电泳技术
概述
电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，相反则带正电荷，在电场中向负极移动，只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零，在电场中不向任何一极移动。
电泳现象早在1890年就被发现，1907年有人曾在琼脂中电泳，研究白喉毒素； 1937年由Tiselius制成界面电泳仪，并开始用于蛋白质的研究。从此，人们才逐渐认识到电泳技术对于生物科学研究是一种重要工具。然而，界面电泳结构复杂。价格昂贵难于普及。1940年左右。以纸为支持物的电泳问世后，电泳技术得到迅速发展。
电泳技术以支持物分，可分为纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼脂（糖）凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。经凝胶形状分有水平平板电泳，园盘柱状电泳及垂直平板电泳。各种类型的电泳技术概括如表。
表电泳技术的种类
各类电泳技术已经广泛地用于基础理论研究，临床诊断及工业制造等方面。例如用醋酸纤维薄膜电泳分析血清蛋白，用琼脂对流免疫电泳分析病人血清，为早期诊断原发性肝癌提供资料：用高压电泳分离肽段，研究蛋白质一级结构：用高压电泳和层析结合研究核酸的一级结构。凝胶龟泳技术在分离分析酶。蛋白质，核酸等生物大分子方面具有较高的分辩力，为生物化学，分子生物学的发展作出了重大贡献。
基本理论
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度（或迁移率）来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。影响泳动度的主要因素有：
1、首先决定于带颗粒的性质，即颗粒所带净电荷的数量，大小及形状。
一般说来，颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则慢。泳动度还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，泳动度与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径反比。带电荷的高分子在电解质溶液中把一些带有相反电荷的离子吸引在其周围，形成一离子扩散层。加以电场时，颗粒向符号相反的电极移动即带阳电荷颗粒移向负极，带阴电荷颗粒移向正移；离子扩散层由于带有过剩的与颗粒符号相反的电荷，可以向相反方向移动。结果颗粒与离子扩散之间的静电引力使颗粒的泳动度减慢，另外，高分了颗粒表面有一层水，在电场影响下，它与颗粒一起移动，可以认为是颗粒的一部分。
2、电场强度
电场强度也称电位梯度，是指单位长度（每一厘米）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。例如纸电泳。测量25厘米长纸条两端电压为250伏特，则电场强度为250伏特/25厘米=10伏特/厘米。
一般，电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度大小，可将电泳分为常压电泳和高压电泳，前者的电压在100-500伏特，电场强度一般是2-10伏特/厘米；后者电压可高达500-1000伏特，电场强度在200-2000伏特/厘米。常压电泳分离时间需数小时至数天，高压电泳时间短，有时仅几分钟即可，高压电泳主要用于分离氨基酸，肽，核苷酸，由于电压升高，电压也随之增大，故需冷却装置。
3、溶液的pH值
溶液的pH值决定了带电颗粒解离的程度，也决定了物质所带净电荷的多少，对于蛋白质，氨基酸等两性电解质而言，溶液pH值离电点越远，颗粒所带净电荷越多；电泳速度越快；反之则越慢。例如血清中几种主要蛋白质的等电点各不相同，白蛋白等电点是4.0。α2球蛋白等电点是5.06，β球蛋白等电点是5.1，γ球蛋白等电点是7.1。当在pH8.6的电泳缓冲液中电泳时，这些蛋白质都带负电荷，它们的泳动速度是白蛋白< α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。因此，当要分离一种蛋白质混合物时，应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH值，以利于各种蛋白质分子的解离。同时，为保持电泳过程中溶液pH恒定也须使用缓冲液。
4、溶液的离子强度
溶液的离子强度是另一个重要选择的条件，在保持足够缓冲能力前提下，离子强度要最小。溶液的离子强度越高，带电颗粒泳动速度越慢，反之越快。通常缓冲液离子强度选择在0.05?FONT FACE="宋体" LANG="ZH-CN">0.1M之间。浓度大的缓冲液在合适电压下，有较低的电阻和较大的电流，产热较高。如果这种额外的热可以驱散，高浓度的缓冲液扩散常数较低，可以产生较窄细
的电泳区带。离子强度很高时要用低电压，避免过多产热，这样又导致长的电泳时间，以致增加变性和区带分离困难。
5、电渗作用
在支持物的电泳中，影响电泳的另一个重要因素是电渗作用。所谓电渗就是指在电场中液体对固体支持物的相对移动，例如在pH8.6时，血清蛋白质进行纸电泳时，γ球蛋白与其他蛋白质一样带负电荷，应该向正极移动，然而它却向负极方向移动，这就是电渗作用的结果。滤纸的纤维间具有大量孔隙带有负电荷，如一束毛细管，进行电泳时蛋白质通过这些孔隙向前移动。纸的孔隙带有负电荷，与带电颗粒一样可以吸引正离子，因此介质沿管壁相对地带的较多的正电荷。在电场中，带负电荷的蛋白质向正极移动，而介质却向反向阴极移动，从而对蛋白质颗粒的泳动起阻碍作用。由于γ球蛋白分子颗粒大，净电荷较少，移动速度慢，电渗作用大于颗粒向前泳动的力，结果γ球蛋白向后退。而其他血清蛋白质，因分子较小，净电荷较多，电渗作用小于分子向前移动的力，因此分子向前移。所以，血清蛋白质电泳后球蛋白反而在点样位置之后。
琼脂糖凝胶电泳
在凝胶电泳中，首先应用的是琼脂电泳，它具有下列优点：（1）琼脂含液体量大，可达98-99%，近似自由电泳，但是样品的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微。（2）琼脂作为支持体有均匀，区带整齐，分辨率高，重复性好等优点。（3）电泳速度快。（4）透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测仪作定量测定。（5）区带易染色，样品易回收，有利于制止备。然而琼脂中有较多硫酸根，电渗作用大。琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。琼脂（糖）电泳常用缓冲液的pH在6-9之间，离子强度为0.02-0.05。离子强度过高时，会有大量电流通过凝胶，因而产生热量，使凝胶的水份量蒸发，析出盐的结晶，甚至可使凝胶断裂，电流中断。常用的缓冲液有硼酸盐缓冲液与巴比妥缓冲液。为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变，可在每次电泳后合并两极槽内的缓冲液，混匀后再用。
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；④对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果，由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低，因此必需在密闭的容器中进行电泳，并使用较低有电流避免蒸发。
醋酸纤维素薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。例如血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液；氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸盐缓冲液等。电泳时先将滤膜剪成一定长度和宽度的纸条。在欲
