生物化学
一．填充题，共26分
1.有一个四肽，其一级结构为Ser．Tyr．Arg．Met．请写出其结构式。
2.蛋白质分子的结构靠各种键(或作用力)来维持，其一级结构靠,二级结构靠，三级结构靠，四级结构靠。
3.由100个氨基酸残基组成的多肽链，如果完全以α-螺旋的形式存在，其长度为
nm。
4.在pH6.0时，将卵清蛋白（pI=4.6），β-乳球蛋白（pI=
5.2），α-胰凝乳蛋白酶（pI=8.3），胃蛋白酶（pI=1.0）的混合物进行纸电泳，向负极移动最快的蛋白质是。
5.如果有重复序列的UCAUCAUCAUCA 作为mRNA,可有等氨基酸掺入蛋白质；如改用GUAGUAGUAGUA为mRNA，则等氨基酸可掺入蛋白质。
6.RNA噬菌体R17外壳蛋白质的mRNA，起始部位周围的碱基序列是：
5?---GAAGCAUGGCUUCUAACUUU---3?此蛋白质的第一个氨基酸的密码子是，在上述序列右端UAA三联体，并不引.起肽链合成的终止，这是因为。
7.酶分子是与其所催化反应的在结构上互补的分子。
8.生物工程主要包括、、和。
9.解释别构酶作用机理的两个重要模型是和模型。
10.酶的活性部位包括和。
11.天冬氨酸转氨甲酰酶（ATCase）是一个酶。
12.乙酰辅酶A在代谢中，可由或转变生成，又可以转变成、或、。
13.草酰乙酸在代谢中可由或转变生成，又可转变成
或。
14.目前最常用于凝胶过滤法的凝胶是。
15.电泳液中,若增加离子强度，则会使蛋白质的电泳迁移率。
16.电泳迁移率的单位是。
17.CM Sephadex是离子交换树脂。
18.对于已知等电点的物质，在高于其等电点的pH时，要使用离子交换剂进行柱层析。
二．选择题
1.破坏α-螺旋结构的氨基酸残基是：
①val ②pro ③Gly ④Ala
2.在含血红素的蛋白质中，唯一和血红素共价结合的蛋白质是：
①血红蛋白②肌红蛋白③细胞色素C ④过氧化氢酶。
3.以下哪一种氨基酸的侧链基团的pK值接近生理pH：
①Glu ②Lys ③Cys ④His
4.对一个混合的氨基酸溶液，用下述哪种实验，可以检出其中的酪氨酸？
①Sakaguchi reaction
②Millon reaction
③Xanthoproteic reaction
④Adamkiewicz Hopkins cole reaction
5.tRNA分子必须能：
①识别密码子②识别反密码子
③区别一个氨基酸与另一个氨基酸④识别DNA分子
6.下列的哪一些是蛋白质合成的步骤？
①tRNA结合到30S核糖体亚基上
②tRNA结合到70S核糖体上
③氨基酸通过氨酰合成酶连到核糖体上
7.活性部位存在于：
①酶分子上②蛋白质分子上③底物分子上.
8.酶之所以能加快反应速度是由于：
①和底物结合②降低反应活化能③增加反应自由能
9.共价调节酶活力的实质是由于：
①酶和底物共价结合
②酶和产物共价结合
③通过其它酶以共价方式修饰它们的结构，从而调节酶的活性形式与失活形式
相互转变。
10.同工酶：
①结构是相同的②功能是相同的③都是来自人体同一组织
11.测定酶活力时：
①温度会影响测定结果
②温度愈高，酶活力愈大
③温度愈低，酶活力愈大
12.丙酮酸及α-酮戊二酸脱氢反应中，哪些辅酶是不需要的：
①生物素②硫辛酸③NAD+④FAD
⑤TPP ⑥CoA ⑦NADP+.
13.戊糖磷酸循环可使：
①葡萄糖完全氧化成CO2和H2O
②产生NADPH
③产生葡萄糖-1-磷酸，可参加糖原合成
④产生甘油，可参加脂肪合成
⑤产生戊糖，可参加核酸的合成。
14.肝糖原可由葡萄糖-6-磷酸在肝脏中生成
①系降解作用（磷酸化酶）的逆转
②需要辅酶A参加
③需要UDPG参加
④需要分枝酶参加
⑤是需能反应
15.假如用14C标记葡萄糖第五个碳原子，则3-磷酸甘油酸中，哪个碳原子将被标记？
14COO- COO- COO-
CHOH 14CHOH CHOH
CH2O P CH2O P 14CH2O P
①②③
16.硫酸铵盐析法纯化蛋白质：
①往往用于一系列纯化步骤的早期
②往往用于一系列纯化步骤的晚期
③是根据蛋白质的分子量来分离它们的
17.离子交换层析中，洗脱蛋白质常采用：
①梯度洗脱②改变温度③改变洗脱液的流速
18.使用Sephadex做凝胶过滤实验时：
①必须考虑不同交联度凝胶所允许的最大流体静力压
②与流体静力压无关
③压力愈大，分离愈好。
19.常用的蛋白质溶液脱盐方法是：
①离子交换层析②凝胶过滤③聚丙烯酰胺凝胶电泳
20.在组织培养中，细胞生长最快的时期是：
①平台期②对数期③早对数期
三.问答题，共56分。
1.有一条肽链，用溴化氰切割后得到三个肽段，它们的顺序分别是：
Asn.Tyr.Gly.Thr.Tyr.Gly.Met
