第一章简介
1.生物工程（bioengineering）（生物技术）：是以生物科学为基础，利用生物个体或生物器官、组织、细胞的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系（包括细胞系），以及与工程原理相结合进行产品加工生产的综合性技术体系。
2.传统生物工程：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程（各个定义见书）
后来：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程以及生化工程。
3.细胞工程（cell engineering ）是以细胞为研究对象，应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的原理或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。
广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。
思考题：1．细胞工程的概念、研究范畴、在生物工程中与其它工程的关系。
2．动物细胞工程发展的主要标志性成就。
3．植物细胞工程技术的主要标志性成就。
4．细胞工程的作用与应用领域
。
第二章细胞工程基础
1、组成细胞的基本元素有哪些？
O、C、H、N、Si、K、Ca、P、Mg，其中O、C、H、N占90%以上。细胞化学物质分为：有机物和无机物。
2、原核细胞与真核细胞有哪些区别？
原核细胞真核细胞
DNA区域没有被摸包被DNA区域有被摸包被
没有典型的细胞核和细胞器（只有核糖体）有细胞核（染色体、核仁、核液）和细胞器
（核糖体、内质网、叶绿体、高尔基体等）结构简单结构比原核细胞复杂
例：细菌、蓝藻例：动植物细胞
3、染色体与染色质有什么区别？
染色质是指细胞分裂间期遗传物质的存在形式。染色体是指细胞有丝分裂或减数分裂过程中，由染色质聚成的棒状结构。（染色质由DNA、组蛋白、非组蛋白、少量RNA组成）4、什么叫细胞周期？
也称细胞分裂周期，是指一个细胞经生长、分裂增殖成两个细胞所经历的全过程。包括分裂期（M期）与间期，间期由G1、S、G2三个阶段组成。
5、什么叫细胞凋亡，什么叫细胞坏死？
细胞凋亡也叫细胞程序性死亡，是机体维持环境稳定、由基因控制的细胞自主的有序性死亡。
细胞坏死是受到化学因素（强酸强碱有毒物质）、物理因素（热、辐射）和生物因素（病原体）等环境因素伤害，引起的细胞死亡现象。
6、什么叫细胞全能性？
是指已分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
7、什么叫细胞分化？
是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。
8、什么叫持家基因，什么叫组织特异性基因？
持家基因：维持细胞的基本结构最低限度功能所不可少的基因。如编码组蛋白、核糖体蛋白。此类基因在所有类型的细胞中均表达。
组织特异性基因：又称奢侈基因，是在各种组织中进行不同的选择性表达的基因，与各类细胞的特殊性有直接关系。如表皮角蛋白基因。
9、植物的组织可分为哪两大类？各自的定义是什么？
永久组织：在生长发育过程中，细胞分化而失去分裂能力，成为有特定功能的细胞组织，即永久组织。
分生组织：细胞进行迅速的有丝分裂并分化为新生组织及导致植物生长的那部分组织称为分生组织。
10、什么叫无性生殖，什么叫有性生殖？
无性生殖：不涉及性别、没有配子参与、没有受精过程的生殖都属于无性生殖。也称为营养生殖。
有性生殖：是两个配子融合为一，成为合子或受精卵，再发育成为新一代个体的生殖方式。
11、植物的营养生殖属于其中哪一种生殖方式？
无性生殖
12、被子植物的花由哪几部分组成？雌雄配子分别位于哪一具体位置？
花是被子植物的生殖器官，着生在花托上，由花被、雄蕊群、雌蕊群等部分组成。13、动物受精卵的早期发育一般都要经过哪几个阶段？
卵、囊胚、原肠胚、神经胚、器官发生。
第三章植物组织与器官培养
1、植物组织培养：是指将植物组织（如花药组织、胚乳、皮层等）给予适当的培养条件下，诱导其长成新的完整植株的一种实验技术。
2、试管植物：植物组织培养再生的植物
3、细胞全能性：是指已分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
4、植物组织培养再生植株的途径：器官发生途径、体细胞胚发生途径
5、植物的器官发生：是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）等器官的过程。
6、植物细胞脱分化：是已有特定结构和功能的植物组织的细胞，在一定的条件下被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。
7、愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团。即由外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。
8、外植体：植物体上切取下来进行培养的部分组织或器官。即植物组织培养中用来进行离体无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。
9、离体培养条件下，经过愈伤组织再分化器官一般要经过四个生长阶段。（简答）
（一）启动期：诱导外植体细胞脱分化和分裂。
（二）外植体经过诱导形成愈伤组织。（愈伤组织的诱导与继代培养）
（三）拟分生组织的形成。当把愈伤组织转移到有利于有序生长的条件下以后，首先在若干部位成丛出现类似形成层的细胞群，通常称之为“生长中心”，也称为拟分生组织，它们是愈伤组织中形成器官的部位。
（四）器官原基及器官形成。
通过器官发生形成再生植株大体上有三种方式：先芽后根、先根后芽、同时生根发芽。
10、体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。
11、原生质体：是去除细胞壁后裸露的球形细胞。
12、植物激素定义与种类和作用（简答）
植物激素：自然状态下产生的、对生长发育有显著作用的微量有机物。
包括：生长素、细胞分裂素、赤霉素、乙烯等
生长素：促进细胞分裂、诱导根的分化。常用的有吲哚乙酸（IAA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA)
细胞分裂素：促进细胞分裂、诱导芽的形成。常用的有6-苄氨基嘌呤（BA）、6-呋喃氨基嘌呤（又称激动素，KT）
赤霉素（GA）：可以调节生长和影响发育过程，包括促进茎的延长、发芽、种子休眠、开花、性别表现、叶和果实的老化机制。
乙烯：促进果实成熟。
13、植物细胞常用培养基（选择和简答）
（1）富盐平衡培养基：MS、LS、BL、BM、ER。特点是：无机盐浓度高，微量元素种类齐全、浓度高；元素间比列适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲能力，稳定性好，营养丰富，一般培养时无需再加入有机成分。
（2）高硝态氮培养基：B5、N6、SH。特点是：硝酸钾浓度高，氨态氮浓度低，含有较高浓度的硫胺素（VB1)
（3）中盐培养基：Nitsch、Miller、H。特点是：大量元素无机盐是MS培养基的一半，微量元素种类减少，但含量增高。维生素种类比MS增多，例如增加了生长素、叶酸等。
（4）低盐培养基：White、WS、HE、HB。特点是：无机盐、有机成分含量浓度低，多用做生根培养的培养基。
14、植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官（如子房、胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
15、毛状根：又名发状根，是植株或组织、器官受到发根农杆菌感染后而形成的类似头发一样的根组织。
16、毛状根属于激素自养型
17、毛状根培养生产次级代谢产物
青蒿毛状根：青蒿素（治疗疟疾）
长春花毛状根：长春花碱（治疗癌症）
紫草毛状根：紫草宁（治疗肝炎）
人参毛状根：人参皂甙（增强体质）
第四章人工种子与植物脱毒
1、人工种子：又称合成种子或体细胞种子，是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
2、人工种子与天然种子具有类似的结构：
1）人工种皮外层
2）人工胚乳
3）胚状体和芽（核的部分）
3、植物脱毒是利用物理、化学或生物学方法脱出植物所感染的病毒，在无菌条件下培养不
带病毒的植株，进行快速繁育无病毒种苗的技术。
4、植物脱毒方法
物理方法（高温、低温）
