?论著?
通讯作者：李琦，上海中医药大学附属曙光医院，邮编：201203，电话（传真）：021-********，E -mail：lzwf@https://www.doczj.com/doc/6c18611286.html,
丹参酮ⅡA对COX -2激活Wnt/β-catenin信号通路
介导的人肠癌细胞VEGF表达的调控作用
刘宣1，王炎1，李丹光2，周利红1，殷佩浩1，隋华1，范忠泽1 ，李琦1,3
（1上海中医药大学附属普陀医院，上海 200062；2吉林省肿瘤医院，长春 130012；3上海中医药大学附属
曙光医院，上海 201203）
摘要：目的：探讨丹参酮ⅡA通过环氧化酶-2（COX -2）-Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的作用机制。方法：分别采用PGE 2和COX -2选择性抑制剂NS -398上调及抑制LoVo细胞COX -2表达，Western Blot检测COX -2对β-catenin蛋白表达的影响；分别采用丹参酮ⅡA、PGE 2和/或GSK -3β选择性抑制剂SB -216763作用人肠癌HCT -116细胞24h，Western Blot法检测丹参酮ⅡA对COX -2和β-catenin蛋白表达的影响；ELISA法检测丹参酮ⅡA对VEGF表达的影响。结果：与对照组比较，PGE 2能够显著上调LoVo细胞中COX -2蛋白表达，同时显著上调β-catenin在细胞总蛋白、浆蛋白和核蛋白中的表达水平；反之，COX -2抑制剂NS -398能够显著下调COX -2和β-catenin蛋白表达水平。丹参酮ⅡA能够显著下调COX -2和β-catenin蛋白在人肠癌LoVo细胞中表达水平，并且能够显著下调PGE 2诱导的COX -2和β-catenin蛋白的高表达；同时，丹参酮ⅡA能够显著下调人肠癌LoVo细胞VEGF表达水平，并且能够下调PGE 2和GSK -3β抑制剂SB -216763诱导的VEGF高表达。结论：丹参酮ⅡA通过抑制人肠癌细胞中COX -2的表达，阻止细胞中β-catenin的累积，从而阻断Wnt/β-catenin信号通路，下调VEGF表达，这可能是丹参酮ⅡA抗大肠癌血管新生的作用机制之一。
关键词：结肠癌；丹参酮ⅡA；环氧化酶-2；Wnt/β-catenin信号通路；血管内皮生长因子
基金资助：上海市自然科学基金资助项目（No.10ZR1427400，No.09ZR1428500），上海市第六院医疗集团项目（No.20114001），上海市教委科研创新项目（No.12YZ058），上海市中医药科研基金（No.2011ZJ030），上海市普陀区科委重点项目（No.2010PTKW005）
Effect of Tanshinone II A on COX-2--β-catenin signal transduction pathway-mediated
VEGF expression in human colorectal cancer cells
LIU Xuan 1, WANG Yan 1, LI Dan-guang 2, ZHOU Li-hong 1, YIN Pei-hao 1, SUI Hua 1,
FAN Zhong-ze 1, LI Qi 1,3
( 1Putuo Hospital Af ? liateal to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200062, China; 2 Jilin Provincial Cancer Hospital, Changchun 130012, China; 3Shuguang Hospital Af ?
