nm作为其检测波长。2.2 流动相的选择
本实验曾尝试用等度洗脱分离该两个化合物，但由于等度洗脱时鸟苷峰形不好，且样品中尿苷、鸟苷和腺苷与相邻峰的分离度不能满足分析要求，用线性梯度时鸟苷峰形不好，经实验得出了1.2中梯度洗脱程序，在该条件下，尿苷、鸟苷和腺苷的色谱峰能与基线分离、与周围峰的分离度均大于2.0。
2.3 提取方法的选择
本实验考察了冷浸、超声和微波3种提取方法，结果表明，超声法提取效率最高。
2.4 系统适应性试验
分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液，按色谱条件对样品溶液、对照品溶液进行测定，结果理论塔
板数按尿苷计不低于10000、按鸟苷计不低于20000，按腺苷计不低于40000，鸟苷和腺苷峰与周围峰的分离度均大于2.0。该色谱条件下对照品及小根蒜的色谱图见图1。
图1 对照品（a）及小根蒜（b）色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of the standard (a) and samples (b)
of allium macrostemon bunge
注：1.尿苷，2.鸟苷，3.腺苷。
2.5 线性考察
用自动进样器精密吸取混合对照品溶液2、5、8、10、15、20 μL进样，于260 nm处测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标(x)，以峰面积为纵坐标(y)计算回归方程。结果：尿苷的回归方程为y=10303x+11.373，线性范围为相关系数r=0.9995，线性范围为0.0784~0.784 μg；鸟苷的回归方程为y =3922.7x-1.8317，相关系数r=0.9995，线性范围为0.0798~0.798 μg；腺苷的回归方程为y =6059.7x+4.7463，相关系数r=0.9994，线性范围为0.0852~0.852 μg。
2.6 精密度实验
表1 精密度实验结果
Table1 The precision of the experiments
1 2 3 4 5 6 平均值RSD/% 尿苷2115.2 2161.2 2130.3 2139.6 2131.9 2117 2132.53 0.79 鸟苷836.3 823.5 819.3 822.8 819.7 810.7 822.05 1.01 腺苷1346.4 1326 1348 1326.2 1328.9 1350.6 1337.68 0.88 精密吸取混合对照品溶液5 μL连续进样6次测定，测定尿苷、鸟苷和腺苷的峰面积。计算得峰面积的相
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对标准偏差(RSD)分别为0.79%、1.01%、0.88%，说明方法的精密度良好。
2.7 稳定性实验
按照2.1色谱条件，将样品溶液在室温(25 ℃)下放置0、2、4、6、8、12、24 h，取样10 μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。计算得尿苷、鸟苷和腺苷峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为1.09%、1.66%、1.84%，表明样品溶液至少在24 h内保持稳定。
2.10 样品分析
分别取3份小根蒜的鳞茎、茎、叶样品，按“1.3”项下所述方法制备供试品溶液，按“1.2”项下色谱条件测定。结果见表2。从表2可以看到，小根蒜的叶和茎中的三种核苷都比鳞茎多，腺苷在叶里的含量最高。
3 结论
本方法前处理简单、快速，线性范围宽，精密度高，回收率高，可满足日常样品的检测需求。测定结果表明，小根蒜不同部位都含有腺苷等三种核苷类化合物，其中叶和茎中的三种核苷都比鳞茎多，腺苷在叶里的含量最高。
表4 回收率测定结果
Table 4 The experimental result of the recovery test 198.62 664.86
380.65
318.84
参考文献
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Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status 】，进入“Status （1 ）”屏幕，光标选“Degasser ”，按【Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“Continuous ”，按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status （ 1 ）”屏幕下，按【Direct Function 】，光标选“Dry Prime ”，按【Enter 】，显示“Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成，按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”，按【Enter 】，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，输入0.000mL/min 和10min. ，按【OK 】。