（一）高温处理：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35℃-40℃）易钝化失活，繁殖力下降，失去侵染能力。
该方法对圆形病毒、线状病毒有效，但对杆状病毒效果不好。
（1）温汤处理：放50 ℃热水浸数分钟至几小时。
（2）热风处理：在室内或生长箱中，以35-40 ℃温度处理几十分钟至数天。
（二）低温处理：降低植物温度可使病毒活力下降。
化学方法
用放线菌酮、三氯唑核苷、孔雀绿、硫脲嘧啶、8-氮鸟嘌呤等可以抑制植物体内病毒的复制
生物方法
1）基本原理
病毒在植物体内的分布具有不均匀性
1943y，怀特就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。
茎尖培养、花器培养成为获得无病毒植株的重要途径。
茎尖培养
特点：周期短、效率高
茎尖越小，病毒含量越低，但其营养、水分含量也低，对培养基要求越高，茎尖通常取材0.2~0.5mm大小。
茎尖培养结合高温处理法脱毒效果更好
第五章植物细胞培养与次级代谢产物制备
1、植物细胞培养：是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖获得大量细胞群体的一种技术。（区别植物组织培养）
植物组织培养：是指将植物组织在适当条件下诱导长成完整植株的技术。
2、植物单细胞分离与小规模培养
单细胞分离
（一）酶解法
根据细胞壁的组成特点，用专一性水解酶将壁物质分解掉，从而释放出细胞。
（二）愈伤组织诱导法
由植物组织培养获得愈伤组织，继代培养使愈伤组织大量增殖，再通过振动、酶解等方法使细胞分离
植物单细胞小规模培养
一）看护培养
是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。具体方法：将单个细胞接种于滤纸上，再置于愈伤组织之上培养。
（二）饲养层培养
是把处理过的（X射线处理）无活性的或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长的方法。
具体方法有4种：
1）双层滤纸植板培养：
2）饲养细胞与要培养的细胞共同混合于琼脂培养基中。
3）饲养细胞与要培养的细胞混合于琼脂培养基中，前者放于下层，后者位于上层。
4）饲养细胞与要培养的细胞一起培养于液体培养基中。
（三）液体浅层静置培养
将一定密度的悬浮细胞接种在培养皿或三角瓶中封口静止培养。
（四）细胞同步化培养
（1）体积选择法：不同孔径筛网逐层过滤
（2）冷处理法：先4 ℃低温处理，再加新鲜培养基培养。
（3）饥饿法：
（4）抑制法：加尿苷、5-氟脱氧尿苷、秋仙等抑制细胞分裂。
3、细胞系：是以一种细胞为主、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
细胞株：指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
4、植物细胞悬浮培养的生物反应器：机械搅拌式、鼓泡式和气升式
5、细胞固定化：指将游离的细胞包埋在支持物内部或表面、培养液呈流动状态进行培养的一门技术
6、植物细胞常采用的固定化方法有：凝胶包埋、表面吸附、网格或泡沫材料固定、膜固定（包括中空纤维）。（方法+例子）
7、固定剂：（多选）
由带电多聚物的离子交联形成胶体：海藻酸盐、角叉藻聚糖。
由热的多聚物冷却形成胶体：琼脂、琼脂糖、角叉藻聚糖。
由发生化学反应形成胶体：聚丙烯酰胺。
8、例子（一）海藻酸盐固定化（二）卡拉胶固定化（三）琼脂糖固定化
9、初级代谢产物：通过初级代谢产生的维持细胞生命活动必须的物质。如：氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素
10、次级代谢产物：通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物。如：抗生素、激素、生物碱、毒素。
第6章原生质体培养与诱变
1、原生质体(protoplast)：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露的细胞。
2、原生质体的制备/分离纯化（简答）
1）、用于分离原生质体的材料准备
无菌试管苗叶片、上胚轴和子叶、培养细胞
2）、酶处理（纤维素酶类、果胶酶类、半纤维素酶、琼脂酶）
酶解法具有条件温和、原生质体完整性好、活力高、得率高等优点。
3）、原生质体的收集和纯化（理解+阐述）
飘浮法：原生质体比重较小，能在具有一定渗透压的溶液（如25%的蔗糖溶液）中漂浮，然后用吸管收集。常用的飘浮剂有蔗糖、Percoll、Ficoll。
沉淀法与漂浮法结合见书：常用甘露醇作为渗透压调节剂，先将酶液洗出干净，再用Percoll 飘浮一次。
过滤-离心法：40-100um筛网出去未消化的细胞、细胞团、碎片，在适当的溶剂中低速离心收集细胞沉淀。
第七章细胞融合与体细胞杂交
1、细胞融合，指将两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
2、同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。
3、异核体：来自不同基因型相同的细胞融合成的融合细胞。
4、对称融合：两个完整的细胞间的融合。
5、不对称融合：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另一个完整的细胞进行融合。
6、细胞融合的具体步骤（简答）：1）两原生质体互相靠近2）质膜融合形成细胞桥3）胞质渗透4）细胞核融合
细胞质膜和细胞质融合后就是细胞核融合，只有细胞核发生了融合，多核细胞才能存活。
含有多个核的异核细胞合并后形成的单核细胞称为合核细胞。
核融合发生在有丝分裂过程中。两个核同时进行有丝分裂，形成一个纺锤体，所有的染色体都排列在一个赤道板上，伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞，其细胞核中双亲细胞的染色体。
不能形成单核细胞的融合细胞会逐渐死亡。
7、融合方法
生物法（各种病毒）：仙台病毒、疱疹病毒、牛痘病毒、副黏液病毒（多选）
仙台病毒法
仙台病毒也称日本血凝病毒HVJ，是RNA病毒。
其促进细胞融合的有效部位在于它的膜，被超声波打碎的病毒膜碎片仍具有促进细胞融合的功能。
仙台病毒被膜上相对分子质量为53000的糖蛋白与其促融合的能力相关。
融合步骤：
1）两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近。
2）通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透。
3）两个原生质体的细胞核互相融合，融为一体。
4）进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种子细胞。
仙台病毒法缺点
要提前培养大量病毒。
灭活后才能做融合剂使用。
操作繁琐。
如果灭活不充分，可能感染操作者和亲本细胞。
目前已较少使用该法。
化学法：（多选）化学诱导剂：NaNO3、高pH的高浓度Ca2+、PEG、溶菌酶、明胶、抗体、植物凝集素、伴刀豆角蛋白A、聚乙烯醇。
物理法：电融合法
8、体细胞杂交：指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。
9、杂交细胞筛选的方式：抗药性筛选、营养互补筛选法、物理特性筛选法、荧光标记法。
第八章多倍体与单倍体植物
1、染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减、添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传性状和选育新品种的一种技术。
2、染色体组：生物体配子的全部染色体称为一个染色体组。
3、多倍体：体细胞中含有超过正常染色体组数的个体。
4、同源多倍体：多倍体的染色体来自于同一物种或在原有染色体组的基础上加倍而成，这
样的个体称为同源多倍体。
5、异源多倍体：染色组来源于不同物种的个体称为异源多倍体
6、多倍体植物特点（多选）：
①体形较大，茎秆粗壮，叶色较深，花冠、花粉粒和果实也较大。
②营养成分高。生理代谢功能较活跃，糖类、蛋白质等含量明显提高，抗旱、抗病的能力也较强。
③抗逆性强，更易适应生存条件的变化。
④生长慢，结实率低。多倍体的利用价值尤其体现在人们利用其营养器官的植物(如甜菜、甘蔗和烟草等)上。
7、多倍体植物的诱导/培育
化学诱导法：细胞松弛素B、秋水仙素、N2O、CHClF2、聚乙二醇
生物法：杂交法、胚乳培养法
8、单倍体（名解）：是细胞中含有正常体细胞一半染色体数的个体，即具有配子染色体的个体。