liated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China )
Abstract: Objective: To investigate the mechanism of Tanshinone ⅡA on VEGF expression via regulating COX-2-Wnt /β-catenin signaling pathway in colon cancer. Methods: Separately using PGE 2 to up-regulate COX-2 and COX-2 selective inhibitor NS-398 to inhibit its expression in LoVo cells, the effect of COX-2 on β-catenin expression was detected by western blot; using Tanshinone ⅡA, PGE 2 and/or GSK-3β selective inhibitor SB-216763 in HCT-116 cells for 24h, the effect of Tanshinone ⅡA on COX-2 and β-catenin expression was detected by western blot; the effect of Tanshinone ⅡA on VEGF expression was detected by ELISA. Results: PGE 2 could increase COX-2 expression, also increase the level of β-catenin in the total cell, cytosolic and nuclear proteins compared with contrast group. COX-2 selective inhibitor NS-398 markedly decreased COX-2 expression, also decreased the level of β-catenin in the total cell, cytosolic and nuclear proteins. Tanshinone ⅡA reduced COX-2 and β-catenin protein expression in LoVo cells; Tanshinone Ⅱcould significantly decrease COX-2 and β-catenin protein expression, which were up-regulated by PGE 2. Tanshinone ⅡA decreased VEGF expression and induced- VEGF expression by PGE 2 or GSK-3β selective inhibitor SB-216763. Conclusion: Tanshinone ⅡA prevented accumulation of β-catenin, ultimately blocked Wnt/β-catenin
大肠癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率在我国乃至世界上呈逐年上升趋势[1]。目前大肠癌的治疗是以手术为主的综合治疗，但复发率高[2]，其主要原因是由于肿瘤血管新生导致的肿瘤向其他脏器组织侵袭、转移。丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA，TSⅡA）对肿瘤细胞具有很强的杀伤作用、能够抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡等[3-6]。本课题组前期研究发现，丹参酮ⅡA在体外能够下调人肠癌细胞环氧化酶-2（cyclooxygenase 2，COX-2）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达[7]，但其机制尚不完全清楚。近年来研究发现，在肠道肿瘤形成过程中COX-2与Wnt/β-catenin通路密切相关，并且Wnt/β-catenin信号通路下游的转录因子TCF/LEF可以上调血管内皮生长因子VEGF的表达。本研究试图从COX-2-Wnt/β-catenin信号转导角度探讨丹参酮ⅡA抑制人肠癌VEGF表达的部分作用机制，为揭示丹参酮ⅡA治疗大肠癌提供实验依据。
材料
1. 细胞及试剂 人肠癌LoVo细胞株购自中科院上海细胞研究所；丹参酮ⅡA，含量>98%，购自西安冠宇生物技术有限公司，批号：200512001；PGE2、NS-398购自美国Sigma公司；SB-216763购自美国Sigma公司；Western及IP细胞裂解液、SDS-PAGE 试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒均购自碧云天科技有限公司；细胞核蛋白与浆蛋白抽提试剂盒购自美国Fermentas公司；兔抗人COX-2、β-catenin和β-actin单克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体、HRP标记的羊抗兔IgG、HRP标记的羊抗鼠IgG均美国CST公司产品；人VEGF Elisa试剂盒购自美国Bio Sources公司。
2. 仪器5804R高速冷冻离心机购自德国Eppendorf公司；CKX41/U-RFLT50荧光倒置显微镜购自日本OLYMPUS；GalaxyS CO2培养箱购自英国RS Biotech公司；Chemidox化学发光成像仪购自Bio-Rad 公司。
方法
1. 人肠癌LoVo细胞培养 人肠癌LoVo细胞用含10%胎牛血清、1.5g/L碳酸氢钠、2mmol/L L-谷氨酰胺的F12K培养液。细胞均置于37℃、5% CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
2. Western Blot检测人肠癌细胞中COX-2和β-catenin蛋白表达 取处于对数生长的细胞分为以下5组：①对照组（control）：LoVo；②PGE2（5μmol/L）组；③NS-398（20μmol/L）组；④TSⅡA（10μmol/L）组；⑤PGE2（5μmol/L）+ TSⅡA（10μmol/L）组。各组均在培养24h后提取细胞蛋白。细胞总蛋白抽提步骤：预冷的PBS清洗细胞2次，加入预冷的含蛋白酶抑制剂的裂解液，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动30min进行裂解，之后4℃离心12 000r/min，5min，上清-80℃保存待用；细胞浆蛋白与核蛋白抽提步骤：用预冷的PBS清洗细胞2次，用含蛋白酶抑制剂的预冷PBS刮下细胞，4℃离心，1 200r/min，5min收集细胞，加入预冷的细胞裂解液（使用前每mL细胞裂解液加入10μL 0.1mol/L DTT，15μL蛋白酶抑制剂），旋涡剧烈振荡15s，放置冰上10-15min，再漩涡震荡；分离细胞浆蛋白和核蛋白，4℃离心，2 500r/min，7min，之后再分别纯化细胞浆蛋白和核蛋白。BCA分析试剂测定蛋白质浓度。50μg总蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，电转移至PVDF膜，膜在5％BSA溶液中室温孵育1h以封闭膜上的非特异结合。封闭过的膜加入一级抗体4℃过夜，抗原抗体结合。TTBS洗膜3次，每次5min，再加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1h，TTBS洗膜3次，每次5min；同样方法标记鼠单克隆抗β-actin作对照。之后按1:1加入AB荧光底物（与二抗HRP结合），显影，定影，并分析其灰度值。每次实验均重复3次。
3. ELISA检测人肠癌细胞培养上清中VEGF表达 取常规培养的对数生长期人肠癌LoVo细胞，调整细胞浓度至1×105/mL，以每孔500μL的量接种于24孔细胞培养板中，置于5%CO2、饱和湿度、37℃培养箱中培养。待细胞贴壁后，用无血清培养基处
signaling pathway and reduced VEGF expression by inhibiting COX-2 expressionⅡwhich was one of the possible mechanisms of TanshinoneⅡA on prevention and treatment of angiogenesis in colon cancer.