点样的位置用铅笔做上记号，点上样品，在一定的电压，电流下电泳一定时间，取下滤膜，进行染色。不同物质需采用不同的显色方法，如核苷酸等物质可在紫外分析灯下观察定位，但许多物质必须经染色剂显色。
醋酸纤维素薄膜电泳染色后区带可剪下，溶于一定的溶剂中进行光密度测定。也可以浸于折射率为1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用光密度计测定。它的缺点是厚度小，样品用量很小，不适于制备。
丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。
聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：
①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。
③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。
④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝胶。
在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂和另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺成为自由基，发动聚合反应，加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。常用的引发剂和加速剂的配伍如下表：
聚合反应催化剂配伍
注：(NH4)2S2O8，过硫酸胺 TEMED：N，N，N，N';四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴用过硫酸铵引发的反应称化学聚合反应；用核黄素引发，需要强光照射反应液，称光聚合反应。聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响： 1、大气中氧能淬灭自由基，使聚合反应终止，所以在聚合过程中要使反应液与空气隔绝。 2、某些材料如有机玻璃，能抑制聚合反应。 3、某些化学药物可以减慢反应速度，如赤血盐。 4、温度高聚合快，温度低聚合慢。以上几点在制备凝胶时必须加以注意。凝胶的筛孔，机械强度及透明度等很大程度上由凝胶的浓度和交联决定。每100亳升凝胶溶液中含有单体和交联剂的总克数称凝胶浓度，常用T%表达；凝胶溶液中交联剂占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示，可用下式计算：
公式
a：丙烯酰胺克数； b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升）凝胶浓度过高时，凝胶硬而脆，容易破碎；凝胶浓度太低时，凝胶稀软，不易操作。
交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不防止对流减低扩散的能力，而且因为它具有三度空间网状结构，某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大小和形状，这是凝胶的分子筛作用。由于这种分子筛作用，这里的凝胶并不仅是单纯的支持物，因此，在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外，还必须注意与凝胶本身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）。可通过下式计算来选择适当的凝胶网孔。
公式
式中：P为网孔平均直径，C为多聚体浓度，d为该多聚体分子直径（若不是卷曲的分子应为5A），K为常数，K值取决于涨胶的几何构型，假如多聚体的链是以近似于直角交联的，则约为1.5根据此式，我们可以通过多聚体浓度C近似地计算出网孔直径，例如已知多聚体浓度为5%，其网孔平均直径应为：
公式
这样的计算是粗略的，与实际情况有一定距离，有人测定了总浓度（T）为20%的丙烯酰胺液，在六种不同比例的双丙烯酰胺存在下，聚合后的网孔大小，发现孔径与总浓度有关，总浓度愈大，孔径相应变小，机械强度增强，与总浓度不变时，甲叉双丙烯酰胺（Bis)的浓度在5%时孔径最小，高于或低于此值时，聚合体孔径都相对变大，凝胶孔径在凝胶电泳中是一个重要的参数，它往往决定了电泳的分离效果。经过不断的实践，得到了如表3所示的经验值，在一般情况下，大多数生物体内的蛋白质采用7.5%浓度的凝胶，所得电泳结果往往是满意的，因此称由此浓度组成的凝胶为“标准凝胶”。
对那些用于重要研究的凝胶，最好是通过采用10%的一系列凝胶浓度梯进行预先试验，以选出最适凝胶浓度。
表3不同分子量范围的蛋白质和核酸在凝胶电泳中所选用的凝胶浓度百分率
聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续的和不连续的两类，前者指整个电泳系统中所用缓冲液，pH 值和凝胶网孔都是相同的，后者是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓冲液，pH值和孔径，不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨能力。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都不一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小，因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。
等电聚焦
等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄；由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离；可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH 单位。电聚焦技术的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀，二是样品中的成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。
电聚焦技术要求有稳定的pH梯度，要求极防止对流和防止已分离区带再混合的措施，其办法有三：密度梯度，聚丙烯酰胺凝胶和区带对流聚焦，以第一种方法为常用。
一、基本原理
（1）人工pH梯度：在分离蛋白质时常用一个直立的性，以蔗糖密度梯度防止对流。当两个不同pH的缓冲液互相扩散时，在其混合区间即形成pH梯度，称为“人工pH梯度”。因为缓冲液是电解质，在电场中的它的离子移动会引起pH梯度的改变，所以不稳定。
（2）天然pH梯度：这种梯度是由电流本身所引起并保持的，比较稳定，其形成过程是，当电解硫酸钠的稀溶液时，在阳极聚焦硫酸而在阴极聚焦氢氧化钠。若将一些两性电解质放入槽中，则它们在阳极的酸性介质中就会得到质子而带正电，在阴极的碱性介质中则失掉质子而带负电，这样就会受其附近的电极所排斥而向相反方向移动。设其中有一个酸性最强的两性电解质（甲），当它由阴极逐渐接近阳极的硫酸时，就会失去电荷而停止运动，（甲）所在的位置就是它的等电点，另有一个等电点稍高于（甲）的物质（乙)，当向阳极运动靠近（甲）时，它不能超过（甲），因为那里低于它的等电点。于是（乙)将带正电荷而向阴极移动，它只能排要（甲）的阴极侧。假如有很多两性电解质，它们就会按照等电点由低到高的顺序依次排列，形成一个由阳极向阴极逐步升高的平稳的pH梯度，此梯度的进程取决于两性电解质的pH值，浓度和缓冲性质。防止对流的情况下，只要电流稳定，这个pH梯度将保持不变。