Ala.Glu.Arg.Thr.Leu.Asn.Met
Glu.Ala.Val.Gly.Phe.Ser.Asp.Ala.Met
用胰凝乳蛋白酶水解得到的肽段中，有一个肽的顺序已测出为：Gly.Met.Glu.Ala.Val.Gly.Phe还有一个肽的氨基酸组成（5.7NHCl水解）是：Leu.Asp.Met请排出该肽链的一级结构。（10分）
2.用RNaseT1限制降解tRNA，得到一个长度为13个核苷酸的片段，用RNaseT1完全降解该片段，得到的产物（I）是：(a)ApCpApGp；(b)pGp；(c)ApCpU；
(d)ApApUpApGp。用RNaseI完全降解，得到的产物(II)是：(a)ApGpApApUp；
(b) pGpApCp；(c)U；(d)ApGpApCp，试写出该片段的碱基序列，并加以解释。（6分）
3.比较在染色体复制和转录过程中，引入一个错误碱基的后果。（4分）
4.给出竞争性抑制、无竞争性抑制和非竞争性抑制作用的双倒数图。（4分）
5.碳酸酐酶催化H2O+CO2 ←→H2CO3，此酶的分子量为30000，现有10ug纯酶，
在37?下一分钟催化0.3gCO2发生水合作用，求此酶的转换数。（5分）
6.讨论有机含硫化合物在下列生物体系中的存在和意义。（可从以下方面考虑：存在：①氨基酸及蛋白质（酶）；②维生素及辅因子。意义：①蛋白质的结构；
②氧化还原反应；③转移反应中分子的“活化”：（a）糖代谢；（b）脂类代谢。）（5分）
7.主要的代谢物质存在着不同的合成与分解途径，也就是说合成代谢与分解代谢的途径不是一种简单的可逆反应。请以脂肪酶的合成代谢与分解代谢为例，说明上述基本原理，并讨论上述现象的意义。（5分）
8.丙氨酸在肝中，如何生成尿素？指出其中氮所经过的代谢途径。（5分）
9.用图解说明葡萄糖-6-磷酸和丙酮酸处于物质代谢中的关键地位。（5分）
10.下列每分子底物在细胞匀浆中完全氧化，产生多少分子ATP？（假设酵解、三羧酸循环及氧化磷酸化均正常进行），①丙酮酸；②NADH；③果糖-1，6-二磷酸；④磷酸烯醇式丙酮酸（4分）
11.亲和层析的基本原理是什么？为什么要在载体和配基间加个“手臂”？（2分）
12.现有已去除核酸的鼠肝细胞抽提物，从其中提纯一种酶,已知前三步提纯方法依次是：①硫酸铵盐析→②离子交换层析→③凝胶过滤。试问：从①→②及从②→③各需要对样品进行什么处理？（2分）
生物化学重点及难点归纳总结 武汉大学生命科学学院生化的内容很多,而且小的知识点也很多很杂,要求记忆的内容也很多.在某些知识点上即使反复阅读课本,听过课后还是难于理解.二则由于内容多,便难于突出重点,因此在反复阅读课本后找出并总结重点难点便非常重要,区分出需要熟练掌握和只需了解的内容. 第一章: 氨基酸和蛋白质 重点:1.氨基酸的种类和侧链,缩写符号(单字母和三字母的),能够熟练默写,并能记忆在生化反应中比较重要的氨基酸的性质和原理 2.区分极性与非极性氨基酸,侧链解离带电荷氨基酸,R基的亲水性和疏水性,会通过利用pK值求pI值,及其缓冲范围. 3.氨基酸和蛋白质的分离方法(实质上还是利用蛋白质的特性将其分离开来,溶解性,带电荷,荷质比,疏水性和亲水性,分子大小(也即分子质量),抗原-抗体特异性结合. 4.蛋白质的一级结构,连接方式,生物学意义,肽链的水解. 第二章: 蛋白质的空间结构和功能 重点: 1.研究蛋白质的空间结构的方法(X射线晶体衍射,核磁共振光谱) 2.构筑蛋白质结构的基本要素(肽基,主链构象,拉氏图预测可能的构造,螺旋,转角,片层结构,环形构象,无序结构) 3.纤维状蛋白:角蛋白,丝心蛋白,胶原蛋白,与之相关的生化反应,特殊性质,,及其功能的原理. 4.球状蛋白和三级结构(特征及其原理,基元及结构域,三级结构揭示进化上的相互关系.蛋白质的折叠及其原理,推动蛋白质特定构象的的形成与稳定的作用力,疏水作用,氢键,静电相互作用,二硫键. 5.寡聚体蛋白及四级结构(测定蛋白质的亚基组成.,寡聚体蛋白存在的意义及其作用 原理) 6.蛋白质的构象与功能的关系(以血红蛋白和肌红蛋白作为例子进行说明,氧合曲线,协同效应,玻尔效应) 第三章: 酶 重点:1.酶的定义及性质,辅助因子.活性部位 2.酶的比活力,米氏方程,Vmax,Km,转换数,Kcat/Km确定催化效率,双底物酶促反应动力学.对酶催化效率有影响的因素,及其作用机理. 3.酶的抑制作用,竞争性抑制剂,非竞争性抑制剂,反竞争性抑制剂,不可逆抑制剂,及其应用. 4.酶的作用机制:转换态,结合能,邻近效应,酸碱催化,共价催化及其原理,会举例.溶菌酶的作用机制,丝氨酸蛋白酶类及天冬氨酸蛋白酶类的结构特点及作用机制. 5.酶活性调节,酶原激活,同工酶,别构酶,多功能酶和多酶复合物. 及其与代谢调节的关系及原理.
