实验一家兔高钾血症及其抢救
【实验目的】
1. 通过静脉给钾，复制家兔高钾血症的动物模型。
2. 观察高血钾时心电图的异常改变。
3. 了解高血钾时，钾对心肌细胞的毒性作用，并自行设计高钾血症反应时的抢救方案
【实验原理】
高血钾可使心脏有效不应期缩短，兴奋性和传导性呈双相变化。血钾急剧增高时，由于严重传导阻滞和兴奋性消失而导致心跳停止。本实验旨在通过静脉给钾，复制高血钾症，通过观测心电图变化，了解高血钾症对心脏的影响。
【实验对象】家兔（雌雄不限）
【仪器与药品】
婴儿秤，兔固定台。心电图机，心电示波记录仪，离心机，火焰光度计。
20% 乌拉坦， 5% 及 10% 氯化钾。 4% 碳酸氢钠， 10% 氯化钙，葡萄糖 - 胰岛素溶液，肝素 - 生理盐水溶液。
小儿头皮针， 5ml 、 20ml 注射器， 5ml 抗凝试管。手术器械一套。
【步骤与方法】
1. 取家兔一只称重，耳缘静脉缓慢推注 20% 乌拉坦（４ ml/kg 体重）全麻。
2. 仰卧固定于兔台上，剪去颈部背毛。做颈部正中纵行切口，长约 6~8cm ，依次打开肌肉组织，小心分离一侧颈总动脉并插管保留，然后采血１ ml 用于测定实验前的血钾浓度。
3. 在心电图机导联线原有的电极杆上外包 2~3 层固定电线用的铝皮，并与 6 号针头紧连（固定要紧勿松动），将改装后的电板针头分别贯穿插入家兔四肢踝部皮下，勿插入肌肉中防止肌颤的干扰。导联线的联接方法，按右前肢（红），左前肢（黄），右后肢（黑），左后肢（绿）的顺序联接。
4. 打开心电示波器观察心电图，选择 T 波低于 0.15mV 的导联，（常用Ⅱ或 avF 导联），若 T 波高于0.15mV ，改用其它导联或更换其它动物。为获得更为高大清晰的心电图波形，可用头胸导联。方法是将心电图机上的导联旋钮旋转到Ⅰ导联位置，把右前肢电板插在下颏部皮下，左前肢的电扳插在相当于心尖部的胸壁上，这样可较早清晰地获得高血钾心电图的异常波形。
5. 按动物心电图的常规操作（即记录纸速度每秒 25mm ，每 1mV 电压基线移位 1cm ）记录一段正常心电图。记录纸长以每人能得到 4~6 个心跳为度。
6. 在家兔耳缘静脉上插入小儿头皮针，并用胶布固定好，头皮针与装有 5% 氯化钾的注射器相联，以每分钟 0.5ml 速度缓慢推注氯化钾，每公斤体重 1ml 。每隔 5 分钟再推同等剂量氯化钾，注射氯化钾的
过程中，由示波器观察心电图波形的变化规律。出现Ｐ波低平增宽， QRS 波群低压变宽和高尖Ｔ波时，开动心电图机描记。
7. 观察到高血钾的心电图异常改变后，再推注 10% 氯化钾（ 3ml/kg.bw ），出现心室扑动或颤动后立即停止注射。同时，从颈总动脉插管取血 1ml ，测定血钾浓度。从另一侧耳朵的耳缘静脉上分别推注拮抗剂（小组讨论后决定采用 4% 碳酸氢钠 5ml/kg.bw 、 10% 氯化钙 2ml/kg.bw 或葡萄糖 - 胰岛素溶液 7ml/kg.bw ），待心室扑动或颤动波消失，心电图基本恢复正常时，再次由颈总动脉采血 1ml 测定救治后的血浆钾的浓度。最后注入致死剂量的 10% 氯化钾，边注射边观察心电示波形的改变，出现室颤时，快速打开胸腔观察心室纤颤及心脏停跳情况。
【注意事项】
1. 推注麻醉剂时宜慢，达到满意麻醉效果（如四肢松驰）时，停止给药。余量视动物反应情况随时随补充。
2. 动脉取血时，应紧贴试管壁放血，这样可减少红细胞的破坏，试管应保持干燥清洁，血液凝固后应立即分离血清。颈总动脉取血后，均用肝素－生理盐水溶液 2ml 冲洗管道内的余血，防止导管内血液凝固。
3. 实验前稳妥地接好心电图机的地线，实验中以心电示波观察，必要时打开心电图记录装置，防止热笔因长时间处于工作状态造成电针温度过高，烧坏记录纸张。针型电极剌入部位要对称，位于皮下，导线避免纵横交错，实验台上的液体要及时擦拭干净。如家兔 T 波高出正常值 0.5m Ｖ或融合在 S-T 段中不呈现正常波形，应更换导联，如用头胸导联，否则更换动物。
4. 耳缘静脉注入氯化钾溶液，注意滴入速度，注入速度不宜太快，也不宜太慢，要随时观察各项指标的变化。当各项指标急剧变化时，应减慢速度。防止滴入速度太快导致动物突然发生心室纤颤而死亡，动物对注入氯化钾溶液耐受性有个体差异，有的动物需注入较多的氯化钾才出现异常心电图改变，遇到这种情况时，应适当调整注入氯化钾的浓度和间隔时间。
【附录】血钾测定法
1. 火焰光度法
原理：此法是一种发射光光谱分析，被测溶液经压缩空气后，喷雾状后，与可燃气体混合燃烧成火焰，火焰激发后各光素发射出特有的光谱。钾的波长为 765nm ，光谱呈红色，溶液中钾浓度越高，发射出的光谱越强，因此在一定激发条件下，钾浓度与火焰光度计检流计的读数成正比。通过与已知标准液的比较，可求得溶液中钾的浓度。
试剂配制
（ 1 ）钾标准贮存液（ 10mmol/L ）：取氯化钾数克，置量瓶内，在 120 ℃烤箱中恒重，取出放入玻璃干燥器内冷却至室温后，准确称取 0.746g 。用重蒸馏水溶解，移入 1000ml 容量瓶中，再以重蒸馏水稀释至 1000ml 刻度处，存放于塑料瓶中，冰箱内保存备用。
（ 2 ）钾标准应用液（ 0.04mmol/L ）：取钾标准贮存液 4ml ，以重蒸馏水稀释 1000ml ，放塑料瓶中备用。
测定步骤
（ 1 ）血清的稀释：取血清 0.1ml 置于 150mm315mm 试管内。加重蒸馏水 9.9 ml ，充分混匀。
（ 2 ）安装：调好仪器，将钾滤色片置于光路中，把样液吸入试管放入钾标准液内，待火焰呈黄色后，开启快门，移动光栅。使检流计读数控制在 80~100 之间，作为钾标准读数，并关闭快门。
用重蒸馏水喷雾洗涤至火焰恢复到空白时所呈的蓝紫色。将样液吸入管放入稀释血清（ 1/100 ）中，待火焰呈黄色后，开启快门，记录检流计上的读数（钾样读数）。关闭快门。依上法用重蒸馏水喷雾洗涤至火焰恢复到蓝紫色。
计算方法
钾测定读数 30.043100= 钾测定读数 34=mmol/L 钾标准读数 钾标准读数
2. 四苯硼化钠比浊法：
原理： 无蛋白血滤液中钾离子与四苯硼化钠作用，形成难溶于水的四苯硼化钾的混浊液，用光电比色计比浊测定其含量。
试剂准备
（ 1 ） 0.2mmol/L 磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠（ Na 2 HPO 4 212H 2 O ） 7.160g ，溶于 100ml 蒸馏水中。
（ 2 ） 0.1mmol/L 柠檬酸溶液：称取柠檬酸（ C 3 H 4 (OH)COOH 3 2H 2 O ， AR ） 2.10g ，溶于 100ml 蒸馏水中。
（ 3 ） 1% 四苯硼化钠液：取 0.2mmol/L 磷酸氢二钠 19.45ml 及 0.1mmol/L 柠檬酸液 0.55ml 于 100ml 量筒中混合。再加入四苯硼化钠 1g ，待溶解后加水至 100ml 。
（ 4 ）蛋白沉淀剂：量取 0.1mol/L H 2 SO 4 800ml ， 10% 钨酸钠 100ml ，浓磷酸 0.3ml 混匀，溶液放置，如果发混即需另配。
（ 5 ）钾标准贮存液（ 5mmol/L ）：称取纯氯化钾在 120 ℃烘干恒重后，称取 373mg 加蒸馏水溶解，稀释至 1000ml 。
（ 6 ）钾标准应用液（ 0.5mmol/L ）：取贮存液 10ml 加水至 100ml 。
操作步骤
（ 1 ）无蛋白血滤液制备：取血清 0.5ml ，加蛋白沉淀剂 4.5ml 混匀，沉淀后取滤液备用。 （ 2 ）血钾测定操作步骤
试 剂
标准 (S) 测定 (R) 空白 (B) 蒸馏水
－ － 1.0ml 无蛋白滤液
－ 1.0ml － 钾标准液
1.0ml － － 1% 四苯硼化钠 4.0ml 4.0ml 4.0ml
上述试剂混匀， 5 分钟后用波长 520 nm 滤光片，于光电比色计中比浊。以蒸馏水调节“ 0 ”点。（ 3 ）计算：
（ R －
B ）3 0.5
31
=mmol/L
（ S －
B ）
0.1
正常值：血清钾 3.5~5.6mmol/L
注意事项
1. 标本切忌溶血，因红细胞内钾含量高。
2. 血液凝固后，应立即分离血清，以免细胞内钾离子逸出。
3. 四苯硼化钠必须提纯。提纯方法为：（ 1 ）将氯仿置 50 ℃左右水浴中加温 15~20min ，然后称取待提纯的四苯硼化钠 10g 于 100ml 烧杯内。加入已温热的氯仿 50ml 左右，搅匀，使成混悬液；（ 2 ）将混悬液倒入玻璃砂心漏斗内，立即置抽滤瓶上抽滤至干；（ 3 ）再加约 50ml 热氯仿于烧杯内，将杯内残存的四苯硼钠洗下，洗液一并倒入玻璃砂心漏斗内，抽滤至干；（ 4 ）直接向漏斗内加入热氯仿
30~40ml ，抽滤至干，并重复 2~3 次；（ 5 ）最后加入 30~40ml 乙醚于漏斗内，迅速抽滤至干，重复洗涤 2~3 次；（ 6 ）取下漏斗，立即置 40 ℃左右干燥箱内，烘 2~3h ，使其尽快干燥。
【讨论思考题】
1. 碳酸氢钠、氯化钙、葡萄糖 - 胰岛素溶液抢救高钾血症的原理是什么？它们是否都能降低血钾的浓度？
2. 注射氯化钾后，心电图有何异常变化，它们的发生机制是什么？
3. 放置血液的试管，为什么应保持干燥清洁？
（史满金）
实验二家兔实验性肺水肿
【实验目的】
1. 掌握肺水肿动物模型复制方法。
2. 观察肺水肿时呼吸、心率、中心静脉压的变化及典型体征。
3. 通过实验加深对肺水肿发生机制的理解。
【实验原理】
水肿的发生与影响血管内外液体交换的因素（如流体静压、胶体渗透压及血管通透性）改变有密切关系，即血管内流体静压升高，血浆胶体渗透压下降及血管通透性增高均可促使水肿发生。当大量快速输液时，血容量明显增加，血液稀释而致血管内流体静压上升，胶体渗透压下降，有利于水肿的发生。在此基础上，输注肾上腺素，可引起外周血管广泛收缩，导致血液由体循环急速转移到肺循环，加之毛细血管通透性增高，未能为左心所代偿，结果使左心房压力和肺毛细血管流体静压突然升高，液体进入肺泡及间质增多，影响肺呼吸功能，而出现肺水肿。
【实验对象】家兔
【器械与药品】
常规手术器械，气管插管，婴儿秤，听诊器，天平，兔固定台。
20ml 注射器，输液装置， PcLab 生物信号采集系统，压力换能器，滤纸，烧杯，丝线，粗棉线。
20% 乌拉坦，注射用肾上腺素。
【步骤与方法】
1. 取家兔一只，称重后经耳缘静脉注入 20% 乌拉坦 5ml/kg.bw 进行全身麻醉，然后固定在家兔固定台上。
2. 剪去颈部兔毛，在颈部正中做长 6cm 的纵切口，钝性分离气管和一侧的颈总静脉。在气管上做倒“T”字形切口，切开气管，插入气管插管，用粗棉线结扎固定，然后将气管插管的一端与压力换能器相连并连接在微机记录系统上，描记呼吸曲线。结扎颈总静脉远心端，在近心端剪一小口，然后插入连有输液装置的静脉插管，打开输液装置检查是否通畅，然后将输液滴数调到 10~15 滴 / 分，以防止血液凝固。