待限定时间结束后，按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。按【Direct Function 】，光标选“PurgeInjector ”，按【Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”，光标下移“Compression Check ”，按任意数字键，按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnositcs ”屏幕，按【Prime Ndl Wash 】，显示“Prime Needle Wash ”屏幕，按【Start 】，30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnosities ”屏幕，按Prime Seal Wash ，显示“Prime Seal Wash ”屏幕，按【Start 】，待排放口有水流出，按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表 在主屏幕下，按【Develop Methods 】，显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下，按【New 】、【Separation Methods 】，输入方法名，按【Enter 】，显示分离方法屏幕，该屏幕共有6 页，通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度，在第（1 ）页按【Gradient 】，输入后按【Exit 】；如需设定色谱柱的温度，在第（4 ）页输入后按【Exit 】；在第（ 6 ）页设定检测器的种类，光标选“Absorbance Detector ”，按【Enter 】，光标选“48 6﹨2487 ”，按Abs （ 1 ）图标，设定检测波长，按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标，按【Edit 】，编辑\ 改各种分析参数，按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下，按【New 】、【Sample Set 】，输入样品组名，按【Enter 】，显示方法组屏幕，在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位
醋泡大蒜的做法大全 日常生活中，蒜是家庭及餐厅烹饪美食不必可少的食材。而糖醋蒜也是筵席上很家常的一道菜，也广受家庭主妇及美食好爱们的欢迎，因其含有丰富的蛋白质、脂肪、糖、维生素及人体所需的各种氨基酸、微量元素和多种挥发性硫化合物等对人体有益的物质。并且具有增强人体生理机能、促进新陈代谢、延缓衰老。因而，平时家常便饭如何制作糖醋蒜也时常成了人们谈论的话题，在此，笔者精心总结了一份有关糖醋蒜腌制的绝秘技巧，在此奉献给广大的厨房管理者及美食爱好者，具体如下： 秘招一： 用料：紫皮蒜，白糖，醋 做法： 1、取1000克紫皮蒜去根除皮后泡入清水，每天换水，3天后沥干。 2、与800克醋、500克白糖拌匀。 3、装入坛中，用塑料薄膜扎紧坛口。 4、经常摇晃，1个月后即腌成糖醋蒜。
秘招二： 原料配方：鲜蒜头100千克食盐10千克红糖18千克粮食醋70千克糖精25克 制作方法： 1.将蒜茎切去，留有约6厘米假茎。 2.将蒜头洗净，沥去水分。 3.将蒜头放入缸中，放一层撒一层盐，装至半缸，再加水。每天早晚将蒜、盐、盐水倒入另一只缸内，并用缸中盐水浇洒缸内蒜头，使之全部湿润腌透。 4.将腌好的蒜头捞出晾晒，每天翻晒一次。 5.把半干的咸蒜头装入空缸中，只装一半，留一半准备倒入糖溶液。 6.将醋煮沸，再把红糖掺入，另用少许沸水溶解糖精，然后掺入糖醋液中。
7.将配好的溶液倒入蒜缸内进行泡制，缸内放一个十字形竹篾片，防止蒜头体积膨胀，冲出缸口。 8.用皮纸将缸口糊上，上面再用猪血调石灰涂好，使缸口封闭严密。 秘招三： 原料配方：鲜蒜头100千克、盐10千克、食醋0.7千克、红糖适量、五香粉少许 制作方法： 1.选用整齐、肥大、皮色洁白、新鲜的蒜头。去掉须根，剥去老蒜皮，洗净沥干水分。 2.按每100千克鲜蒜头用盐10千克的比例，在缸内一层层装好，装到大半缸即可，另外用同样大小的缸一口，备用。 3.每天早晚各换缸一次，这样，蒜头腌制均匀，腌至15天后，即成咸蒜头。