（3）两性电解质互相分离的条件：上述经验甲乙两物质形成两个相邻的不同pH的等电点层，因为在它们中间不能形成纯水层，所以它们不是完全分离开的，中间部分互相扩散，互相粘连。要使两物质完全分开，中间必须有一个介于其间pH值的物质，例如，当甲乙两物质的pH值正好一个在7以下，一个在7以上，即可以分开，因为中间形成了纯水层（pH=7)，这时水是作为一个两性电解质而存在。
（4）蛋白质的电聚焦分离：蛋白质及多肽是两性电解质，它们比氨基酸更适于电聚焦，因为它们在等电点附近仍有电荷而能进行电迁移，大部分中性氨基酸在接近等电点时就失去电荷而停止运动，不能过到真正的等电点。但在没有第三种居间的两性电解质存在时也不能将两种蛋白质完全分开，必须有很多不同pH值的是电解质（载体两性电解质）才能解决这个问题。
二、载体两性电解质
（1）载体两性电解质必需具备的条件：
（i）在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。
（ii）在等电点必需的足够高电导，以便使一定的电流通过，而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数，使整个体系中的电导均匀，如果有局部电导过小，就会产生极大的电位降，从而其他部分电压就会太小，以致不能保持梯度，也不能使应聚焦的成分进行电迁移，达到聚焦。（iii）分子量要小，便于与被分离的高分子物质用透析或凝胶过滤法分开。
（iv）化学组成应不同于被分离物质，不干扰测定。
（v）应不与分离物质反应或使之变性。总起来说，当一个两性电解质的等电点介于两个很近的pk值之间时，它在等电点的解离度大，缓冲能力强，而且电导系数高，这就是好的载体两性电解质。
（2）理想的载体两性电解质的合成：
用具有几个pH值很相近的多乙烯多胺（如五乙烯六胺）为原料，与不饱和酸（如丙烯酸）发生加合反应：加合反应优先加在α、β饱和酸的β碳原子上，调节胺和酸的比例可以加上一个或多个羧基，这种合成方法与一般有机会合成不同，有机合成一般要求合成的产物愈纯愈好，而这里要求合成出的产物愈复杂愈好，要有多异构物和同系物，以保证的很多具有不同而又互相接近的pK值和pI值，从而得到平滑的pH梯度。载体两性电解质的等电点在pH3-10的范围，分子量在300-1000之间，它们的缓冲能力等于或优于组氨酸，电导性能良好，可以使电场强度分布较均匀，它们的水溶性良好，在1%水溶液中的紫外吸收值（260mμ）很低。
三、密度梯度等电点聚焦
（一）密度梯度
密度梯度是用以防止对流保持pH梯度，避免已分离物质再混合的重要措施则由重溶液和轻溶液以梯度混合形成。用做密度梯度的溶质应具有以下条件：溶解度高，粘度低；密度大，得到的密度差不低于0.12克/厘米3，不与样品蛋白质起反应，不解离。最常用的是蔗糖（分析纯），它对蛋白质不仅无害还有保护作用。重溶液含蔗糖50%（W/V)，这时柱上和柱下最大密度差为0.2克/厘米3，浓度太高则粘度过大适用。蔗糖在高pH值时会分解，影响pH梯度及pI值测定，这种情况下可改用甘油，也可用甘露醇，山梨醇，右旋糖酐等。
（二）pH梯度的选择
在测定未知蛋白时，可先采用pH3-10的载体，经初步测定后改用较窄的以提高分辨率，在使用pH7以上或以下范围时，因缺少中性载体，在聚焦过程中载体与电极之间在pH7部位就会形成纯水区带，纯水的电导极低，必须避免此现象。凡使用离开中性的pH范围的载体时应加入相当于0.1载体量的pH6-8或pH3-10的载体。在用pH低于3的范围时，可加有机酸如一氯醋酸，二氯醋酸，甲酸，乙酸，pH离于10时，可补加胺使pH增加到11。载体在pH6附近电导较低，可以与蔗糖密度梯度互相补偿，蔗糖浓度高时电导低，所以可把pH6电导低部位放在柱上部，也就是用pH6以下范围时，阴极在上，而用pH6以上范围时，阳极在上方。
（三）蛋白质样品及分离容量
电聚焦有高的分辨力，一般样品不需提纯，分析上可用来测定混合物中某一成分的相对比例：如大量提纯蛋白质，则应预先初步提纯。有些物质（如核酸）聚焦时会沉淀，应预先除去。蛋白质应不含盐，因盐浓度高电流大，易发热，而且盐离子迁移至两极产生酸碱，占据了分离的有效部位。加样体积不受限制，最高可达80-85毫升。等电点聚焦的分离容量受下列几个因素影响：聚焦后每一区带的蛋白量取决于密度梯度所能支持的蛋白质，提高密度可以提高分离容量；容量与区带高度的平方成正比，降低电压可使区带变宽，提高容量，但分辨率降低，聚焦时间长，用窄的pH梯长范围可以使区带变宽，提高分辨率。用110毫升柱时，每一区带蛋白质含量最高可达２0-25毫克，由于粗蛋白样品可分为很多区带，所以总量可以加至几百毫克；分离的容量与柱的横载面成正比，用440毫克柱时，可加粗蛋白质5克，每一区带可达一克。
λ噬菌体DNA(48502bp)的限制性内切酶酶切片段
编 号 GY-TY-23-2013 代 替 规范等级 二级 重庆长安汽车股份有限公司内部技术规范 汽车零部件油漆涂层技术规范 Painting of auto parts technique criterion 2013-08-01制定 2013-09-25发布重庆长安汽车股份有限公司发布
前言 本规范是根据有关国家标准、行业标准及长安汽车的实际情况制定的。为保证汽车零部件油漆涂层质量，明确了涂层的质量要求、工艺管控要求和质量验收要求。 本规范由汽车工程研究总院法规标准所管理。 本规范由工艺技术部发动机总铸工艺设计所负责起草。 本规范主要起草人：黄平、张营营、杨鸿昌。 编制：黄平、张营营、杨鸿昌 校核：程巾 审定：彭宝斌 批准：张劲松 本规范的版本记录和版本号变动与修订记录 规范编号 制定/修订者 制定/修订日期批准 日期
汽车零部件油漆涂层技术规范 1范围 本规范规定了汽车零部件油漆涂层的质量要求、工艺管控要求和质量验收要求。 本规范适用于长安汽车零部件的油漆涂层。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 1730 漆膜硬度测定法 摆杆阻尼试验 GB/T 1731 漆膜柔韧性测定法 GB/T 1732 漆膜耐冲击测定法 GB/T 1734 漆膜耐汽油性测定法 GB/T 1735 色漆和清漆 耐热性的测定 GB/T 1740 漆膜耐湿热测定法 GB/T 1764 漆膜厚度测定法 GB/T 1766 色漆和清漆 涂层老化的评级方法 GB/T 1865 色漆和清漆 人工气候老化和人工辐射暴露（滤过的氙弧辐射） GB/T 5209 色漆和清漆 耐水性的测定 浸水法 GB 6514 涂装作业安全规程 涂漆工艺安全及其通风净化 GB/T 6739 涂膜硬度铅笔测定法 GB/T 9274 色漆和清漆 耐液体介质的测定 GB/T 9286 色漆和清漆 漆膜的划格试验 HG/T 3343 漆膜耐油性测定法 HJ／T 293 清洁生产标准 汽车制造业（涂装） QC/T 484 汽车油漆涂层 SY-HB-14 长安汽车禁限用物质的限值及测量方法（中国） SY-HB-15 长安汽车禁限用物质的限值及测量方法（欧盟）
实验二SDS－PAGE 蛋白电泳分析 一、目的 掌握 SDS-PAGE 电泳原理与方法 二、电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。 SDS 是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。 三、试剂配制 1．30% 丙烯酰胺：将29g 丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml 的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用过滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温(丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料)。 2．1M Tris-Cl: 称取12.191g Tris 碱溶于80ml 蒸馏水中，用浓HCl 调到所需pH 值，定容至100ml。 1.5M：Tris 碱18.15g 去离子水80ml 浓盐酸调PH 值8.8 加去离子水定容至100ml 3．1 M DTT：称取3.09 g DTT，加入到50 ml 塑料离心管内，加20 ml 的0.01 M NaOAc （pH5.2)，溶解后使用0.22 mm 滤器过滤除菌适量分成小份后，-20℃保存。 4．10% SDS: 20g SDS 溶于200ml 纯水中。