3. 打开微机进入 PcLab 生物信号采集系统，按 PcLab 常规操作进行通道和零点设置，然后描记正常呼吸曲线。观察呼吸、心率、中心静脉压的变化，并用听诊器听诊正常呼吸音。
4. 由输液装置输入生理盐水，输液量按 100ml/kg.bw 计算，输液速度控制在 150~180 滴 / 分，输完后，将 0.1% 肾上腺素以 0.5mg/kg.bw 计算，用生理盐水稀释 10 倍后加入输液瓶中，继续滴注。肾上腺素输完后，可给少量生理盐水，以 10~15 滴 / 分速度维持通道，以便必要时第二次给药。观察呼吸、心率、中心静脉压的变化。
5. 输药过程中，应密切观察呼吸曲线的变化，有无呼吸急促、呼吸困难，听诊有无湿罗音，气管插管口有无粉红色泡沫痰溢出。如无以上肺水肿的典型表现，可重复使用肾上腺素，用法剂量同上，直至出现以上变化为止。
6. 当动物出现肺水肿典型表现时，用止血钳夹闭气管，剪开胸前壁，然后用粗棉线在气管分叉处结扎，防止水肿液溢出，小心分离心脏和血管，将肺取出，用滤纸吸干肺表面水分后，准确称取肺重量，计算肺系数。肺系数 = 肺重量（ g ）÷体重（ kg ）。正常肺系数为 4~5 。
7. 肉眼观察肺大体变化及双肺底有无淤血发生，然后用刀片切开肺组织，观察挤压时是否有水肿液溢出（注意其量、性质、颜色）。
8. 另取家兔一只，称重麻醉后固定于兔台上，进行颈部手术，实验步骤和方法条件同前一只家兔，但不使用肾上腺素。比较两只动物的表现有何不同。
9. 整个实验过程中，呼吸、心率、中心静脉压等指标需观察三次，分别在实验开始后、输完肾上腺素后及泡沫痰溢出时进行观察。
10. 切片观察：取以往做好的肺水肿病理切片，放置在显微镜下进行低倍、高倍观察，了解肺水肿的病理变化。
【注意事项】
1. 注射乌拉坦麻醉时速度要慢，否则容易造成动物死亡。
2. 不能使用实验前有肺水肿指征（罗音、喘息、气促）的动物，否则会影响实验结果。
3. 插完静脉插管后，应马上以 10~15 滴 / 分速度输液，这样可以防止静脉插管内凝血。
4. 控制好输液速度和输液量，过慢时实验组和对照组均不发生肺水肿，而过快时对照组也会发生肺水肿。
5. 如一次给肾上腺素肺水肿指征不明显需重新给药时，两次间隔宜在 10~15 分钟，不易过频。
6. 取肺时要小心，防止肺组织破裂和水肿液流出，否则影响肺系数的准确性。
【附录】
（一）中心静脉压测量方法
1. 将颈静脉插管经三通管与输液瓶和水检压计相连（输液瓶可用 50ml 注射器代替）。
2. 先使输液瓶与水检压计相通，让盐水充满水检压计，检压计零点与动物右心房处于同一水平（向水检压计充盐水时，可先将检压计倒置，待气泡排出后再翻转水检压计，这样可排净检压计中的气泡）。
3. 将水检压计与颈总静脉相通，检压计内液面开始下降，当液面不再继续下降而随呼吸上下波动时，此时的液面刻度即为中心静脉压的值。
4. 测完压力后，阻断与检压计相通的侧管，使输液瓶与静脉导管相通，继续缓慢输液（输液速度为 10~15 滴 / 分），维持管道通畅。
（二）大鼠实验性肺水肿
大鼠注入生理盐水和肾上腺素后，引起外周血管广泛收缩，导致血液由体循环急速转移到肺循环，加之毛细血管通透性增高，未能为左心所适应，结果使左心房压力和肺毛细血管流体静压突然升高，液体滤入肺组织增多，随后出现肺水肿。其具体方法是：
1. 大鼠称重后，用 20% 乌拉坦（ 0.5ml/100g.bw ）腹腔注射麻醉，或 1% 戊巴比妥钠（ 0.5ml /100g.bw ）肌肉注射全身麻醉，然后将大鼠仰卧位固定于手术台上。
2. 剪去颈部手术区的鼠毛，做颈部正中纵切口（长 2cm ），细心分离气管，左侧颈总动脉及右侧颈总静脉，穿线备用。
3. 在气管上做倒“ T ”字形切口，切开气管，插入气管插管，用粗棉线结扎固定，然后将气管插管的一端与压力换能器相连并连接在微机记录系统或二道生理记录仪上，描记呼吸曲线。
4. 结扎颈总静脉远心端，在近心端剪一小口，然后插入静脉插管（静脉插管内要充满 0.1% 的肝素化生理盐水）结扎固定，注入 0.5% 肝素（ 0.1ml ∕ 100g.bw ）抗凝，用丝线结扎颈总动脉远心端，动脉夹夹闭近心端，插入充满 0.1% 肝素的动脉插管结扎固定，将动脉插管经压力换能器连于记录仪或微机系统上，记录一段正常血压曲线。
5. 动物分为实验组和对照组两组。实验组大鼠经颈总静脉注入生理盐水（ 0.3ml/100g.bw ）后，接着较快推注 0.01% 的肾上腺素（ 0.1ml/100g.bw ）。对照组注入生理盐水，不推注肾上腺素。观察动物的表现（呼吸情况及呼吸音的改变，气管插管处有无粉红色泡沫痰溢出）及存活时间。
6. 动物死亡或处死后，用止血钳夹闭气管，剪开胸前壁，然后用粗棉线在气管分叉处结扎，防止水肿液溢出，小心分离心脏和血管，将肺取出，用滤纸吸干肺表面水分后，准确称取肺重量，计算肺系数。
7. 肉眼观察肺大体变化及双肺底有无淤血发生，然后用刀片切开肺组织，观察是否有水肿液溢出（注意其量、性质、颜色）。
【讨论思考题】
1. 本实验中为什么要大量快速输液？
2. 输入肾上腺素导致肺水肿的机制是什么？
3. 实验中为什么会出现粉红色泡沫痰？
4. 输入肾上腺素为何会出现呼吸抑制甚至暂停？
5. 本实验中如果输液过快过多对实验结果有何影响？
（刘艳凯张学锋）
实验三小鼠实验性缺氧
【实验目的】
1. 掌握各型缺氧动物模型的复制方法。
2. 观察缺氧时呼吸系统的改变及血液颜色的变化。
3. 了解环境温度改变对缺氧的影响。
4. 了解中枢神经系统机能状态改变时机体对低气压所致缺氧耐受性的影响。
【实验原理】
缺氧是临床上常见的病理过程，根据其原因不同可分为乏氧性缺氧、血液性缺氧、循环性缺氧及组织性缺氧四种类型。引起乏氧性缺氧的常见原因有大气中氧分压降低和呼吸系统疾病，其共同特征是动脉氧分压、氧含量、血氧饱和度均降低，实验中将小白鼠放入装有钠石灰的密闭缺氧瓶内，造成吸入气氧分压降低，从而引起乏氧性缺氧。血液性缺氧是由于血红蛋白性质和含量改变所致的缺氧，本实验利用一氧化碳和亚硝酸钠中毒的方法，使血红蛋白失去携氧能力，从而引起血液性缺氧，其中亚硝酸钠中毒所形成的高铁血红蛋白，可被还原剂美蓝还原成正常血红蛋白，恢复带氧能力，达到抢救和预防的目的。机体对缺氧耐受性受多种因素影响，本实验将探讨环境温度改变和中枢神经系统机能状态改变对缺氧耐受性的影响，当环境温度升高、中枢神经系统兴奋时，机体代谢率增高，单位时间内耗氧量增加，对缺氧耐受性降低；反之，机体对缺氧耐受性增强。
【实验对象】小鼠
【器械与药品】
小白鼠缺氧瓶，一氧化碳发生装置，广口瓶， 5ml 刻度吸管， 1ml 注射器，酒精灯，剪刀，镊子，蜡盘，小天平，负压吸引器（或抽气机）。
钠石灰，甲酸，浓硫酸， 5% 亚硝酸钠， 1% 美蓝， 1% 咖啡因， 0.25% 氯丙嗪，生理盐水，碎冰块。
【步骤与方法】
为便于实验操作，取 10 只小鼠，从 1~10 进行编号，然后按以下步骤进行操作：
1. 各型缺氧的观察：
（ 1 ）乏氧性缺氧：取 1 号小鼠及 5 克钠石灰放入缺氧瓶中，盖紧瓶塞，复制乏氧性缺氧。观察动物的一般情况、呼吸频率、鼠尾及口唇颜色。每 3 分钟重复观察上述指标一次，直至动物死亡为止，记录存活时间。
（ 2 ）一氧化碳中毒性缺氧：取 2 号小白鼠放入广口瓶中，并与一氧化碳发生装置相连（图 7-3-1 ），然后将 3ml 甲酸与 2ml 浓硫酸放于一氧化碳发生装置的锥形瓶中，塞紧后用酒精灯加热（加热时不可过热以致液体沸腾，因为一氧化碳产生过多过快时动物迅速死亡，血液颜色改变不明显），观察指标同上。
（ 3 ）亚硝酸钠中毒性缺氧：取 3 、 4 号小鼠，观察正常表现后，分别向腹腔注入 5% 亚硝酸钠 0.3ml ，其中 3 号注入亚硝酸钠后，立即腹腔注射 1% 美蓝溶液 0.3ml ， 4 号注入生理盐水 0.3ml 。观察指标与方法同上，比较两只小鼠的表现及存活时间。
图 7-3-1 CO 发生装置
2. 环境温度改变对缺氧耐受性的影响：
（ 1 ）取两个氧瓶，各放入钠石灰 5 克。
（ 2 ）取 500ml 烧杯两个，一个加入碎冰块，将杯内水温调制 0~-4 ℃，另一个加入热水，将温度调制40~42 ℃。
（ 3 ）取 5 、 6 号两只小白鼠，称重后装入两个缺氧瓶内，盖紧瓶塞，然后将两个缺氧瓶分别放于装有碎冰和热水的烧杯内（高温组小鼠缺氧瓶也可直接放于 40~42 ℃恒温水浴锅内）。
（ 4 ）观察动物的一般状态和存活时间，并与室温条件下的 1 号小鼠进行对比。
3. 中枢神经系统状态对低气压所致乏氧性缺氧耐受性的影响：
（ 1 ）取 7 、 8 、 9 号三只小鼠，于抽气前 10 分钟分别腹腔注射 1% 咖啡因、 0.25% 氯丙嗪、生理盐水 0.3ml 。
（ 2 ）将三只小白鼠放入负压吸引器的低压槽内，密闭容器。
（ 3 ）打开负压吸引器电源，抽气减压，从压力表上观察，减压速度为每分钟上升 2000m ，模拟高度，直至 9000m （高度与大气压的关系见表 7-3-2 ），自减压开始记录时间，直至小鼠死亡，观察各组动物的一般表现，记算存活时间。
4. 肝脏颜色的观察：
将 10 只小白鼠（未死者处死）按顺序放于蜡盘中，用剪刀剪开腹部并向上翻起腹壁，暴露肝脏，观察肝脏颜色变化。
图 7-3-2 高度与大气压关系图
【注意事项】
1. 缺氧瓶内外表面要干净透明，以利观察动物在瓶内的表现。
2. 必须保证缺氧瓶完全密闭，否则会影响实验结果。
3. 给小白鼠腹腔注药时要稍靠右下腹，勿损伤肝脏，也不要将药注入肠腔或膀胱。
4. 测量耗氧量前，高、低温环境中的两只缺氧瓶必须在室温下平衡 15 分钟左右。
【附录】用测氧仪测小白鼠耗氧率的方法
1. 按测氧仪说明书安装电极，检查电池电压，调整极化电压和调节零点。
2. 将已安装好的氧电极插入仪器的“输入”孔，进行电极的灵敏度调节，校正零点。然后用干燥氮气调节灵敏度至刻度 21% 。重复以上动作 1~2 次，使重现性误差小于读数误差的 2.5% 。
3. 将缺氧瓶塞上的一个橡皮管同测瓶内空气容积装置相连，装置内的水即因负压而进入缺氧瓶内。然后将另一橡皮管同测氧仪的电极进样管相连，并从电极出样管缓慢抽气，使缺氧瓶内气体缓慢进入测氧仪的测量池。当测氧仪表头指针稳定后，直接读取瓶内空气剩余氧浓度（ C ）。
4. 将缺氧瓶塞上的两个橡皮管全部打开，用 50ml 注射器向其中一管注入水，当水充满缺氧瓶时，将缺氧瓶内水倒入量筒内，读取液面刻度即为缺氧瓶内空气容积（ B ）。
5. 用测氧仪测得瓶内空气的剩余氧浓度（ C ）和用测瓶内空气容积装置测出瓶内空气容积（ B ），求总耗氧量（ A ）： A(ml)=(20.94%-C) 3 B 。
6. 根据小白鼠体重（ W ），存活时间（ t ），总耗氧量（ A ），计算小白鼠耗氧率（ R ）（每分钟 ml/g ）：R(ml/g.min)=A ÷体重（ g ）÷存活时间 t （ min ）。
【讨论思考题】
1. 一氧化碳中毒和亚硝酸钠中毒性缺氧血液颜色有何异同 ?