高效液相色谱的发展及其应用 摘要：了解高效液相色谱[1]的发展历史，知道高效液相色谱的组成结构、操作 原理以及方法等等。掌握它的分类方法，通过比较得出高效液相色谱分析方法的优点与缺点。明确高效液相色谱的应用，最终分析结果。 关键词：高效液相色谱；发展历史；应用 高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 1、高效液相色谱的发展历史 1.1高效液相色谱的历史 高效液相色谱作为色谱分析法的一个分支，是在二十世纪60年代末期，在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上，发展起来的新型分离分析技术。1960年中后期，气相色谱理论和实践的发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了高效液相色谱。 1.2高效液相色谱与其它色谱的比较[2] 1.2.1与经典液相色谱的比较 经典液相色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，柱效低，分析时间冗长。 高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。 1.2.2与气相色谱法的比较 高效液相色谱法与气相色谱法有许多相似之处。气相色谱法具有选择性高、分离效率高、灵敏度高，分析速度快的特点，但它仅适于分析蒸气压低、沸点低的样品，而不适用于分析高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及生物活性物质，因而使其应用受到限制。在全部有机化合物中仅有20%的样品适用于气相色谱分析。高效液相色谱法却恰可弥补气相色谱法的不足之处，可对80%的有机化合物进行分离和分析。 2、高效液相色谱 2.1高效液相色谱的特点 2.1.1高效液相色谱的优点 1.分辨率高于其它色谱法，可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果； 2.速度快，十几分钟到几十分钟可完成； 3.重复性高、样品不被破坏、易回收； 4.高效相色谱柱可反复使用； 5.自动化操作，分析精确度高；
高效液相色谱法标准操作规程 目的：建立高效液相色谱法标准操作规程。 适用范围：高效液相色谱法。 责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。 程序： 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 1.对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。 2.系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和 1
2 调整。应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 (1) 色谱柱的理论板数（n ） 在选定的条件下；注入供试品对仪器或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54(t R /（W h/2）计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改普通色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。 (2)分离度 定量分析时，为便于准确测量，要求定时峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R ）的计算公式为： ()21122w w t t R R R +-= 式中 2R t 为相邻两峰中后一峰的保留时间； 1R t 为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1及W 2为此相邻两峰的保留时间； 除另有规定外，分离度应大于1.5。 (3)重复性 取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%。 (4)拖尾因子 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子 拖尾因子公式为： 1 05.02d W T h = 式中W 0.05h 为0.05峰高处的峰宽； d 1为峰极大至峰前沿之前的距离。 除另有规定外，T 应在0.95～1.05之间。 3.测定法
1 材料：鲜蒜10斤，白糖2斤，清水10斤，盐１斤（根据口味，但不可超过１.５斤），米醋1两多（根据口味，最好不超过２两）制作方法： １、切去鲜大蒜的毛根，剥去干皮，蒜梗留1 寸左右。清洗干净后入缸，用清水浸泡２天左右，每天换水1～２次，等到除去鲜蒜的辣味后，捞出缸外沥干。 2、将泡好的蒜放入坛子内，放一层蒜撒一层盐，每天搅拌１～２次，大约 3-4天捞出来（等到蒜芯都淹透了即可），把浮皮弄出去，盐水倒掉，下入缸内，再用糖水腌。 3、糖水：用水10斤加白糖2斤，煮沸。待糖水凉到不烫手时，再倒入蒜缸内，可适量加些大料、味精等调味品。注意：糖水要比蒜高出2寸左右（最好用竹帘挡在蒜上面，不让蒜浮出水面），然后将坛口盖紧密封，放在阴凉处，腌制15~20天，就成为白嫩如玉晶莹透亮味美的白糖蒜了（如果要红色的，就要加红塘）。 4、在食用的前3~5天，加入米醋1~2两（喜欢吃酸的多加一点儿，不喜欢就少加一点儿）。 制品特点：脆、甜、酸