双向电泳技术在生物医学中的应用现状和应用前景 1 双向电泳技术 1.1双向电泳技术概述 双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE）是蛋白分离的黄金标准，由此可以分析生物样品的显著差别，产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。 双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。就像Fey和Larsen在他们的综述中提到：“尽管人们都想有新技术取代它，可是如果希望对细胞活动有全面的认识，其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。 1.2 双向电泳技术的原理 双向电泳技术是蛋白质组学研究的核心技术之一。它利用了各种蛋白质等电点和分子量的不同来分离复杂蛋白质组分，具有较高的分辨率和灵敏度，目前已成为复杂蛋白质组分检测和分析的最好的生化技术。IPG - DALT系统双向电泳技术原理简明：首先利用等电聚焦( isoelectric focusing ,IEF) 将蛋白质沿pH 梯度分离至各自等电点(isoelectric point ,pI)，通过电荷分离蛋白质；然后沿垂直的方向以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( sodium dodecyl sulphate polyacryla -mide gel electrophoresis ,SDS-PAGE)，通过分子量分离蛋白质。所得蛋白双维排列图中每个点代表样本中一个或数个蛋白质，而蛋白质的等电点、分子量和在样本中的含量也可显现出来。蛋白双向电泳的分辨率和灵敏度很高，一般可分离
电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜，目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里，小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析，但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质，操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展，使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶，但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种，常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板，玻璃板两边由塑料条隔开，在玻璃平板中间
第一章概述 电泳涂料技术源自汽车工业，它是适应汽车车身的涂装技术要求、解决汽车车身底漆涂装工艺中存在的问题而开发和发展起来的新的车身涂底漆方法（含新型的电泳涂料、电泳涂装工艺和涂装设备及其配套的附属装置等），是当今汽车车身涂底漆工艺的主流涂装方法。 汽车车身“打底工艺”（即漆前表面处理工艺加涂底漆工艺）是汽车车身防腐蚀和获得优质涂层的基础，是直接影响车身使用寿命的关键工艺。“打底工艺”所追求的目标是： ①能将汽车车身的100%表面（含内腔、焊缝表面）处理完善，涂上底漆。 ②底涂层的耐腐蚀应优异（达到产品设计要求），对底材的附着力强，与中涂、面漆的配套性应优良。 ③底涂层的机械性能好，且平整光滑，不需打磨，为面漆创造良好的基底。 ④涂装能实现自动化，且安全又环保。 ⑤材料利用率高，经济性好，高效且性价比高。 在世界汽车工业100多年的历史中，汽车车身涂底漆的方法已经历刷涂、喷涂、浸涂、阴极电泳、阴极电泳等多次变革，在克服或消除前种涂底漆的方法存在的工艺问题的基础上逐步走向完善。汽车车身的各种涂底漆方法的特征及优缺点参见表1-1。 表1-1 汽车车身涂底漆方法一览表 涂装方法特征存在的工艺问题备注 刷涂手工作业、工装简单 1.内腔、焊缝内涂不上漆① 2.作业效率低 3.漆面有刷痕仅适用于小批量,作坊式生产 喷涂（空气喷涂和高压无气喷涂）适用于快干底漆（如硝基 漆、双组分底漆）；作业 效率有较大幅度提高 1.内腔、焊缝内涂不上漆① 2涂着效率低；材料利用率 低 适用于流水作业式生 产和各种底漆的涂装 浸涂拖式浸涂仅浸涂车身的底部，易实 现自动化1.涂膜上下不均，有流痕， 采用滚动浸涂有改善 2.缝隙中产生“溶落②”现 象，涂膜变薄 3.大槽浸漆，火灾危险大 为不影响外观，在拖 式浸涂后车身外面涂 膜擦洗掉后再喷涂 在美国曾产生一次 浸涂槽火灾，促使改用 水性漆。 浸涂法已被电泳涂 装法淘汰 滚动浸涂在浸涂和沥漆过程中车 身旋转滚动，易实现自动 化 电泳涂装阳极电泳以车身为阳极，采用阴离 子型电泳涂料，工作液为 碱性，易实现自动化 产生阳极溶解，涂层的耐腐 蚀性差 在车身涂装中已被阴 极电泳涂装淘汰 阴极电泳以车身为阴极，采用阳离 子型电泳涂料，工作液为 酸性，易实现自动化 因车身为阴极，不产生阳极 溶解，涂膜有耐腐蚀性高， 泳透力优异 已成为大量流水生产 的汽车车身涂底漆的 主流工艺③ ①内腔，缝隙内兴漆，锈蚀就从里向外烂，产生“穿孔腐蚀”，大大降低汽车车身的使用寿命。 ②“溶落”现象是指浸渍到缝隙中的涂料，在烘干过程中随溶剂蒸发将涂膜洗落掉，从而使涂膜变薄、抗腐蚀性能降低。 ③随着先进的输送车身机械（如旋转输送机Rodip-3和多功能穿梭机）与阴极电泳涂装工艺的配套，
合同编号：****2016( )号 *******摩托车有限公司 *********** MOTORCYCLE CO.,LTD 技 术 服 务 协 议
协议编号： 技术、服务协议书 协议签订地点： 需方： (以下简称甲方) 供方：（以下简称乙方）甲、乙双方经协商就HL1201双组分阴极电泳漆产品的供货及技术服务要求，达成以下协议： 第一条总则 供方为需方提供的电泳涂料为供方目前稳定生产的HL1201双组份阴极电泳漆涂料，且能满足需方提出的质量技术要求。 1、电泳漆应稳定性好，耐腐蚀性能好，槽液易管理； 2、此涂料为双组份阴极电泳涂料，可以直接添加。档槽液参数偏高正常范围时，可以通过少量添加剂或添加涂料调整至正常； 3、在设备正常使用及运行情况下，此涂料应能满足极膜、超滤器、过滤器的正常使用周期。 4、供方提供不间断优良的现场技术服务，使电泳涂装顺利进行。 5、涂膜质量应达到双方达成协议的技术要求。 6、每年不定期的委托第三方检验两次。 7、电泳漆不含：铅汞镍硒铬等重金属符合环保指标。 第二条责任及条件 一、甲方责任 1、甲方对生产使用过程中的设备完好负责，并且在设备故障、损坏、不满足要求或使用寿命已到的情况下，应及时进行修复或更换。