第9章植物离体受精
1、植物离体受精：指在体外无菌条件下培养未受精的子房、胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠完成受精的技术。
第10章转基因植物
1、转基因植物：是指将外源基因转入到植物的细胞或组织中获得的具有新的遗传性状的植物。
2、转基因方法
第一类：载体介导法（常用），即将目的基因插入到农杆菌的质粒或病毒的DNA等载体分子上，随着载体DNA的转移而将目的基因导入到植物基因组中。包括农杆菌介导和病毒介导法。农杆菌介导可采用“共培养法”，有根癌农杆菌和发根农杆菌两种载体系统。
野生型根癌农杆菌Ti质粒大小约200-800kb。根癌农杆菌介导法见ppt上第二类：基因直接导入法，是指通过物理或化学的方法直接将外源目的基因导入植物的基因组中
物理方法包括基因枪转化法(也称微粒轰击法，是将DNA包被到金粒或钨粒中然后把这些粒子加速推进靶细胞。
3、转基因植物生物制药（前景，了解）
第11章动物细胞培养与表达制备药用蛋白
1、动物细胞培养的特点（了解）
动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。
动物细胞倍增时间长，生长缓慢
培养过程中需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感。
动物细胞间主要以聚集体形式存在。
原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡
动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，一般还需要血清。
对于培养环境极其敏感，包括PH、溶解氧、温度、剪切力等。
细菌、真菌、病毒、支原体均可导致动物细胞培养物的污染。
绝大多数哺乳动物细胞只有贴附在固体或半固体的表面才能生长。
2、离体培养的动物细胞可分为两类：贴壁依赖型、贴壁非依赖型
3、贴附型细胞：成纤维细胞、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞
4、非贴附型细胞：悬浮型细胞血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞始终为球形
5、培养基：
天然培养基：小牛血清、鸡胚浸出液、组织提取液等。
基础培养基（人工合成）商品种类：
普通培养基：RPMI-1640、DMEM（high /low glucose）、Ham-F12、M199；
专用培养基：神经元培养基、角朊细胞培养基；
限制性培养基：
完全培养基：
无血清：专用培养基+抗生素、缓冲系统、添加的必需生长因子。代替血清。
有血清：普通基础培养基+5~20% FBS 或NBS、抗生素、缓冲系统等。
6、常用的pH调整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3、4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)液等。
7、细胞中常用抗生素：青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉素（这两种现在用庆大霉素）
8、动物细胞小规模培养（与植物细胞小规模培养相对比）
一、悬滴培养：将组织或器官植块接种在一张盖玻片上，滴上一滴培养液，然后翻转盖玻片使植块及培养液悬挂在盖玻片下，再置放于一凹形载片上，最后用熔蜡密封后放入培养箱中培养。
二、灌注小室培养：细胞培养于密闭小室内，培养液从一侧流入，另一侧流出。培养液可以循环供应。细胞生长可以少受代谢产物积累的影响。
三、培养瓶培养：玻璃、一次性塑料
四、培养板培养：一次性塑料
五、转管培养：管状培养器皿固定于一旋转装置上。
六、转瓶培养：
9、动物细胞大规模培养
一、悬浮培养：少数动物细胞属悬浮生长型。细胞增殖快、产量高、培养过程简单。
二、微载体培养：多孔微载体、实心微载体
微载体的特点：书上
三、中空纤维法（谁在里外）
空心纤维是由醋酸纤维素和硝酸纤维素混合组成的可透性膜，表面有许多海绵状多孔结构。细胞在其上贴附生长，水分子、营养物质和气体可以透过。
培养系统的核心部分由3-6层空心纤维组成，细胞接种于空心纤维的外腔。
10、动物细胞培养的生物反应器：（类型，了解）
一、柱状中空纤维反应器
二、板框式中空纤维反应器
三、中心灌流式反应器
四、灌流微载体生物反应器
五、旋转壁式反应器
11、动物细胞表达制备药用蛋白
转基因方式
1、暂时转染：质粒在宿主细胞中不必停留很长时间，DNA被转录成mRNA，随后翻译成蛋白质，并不进入细胞基因组。如：磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法。
2、永久性转染：反转录病毒载体法可以产生永久有效的转染。
基因转移的方法
1、物理方法
2、化学方法：DEAE（二乙氨乙基）-葡聚糖法、磷酸钙-DNA共沉淀法、脂质体载体包埋法（转染效率依次增高，最后一种常用）
3、生物学方法：病毒介导的基因转移
常用病毒载体：逆转录病毒载体（单链RNA病毒）、DNA病毒载体（腺病毒载体、牛痘病毒载体）
第12章杂交瘤技术与单克隆抗体（这章做过实验）
1、单抗制备流程：
2、HA T培养基筛选原理（简答）
H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA
A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途径
T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA
DNA的合成有两条途径
1）正常途径：可以被氨基蝶呤阻断。
2）补救途径：需要次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）两种酶的参与。
HA T培养基中的A可阻断细胞正常途径合成DNA。融合所用瘤细胞是HGPRT或TK缺陷型，也不能采用补救途径合成DNA。
在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。
未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HA T培养基中存活和增殖。
3、作业：如何制备人源化单克隆抗体，设计一个具体实验。
第13章体外受精与核移植动物
1、体外受精：如将精子和卵子分别从公、母畜体内取出并经过一系列的处理，使精卵在体外条件下结合的过程，称为体外受精(in vitro fertilization，IVF)。
2、体外受精的基本操作程序（步骤）
精子采集与体外获能，卵子采集与成熟培养
卵子和精子的体外受精
重组胚激活与体外培养
胚胎移植
体内发育、出生
3、名解精子获能：指精子获得穿透卵子透明带能力的过程。（精子表面有去能因子，是顶体酶的抑制剂，能抑制精子受精。）
4、多选促进卵细胞成熟与排卵的激素主要有：见书
5、试管婴儿：是指卵子与精子在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回受体子宫内发育出生的婴儿。
6、试管婴儿的三个类型（区别，各有用途）见书
第一代
第二代
第三代
7、核移植动物培育流程：核供体任何都OK
质供体的要求（一般采用MⅡ期成熟卵细胞）
1．供体细胞：早期胚胎细胞、胚胎干细胞、胚胎成纤维细胞、体细胞
2．受体细胞：去核卵细胞、受精卵和2-细胞胚胎
3．核移植或融合方式：A.显微注射的方法。B.融合的方法（化学融合
4．重构胚的培养及移植
第14章多倍体与转基因动物
1、多倍体动物：是指细胞中含有超过正常体细胞染色体组数的动物个体。
2、三倍体鲍鱼、三倍体鲤鱼、三倍体牡蛎
3、多倍体动物制备方法
一、物理方法
（一）温度休克法
冷休克法：0-5 ℃温水性鱼类应用冷休克效果好
热休克法：30 ℃冷水性鱼类应用热休克效果好
（二）水静压法：采用较高的水静压（65kg/cm2）抑制第二极体的放出或第一次卵裂来产生多倍体。
二、化学方法
指应用某些化学药品（秋仙、细胞松弛素B、聚乙二醇、咖啡因）诱导多倍体。
动物少有用化学方法，因成功率低且有些有毒。
三、生物学方法（很难）
如四倍体+二倍体=三倍体
4、转基因方法
（一）原核期胚胎显微注射法
（二）胚胎干细胞方法
（三）精子载体法
（四）反转录病毒感染法
（五）受精前卵细胞显微注射法
