MYCT-1基因真核表达载体的构建及鉴定
梅旭,刘政,邱广斌*
【摘要】摘要:目的构建MYCT-1(myc target)基因真核表达载体,观察其转染胃粘膜GES-1细胞系后的表达。方法用RT-PCR法合成MYCT-1 cDNA,克隆至表达载体pcDNA3.1上,测序验证无突变发生。将表达载体转染GES-1细胞,用RT-PCR和Western blot检测MYCT-1基因的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实成功克隆了MYCT-1 cDNA全长并正确插入了表达载体,在GES-1细胞中检测到MYCT-1mRNA和蛋白。结论成功构建了MYCT-1真核表达载体,可在GES-1细胞中稳定表达。
【期刊名称】中国实验诊断学
【年(卷),期】2010(014)008
【总页数】2
【关键词】关键词:MYCT-1;表达载体;转染
(Chin J Lab Diagn,2010,14:1161)
MYCT-1(myc target)基因是我室克隆的一个新基因,曾命名MTLC(myc target from laryngeal carcinoma cells)[1]。研究表明MYCT-1在多种肿瘤组织中表达降低,可能是一个新的抑癌基因[2-5]。为了进一步探讨MYCT-1的基因功能及在肿瘤发生中的可能机制,在本研究中,我们构建了MYCT-1基因的真核表达载体,并将其转染粘膜GES-1细胞系,以鉴定重组载体表达的稳定性。
1 材料与方法
1.1 材料TRIZOL试剂、RPMI1640培养基(Gibco-BRL公司),反转录酶、Taq 酶(Promega公司),Lipofectamin2000脂质体转染试剂盒、pcDNA3.1载体、