2、甲方应具备常规的实验场地、检测仪器及化验人员。 3、甲方应对乙方服务代表的建议和分析数据予以高度重视，并积极调整、改善。 二、乙方责任 1、乙方具备完善的质量保证体系，从原材料到半成品、在制品、成品等都有严格的检验制度、检验设施，具备一定的生产、检验/仓储条件。 2、乙方保证向甲方提供的产品符合技术指标所规定的标准，供货时应标明产品名称、型号、净量、生产批号和生产日期，并随货提供产品出厂检测报告单。 3、乙方须提供“阴极电泳漆施工工艺及槽液管理规范”，供甲方执行。 4、乙方必须在投槽前、中，对需方现有前处理设备。工艺设计认同。 5、投槽后，一个月内达到所提供样板同等的质量和外观。并在以后的使用过程中达到最佳的、稳定的涂装质量。 6、在涂装过程中，档出现涂装异常时，一旦分析判定为乙方责任（原漆质量问题、技术指导、服务等）乙方承担全部责任，造成的所有经济损失由乙方承担，并负责在最短的时间内改善状况。 第三条质量、技术服务要求 1、供方提供的电泳涂料应能使用膜厚调整的需要；外表面≥16um 2、供方须每月对需方槽液进行抽样检测，对极液中的细菌、霉菌等含量根据生产情况进行检测，对检测的槽液或极夜供方应向需方提交实验报告及解决方法。 3、供方电泳漆在投入大槽后，在工艺、设备、槽液参数均达到要求的前提下，需方产品经过电泳漆、烘干后，应保证做到：①产品烘后，外露面上不得出现有流挂现象，②车厢所有缝隙不得出现不上漆的现象。③外露面上不得出现水迹。④整个车厢电泳烘干后应保持漆膜均匀、光滑，不得有色差。⑤确保电泳漆与需方
凝胶电泳结果分析 常见问题原因对策 DNA条带模糊DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。 电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低， PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电 泳效果。TBE建议使用10就更换。 所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度 <30℃，巨大DNA链电泳，温度 <15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力， 注意经常更换。 DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量 DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。 有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。 DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。 出现片状拖带或涂抹带PCR扩增时出现涂抹带、片状 带或地毯样带，往往由于酶量多 或者酶的质量差，dNTP浓度高， Mg2+浓度高，退火温度过低， 循环次数多。 减少酶量或更换酶，减少dNTP浓度，适 当降低Mg2+浓度，增加模板量，减少循 环次数。 不规则DNA 带迁移电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度 <30℃，巨大DNA链电泳，温度 <15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力， 注意经常更换。 DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。 带弱或无DNA 带DNA上样量不够增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳 比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降 低。 DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。 DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。EB染色的DNA所用光源不合 适 应用短波长（254nm）的紫外光源。 DNA带缺尖DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。 分子大小相近的DNA带不易分 辨 增加电泳时间，核准正确凝胶浓度 DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。 DNA链大，常规电泳不合适。在脉冲凝胶电泳上个分析。 电泳时ladder 扭曲配胶的缓冲液与电泳的缓冲液 不是同时配制。 同时配制，电泳缓冲液高出胶的1-2mm 即可。 电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。
目录 一、公司简介 二、电泳原理 三、规范工艺流程 四、产品简介 五、全系列丙烯酸聚氨酯电著产品简介 六、全系列产品规格 七、全系列涂膜性能 八、补给剂资料 九、管理对策 十、问题点与对策 十一、各型号产品说明书
二、电泳涂装原理： 阴极电泳涂料是一种具有半水溶型和悬体系特征的多组份体系，在电场作用下，已中和的阳离子树脂携带的涂料粒子在阴极进行电沉积，其过程包括电泳、电解、电沉积、电渗四种现象。 1、电泳：悬浮在极性液体中的带电粒子由于电场影响而发生泳动的现象。阳离子型树脂粒子向作为阴极的工件移动。 2、电解：液体中的氢离子和氢氧根离子在直流电源的作用下，生成氢气和氧气，阴极界面PH值升高。 3、电沉积：阳离子涂料粒子在吸引它的电极（阴极）上被还原为中性不溶脂，析出粘附，形成不溶解的涂膜。 过程如下： H 2 O≒H++OH- 阳极：2H++2OH—- 2e→H 2O+1/2O 2 ↑+2H+ 阴极：2OH-+2H++2e→H 2 ↑+2OH- R 1 R 1 ∣∣ ~NH++OH-→~N↓+H 2 O ∣∣ R 2 R 2 4、电渗：在外电场力作用下，涂膜内部所含的水份从涂膜中渗析出来移向槽液，进行内聚部分脱水。电渗使亲水涂膜变为憎水涂膜，脱水使涂膜致密化。 由于上述四个过程是连续进行的，获得的涂膜在烘干之前含水量在10%以下，可以直接进行水洗、烘干，最后形成连续均一的品质优良的涂膜。
三、规范工艺流程： 1.环氧体系电泳流程： 高温脱脂（加超声波）→常温脱脂→水洗三次→酸洗除锈→水洗三次→流动水洗→表调→磷化→水洗三次→流动水洗→纯水洗两次→电泳涂装→回收水洗三次→纯水浸洗两次→纯水喷淋→脱水剂洗/吹洗→烘干固化→成品包装 2.透明有色体系电泳流程： 电镀工件（抛光工件）→化学除油（加超声波）→水洗两次→电解除油→水洗三次（溢流水洗）→中和（弱酸洗）→水洗三次（溢流水洗）→纯水洗两次→电泳涂装（透明及各色）→回收纯水洗两次→纯水洗三次（溢流）→脱水剂洗→滴水（吹净水珠）→烘烤→成品包装
全 自 动 电 泳 仪 在 测 定 血 清 蛋 白 质 方 面 的 应 用 年级：2012级医学检验 学号：112523031 姓名：辛丽君
设计方案 i探讨用全自动血红蛋白电泳仪诊断地中海贫血的临床价值。 方法：对2013年3月?2014年3月期间在我院经地贫基因诊断确诊为地贫的375例患者的临床资料进行回顾性研究。我院用全自动血红蛋白电泳仪对这375例患者进行了血生化指标检测，同时进行了H b F碱变性试验以及地贫基因分析，检测其血红蛋白F的水平，比较用不同的方式诊断a、卩型地中海贫血以及复合型地贫的符合情况。在此基础上，评定用电泳仪诊断地贫的临床价值。结果：血红蛋白电泳仪的检测结果与地贫基因分析结果的符合率比较无显著性差异（P>0.05)。与地贫基因分析结果比较，用电泳仪诊断a、0型地中海贫血与a 卩复合型地贫的符合率分别为71.54%、78.31%与100%。与H b F碱变性试验结果比较，用电泳仪检测时患者H b F > 2.0%的符合率为89.02%。 结论：用全自动血红蛋白电泳仪诊断地中海贫血具有较高的有效性、准确性与精确性。该方法值得在临床上推广使用。 工作原理 电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。若溶液里一个电量为Q的带电粒子，在场强为E 的电场中以速度υ移动，则它所受到的电场力Ｆ应为： Ｆ＝QＥ 根据斯托克司定律，在液体中泳动的球状粒子所受到的阻力Ｆ’为： Ｆ’＝6 ηrυ 式中η为介质的粘度系数，r为粒子半径。 当二力平衡，即Ｆ＝Ｆ’时，粒子作匀速泳动，且有 υ＝QＥ／6 ηr 结构图示
电泳技术标准 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