2.1 植物细胞工程 一、知识与技能目标 1、简述植物组织培养和体细胞杂交技术，掌握它们的原理、过程及关键环节。 2、了解植物繁殖的新途径及作物新品种的培育的具体方法。 二、过程与方法目标 1、尝试进行植物组织培养，运用细胞的基础知识，分析植物细胞工程的理论基础；收集植物细胞工程的相关资料并进行整理、分析、交流。 2、以植物细胞工程的基本技术为基础，弄清楚其在生产实践中的实际应用。 三、情感与价值观目标 1、体验植物组织培养技术，讨论植物细胞工程的社会意义及细胞学基础理论与技术开发之间的关系。 2、搜集相关的实际技术应用，积极参加各种技术应用的讨论，体验现代生物科技的新进展带来的社会效益，激发学习生物学的兴趣。 四、教学过程 1、植物细胞的基本结构包括、、。 2、植物细胞主要的增殖方式是，细胞分化是指，_______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________。原因是。 3、全能性是指，已分化的细胞表现为全能性的原因是。 4、织物组织培养就是在和条件下，将培养在上，给予条件，诱导其产生形成完整的植株。 5、植物体细胞杂交就是将细胞在一定条件下融合成，并把它培养成的技术，优点是。 6、生物体可遗传变异类型包括、、。
根据变异类型育种的方法有、、、等。 7、植物的微型繁殖技术指，_____________举例_________________________________________________________。 8、获得脱病毒的植株的方法 。 9、神奇的人工种子指。 10、生物育种技术比较 技术原理优点缺点 诱变育 种基因突变 提高生物变异的频率，使后代变异频率 较快稳定；可大幅度改良某些性状，缩 短育种进程 盲目性大，需大 量处理供试材料 杂交育 种基因重组 使位于不同个体的优良性状，集中于一 个个体 周期长，难以克 服远缘杂交的障 碍 单倍体 育种染色体变异获得个体均为纯种，明显缩短育种年限 技术复杂，须与 杂交育种配合 多倍体 育种染色体变异器官大，提高产量和营养成分 适用于植物，动 物方面难以开展 基因工 程育种分子遗传学原理 打破物种界限，定向地改造生物遗传性 状 细胞工程育种细胞生物学和分 子生物学原理 克服远缘杂交不亲和的障碍；扩大了用 于杂交的亲本组合范围；定向改变生物 遗传性状 不能按人们的需 要表现出亲代的 优良性状
原代细胞的培养与建系 凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞培养工作的基础。 原代细胞的取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。 一、取材的基本要求 .1．取材要注意新鲜和保鲜 .2．应严格无菌 .3．防止机械损伤 .4．去除无用组织和避免干燥 .5．应注意组织类型、分化程度、年龄等 .6．作好记录 二、各类组织的取材技术 皮肤和粘膜的取材 内脏和实体瘤的取材 血液细胞的取材 骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 动物组织取材 人胚体组织取材 鸡（鸭）鸟类胚胎组织取材鸡（鸭）鸟类胚胎组织取材 皮肤和粘膜的取材 主要取自于手术过程中的皮片，方法似外科取断层皮片手术操作，但面积一般2~4平方厘
米。 内脏和实体瘤的取材 内脏除消化道外基本是无菌的，但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位，实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域，要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。 血液细胞的取材 血细胞、淋巴细胞的取材，一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中（如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等）分离细胞，取材时应注意抗凝。 骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。 动物组织取材 1、鼠胚组织取材 首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物，然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中，5分钟后（注意时间不能太长，以避免酒精从口或其他通道进入体内，影响组织活力），取出动物，在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢，切开皮肤，用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤，用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾，把动物反包，暴露躯干，然后再固定，更换无菌解剖器材，采用无菌操作法解剖取出胚胎。 2、幼鼠胚肾（或肺）取材 幼鼠采用上述方法处死消毒后，腹部朝上固定在木板上，先切开游离毛皮并拉开至两侧：然后采用无菌法打开胸腔取肺，或背部朝上固定在木板上，先将背部毛皮切开游离并拉向两侧，
植物细胞工程测试题 一、单选题： 1．植物组织培养是指（） A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体D．愈伤组织形成高度液泡化组织2．植物体细胞杂交的结果是（） A.产生杂种植株B．产生杂种细胞C．原生质体融合D．形成愈伤组织 3．如图是“白菜一甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是（） A．图示“白菜—甘蓝”植株不能结子 B．愈伤组织有叶绿体，代谢类型是自养需氧型 C．上述过程中包含着有丝分裂、减数分裂和细胞分化等过程 D．“白菜—甘蓝”杂种植株具有的性状是细胞全能性表达的结果 4．不能人工诱导原生质体融合的方法是（） A.振动 B.电刺激 C.PEG试剂D．重压 5．植物细胞表现出全能性的必要条件是（） A.给予适宜的营养和外界条件 B.脱离母体后给予适宜营养和外界条件 C.导入其他植物细胞的基因 D.将成熟筛管细胞核移植到去核的卵细胞内 6．植物组织培养过程中的脱分化是指（） A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞 B．未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程 C．植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程 D.取植物的枝芽培育成一株新植物的过程 7.下列植物细胞全能性最高的是（） A.形成层细胞 B.韧皮部细胞 C.木质部细胞 D.叶肉细胞 8．植物组织培养过程的顺序是（） ①离体的植物器官、组织或细胞②根、芽③愈伤组织 ④脱分化⑤再分化⑥植物体 A．①④③⑤②⑥B．①④③②⑤⑥C．①⑤④③②⑥D．⑥①④③⑤②
9．下列有关细胞工程的叙述不正确的是（） A. 在细胞整体水平上定向改变遗传物质B．在细胞器水平上定向改变遗传物质 C．在细胞器水平上定向改变细胞核的遗传物质 D．在细胞整体水平上获得细胞产品 10．对人工种子正确的解释是（） A．通过科学手段人工合成的种子B．利用植物组织培养技术获得的种子 C．种皮能自我生成的种子D．人工种子发芽率低 11．有关全能性的叙述，不正确的是( ) A．受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此全能性最高 B．生物体内细胞由于分化，全能性不能表达 C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高 D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性 12．马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会感染病毒而减产，为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒幼苗的最佳办法是（） A．选择优良品种进行杂交B．进行远缘植物体细胞杂交 C．利有芽尖进行组织培养D．人工诱导基因突变 13．用植物组织培养技术，可以培养或生产出（） A．食品添加剂B．无病毒植物 C.人工种子D．前三项都是 14．科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是（） A．彼此性状相似B．变异频率较高C．单倍体D．都是纯合子 15．植物的微型繁殖技术是指（） A．植物体细胞杂交技术B．嫁接C．营养繁殖D．植物组织培养 16．胚状体是在植物组织培养的哪一阶段上获得的（） A．愈伤组织B．再分化C．形成完整植株D．取离体组织 17．运用植物组织培养技术，可以培育或生产出（） A．细胞产物——生物碱B．无病毒植物C．人工种子D．以上都是 18．植物的微型繁殖的优点是（） A．取材少B．培养周期短C．繁殖率高D．以上都是 19．（08江苏高考）下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是（） A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 20.（08天津）为获得纯合高蔓抗病番茄植株，采用了下图所示的方法，图中两对相对性状独立遗传。