Key words: Colorectal cancer; TanshinoneⅡA; Cyclooxygenase 2; Wnt/β-catenin singaling pathway; VEGF
Fund assistance: Project of Shanghai Committee of Science and Technology (No.10ZR1427400, No.09ZR1428500), Research projects of Shanghai 6th People's Hospital Medical Group (No.20114001), Innovation Program of Shanghai Municipal Education Commission (No.12YZ058), Project of Shanghai Traditional Chinese Medicine (No.2011ZJ030), The Scienti? c and Technological Innovation Project of Putuo District Science and Technology Commission of Shanghai (No.2010PTKW005)
组别对照组
PGE 2组NS -398组COX -2细胞 总蛋白0.45±0.05
1.67±0.12**0.19±0.03**
细胞总蛋白0.76±0.072.90±0.16**0.24±0.03**
细胞浆蛋白0.56±0.051.50±0.16**0.16±0.01**
细胞核蛋白0.60±0.021.81±0.08**0.16±0.02**
β-catenin 表1 各组COX -2和β-catenin蛋白相对表达情况（x - ±s ，n =3）注：与对照组比较，**
P <0.01。
理细胞12h，之后分别更换为完全培养基。分为以下6组：①对照组（control ）：Lo V o；②TS ⅡA （10μmol/L ）组；③PGE 2（5μmol/L）组；④PGE 2（5μmol/L）+ TSⅡA （10μmol/L ）组；⑤SB -216763（5μmol/L ）组；⑥SB -216763（5μmol/L）+ TSⅡA （10μmol/L）组。各组均在培养24h后收集细胞上清，离心3 000r/min，10min，分装到无菌管中。按人V EGF 试剂盒说明书进行ELISA法检测细胞培养液中VEGF的表达情况。每次实验均重复3次。
4. 统计学方法 数据以x -±s 表示，采用SPSS 13.0统计软件包进行统计分析。方差齐性检验后，多样本均数比较用单因素方差分析，均数间两两比较采用Newman-Keuls 检验。
结果
1. COX -2对人肠癌细胞β-catenin蛋白表达的影响 见图1，表1。Western Blot结果显示，与对照组比较，PGE 2能够显著上调COX -2在细胞总蛋白中的表达水平，与之相反COX -2选择性抑制剂NS -398能够显著下调COX -2蛋白表达水平（P <0.01）。同时，PGE 2能够明显上调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平；而NS -398可以显著下调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平（P <0.01）。结果提示，PGE 2能够上调人肠癌LoVo细胞中COX -2表达，进而上调β-catenin的蛋白
组别对照组TSⅡA组PGE 2组
PEG 2+ TSⅡA组COX -2细胞总蛋白0.50±0.04 0.11±0.01**1.70±0.12**
0.41±0.03△△细胞总蛋白0.62±0.05 0.17±0.02** 1.95±0.19**
0.65±0.04△△ 细胞浆蛋白0.42±0.02 0.19±0.03**1.19±0.11**
0.40±0.02△△细胞核蛋白0.50±0.03 0.07±0.01** 1.64±0.20**
0.54±0.02
△△
β-catenin 表2 丹参酮ⅡA 对人肠癌细胞COX -2和β-catenin蛋白
相对表达的影响（x - ±s ，n =3）注：与对照组比较，
**P <0.01；与PGE 2组比较，△△P <0.01。表达水平，促使β-catenin在细胞浆累积并向细胞核移位，从而激活Wnt/β-catenin信号通路。
2. 丹参酮ⅡA通过COX -2对人肠癌细胞β-catenin 蛋白表达的影响 Western Blot结果发现，与对照组比较，丹参酮ⅡA能够显著下调LoVo细胞中COX -2蛋白表达水平；同时，丹参酮ⅡA能够显著下调PGE 2诱导的人肠癌LoVo细胞COX -2高表达（P <0.01）（表2，图2）。结果提示，丹参酮ⅡA能够下调人肠癌LoVo细胞中COX -2蛋白表达水平。
图2 丹参酮ⅡA对人肠癌细胞COX -2表达的影响对照组
TSⅡA组
PGE 2组PGE 2+TSⅡA组
COX -2β-actin
