关于DNA胶回收的一些东西
(2012-08-28 21:01:59)
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杂谈
这几次做胶回收的回收率都不高，所以很就纠结啊。逛论坛的时候发现原来中科大IGEM实验的胶回收也跟我们情况差不多，于是去看了一下他们的论坛，就把中科大师兄师姐的经验拿过来先了，希望我们的后续实验能顺利些，前面时间有点拖得久了....
1.切胶时放在不吸水的PE手套上，但是PE手套一旦滑动将导致质量的改变，因为说DNA
主要在琼脂糖颗粒的缝隙中，也就是TAE缓冲液里，所以吸水过强会导致DNA损失。
2.胶回收的Eluent要预热这个已经不用多说。我们平时加入Eluent一般静置1-2min，后来在学姐的建议下我延长了静置时间，后来浓度很高的两次都是在5分钟以上，30ng/ul的那次是5分钟，51ng/ul的那次是在65摄氏度水浴中盖盖静置10分钟。取得了很好的效果，回收浓度比较高（以前经常是10ng/ul）。
主要就这两点，尤其是第二点，个人认为第二点确实很重要。因为我们平时会遇到片段小了挂不上（用异丙醇），片段大了洗不下来。我们有的时候是几kb的，一般属于第二种情况，这时就应该延长加入Eluent的静置时间，以获得更高的回收率。
3.照胶一定要快，长时间的紫外照射会引起序列的突变。
4.切胶时注意把胶块切得小些，但是要切掉所有目的片段。胶块太大不容易溶解，而且会使得浓度低，影响回收效率。没有切干净所有片段会更加严重影响回收效率。关于切胶和胶回收效率的关系，文献上是这么讲的：“切胶质量比较小时，对回收效率影响不大；但是切胶质量比较大时，将明显降低胶的回收效率。”也就是说，切胶不是越小越好，但大了肯定不好，具体到我们现在的条件下，若能控制到0.15g~0.1g左右就应该没有问题了。当然，前提是一定要把所有的目的条带切干净。
5. 关于溶胶的问题，文献中则说太长和太短都不好，推荐时间是 10min。他们用的试剂盒和我们的不一样，绝对时间不具有可比性，生工的试剂盒说明书上写的是5~10min。关于这一点，我们可以做对比试验验证，我的观点是溶胶时间按照10min进行可能效果好一些。
6.之前加buffer B2（就是溶胶用溶液）都是按照说明书的最小量（300μl/100mg）加的，我查了之后发现这是不对的，挂柱的时候要保证溶液的盐浓度，而琼脂糖凝胶的溶解会降低盐浓度，因此buffer B2要按照600μl/100mg的量来加，以此来提高溶液的盐浓度。
7. 很多资料和文献都提到在沉淀时加入异丙醇（不限于小片段）和乙酸钠可以明显提高得率。加乙酸钠的目的是为了降低pH（这是文献上说的，可是，可是强碱弱酸盐是碱性的有木有……），加异丙醇的目的我就不知道了。我在这里把这个提出来供师兄师姐参考，用法用量见随后的文献，不知道在我们这里到底是不是可行~~
8.上柱之后多放一会儿会提高得率的，目的是尽可能让乙醇挥发干净（比较重要，切记）。
9. 抽基因组的柱子、抽质粒的柱子还有胶回收的柱子和wash solution都是不一样的，请大家在使用的时候千万不要弄混了！！！
10.胶回收这里可以溶胶之后放在4度冰箱几个小时，所以不用非得要胶回收到很晚影响大家休息！
Q&A
1、如何计算提取率？
1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率；
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比；
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
2、如何简易测算提取率？
取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。
3、如何看待提取得率？
影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭 1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。
4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？
DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收；
3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；
4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率；
5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好；
6）回收前的样品量太少，加大点样量；
7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。
6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？
1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶；
2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收；
3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。
7、琼脂糖凝胶块不溶？
1）琼脂糖质量不好；
2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
8、点样时发现DNA样品有漂出点样孔外的现象？
柱子上的乙醇未完全挥发干净，延长室温下空柱静置时间以确保乙醇完全挥发干净。
9、能否使用去离子水洗脱回收？
可以，但是实验室所用去离子水一般PH值偏低，可用NaOH适当调高PH值＞7.0，以增加回收得率。
10、能否使用TE（PH8.0）洗脱？可以。
11、可否使用小于30μl的洗脱液进行洗脱？
不可以。因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积。
12、关于DNA片段大小与回收率的问题？
100bp-500bp，30-60%；500bp-4kb，80-95%；4kb以上，30-50%。