以下每一考题下面有A、B、C、D、E 5个备选答案，请从中选一个最佳答案，并在答题卡将相应题号的相应字母所属方框涂黑。 1．下列不含极性链的氨基酸是 A．酪氨酸 B．苏氨酸 C．亮氨酸 D．半脱氨酸 E．丝氨酸 2．能够参与合成蛋白质的氨基酸的构型为 A．除甘氨酸外均为L系 B．除丝氨酸外均为L系 C．均只含a—氨基 D．旋光性均为左旋 E．以上说法均不对 3．有关酶的各项叙述，正确的是 A．蛋白质都有酶活性 B．酶的底物均是有机化合物 C．酶在催化时都不需辅助因子 D．酶不见得都是蛋白质 E．酶对底物有绝对的专一性 4．酶只所以能加速化学反应，是因为 A．酶能使反应物活化 B．酶能降低反应的活化能
C．酶能降低底物能量水平 D．酶能向反应体系提供能量 E．以上均正确 5．Km值的概念是 A．达到Vmax所需底物的浓度 B．与底物毫无关系 C．酶一底物复合物的解离常数 D．酶在同一反应中Km值随浓度而变化E．是达到1/2Vmax时的底物浓度 6．酶的竞争性抑制剂具有哪种效应A．Km值降低，Vmax变大 B．Km值增大，Vmax变大 C．Km值不变，Vmax不变 D．Km值增大，Vmax不变 E．Km值和Vmax均降低 7．乳酸脱氢酶能够形成几种同工酶A．5种 B．7种 C．3种 D．4种 E．6种 8．真核生物的mRMA大多数在5’端有
A．多种终止密码子 B．一个帽子结构 C．一个起始密码子 D．一个聚A尾巴 E．多个CCA序列 9．关于RNA的叙述，错误的是 A．主要有mRNA、tRNA、rRNA三大类B．胞质中只有一种RNA，即mRNA C．最小的一种RNA是tRNA D．原核生物没有hmRNA E．原核生物没有SnRNA 10．只有一个遗传密码的氨基酸是 A．甘氨酸和蛋氨酸 B．精氨酸和丝氨酸 C．色氨酸和甲硫氨酸 D．天门冬氨酸和赖氨酸 E．脯氨酸和亮氨酸 11．下列单糖在小肠中吸收速率最高的是A．葡萄糖 B．甘露糖 C．阿拉伯糖 D．果糖
生物化学实验 实验基本原理 1 有效数字计算（结合电子天平的应用等） 加减法： 进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。 乘除法： 进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。 2 误差分析 误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小，测定值越准确，即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。 绝对误差= 测定值- 真实值 相对误差= 绝对误差÷真实值×100% 一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。 3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握） 精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。 绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号） 相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%
例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下： 分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负） 16.1% 0.1% 15.8% 0.2% 16.3% 16.0% 0.3% 16.2% 0.2% 15.6% 0.4% 平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2% 平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25% 在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度： 两次分析结果的差值÷平均值×100% 4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。 第1章分光光度技术 分光光度技术是光学（光谱）分析技术的一种，它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。 一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理 1、讨论的波长范围：200～400nm的紫外光区和400～760nm的可见光区。 人肉眼可见的光线称可见光，波长范围在400～760nm；
生物化学实验的答案 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】
生物化学实验的答案 一、理论考试部分 1.醋酸纤维薄膜电泳时，点样的一端应靠近电极的哪一端为什么 2. 答：负极。因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 3.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的意义是什么？ 答：空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。 4.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理？ 答：血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 5.何谓R f值？影响R f值的主要因素是什么？ 答：Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关， 6.什么是盐析盐析会引起蛋白质变性吗一般我们用什么试剂做盐析的实验 答：盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析。 7.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？ 答：还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。 8.依据我们所做的实验，说明影响蛋白质沉淀的因素是什么影响蛋白质变性的因素是什 么沉淀和变性有何联系 答：水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。 8. 什么是碘值脂肪的不饱和程度越大，碘值越大吗在测定碘值的实验中，氯仿的作用是什么 答：每100g脂肪所吸收的碘的克数，即脂肪的碘值。脂肪的不饱和度越大，碘值就越大。氯仿作为溶剂，去溶解脂肪。
