“从RNA提取到荧光定量PCR”解决方案
―核酸纯化系统TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD
RNA相关知识及提取原理
RNA提取流程
特殊组织RNA的提取
的评价、、鉴定与保护
RNA的评价
TIANGEN公司RNA提取产品选择指南
AAAAAA
细胞中RNA 的种类和含量
1mg
玉米叶片
0.050.05--0.10.1μμg 1mg 烟草叶片低丰度
0.20.2--0.50.5μμg 1mg 拟南芥叶片0.50.5--1.51.5μμg 105酵母中丰度105人白细胞0.50.5--1μg 105成纤细胞高丰度1mg 脂肪
1mg 骨0-0.050.05μμg 1mg 膀胱
低丰度
1mg 肺1mg 肾脏1mg 胚胎0.050.05--2μg 1mg 大脑
中丰度
1mg 心脏1mg 脾脏2-4μg
1mg 肝脏高丰度
总RNA RNA含量含量
样品量组织名称不同丰度
RNA 提取的基本方法——裂解原理不同
异硫氰酸胍/苯酚法
细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解，，同时核蛋白体上的蛋白变性白体上的蛋白变性，，核酸释放
释放出来的释放出来的DNA DNA DNA和和RNA RNA由于在特定由于在特定由于在特定pH pH pH下溶解度的不同而下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相分别位于整个体系中的中间相和水相，，从而得以分离
胍盐/β-巯基乙醇法
盐酸胍裂解样本盐酸胍裂解样本，，抑制抑制RNase RNase RNase的活性的活性 β-巯基乙醇变性蛋白
磁性微粒挂上不同基团可吸附并携带吸附并携带RNA RNA
磁珠
低盐高低盐高pH pH pH值结合核酸值结合核酸高盐低高盐低pH pH pH值洗脱值洗脱阴离子交换树脂
高盐低高盐低pH pH pH值结合核酸值结合核酸低盐高低盐高pH pH pH值洗脱值洗脱硅基质纯化原理吸附材料 沉淀法 介质吸附
RNA 提取的基本方法——吸附方法不同
RNA相关知识及提取方法原理
RNA提取流程
特殊组织RNA的提取
的评价、、鉴定与保护
RNA的评价
TIANGEN公司RNA提取产品选择指南
样品前处理——实验材料的选择
可将新鲜血液先进行红细胞裂解可将新鲜血液先进行红细胞裂解，，得到白细胞得到白细胞，，然后加入一定量的然后加入一定量的TRNzol TRNzol TRNzol，，-7070℃℃保存较长时间
样品前处理——实验材料的保存
液氮研磨匀浆或液氮研磨应用红细胞裂解液处理直接裂解或胰蛋白酶处理
样品前处理——处理方式
Q -1：样品量是否越多越好样品量是否越多越好？？A -1：不是不是。。在试剂盒规定内增加在试剂盒规定内增加，，若过度增加样品处理量会
影响RNA 得率得率；；
如增加样品起始量如增加样品起始量，，则后续实验中各溶液量均要相应按比例增加例增加。。
处理样品量
RNA 得率
实 得率
得率
量
样品前处理——常见问答
Q -2：如何保证研磨过程和匀浆中RNA 不被降解不被降解？？A -2：研磨过程要迅速研磨过程要迅速，，同时尽量避免外源RNA 酶污染酶污染；；
匀浆过程中一定要保证组织和裂解液充分接触匀浆过程中一定要保证组织和裂解液充分接触，，尽量在匀浆前将组织低温切割成小块加入裂解液中在匀浆前将组织低温切割成小块加入裂解液中，，可确保RNA 不被降解不被降解。。
样品前处理——常见问答
细胞裂解细胞裂解－－－－释放
释放RNA RNA 异硫氰酸胍异硫氰酸胍//酚－TRNzol TRNzol、
、TRNzol TRNzol－－A ＋总RNA RNA提取试剂提取试剂独特配方独特配方----RNAplant RNAplant植物植物植物RNA RNA RNA提取试剂提取试剂
胍盐胍盐//β-巯基乙醇巯基乙醇——RNAprep pure pure系列系列系列RNA RNA RNA提取试剂盒提取试剂盒
RNA RNA纯化与获得纯化与获得纯化与获得－－－－纯化要求
使用试剂（以TRNzol TRNzol－－A ＋为例为例））
使用试剂盒（以RNAprep pure pure试剂盒为例试剂盒为例试剂盒为例））
实验举例及注意事项
、细胞裂解
试剂盒
加入吸附柱
获得获得RNA 加去蛋白液
样品处理量与加入的样品处理量与加入的TRNzol TRNzol TRNzol--A+A+的量要对应的量要对应1ml 1ml TRNzol TRNzol TRNzol--A+A+对应对应对应：： 血液0.3ml 动植物组织动植物组织303030--50mg 贴壁细胞贴壁细胞：：每10cm 2培养面积 悬浮细胞悬浮细胞：：5-1010××106细胞
TRNzol TRNzol--A ＋试剂法提取
试剂法提取————加量
细胞
基因组DNA
水相
有机相
RNA 氯仿
纯化
pH5.7
离心
加入裂解液(TRNzol-A+)
TRNzol TRNzol--A ＋试剂法提取
试剂法提取————提取动物培养细胞
等体积异丙醇沉淀
75％乙醇洗涤沉淀
晾干溶解
吸附柱
去蛋白液
漂洗
洗脱
水相RNA
传统方法传统方法：：有机溶剂抽提有机溶剂抽提，，得率高
柱纯化法柱纯化法：：纯度高
TRNzol TRNzol--A ＋试剂法提取
试剂法提取————提取动物培养细胞
图片说明图片说明：：
M: TIANGEN Marker III
A: A 公司同类产品提取动物细胞结果
T: TIANGEN 公司TRNzol-A ＋提取动物细胞结果
?试验材料试验材料：：
Hela cell/106
?实验方法实验方法：：
TIANGEN 公司TRNzol TRNzol--A +
A 公司同类产品
?试验结果试验结果：：得率得率：：TRNzol TRNzol--A +得率与得率与A A 公司同类产品略高
纯度纯度：：经TRNzol TRNzol--A +纯度较高纯度较高，
，无明显无明显DNA DNA DNA、、蛋白残留
M
T
A
1 2 3 4 5 6
TRNzol TRNzol--A ＋试剂法提取
试剂法提取————实验举例
前处理裂解
沉淀洗涤抽提溶解
RNA降解处理样品量
上清吸取，杂质去除适量异丙醇乙醇，盐离子残留RNA不宜太干
TRNzol TRNzol--A ＋试剂法提取
试剂法提取————注意事项