电泳技术说明 环氧电泳漆电泳规范 1.定义: 这种电泳方法是用一种黑色、阳离子水溶性的环氧树脂漆, 沉积覆着在被阴极 化的零件表面, 从而起到涂层的作用. 然后，这个漆层被置于165℃—190℃范围之下，在零件表面发生聚合反应而呈网状结构. 2.技术特征: 2.1处理过程零件电透的过程如下: ●脱脂. ●酸洗 ●磷化 ●表面电泳涂装 (环氧漆) ●通过165℃—190℃温度聚合反应(隧道)炉持续时间20分钟 2.2阳离子底漆 型号: 例如:阳离子电泳底漆2K BT SP 颜色: 黑色 RAL9005 3.技术要求: 3.1抗侵蚀要求---盐雾试验 根据ISO9227 的标准,在96个小时暴露于盐雾之后,在被测试零件表面不应该看到任何红锈痕迹或水泡，以下部位除外： 螺纹部位 零件的尖角部位
附着力---要求 根据NFT30 038 或NFEN ISO 2409标准， (在依据ISO9227 标准进行盐喷雾实验 96 个小时之后), 用间隔1mm的梳状物在零件表面划出方格，用3M 250 的胶带 粘贴后撕下，我们认为合格的等级是 0级和1级。 3.2厚度 厚度要符合以上所述3. 1和条的要求，这以厚度值应该在 10--20微米之间(最多不超过25微米) 在螺纹部位的电泳厚度要求使用螺纹规控制，并考虑到最大允许螺纹厚度。. 螺纹端检验规范 --- 循环泵泵壳 非内密封管螺纹 NFE 03005 标准 1.泵壳加工件螺纹检规 2 螺纹规的尺寸(螺纹面上的d2 尺寸)
双向凝胶电泳技术原理与应用 Principle and application of two-dimensional gel electrophoresis 姓名：XX 班级：检验本科1113班 学号：XXX 【摘要】人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于2001年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出，蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。其中双向电泳（two-dimensional electrophoresis，2.DE）是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一 【abstract】Human gene group plans and United States sailaila genetic information company Yu 2001 in United States Science under magazine and United Kingdom natural under magazine joint announced, they draws out has accurate, and clear, and complete of human gene Group map, at this point, human gene group plans has basic completed, as Hou gene group era of comes, protein group learn get has unprecedented of development, protein group research aimed at reveals gene express of real implementation life activities of all protein of express law and biological function. Includes proteome, proteomics, structural proteomics and functional genomics of new concepts, such as proposed, proteomics has become extremely active in the field of biological sciences. Two-dimensional gel electrophoresis (two-dimensional electrophoresis,2.DE) is one of the three key core technologies of proteome research
一、200#溶剂 1. 标准号：沪Q/HG13-537-83（86） 2. 技术标准： 二. 石油甲苯 1. 标准号：GB3406-90 2. 技术标准： 三. 石油混合二甲苯 1. 标准号：GB3407-90 2. 技术标准：
四. 1000#溶剂 1. 标准号：AKZO/T03-R014-92 2. 技术标准： 检验方法： 馏程：按GB255-77（88） 芳烃含量：色谱法 闪点：GB261-71 4. 用途：醇酸漆、氨基漆。
五. 烧火油 1. 标准号：AKZO/T03-R008-92 2. 技术标准： 馏程：按GB255-77（88） 闪点：按GB261-77 六. 芳烃DH 100#（国产） 1. 标准号：AKZO/T03-R001-97 2. 技术标准： 馏程：按GB255-77（88） 4. 用途：氨基漆。 七. 芳烃100#（进口） 1. 标准号：AKZO/T03-R004-97 2. 技术标准：
馏程：按GB255-77（88）执行。 芳烃含量：按ASTM875执行。 4. 主要用途：氨基漆。 八. 芳烃DH150# 1. 标准号：AKZO/T03-R002-97 2. 技术标准： 馏程范围：按GB255-77（88）执行。 4. 主要用途：氨基漆。 九. 501稀释剂 1. 标准号：AKZO/T03-R003-96
2. 技术标准: 3. 环氧值：参照92年4月版《涂料工业用原料技术标准手册》中E型环氧树脂（E-20）中的环氧值测定。 4. 用途：环氧漆。 十. 异丙醇 1. 标准号：GB7814-87 2. 技术标准： 十一. 松节油 1. 标准号：LY205-74 2. 技术标准：
电泳漆的标准、成分与技术 电泳漆，作为一类新型的低污染、省能源、省资源、起作保护和防腐蚀性的涂料，具有众多优势。下面天津弘创润天为大家细说电泳漆标准、电泳漆的成分以及电泳漆技术。 电泳漆标准 1、漆膜颜色及外观符合色标标准 2、柔韧性mm1 3、附着力（划圈法），级≤２ 4、冲击强度，公斤，厘米50 5、漆膜厚度，μM≥2 6、漆膜光度，度55-7 7、耐盐水性（25℃=1℃，3%氯化钠溶液中24H）肉眼 观察无变化 电泳漆的成分 电泳漆，也叫电泳涂料，现在还有很多人沿用“电泳漆” 的称呼，而不用“电泳涂料”。随着常规喷涂的缺陷不断浮现，电泳开始变得越来越普及.电泳漆也开始不断更新换代，从阳极电泳漆到阴极电泳漆，从单组分电泳漆到双组分电泳漆，电泳漆的发展也促进了电泳涂装的发展，使更加多的产品不再使用喷涂技术而是使用电泳。 电泳涂料由水溶性树脂，颜料，填料，助剂，溶剂还有中和剂组成。
电泳漆技术 电泳漆技术主要有以下原理： 1电泳是涂装金属工件最有效的方法之一。电泳涂装是将具有导电性的被涂物浸在装满水稀释的浓度比较低的民泳涂料槽中作为阳极（或阴极），在槽中另设置与其对应的阴极（或阳极），在两极间接通直流电一段时间后，在被涂物表面沉积出均匀细密、不被水溶解涂膜的一种特殊的涂装方法。 2电泳涂装过程中伴随着四种化学物理变化，即电解、电泳、电沉积、电渗。 （1）电泳：在电场作用下，带电荷的胶体粒子会向相反电荷电极泳动，这一现象称为电泳。 （2）电解：任何一种导电液体在通电时产生分解的现象称电解。例如，在具有导电性介质的水溶液中，在通直流电的条件下，在阳极表面产生氧气并发生金属溶解，在阴极表面还原氢气并析出金属这一现象称作电解。 （3）电沉积：在电泳涂装时，带电荷的粒子（树脂和颜填、料）在电场作用下到达相反电荷的电极，被H（阳极电泳）OH（阴极电泳）所中和，变成不溶于水的涂膜，这层漆膜很稳定，而且致密均一。这一过程称为电沉积。 （4）电渗：是电泳的逆过程。如果电沉积出的颗粒附着在某一位置，它们不在随电场的作用而发生移动，分散介质在不致密的松散颗粒中作与其移动方向相反的移动。这个电