一.细胞培养的基本原理 细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0.5～1立方毫米)或薄片(厚0.2毫米)，而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。在组织培养中，细胞自组织块周围移出并生长，细胞在生长过程中总有移动(运动)或其它变动，这样就使被培养的组织难以长期维持其原有的结构和功能。培养时间越长，发生变化的可能性越大，结果常使单一类型的细胞保存下来，最终成了细胞培养。在细胞培养中，细胞生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存的，呈现一定的组织特异性，所以组织培养和细胞培养实际上无严格区别。 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。通过实验可获得某一类型细胞的纯培养。如心肌组织中心肌细胞约占50%，非心肌细胞占50%;而经纯化分离的心肌细胞悬液中，心肌细胞可达95%以上，这样，心肌细胞原代培养实验基本不受其它细胞的干扰。在细胞培养实验中能直接观察到培养细胞生命活动的动态过程;用定时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象;还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。此外，还能节约研究费用。如在某些研究中，用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论具有相同的统计学意义，而细胞培养较之大批量的动物饲养花费要小。 但细胞培养方法也存在不足之处：培养细胞失去体内细胞的制约和整体的调节作用，细胞形态和功能会发生一定程度的改变。培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有一定的影响，如胰蛋白酶可破坏细胞表面受体、酶、抗原等。长期体外培养的细胞，由于反复传代、冻存和操作等因素的影响，可能发生染色体非整倍体改变，呈永生化或癌变的特征。 二.细胞培养的基本设备与用品 (1)细胞培养的基本设备 细胞培养的基本设备有：CO2培养箱，倒置显微镜，净化台，压力蒸汽消毒器，自动双重纯水蒸馏器，液氮罐，冰箱，电热干燥箱，电热恒温培养箱，电动吸引器，抽气泵等。 (2)常用的实验用品 1.玻璃器皿 细胞培养所用的玻璃器皿应由透明度好、无毒的中性硬质玻璃制成。常用的有以下几种：国产螺旋口培养瓶[有12.5毫升，25毫升，100毫升等规格，国外培养瓶常以底面积(平方厘米)表示];培养皿(直径有3.5厘米，6厘米，9厘米，10厘米等规格);离心管(5毫升，10毫升);注射器(1毫升，5毫升等);用生理盐水瓶代替的贮存瓶(100毫升，250毫升，500 毫升);青霉素瓶(5毫升);西力辛瓶(10毫升);其它还有尖吸管和移液管，载玻片(厚度0.8～1.2毫米)，盖玻片(厚度0.12毫米)，贮存尖吸筒用的玻璃筒或金属筒，漏斗，烧杯，量筒，贮蒸馏水瓶，冷冻管(1.5毫升，2毫升)等。
《细胞工程学》教学大纲 课程名称：细胞工程学 课程类别：专业必修课 学时：32 学时 学分：2学分 考核方式：考试 适用专业：生物技术 开课学期：第5学期 一、课程性质、目的任务 《细胞工程》是通过对细胞及其组分的人工操作，研究生命活动规律；实现对动植物的遗传改造,用于农业、林业、园艺等生产实践；结合非生物材料等手段，生产用于治疗人类疾病或缺陷的人工器官，组织, 细胞及其代谢产物或用于深入研究的材料等为主要研究内容的一门新兴学科。 通过本课程的学习，使学生系统掌握该门学科形成与发展，理论与原理，技术与方法等基础知识，结合科研实际以及最新研究动态，使学生对本课程有一个全面的了解；以适应后基因组学时代在教学、科研和生产开发各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。 二、课程基本要求 通过对细胞工程学的特性和内容，细胞工程的主要类型和技术操作，细胞工程学研究的基本方法等进行阐述，使学生能够掌握如何将细胞工程学知识应用于生产实践。 三、学时分配
四、教学方法与考核 1．教学方法：讲授法、案例分析法 2．课程考核方法：考试 1）平时成绩占20%，期末考试成绩占80% 2）平时成绩评分标准 平时成绩（100分），包括学生课堂出勤情况（20分）、课堂发言及积极参与情况（20分）、课后作业完成情况及质量（60分）。此项成绩需由教师提供评分依据及记录。 3）期末成绩评分标准 以评分标准为依据，所得卷面成绩为准，以考试试卷形式考查，考试形式为笔试，满分100分，试题包括基本知识概念，知识的理解和应用，综合应用等能力等教学内容的考查。全面涵盖本课程知识重点和难点，渗透学科前沿及进展，能够真实反映学生对本课程的知识和能力的学习情况。 五、大纲正文 绪论（2学时） 【目的要求】 1. 了解细胞工程的发展历史。 2. 了解生物工程学的组成内容 3. 了解细胞工程的应用。 4. 理解生物工程学与其它学科之间的学科交叉。 5. 理解细胞工程学与生物工程的其他技术之间的联系。 6. 掌握细胞工程学的主要组成。 7. 培养严谨、认真的科学观。
细胞生物学实验报告 实验三细胞原代培养 1引言 1.1 实验目的 1. 理解细胞原代培养原理。 2. 了解细胞原代培养的应用。 3. 独立进行鼠胚和鸡胚细胞原代培养操作。 4. 巩固无菌操作技术。 1.2 实验原理 细胞原代培养：原代培养组织直接从机体获取后，通过组织块长出单层细胞或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，严格意义上的原代培养指在首次传代前的培养，但通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 2实验仪器、试剂及操作步骤 2.1 实验仪器 超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒 （头）、废液缸、手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶等 2.2 实验试剂 DMEM培养基、D-Hanks缓冲液、血清、抗生素、胰蛋白酶消化液等 2.3 实验材料 动物：9至12日龄的鸡胚、15日龄的鼠胚 2.4 实验步骤 A.鸡胚成纤维细胞的原代培养 1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。 2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。 3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。 4.在D-Hanks缓冲液中按1：100的比例加入双抗。 5.取9-12日龄鸡胚，用照蛋器照检，画出气室边界和胎位。将鸡胚置于鸡卵架上，用酒精棉球擦拭蛋 壳。 6.用镊子在鸡蛋气室位置敲一道划痕，然后用镊子小心去除气室部位的蛋壳。 7.换用洁净的无菌镊子揭开膜，取出鸡胚至灭菌的培养皿中，用D-Hanks缓冲液冲洗鸡胚。 8.用眼科剪去除鸡胚的头部、四肢以及内脏，然后用D-Hanks缓冲液充分洗涤躯干。 9.将躯干置于小平皿盖中，用D-Hanks缓冲液至少洗涤3次，充分弃除红细胞。 10.用无菌眼科小剪刀将鸡胚躯干剪成1mm3的碎块。在胚胎组织块中加入1mL的胎牛血清，用滴管吸取组 织块接种到培养瓶内。在培养瓶中放置10-15个组织块。 11.在培养瓶的另一侧面加入完全培养基，注意不要冲到组织块。将接种组织块的培养瓶面朝上在