2. 在乏氧性缺氧实验中，如果缺氧瓶中不加钠石灰对实验结果有何影响 ?
3. 通过本实验解释低温麻醉的原理 ?
4. 在高原环境中机体对缺氧有何代偿反应 ?
（刘艳凯张学锋）
实验四家兔失血性休克及其抢救
【实验目的】
1. 掌握失血性休克动物模型的复制方法。
2. 观察失血性休克时机体的一般状态及呼吸、血压、心率、中心静脉压、尿量的变化，了解失血性休克的病理生理过程。
3. 了解失血性休克的抢救原则和抢救方法。
【实验原理】
失血性休克是临床上常见的急症，由于血容量减少，机体有效循环血量降低，从而使机体重要脏器血液灌流减少，而微血管的持续收缩与痉挛又加重了器官的缺血，使器官功能进一步障碍。本实验采用颈总动脉放血方法，造成机体有效循环血量减少，复制失血性休克。通过实验进一步了解失血性休克时心、肺、肾等器官的功能障碍，加深对失血性休克的认识。由于微循环障碍是失血性休克的基础，治疗的主要措施就是改善微循环灌流，因此，实验中采用回输血液及输入生理盐水方法来改善微循环灌流状态，对失血性休克进行抢救。
【实验对象】家兔
【器械与药品】
常规手术器械，气管插管，动脉套管，动脉夹，婴儿秤，兔固定台， 5ml 、 20ml 、 50ml 注射器，输液装置，水检压计，二道生理记录仪，导尿管，压力换能器，压力定标装置，滤纸，烧杯，丝线，粗棉线。
20% 乌拉坦， 1% 肝素， 3.8% 枸橼酸钠，生理盐水。
【步骤与方法】
1. 家兔称重后，自耳缘静脉注射 20% 乌拉坦 5ml/kg.bw 进行全身麻醉，然后将家兔仰卧位固定于兔台上。
2. 剪去颈部兔毛，沿甲状软骨下缘正中做长 6cm 纵切口，用止血钳钝性分离气管、左侧颈总动脉及右侧颈总静脉，在气管上做倒“ T ”字形切口，插入气管插管，用粗棉线结扎固定，然后与换能器和记录仪相连，描记呼吸曲线。
3. 自耳缘静脉输入 1% 肝素 1ml/kg. bw 抗凝后，用丝线结扎颈总动脉远心端，动脉夹夹闭近心端，插入充满枸橼酸钠的动脉套管结扎固定，将套管一端连于压力换能器，经记录仪记录血压，另一端备放血用。
4. 输液装置内加入生理盐水 200ml ，排净输液管道及水检压计内的气泡，结扎颈总静脉远心端，插入与输液装置及水检压计相连的静脉插管，检查通畅后以 10~15 滴 / 分速度缓慢输入生理盐水，以确保管道通畅。
5. 在耻骨联合上做腹部正中切口长约 5cm ，找出膀胱，排空尿液后，将膀胱从腹腔拉出，在背面膀胱三角区找出输尿管入口，分离双侧输尿管，插入细导尿管，记录每分钟尿液的滴数。
6. 打开二道生理记录仪，用压力定标装置对血压进行定标，稳定 5 分钟后，观察放血前动物的一般状态及血压、呼吸、中心静脉压、尿量的变化。
7. 打开颈总动脉套管的放血端，并与 50ml 注射器相连，使血液自颈总动脉流入注射器内，一直放血至血压 40mmHg 时，调节注射器内放出的血量，使血压稳定在此水平（图 7-4-1 ）
图 7-4-1 兔出血性休克示意图
8. 维持血压 40mmHg 20 分钟，观察注射器内血量的变化，记录失血期的各项生理指标（同步骤 6 ）。
9. 停止放血，倒掉输液瓶中剩余的生理盐水，将注射器内的血液加入到输液瓶中，快速从静脉输回放出的血液和生理盐水，进行抢救，输血输液总量为 3 倍失血量，速度为 150 滴 /min 。
10. 输完血液及生理盐水后，观察动物一般状态及各项生理指标，评价抢救效果。
11. 若实验中实验小组较多，输液治疗组还可分为：与失血量等量的生理盐水 + 失血全血 + 去甲肾上腺素 0.75mg/kg.bw ， 2 倍失血量生理盐水 + 失血全血 +654-2 1mg/kg.bw 及失血全血治疗组。
【注意事项】
1. 本实验手术较多，要减少手术性出血。对部分项目（如输尿管插管），手术可少做或不做，以确保实验的成功。
2. 各导管和注射器要肝素化并注意导管畅通，随时缓慢推注，以防凝血。
3. 插动脉插管前必须先向动物体内注射肝素，否则会造成插管内凝血，影响实验。
4. 插静脉插管时要小心，防止插管穿破静脉壁进入胸腔或其他软组织。
5. 若做输尿管插管，输尿管插入后切忌扭曲和折叠，正常情况下，导管插入即有尿液滴出；如果导管通畅但无尿液滴出，可少量快速输液。
【附录】
（一）复制失血性休克的 Lamson 氏法
本方法主要使用自动调节血压装置将血压控制在较低水平，既可消除动物失血后血压的代偿波动，又可减轻实验的工作量，因此，广泛应用在失血性休克的动物实验中。其具体方法是：
1. 取 250ml 输液瓶，加入 100ml 生理盐水后，经三通管与动脉套管及颈动脉相连（动脉套管的另一端与记录仪相连记录血压）。
2. 将输液瓶悬挂在高于心脏 50cm 以上的位置，打开三通管放血，血液流入瓶内，待血压降至预定水平后，通过维持储血瓶悬挂高度，使血压维持在预期水平。
3. 在实验中，如血压过低，则储血瓶内血液自动回输动物体内，使血压回升，若血压超过预定水平，则血液流入储血瓶，藉此将血压维持在预定水平。
4. 低血压稳定时间以实验要求而定，一般控制在 20~60 分钟，该方法应使用肝素抗凝。
（二）肠系膜微循环观察方法
1. 动物称重麻醉后，仰卧位固定于手术台上。剪去左腹部毛，在左腹直肌旁做 5cm 纵行腹部切口，钝性分离肌肉，打开腹腔，推开大网膜找出一段游离度较大的小肠肠袢，轻轻从腹腔拉出，放置在微循环显微镜下的观察窗内进行观察。
2. 打开蠕动泵，以台式液 37 ℃恒温灌流，灌流速度为 20~30 滴 /min ，在微循环显微镜下找出具有丰富微动脉和微静脉的视野进行观察。
3. 肠系膜微循环观察时，需观察的主要指标包括微血管形态、数目、口径、微血流流速、血细胞聚集及微血管出血，通过这些指标的综合分析来评价微循环障碍程度。
【讨论思考题】
1. 为什么在抢救失血性休克时其输液总量要明显多于失血量？
2. 在放血后维持务压时，为什么血压会出现明显波动？
3. 在失血性休克抢救中有部分动物死亡或抢救效果较差，为什么？
4. 本实验中各管道内最易发生凝血，当出现以上情况后应如何处理？
（刘艳凯张学锋）
实验五急性心肌缺血 / 再灌注损伤
【实验目的】
1. 学习用冠脉结扎的方法来复制家兔心肌缺血性损伤的动物模型。
2. 观察心肌缺血 / 再灌注损伤时机能、代谢及结构的变化规律，探讨其病因和发病机制。
【实验原理】
采用开胸术及冠脉结扎术复制家兔急性心肌缺血 / 再灌注损伤模型，通过观察动物心电图等机能指标、心肌组织匀浆糖含量、丙二醛（ malondialdehyde ， MDA ）、超氧化物歧化酶（ superoside dismutase ，SOD ）以及心脏结构指标的变化，观察心肌缺血 / 再灌注损伤的机能、代谢及结构的变化规律，探讨缺血 / 再灌注损伤病因和发病机制。
【实验对象】家兔
【仪器与药品】
心电示波记录仪（或心电图机及心电示波器），家兔用人工呼吸机，兔实验台，普通离心机，低温高速离心机， 722 型分光光度计，婴儿秤、扭力天平，组织匀浆器，恒温水浴槽，动物手术器械一套，恒温水槽，微量加样器，生化操作玻璃器材一套。
20% 乌拉坦溶液， 80% 苯酚溶液，糖标准贮存液，糖标准应用液，生理盐水，浓硫酸，无水乙醇，蒸馏水。组织匀浆总蛋白、 MDA 、 SOD 测定试剂各一套。
【步骤和方法】
1. 正常家兔一般状态的观察与记录：
（ 1 ）将动物称重， 20% 乌拉坦溶液由耳缘静脉缓慢推注（ 5ml/kg.bw ），行全身麻醉。当家兔进入初期麻醉时，将家兔仰卧位固定在手术台上，麻醉逐渐加深，保持安静状态。
（ 2 ）首先记录家兔呼吸频率，呼吸深度，估计家兔潮气量（一般在 20ml 左右），为人工呼吸做好准备。
（ 3 ）将心电图机各导联电极连接在家兔肢体上，即右上肢（红色标记电极），左上肢（黄色）、左下肢（兰色），右下肢（黑色）及胸前（白色），描记正常家兔心电图。心电图描记必须记录标准电压（ lmV ）曲线，以此计算各波电压，心电机走纸采用 25mm/s 速度。
2. 家兔气管插管术与人工呼吸：
家兔纵隔障与胸膜腔彼此分离，如果谨慎从事开胸术可避免气胸和肺萎陷。为保证实验成功，采用人工呼吸机正压呼吸控制动物呼吸，即人工呼吸。人工呼吸机的运转必须保证与动物自然呼吸相同步。潮气
量不能过大造成肺过度膨胀，也不能过小造成肺不张，影响呼吸气量。为确保人工呼吸的正常进行，避免因气胸造成全身性缺氧，故实行气管插管术。
（ 1 ）用大弯剪刀沿家兔胸前部和颈部正中线剪毛，为手术做准备。
（ 2 ）沿家兔颈中线，上自甲状软骨向下至胸骨剑突处切开皮肤，逐层分离颈前部肌肉，暴露出气管将气管下穿一粗结扎线以备用。
（ 3 ）在游离段气管的气管软骨间用手术刀横切开气管的一半，行“┴”形切口，插入气管插管并结扎固定。插管通过胶管与人工呼吸机相连。开动人工呼吸机，调整呼吸频率，选定潮气量。在本实验的全过程中呼吸机不能间断。
3. 心肌缺血性损伤模型的制备：
（ 1 ）开胸术：
切开家兔胸部皮肤，可见肌肉及突出的胸骨。家兔胸骨实际上是左右侧肋骨在中线处结合起来的一条骨性脊状隆起，依此作为正中线的标志。在距正中线左缘 2mm 处，上 2 肋下至剑突，切断肋骨，顺序是先将左侧胸肌的胸骨附着点切断，继之选择 3 、 4 、 5 肋骨附着点用手术刀刃向上至 2 肋，向下至 7 、8 肋切断肋骨，扩大开胸切口，将切口用扩胸器扩开或用粗线缝于左右胸壁上向两侧拉开，即见心脏跳动，为结扎冠状动脉尚需剖开心包膜，方法是用小镊子将心包膜夹起再以小剪刀上至心房，下至心尖剪开心包膜。此时心表面清晰可见。
（ 2 ）冠状动脉结扎术：
家兔冠状动脉起始于主动脉根部动脉圆锥。分冠状动脉左、右旋支。左旋支沿左房、左室间沟从前向左右旋行，当行至距左旋支起始部 2~3mm 处分出前降支，它沿左、右室间沟下行。而左旋支继续旋行至左室前时向下分出左室支。该支粗大、膨起、自左旋支分出后即向后下方呈乙字形行走，先行至左室侧缘，再向后下方与大心脏静脉交叉并伴行，继续复返左缘，至左室前壁心尖区。左室支是冠脉左旋支的主要分支，上半段走行浅表，与大心脏静脉（ Great Cardiac Vein ）在上 1/3 段相距较远。其识别方法系按其动脉鲜红色（静脉呈紫红色）、突出于心肌表面、与心室收缩呈反向搏动，用指压法可证明血行方向流向心尖。一旦发生全身性缺氧该特征即消失。为了结扎左室支用一个中间挖空的药勺即掏心勺，从左室左缘向后伸进此勺，轻轻地将心脏托起向右上方翻动一个角度，仔细按解剖部位、左室支特征寻找辩认它（见图7-5-1 ）。
当对左室支确认无疑时即用眼科小园针带细绦纶线于左室支管壁下穿结扎线，以备结扎。结扎点在左室支上 1/3 部位时，可导致左心室游离壁下 2/3 范围缺血。结扎法采用缝合结扎法及垫塞结扎法。
缝合扎结法：即选定在左室支上段不伴行静脉处，用持针器夹持小圆缝合针，由左室支左侧靠近血管壁刺入心肌，使针紧绕血管壁下方将结扎线由血管壁右侧穿出。不要刺破支脉造成出血，也不要距离血管太远造成不必要的心肌损伤。紧拉结扎线两端扎好第一次结，更不能松脱。结扎断血流时间在 40min 内，心肌损伤性变化是可逆性的。
垫塞结扎法：是为恢复血流实行再灌注设计的，它是在第一次结扎结内加一塑料套管和一个长约 2~3cm 、直径 1mm 的塑料绳。将塑料绳伸入空心管内并将此垫塞结扎在第一个结内，拉紧扎好第二次结。此结除达到结扎完全闭塞动脉外，当需要一定时间将结扎去除时只需拉出空心塑料管内塑料绳，再拔出塑料管，剪掉结扎线即可实行再灌注。