进一步实验研究发现，丹参酮ⅡA能够显著下调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平；同时，丹参酮ⅡA能够显著下调PGE 2诱导的人肠癌LoVo细胞β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的高表达（P <0.01）（表2，图3）。结果提示，丹参酮ⅡA通过COX -2途径下调β-catenin蛋
白表达，
进而抑制Wnt/β-catenin信号转导通路。
图1 COX -2对人肠癌细胞β-catenin蛋白表达的影响细胞总蛋白
细胞浆蛋白
COX -2
对照组
对照组对照组PGE 2组PGE 2组PGE 2组NS -398组
NS -398组
NS -398组
β-catenin β-catenin
β-catenin
β-actin
β-actin
PCNA
细胞核蛋白
图3 丹参酮ⅡA对人肠癌细胞β-catenin蛋白表达的影响
对照组 TSⅡA组PGE 2组PGE 2+TSⅡA组
对照组TSⅡA组PGE 2组PGE 2+TSⅡA组
β-catenin β-actin
β-catenin
β-actin
对照组TSⅡA组PGE 2组PGE 2+TSⅡA组
β-catenin PCNA
细胞总蛋白
细胞浆蛋白
细胞核蛋白
3. 丹参酮ⅡA通过COX -2-Wnt/β-catenin信号通路下调VEGF表达 ELISA结果显示：与对照组
比较，丹参酮ⅡA能够显著下调LoVo细胞VEGF表达水平，是对照组的0.61倍（P<0.01）；PGE2能够显著上调LoVo细胞VEGF表达水平，是对照组的1.50倍（P<0.01）；GSK-3β抑制剂SB-216763能够显著上调LoVo细胞VEGF表达水平，是对照组的1.68倍（P<0.01）。同时，丹参酮ⅡA能够显著下调PGE2和SB-216763诱导的人肠癌LoVo细胞VEGF的高表达，分别是PGE2组和SB-216763组的0.410倍和0.414倍（P<0.01），见表3。结果提示，丹参酮ⅡA能够通过COX-2-Wnt/β-catenin信号转导调控人肠癌LoVo细胞的VEGF表达。为其与肿瘤的生长，血管的新生有关[12]。VEGF与大肠癌的发生、发展、浸润程度及淋巴结转移关系密切，干预VEGF的生成及其产生的作用途径或破坏其受体可抑制大肠癌血管生成，从而抑制大肠癌的生长、转移，为临床治疗本病提供了新思路。
TSⅡA是从丹参中提取的脂溶性有效活性成分，具有抗氧化、抗心脑血管疾病、抗菌消炎等药理作用。近年发现TSⅡA对肿瘤细胞具有很强的杀伤作用、能够抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡[1-4]。本课题组前期研究发现，TSⅡA在体外能够显著下调人肠癌细胞COX-2和VEGF表达[5]，但其机制尚不清楚。
近年来研究发现，在肠道肿瘤形成过程中COX-2/ PGE2通路与APC/β-catenin/TCF通路密切相关。临床试验证明，家族性腺瘤性息肉病患者在使用COX-2选择性抑制剂塞来昔布后，息肉数目显著减小，息肉体积缩小[13-14]。APC△716模型小鼠敲除EP2受体后可致小鼠肠息肉数目减少和体积缩小，并且VEGF表达水平显著下调[15]。在大肠癌中，95%的APC基因突变发生在参与降解β-catenin羧基端[16]。Kawasaki T等[17]研究发现Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin基因的激活伴随COX-2的过表达，并且细胞质中β-catenin 能使COX-2基因mRNA稳定表达[18]。Castellone M D等[19]研究发现在大肠癌细胞中PGE2能够激活G蛋白偶联受体EP2，它含有与Axin结合位点，使GSK-3和Axin从破坏复合体中释放，导致β-catenin积聚。APC 基因突变能够上调TCF转录活性，增加COX-2和PGE2表达水平[20]，而COX-2/PGE2又能通过cAMP/PK通路进一步上调β-catenin/TCF转录活性[21]。
为了进一步探讨丹参酮ⅡA对人肠癌细胞VEGF 表达的调控机制，选用10μmol/L的丹参酮ⅡA从蛋白水平进行深入研究。Western Blot结果发现，丹参酮ⅡA能够下调COX-2和β-catenin表达。进一步实验研究发现，丹参酮ⅡA通过COX-2途径下调β-catenin表达，导致细胞中β-catenin降解增加，β-catenin核移位量减少，从而抑制Wnt/β-catenin信号转导通路，下调VEGF的转录表达，可能是丹参酮ⅡA抗大肠癌血管新生的作用机制之一。
参 考 文 献
[1] Ahmedin J D,Freddie Bray,Melissa M,et al.Global Cancer
Statistics,CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90
[2] 李玉明,詹文华,韩方海,等.大肠癌同时性肝转移外科治疗的
组别
对照组
TSⅡA组
PGE2组PGE2+TSⅡA组
SB-216763组SB-216763+TSⅡA组
VEGF（pg/mL）
699.01±32.85
426.26±39.65**
1048.70±35.21**
430.03±32.01△△
1174.05±22.12**
486.06±27.03▲▲
VEGF（倍数）
1.00±0.05
0.61±0.06**
1.50±0.05**