13、OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符？
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值。
14、吸光度纯度测定时应注意哪些问题？
吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
15、为什么溶胶不彻底会影响回收结果的纯度？
在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密的结合在一起，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放，否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。
《汽车维修工程》复习及答案题 一、名词解释 （1）汽车产品：包括整车、部件、零件。 （2）可靠性：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的能力。 （3）可靠度：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的概率。 （4）失效度：也称不可靠度，是指产品在规定条件下，在规定时间内丧失规定功能的概率。（5）汽车故障：是指汽车部分或完全丧失工作能力的现象。 （6）汽车的技术状况：是指定量测得的表征某一时刻汽车外观和性能的参数值的总和。（7）磨损：零件摩擦表面的金属在相对运动过程中不断损失的现象。 （8）黏着磨损：当金属表面的油膜被破坏，摩擦表面间直接接触而发生黏着作用，使一个零件表面的金属转移到另一个零件表面引起的磨损。 （9）疲劳磨损：在交变载荷作用下，零件表面产生疲劳剥落的现象。 （10）腐蚀磨损：零件摩擦表面由于外部介质作用，产生化学或电化学的反应而引起的磨损。（12）修理尺寸法：将待修配合副中的一个零件利用机械加工的方法恢复其正确的几何形状并获得新的尺寸，然后选配具有相应尺寸的另一配合件与之配合，以恢复配合性质的一种修理方法。 （13）附加零件修理法：也称镶套修理法。是通过机械加工的方法将磨损部分切去，恢复零件磨损部位的几何形状，然后加工一个套并采用过盈配合的方法将其镶在被切去的部位，以代替零件磨损或损失的部分，恢复到基本尺寸的一种修复方法。 （14）喷涂：是用高速气流将被热源熔化的金属雾化成细小的金属颗粒，以很高的速度喷敷到已准备好的零件表面上。 （15）喷焊：是用高速气流将氧-乙炔火焰加热熔化的自融合金粉末喷涂到准备好的零件表面上，并经再一次重熔处理形成一种薄而平整呈焊合状态的表面层-喷焊层。 （16）电镀：将金属工件浸入电解液中，以工件为阴极，通以直流电，在电流作用下，电解液中的金属离子析出，向工件表面扩散，并沉积在工件表面，形成金属镀层。 （17）汽车维护：采用相应的技术措施预防故障发生的作业。 （18）修理工艺过程：汽车修理可分为许多工艺作业，按规定顺序完成这些作业的过程称为汽车修理工艺过程。 （19）磁力探伤：是利用电磁原理检查铁磁性零件表面及近表面缺陷的一种无损探伤检测方法。 （20）静不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线而引起的旋转振动现象 （21）动不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线，或零件的惯性主轴与其旋转轴线不重合且不平衡质点还产生有力偶，从而引起的旋转振动现象 （22）汽车大修：是指发动机主要零件出现破损、断裂、磨损、变形，在彻底分解后，用修理或更换零件的方法，使其达到完好技术状况和使用寿命的恢复性修理。 （23）汽车小修：是指用修理或更换个别零部件的方法来消除发动机在运行中临时出现的故障，或针对维护作业中发现的隐患所进行的运行性修理。 （24）自动变速器失速工况：在前进档或倒档时，踩住制动踏板，并完全踩下加速踏板，发动机处于最大转矩工况，而变速器输入、输出轴静止，涡轮也是静止不动的，只有变矩器壳与泵轮随发动机转动，此工况就称为失速工况。 (25) 全面质量管理：全面的（全方位的）全员参加的，全过程的质量管理简称"三全"管理，又叫全面质量管理。
胶回收DNA注意事项 ①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。 ②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。 ③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。 ④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。 ⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。 ⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。 ⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。 ⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。 ⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。 关于胶回收切胶的一点注意事项 1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。 4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。 胶回收