当结扎完毕后可迅速见到心室前壁、心尖区出现心肌颜色变化，先呈粉白色逐渐呈紫绀色，该区心肌收缩减弱。
图 7-5-1 家兔心脏冠状动脉左室支位置与结扎点
4. 观察心肌缺血性损伤的有关指标：
观察心肌缺血 / 再灌注损伤的机能、代谢及结构的变化规律，可选的指标很多，本实验设计的观察指标为：
（ 1 ）机能指标：
以心电图描记记录与一般心功能观察为重点。家兔心电图在结扎后立即发生改变，是最敏感的指标，也是临床上诊断心肌梗塞的有力依据。表现为 R 波时期、 ST 段形态的变化。应用心电示波记录仪，或将心电图机与心电示波器连接起来，由示波器上观察心电波形，每隔 3~5min 记录一段心电图。由心电图上计算出心率， ST 段抬高了多少毫伏。注意观察再灌注家兔有无心律失常的发生。
（ 2 ）代谢指标：
心肌组织细胞不停进行代谢以产生供心肌收缩所需能量，当结扎左室支后，不仅缺少血氧供应，同时代谢产物也不易排出。这样，缺血区域内的代谢变化就很复杂。故选择心肌组织匀浆糖含量、 MDA 含量、 SOD 活性作为代谢指标进行观察。
（ 3 ）结构指标：
心脏剔出与缺血区检定是本实验的结构指标，并为心肌代谢指标取材之用。实验采用全心剔出的方法。用左手将家兔心脏抓起尽量提出胸腔，右手持剪刀在上、下腔静脉根部剪断，心脏即剔出。将心脏在冷生理盐水内洗一下，用 50ml 大注射器对准伸入主动脉，逆血流方向加压推注生理盐水冲洗心脏。当盐水沿冠状动脉将残血冲出后即见非缺血区呈现粉红色，而缺血区呈紫绀。缺血区范围的大小与结扎左室支部位的高低呈正相关系。本冲灌法使缺血区显而易见，行之有效。
5. 心肌组织匀浆制备：
各取实验模型新鲜的心肌缺血区与非缺血区（左室心底部）心肌组织 600mg 左右，在扭力天平上准确称量（称量过程中组织应保持冰浴）。按 1:9 的量加入冰生理盐水，置于小烧杯中，应用组织匀浆器匀浆。为防止研磨发热，匀浆过程中烧杯应浸在冰水中，研磨时间，不超于 2 分钟。所制备的匀浆浓度为 10% ，使用时可按倍数稀释。
6. 心肌组织糖含量测定：
（ 1 ）原理：采用苯酚—浓硫酸比色定糖法。本法灵敏，重复性好，简单易行，不受蛋白质干扰。其原理是还原糖在浓硫酸环境中与苯酚反应生成桔黄色化合物，在 490nm 处有强吸收峰。本法适用测单糖，也适用于直接测多糖，需水解。糖浓度在 5μg~50μg 之间时光密度值为 0.05~1.0 之间，呈线性关系。
（ 2 ）主要试剂配制：
① 80% 苯酚溶液（ 80g 分析纯苯酚，加入重蒸馏水定容至 100ml ）；
②浓硫酸（比重 1.84 ，含量 93% ）；
③糖标准贮存液（精确称取 1.0g 分析标准糖，用 0.25% 苯乙酸定容至 100ml ）；
④糖标准应用液（糖标准贮存液 1ml ，用重蒸馏水定容至 100ml ）。
（ 3 ）操作方法
①心肌组织匀浆糖含量的测定：见表 7-5-1 。
②葡萄糖含量标准曲线制作：见表 7-5-2 。
③查标准曲线得出心肌组织匀浆糖含量（μmol/ml ），再计算出每克湿重心肌组织的糖含量。
表 7-5-1 心肌组织匀浆糖含量测定
试剂（ ml ）缺血区心肌匀浆非缺血区心肌匀浆
待测样品（心肌匀浆）0.2 0.2
重蒸馏水 1.8 1.8
苯酚液（ 80% ）0.05 0.05
浓硫酸（冲入） 5.0 5.0
静置 10min ， 30 ℃水浴 15min ，以蒸馏水调零， 490nm 波长测各测定样品的 OD 值。
表 7-5-2 葡萄糖含量标准曲线制作
试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
试剂（ ml ）
糖标准应用液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
重蒸馏水 2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1
苯酚溶液（ 80 ％）0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
浓硫酸（冲入） 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
操作方法同上，绘成标准糖曲线（ OD 值为纵坐标，糖浓度为横坐标）。
7. 心肌组织匀浆 MDA 含量测定：
机体组织通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中多不和脂肪酸（ Polyunsaturated Fatty Acid ， PUFA ）引发脂质过氧化反应，其产物为 MDA ，测定 MDA 含量不仅可反映组织脂质过氧化的程度，也可间接反映细胞损伤的程度。
（ 1 ）原理： MDA 与硫代巴比妥酸结合，形成红色产物，在 532nm 处有最大吸收峰。
（ 2 ）试剂组成：
① 1 号试剂： 11ml 溶液，室温保存、天冷时会凝固，每次测试前适当加温以加速溶解，直至透明方可应用。
② 2 号试剂： 11ml 溶液，用时加双蒸水至 330ml 混匀。
③ 3 号试剂：粉剂，用时加双蒸水至 110ml ，适当加温，充分溶解。
④标准品： 10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml 。
视测定样品的数量，配制甲、乙液。
⑤甲液配制方法： 1 号试剂 :2 号试剂 :3 号试剂 =0.1ml:3ml:1ml 混合备用。
⑥乙液配制方法： 1 号试剂 :2 号试剂 : 双蒸水 =0.1ml:3ml:1ml 混合备用。
（ 3 ）测试方法（见表 7-5-3 ）：
表 7-5-3 心肌组织匀浆 MDA 含量测定
试剂及样品（ ml ）
标准管 标准空白管 测定管 测定空白管
标准品
a* 测试样品
a* a* 无水乙醇
a* 甲液
4.1 4.1 乙液 4.1 4.1 旋涡混匀器混匀，置沸水浴 40min ，以 4000rpm/min 速度离心 10min ，吸取上清液，以蒸馏水调零、 1cm 比色杯在 532nm 处比色，读取各测定管及标准管吸光度。
测定心肌组织匀浆总蛋白含量（ mg.pro/ml ）。
按下列公式计算结果：
MDA （ nmol/mg.pro ） = 测定管吸光度—测定空白管吸光度 3 10nmol/ml ÷蛋白含量
标准管吸光度 — 标准空白管吸光度
换算出每克湿重心肌组织的 MDA 含量。
（ 4 ）备注：
① a* 代表样品取样量和双蒸水取样量。参考取样量：血清（浆） 0.1~0.2ml 、 10% 组织匀浆 0.1~0.2ml 。
②一般标准管、标准空白管及测定空白管每批只需做 1~2 只，若测定管中蛋白量不是太高，则测定空白管可以不测。
③溶血标本不宜作此实验，因血红蛋白使 MDA 检测结果偏高。
④比色时液体如发现混浊，可置 37 ℃片刻，变清后再行比色。
⑤参考值：
人血清（浆）： 7.1+1.2nM/ml ；
标准管参考吸光度：当标准品取样量为 0.1ml 时，则吸光度为 0.060~0.070 。
8. 心肌组织匀浆 SOD 活性测定：
超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase ， SOD ）对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要的作用，此酶清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤。故 SOD 活力的高低与衰老、肿瘤、炎症、自身免疫病、血液病、心血管病、肾脏病、消化系统疾病、药物作用等有密切的联系，对疾病的病因学探讨、诊断、治疗、术后观察、疗效观察有着重要意义。
（ 1 ）原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫色，用可见分光光度计测定其吸光度。当被测样品中含 SOD 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度值，从而计算 SOD 的活力。组织匀浆 SOD 活性的定义为每毫克组织蛋白在 1ml 反应液中 SOD 抑制率达 50% 时所对应的 SOD 量为一个亚硝酸盐单位。
（ 2 ）试剂组成与配制参见不同厂家的试剂盒操作说明书，测试方法见表 7-5-4 ：
表 7-5-4 心肌组织匀浆 SOD 活性测定
试剂（ ml ）测定管对照管
1 号试剂 1.0 1.0
样品a*
蒸馏水0.5** 0.5**+a*
2 号试剂0.1 0.1
3 号试剂0.1 0.1
4 号试剂0.1 0.1
用旋涡混匀器充分混匀，置 37 ℃恒温水浴 40min
显色剂（ ml ） 2 2
旋涡混匀器混匀， 10min 后倒入 1cm 光径比色杯中，以蒸馏水调零、在波长 550nm 处比色，读取各测定管及对照管吸光度。
测定心肌组织匀浆总蛋白含量（ mg.pro/ml ）。
按下列公式计算结果：
SOD(NU/mg.pro)= 对照管吸光度一测定管吸光度 ÷ 50% 3 反应液总体积 ÷蛋白含量 对照管吸光度 取样量
（ 4 ）备注：
① a* 代表样品取样量和双蒸水取样量， ** 若只测总 SOD ，可不加。
②参考取样量：最佳取样量因样品种类不同， SOD 活力不一。根据酶的百分抑制率与酶活力呈抛物线关系，各种测定样品取样量不同。一般第一次使用试剂盒测定时，就选取三只不同取样量的测试管。例如测定 10% 心肌组织匀浆，取样量分别为 10μl 、 20μl 、 30μl 的量。
③正常参考值：人血清 T-SOD 活力： 104.2 ± 18.8NU/ml ；人红细胞中 T-SOD 活力： 19246 ±
132NU/ml ；小鼠 1% 皮肤组织 T-SOD 活力： 69.01 ± 19.95NU/mg.pro ；家兔血清 T-SOD 活力： 429.04 ± 31.60NU/ml 。
【注意事项】
1. 家兔行耳缘静脉麻醉时，要由远心端开始，注射速度要慢，以防麻醉过量造成动物死亡。
2. 如果操作者技术娴熟、不会造成家兔气胸，可不必对动物施行气管插管术与人工呼吸。
3. 开胸挑断肋骨时，尽量贴近胸骨，以免伤及肋间动脉而造成大出血。
【讨论思考题】
1. 冠脉结扎成功的标志有哪些？试分析其发生的机理。
2.MDA 含量及 SOD 活性的变化为何可反映心肌缺血 / 再灌注损伤的程度？试分析其发生机理。
（樊 贵）
实验六 急性右心衰竭
【实验目的】
1. 掌握急性右心衰竭动物模型的复制方法。
2. 观察急性右心衰竭时呼吸、心律、血压及中心静脉压的变化。
3. 通过对实验的观察分析，加深对心力衰竭的发生机理及病理生理变化的理解。