教学目标： 1.掌握蛋白质的概念、重要性和分子组成。 2.掌握α-氨基酸的结构通式和20种氨基酸的名称、符号、结构、分类；掌握氨基酸的重要性质；熟悉肽和活性肽的概念。 3.掌握蛋白质的一、二、三、四级结构的特点及其重要化学键。 4.了解蛋白质结构与功能间的关系。 5.熟悉蛋白质的重要性质和分类 导入：100年前，恩格斯指出“蛋白体是生命的存在形式”；今天人们如何认识蛋白质的概念和重要性？ 1839年荷兰化学家马尔德（G.J.Mulder）研究了乳和蛋中的清蛋白,并按瑞典化学家Berzelius的提议把提取的物质命名为蛋白质（Protein，源自希腊语，意指“第一重要的”）。德国化学家费希尔(E.Fischer)研究了蛋白质的组成和结构，在1907年奠立蛋白质化学。英国的鲍林(L.Pauling)在1951年推引出蛋白质的螺旋；桑格(F.Sanger)在1953年测出胰岛素的一级结构。佩鲁茨(M.F.Perutz)和肯德鲁(J.C.kendrew) 在1960年测定血红蛋白和肌红蛋白的晶体结构。1965年，我国生化学者首先合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素（insulin）。 蛋白质是由L-α-氨基酸通过肽键缩合而成的，具有较稳定的构象和一定生物功能的生物大分子（biomacromolecule）。蛋白质是生命活动所依赖的物质基础，是生物体中含量最丰富的大分子。 单细胞的大肠杆菌含有3000多种蛋白质，而人体有10万种以上结构和功能各异的蛋白质，人体干重的45%是蛋白质。生命是物质运动的高级形式，是通过蛋白质的多种功能来实现的。新陈代谢的所有的化学反应几乎都是在酶的催化下进行的，已发现的酶绝大多数是蛋白质。生命活动所需要的许多小分子物质和离子，它们的运输由蛋白质来完成。生物的运动、生物体的防御体系离不开蛋白质。蛋白质在遗传信息的控制、细胞膜的通透性，以及高等动物的记忆、识别机构等方面都起着重要的作用。随着蛋白质工程和蛋白质组学的兴起和发展，人们对蛋白质的结构与功能的认识越来越深刻。 第一节蛋白质的分子组成 一、蛋白质的元素组成 经元素分析，主要有C（50%～55%）、H（6%～7%）、O（19%～24%）、N（13%～19%）、S（0%～4%）。有些蛋白质还含微量的P、Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo、I等。 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16%。因此，可以用定氮法来推算样品中蛋白质的大致含量。 每克样品含氮克数×6.25×100=100g样品中蛋白质含量（g%） 二、蛋白质的基本组成单位——氨基酸 蛋白质在酸、碱或蛋白酶的作用下，最终水解为游离氨基酸（amino acid），即蛋白质组成单体或构件分子。存在于自然界中的氨基酸有300余种，但合成蛋白质的氨基酸仅20种（称编码氨基酸），最先发现的是天门冬氨酸（1806年），最后鉴定的是苏氨酸（1938年）。 （一）氨基酸的结构通式 组成蛋白质的20种氨基酸有共同的结构特点： 1．氨基连接在α- C上，属于α-氨基酸（脯氨酸为α-亚氨基酸）。 2．R是側链，除甘氨酸外都含手性C，有D-型和L-型两种立体异构体。天然蛋白质中的氨基酸都是L-型。 注意：构型是指分子中各原子的特定空间排布，其变化要求共价键的断裂和重新形成。旋光性是异构体的光学活性，是使偏振光平面向左或向右旋转的性质，（-）表示左旋，（+）表示右旋。构型与旋光性没有直接对应关系。 （二）氨基酸的分类 1．按R基的化学结构分为脂肪族、芳香族、杂环、杂环亚氨基酸四类。 2．按R基的极性和在中性溶液的解离状态分为非极性氨基酸、极性不带电荷、极性带负电荷或带正电荷的四类。 带有非极性R（烃基、甲硫基、吲哚环等，共9种）：甘（Gly）、丙（Ala）、缬（Val）、亮（Leu）、异亮（Ile）、苯丙（Phe）、甲硫（Met）、脯（Pro）、色（Trp） 带有不可解离的极性R（羟基、巯基、酰胺基等，共6种）：丝（Ser）、苏（Thr）、天胺（Asn）、谷胺（Gln）、酪（Tyr）、半（Cys）带有可解离的极性R基（共5种）：天（Asp）、谷（Glu）、赖（Lys）、精（Arg）、组（His），前两个为酸性氨基酸，后三个是碱性氨基酸。 蛋白质分子中的胱氨酸是两个半胱氨酸脱氢后以二硫键结合而成，胶原蛋白中的羟脯氨酸、羟赖氨酸，凝血酶原中的羧基谷氨酸是蛋白质加工修饰而成。 （三）氨基酸的重要理化性质 1．一般物理性质 α-氨基酸为无色晶体，熔点一般在200 oC以上。各种氨基酸在水中的溶解度差别很大（酪氨酸不溶于水）。一般溶解于稀酸或稀碱，
------------------------------------------------------------精品文档-------------------------------------------------------- 生物化学习题 一、最佳选择题：下列各题有A、B、C、D、E五个备选答案，请选择一个最佳答案。 1、蛋白质一级结构的主要化学键是( ) A、氢键 B、疏水键 C、盐键 D、二硫键 E、肽键 D*2、蛋白质变性后可出现下列哪种变化( ) A、一级结构发生改变 B、构型发生改变 C、分子量变小 D、构象发生改变 E、溶解度变大 3、下列没有高能键的化合物是( ) A、磷酸肌酸 B、谷氨酰胺 C、ADP D、1，3一二磷酸甘油酸 E、磷酸烯醇式丙酮酸 4、嘌呤核苷酸从头合成中，首先合成的是( ) A、IMP B、AMP C、GMP D、XMP E、ATP 5、脂肪酸氧化过程中，将脂酰～SCOA载入线粒体的是( ) 、柠檬酸B、肉碱C A、ACP A E、乙酰辅酶、乙酰肉碱D) 、体内氨基酸脱氨基最主要的方式是( b6 A、氧化脱氨基作用、联合脱氨基作用 B 、转氨基作用 C D、非氧化脱氨基作用 、脱水脱氨基作用E ) 、关于三羧酸循环，下列的叙述哪条不正确d7( FADH2 和NADH、产生A B、有GTP生成 C、氧化乙酰COA D、提供草酰乙酸净合成 E、在无氧条件下不能运转 c8、胆固醇生物合成的限速酶是( ) A、HMG COA合成酶 B、HMG COA裂解酶 C、HMG COA还原酶 D、乙酰乙酰COA脱氢酶 E、硫激酶 9、下列何种酶是酵解过程中的限速酶( ) A、醛缩酶 B、烯醇化酶 C、乳酸脱氢酶 D、磷酸果糖激酶 E、3一磷酸甘油脱氢酶
生物化学实验 （二）
绪论 ?随着生物化学的发展和生物化学教学内容的不断丰富，生物化学实验也在不断更新和提高。 ?本门课程在以往教学工作的基础上，结合生物化学实验教学，力求使学生能够更加深刻地学习生物化学课程。 本实验课实验项目覆盖了当今生物化学研究中常用的技术和方法。
绪论 一、实验目的 ?掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法； ?掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能； ?培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。