2、糖醋蒜的简单做法3种 一、糖醋蒜的简单做法 原料配方：鲜蒜头100千克,盐10千克,食醋0.7千克,红糖适量,五香粉少许 制作方法： 1.选用整齐、肥大、皮色洁白、新鲜的蒜头。去掉须根，剥去老蒜皮，洗净沥干水分。 2.按每100千克鲜蒜头用盐10千克的比例，在缸内一层层装好，装到大半缸即可，另外用同样大小的缸一口，备用。 3.每天早晚各换缸一次，这样，蒜头腌制均匀，腌至15天后，即成咸蒜头。 4.捞出蒜头，在席上晾晒，每天翻动一次，晒至原重的70%为宜。发现蒜皮松弛者即需剥去。 5.将咸蒜头装坛，轻轻压紧，待装到坛子3/4时，将配制好的糖醋液注入坛内。装满后在坛中横放几根竹片，以免蒜头上浮。最后用油纸或塑料布将坛口扎紧，用三合土封好，2个月后即可食用。如密封贮藏，可以长期保存。 6.糖醋液配制：先将食醋加热到80℃，再加红糖使其溶解，酌加五香粉少许。 产品特点：红褐色，色泽美观，很有地方色彩。 二、糖醋蒜的简单做法 糖蒜的腌制非常简单：将蒜去掉外皮，仅留下里面的一层嫩皮，洗净后用淡盐水泡上半天到一天，可起到消毒的作用，能让蒜比较好保存；把浸在盐水中的蒜捞出，一边沥干水分，一边放入坛子或搪瓷缸、玻璃瓶里，再加绵白糖和白醋，一般来说，500克蒜大约需要750克白糖，醋的数量则根据自己的口味添加；最后，加上适量的冷开水，以淹没蒜瓣为宜，不用搅拌，让糖慢慢溶化，将容器盖上盖子密封，两周到一个月左右就可以食用了。糖蒜腌好后，用来腌蒜的汁也可以用来调味。烧鱼时一般会用糖、醋和料酒调汁，把糖和醋直接换成糖蒜汁，就另有一番味道。 秋蒜又称白皮蒜，其耐寒性强，多在秋季栽培，外皮为白色，辣味淡，它的这些特点决定了它最适于腌制。也只有选秋蒜进行腌制才使其具有风味特色，酸甜中略带辣味，可直接食用。若选用春蒜腌制，不仅辣味大，还容易消除其他作料味。若用它去除异味物质，则是最好的选料，秋蒜则差。
高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展 摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。 关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术 Abstract:Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete application and the prospect of the high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis application prospect. Keywords: high performance liquid chromatography，HPLC ,pharmaceutical analysis，hyphenated techniques 引言： 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。HPLC 在药物的分析中的应用主要是鉴别、有关物质的检查、有效成分及含量的测定[1]；本文对高效液相色谱法（HPLC）技术在药物分析中的应用进行概述并展望其应用前景。 1 在药物分析中的应用 1.1 在药物鉴别中的应用 在HPLC 法中，药物组分的保留时间与其结构和性质有着直接的关系，不同的药物由于结构和性质的差异在色谱图上的出峰顺序不同，是定性的重要参数，
高效液相色谱法的标准操作规程 1 定义及概述： 1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
高效液相色谱的原理与发展 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，对复杂样品中的分析物具有极高的分离效率，在环境监测、药物鉴别、石油化工、食品安全等广泛应用。本文从仪器原理、仪器结构、液相色谱发展、应用范围等方面，简要介绍高效液相色谱法在不同领域的应用情况及对前景进行展望，以期为相关研究人员提供参考。 高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。高效液相色谱仪是由高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器、工作站等几部分组成。 一、原理 高效液相色谱的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入固定相内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器进行检测。 二、结构 贮液器主要用来提供足够数量的符合要求的流动相以完成分析工作，对于贮液器的要求：①必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液；②脱气方便；③能耐一定的压力；④所选用的材质对所使用