1. 适用范围：本标准适用于钣金车身表面电泳涂层材料的检测。 2. 检验项目和技术指标见表一、表二。 表一：电泳漆膜性能指标 序号 检验项目 单位 指标 执行标准 1 外观 A 板 级 8-10 QB8021 C 板 8-10 QB8021 L 板 7-10 QB8021 H 板 7-10 QB8021 2 膜厚 μm 20-30 GB/T1764 3 硬度 ≥ 2H GB/T6739 4 杯突 ≥ 6 GB/T9753 5 附着力 级 0-1 GB/T1720 6 柔韧性 mm 1 GB/T1731 7 冲击 cm 50 GB/T1732 8 光泽 （60°） 50-80 GB/T9754 9 耐水性 （40℃）h ≥ 500 GB/T5209 10 耐盐雾 h ≥ 1000 ASTMB117 11 干燥时间 （工件温度） 175℃ min 25 GB/T1728 12 泳透力 cm ≥ 80% 福特盒法 文件名称 电泳漆技术质量要求 文件编号 JB-2011-001 发布部门 工艺技术部 编制 审核 批准 实施日期 修订状态 A1 共2页
表二：电泳漆原漆技术指标 序号 检验项目 单位 指标 执行标准 乳液 色浆 1 外观 乳白色液体 灰色粘稠液体， 无结块 目测 2 不挥发物 （120±2）℃/1h % 36±2 57±2 GB/T6751 3 细度 μm ≤ 10 15 GB/T6753.1 4 PH 值 6.3-6.9 酸度计 5 电导率 Μm/Cm 2000-2800 HC/T3336 6 MEQ 酸 mm01/100g 30-36 0.1mol/1NaOH 滴定 7 MEQ 碱 mm01/100g 55-65 0.1mol/1H 2SO 4滴定 8 粘度（20℃） mP a 2S ≤ 100 GB/T2794 9 密度（20℃） g/ml 1.05-1.07 GB/T6750 10 溶剂含量 (EB)% 0.5-1.5 气相色谱法
电泳技术利用混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同电场作用下，根据各组分移动距离的不同，来分离鉴定各组分。电泳技术作为一种先进的检测手段，广泛应用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、无机离子等的分离和鉴定，甚至病毒与细胞的研究。随着许多自动化电泳仪器设备的问世和普及，电泳技术在生物医学方面有着许多应用，显示出强大的生命力。 电泳介质的ph、缓冲液的离子强度、电场强度和电渗作用是影响电泳的主要因素。区带电泳可根据支持物的物理性状、支持物的装置形式和ph的连续性等来分类。其中常见的有聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖电泳、等电聚焦电泳和双向电泳等。下面将简要地介绍几种电泳技术在生物医学中的应用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法，是聚合酶链式反应、单链构象多态分析中不可缺少的技术，广泛应用于生物医学中分子水平的诊断。其对小于500碱基的DNA片段分辨率很高，且可容纳相对大量的DNA。聚丙烯酰胺凝胶电泳基本上是一种分析工具，但有时也可用于纯化蛋白质。变性的蛋白质可以经过回收、洗脱、浓缩和除盐来纯化，这样制备的蛋白质样品可以用于蛋白质的结构分析或抗体的制备，是进行生物化学研究的基础。 琼脂糖电泳因为操作简单，耗时短而被广泛应用新鲜血液经琼脂糖电泳、染色后可得患者的血清蛋白质电泳图谱，这是了解患者血清蛋白质全貌的有效方法，可以用为初筛试验。在肾小球疾病中，尿蛋白电泳测定是反映疾病性质的重要窗口，是区别选择性尿和非选择性尿的重要标准之一。十二烷基硫酸钠-琼脂糖电泳测尿蛋白组分操作方法简便，高效。 等电聚焦电泳利用蛋白质具有两性解离及等电点的特征，用具有ph梯度的支持介质来分离的蛋白质。它的主要特点是：灵敏度及分辨率高，重复性好，电泳区带相当狭窄，特别适用于大批量纯度检测和真实性鉴定以及遗传多样性等群体生物学领域的研究。目前等电聚焦电泳主要用于两性电解质样品的分析、分离和制备，在同工酶的鉴定及蛋白质的微量分析上应用尤为广泛。随着生命科学的发展，特别是人类基因组计划全面完成之后所谓“后基因组”时代的来临，对复杂生命体的准确表征和分析就显得日益紧迫，等电聚焦电泳技术得到越来越多的使用。例如，利用等电聚焦电泳技术可以区分人血清蛋白、测出异常免疫球蛋白、进行基因分型，还可以在双相电泳中，将IEFE作为第一相。 双向电泳技术是八十年代发展起来的一种有效的二维分离技术。基于不同蛋白质等电点和分子量不同的特性，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过电荷的不同分离，来建立混合物各组分的双向电泳图谱。由此可以分析生物样品的显著差别，产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的药物和环境的毒性。在功能基因组时代，双向电泳技术主要用于寻找不同组织或细胞中差异表达的蛋白质，寻找疾病相关的标记分子，以进行疾病相关蛋白或基因的研究。目前许多研究者利用双向电泳对人体的各种器官、组织、细胞进行了研究，为疾病的判断、诊治及了解发病机制提供了新的手段。 例如，在肿瘤的研究中，寻找与肿瘤发生、发展和抗药性有关的蛋白，为寻找肿瘤的特异标志物、揭示肿瘤的发病机制以及开发新的肿瘤治疗方式和治疗药物提供理论依据。肿瘤发生的早期常常无任何症状，而只有在转移时才容易被发现，这往往延误了治疗的最佳时期，因此找到肿瘤的标志物进行及时的诊断和治疗显得尤为重要。Wadsworth J T等筛选了99例头颈部鳞状细胞癌患者和102例正常对照的血清蛋白质的表达情况，发现了几种蛋白在患者与
电泳技术的应用 在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳（electropho-resis）。1809年俄国物理学家Peнce首先发现了电泳现象，但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳（boundary electrophoresis）之后，电泳技术才开始应用。本世纪60-70年代，当滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来，电泳技术得以迅速发展。丰富多彩的电泳形式使其应用十分广泛。电泳技术除了用于小分子物质的分离分析外，最主要用于蛋白质、核酸、酶，甚至病毒与细胞的研究。由于某些电泳法设备简单，操作方便，具有高分辨率及选择性特点，已成为医学检验中常用的技术。 一、电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。 F＝QE 质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即： F′＝6πrην 式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时： F＝F′即QE＝6πrην 上式交换后可写成 ν/E的含意为单位电场强度下的移动速度，这里可用迁移率μ表示，即 从上式可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas 式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。