白乳胶（其主要成分： 聚醋酸乙烯） a普通型白乳胶： 广泛用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 b新型复合白乳胶： 用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 优点： 可常温固化、固化速度较快、粘接强度较高，粘接层具有较好的韧性和耐久性且不易老化；安全、无毒、不燃、清洗方便；对木材、纸张和织物有很好的黏着力，胶接强度高；固化后的胶层无色透明，韧性好，不污染被粘接物。 缺点： 耐水性和耐湿性差，易在潮湿空气中吸湿；在高温下使用会产生蠕变现象，使胶接强度下降；在-5℃以下储存易冻结，使乳液受到破坏。 淀粉胶黏剂 代替水玻璃黏合工业用纸箱等。（但目前淀粉胶仍高于水玻璃胶价格。） 优点： 无毒、无味、对环境无污染。施胶方便，不需专门设备，一次性涂布量低。 缺点： 易霉变、虫蛀；黏度偏低，流动性较大，胶黏剂剂量不稳定；干燥速度较慢，大批量机械化作业有—定难度；储存稳定性较差，易凝胶；粘接性能偏低。 水玻璃（俗称泡花碱）
粘结力强、强度较高，耐酸性、耐热性好； 缺点： 耐碱性和耐水性差；具腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。 酚醛树脂胶黏剂 a水溶性酚醛树脂胶黏剂（未改性）： 用于胶合板制造。 b醇溶性酚醛树脂胶黏剂： 用于胶合板制造、木器的粘接修补。 c改性间苯二酚-甲醛树脂胶黏剂： 适用期约16h，对木材、尼龙有一定的粘结力，主要用于粘接木材与塑料、橡胶、金属等。 d酚醛-xx腈胶黏剂： 广泛用于汽车和飞机工业中。 优点： 胶接强度高；较好的耐热、耐老化性；耐水、耐化学介质和耐霉菌，特别是耐沸水性能；尺寸稳定性好；电绝缘性能优良。 缺点： 脆性大，剥离强度低，不适于作结构胶粘剂使用；固化时间较长，固化温度高。 脲醛树脂胶黏剂 广泛用于制造胶合板、压层板、装饰板、木结构家具和碎木板等。
1、如何计算提取率 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关 DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因 1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃； 3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
厌氧胶比较常见问题及处理 随着工业的快速发展，厌氧胶已成为机械行业不可缺少的液体工具，而且厌氧胶在航空航天、军工、汽车、机械、电子、电气等行业有着很广泛的应用。在广泛的应用中，我们总会遇到关于厌氧胶各种各样的问题，如它的固化时间、它的包装、它的颜色等，下面我们一起来看看比较常见的问题，并解决这些问题。 1、可以用什么溶剂来清除液态厌氧胶产品？ 回答：大多数有机溶剂都对去除厌氧类和丙烯酸类产品有效。氯类溶剂是最常用的。 2、厌氧胶类产品需要多长的固化时间？ 回答：厌氧胶不含溶剂（溶剂需要干）。厌氧胶的固化必须接触到金属离子并且在缺氧状态。在粘接点外部，厌氧材料无法完全固化。粘接点内部，固化速率取决于产品和促进剂的种类，加热可以加速固化过程。 3、为什么50ml和250ml的厌氧胶其瓶子仅装一半？ 回答：实际上其瓶子里已经有50ml和250ml的产品。仅装一半的瓶子是为了让空气起到隔绝的作用，以防止厌氧胶固化。50ml和250ml 瓶子设计同时让空气渗入以让厌氧胶进行呼吸作用。 4、颜色代表什么意义？ 回答：厌氧胶经常被称为“红色或蓝色物品”。对于螺纹锁固胶，颜色代表强度。通常红色代表高强度，蓝色代表中强度，紫色代表低强度。其他颜色在不同产品领域中代表不同强度。 5、厌氧胶在冬季变得很稠，固化速度也比较慢？ 回答：这是缺氧胶的固有特性，气温降低，粘度变大，固化时间延长。在-5℃以下如用于非活性金属，会出现固化不完全；气温升高，粘度变小，固化时间缩短。如将操作地点改在温暖的环境，问题可解决。 6、有用户反应经常使用的缺氧胶突然锁紧强度下降？ 回答：经调查，有的客户为防止库存螺纹件生锈而涂上防锈油或其它油，或要求供货商所供螺纹件涂上油脂，装配时又未作除油处理所致。经除油处理后问题解决。
胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而 烦恼。到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如 酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。 一、胶回收的关键参数 胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。 回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。 回收率：回收得率，是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少，电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低;又比如说，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。 其他：操作方面，相信大家都会比较喜欢操作简单，快速，应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量，就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质，过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物，大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子，多郁闷啊。
密封胶又名无氧胶、厌氧胶、机械胶，它与氧气或空气接触时不会固化，一旦隔绝空气后就迅速聚合变成交联状的固体聚合物，可以作用于不锈钢及金属管道。下面由螺纹密封胶产品销售中心曼伦自动化为大家介绍一下这款产品的主要类型有哪些，帮助大家对该产品有正确的把握。 密封胶粘剂是由多种成分组成，特别是单体千变万化，其中每种成分的变化都有可能获得新的性能，因此厌氧胶的品种甚多，其分类方法也不统一。一般情况下可按单体的结构、单体的类别和强度、粘度分类，也有按用途分类的。较常见的分类方法是按单体的结构和用途分类法具体地说，按其结构可分为四类。