0.62±0.05△△
1.68±0.03**
0.70±0.04▲▲
表3 丹参酮ⅡA通过COX-2-Wnt/β-catenin信号转导下调
VEGF表达（x-±s，n=3）
注：与对照组比较，**P<0.01；与PGE2组比较，△△P<0.01； 与SB-216763组比较，▲▲P<0.01。
讨论
肿瘤血管新生或血管生成是实体瘤生长非常关键的因素。恶性肿瘤的生长、浸润和转移有赖于肿瘤血管的生成，如果没有血管生成，原发肿瘤生长不会超过1-2mm3，其继续生长必须依赖新血管的形成，以提供足够的营养和氧，带走代谢产物[8-10]。同时新生血管管壁不完整，呈高通透状态，利于肿瘤细胞的转移。肿瘤血管生成受血管生成因子和血管生成抑制因子两者的有机调控：一旦血管生成因子上调或血管生成抑制因子功能障碍，二者平衡被打破即发生肿瘤血管新生[8-9]。肿瘤细胞分泌的血管生成因子能将增强新血管生成和增殖的特殊基因激活和蛋白表达的信号传递到正常组织周围，从而使血管内皮细胞加速分化，产生微血管包绕到肿瘤组织周围，促进肿瘤侵袭和转移。
VEGF和血管生成素2（angiogenin，Ang-2）是促血管生成因子的典型代表。VEGF是一种糖基化分泌性多肽因子，分子量约4.3KD，是作用最强的促血管生长因子，能特异性刺激血管内皮细胞增殖与血管生成[11]。已发现多种恶性肿瘤中VEGF表达增高，并认
预后因素分析.中华普通外科杂志,2005,20(10):625-628
LI Yu-ming,ZHAN Wen-hua,HAN Fang-hai,et al.Prognosis of colorectal cancer with synchronous liver metastasis.Chin J Gen Surg,2005,20(10):625-628
[3] 李一龙,李蕾,王发龙,等.丹参酮ⅡA抑制脂多糖诱导后巨噬
细胞HMGB1的释放.中华中医药杂志,2011,26(9):2059-2061
LI Yi-long,LI Lei,WANG Fa-long,et al.Suppressive effect of Tanshinone ⅡA on HMGB1 release from lipopolysaccharide-induced macrophages.China Journal of TCM and Pharmacy, 2011,26(9):2059-2061
[4] 李琦,王炎,范忠泽,等.丹参酮ⅡA及其纳米粒诱导肝癌细胞
凋亡及对p38MAPK、TGFβ1信号蛋白表达的影响.肿瘤, 2008,28(1):8-12
LI Qi,WANG Yan,FAN Zhong-ze,et al.Effects of TanshinoneⅡA and its nanoparticles on apoptosis and expression of p38 MAPK and TGFβ1 signaling proteins of hepatoma cells in mice.Tumor, 2008,28(1):8-12
[5] 董晓荣,伍钢,董继华,等.丹参酮ⅡA对MKN-45细胞生长的影
响.肿瘤防治杂志,2005,12(19): 1465-1468
DONG Xiao-rong,WU Gang,DONG Ji-hua,et al.Effect of TanshinoneⅡA on the growth of MKN-45 cell line in vitro.Chinese Journal of Cancer prevention treatment,2005,12(19):1465-1468 [6] Li Qi,Wang Yan,Feng Nian-ping,et al.Novel polymeric
Nanoparticles containing Tanshione ⅡA for the treatment of Hepatoma.J Drug Target,2008,16(10):725-732
[7] 周利红,王炎,范忠泽,等.丹参酮ⅡA调节COX-2对人结肠癌HCT-116
细胞V E G F表达的影响.世界华人消化杂志,2011,19(15):1561-1567 ZHOU Li-hong,WANG Yan,FAN Zong-ze,et al.Tan ⅡA inhibits COX-2-regulated VEGF expression in human colon cancer HCT-116 cells.World Chinese Journal of Digestology,2011,19(15): 1561-1567
[8] Folkman J.Clinical applications of research on angiogenesis:
seminars in medicine of the Beth Israel Hospita1,Boston. N Engl J Med,1995,333(26):1757-1763
[9] ThompsonW D,LiWW,Maragoudakis M.The clinical manipulation