的溶剂都是惰性的。 贮液器一般是以不锈钢、玻璃、聚四氟乙烯或特种塑料聚醚醚酮衬里为材料，容积一般为0.5-2L。 所有流动相放入贮液罐之前都必须用0.45微米滤膜过滤，除去流动相中的杂质，防止输液管道或者进样阀出现阻塞现象。 所有流动相在使用前必须脱气。因为色谱柱是带压力操作的，而检测器是在常压下工作的。若流动相所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而收缩，流出柱子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声较大，基线不稳，仪器不能正常工作，在梯度洗脱时尤为突出。 高压输液泵是高效液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱分离系统。对于带有自动脱气装置的色谱仪，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。 ①高压输液泵的要求 A.泵体材料耐化学腐蚀； B.耐高压，且能在高压下连续工作8h-24h； C.输液平稳，脉动小，流动重复性与准确度高； D.耐用且维护方便，更换部件方便、容易。 ②高压输液泵类型 高压输液泵一般可分为恒压泵和恒流泵两大类。恒流泵在一定操作条件下可输出恒定体积流量的流动相。恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵，其流量随色谱系统阻力变化而变化。
高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
高效液相色谱在生物制药中的应用 高效液相色谱法是近35年发展起来的一项高效、快速的分离分析技术，是现代分离测试的重要手段[1]。高效液相色谱法已经被广泛用在各种领域，它是以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域发展最快、应用最广的现代分析技术之一。于此同时，高效液相色谱法成为环境污染物检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。鉴于其简便、快速、灵敏、准确的特点，目前，在医药、卫生、食品、环保等各个领域已得到广泛应用。随着色谱技术的不断发展，在世界许多科学领域中，色谱法已成为世界许多科学领域中普及的一种分离分析手段，色谱仪也呈多样化、高精化、自动化、联用技术化等方向发展。高效液相色谱仪具有柱效高、分析速度快、流动相和被测组分的体积流量小等特点，广泛应用于临床工作[2]。 1.高效液相色谱的介绍 高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。高效液相色谱法有以下五个特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱受到的阻力比较大，为了能够快速的通过柱子，必须对流动相加很高的高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是强极性、热稳定性差、高沸点、大分子化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：分析所需时间一般小于1小时，和传统经典液体色谱法相比速度快得多。高效液相色谱有5种类型： 1、吸附色谱（Adsorption Chromatography） 2、分配色谱（Partition Chromatography） 3、离子色谱（Ion Chromatography） 4、体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography）
目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。 范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。 责任者：QC主任，设备使用人员。 规程： 依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。 1 ?定义及概述： 1.1高效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。 1.2高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2. 高效液相色谱仪的使用要求：