《细胞结构与细胞工程》二轮复习 植物细胞的结构与植物细胞工程 一、三维目标 知识目标： 1.简述植物细胞的结构特点。 1.简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。 2.列举植物细胞工程的实际应用。能力目标： 1.简述植物细胞结构与植物细胞工程的关系。 2.尝试植物培养技术。情感态度价值观目标：体验植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术 二、教学重点： （1）植物细胞的基本结构特点。 （2）植物组织培养的原理和过程。 （3）植物体细胞杂交的原理。 （4）植物细胞工程应用的实例。 三、教学难点：植物组织培养技术 四、课时安排： 1 课时 五、教学过程： 1.植物细胞的结构 专题引入：PPT展示高等植物细胞的亚显微结构图，引导学生观察高等植物细胞的亚显微 结构图并复习高等植物细胞的各种结构以及这些结构相应的作用。 （1）、细胞壁：主要成分：纤维素和果胶。作用：支持和保护作用。在不破坏植物细胞其他结构的条件下怎样去除细胞壁：酶解法（纤维素酶和果胶酶）。 （2）、细胞膜：植物细胞的边界。主要成份：磷脂和蛋白质。结构特点：具有一定的流动性。 功能特性：选择透过性。 （3）、叶绿体：植物细胞进行光和作用的场所，养料制造车间。分布特点：绿色植物的叶肉细胞、幼茎的皮层细胞。 （4）、线粒体：有氧呼吸的主要场所，动力车间。 （5）、核糖体：生产蛋白质的机器。翻译的场所。 （6）、内质网：对来自核糖体的蛋白质进行初步加工。脂质合成车间。 （7）、高尔基体：与植物细胞壁的形成有关。 （8）、液泡：内含细胞液，植物细胞的仓库，充盈的液泡能使植物细胞保持坚挺。 （9）、细胞核：植物细胞代谢和遗传的控制中心。DNA的主要分布场所。 2.植物组织培养技术 1）、设问：将一个植物细胞能否培养成一个完整的植株？需要什么技术？该技术的原理？引入复习植物组织培养技术。 回答：能。植物组织培养技术。原理是植物细胞具有全能性。 以问题的形式引导学生复习植物细胞全能性的有关知识： （1）、什么是细胞的全能性？ 答：已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。
细胞工程学习题 1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应 A．加大盐的浓度B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 A．小麦的茎尖培养B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养D．玉米花粉培养 3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 A．体细胞B．生殖细胞C．受精卵D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类 A．葡萄糖B．果糖C．麦芽糖D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于 A．草本植物B．木本植物C．单子叶植物D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步： ①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。 ③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。 ④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104～106／ml。 正确的操作步骤是：（） A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④ 7．常用的细胞融合剂是 A．刀豆球蛋白B．聚乙二醇（PEG）C．细胞松弛素B D．脂质体 8．利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中，HAT培养基用来进行 A．细胞融合B．杂交瘤选择C．检测抗体D．动物免疫 9．下列过程中，没有发生膜融合的是 A．植物体细胞杂交B．受精过程 C．氧进入细胞中的线粒体D．单克隆抗体的产生 10．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生 大量的单克隆抗体。与骨髓瘤细胞融合的是 A．经过免疫的B细胞B．没经过免疫的T细胞
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
选修三植物细胞工程习题 一、单选题 1.下列有关植物细胞全能性的叙述，不正确的是（） A．植物体内某些体细胞没有表现出全能性，原因是所含基因在特定的时空条件下选择性表达各种蛋白质 B．高度分化的植物细胞只有处于离体状态时才有可能表现出全能性 C．植物细胞的全能性是植物体细胞杂交的理论基础 D．植物体只有体细胞才具有发育成完整个体所必需的全部基因 2.植物细胞工程中的叙述中不正确的是是指（） A．植物组织培养是指离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体 B．植物体细胞杂交的结果是产生杂种细胞 C．重压方法是不能人工诱导原生质体融合的． D．用植物组织培养技术，可以培养或生产出食品添加剂、无病毒植物、人工种子 3.如图是“白菜一甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是（） 甘蓝—”植株不能结子A．图示“白菜B．愈伤组织有叶绿体，代谢类型是自养需氧型．上述过程中包含着有丝分裂、减数分裂和细胞分化等过程C 杂种植株具有的性状是细胞全能性表达的结果—甘蓝”D．“白菜）（ 4.在植物细胞工程中原生质体融合成一个细胞后，需诱导产生细胞壁，参与该过程的细胞器是．线粒体、高尔基体 B ．叶绿体、高尔基体 A D．线粒体、内质网C．叶绿体、线粒体 科学家把天竺葵的原生质体和香茅草的原生质体进行诱导融合，培育出的驱蚊草含有香茅醛，能散发出5. ）（一种特殊的达到驱蚊且对人体无害的效果。下列关于驱蚊草培育的叙述中，错误的是 A．驱蚊草的培育属于细胞工程育种，其优点是能克服远源杂交不亲和的障碍 等试剂或离心、振动、电刺激等方法．驱蚊草培育过程要用到纤维素酶、果胶酶、BPEG ．驱蚊草培育过程是植物体细胞杂交，不同于植物组织培养，无愈伤组织和试管苗形成C ．驱蚊草不能通过天竺葵和香茅草杂交而获得是因为不同物种间存在生殖隔离D ）植物组织培养过程中的脱分化是指（6. A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B．未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程．植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程 C 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程D.两种植物细胞去掉细、AB 显示细胞核），将B7. A种植物的细胞和种植物细胞的结构如右图所示（仅组织培养后得到了杂种植株，则胞壁后，诱导二者的原生质体融合，形成单核的杂种细胞，若经过 ）该杂种植株是 （
课时作业(三十七)细胞工程 [基础练] 1．(2019·河南郑州调研)应用植物组织培养技术，不仅可实现种苗的快速繁殖、培育无病毒植株，也可加快作物及苗木育种。下面是培育柑橘耐盐植株的实验流程： 回答下列问题： (1)愈伤组织是由离体的茎段经________过程形成的，此时愈伤组织细胞________(填“具有”或“不具有”)细胞的全能性。 (2)对愈伤组织进行了两次处理，处理1中γ射线照射的目的是______________，用γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，原因是___________________________；处理2中添加的物质X为____________。 (3)植物组织培养技术也被广泛应用于其他作物的育种中。在培育白菜—甘蓝、三倍体无子西瓜、农杆菌转化法获得的抗虫棉中，必须用到植物组织培养技术的是____________________。 解析(1)离体的茎段经过脱分化过程可形成愈伤组织，此时愈伤组织具有未分化的特点，细胞依然具有较高的全能性。(2)图中对愈伤组织进行了两次处理，第一次处理是用γ射线照射诱发愈伤组织细胞发生基因突变。愈伤组织细胞分裂能力强，易受到培养条件和外界压力的影响而发生基因突变。第二次处理是抗盐接种实验，即在培养基中加入NaCl(盐)，适应一定浓度盐的愈伤组织才可以生长，不适应的愈伤组织死亡。(3)作物育种研究中常用农杆菌转化法将含抗虫基因的Ti质粒导入植物体细胞中，再利用植物组织培养技术获得抗虫的农作物。运用细胞工程培育白菜—甘蓝杂种植株，需要采用植物组织培养技术将杂种细胞培养成杂种植株。 答案(1)脱分化具有(2)诱发基因突变愈伤组织细胞分裂能力强，易诱发基因突变NaCl(或盐)(3)白菜—甘蓝、抗虫棉,,2.(2019·山师附中模拟)下图是植物体细胞杂交过程的示意图，请据图回答： (1)过程①②需要使用___________处理细胞，以去除细胞壁。过程③叫作_____________________。,(2)在利用杂种细胞培育成杂种植株的过程中，运用的技术手段是___________。利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种的过程中，遗传物质的传递___________(填“遵循”或“不遵循”)孟德尔的遗传规律。,(3)若原生质体只能发生两两融