of angiogenesis:pathology,side-effects,surprises,and opportunities with novel human therapies.J Pathol,2000,190(3):330-337 [10] Kawasaki T,Nosho K,Ohnishi M,et al.Correlation of beta-
catenin localization with cyclooxygenase-2 expression and CpG island methylator phenotype (CIMP) in colorectal cancer.
Neoplasia,2007,9(7):569-577
[11] Hotz H G,Hines O F,Hotz B,et al.Evaluation of vascular endothelial
growth factor blockade and matrix metalloproteinase inhibition as
a combination therapy for experimental human pancreatic cancer.J
Gastrointest Surg,2003,7(2):220-228
[12] 周小军,周福生,孔梅,等.大肠癌虚实证候与蛋白质差异性表
达的研究.中华中医药杂志,2011,8(5):1808-1812
ZHOU Xiao-jun,ZHOU Fu-sheng,KONG Mei,et al.Study on different expression of proteins between excess and deficiency syndrome of colorectal cancer.China Journal of TCM and Pharmacy,2011,8(5):1808-1812
[13] Giardiello F M,Hamilton S R,Krush A J,et al.Treatment of colonic
and rectal adenomas with sulindac in familial adenomatous polyposis.N Engl J Med,1993,328(18):1313-1316
[14] Steinbach G,Lynch P M,Phillips R K,et al.The effect of celecoxib,a
cyclooxygenase-2 inhibitor,in familial adenomatous polyposis.N Engl J Med,2000,342(26):1946-1952
[15] Sonoshita M,Takaku K,Sasaki N,et al.Acceleration of intestinal
polyposis through prostaglandin receptor EP2 in Apc(Delta 716) knockout mice.Nat Med,2001,7(9):1048-1051
[16] Polakis P.Mutations in the APC gene and their implications for
protein structure and function.Curr Opin Genet Dev,1995,5(1): 66-71
[17] Kawasaki T,Nosho K,Ohnishi M,et al.Correlation of beta-
catenin localization with cyclooxygenase-2 expression and CpG island methylator phenotype (CIMP) in colorectal cancer.
Neoplasia,2007,9 (7):569-577
[18] Lee H K,Jeong S.Beta-Catenin stabilizes cyclooxygenase-2 mRNA
by interacting with AU-rich elements of 3'-UTR.Nucleic Acids Res,2006,34(19):5705-5714
[19] Castellone M D,Teramoto H,Williams B O,et al.Prostaglandin E
2 promotes colon cancer cell growth through a Gs-axin-beta-catenin signaling axis.Science,2005,310(5753):1504-1510
[20] Williams C S,Luongo C,Radhika A,et al.Elevated cyclooxygenase-2
levels in Min mouse adenomas.Gastroenterology,1996,111(4): 1134-1140
[21] Shao J,Jung C,Liu C,et al.Prostaglandin E
2
stimulates the beta-catenin/T cell factor-dependent transcription in colon cancer.J Biol Chem,2005,280(28):26565-26572
（收稿日期：2012年6月23日）