（1）醚型以双甲基丙烯酸三缩四乙二醇酯为代表的结构。 （2）醇酸酯常见的有双甲基丙烯酸多缩乙二醇酯；甲基丙烯酸羟乙酯或羟丙酯。 （3）环氧酯其由各种结构的环氧树脂与甲基丙烯酸反应的产物。常见的有双酚A环氧酯（如国产Y-150、GY-340等是环氧酯与多缩乙二醇酯的混合物）。 （4）聚氨醋其由异氰酸酯、甲基丙烯酸羟烷基酚和多元醇的反应产物。实际上厌氧胶的产品很多是混合物或是复杂的组成物，是难以简单分类的。 还有一种分类方法，按用途可分为紧固件锁紧和密封、法兰面和
管接头的密封、粘接固持和浸渗堵漏等。这种分类方法简单明了，易记易用，特别容易为用户所接受。尽管胶种有多种用途，但总有一种主要的用途可以作为分类的依据。 安徽曼伦自动化设备有限公司是一家专业代理经销品牌工业电气自动化产品服务商，集科工贸于一体的系统集成商，公司代理汉高旗下经营汉高旗下乐泰Loctite、泰罗松teroson等厌氧胶、快干胶、聚氨酯、硅橡胶等粘合剂。 同时，该公司广泛服务于汽车、电力、电子、冶金、化工、太阳能、水泥、造纸、船舶、卷烟、纺织、机床、包装机械、印刷机械、橡胶机械、物流设备等行业，以货期快，服务好，价格优惠等优势赢得了广大客户的支持与信任。如果您想进一步了解，可以直接点击官网曼伦自动化进行在线咨询。
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点: (1)防止抽提过程中污染DNA酶 与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末 端时也会导致严重的连接困难. (2)紫外照射选择长波段 回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射. (3)实验操作要轻柔 特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离 心管等操作均应缓慢,轻柔. 综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础. 3 实验步骤 一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例) (1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率) (2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN) (3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀. (4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒. (5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟. (6)重复步骤5一次. (7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm 离心2分钟. (8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放 置2分钟. (9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA 片段. 胶回收 一. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
琼脂糖凝胶电泳常见问题分析
DNA凝胶电泳简介 一、实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 二、琼脂糖凝胶 琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。 表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围 由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。 随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。（5）其它类型。各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。
D N A胶回收中常见问题 和解答 TYYGROUP system office room 【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-
1、如何计算提取率？ 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率？ 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率？ 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？ DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例； 2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？ 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶？ 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
螺纹胶 螺纹胶粘剂简称厌氧胶，是利用氧对自由基阻聚原理制成的单组份密封粘 和剂，既可用于粘接又可用于密封。当涂胶面与空气隔绝并在催化的情况下便 能在室温快速聚合而固化。 一、产品简介 广粘螺纹胶粘剂简称厌氧胶，是利用氧对自由基阻聚原理制成的单组份密 封粘和剂，既可用于粘接又可用于密封。当涂胶面与空气隔绝并在催化的情况 下便能在室温快速聚合而固化。广粘螺纹胶的组成成分比较复杂，以不饱和单 体为主要组成成分，还会有芳香胺、酚类、芳香肼、过氧化物 二、螺纹胶特点 （1）大多数为单体型，黏度变化范围广，品种多，便于选择。 （2）不需称量、混合、配胶，使用极其方便，容易实现自动化作业。 （3）室温固化，速度快，强度高、节省能源、收缩率小、密封性好。固化后可拆卸。 （4）性能优异，耐热、耐压、耐低温、耐药品、耐冲击、减震、防腐、防雾等性能良好。 （5）胶缝外溢胶不固化，易于清除。 （6）无溶剂，毒性低，危害小，无污染。 （7）用途广泛，密封，锁紧、固持、粘接、堵漏等均可使用。 （8）储存稳定，胶液储存期一般为三年。 三、螺纹胶应用 广粘螺纹胶因其具有独特的缺氧胶固化特性，可应用于锁紧、密封、固持、粘接、堵漏等方面。螺纹胶已成为机械行业不可缺少的液体工具。在航空航天、军工、汽车、机械、电子、电气等行业有着很广泛的应用。 （1）锁紧防松。金属螺钉受冲击震动作用很容易产生松动或脱机，传统的机械锁固方法都不够理想，而化学锁固方法廉价有效。如果将螺钉涂上厌氧胶后进 行装配，固化后在螺纹间隙中形成强韧塑性胶膜，使螺钉锁紧不会松动。现在 已经有预涂型（B-204）螺纹胶，预先涂在螺钉上，放置待用（有效期四年），只要将螺钉拧入旋紧，即可达到预期的防松效果。