基础医学机能实验设计 班级：临床1202 姓名：汪茜 学号：2 题目：卡托普利、硝苯地平和硝普钠对血压的影响 （一）材料与方法 1、实验对象及分组 （1）实验对象的种类：家兔8只。 （2）家兔的条件：家兔体重2.0~3.0kg，体重不应相差10%，雌雄各半，健康状况良好。 健康标准：1、一般状况：发育良好，反应灵活，食欲尚佳 2、皮毛与爪趾：被毛浓密而有光泽，紧贴体表。 爪趾无溃疡、结痂。 3、头部：眼睛明亮而灵活，眼结膜无充血，眼鼻部 无过多分泌物，呼吸均匀，无鼻翼扇动。 4、腹部与外生殖器：腹部无膨胀，肛门周围毛色洁 净，无损伤、脓痂与分泌物。 （二）实验器材与药品 BL-410型生物信号处理系统、哺乳类动物手术器械一套、听诊器、兔固定台、玻璃分针、注射器（5ml、2ml、1ml）、针头、头皮针、有色丝线、缚腿带、纱布、压力转化器、气管插管、动脉插管、动脉夹、保护电极、婴儿秤。20%氨基甲酸乙酯溶液（乌拉坦溶液）、0.08%
卡托普利(2.10 ml/kg) 、0.004%硝苯地平(0.84 ml/kg) 、0.002%硝普钠(0.54 ml/kg)、0.5%肝素生理盐水、生理盐水。 （三）实验步骤 1、麻醉固定：选取合适家兔后，称重，用20%氨基甲酸乙酯溶 液5ml/kg，从耳缘静脉缓慢注入（用头皮针），麻醉后仰卧固定于手术台上。可保留耳缘静脉以待给药。麻醉过程中若发现药量不够可适当增加麻醉药量（不宜超过原量的10%） 2、气管插管：剪去兔子颈部手术部位被毛，在甲状软骨至胸骨上 凹作一切口，用止血钳分离肌肉至暴露气管，并穿一根浸过生理盐水的丝线备用。于甲状软骨下1~2cm处的两个软骨环之间，用手术剪将气管横向切开，再想头端作一纵向切口，使呈’’⊥’’型，将口径适当的气管插管由切口向肺段插入气管腔内，用备用线结扎，再在插管的侧管上打结固定，以防插管滑出。3、颈总动脉分离与插管：在气管左侧，分离两条肌肉之间的结缔 组织，找到呈粉红色较粗大的血管，用手触之有搏动感，即为颈总动脉。用拇指和示指抓住颈皮和颈肌，以中指顶起外翻，另一手持玻璃分针，顺血管走行方向分离出颈总动脉。用长大约1.5cm，内径约为0.1~0.2的塑料管插入（管头为斜面），另一头连接的换能器腔中应充满肝素抗凝剂。游离的颈总动脉段应有两根备用线，一根结扎动脉远心端，用动脉夹夹住近心端，另一根线打一活结于动脉夹与远心端结扎线之间。用眼科剪在动脉靠远心端结扎线处剪一“V”形切口，插入导管。插
一、选择题 1.兔的正确捉持方法为：一手抓住（ B ），另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势 A 双耳 B 颈背部皮肤 C 头部 D 双上肢 2.下列哪种溶液是等渗溶液（ C ） A 5%氯化钠 B 10%葡萄糖 C %氯化钠 D %葡萄糖 3.在机能学实验中，做颈总动脉插管时常用下列哪种剪刀剪开颈动脉（ C ） A 弯手术剪刀 B 直手术剪刀 C 眼科剪 D 普通手术剪刀 4.行气管切开时，应作（ B ）切口 A “T”行 B 倒“T”行 C “V”行 D “L”行 5.破坏蛙脑时，探针的针位置是（ A ） A 枕骨大孔 B 头部正中 C 第一颈椎 D 第二颈椎 6.机能实验学主要内容不包括下列哪项（ D ） A 生理学知识 B 药理学知识 C 病理生理学知识 D 组培学知识 7.在小鼠腹腔注射中，下列说法中错误的是（ B ） A 注射时应从左下腹或右下腹进针，避开膀胱 B 进针时以45度角直接刺入腹腔 C 在给药前应回抽，判断有无血液或气泡 D 腹腔注射给药量一般为10g做兔颈手术时，打开颈总动脉鞘时，可
见哪条神经最细（ D ） A 迷走神经 B 交感神经 C 升压神经 D 减（降）压神经 二、填空题 1.动物实验中，常用（25%的乌拉坦）麻醉家兔。 2.小白鼠脊髓半横断损伤，导致（对）侧浅感觉消失和（同）侧深感觉消失。 3.家兔肺水肿后，气管插管口有大量（粉红）色泡沫液体流出，肺部听诊有（湿）啰音。 4.呋塞米的利尿原理是通过阻断髓袢（升支粗段）重吸收氯化钠而使尿量增多。 5.小肠平滑肌的生理特点是：兴奋性（较低）；收缩（微弱）；富有（节律性）；具有紧张性和（伸展性）；对化学温度机械牵张敏感。 三、判断题 1.增大无效腔，呼吸变浅变快。（错） 2.在一定范围内，随着刺激强度的增强，肌肉收缩幅度增大。（对） 3.豚鼠迷路破坏后，身体内对侧偏转眼球出现震颤。（错） 4.低氧对呼吸的刺激作用完全是通过外周和化学感受器实现的。（错） 5.硫酸镁导泻作用是通过注射给药方式实现的。（错） 6.小白鼠一氧化碳中毒时，口唇出现樱桃红色。（对） 7.青霉素钾盐快速注射小白鼠体内，会使小白鼠先出现兴奋，后抑制，最后中毒死亡。（对） 8.发绀是缺氧的表现，但缺氧的病人不一定发绀。（对）
习题十一、有机磷农药中毒及其解救 一、单选题 （ C ）1、有机磷酸酯类中毒，必须马上用胆碱酯酶复活剂抢救，是因为： A．胆碱酯酶不易复活B．胆碱酯酶复活药起效慢C．被抑制的胆碱酯酶很快“老化”D．需要立即对抗乙酰胆碱的作用（ D ）2、下列症状哪种不是有机磷酸酯慢性中毒的表现：A．神经衰弱症候群B．多汗C．腹胀D．小便失禁 （ C ）3、碘解磷定除复活胆碱酯酶外，还能： A．与N受体直接结合而解除肌肉震颤症状B．与乙酰胆碱直接结合而解毒 C．与血中游离的有机磷酸酯类直接结合而解毒D．与M受体直接结合而阻断乙酰胆碱的作用 （ B ）4、有机磷酸酯类的急性中毒治疗中注射碘解磷定的速度应为： A．快速注射B．注射宜慢C．先快后慢D．先慢后快 （ B ）5、碘解磷定对有机磷酸酯类解毒疗效的叙述，哪种是错误的： A.对马拉硫磷的解毒疗效较好 B.对乐果中毒是首选的解毒剂 C.对敌百虫中毒疗效稍差 D.对敌敌畏中毒疗效稍差 （ C ）6、下列哪种症状不是有机磷酸酯中毒的症状：A.流涎、出汗B.呼吸困难C.支气管分泌物减少D.肌束颤动 （ C ）7、有机磷酸酯类中毒，宜选用：A.阿托品B.解磷定C.阿托品＋解磷定D.筒箭毒碱 （ D ）8、有机磷酸酯类中毒的机制 A.直接激动M、N受体 B.阻断M、N受体 C.促进乙酰胆碱的释放 D.难逆性的抑制胆碱酯酶 （ D ）9、氯解磷定的作用机制是： A.直接阻断M、N受体 B.抑制乙酰胆碱的形成 C.促进乙酰胆碱的摄取 D.恢复胆碱酯酶的活性 （ B ）10、有机磷中毒实验中，何时开始解救：A.轻度中毒B.中度中毒C.重度中毒D.出现呼吸麻痹时 二、名词解释1、胆碱酯酶2、N样作用 三、填空题 1、有机磷农药抑制______________________活性，使____________________在体内堆积，表现为____________症状、_______________症状及_________________症状。(胆碱酯酶、乙酰胆碱、M样、N样、中枢) 2、有机磷农药中毒选用____________________和____________________解救。(M受体阻断药（阿托品）、胆碱酯酶复活药（解磷定）) 四、问答题 1、有机磷中毒的原理是什么在兔动物实验中，动物中毒后期呼吸与血压怎样变化解磷定解毒原理是什么 有机磷酸酯类可以与胆碱酯酶牢固的结合，其结合点位于胆碱酯酶的酯解部位丝氨酸的羟基，磷氧二原子易于形成共价键结合，生成难以水解的磷酰化胆碱酯酶。结果使胆碱酯酶失去水解Ach的能力，造成体内Ach大量聚集，引起一系列中毒症状，包括M症状、N症状和中枢神经系统症状。呼吸加升加快，血压下降。胆碱酯酶的复活剂。 3、当家兔由于有机磷酸农药中毒而出现呼吸急促、瞳孔缩小、大小便失禁、肌张力减弱、肌震颤时，给予阿托品治疗后，上述那些症状会改善为什么 解磷定能缓解哪些症状解毒原理是什么解救中重度中毒时,为何不单用阿托品而应与解磷定合用 家兔有机磷酸酯类中毒的表现及解救措施临床上抢救人时的步骤（10分） 答：M样症状：瞳孔变小，呼吸急促，流泪，流涎，大小便失禁。（3分）N样症状：抽搐，痉挛，肌颤。（3分）中枢样症状：兴奋不安。（2分）解救措施：家兔儿缘静脉注射阿托品和解磷定。（2分）临床上抢救病人的步骤：①脱离现场，清除毒物；（1分）②洗胃；（1分）③输氧；（1分）④给予特效解毒药，促进毒物排泄，密切监测血压、呼吸、脉搏，观察瞳孔等，处理并发症，重症者用肾上腺皮质激素。（2分） 习题九、异烟肼半数致死量（LD50）的测定
一、填空题。（每空1分，共20分） 1、将液体加热至沸腾，使液体变为蒸气，然后使蒸气冷却再凝结为液体，这两个过程的联合操作称为（）。 2、减压蒸馏装置中蒸馏部分由（）、（）、（）、（）及（）、（）等组成。 3、熔点是指（），熔程是指（），通常纯的有机化合物都有固定熔点，若混有杂质则熔点（），熔程（）。 4、（）是纯化固体化合物的一种手段，它可除去与被提纯物质的蒸汽间有显著差异的不挥发性杂质。 5、按色谱法的分离原理，常用的柱色谱可分为（）和（）两种。 6、芳胺的酰化在有机合成中有着重要的作用，主要体现在（）以及（）两个方面。 7、采用重结晶提纯样品，要求杂质含量为（）以下，如果杂质含量太高，可先用（），（）方法提纯。 8、在从天然物槐花米中提取芦丁，提取液中加入生石灰可以（）芦丁，加入盐酸可以沉淀芦丁。二、选择题。（每空2分，共20分） 1、常用的分馏柱有（）。A、球形分馏柱 B、韦氏（Vigreux）分馏柱 C、填充式分馏柱 D、直形分馏柱 2、水蒸气蒸馏应用于分离和纯化时其分离对象的适用范围为（）。A、从大量树脂状杂质或不挥发性杂质中分离有机物B、从挥发性杂质中分离有机物C、从液体多的反应混合物中分离固体产物 3、在色谱中，吸附剂对样品的吸附能力与（）有关。A、吸附剂的含水量 B、吸附剂的粒度 C、洗脱溶剂的极性 D、洗脱溶剂的流速 4、环己酮的氧化所采用的氧化剂为（） A、硝酸 B、高锰酸钾 C、重铬酸钾5．1）卤代烃中含有少量水（）。2）醇中含有少量水（）。3)甲苯和四氯化碳混合物（）。 4)含3%杂质肉桂酸固体（）。A、蒸馏 B、分液漏斗 C、重结晶 D、金属钠 E、无水氯化钙干燥 F、无水硫酸镁干燥 G、P2O5 H、NaSO4干燥 6、重结晶时，活性炭所起的作用是（）。A、脱色 B、脱水 C、促进结晶 D、脱脂 7、正丁醚合成实验是通过（）装置来提高产品产量的？A、熔点管 B、分液漏斗 C、分水器 D、脂肪提取器 三、判断题。（每题1分，共10分） 1、液体的蒸气压只与温度有关。即液体在一定温度下具有一定的蒸气压。（） 2、在蒸馏低沸点液体时，选用长颈蒸馏瓶；而蒸馏高沸点液体时，选用短颈蒸馏瓶。（） 3、薄层色谱可用于化合物纯度的鉴定，有机反应的监控，不能用于化合物的分离。（） 4、化合物的比移值是化合物特有的常数。（） 5、重结晶实验中,加入活性碳的目的是脱色。（） 6、在进行正丁醚的合成中，加入浓硫酸后要充分搅拌。（） 7、在使用分液漏斗进行分液时，上层液体经漏斗的下口放出。（） 8、纯净的有机化合物一般都有固定的熔点。（） 9、微量法测定沸点时，当毛细管中有一连串气泡放出时的温度即为该物质的沸点。（） 10、硫酸洗涤正溴丁烷粗品，目的是除去未反应的正丁醇及副产物1－丁烯和正丁醚。（） 四、实验装置图。（每题10分，共20分）1、请指出以下装置中的错误之处？并画出正确的装置。 2、画出柱层析装置示意图，并简述实验的基本操作过程和注意事项。五、简答题。（每题6分，共30分） 1、简述减压蒸馏操作的理论依据。当减压蒸馏结束时，应如何停止减压蒸馏？为什么？（） 2、什么叫共沸物？为什么不能用分馏法分离共沸混合物？ 3、在乙酰苯胺的制备过程中，为什么是冰醋酸过量而不是