电泳技术与应用 一．电泳的基本原理： 生物大分子如蛋白质，核酸，多糖等大多都有阳离子和阴离子基团，称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中，它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中，带电颗粒向阴极或阳极迁移，迁移的方向取决于它们带电的符号，这种迁移现象即电泳。 二．电泳的主要类型 1.醋酸纤维薄膜电泳 原理：醋酸纤维素薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维素薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术。醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象。又因膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分有样品传到，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5ug的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 优点：①电泳后区带界限清晰； ②通电时间较短（20min-1h)； ③它对各种蛋白质(包括血清蛋白、溶菌酶、核糖核苷酸）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象； ④对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。 操作过程中应注意事项：由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低，因此必须在密闭的容器中进行，并使用较低电流避免蒸发。 应用：广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、类固醇及同工酶等地分离分析中。尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单、快速等优点。 2．琼脂糖凝胶电泳 原理：琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中 优点：①适用于大分子物质的分离如核酸大分子蛋白质 ②兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用 ③琼脂糖凝胶制备容易，分离范围广 注意事项：①注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象 ②注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 ③对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
SGM自制件电泳技术标准及要求一、电泳零件前处理技术参数
二、电泳技术参数
二、质量要求 1 磷化 (1) 膜厚及结晶尺寸 需对磷化层的晶貌（膜重-GM9733P及结晶尺寸-GM9613P）进行评估。将测试结果 与《全球磷化规范》（GMW3011L-PH)的要求作对比，并根据要求对现存系统进行 控制。 (2) 防腐性能 需根据GM9540P（方法B，40个循环）对磷化层的防腐性能进行评估。将测试结果 与《全球磷化规范》（GMW3011L-PH)的要求作对比，并根据要求对现存系统进行 控制。 2 电泳涂装 (1) 电泳涂层的厚度：内/外表面最低平均值为18微米，目标范围为20～31微米 内腔电泳涂层完整均匀, 无金属裸露 注: 通过每周泳透力测试评估内腔电泳涂层状态 (2) 外观 (a) 供应商的电泳涂层不能对油漆涂层的外观带来不良的影响。 (b) 需根据下列标准对电泳涂层的外观进行评估： 粗糙度：<12μ/inch ASTM D523 目视外观平整光洁，无明显的条印、缩孔、针孔、流挂、灰粒, 钣金缺陷等缺陷，其质量需得到参与评估的各方面的认同。 (3) 物理性能（附着力，耐石击） (a) 涂层的附着力和耐石击性能应该根据下列标准进行评估：
(b) 胶带测试附着力(GM9071P, Method A 和B) (c)用胶带测试附着力(GM9071P, Method A)后再进行240小时的潮湿测 试(GM4465P, ASTMD870) (d) 耐石击试验(GM9508P, Method A) (e)盐雾试验1000小时后，划格处单边扩展<2mm (f)溶剂擦拭实验(GM9509P), 溶剂使用MIBK(甲基-异丁基甲酮), 合格结果 3. 三化工材料 磷化工艺体系材料必须通过GM9984090标准认可或等同的材料标准认可 脱脂剂必须通过GM9984400标准认可或等同的材料标准认可 表调材料必须通过GM9984415标准认可或等同的材料标准认可 钝化材料料必须通过GM9984404标准认可或等同的材料标准认可 电泳漆材料必须通过GM9984094标准认可或等同的材料标准认可 预处理材料必须适合冷轧板/电,热镀锌板/铝板/锌镍合金板等SGM车身所用板材的涂 脱脂剂要求是弱碱性的，以防碱对镀锌层的伤害。 磷化液：选用锌、镍、锰，三元体系的低锌磷化液 钝化液：可选择有铬或无铬钝化 四技术条件 1 电泳工艺必须采用阴极电泳。 2 工艺过程
电泳显示技术(EPD) 特点 又称电泳显示器,是类纸式显示器较早发展的显示技术，是利用有颜色的带电球，藉由外加电场，在液态环境中移动，呈现不同颜色的显示效果，其代表厂商包括E-Ink与Sipix。日本Bridgestone所推出的高速响应液态显示器（QR-LPD），其工作原理与EPD相似，只是其成像的物质不是使用带电球，而是由黑白2色的粉末在电场之间移动产生显示效果。另外发展较早的胆固醇液晶（ChLC），是一种结构相似于胆固醇分子的液晶。胆固醇反射式显示器在不加电压时，可存在两种稳定的状态，利用两个状态之间的转换，呈现亮暗态的显示效果。其它还有强诱电性液晶（Ferroelectric Liquid Crystal；FLC）等。发展前景 电泳显示（Electrophoretic，E-Paper）技术由于结合了普通纸张和电子显示器的优点，是最有可能实现电子纸张产业化的技术。目前它已从众多显示技术中脱颖而出，成为极具发展潜力的柔性电子显示技术之一。据iSuppli预测，电泳显示全球市场2006年仅仅900万美元，但是预计到2013年将增加到2.47亿美元，年均增长率高达60.5%。该增长的大部分市场在指示标和新颖的直接驱动显示器，另外电子显示卡、柔性电子阅读器、电子纸张和数字签字等产品也将获得应用。电泳技术及其优势 何为电泳技术？照字面意味着“在一定的电压下可泳动”，其显示的工作原理是靠浸在透明或彩色液体之中的电离子移动，即通过翻
转或流动的微粒子来使像素变亮或变暗，并可以被制作在玻璃、金属或塑料衬底上。具体技术是将直径约为1mm的二氧化钛粒子被散布在碳氢油中，黑色染料、表面活性剂以及使粒子带电的电荷控制剂也被加到碳氢油中；这种混合物被放置在两块间距为10-100 mm的平行导电板之间，当对两块导电板加电压时，这些粒子会以电泳的方式从所在的薄板迁移到带有相反电荷的薄板上。当粒子位于显示器的正面(显示面)时，显示屏为白色，这是因为光通过二氧化钛粒子散射回阅读者一方；当粒子位于显示器背面时，显示器为黑色，这是因为彩色染料吸收了入射光。如果将背面的电极分成多个微小的图像元素(像素)，通过对显示器的每个区域加上适当的电压来产生反射区和吸收区图案，即可形成图像。 电泳技术具有几大优势。一是能耗低。由于具有双稳定性，在电源被关闭之后，仍然在显示器上将图像保留几天或几个月。二是电泳技术生产的显示器属于反射型，因此具有良好的日光可读性，同样也可以跟前面或侧面的光线结合在一起，用于黑暗环境。三是具有低生产成本的潜力，因为该技术不需要严格的封装，并且采用溶液处理技术如印刷是可行的。四是电泳显示器以形状因子灵活为特色，容许它们被制造在塑料、金属或玻璃表面上，所以它是柔性显示技术的最佳选择。 电泳技术研发与生产企业 目前投入电泳技术开发的企业有美国E—Ink和SiPix公司、英国Plastic Logic、荷兰飞利浦旗下Polymer Vision、日本Bridgestone、