?二、通过生物化学实验应该做到 ?学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。 ?训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。 ?学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验。 ?掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。
?三、实验室规则 ?１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退。 ?２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因；贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作；发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。仪器使用完毕后，一定要填写使用记录。
绪论 ?３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放。 ?４、注意安全。对于有毒、腐蚀的试剂应避免其直接接触人体及衣物；乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。 ?５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔。实验结束后应将实验台整理好，并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，方可离开实验室。
一、糖类化学 1、糖的概念与分类 糖是多羟基的醛或酮及其缩聚物和某些衍生物。 单糖是最简单的糖，不能再被水解为更小的单位。 寡糖是由2~10个分子单糖缩合而成，水解后产生单糖。 低聚糖通常是指20以下的单糖缩合的聚合物 多糖是由多个单糖分子缩合而成。 多糖中由相同的单糖基组成的称同多糖，不相同的单糖基组成的称杂多糖。 按其分子中有无支链，则有直链、支链多糖之分 按其功能不同，可分为结构多糖、贮存多糖、抗原多糖等 按其分布来说，则又有胞外多糖、胞多糖、胞壁多糖之别 如果糖类化合物含有非糖物质部分，则称糖缀合物或复合糖类，例如糖肽、糖脂、糖蛋白等。 2、单糖的构型、结构、构象 1）构型是指一个分子由于其中各原子特有的固定的空间排列，而使该分子所具有的特定的立体化学形式。当某一物质由一种构型转变为另一种构型时，要求共价键的断裂和重新形成。★2）单糖的D-、L-型：以距羰基最远的不对称碳原子为准，羟基在左面的为L构型，羟基在右面为D构型。 3）环状结构——葡萄糖的某些性质不能用链式结构来解释: 葡萄糖不似醛发生NaHSO3和Schiff试剂的加成反应；葡萄糖不能和醛一样与两分子醇形成缩醛，只能与一分子醇反应；葡萄糖溶液有变旋现象。 4）一般规定半缩醛碳原子上的羟基(称为半缩醛羟基)与决定单糖构型的碳原子上的羟基在同一侧的称为α-葡萄糖，不在同一侧的称为β-葡萄糖。 5) 构象指一个分子中，不改变共价键结构，仅靠单键的旋转或扭曲而改变分子中基团在空间的排布位置，而产生不同的排列方式。 3、寡糖 寡糖是少数单糖（2-10个）缩合的聚合物。 低聚糖通常是指20以下的单糖缩合的聚合物。 4、多糖 多糖是由多个单糖基以糖苷键相连而形成的高聚物。 多糖完全水解时，糖苷键裂断而成单糖。 4.1 淀粉 1）直链淀粉：葡萄糖分子以α（1-4）糖苷键缩合而成的多糖链。可溶于热水、250~300个糖分子、遇碘呈紫蓝色 2）支链淀粉：由多个较短的1、4-苷键直链结合而成，不可溶于热水、可溶于冷水、＞6000个糖分子、遇碘呈紫红色 3）淀粉的降解：在酸或淀粉酶作用下被降解，终产物为葡萄糖： 淀粉→红色糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖 4.2 糖原：α-D-葡萄糖多聚物 1）结构：同支链淀粉；区别在于分支频率及分子量为其二倍。 2）分布：主要存在于动物肝、肌肉中。 3）特点：遇碘呈红色。 4）功能：同淀粉，亦称动物淀粉。其合成与分解取决于血糖水平 4.3 纤维素--植物细胞壁结构多糖 1）结构：由D-葡萄糖以β（1-4）糖苷键连接起来的无分支线形聚合物。
巢湖职业技术学院生物化学模拟试题2 名词解释（5×3） 1酶原 2糖有氧氧化 3底物水平磷酸化 4生物转化 5 DNA变性 填空（50×0.5） 1 氨基酸的结构通式------------------------- 2 蛋白质胶体稳定存在受------------------，--------------------两个因素影响 3 用盐析法可将血浆蛋白分为--------------.-----------------.----------------------三 部分 4 酶的催化作用特点--------------------, ------------------,-------------------,---------------------- 5 DNA复制的特点有-----------------.----------------.---------------------.------------------- 6 物质代谢调节的三种方式是---------------------.----------------------.------------------------ 7 维生素根据其溶解性分为----------------------，----------------------两大类 8 糖的分解代谢方式有-------------------，-------------------------，