2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2,仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。 3. 操作前的准备： 3.1流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。对规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。配制好的流动相应通过0.45a m。适宜的滤膜滤过，用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。 3.2供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成供试溶液。定量测定时, 对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45a m适宜的滤膜滤过。必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。 3.3检查上次使用记录和仪器状态:检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。 4操作： 4.1泵的操作； 用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml,设置高流速（9ml/min）或用冲洗键PURGE进行充泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP冲洗，关闭排放阀。 4.1.3将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示 应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。初始平衡时间一般约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化比例的流动相对色谱柱进行平衡。 4.2紫外可见光检测器和色谱数据处理机的操作。 4.2.1开启检测器电源开关，选择光源（氘灯或钨灯），选定检测波长，
腌大葱 原料配方大葱1千克胡萝卜５0０克精盐5０克辣椒面100克酱沙丁鱼5０克蒜末50克姜末6克芝麻８克 制作方法 1.选出鲜嫩的好葱(根部较粗、较短、葱白多的为好)收拾干净,用盐腌30分钟，然后用水漂洗两遍捞出。 ２．选细长的胡萝卜洗净，坚切成薄片，用盐腌30分钟，与葱放在一起。 3．把酱沙丁鱼煮好,放凉后用筛子筛一筛。 ４．把煮好的酱沙丁鱼浇到葱和胡萝卜上,把葱和胡萝卜泡软。 5.把葱和胡萝卜掺杂着几个一捆捆好,整齐地放入坛中,数日即可食用。 泡大葱 原料配方大葱2千克一等老盐水2千克红糖20克白酒30克醪糟汁２0克干红辣椒30克食盐50克香料包(八角、香草、豆蔻各1克，花椒２克，滑菇7克)1个 制作方法１.选个大均匀,鲜嫩无伤的扁圆大葱剥去表皮，洗净，入清水退去浆汁，捞起沥干，预处理7天捞起,晾干附着表现的水分。 ２．将各料调匀装坛内，放入大葱及香料包,盖上坛盖，掺足坛沿水。泡２天即成。 产品特点色微黄、鲜嫩甘香。可贮存1０0天以上。 腌香葱 原料配方香葱5０00克精盐750克 制作方法 1．将香葱去掉黄叶,根须，洗净控干水分后待用。 ２.葱放入盆中加盐搓擦一下，装入干净的坛内压紧,封好口，放约15~2０天左右即可食用。食用时也可加少许味精调拌。 产品特点特殊的葱香味，酸中微带甜味，色泽清爽，促进食欲。 糖酱洋葱
原料配方洋葱头５000克红糖３00克酱油15０克盐７5克花椒、大料少许 制作方法 1.将洋葱去掉根须和外层壳皮，用清水洗净，沥尽水分，改刀切成滚刀块，放入盆内待用。 2.把酱油、红糖、花椒、大料等倒入锅中，上火烧开后起锅晾凉。 ３.取净坛一只,净洋葱和兑好的汁液一起搅拌均匀即可装入坛中，封好口,约3~４天即可食用。 产品特点色微红,清脆甜香，开胃增食。 糖醋葱头 原料配方葱头５０００克白糖75０克醋５0０克酱油750克精盐２５0克 制作方法1．将鲜嫩葱头去外皮、根，用清水洗净,沥干水,改刀切成四瓣待用。 2.铁锅上火加入酱油、盐烧开,待酱油晾凉后加入醋，倒入坛内,再加入葱头搅拌均匀,装坛封口,１月后即可食用。 产品特点色泽深褐，甜酸适口,富有营养。 蜜汁葱丝 原料配方洋葱头５000克精盐50克蜂蜜3000克青椒少许 制作方法１.将洋葱头去外皮,用水洗净,从中间剖开,挖去根心部分，改刀切成丝，倒入盆内,撒上盐腌2小时。青椒切丝待用。 2.取坛1只，将腌好的洋葱丝控干水和青椒一起加入坛中,然后注入蜂蜜,腌渍 2~3天,即可取出食用。 产品特点甜中带辣，蜜香味浓郁,色白脆嫩。 糖醋蒜 原料配方鲜蒜头1００千克食盐10千克红糖18千克粮食醋7０千克糖精2５克 制作方法 1.将蒜茎切去，留有约６厘米假茎。