细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程（cytotechnology或cell engineering）：它是以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状，生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养（nursing culture）：用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交（cell hybridization）：指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子：是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养（anther culture）：将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。（指离体培养花粉和花药，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，并从中鉴定出单倍体植株，使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium)：培养过程中，有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中，这种培养过某种细胞以后，含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒：由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除，以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系：指从机体中取出而直接培养的细胞，从一代到十代的细胞培养是原代培养，形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交：指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养：是指胚或具胚器官（如子房、胚珠等）在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择：是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征，在特定培养条件下，具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存：是指液体转变为非晶态（玻璃态）的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition)：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合（aymmetric fusion）：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合（symmetric fusion）：两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞）。 21、永久细胞系：大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。
原代细胞培养和传代培养的方法 原代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织
已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。 传代培养法 原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时 也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去
植物细胞工程复习资料 名词解释 细胞工程: 广义——在离体、无菌条件下，在人工培养基及适宜条件下，对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，促使其长成完整植株的技术。 狭义——应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 植物细胞的全能性: 生物体的每个细胞都具有该物种全部遗传信息和离体培养条件下发育成完整植株的潜在能力。 体细胞杂交:将不同来源（种、属间）的体细胞原生质体在诱导剂诱发下融合形成杂种细胞，并进一步分化形成杂种植物体，进而形成新物种或新品种的技术。 固体培养：将外植体接种在加有凝固剂的培养基上进行静止培养的技术。 超低温保存：将植物细胞或组织经防冻处理后，在-196℃条件下的低温保存的一整套技术。 细胞固定化培养：将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中、培养液呈流动状态进行无菌培养的技术。 外植体：用于培养的离体组织或器官。如下胚轴、叶片、胚、根等。 继代培养：把培养物转移到相同的、新鲜培养基中的过程。一般每隔4-6周进行一次继代培养。继代也不能过于频繁。 植物体细胞胚胎：体细胞在离体培养下未经受精过程，但经历类似合子胚胎发生和发育的过程，从而形成类似合子胚的结构。 花药及花粉培养：离体条件下对植物的花粉或花药进行培养获得单倍体植株的技术。 接种：将外植体种植于培养基上的过程。 人工种子：又称合成种子或体细胞种子。任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。 离体快繁（微繁）：通过无菌培养方法进行的营养繁殖。 愈伤组织：由外植体脱分化形成的一团无序的、分生状态的薄壁细胞。
配套课时作业 1.(2018·广东深圳高中模拟)利用相关工程技术可以获得抗黑腐病杂种黑芥—花椰菜植株，已知野生黑芥具有黑腐病的抗性基因，而花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，技术人员用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力，再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，流程如下图。 据图回答下列问题： (1)该过程用到的细胞工程技术有________________和________________。 (2)过程①所需的酶是________________，过程②PEG的作用是________________，经过②操作后，需筛选出融合的杂种细胞，显微镜下观察融合的活细胞中有供体的叶绿体存在可作为初步筛选杂种细胞的标志。 (3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是________________。原生质体经过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成________。 (4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和双亲植株的根尖，制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的________；将杂种植株栽培在含有________的环境中，可筛选出具有高抗性的杂种植株。 答案(1)植物体细胞杂交植物组织培养 (2)纤维素酶和果胶酶促进原生质体的融合 (3)保持原生质体完整性愈伤组织 (4)形态和数目黑腐病菌 解析(1)图中先去掉两种植物细胞的细胞壁，然后诱导融合获得杂种细胞，再通过植物组织培养获得杂种植株，该过程是植物体细胞杂交。 (2)植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，可采用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁；聚乙二醇(PEG)的作用是促进原生质