-------------------- ， 9 磷酸戊糖途径的主要产物有-------------------，--------------------- 10在糖原合成时形成主链糖苷键是-------------------------，侧链是----------------------- 11酯酰基进入线粒体的载体是-------------------------。 12酰基B氧化可分--------------.-----------------.---------------------.------------------- 14临床氨基酸制剂的种类-------------------------，--------------------- 15氨基酸脱氨基的方式有--------------------，-----------------------，------------------- 16氨的主要代谢去路是在-------- 合成----------- 17一碳单位的载体是---------------------- 18氧代谢途径的类型有----------------，------------------，---------------------- 19呼吸链的类型有------------------------，-------------------------- 20核苷酸的合成代谢方式有-----------------------------，-------------------- 21生物转化的特点---------------，-------------------，---------------------- 22酸碱平衡紊乱时，根据产生的原因可分为-------------------，--------------------- 选择题（15×2） 1，维持蛋白质级结构的主要化学键是（） A.肽键 B.氢键 C.二硫键 D.离子键 2．100ml蛋白质溶液其含氮量为1.6克那么此溶液蛋白质浓度是（） A.6.25 g/L B.62.5 g/L C.10 g/L D.100g/L 3.温度是影响酶反应的因素之一酶在人体内的最适温度是（） A.３５-４０℃ B.３７℃ C.２５℃ D.２５-４０℃ 4.重金属元素中毒是因为酶的什么基团与其结合使酶失活（）
生物化学实验报告 动物营养研究所 树润 2015.10.12 猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活性测定一．实验目地 1.通过实验了解活性物质的分离提取。 2.了解超氧化物歧化酶的基本功能与应用。 二．实验原理 超氧化物歧化酶是一种酸性蛋白，是唯一以自由基为底物 的酶，具有清除自由基的功能酶，在酶分子上共价连接金属辅 基，因此它对热、PH、以及某些理化性质表现出异常的稳定性。 该酶首次从牛红细胞中分离得到，是一种蓝色含铜蛋白，之后， 研究发现该蛋白酶具有催化氧发生歧化反应的能力，因此将其 命名为超氧化物歧化酶1-2。超氧化物歧化酶是一种能专一地清 除超氧离子自由基（O2-）的金属酶，它具有抗衰老、抗辐射、 抗炎抗癌等作用，因而在医药（如关节炎、红斑狼疮等疾病的 治疗3）、化妆品(有防晒抗炎效果4)、食品工业（SOD灵芝菌5 等）等方面具有了广泛的应用前景。 超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体的一种金属酶, 可催化超氧阴离子自由基(O2-)与H+发生歧化反应, 生成H2O2和 O2。SOD催化下述反应：2H++2O2-→H2O2+O2。
超氧化物歧化酶按照它所含金属离子的不同，可分为 Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体，呈 蓝绿色；Mn-SOD呈紫红色；Fe-SOD呈黄褐色。 SOD提取、纯化制备方法各异, 常用方法有经典的溶剂沉淀法、盐析法、超滤法和层析法等6-7。本实验采用有机溶剂沉淀法8以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可用以下方法：邻苯三酚自氧化法9、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。 该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单 位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率 达50%的酶量定义为一个酶单位。 样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮 蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈现蓝色。在一 定围，溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比，可 用比色法测定，测定围1-1000μg。 三．实验试剂与器材 1.实验试剂 ACD抗凝剂、0.9%Nacl、丙酮、95%乙醇、氯仿、考马斯 亮蓝G-250、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/L EDTA钠盐 溶液、3mmol/L邻苯三酚溶液等 2.实验器材
绪论 掌握：生物化学、生物大分子和分子生物学的概念。 【复习思考题】 1. 何谓生物化学？ 2. 当代生物化学研究的主要内容有哪些 蛋白质的结构与功能 掌握：蛋白质元素组成及其特点；蛋白质基本组成单位--氨基酸的种类、基本结构及主要特点；蛋白质的分子结构；蛋白质结构与功能的关系；蛋白质的主要理化性质及其应用；蛋白质分离纯化的方法及其基本原理。 【复习思考题】 1. 名词解释：蛋白质一级结构、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、蛋白质四级结构、肽单元、模体、结构域、分子伴侣、协同效应、变构效应、蛋白质等电点、电泳、层析 2. 蛋白质变性的概念及本质是什么有何实际应用？ 3. 蛋白质分离纯化常用的方法有哪些其原理是什么？ 4. 举例说明蛋白质结构与功能的关系 核酸的结构与功能 掌握：核酸的分类、细胞分布，各类核酸的功能及生物学意义；核酸的化学组成；两类核酸（DNA与RNA）分子组成异同；核酸的一级结构及其主要化学键；DNA 右手双螺旋结构要点及碱基配对规律；mRNA一级结构特点；tRNA二级结构特点；核酸的主要理化性质（紫外吸收、变性、复性），核酸分子杂交概念。 第三章酶 掌握：酶的概念、化学本质及生物学功能；酶的活性中心和必需基团、同工酶；酶促反应特点；各种因素对酶促反应速度的影响、特点及其应用；酶调节的方式；酶的变构调节和共价修饰调节的概念。 第四章糖代谢 掌握：糖的主要生理功能；糖的无氧分解（酵解）、有氧氧化、糖原合成及分解、糖异生的基本反应过程、部位、关键酶（限速酶）、生理意义；磷酸戊糖途径的生理意义；血糖概念、正常值、血糖来源与去路、调节血糖浓度的主要激素。 【复习思考题】 1. 名词解释：.糖酵解、糖酵解途径、高血糖和糖尿病、乳酸循环、糖原、糖异生、三羧酸循环、活性葡萄糖、底物水平磷酸化。 2．说出磷酸戊糖途径的主要生理意义。 3．试述饥饿状态时，蛋白质分解代谢产生的丙氨酸转变为葡萄糖的途径。