高效液相色谱分析法在各领域的应用及发展前景 摘要：高效液相色谱分析是一种高效、快速、准确的分离分析方法，在石油化工、生命科学、环境、医药及食品安全等领域有着广泛的应用。本文旨在简要介绍液相色谱分析法在不同领域的应用情况，并从使用频度、应用范围、检测效率、检测准确度及在本领域分析方法中的重要性等角度进行阐述。 关键词：高效液相色谱仪；石油化工；食品安全 中图分类号： O657.7+2 文献标识码：A 高效液相色谱在20世纪70年代获得迅猛的发展，是一种常规的分离技术色品分析仪的应用最广是在化学领域上，食品与环境的领域上也出现多方面的应用。其中，化合物的分析就包括高分子化合物，离子型化合物，热不稳定化合物以及生活性的化合物等都可以用不同的方式进行离子交换色谱和离子色谱，体积排除法，亲和色谱法等，进行离子分析。 一、高液相色谱分析仪发展现状 随着高效液相色谱分析仪的转换，高效液相色谱仪器成为国际分析化学界发展较快的学科，高效液相色谱是由液相系统组成，分别是检测器，色谱柱，记录仪等三个方面的部分组成，为了取得更好的效果，科研工作者需要提升准确度以及精确度和灵敏度显示科研工作的重要性。 经常采用薄层色谱法(TLC)和气相色谱法(OC)进行含量测定，而液相色谱法(LC)只是用于对组分标样的测定和分离的可能性研究。色谱法是一
种分类和混合的开发技术，是在1913年由俄国植物学家在实验中发现并且命名的技术，将植物的叶色素和石油醚，通过装有白色的碳酸钠颗粒的玻璃管，再用石油醚进行全面的冲洗，玻璃管的内壁出现不同颜色的色带，随着冲洗剂的不断转变，色带以不同的颜色进行冲洗，不同的色带以不同的速度向下移动并且分离，色谱法由此得名。 二、色谱分析仪的使用及工作原理 色谱柱通称为不锈钢柱，内装填充剂，常用的是硅胶作为填料，用于正相色谱，化学键固定相，根据色谱化学键的固定相，可以用来作为反相或者是反高的要求。输液系统要为 HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，同时还要提供精度好、准确度高的多元溶剂梯度。早在2003年国家标准中就已经规定了液相色谱法检测食品中糖精钠和安赛蜜的检测方法，在质检机构中已经将之作为一种常规检验项目的基本检测方法来进行操作。近几年随着色谱柱填充制备技术的高速发展，已经可以一次性分离糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、柠檬黄、日落黄、胭脂红。 （一）、高效液相色谱仪的工作原理 储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程高的要求。 储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相
高效液相色谱的应用呵发展前景 液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过 改进填料的粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快. 分离效率高和操作自动化,这种色谱技术被称为高效液相色谱法(HighperformanceliquidchromatographyHPLC) HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪结构。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。 对于高效液相色谱的发展前景应该是非常乐观的，现在的社会的发展节奏很快，各个领域对于分析检验的需求很多，而分析检验中，HPLC所占的比重是不言而喻的，已成化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。所以她的发展情景很乐观。理由有几点 1，随着科技的发展，技术的日臻完善，较之以前色谱分析的方法有了很大程度的提高，很多科学家在对于一些分析上的难点有了新的突破，这样一个 不断完善的技术在以后的社会发展中一定会扮演着一个重要的角色。 2，最近,一些先进的检测仪器成功的用在了高效液相色谱分析法上,使得高效液相色谱的应用更广泛,并充分利用高效快速.选择性好.灵敏度高等优 点,建立更加系统的成分分析方法.通过与质谱联用.梯度洗脱.柱切换技 术.配合先进的检测技术,以及与分子生物学.现代分子药理学相结合,必
最新高效液相色谱使用方法 一、流动相准备 将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。 二、开机 首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打； 打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。 三、抽气 抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。 抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。 四、调节流动相比例与流速 在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。 五、2410示差检测器的使用 1、打开2410示差检测器开关 2、调整检测器内、外温度 3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。 六、2487紫外检测器的使用 1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。 2、设置检测波长 3、预热30分钟左右，即可注样测定。