胶回收 一. 提高胶回收量的办法： 1）增加电泳时的上样量。 2）电泳缓冲液用新鲜配制的。 3）切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。 4）把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。 5）溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。 6）胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul （PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7）加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以 使乙醇充分挥发。 8）最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液 洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充 分洗脱结合在膜上的DNA。 9）可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴 10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。 10）将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。 DNA胶回收实验技术总结 胶回收
一. 提高胶回收量的办法： 1）增加电泳时的上样量。 2）电泳缓冲液用新鲜配制的。 3）切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。 4）把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。 5）溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。 6）胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。 7）加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。 8）最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反
发动机气缸体一些缺陷的修复工艺 The repair process of some defect of Engine cylinder block 机制0903 苑庆超学号2011212010120 摘要：本文主要介绍在发动机使用一段时间后针对汽缸体经常出现的一些问题、缺陷所采用的一些修复工艺。如缸体上表面的螺栓滑扣采用镶螺套法进行修复、缸体上平面的裂纹与边角缺损采用加热减应气焊进行修复、缸体水套壁的裂纹与破损采用手工电弧冷焊或手工电弧焊挖补法进行修复、气门弹簧座和气门导管壁的裂纹以及气缸套壁渗漏缺陷采用厌氧胶粘补法进行修复、轴承座的磨损失圆和不同轴度采用电刷镀修复。 Abstract:This paper introduces some repair process of the problems and defects that often appear in the engine cylinder block when it is used for a period .For example the sliding of the bolt on the surface of cylinder block can be repaired by the method of setting bolt sleeve.The cracks and corner defects on the surface of the cylinder block can be repaired by the method of gas welding.The cracks and damage of the cylinder block water jacket can be repaired by the method of manual arc cold welding .The cracks of valve spring retainer and valve guide wall and the leakage of the cylinder sleeve wall can be repaired by the method of anaerobic adhesive filling.Bearing pedestal grinding loss of round and loss of axiality can be repaired by the method of electro-brush plating. 关键词：镶螺套；加热减应气焊；手工电弧冷焊；厌氧胶粘补；电刷镀修复 Keywords:setting bolt sleeve; gas welding; manual arc cold welding；anaerobic adhesive filling; electro-brush plating 引言 气缸体是发动机机体组的主要组成部分，在气缸盖和曲轴箱之间，水冷式发动机气缸体常和曲轴箱铸成一体，称为气缸体-曲轴箱，风冷式发动机常将气缸体与曲轴箱分开制造在用螺栓连接起来。缸体的汽缸是可燃气体压缩、燃烧和膨胀的空间，工作条件非常恶劣。做功的燃烧过程中，燃气的最高温度可达2200~2800k，压强可达3~10MPa，它的内壁直接受到高温高压气体的作用，而外壁又受到风(或水)的冷却，使缸体承受较大的机械应力和热应力，因此要求气缸套要有足够的强度和刚度，且工作时变形小。此外，气缸体对活塞的运动起导向作用，气缸内壁除受活塞的侧压力外，还受由于活塞的高速运动而产生的强烈的摩擦作用，是发动机磨损最严重的表面之一，处于这样恶劣的工作条件下汽缸体难免产生一些裂纹、破损、螺栓滑扣、拉缸等缺陷。 图1 1、汽缸体常见的问题