机能实验学 一、选择题 1.兔的正确捉持方法为：一手抓住（ B ），另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势 A 双耳 B 颈背部皮肤 C 头部 D 双上肢 2.下列哪种溶液是等渗溶液（ C ） A 5%氯化钠 B 10%葡萄糖 C 0.9%氯化钠 D 0.9%葡萄糖 3.在机能学实验中，做颈总动脉插管时常用下列哪种剪刀剪开颈动脉（ C ） A 弯手术剪刀 B 直手术剪刀 C 眼科剪 D 普通手术剪刀 4.行气管切开时，应作（ B ）切口 A “T”行 B 倒“T”行 C “V”行 D “L”行 5.破坏蛙脑时，探针的针位置是（ A ） A 枕骨大孔 B 头部正中 C 第一颈椎 D 第二颈椎 6.机能实验学主要内容不包括下列哪项（ D ） A 生理学知识 B 药理学知识 C 病理生理学知识 D 组培学知识 7.在小鼠腹腔注射中，下列说法中错误的是（ B ） A 注射时应从左下腹或右下腹进针，避开膀胱 B 进针时以45度角直接刺入腹腔 C 在给药前应回抽，判断有无血液或气泡
D 腹腔注射给药量一般为0.1-0.25ml/10g 8.做兔颈手术时，打开颈总动脉鞘时，可见哪条神经最细（ D ） A 迷走神经 B 交感神经 C 升压神经 D 减（降）压神经 二、填空题 1.动物实验中，常用（25%的乌拉坦）麻醉家兔。 2.小白鼠脊髓半横断损伤，导致（对）侧浅感觉消失和（同）侧深感觉消失。 3.家兔肺水肿后，气管插管口有大量（粉红）色泡沫液体流出，肺部听诊有（湿）啰音。 4.呋塞米的利尿原理是通过阻断髓袢（升支粗段）重吸收氯化钠而使尿量增多。 5.小肠平滑肌的生理特点是：兴奋性（较低）；收缩（微弱）；富有（节律性）；具有紧张性和（伸展性）；对化学温度机械牵张敏感。 三、判断题 1.增大无效腔，呼吸变浅变快。（错） 2.在一定范围内，随着刺激强度的增强，肌肉收缩幅度增大。（对） 3.豚鼠迷路破坏后，身体内对侧偏转眼球出现震颤。（错） 4.低氧对呼吸的刺激作用完全是通过外周和化学感受器实现的。（错） 5.硫酸镁导泻作用是通过注射给药方式实现的。（错） 6.小白鼠一氧化碳中毒时，口唇出现樱桃红色。（对） 7.青霉素钾盐快速注射小白鼠体内，会使小白鼠先出现兴奋，后抑制，最后中毒死亡。（对）
影响尿液生成的因素 【目的和原理】 尿生成的过程包括肾小球的滤过、肾小管和集合管的重吸收和分泌三个过程。凡能影响上述过程的任何因素，均可影响尿的生成并可引起尿量及尿的性质、成分的改变。本实验以家兔为实验对象，采用膀胱插管术收集并记录尿量，主要观察不同因素或药物对尿量的影响。实验目的： 1．学习膀胱插管术、尿量记录及尿糖鉴定等泌尿实验的方法。 2．进一步学习并熟悉大动物实验的基本方法和技术。 3．观察影响尿生成的若干因素，加深理解尿生成的机理。 【实验材料】 1．动物家兔 2．试剂和药品生理盐水、20％氨基甲酸乙酯溶液、20％葡萄糖注射液、100单位／毫升肝素生理盐水（或6％枸橼酸钠）、1∶10，000去甲肾上腺素、垂体后叶素、速尿、20％甘露醇、班氏（Benedict）尿糖定性试剂。 3．装置和器材微型计算机及生物信号采集与处理系统、血压换能器、保护电极、兔手术台和手术器械、动脉插管、动脉夹、膀胱漏斗、注射器（2ml 、5ml 、10ml 、20ml）及针头、酒精灯、试管架、试管和试管夹、输液装置、手术灯、纱布、丝线等。 【实验方法】 1．麻醉固定将兔称重后，自耳缘静脉缓慢注入20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg），待动物麻醉后仰卧固定于兔手术台上，剪去颈部和下腹部手术野的毛。 2．手术 1）颈总动脉插管在颈部正中切开皮肤6～7厘米，分离皮下组织及肌肉，暴露出气管。在气管的两边分别分离出左颈总动脉和右迷走神经，在其下穿线备用。按颈动脉插管方法将充满肝素生理盐水的动脉插管插入左颈总动脉，动脉插管的另一端经血压换能器连接于生物信号采集、处理系统的某一通道上，用于观察动脉血压的变化。手术完毕后用温的生理盐水纱布覆盖创面。 2）膀胱插管在下腹部正中线脐下方作一长约3～4厘米的皮肤切口，其下端直达耻骨联合。分离皮下组织并沿腹白线切开腹壁。将膀胱翻出腹外，辨认清楚输尿管，并向肾侧仔细地分离两侧输尿管2～3厘米，在其下方穿一条线，将膀胱上翻用线结扎膀胱颈部以阻断它同尿道的通路；然后在膀胱顶部选血管较少处，做一环形的荷包缝合，缝合线两端要足够长，暂不结扎；在荷包缝合的中央剪一纵行小切口，插入膀胱漏斗，然后用荷包缝合线将切口边缘固定于膀胱漏斗的凹槽上，膀胱漏斗的延伸管与引流导管相连。动物所产生的尿液经膀胱漏斗、引流导管流出后直接观察。手术完毕用温热的生理盐水纱布覆盖腹部创口。3．实验记录 生物信号采集与处理系统：与上次实验相同 4. 观察项目 待尿量和血压稳定后，即可进行下列各项观察。注意每项实验开始前都必须先记录一段正常尿量和血压曲线作为对照，然后进行注射或刺激，并连续观察和记录至效应明显后再等待恢复至原来水平时，才能开始下一项实验。 1）耳缘静脉快速注射37OC生理盐水20ml，观察血压和尿量的变化。 2）结扎并剪断右侧迷走神经，用中等强度的电流刺激其外周段20～30 秒，使血压维持在40～50mmHg，观察尿量的变化。 3）先收集尿液2滴进行尿糖定性实验*作为对照，然后自耳缘静脉注射20%葡萄糖溶液10ml，观察血压和尿量的变化，在尿量变化最明显时，再收集尿液2滴作尿糖定性实验。
机能学实验设计 ——探究纳豆激酶是否有降血压作用 专业：医学检验与技术 年级及班级：14级本科一班 学号：1415030104 姓名：李天佑 组数：1班2组 日期：2015年12月12日
【立题依据】 1、研究背景： 纳豆源于中国。纳豆类似中国的发酵豆、怪味豆。古书(和汉三才图会)记载有：“纳豆自中国秦汉以来开始制作。”纳豆初始于中国的豆豉。据《食品文化·新鲜市场》(石毛直道著，第101页)一书介绍，两种纳豆都与中国有缘。特别是咸纳豆，大约在奈良、平安时代由禅僧传入日本。日本也曾称纳豆为“豉”，平城京出土的木简中也有“豉”宇。与现代中国人食用的豆豉相同。由于豆豉在僧家寺院的纳所制造后放入瓮或桶中贮藏，所以日本人称其为“唐纳豆”或“咸纳豆”。纳豆激酶(nattokinase简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilislnatto)产生的一种丝氨酸蛋白酶。近年来，关于纳豆降血压的相关广告在国内十分盛行，但真正的有科学依据关于报道还未出现，日本生物科学研究所与韩国首尔延世大学研究院心脑血管疾病中心共同研究关于纳豆激酶对高血压的效果。该研究报告的结论是：“总之，纳豆激酶会导致收缩压和舒张压下降。这个结果表明增加纳豆激酶的摄入，可能对于预防和治疗高血压起着重要的作用。” 随着中国高血压病人的增多，有相关报道中国高血压患者达2亿人，每年新增加1000万人！市面上的降血压药物在降低血压的同时，也带来了一些副作用，因此寻找一种食物让人们在日常生活中预防控制血压及有益于健康是广大人民普遍的需求。 2、研究目的： 本实验旨在探讨纳豆激酶是否有降低血压的功效，如果有，那对于病情不同程度的病人效果又是否有不同。 【研究内容与方法】 研究方法：本实验将先从小鼠入手，观察是否有降血压作用，如有作用再推广及人类，探究其对对于病情不同患者的作用效果。即实验二是在实验一的基础上进行的。 研究内容： 实验一： 1、实验对象与分组： 大鼠9只、体重100克左右、雄性、健康状况良好。 按血压、体重随机分成3组，设正常组（A组），高血压组（B组），高血压纳豆激酶组（C组）。 2、实验器材和药品： 大鼠、台秤、音频震荡器、扬声器、血压换能器、20%氨基甲酸乙酯、生理盐水。 3、高血压大鼠造模： 采用大鼠，4月龄，放入隔音室内笼养，噪音刺激可由电铃或扬声器发出，发音器是一个音频振荡器，连接一个20W高音扬声器。噪音刺激应经常在700～1000周/秒中变换，噪音刺激每30秒一次，亦可每隔1分钟刺激30秒。可随时变换毋须恒定，但噪音干扰须日夜不止，连续数月。噪音刺激连续3个月后血压普遍升高，大灰鼠正常平均收缩压为113±8mmHg，此时可升高到130～140mmHg，有40%动物收缩压可高达160mmHg。 4、实验步骤： 大鼠进入实验室先喂养1-2天，然后选血压在130—140的小鼠进行实验，AB组
机能实验学 一、选择题 1、兔的正确捉持方法为:一手抓住( B ),另一手托其臀部,使兔呈坐位姿势 A 双耳 B 颈背部皮肤 C 头部 D 双上肢 2、下列哪种溶液就是等渗溶液( C ) A 5%氯化钠 B 10%葡萄糖 C 0、9%氯化钠 D 0、9%葡萄糖 3、在机能学实验中,做颈总动脉插管时常用下列哪种剪刀剪开颈动脉( C ) A 弯手术剪刀 B 直手术剪刀 C 眼科剪 D 普通手术剪刀 4、行气管切开时,应作( B )切口 A “T”行 B 倒“T”行 C “V”行 D “L”行 5、破坏蛙脑时,探针的针位置就是( A ) A 枕骨大孔 B 头部正中 C 第一颈椎 D 第二颈椎 6、机能实验学主要内容不包括下列哪项( D ) A 生理学知识 B 药理学知识 C 病理生理学知识 D 组培学知识 7、在小鼠腹腔注射中,下列说法中错误的就是( B ) A 注射时应从左下腹或右下腹进针,避开膀胱 B 进针时以45度角直接刺入腹腔 C 在给药前应回抽,判断有无血液或气泡 D 腹腔注射给药量一般为0、1-0、25ml/10g
8、做兔颈手术时,打开颈总动脉鞘时,可见哪条神经最细( D ) A 迷走神经 B 交感神经 C 升压神经 D 减(降)压神经 二、填空题 1、动物实验中,常用(25%的乌拉坦)麻醉家兔。 2、小白鼠脊髓半横断损伤,导致(对)侧浅感觉消失与(同)侧深感觉消失。 3、家兔肺水肿后,气管插管口有大量(粉红)色泡沫液体流出,肺部听诊有(湿)啰音。 4、呋塞米的利尿原理就是通过阻断髓袢(升支粗段)重吸收氯化钠而使尿量增多。 5、小肠平滑肌的生理特点就是:兴奋性(较低);收缩(微弱);富有(节律性);具有紧张性与(伸展性);对化学温度机械牵张敏感。 三、判断题 1、增大无效腔,呼吸变浅变快。(错) 2、在一定范围内,随着刺激强度的增强,肌肉收缩幅度增大。(对) 3、豚鼠迷路破坏后,身体内对侧偏转眼球出现震颤。(错) 4、低氧对呼吸的刺激作用完全就是通过外周与化学感受器实现的。(错) 5、硫酸镁导泻作用就是通过注射给药方式实现的。(错) 6、小白鼠一氧化碳中毒时,口唇出现樱桃红色。(对) 7、青霉素钾盐快速注射小白鼠体内,会使小白鼠先出现兴奋,后抑制,最后中毒死亡。(对)
医学机能学实验-学生创新性实验设计题目汇编 饮食控制对AD大鼠学习、记忆能力的影响 Nm23-H1基因对宫颈癌转移的影响雄性素对大鼠心肌却血型损伤的保护作用比较不同血管生成抑制剂对抗肿瘤效果一氧化氮对肿瘤的作用芹菜提取物对肾性高血压大鼠血管重构的影响盐是天然的抗抑郁剂（探究实验）绿茶对家兔急性心力衰竭模型的保护和治疗作用咖啡对大鼠学习记忆的影响氨基比林咖啡因片（脑清片）致死性研究及对其有效成分进行配比优化芦荟与治疗高血压的相关性探究银杏叶对高血压左心肥厚逆转作用氨茶碱对小鼠心肺复苏的作用注射用碟脉酮对垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血的影响血红素加氧酶 1 对哮喘的抗炎作用新型利尿药托拉塞米的利尿作用探究阿司匹林对高血压的治疗作用大蒜素对小鼠结肠癌抗肿瘤作用茶多酚对心律失常的作用口服异丙酚与部分常用麻醉药效果比较的研究高盐饮食对家兔血压和心肝肾组织中自由基的影响实验