试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定 一、样品准备 取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。配80％甲醇，冰箱冷冻。 二、提取 样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。 三、过滤 取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。 四、浓缩 将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。 五、萃取 提取液中加入等量石油醚萃取，用力振荡，待静止分层后，用胶头滴管吸取上层液体弃去，此过程反复进行，直至醚层不再有颜色。 六、过柱纯化 萃取脱色后液体吸入针管，通过C18小柱滤除色素，用1~2m1甲醇清洗小柱一次，若滤出色素，将液体吸回，用新小柱重新滤一次（小柱使用前要用甲醇浸泡，用后再用甲醇反复冲洗，再浸泡）。 七、二次浓缩 液体转入蒸发皿中，60℃蒸干，用lml甲醇洗脱。 八、过滤 0．45um滤膜过滤，滤液收集到小瓶中，冷冻待测定。 九、测定与计算 用标样做标准曲线，分别为10，50，100，200，500mg／ml。进样量为20ul。 测定条件：流速为lml／min，柱温设定为35℃，测定波长为260nm，流动相甲醇：3％乙醇＝45：55 计算：通过曲线计算样品中激素浓度。
家庭糖醋蒜腌制方法 一 制作材料 主料：大蒜白皮800克 调料：白砂糖50克,醋400克,酱油400克,花椒5克 特色 酸甜可口。 制作工艺 1、白皮蒜加工的须梗适当去掉一部分，再剥掉两层表皮，放入清水里浸泡7天，每天换水一次，然后捞出晾晒，直至表皮呈现皱纹时装坛内。 2、白糖、醋、酱油、花椒调成汁，浇入蒜坛内，盖严盖，30天左右即成。 二 一、备料剥皮蒜头100千克、食盐10千克、食醋53.3千克、白糖16.7千克。 二、漂洗把剥皮蒜头用清水漂洗并浸泡4～6小时，除去泥沙杂质，然后沥干水分。 三、腌渍按蒜头总量的10%用盐，先在缸底铺一层盐，然后一层蒜头撒一层盐，装好压实，装到缸八成满为止，最上层再撒一层盐，盖好缸盖。 四、倒缸腌渍时，12小时倒缸1次，使上、下层蒜头腌渍均匀，直到缸内蒜卤水达到蒜头的3/4高度时，可不再倒缸。一般需倒缸4～6次。 五、淋卤在每次倒缸结束后，把腌出的卤水淋到缸内蒜头表面上。腌渍和淋卤时间总计为10～15天。 六、晒蒜将咸蒜头捞出，铺在席子上晾晒，其间每天要翻动1次，晒到蒜头为原重的70%时即可。晾晒后应将松弛的蒜皮剥去，并将蒜头按大、中、小分为三级分别调味。 七、配制调味液用料：红皮蒜用食醋35千克、红糖11千克白皮蒜用白醋35千克、白糖11千克。配制时，先将醋加热到80℃，然后加入糖搅拌，使其充分溶解，备用。 八、装坛将咸蒜装入坛中，轻轻压紧，装至坛的3/4高度时，加入调味液，以浸没蒜头为宜，一般咸蒜和调味液的比例为1∶1。在调味液表面用小竹排压住蒜头，防止蒜头上
浮。然后用塑料薄膜密封坛口，再涂上黄泥严密封闭。将坛置于阴凉干燥处，4个月后即成。 三 蒜头100千克食盐10千克红糖18千克粮食醋70千克糖精25克 制作方法1.将蒜茎切去，留有约6厘米假茎。 2.将蒜头洗净，沥去水分。 3.将蒜头放入缸中，放一层撒一层盐，装至半缸，再加水。每天早晚将蒜、盐、盐水 倒入另一只缸内，并用缸中盐水浇洒缸内蒜头，使之全部湿润腌透。 4.将腌好的蒜头捞出晾晒，每天翻晒一次。 5.把半干的咸蒜头装入空缸中，只装一半，留一半准备倒入糖溶液。 6.将醋煮沸，再把红糖掺入，另用少许沸水溶解糖精，然后掺入糖醋液中。 7.将配好的溶液倒入蒜缸内进行泡制，缸内放一个十字形竹篾片，防止蒜头体积膨胀，冲出缸口。 8.用皮纸将缸口糊上，上面再用猪血调石灰涂好，使缸口封闭严密。 四 原料配方 鲜蒜头100千克、盐10千克、食醋0.7千克、红糖适量、五香粉少许。 方法 1.选用整齐、肥大、皮色洁白、新鲜的蒜头。去掉须根，剥去老蒜皮，洗净沥干水分。 2.按每100千克鲜蒜头用盐10千克的比例，在缸内一层层装好，装到大半缸即可， 另外用同样大小的缸一口，备用。 3.每天早晚各换缸一次，这样，蒜头腌制均匀，腌至15天后，即成咸蒜头。 4.捞出蒜头，在席上晾晒，每天翻动一次，晒至原重的70%为宜。发现蒜皮松弛者即 需剥去。 5.将咸蒜头装坛，轻轻压紧，待装到坛子3/4时，将配制好的糖醋液注入坛内。装满 后在坛中横放几根竹片，以免蒜头上浮。最后用油纸或塑料布将坛口扎紧，用三合土封好，2个月后即可食用。如密封贮藏，可以长期保存。