Marker 参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象 琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的? 参考见解：DNA带模糊??： 1、DNA降解??避免核酸酶污染。 2、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。 3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 4、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。 6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。 将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。好象没跑出来，是怎么回事？ 参考见解： 1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。 2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一下，或直接试跑一下PCR。
3、最好加一个marker孔，尤其你第一次跑胶时。 4、电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。 怎样根据目测条带亮度来判断DNA浓度？ 参考见解： 1、跑胶时候marker 可以加成定量marker，如1kb、100bp等marker，按说明书的量上样电泳，如加500ng量的DNA marker，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和MARKER 条带的亮度做个大致的比较，找出两者最接近亮度的条带。因为marker的各条带都已知所含的DNA浓度（说明书中详细注明），因此根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。 2、在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，比如从0。5、2、4、6，因为，如果质粒的量很浓的话，通过简单的对一条条带的目测产生的结果误差是很大的或者利用marker(推荐DL 2000),再用软件做半定量分析。 DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？ 参考见解： 1、配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。 2、电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。 3、上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。 跑出的DNA带模糊？ 参考见解： 1、DNA降解：避免核酸酶污染。 2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。 3、所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 4、DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。 5、DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 6、有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。 7、DNA变性：电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。 有不规则DNA带迁移? 参考见解： 1、对于λ/Hind III片段cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟。 2、电泳条件不合适：电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液。 3、DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热。 跑出的DNA条带带弱或无DNA带？ 参考见解： 1、DNA的上样量不够：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低。 2、DNA降解：避免DNA的核酸酶污染。