u型高血压时交感神经活性及其相应受体敏感性的变化 艾叶油对离体豚鼠气管平滑肌的影响白术对在体小鼠胃肠运动的作用及其机制的探讨不同比例的高渗盐溶液对失血性休克家兔的抢救效果丹参注射液、参麦注射液和大蒜素对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用的对比实验毒蕈碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用急性右心衰竭与ANP在急性心力衰竭治疗中的作用决明子对家兔的降血脂作用的研究 咖啡因对大鼠工作记忆促进作用的定性研究 硫化氢和胃肠道疾病硫化氢对胃肠道的扩张及其机制的简单探讨 迷迭香对小鼠脑缺血再灌注的影响 纳洛酮对家兔失血性休克血压的影响生姜汁的降血糖作用生姜油对病毒性肝炎小鼠肝损伤的预防作用研究生姜油对豚鼠气管平滑肌的作用研究酸樱桃提取物软膏剂镇痛抗炎作用的初步研究探究腺苷在大鼠心肌缺血后适应中的保护作用桃仁对未孕大鼠子宫平滑肌收缩的影响小鼠中毒性休克模型及其救治药物 血管紧张素n对不同年龄大鼠心脏al肾上腺素受体介导正性变力效应的影响 乙醇联合安定对血压、心率和微循环的影响 丹参、川芎、穿山甲的活血性气作用比较应激性因素致大鼠胃溃疡作用及药物预防不同的送服溶液对药物吸收的影响天麻素对血压影响途径的研究抗生素联合用药的优势褪黑素对大鼠应激性胃溃疡的影响花椒毒酚不同给药途径镇痛作用的比较研究白萝卜提取物（MIGB对小肠平滑肌运动的影响绿豆球蛋白对血浆胆固醇的影响苦瓜提取物的降血糖作用阿嗪米特对血铅浓度的影响1, 2-二甲基-3-羟基4吡啶酮（DHPO对铅中毒小鼠学习记忆能力的影响 多巴胺在治疗急性肾功能衰竭中疗效评价甘油溶血实验鸡蛋对大鼠胃溃疡的预防作用及其机制探讨失血性休克腹腔复苏最佳给药浓度的研究甜菊苷的降压作用 实验性铅中毒对子代大鼠学习记忆能力的影响山莨菪碱及IL-13 预处理对肾脏缺血/ 再灌注的影响硝酸异山梨酯对急性右心功能衰竭的治疗作用缩宫素对离体子宫平滑肌的兴奋作用主、被动吸烟的危害有机磷及解毒剂对蟾蜍离体坐骨神经腓肠肌肌标本的作用失血性休克的生理指标观察利尿药对家兔尿量的影响布鲁卡因、利多卡因对BaCI2 致心律失常的治疗效果的比较理化因素对红细胞脆性的影响精神性灼口综合征的临床心理治疗海水浸泡对创伤性脑水肿影响的实验研究缺铁对大鼠胃排空功能的影响及机制新斯的明对箭毒和琥珀胆碱肌松作用的影响清开灵注射液防治酒精中毒性肝损伤碘化钾预防孢子丝菌病的实验研究冷热环境中蟾蜍肠系膜微循环血流速度改变兔肾内是否存在乙酰胆碱能舒血管纤维灭滴灵、乙醇对甲醇中毒的解救对比一种联合药膏治疗烧伤的疗效判断巧克力的镇咳作用烟碱对家兔血
机能实验设计 - 机能实验设计 课题名称：咖啡因对青蛙骨骼肌收缩的影响选题目的和意义 1、实验目的 本实验的目的为探究咖啡因任氏液对青蛙骨骼肌收缩的影响。 2、临床应用 咖啡碱是茶叶、咖啡豆、可可、可拉果等植物中的主要生物碱，化学名为1，3，7－三甲基黄嘌呤，分子式为C8H10O2N4。咖啡碱是重要的医药原料，对人体机体的作用非常复杂。咖啡碱能刺激神经系统，提高大脑记忆和识别能力，促进胰岛素分泌和降低Ⅱ型糖尿病风险，能刺激呼吸系统，可用于治疗早产婴儿呼吸暂停，具有抗癌效果，同时也会引起高血压和心率不齐导致钙流失和骨质疏松以及流产［1］等不良反应 3、研究意义 李淑翠等［2］报道咖啡因能提高小鼠运动耐力，使运动后小鼠肝糖原储备增加，血乳酸和血尿素氮水平降低，并抑制运动引起的脂质过氧化反应，表明咖啡因具有抗运动性疲劳作用；而运动依靠骨骼肌的收缩，肌肉收缩乏力时表现出运动疲劳。本次实验拟观察咖啡碱处理后，蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本在不同的刺激形式下，对肌肉收缩性的影响，进一步深入探讨咖啡因在缓解运动疲劳，提高运动耐受力作用
的具体机制。实验动物 青蛙实验材料 1、器械：手术器械一套 2、仪器：生物机能实验系统、张力换能器、刺激电极、肌动器等 3、药品：任氏液、咖啡因原液1支，100μg/ml咖啡因任氏液、1000μg/ml咖啡因任氏液。 4、其他：烧杯、棉线、纱布、培养皿、吸管等。实验步骤与方法 1、手术操作：制备青蛙坐骨神经腓肠肌标本。 2、试剂配制：制备1000μg/ml咖啡因任氏液；制备100μg/ml咖啡因任氏液。 3、实验准备：制备标本，先在任氏液中浸泡10分钟，然后再将实验组的标本分别在1000μg/ml 咖啡因任氏液与100μg/ml咖啡因任氏液中浸泡10分钟；对照组浸泡在任氏液中10分钟，进行两组对照实验。 4、仪器装置：准备好生物机能实验系统及张力换能器。 5、观察与记录：观察青蛙坐骨神经腓肠肌标本在不同浸泡环境下，其收缩性的影响，记录并对比阈刺激与最大刺激收缩曲线的幅度的百分比。 给肌肉的负荷增加2g后，测量肌肉收缩的阈刺激与最大刺激收缩曲线的收缩幅度，并计算它们增加的比例。 再给肌肉不完全强直收缩，重复3次后，再次测量阈刺激与最大刺激收缩曲线收缩的幅度，并计算它们增加的比
《机能实验学》习题一 一．填空题: 1. 家兔重 2.4千克，耳缘静脉注射1%盐酸吗啡15mg/kg，应注( 3.6 )毫升 2. 肺水肿家兔肺的特点是(大量白色或粉红色泡沫样痰,表面饱满光滑，红白相间)、(切面有白色或粉红色泡沫流出)、(有握雪感)，兔的特点 (肠内哮鸣音 )、(呼吸浅快)、(口唇粘膜青紫)。 3. 将沾有利多卡因的小滤纸贴附神经干上，利多卡因通过(阻断Na+通道 ) 作用使动作电位( 传导受阻) 。 4.家兔静脉麻醉最常用药物(乌拉坦)，浓度及给药量分别为(20%) 、(5ml/kg)。 5. 小鼠缺氧实验中复制低张性缺氧动物模型时，在广口瓶中加入钠石灰的作用是(吸收二氧化碳)，复制血液性缺氧动物模型的方法有(一氧化碳中毒)和(亚硝酸钠中毒)。 6. 常用的两栖类动物的生理代溶液是(任氏液) ，其主要成份为
(Nacl) 、(Cacl2) 、(Kcl) 和 (NaHCO3)。其所含阳离子有维持细胞的兴奋性和 (收缩性) 的功能；阴离子有维持细胞的 (酸碱平衡) 的功能。 7. 在心电图描记中，P波反映 ( 两心房去极化过程化所经历的时间)、QRS波群反映(两心室去极化过程) 、T波反映(心室复极化过程)、PR间期反映 (兴奋由心房传导至心室的时间) 、ST段反映(心室各部分心肌细胞均处于动作电位平台期) 、QT间期反映(从心室开始去极化到完全复极) 。 8. 在血管插管试验中肝素化的目的是( 抗凝，防止血液堵塞管口)，插管后进行的三步结扎法是指第一步结扎(远心端结扎)，第二步结扎(近心端结扎)，第三步(远心端和近心端对扎) 。 9. 运动对血压的影响是使(收缩压) 升高，主要原因是 (交感肾上腺髓质系统活动增加)。 10. 在抗B血清上滴加受试者血液，数分钟后出现凝集，抗A 血清未发生凝集，受试者的血型为(B) 型。 11. 失血性休克的治疗原则(扩容)、(纠酸) 、(解痉)。
本科临床医学专业《机能实验学》 集体备课教案（3） --“设计性实验” 设计性实验（一） 教学内容：1、实验设计概论 2、实验设计讲座 教学时数：5学时 教学方法：讲授、讨论 教学安排： 集中讲授，实验设计概论（约100分钟）→实验设计讲座（约100分钟）→学生讨论、提问、教师答疑（约25分钟）。 实验设计概论 §1 概述 ﹡机能实验学是一门什么课程？基础医学范畴？ 机能实验学是融合传统的生理学、病理生理学和药理学三门实验内容为一体的新型课程，是实验性很强的医学基础课程。 ﹡实验教学的主要手段？ 人体实验：有一定局限性 动物实验：主要是应用模拟人类疾病的动物模型进行实验研究，是生命科学领域研究正常机体机能代谢规律、疾病发生、发展、转归以及药物作用和机制的主要手段。 ﹡实验教学的主要目的？ 培养学生动手能力、科学思维及创新能力。 ﹡实验教学的主要内容？ 基础性实验：掌握基本实验技术及仪器，设备的使用，培养动手能力。 综合性实验：促进各学科知识的融会贯通。 设计性实验：掌握基本的科研工作方法。 §2 设计性实验 给定实验目的要求和实验条件，由学生自行设计实验方案并加以实现的实验。 以学生为主，导师带教，学生自己选择题目、开题设计、实施实验、观察记录、论文答辩等，即创设“发现情景”，培养学生个性，让学生积极主动的去探索未知世界。 ﹡实验设计目的 1、充分认识实验在科学理论产生和发展中的作用。 2、培养创新能力 3、培养一定的科研能力 ﹡实验设计三个基本要素 1、处理因素： 2、受试对象： 3、实验效应： 如：观察巯甲丙脯酸对肾性高血压大鼠的疗效（动脉血压变化是实验效应） ﹡实验设计的基本原则 1、对照原则：可使处理因素和非处理因素的差异有一个科学对比。 空白对照标准对照处理对照自身对照
机能学实验设计大纲 实验名称：外源性PS和内源性PS在肺水肿疗效 中的比较 课题来源：自选 设计班级：2006级临床医学本科1班 设计人员：林静 设计日期：2006年10月8日 指导老师：张晓 成都医学院实验技术教研室 2009年制
二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。 （一）实验设计目标，拟解决的关键问题 设计目标：探讨外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质对实验性肺 水肿治疗作用上所存在的区别，从而探讨外源性PS能否在肺水肿的防治中作为一 种较为理想的内源性PS不足的替代药物。 拟解决的关键问题：实验模型的制备。对试验性肺水肿的模型进行分组与实验结果分析。 （二）实验设计 1、实验动物设计 我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由： 1）、家兔易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。 2）、家兔肺相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。 2、实验专业设计 选用家兔作为实验动物，给予外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质，观察对实验性肺水肿治疗作用，观察兔子死亡时间（min），肺系数（g／kg），肺湿／干重比（g／g），血管外肺水（g）等实验指标。 3、实验统计设计 实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。 （1）随机：选正常成年健康重相近的家兔80只，将80只家兔按体重由小变大编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于家兔编号下。具体方法：动物编号为1—80号，随机数字从11行第一个数字开始接着抄写80个，按照能被4除的规律：不余到A组，余1到B1组，余2到B2组，余3到B3组，每组20只。 （2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。 （3）重复：本实验采用的是每实验小组有20只家兔，具有一定的重复性。 （4）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。 表1 实验数据收集记录表 编号肺系数（g／kg） 肺湿／干重比（g／ g） 血管外肺水（g） 兔子死亡时间 （min） A B1B2B3A B1B2B3A B1B2B3A B1B2B3