函授站（教学点） ： 海 宁 班级： 姓名： 学号： 密封线内请不要答题 《生物化学》模拟试题（B ） 一、单项选择题（在每小题的五个备选答案中，选出一个正确答案，并将正确答案的序号填在题干的括号内，每小题1分，共30分） （ ）1．NADH 氧化呼吸链的P/O 比值接近 A ． 1 B. 2 C ．3 D. 4 E ．12 （ ）2．骨骼肌和心肌中氨基酸脱氨基的主要方式是 A ．转氨基作用 B.联合脱氨基作用 C ．氧化脱氨基作用 D.嘌呤核苷酸循环 E ．以上都不正确 （ ）3．维系蛋白质二级结构稳定最重要的键或作用力是 A ．离子键 B ．二硫键 C ．氢键 D ．疏水作用力 E ．肽键 （ ）4．一分子CH 3CO~SCoA 进入三羧酸循环一周，产生 A . 3个NADH ，1个FADH 2，1个ATP B . 3个NADH ，1个FADH 2，1个GTP C . 2个NADH ，2个FADH 2，12个ATP D . 4个NADH ，1个FADH 2，1个GTP E ．1个NADH ，1个FADH 2，12个ATP （ ）5．生物转化第二相反应中，最常见的是 A .与葡萄糖醛酸结合 B .与硫酸结合 C .与谷胱甘肽结合 D .与甘氨酸结合 E .与甲基结合 （ ）6．体内嘌呤核苷酸的分解代谢终产物是 A ．NH 3 B ．尿素 C ．β-丙氨酸 D ．β-氨基异丁酸 E ．尿酸 （ ）7．转氨酶的辅酶是 A ．磷酸吡哆醛 B ．焦磷酸硫胺素 C ．生物素 D ．四氢叶酸 E ．泛酸 （ ）8．PCR 技术的基本反应步骤，正确的是 A ．退火→变性→延伸 B ．变性→退火→延伸 C ．延伸→变性→退火 D ．退火→延伸→变性 E ．变性→延伸→退火 （ ）9．G 蛋白的活化型是 A ．αβγ三聚体与GDP 结合 B ．α亚基与GDP 结合 C ．α亚基与GTP 结合 D ．αβγ三聚体与GTP 结合 E ．以上都不正确 （ ）10．组成多聚核苷酸的骨架成分是 A ．碱基与戊糖 B ．碱基与磷酸 C ．碱基与碱基 D ．戊糖与磷酸 E ．戊糖与戊糖 （ ）11．关于酶活性中心的叙述，正确的是 A ．酶原有能发挥催化作用的活性中心 B ．由一级结构上相互邻近的氨基酸组成 C ．必需基团存在的唯一部位 D ．均由亲水氨基酸组成 E ．含结合基团和催化基团 （ ）12．合成一分子尿素需要消耗 A ．1个高能键 B ．2个高能键 C ．3个高能键 D ．4个高能键 E ．6个高能键 （ ）13．合成血红素的原料是 A ．乙酰CoA 、甘氨酸、Fe 3+ B ．琥珀酰CoA 、甘氨酸、Fe 2+ C ．乙酰CoA 、甘氨酸、Fe 2+ D ．丙氨酰CoA 、组氨酸、Fe 2+ E ．草酰CoA 、丙氨酸、Fe 2+ （ ）14．一碳单位的载体是 Ａ．四氢叶酸 Ｂ．二氢叶酸 Ｃ．叶酸 Ｄ．泛酸 Ｅ．硫辛酸 （ ）15．苯丙酮尿症（PKU ）是由于缺乏 A ．苯丙氨酸羟化酶 B ．酪氨酸酶 C ．酪氨酸羟化酶 D ．苯丙酮酸氧化酶 E ．多巴脱羧酶 （ ）16．原核生物复制时起主要作用的DNA 聚合酶是 A ．DNA 聚合酶Ⅰ B ．DNA 聚合酶Ⅱ C ．DNA 聚合酶 Ⅲ D ．DNA 聚合酶δ E ．DNA 聚合酶α （ ）17．转录调节因子结构中，常见的DNA 结合域结构形式是 A ．α螺旋-环-α螺旋结构 B ．酸性α螺旋结构 C ．亮氨酸拉链结构 D ．谷氨酰胺富含域结构 E ．锌指结构 （ ）18．关于逆转录酶，下列说法错误的是．．．． A ．有以RNA 为模板的dNTP 聚合酶活性 B ．有以DNA 为模板的dNTP 聚合酶活性 C ．有RNA 水解酶活性 D ．有DNA 水解酶活性 E ．最开始在RNA 病毒中发现 （ ）19．摆动配对是指以下哪种配对不严格遵守碱基配对规律 A ．反密码的第1位碱基与密码的第3位碱基 B ．反密码的第3位碱基与密码的第1位碱基 C ．反密码的第3位碱基与密码的第3位碱基 D ．反密码的第3位碱基与密码的第2位碱基 E ．反密码的第1位碱基与密码的第1位碱基 （ ）20．第三信使负责 A ．细胞间的信息传递 B ．细胞浆内的信息传递 C ．细胞核内的信息传递 D ．细胞核内外的信息传递 E ．细胞膜内外的信息传递 （ ）21．关于血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，下列说法正确的是 A ．形成明显的六条区带，由快到慢依次为：清蛋白、α1、α2、β、γ、δ球蛋白 B ．形成明显的五条区带，由快到慢依次为：清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白 C ．形成明显的五条区带，由快到慢依次为：α1、α2、β、γ、δ球蛋白 D ．形成明显的五条区带，由快到慢依次为：清蛋白、α、β1、β2、γ球蛋白 E ．形成几十条区带 （ ）22．关于2，3-BPG ， 下列说法最正确的是 A ．是2，3-二磷酸甘油酸，是所有组织细胞糖酵解过程中的关键中间产物之一 B ．通过降低Hb 与O 2的亲和力，使Hb 的T 构象更稳定，促进O 2向组织释放 C ．2，3-BPG 浓度增高时使Hb 与O 2的亲和力升高，提高血液运O 2能力 D ．2，3-BPG 存在于红细胞内，对红细胞利用氧进行有氧氧化起到重要调控作用 E ．2，3-BPG 存在于所有细胞中，对细胞的有氧氧化起到重要的调节作用 ( ) 23．某患者血液中结合胆红素明显增高，而游离胆红素正常，同时尿胆红素检查阳性， 粪便呈现白陶土色，该患者的黄疸类型最可能是： A ．溶血性黄疸 B. 肝细胞性黄疸 C ．阻塞性黄疸 D.以上三种都有可能出现 E ．以上三种都不可能出现 ( ) 24．下列哪一组分子几乎只能在肝脏．． 合成 Ａ．胆固醇、脂酸、初级胆汁酸 B. 初级胆汁酸、酮体、糖原 C ．尿素、胆固醇、酮体 D. 初级胆汁酸、酮体、尿素 E. 糖原、胆色素、尿素 ( )25．酮体合成与胆固醇合成都需要的酶是 A ．HMG CoA 合酶 B ．HMG CoA 还原酶 C ．HMGCoA 裂解酶
食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不 许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程中， 掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作， 如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆 放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时