厌氧胶常见问题解答 1.什么是耐候性？ 耐候性是指胶合制品耐日光、冷热、风雨等气候条件的能力。 2.如果将厌氧胶的X产品与Y产品混合，会产生什么情况？ 不同产品不能相互混合，如果混合胶消夜会产生不良反应，或自然凝固。对于强度、固化速度和粘性的控制，根据不同要求有很多产品可供选择。 3.用什么溶剂可以清除未固化的厌氧胶？ 一般是用溶剂清除厌氧型胶粘剂效果比较好，最常用的是氯化烃溶剂、丁酮和丙酮。 4、怎样拆除被“永久”锁固的坚固件？ 对于不能用手持工具拆除的紧固件，可以使用加热法。分解标准的厌氧型胶粘剂需要摄氏170℃左右，分解耐高温碰厌氧型胶粘剂需要260℃。通常使用加热枪或者丙烷喷火器进行这一操作，当部件温度依然很高时请小心拆卸。当紧固件被拆下冷却后，用二氯甲烷清除已经固化的多余胶液。最后要用溶剂把坚固件擦干净，以清除二氯甲烷挥发后留在表面的一层腊质。 5.厌氧胶可以在塑料上使用吗？ 不太建议把厌氧胶使用在塑料件上，有时也不是绝对的，必须试验合格才能使用，比如用在塑料圆柱与钢铁固持，空隙小，选择合适的厌氧胶再涂上促进剂，效果也是可以的。 6.厌氧胶怎么涂？ 厌氧胶是在两个金属紧密的表面隔绝空气才能固化，因此锁固螺纹时应将胶涂在螺栓与螺母配合紧密的槽里才会固化。溢在外面的胶不会发生反应，有人把螺母、螺栓装配好后再在外涂胶，这种操作是错误的，达不到使用效果，因为不是所有厌氧胶都能渗透进去。 7、厌氧弄胶粘剂完全固化需要多长时间？ 厌氧型胶粘剂不含溶剂，厌氧型胶粘剂的固化必须与活性金属离子接触并在氧环境中才能固化，完全固化需要24小时。在粘接区域之外，厌氧胶不会完全固化。在粘接区域之内，可以通过底剂来控制固化速度，也可以用加热的方式来加快固化时间。 8、为什么厌氧型胶粘剂要求装在容积为胶液体积两倍的塑料瓶内？ 厌氧胶只能在瓶内装一半的容量，原因是需要在瓶内保留足够的氧气以防止厌氧型胶粘剂发生凝固。 9、厌氧型胶粘剂颜色代表什么意思？ 通常厌氧型胶粘剂被称为“红色或蓝色”。对于螺纹锁固剂而言，颜色表示强度，红色表示高强度，蓝色表示中强度，紫色表示低强度，其它颜色分别表示相应范围的强度。 10、厌氧胶在使用前，需要进行哪些准备工作？ 对于大多数螺纹锁固产品与密封复合物而言，粘接部件表面有薄薄的油层是可以的。对于大面积油脂或污物，则必须清洁后才能涂胶粘接。对于结构型胶粘剂与瞬干型胶粘剂而言，应
常见问题 你们能提供的粘合剂有哪些? 我们能提供包括有机硅胶、丙烯酸、厌氧胶、快干胶、环氧树脂、热熔胶、聚胺酯、溶剂型粘合剂、胶带、UV固化胶和水溶性粘合剂等产品。 如何获得产品的MSDS或TDS？ 欲知详情请点击联系我们。 怎样移走被螺纹锁固胶“永久”锁住的固定装置？ 一定要加热，加热的温度超过325 ℉(~162.5℃)就可分开它。切勿用手工工具移取固定装置。 粘合剂能将我的工件粘住5, 10, 20年吗？ 测试粘合剂的耐久性是一个困难的事情，某些方法有助于测试粘合剂的使用寿命，从而得出工件能被粘住的实际时间，例如高温、老化和高湿。确定工件粘结时间最准确的方法是让工件在一定的时间里进行老化。估计粘结时间最好的方法是用新产品与已经知道在老化测试中使用寿命和性能比的产品进行比较，从而来评估新产品的粘接结寿命。产品对粘结寿命要求越长，那么对产品的老化检测就越重要。 怎样处理快干胶散发出的水蒸气和气味？ 快干胶散发出的水蒸气和气味有刺激性，工人不要长时间暴露在他们面前。通常，“低挥发”或“低白化”的可以控制这种刺激性气味。做好通风设施和让工人戴上口罩是必须的。 使用快干胶时发现粘结区有白色的薄雾，它有害吗？怎样消除？ 这种现象被通称为“白化”或“结霜”，出现在用快干胶固化过程。白化通常出现在湿度最高的夏季，它也会在使用了过量的加速器引起强烈的固化反映。某些情况下，用户在封闭的区域装配之前不完全固化产品就会防止水蒸气挥发。 寒冷的温度使催化剂结晶了？我怎样使用它？ 将其加热到45-65℃中直到所忧的催化剂溶解，将其加热到45-65中直到所忧的催化剂溶解，混合均匀并在使用前将其冷却到35℃。 如何选择合适的敷形涂布材料？ 将其加热到45-65℃中直到所忧的催化剂溶解，主要考虑下列因素：板面和组分在恶劣环境下的保护性能和可靠性，如温度范 围，压力承受等； 施胶的设备和被涂抹板面的体积； 环境和工人的安全因素； 符合所列的UL 认证或军标； 成本和配置； 修复指标
胶回收常见问题 dna回收|dna回收试剂盒|捷瑞dna回收试剂盒|胶回收|胶回收试剂盒|胶回收原理 1、如何计算提取率？ 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率？ 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率？ 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？ DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？ 1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例； 2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？ 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶？ 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃； 3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。 8、点样时发现DNA样品有漂出点样孔外的现象？ 柱子上的乙醇未完全挥发干净，延长室温下空柱静置时间以确保乙醇完全挥发干净。 9、能否使用去离子水洗脱回收？ 可以，但是实验室所用去离子水一般PH值偏低，可用NaOH适当调高PH值＞7.0，以增加回收得率。 10、能否使用TE（PH8.0）洗脱？可以。 11、可否使用小于30μl的洗脱液进行洗脱？ 不可以。因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积。 12、关于DNA片段大小与回收率的问题？ 100bp-500bp，30-60%；500bp-4kb，80-95%；4kb以上，30-50%。 13、OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符？ 从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值。 14、吸光度纯度测定时应注意哪些问题？ 吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。 15、为什么溶胶不彻底会影响回收结果的纯度？ 在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密的结合在一起，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放，否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。