第一章简介 1.生物工程（bioengineering）（生物技术）：是以生物科学为基础，利用生物个体或生物器官、组织、细胞的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系（包括细胞系），以及与工程原理相结合进行产品加工生产的综合性技术体系。 2.传统生物工程：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程（各个定义见书） 后来：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程以及生化工程。 3.细胞工程（cell engineering ）是以细胞为研究对象，应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的原理或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 思考题：1．细胞工程的概念、研究范畴、在生物工程中与其它工程的关系。 2．动物细胞工程发展的主要标志性成就。 3．植物细胞工程技术的主要标志性成就。 4．细胞工程的作用与应用领域 。 第二章细胞工程基础 1、组成细胞的基本元素有哪些？ O、C、H、N、Si、K、Ca、P、Mg，其中O、C、H、N占90%以上。细胞化学物质分为：有机物和无机物。 2、原核细胞与真核细胞有哪些区别？ 原核细胞真核细胞 DNA区域没有被摸包被DNA区域有被摸包被 没有典型的细胞核和细胞器（只有核糖体）有细胞核（染色体、核仁、核液）和细胞器 （核糖体、内质网、叶绿体、高尔基体等）结构简单结构比原核细胞复杂 例：细菌、蓝藻例：动植物细胞 3、染色体与染色质有什么区别？ 染色质是指细胞分裂间期遗传物质的存在形式。染色体是指细胞有丝分裂或减数分裂过程中，由染色质聚成的棒状结构。（染色质由DNA、组蛋白、非组蛋白、少量RNA组成）4、什么叫细胞周期？ 也称细胞分裂周期，是指一个细胞经生长、分裂增殖成两个细胞所经历的全过程。包括分裂期（M期）与间期，间期由G1、S、G2三个阶段组成。 5、什么叫细胞凋亡，什么叫细胞坏死？ 细胞凋亡也叫细胞程序性死亡，是机体维持环境稳定、由基因控制的细胞自主的有序性死亡。 细胞坏死是受到化学因素（强酸强碱有毒物质）、物理因素（热、辐射）和生物因素（病原体）等环境因素伤害，引起的细胞死亡现象。 6、什么叫细胞全能性？ 是指已分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 7、什么叫细胞分化？
小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数 实验背景： 一、细胞培养的基本条件： 1.无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素 2.细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清 3.细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器 4.细胞保存条件：液氮罐 1.超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 2.Zeiss滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌。
3.CO2培养箱： CO2培养箱设定的条件为37 ℃，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90 ℃，14 h)。 ③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避免培养液 蒸发。 三、细胞培养用液的配制： 1.水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 2.平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液 PBS：NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4.H2O 1.56 g KH2PO4 0.20 加水至1000 ml 3.消化液： ①胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。 ②胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。 ③胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是 0.25％。用滤器过滤除菌。 ④胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。 ⑤用含血清培养液终止其对细胞的消化作用 4.培养基： 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。 ①天然培养基： 天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限，成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污
温馨提示： 此套题为Word版，请按住Ctrl,滑动鼠标滚轴，调节合适的观看比例，答案解析附后。关闭Word文档返回原板块。 课时分层作业四十一 植物细胞工程 (30分钟100分) 1.(12分)(2018·正定模拟)叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。请回答： (1)转基因技术的核心步骤是______________________，完成该步骤所需要的酶有______________________。 (2)将植物体细胞处理得到原生质体，再通过________法或________法，将目的基因导入原生质体，使原生质体再生细胞壁之后，通过______技术培养可得到相应的转基因幼苗。 (3)原核生物中有重要价值的外源基因不需要改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，据此分析，原因是_________________________________________。 (4)对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式________(填“遵循”或“不遵循”)分离定律，不会随________(填“花粉”或“卵细胞”)传给后代，从而保持了________(填“父本”或“母本”)的遗传特性。 【解析】(1)转基因技术的操作分四步：获取目的基因、构建基因表
达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定，其中构建基因表达载体是核心，需要用到限制酶和DNA连接酶。 (2)将目的基因导入原生质体，可以用农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。原生质体再生细胞壁之后，通过植物组织培养技术可得到相应的转基因幼苗。 (3)外源基因不需要改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，原因是叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似。 (4)叶绿体转基因属于细胞质基因，不遵循分离定律，受精卵的细胞质几乎全部来自卵细胞，所以叶绿体转基因不会随花粉传给后代，从而保持了母本的遗传特性。 答案：(1)构建基因表达载体限制酶和DNA连接酶 (2)农杆菌转化基因枪植物组织培养 (3)叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似 (4)不遵循花粉母本 【延伸探究】 (1)本题中的外源基因在叶绿体中表达时，与核基因的表达相比较，其特点是什么？ 提示：转录还未结束，翻译已经开始，即转录和翻译同时进行。(2)本题中外源基因在叶绿体中表达的场所是什么？其所需要的能量来自哪里？ 提示：叶绿体中的核糖体；光反应产生的ATP。 2.(12分)根据下面植物体细胞杂交技术流程图，回答相关问题：