二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是200～980或相对分子质量范围是32 000～160 000时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度20～28，这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定，所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽属糖类，但本身没有甜味，是一种白色粉末，不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一部分淀粉溶解在水里，另一部分悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后，一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用，发生水解反应，生成麦芽糖；余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，继续进行水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下，水解为人体可吸收的葡萄糖，供人体组织的营养需要。反应过程为：（C6H12O5）m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖
生物化学实验 一、名词解释： 分配层析法电泳同工酶酶活性分光光度法层析技术比活力 二、填空题： 1. 测定蛋白质含量的方法有，，和。 2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用测定未分解的H2O2。 3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备_____________胶，其自由基的引发剂是，催化剂是______________；光聚合法适于制备大孔径的_________________胶，催化剂是______________。 4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________，_______________和________________。 5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管__________且对称放入离心机。 6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈，Km愈大，表示E对S 的亲合力愈。 7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须_________（打开、合上）样品池翻盖。 8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的密切相关。 9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。 10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：和。11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________和________________。 三、问答题： 1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。 2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。 3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？ 参考答案： 生物化学实验 一、名词解释： 1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。 3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。
生物化学基本内容 学习方法 生物化学是是在分子水平上研究生物体的组成与结构、代谢及其调节的一门科学。其发展快、信息量丰富，有大量需要记忆的内容，因此学好它不是一件容易的事情。下面就如何学好生物化学这门课程谈一谈自己的浅见，希望能对学生们有所帮助。 1、选择好教材和参考书 目前市场上有各种各样的生物化学教材和一些参考书，如何选择适合自己的教材和参考书对于培养自己的学习兴趣，学好本学科十分重要。我个人认为应该准备三本教材和一本习题集：一本是简单的版本，便于理解和自学。如南京大学由郑集等编写的《普通生物化学》；一本是高级的版本，如北京大学王镜岩等编著的《生物化学》，阅读此类教科书便于对各章内容全面和深入的掌握；第三本应该是一本英文的原版教材，如DonaldVoet编著的《FundamentalsofBiochemistry》和ChristopheK.Mathews编写的《Biochemistry》。英文版教材的特点是新、印刷精美，图表多为彩图，通常还有配套的多媒体光盘，方便你自学。阅读一本好的英文生化教材，不仅对提高自己的专业英语水平，而且对理解各章节的内容，学好本学科是非常有帮助。 2、由表及里，循序渐进，课前预习，课后复习 根据研究内容，本课程可分为以下几部分：①重要生物分子的结构和功能：着重介绍蛋白质、核酸、酶、维生素等的组成、结构与功能。重点阐述生物分子具有哪些基本的结构?哪些重要的理化性质?以及结构与功能有什么关系等问题，同时要随时将它们进行比较。这样既便于理解，也有利于记忆。②物质代谢及其调节：主要介绍糖代谢、脂类代谢、能量代谢、氨基酸代谢、核昔酸代谢、以及各种物质代谢的联系和调节规律。此部分内容是传统生物化学的核心内容。学习这部分内容时，应注重学习各种物质代谢的基本途径，特别是糖代谢途径、三羧酸循环途径、糖异生途径和酮体代谢途径；各代谢途径的关键酶及生理意义；各代谢途径的主要调节环节及相互联系；代谢异常与临床疾病的关系等问题。③分子遗传学基础：重点介绍了DNA复制，DNA转录和翻译。学习这部分内容时，应重点学习复制、转录和翻译的基本过程，并从必要条件、所需酶蛋白和特点等方面对三个过程进行比较，在理顺本课程的基本框架后，就应全面、系统、准确地掌握教材的基本内容，并且找出共性，抓住规律。 3、学会做笔记 首先有一点必须强调，上课时学生的主要任务时是听老师讲课而不是做笔记，因此在课堂上要集中精力听讲，一些不清楚的内容和重要的内容可以笔录下来，以便课后复习和向老师求教。当然，条件好的同学可以买来录音设备，将老师的上课内容录下来，以供课后消化。另外，老师的讲稿大都做成了幻灯片，学生可从老师那里得到拷贝。 4、懂得记忆法 学习生物化学时，学生反映最多的问题是记不住学过的内容。关于此问题我的建议是：首先分清楚那些需要记忆，那些根本就不需要记忆。如氨基酸的三字母和单字母符号是需要记的，而许多生物分子的结构式并不需要记；其次明白理解是记忆之母，因此对各章内容，必须先对有关原理理解透，然后再去记忆；第三，记忆要讲究技巧，多想想方法。如关于必需氨基酸的记忆，可以将高等动物10种必需氨基酸的首写字母拼写成一句话：Tip MTV hall(需付小费的MTV厅)。 5、勤于动手，联系实际 这是由“学懂”通向“会做”的桥梁和提高考生在考试中的实践能力的重要保证。平时多做习题，多做实验，是你掌握本学科，取得比较理想的考试成绩的一个很重要的保证。 5、充分利用网络资源