有机化学实验竞赛训练试题三 一、填空题。 1、常用的分馏柱有（球形分馏柱）、（韦氏（Vigreux）分馏柱）和（填充式分馏柱）。 2、温度计水银球（上限）应和蒸馏头侧管的下限在同一水平线上。 3、熔点测定关键之一是加热速度，加热太快，则热浴体温度大于热量转移到待测样品中的转移能力，而导致测得的熔点偏高，熔距（加大）。当热浴温度达到距熔点10-15℃时，加热要（缓慢），使温度每分钟上升（1-2℃）。 4、在正溴丁烷的制备实验中，用硫酸洗涤是（除去未反应的正丁醇）及副产物（1－丁烯）和（正丁醚）。第一次水洗是为了（除去部分硫酸）及（水溶性杂质）。碱洗（Na2CO3）是为了（中和残余的硫酸）。第二次水洗是为了（除去残留的碱、硫酸盐及水溶性杂质）。 二、选择题。 1、在水蒸气蒸馏操作时，要随时注意安全管中的水柱是否发生不正常的上升现象，以及烧瓶中的液体是否发生倒吸现象。一旦发生这种现象，应（B），方可继续蒸馏。 A、立刻关闭夹子，移去热源，找出发生故障的原因 B、立刻打开夹子，移去热源，找出发生故障的原因 C、加热圆底烧瓶 2、进行简单蒸馏时，冷凝水应从（B）。蒸馏前加入沸石,以防暴沸。 A、上口进，下口出 B、下口进，上口出 C、无所谓从那儿进水 3、在色谱中，吸附剂对样品的吸附能力与（ A B C D）有关。 A、吸附剂的含水量 B、吸附剂的粒度 C、洗脱溶剂的极性 D、洗脱溶剂的流速 4、在用吸附柱色谱分离化合物时，洗脱溶剂的极性越大，洗脱速度越（A）。 A、快 B、慢 C、不变 D、不可预测 5、在进行脱色操作时，活性炭的用量一般为（A）。 A、1%-3% B、5%-10% C、10%-20% D、30-40% 6、在乙酰苯胺的重结晶时,需要配制其热饱和溶液,这时常出现油状物,此油珠是 （B）。 A、杂质 B、乙酰苯胺 C、苯胺 D、正丁醚 7、熔点测定时，试料研得不细或装得不实，将导致（A）。 A、熔距加大，测得的熔点数值偏高 B、熔距不变，测得的熔点数值偏低 C、熔距加大，测得的熔点数值不变 D、熔距不变，测得的熔点数值偏高 三、判断题。
医学机能学实验---学生创新性实验设计题目汇编饮食控制对AD大鼠学习、记忆能力的影响 Nm23-H1基因对宫颈癌转移的影响 雄性素对大鼠心肌却血型损伤的保护作用 比较不同血管生成抑制剂对抗肿瘤效果 一氧化氮对肿瘤的作用 芹菜提取物对肾性高血压大鼠血管重构的影响 盐是天然的抗抑郁剂（探究实验） 绿茶对家兔急性心力衰竭模型的保护和治疗作用 咖啡对大鼠学习记忆的影响 氨基比林咖啡因片（脑清片）致死性研究及对其有效成分进行配比优化 芦荟与治疗高血压的相关性探究 银杏叶对高血压左心肥厚逆转作用 氨茶碱对小鼠心肺复苏的作用 注射用碟脉酮对垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血的影响 血红素加氧酶1对哮喘的抗炎作用 新型利尿药托拉塞米的利尿作用 探究阿司匹林对高血压的治疗作用 大蒜素对小鼠结肠癌抗肿瘤作用 茶多酚对心律失常的作用 口服异丙酚与部分常用麻醉药效果比较的研究
高盐饮食对家兔血压和心肝肾组织中自由基的影响实验 Ⅱ型高血压时交感神经活性及其相应受体敏感性的变化 艾叶油对离体豚鼠气管平滑肌的影响 白术对在体小鼠胃肠运动的作用及其机制的探讨 不同比例的高渗盐溶液对失血性休克家兔的抢救效果 丹参注射液、参麦注射液和大蒜素对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用的对比实验 毒蕈碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 急性右心衰竭与ANP在急性心力衰竭治疗中的作用 决明子对家兔的降血脂作用的研究 咖啡因对大鼠工作记忆促进作用的定性研究 硫化氢和胃肠道疾病——硫化氢对胃肠道的扩张及其机制的简单探讨 迷迭香对小鼠脑缺血再灌注的影响 纳洛酮对家兔失血性休克血压的影响 生姜汁的降血糖作用 生姜油对病毒性肝炎小鼠肝损伤的预防作用研究 生姜油对豚鼠气管平滑肌的作用研究 酸樱桃提取物软膏剂镇痛抗炎作用的初步研究 探究腺苷在大鼠心肌缺血后适应中的保护作用
机能学实验设计 实验名称：外源性PS和内源性PS在肺水肿疗效 中的比较 课题来源： 设计班级： 设计人员： 设计日期： 指导老师：
二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。 （一）实验设计目标，拟解决的关键问题 设计目标：探讨外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质对实验性肺 水肿治疗作用上所存在的区别，从而探讨外源性PS能否在肺水肿的防治中作为一 种较为理想的内源性PS不足的替代药物。 拟解决的关键问题：实验模型的制备。对试验性肺水肿的模型进行分组与实验结果分析。 （二）实验设计 1、实验动物设计 我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由： 1）、家兔易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。 2）、家兔肺相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。 2、实验专业设计 选用家兔作为实验动物，给予外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质，观察对实验性肺水肿治疗作用，观察兔子死亡时间（min），肺系数（g／kg），肺湿／干重比（g／g），血管外肺水（g）等实验指标。 3、实验统计设计 实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。 （1）随机：选正常成年健康重相近的家兔80只，将80只家兔按体重由小变大编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于家兔编号下。具体方法：动物编号为1—80号，随机数字从11行第一个数字开始接着抄写80个，按照能被4除的规律：不余到A组，余1到B1组，余2到B2组，余3到B3组，每组20只。 （2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。 （3）重复：本实验采用的是每实验小组有20只家兔，具有一定的重复性。 （4）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。 表1 实验数据收集记录表 编号肺系数（g／kg） 肺湿／干重比（g／ g） 血管外肺水（g） 兔子死亡时间 （min） A B1B2B3A B1B2B3A B1B2B3A B1B2B3
茶多酚对SD大鼠降血糖机制的研究 【立项依据】 1、研究背景： 茶文化起源久远，历史悠久，文化底蕴深厚。全世界有一百多个国家和地区的居民都喜爱品茗，而我国民间就有泡饮粗老茶治疗糖尿病的历史。研究初步证实，茶多糖是粗老茶叶降血糖的有效成分之一[1]，对于茶叶中的主要成分—— 茶多酚的降糖作用，目前的研究报道很多，但许多研究者人员持有不同意见[2,3]，但其作用机制更是知之甚少。 茶多酚是以茶叶为原料经提取而成的, 以儿茶素为主体的多酚类化合物(约 含30余种酚类化合物)。茶多酚(tea polyphenol)又叫茶单宁、茶鞣质，是茶叶 中多酚类物质及其衍生物的总称，约占茶叶干重的20%—30%，它由30余种多酚 类物质组成，其主要成分为黄烷醇(主要是儿茶素)、花色素(包括茶黄素、茶红 素等)，黄酮及黄酮醇、酚酸及缩合酚酸4类化合物，其中属黄烷醇类的儿茶素占茶多酚总量的60%—80%，其主要的组成成分为表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯，茶多酚作为茶叶中一种重要的生理活性成分，现代生物学和医学研究证明其具有抗癌防癌"抗氧化"抗突变多种生物学功效。 近年来，随着科技的发展和人们饮食习惯的改变，2型糖尿病患者的数量急 剧增加，预计到2025 年全世界2 型糖尿病患者的数量可能会达到3亿人。糖尿病的预防和治疗日益引起人们的关注，而在中国"日本和印度民间验方中均有饮泡 茶以预防和治疗糖尿病的记载#现代研究表明, 茶多酚具有抗病毒活性、抗菌、 抑菌、防龋齿、改善肾功能、降脂、降压、保护心血管系统、抗癌、增强免疫力及延缓衰老的作用。近年来, 随着人们生活水平的提高, 糖尿病的发病率有增 高趋势, 并以极快的速度增加。因此, 开发研制具有降血糖作用的药品及保健品, 具有较好的社会效益和经济效益。 茶多酚是茶叶中一种重要的生理活性成分。具有抗癌、抗氧化、抗突变、抗菌、降血脂等多种生物学功能"因而成为研究的热点。近几十年来，随着糖尿病
机能实验学实验设计报告 实验名称：人指甲对慢性化脓性中耳炎的药用价值 实验设计人： 专业： 年级班级： 联系电话： 指导教师： 2017 年11 月15日 1
实验内容： 一、立题理论依据及研究现状。 理论依据：根据《草医草药简便验方汇编》中所述，人指甲（煅存性），冰片少许，共研细粉。用时先将耳道洁净，后吹药粉。可治慢性化脓性中耳炎。 在某一偏方中也有说将人指甲烤干后磨粉，然后掺入一定比例的白矾。用时将耳道洁净，后吹药粉。 从以上依据可知，人指甲对慢性化脓性中耳炎有一定的药用价值，但其科学性有待考察。 研究现状：针对慢性化脓性中耳炎，王冰和许珉在国际耳鼻咽喉头颈外科杂志中表示，慢性化脓性中耳炎与细菌生物膜密切相关。他们认为低毒力的细菌或病毒感染是分泌性中耳炎的重要致病因素，而细菌生物膜的形成和发展包括调节膜的形成、细菌可逆性附着、细菌繁殖、细菌播散5个过程，可通过屏障作用、生物膜特殊的微环境、耐药表型的表达对抗机体免疫、密度感应系统等多种方式导致抗生素耐药，从而导致慢性感染迁延不愈或反复性发作。通过对患者的分泌液进行培养，发现最主要的致病菌为金葡萄菌和铜绿假单胞菌。故针对慢性化脓性中耳炎的治疗方面提出假设：通过抑制细菌的黏附，破坏保护性基质、脂质体包裹抗生素穿透生物膜的目的，从而对慢性感染的治疗提供新的突破。 二、主要研究内容及实验过程。 1、实验对象、性别、规格、数量 健康豚鼠70只，雌雄不拘，体重250-300g。所选豚鼠均为耳廓反应灵敏，电耳镜检查可见鼓膜完整，光锥清晰，排除外耳道、鼓膜、中耳等感染。 2、仪器与药品 仪器：笼子、电耳镜、试管、注射器、生化培养箱、方形滤纸 试剂：铜绿假单胞菌落、3%戊巴比妥钠溶液、生理盐水、人指甲粉末、白矾粉末、冰片粉末、氧氟沙星洗耳液 3、实验步骤 （1）将豚鼠分为七组，分别进行编号（1-7）放置于鼠笼中。 （2）制备豚鼠的慢性化脓性中耳炎模型。取真空保藏铜绿假单胞菌菌种活化24h后，取一个单菌落于盛5mlMH肉汤培养液的试管中，35℃静止培养12h左